Respuesta inmune de las clulas del hospedero a la infeccin por Trypanosoma cruzi

Dr. Gerald Montiel * y Dra. Gendry Daz ** Introduccin La enfermedad de Chagas es un serio problema de salud. causado por el protozoario Trypanosoma cruzi. A pesar de que fue descubierto en la primera dcada del siglo XX, an queda mucho por aprender acerca de este protozoario flagelado. Es transmitido al ser humano por un triatomino hematfago, conocido como chinche. La infeccin se lleva a cabo cuando el insecto luego de picar al humano. deposita sus heces que contienen tripomastigotos metacclicos. cerca del sitio de la picadura, con lo cual las formas infectantes logran penetrar, a travs de la conjuntiva, membranas mucosas o abrasiones contaminadas (27 ). La distribucin de la enfermedad de Chagas en Amrica va desde el sur de los Estados Unidos hasta Argentina y Chile, constituyendo en algunos pases un verdadero problema de salud pblica (28 ). Una de las caractersticas ms sobresaliente de esta enfermedad es que, alcanza de veintisiete a treinta y cinco millones de portadores, con repercusin patolgica o sin ella. Se estima, asimismo, que alrededor de cien millones de americanos estn expuestos a contraerla (29 ). Desde un punto de vista epidemiolgico, Jos Carpintero (29 ) describe cuatro ciclos infecciosos que se relacionan entre s; un ciclo natural o silvestre: que se lleva a cabo en mamferos silvestres, un ciclo peridomiciliar, que se relaciona con los animales de cra, un ciclo domstico en el que el hombre es infectado directamente, y por ltimo el ciclo de transmisin exclusivo del hombre; originado en zonas donde no existe el parsito y donde el mecanismo de transmisin es el interhumano. En el ciclo de transmisin exclusivo del hombre, cobra vital importancia la transmisin de la infeccin por Trypanosoma cruzi, por medio de unidades de sangre de personas infectadas. generalmente personas portadoras o en estados crnicos de la infeccin. No obstante el riesgo de transmisin sangunea por Trypanosoma cruzi depende de varios factores, tales como la cepa del parsito, parasitemia del donador, condiciones generales del receptor y cantidad del hemocomponente transfundido (30 ) por lo que el riesgo es relativo, pero no deja de ser importante. La enfermedad de Chagas en su ciclo de transmisin exclusivo del hombre puede ser transmitida: a) verticalmente de la madre al feto, b) como resultado de accidentes de laboratorio, c) por el uso de drogas endovenosas, d) transmitida por transfusin (ECT) y e) trasplante de rganos (28 ). La ECT se considera como la segunda va de transmisin ms importante despus de la vectorial (por Triatominos) (28 ). Invasin Celular

El Trypanosoma cruzi es un protozoario cuyo ciclo de vida se desarrolla entre un hospedero invertebrado y otro vertebrado. Las formas infectantes que habitan el tracto digestivo del insecto se denominan tripomastigotos metacclicos, y stos son los que entran al hospedero e invaden las clulas a travs de la formacin de vacuolas de membrana unidas al parsito (1 ). El Trypanosoma cruzi puede infectar muchos tipos celulares; ste utiliza diferentes tipos de receptores de las clulas del hospedero, los que se caracterizan por tener una propiedad en comn: la presencia de cargas negativas ( 1 ). Sus principales clulas blanco son: las clulas fagocticas y en especial los macrfagos, que representan la primera lnea celular invadida (4 ), no obstante un mecanismo inusual de invasin se ha reportado en clulas no fagocticas tales como los fibroblastos y otros tipos celulares experimentales, como las clulas HeLa y MDCK ( 1 ). El mecanismo por el cual los tripomastigotos ingresan a los macrfagos ha sido motivo de controversia. Mientras varios investigadores reportan que la entrada es bloqueada en la presencia de inhibidores de la polimerizacin de actina como la citocalasina B (2 , 3 ), otros reportan que no han encontrado inhibicin y concluyen que la invasin es activada en parte por el parsito ( 24 ). Hay estudios que presentan evidencia, de que la invasin de las clulas del hospedero por Trypanosoma cruzi depende ms de la habilidad del parsito de reconocer receptores moleculares de la membrana del hospedero, como son los polipptidos de membrana de 32 y 34 Kilodaltons ( Kda ) (6 ). Por otro lado, en el hospedero vertebrado, la forma de amastigoto se multiplica en clulas fagocticas y no fagocticas, como las pertenecientes a los tejidos muscular y nervioso (5 ) y tiene la capacidad de infectar las clulas del hospedero una vez que se liberan al espacio extracelular (7 ). En sntesis, la habilidad de infectar clulas del hospedero no es exclusiva del tripomastigoto metacclico, sino que tambin es dado por las formas de amastigoto, lo cual favorece la diseminacin del parsito. Respuesta Inmune Los mecanismos de patogenicidad del Trypanosoma cruzi actualmente no son bien comprendidos, slo se sabe que la respuesta inmune humoral juega un rol muy importante en la resistencia y eliminacin de los parsitos de circulacin (9 ) y que algunos epitopos del parsito pueden desarrollar una reaccin cruzada con antgenos propios, desencadenando un proceso autoinmune (24 ). En el husped infectado con Trypanosoma cruzi la respuesta inmune protectora involucra principalmente la produccin de anticuerpos especficos y la activacin de clulas fagocticas por interfern gama ( 14 ). La respuesta humoral contra el Trypanosoma cruzi se caracteriza por una respuesta, a una mezcla compleja de antgenos, por lo que no es posible determinar las variaciones de las especificidades de anticuerpos en los diferentes estadios de la enfermedad: aguda, crnica e infeccin congnita. La produccin de anticuerpos contra los diferentes determinantes antignicos, depende del estado de la infeccin en que se encuentre el husped (23 ). De hecho los tripomastigotos metacclicos poseen invasinas o molculas de invasin celular, que son especficas de estado, por lo que la inmunidad inducida en

