Manual para Estudiantes - Nca

UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS
LABORATORIO DE BIOQUMICA MANUAL DE PRCTICAS
DOCENTE: NILDA CEDEO
2013
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA
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Temas
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Bioseguridad en el laboratorio de bioqumica Normas para los trabajos realizados en el laboratorio Preparacin de soluciones Normas para el uso correcto de las micropipetas Variaciones en las mediciones volumtricas Separacin de aminocidos por cromatografa en papel Reacciones cualitativas para identificar aminocidos Determinacin del punto isoelctrico de la gelatina Aislamiento de la casena de la leche de vaca y determinacin de su punto isoelctrico Preparacin de una curva estndar para protenas totales por el mtodo de Biuret Curva estndar pata protenas por el mtodo de Lowry Desnaturalizacin de las protenas Aislamiento de la ovoalbmina Bibliografa
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RECOPILACIN BIBLIOGRAFICA Y EXPERIMENTAL nrcalban@gmail.com
DOCENTE: NILDA CEDEO ALBAN
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TRABAJO 1
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE BIOQUMICA

ANTECEDENTES En la historia de la microbiologa se cuentan muchos ejemplos de infecciones contradas en el laboratorio: en 1957 se seala la ocurrencia de casos de fiebre tifoidea, clera brucelosis, ttanos, etc. asociados con el trabajo de laboratorio, adems de algunos agentes patgenos considerados como de muy alto riesgo por presentar una situacin especial, ya que su inefectividad se mantiene aun en la sangre los tejidos de vertebrados asintomticos naturalmente infectados, con lo cual la enfermedad puede transmitirse a los manipuladores de estos animales aparentemente sanos y sus productos, como ocurri con la enfermedad de Marburgo aparecida en 1967.
OBJETIVO GENERAL Conocer las normas de bioseguridad que deben aplicarse en el laboratorio a fin de disminuir riesgos que afecten la salud e integridad de las personas que trabajan en el laboratorio, comunidad y medio ambiente.
OBJETIVOS ESPECFICOS 1. Sealar las medidas de Bioseguridad universales y del laboratorio 2. Especificar los factores de riesgo en cada caso. 3. Conocer la toxicidad y efectos nocivos de ciertas sustancias qumicas. 4. Establecer los niveles de desinfeccin. JUSTIFICACIN
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RECOPILACIN BIBLIOGRAFICA Y EXPERIMENTAL nrcalban@gmail.com DOCENTE: NILDA CEDEO ALBAN
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA El grupo de trabajo, consciente de los mltiples problemas de salud que puede presentar las personas a causa del inadecuado cumplimiento de las Normas bsicas de Bioseguridad dentro de los laboratorios, se debe realizar una investigacin acerca de la problemtico descuido que se tiene y por ende nosotros adquirir y compartir los conocimientos a las dems personas. El concepto de Bioseguridad se define como una doctrina del comportamiento que compromete a todas las personas que trabajan dentro de este campo a disear estrategias que disminuyan los riesgos de contaminacin. No se debe pasar por alto que el establecimiento de Normas de Bioseguridad tiene como principal objetivo la reduccin de riesgos ocupacionales en todo nivel, por lo que deben seguirse a conciencia. DEFINICION DE BIOSEGURIDAD El significado de la palabra bioseguridad se entiende por sus componentes: bio de bios (griego) que significa vida, y seguridad que se refiere a la calidad de ser seguro, libre de dao, riesgo o peligro. Por lo tanto, bioseguridad es la calidad de que la vida sea libre de dao, riesgo o peligro. Tambin es un conjunto de medidas y normas preventivas, destinadas a mantener el control de factores de riesgo laborales procedentes de agentes biolgicos, fsicos o qumicos, logrando la prevencin de impactos nocivos frente a riesgos propios de su actividad diaria, asegurando que el desarrollo o producto final de dichos
procedimientos no atenten contra la seguridad de los trabajadores de la salud, pacientes, visitantes y el medio ambiente.
PRINCIPIOS DE LA BIOSEGURIDAD Los principios de la Bioseguridad pueden resumirse en:
profesionales de todos los servicios, independientemente de conocer o no su serologa.

