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Laboratorio de Bioqumica Reporte de la Prctica 1 Determinacin de aminocidos terminales con grupo alfa amino libre Mtodo de Sanger Alumnos:

Valencia Torres Miguel Alejandro & Velzquez Granados Alejandra Seccin: 2 Grupo: 2OV1 Introduccin:
EL mtodo de determinacin de aminocidos terminales y secuenciacin de aminocidos en cadenas peptdicas fue introducido por Frederick Sanger en 1955. En este mtodo se emplea el reactivo 1-fluoro-2,4-dinnitrobenceno (Reactivo de Sanger) para identificar el aminocido N-terminal de una protena. F. Sanger es el nico hombre vivo que ha ganado dos premios Nobel de Qumica. Por su trabajo de secuenciacin de aminocidos en protenas, como la insulina y por sus investigaciones acerca de la determinacin de secuencias de bases de cidos nucleicos. Gracias a Sanger, la idea de las protenas amorfas qued completamente desechada, abriendo as un nuevo campo de investigacin bioqumico que ha tenido grandes avances en el siglo XX y que sigue siendo de enorme importancia en el XXI. Resultados El DNFB (Reactivo de Sanger) de color amarillo reacciona con los grupos amino libres en condiciones ligeramente alcalinas (por eso se adicion el CaHCO3) formando dinitrofenil derivados de los residuos de aminocidos (DNP-aa), tambin de color amarillo. Cuando se hidroliza con HCl se rompen todos los enlaces peptdicos, sin embargo la unin del nitrofenilo y el grupo amino permanece estable, y por lo tanto, el hidrolizado va a contener aminocidos libres y dinitrofenil derivados (DNP) y estos pueden identificarse por la tcnica de cromatografa en papel. Reaccin: Cromatograma

RF DNP Phe: 0.474 RF DNP Glu: 0.312 RF DNP Val: 0.310 RF DNFB: 0.661

DNP P1: 0.326 DNP P2: 0.439 Con el Cromatograma finalizado podemos darnos cuenta, calculando el RF de cada mancha, las cuales siguen siendo de color amarillo porque como ya se mencion el enlace del dinitrofenil con el grupo amino libre no se rompi. Haciendo una comparacin de las manchas de la solucin problema que contiene DNPs aa, resultado de la reaccin del Reactivo de Sanger con la hemoglobina, se obtuvieron los datos expuestos en el esquema del Cromatograma. Bibliografa: Discusin y Conclusin Al hidrolizar la DNP hemoglobina se hidrolizan todos los enlaces peptdicos y obtendremos el dinitrofenil (aportando el color amarillo todava) del primer aminocido de la secuencia, el NH2 terminal (DNPaa), ms el resto de los aminocidos. Los resultados que arroj el Cromatograma es una aproximacin mayor de la mancha DNP P1 con el RF DNP Val, ms que cualquier otra sustancia. Claro que es apreciable la relacin de las otras manchas problema con los dems DNPs aa e incluso con el DNP DNFB sin reaccionar, pero matemticamente se comprueba que el Derivado de Valina se acerc ms. Pudiendo concluir as que el residuo de aminocido N-terminal de la DNP Hemoglobina es DNP Valina. Wade Leroy G. JR. Qumica Orgnica. Pearson Educacin, Espaa, 2004. Pp 11141161. ISBN: 84-205-4102-8. DNP P3: 0.653

Nelson D. L. Cox M. M., Lehinger. Principios de bioqumica 3ra. Ed. Editorial Omega. Pp 138-142 (2000)