un estadio. no neutraliza las invasinas expresadas por la siguiente generacin de tripomastigotos ( 25 ). Una alta respuesta inmune especfica mantenida por aos, sugiere un estimulo antignico constante, por persistencia del parsito (10 ) Y se sabe que en los humanos la interleukina 4 induce el cambio de switch de inmunoglobulina IgM a IgG 1 o bien se produce IgG4 en la presencia de un estmulo persistente del antgeno (11 ). Actualmente se sabe que los ttulos de las diferentes subclases de anticuerpos tipo IgG se relacionan con el estadio de la enfermedad y con la patologa desarrollada en los pacientes chagsicos (12 ). En un estudio realizado en 12 pacientes con diagnstico de enfermedad de Chagas crnica se observ, en los ttulos de anticuerpos de tipo IgG, una expresin de las cuatro subclases, con una prevalencia mayor de las inmunoglobulinas de tipo IgG 1 y IgG2 (8 ). Altos ttulos de anticuerpos de IgG 1 y IgG3 anti Trypanosoma cruzi se han observado en pacientes con cardiomiopata chagsica crnica, y en crnicos asintomticos, mientras que otros estudios han reportado niveles altos de Anti IgG 1 en pacientes con cardiomiopata severa (8 ). Tambin, una respuesta preferiblemente dada por IgG2 y IgG3 corresponde ms a una respuesta de tipo TH 1 (12 ), por lo que una expresin de las cuatro subclases de anticuerpos sugiere que se induce una respuesta mixta Th1 y Th2 en pacientes chagsicos crnicos (8 ). Publicaciones recientes reportan que las clulas mononucleares de sangre perifrica en pacientes sintomticos y asintomticos presentan una mezcla de interfern gama y de interleukina 4 (13 ), por lo que una parasitemia intracelular persistente puede inducir las cuatro subclases de inmunoglobulinas en una mezcla de respuesta TH 1 ( INF gama) y TH2 (IL-4) (8 ). Se ha evidenciado que la patologa en la fase crnica de la enfermedad es de naturaleza auto inmune. Ello ha sido demostrado en estudios donde se observ que al transferir clulas T sin los parsitos de un animal infectado crnicamente a un ratn normal de una misma cepa. da como resultado lesiones inflamatorias en el corazn y tejido nervioso (25 ). Existen al menos dos explicaciones para la generacin de autoinmunidad en la Enfermedad de Chagas; primero que la infeccin con el parsito altera la inmuno-regulacin dando como resultado la prdida de la tolerancia a los antgenos propios: segundo, el reconocimiento inmune de los antgenos de Trypanosoma cruzi da reaccin cruzada con los determinantes antignicos de las clulas husped, dando como consecuencia la autoinmunidad (26 ). En la infeccin aguda, la induccin de la respuesta TH 1 es llevada a cabo por la interleukina 12, que estimula la produccin de INF gama en clulas NK (14 ). La respuesta protectora TH 1 est implicada en el dao tisular y en las alteraciones de ]a respuesta inmune observadas durante la infeccin. Cardoni y colaboradores (14 ), realizaron un estudio con cepas de ratones C3H y BALB/c, para seguir los niveles de las citokinas IL-12 y IFN gama durante los diferentes estadios de infeccin con Trypanosoma cruzi, cepa de

Tulahuen, observando un rpido aumento de los niveles de IL-12 y IFN gama en la infeccin inicial en ambas cepas. No obstante se observ un incremento mayor en de los niveles de IFN gama en los ratones BALB/c, lo que hace pensar que la respuesta TH 1 se relaciona con la asociacin husped - parsito. La respuesta de las citokinas en la infeccin y enfermedad producida por Trypanosoma cruzi se ha asociado con la patologa cardiaca producida en el husped. En un estudio con dos cepas de ratones: B10.D2 con una afinidad a desarrollar una respuesta TH 1 por produccin de rFN gama en la infeccin por Trypanosoma cruzi, y ratones DBA/2 con afinidad para desarrollar una respuesta TH2 con produccin de IL-4, se observ grandes diferencias en la miocarditis desarrollada por ambos, siendo mucho menor en los ratones B10.D12 (15 ). Al igual que en la mayora de las enfermedades parasitarias o infecciosas por agentes patgenos, las citokinas o moduladores de la respuesta inmune, tienen como funcin inducir la multiplicacin y diferenciacin de otras clulas. En general son producidas por una gran variedad de clulas, pero principalmente por los linfocitos T. La respuesta TH1 y TH2 a los diferentes estmulos es promovida y regulada por estas sustancias; dependiendo del tipo de infeccin y respuesta de defensa inmune predominante, as ser la concentracin de algunas citokinas (16 ). Se ha observado que la IL-10 inhibe algunos aspectos de la activacin de macrfagos, lo cual incluye la muerte intracelular de parsitos protozoarios mediada por INF gama, de forma tal que en cepas de ratones susceptibles a la infeccin por Trypanosoma cruzi se ha demostrado proteccin al administrar un Anti IL-10 neutralizante a los ratones (16 ). Determinantes antignicos Trypanosoma cruzi se caracteriza por ser un parsito con una gran variabilidad antignica. Sus molculas de membrana cambian constantemente al pasar de un ciclo a otro, lo que demuestra una complejidad biolgica y complica el panorama de crear una vacuna eficaz. No obstante se han estudiado antgenos dominantes que determinan la respuesta en el husped y en algunos casos inducen una respuesta que es utilizada como mecanismo de evasin. El antgeno HSP70 es una protena de choque trmico, que se encuentra en la membrana del Trypanosoma cruzi, que ha resultado ser un antgeno dominante en la infeccin humana, existiendo un alto nivel de anticuerpos frente a ste, en pacientes chagsicos (18 ). Por lo que sta es capaz de inducir una respuesta T CD8+ citotxica especfica de antgeno, en presencia de macrfagos peritoneales a travs de la secrecin activa de IFN gama y TNF alfa ( 19 ). Se ha descrito que la HSP70 es un fuerte inmungeno (20 ) capaz de actuar como estimulador del sistema inmune a varios niveles ( 21 ), siendo particularmente eficiente en la activacin de los linfocitos T CD8+ (22 ).

Contrario a la protena HSP70 se ha descrito otro antgeno dominante, la protena de membrana denominada cruzipain, cuya respuesta en el husped es utilizada a favor del parsito (17 ). La respuesta humoral al antgeno cruzipain, el mayor antgeno de Trypanosoma cruzi, est implicado en la patognesis de la Enfermedad de Chagas experimental. Se ha observado cmo, este antgeno incrementa el nmero de clulas del bazo de gran tamao, con niveles altos de interIeukinas tipo 2 como IL-4. IL-5, IL-10, y niveles bajos de Interfern gama y IL-12. Adems se da un incremento de la urea asociada a un decrecimiento de los niveles de nitrito (17 ). Al guiar el antgeno la respuesta con produccin de citokinas tipo 2, posiblemente consume arginasa en los macrfagos y promueva la susceptibilidad a los mecanismos de infeccin. Por lo tanto, puede ser que este antgeno sea usado por el parsito para llevar a cabo su esparcimiento dentro del husped ( 17 ). Conclusiones El Trypanosoma cruzi es un parsito altamente complejo, del cual hace falta mucho por investigar. La respuesta inmune a ste, todava hoy en da no se conoce bien, a pesar de que se han hecho grandes esfuerzos por estudiarla. Al igual que en toda respuesta a un agente externo, las citokinas juegan un papel preponderante y segn sea el tipo de estmulo, se determina no slo el tipo de respuesta, sino tambin el dao tisular o inflamatorio que sufra el husped. Debe de quedar claro que siempre que se da una respuesta inmunolgica a un determinado estmulo antignico, ocurre un dao tisular en el husped, cuya intensidad depende no solo del estmulo sino tambin de la duracin del mismo. Por otro lado la variabilidad gentica, el ciclo biolgico del agente infeccioso y la autoinmunidad generada en el husped durante la infeccin crnica. han dificultado el desarrollo de una vacuna eficaz. Todos estos aspectos antes mencionados hacen de la enfermedad de Chagas una de las endemias ms importantes del continente americano y una de las enfermedades parasitarias ms enigmticas, de la cual an falta, mucho por descubrir. Resumen La enfermedad de Chagas es causada por un protozoario flagelado denominado Trypanosoma cruzi y ste es transmitido al ser humano por un triatmino hematfago, que se le conoce como chinche. Se calcula que unos veinticinco miIlones de personas en todo Latinoamrica sufren sus consecuencias y que ms de 100 millones estn en riesgo de contagio. El mal de Chagas se caracteriza por ser una infeccin que invade una gran variedad de clulas del husped vertebrado. El mecanismo de invasin depende del parsito y tambin de los receptores moleculares en la superficie de las clulas blanco. La respuesta humoral a este parsito est dada contra una mezcla compleja de antgenos que varan de un ciclo

parasitario a otro, con estmulos constantes del sistema inmune que determinan la respuesta del husped durante la fase crnica de la enfermedad. En la infeccin aguda la respuesta inmune por clulas TH 1 (Clulas T cooperadoras tipo 1) es estimulada por Interleukina 2 (lL-2) e Interfern gama, lo cual se relaciona con el dao tisular generado en el husped. Por otro lado la induccin de una respuesta por parte de las clulas T cooperadoras de tipo 2 (TH2) por aumento de Interleukina 4 (lL-4) e InterIeukina 10 (lL-10), hace al husped ms susceptible a la infeccin por Trypanosoma cruzi. Al igual que en cualquier infeccin por agentes patgenos, el grado de susceptibilidad del husped y el dao tisular generado, depende de la inmunoregulacin de la respuesta inmune TH 1 TH2 y del predominio en la accin de las diferentes citokinas. Bibliografa 1. Burleigh B. & Andrews W.: The Mechanisms of Trypanosoma cruzi invasion of Mammalian ceIls. An. Rev. Microbiology 49: 175. 1995. [ Links ] 2. MeireIles M., Araujo J. & de Sousa W.: Interaction of Trypanosoma cruzi with macrophages in vitro: dissociation of the attachment and internalization phases by low temperature and cytochalasin B. Parasitenkd. 68: 7, 1982. [ Links ] 3. Ortega-Barria E. & Pereira M.: A novel Trypanosoma cruzi heparin-ding protein promotcd fibroblast adhesion and penetration of engineered bacteria and Tripanosomes to mammalian ceIls. CeIl 67: 411,1991. 4. Kipnis T.. Calich V. & Dias da Silva W. : Active entry of bloodstream forms of Trypanosoma cruzi macrophages. Parasitology 78: 89, 1979. [ Links ] 5. Garcia E. & Azambuja. P.: Development and interacts of Trypanosoma cruzi within the insect vector. Parasitology Today. 7: 240. 1991. [ Links ] 6. Cheryl D. & Kuhn R.: Selective binding of Trypanosoma cruzi to host cell membrane polypeptides. Infection and Immunity Jan 58: 1, 1990. [ Links ] 7. Mortara R. : Trypanosoma cruzi : amastigotes and Trypomastigotes interact with different structures on the surface of HeLa CeIls. Experimental Parasitology 73: 1. 1991. [ Links ] 8. Hernndez-Becerril N., Nava A., Reyes P et al.: IgG subclass reactivity to Trypanosoma cruzi in chronicchagasic patients. Archivos de Cardiologa de Mxico. 7: 199. 2001. [ Links ] 9. Kretili A. & Brenes Z.: Protective effects of specific antibodies in Trypanosoma cruzi associated to anti living trypomastigotes antibodies. Journal Immunology. 16:755. 1976. [ Links ] 10. Higuchi M., Britto T., Reiss M. et al.: Correlation between Trypanosoma cruzi parasitism and myocardium, inflammatory infiltrate in human chronic

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* Laboratorio Clnico. rea de Salud Matina. San Jos. Costa Rica. ** Laboratorio Clnico. Hospital Nacional de Nios. "Dr. Carlos Senz Herrera". Caja Costarricense de Seguro Social. San Jos. Costa Rica. gdiaz50@racsa.co.cr