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1- Universalidad: Las medidas deben involucrar a todos los pacientes, trabajadores y
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Todo el personal debe seguir las precauciones estndares rutinariamente para prevenir la exposicin de la piel y de las membranas mucosas, en todas las situaciones que puedan dar origen a accidentes, estando o no previsto el contacto con sangre o cualquier otro fluido corporal del paciente. Estas precauciones, deben ser aplicadas para todas las personas, independientemente de presentar o no patologas. 2- Uso de barreras: Comprende el concepto de evitar la exposicin directa a sangre y otros fluidos orgnicos potencialmente contaminantes, mediante la utilizacin de materiales adecuados que se interpongan al contacto de los mismos. La utilizacin de barreras (ej. guantes) no evitan los accidentes de exposicin a estos fluidos, pero disminuyen las probabilidades de una infeccin 3- Medios de eliminacin de material contaminado: Comprende el conjunto de dispositivos y procedimientos adecuados a travs de los cuales los materiales utilizados en la atencin de pacientes, son depositados y eliminados sin riesgo.
RIESGOS EN EL LABORATORIO DE BIOQUIMICA
DEFINICIN El riesgo es la probabilidad de que una amenaza se convierta en un accidente. La vulnerabilidad o las amenazas, por separado, no representan un peligro. Pero si se juntan, se convierten en un riesgo, o sea, en la probabilidad de que ocurra un desastre. Los laboratorios son lugares en los que se manipulan productos qumicos o agentes biolgicos peligrosos, lo que sumado a las operaciones especficas que se realizan, hace que normalmente presenten un nivel de riesgo elevado para la salud. CLASIFICACION Los riesgos se clasifican segn su carcter u origen en fsicos, qumicos, biolgicos y
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aquellos dependientes de factores humanos.
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA RIESGO FSICO
El calor, las radiaciones, la electricidad, los objetos en movimiento y/o que interfieren con ste, los traumatismos, as como, las condiciones ambientales de trabajo, entre otros son agentes fsicos a los que estn expuestos los trabajadores en los laboratorios y a ellos se debe la presencia del riesgo fsico en estas reas. La existencia de fuentes de ignicin en los locales de trabajo, as como las mltiples conexiones de los equipos a una lnea elctrica, el almacenamiento de productos qumicos inflamables y explosivos en los refrigeradores, la presencia de superficies mojadas o hmedas cerca de los equipos elctricos, entre otras constituyen causas comunes de incendios en los laboratorios. Cmo prevenirlos y qu hacer ante un incendio, son aspectos recomendados a incluir en el plan de formacin del personal de laboratorio relacionado con la prevencin y extincin de incendios. El cual no solo debe considerar actividades tericas sino considerar la inclusin de actividades prcticas con cierta regularidad, garantizando que cada individuo sepa de antemano como proceder. El diseo del laboratorio debe responder a las necesidades del mismo, predominando la seguridad, la funcionalidad y la eficacia, sobre los criterios puramente estticos, si bien se deben intentar conjugar todos ellos. La iluminacin, el ruido, el estado de los techos, paredes y suelos, as como el diseo del puesto de trabajo, son algunos de los elementos que comprende este trmino, y tienen un impacto sobre la salud de los trabajadores de los laboratorios, de aqu su importancia en la prevencin del riesgo fsico. Las acciones de control para este tipo de riesgo incluyen medidas relativas a la vigilancia permanente del estado tcnico de los equipos, de las conexiones elctricas, de las condiciones del ambiente laboral, la sealizacin apropiada de las reas, el mantenimiento del orden en los locales, el uso de los medios de proteccin, entre otras. Todas ellas encaminadas a disminuir los daos que los agentes fsico-mecnicos, trmicos, elctricos, radiantes u otros pueden causar.
RIESGO ELCTRICO
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Todo aquel asociado a la electricidad y el uso de aparatos elctricos. Para evitar el riesgo elctrico, debemos aplicar una serie de medidas de proteccin, como son: Conexin a tierra. Transformador de seguridad. Transformador de aislamiento.. Proteccin termomagntica. Puesta a tierra en todos los equipos. Recordar que aunque un elemento no est funcionando, no por eso deja de estar bajo tensin elctrica. No tocar elementos elctricos con las manos hmedas. Antes de utilizar un equipo elctrico, verificar su correcto funcionamiento. Asegurarse que el uso que le va a dar al equipo es el correcto. No realizar reparaciones en circuitos bajo tensin y comprobar que no exista posibilidad de que esto ocurra por error mientras se est reparando. Evitar sobrecargar las lneas elctricas con zapatillas y triples. Evitar el uso de adaptadores en los enchufes. Evitar las conexiones caseras. Controlar la integridad de fichas y cables antes de conectarlas.
Es imprescindible la concientizacin del riesgo que engendra la corriente elctrica, ya que si bien no es la mayor fuente de accidentes, se trata en general de los ms graves, en muchos casos mortales.
RIESGO DE INCENDIO Un incendio es una reaccin qumica de oxidacin reduccin fuertemente exotrmica, siendo los reactivos el oxidante (comburente) y el reductor (combustible), y su producto el fuego. Este es consecuencia del calor y la luz que se producen durante estas reacciones reaccin de combustin se produce cuando el oxgeno del aire, que acta como
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qumicas, normalmente denominadas de combustin. En la mayora de los fuegos, la
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA comburente, reacciona con un material inflamable, tal como la madera, la ropa, el papel, el petrleo, o los solventes, los cuales entran en la clasificacin qumica general de compuestos orgnicos. La combinacin del material combustible con el oxgeno y calor, suministran los tres componentes de la reaccin de combustin que puede dar origen al fuego. As, los tres elementos del fuego pueden representarse mediante el tringulo que se muestran a continuacin.
COMBUSTIBLE
CALOR
OXIGENO
Si el tringulo est incompleto no podr producirse "fuego". La base sobre lo que se apoya la prevencin del fuego y la lucha contra el mismo consiste en romper el triangulo del fuego. En general la reaccin de combustin reside en el oxigeno del aire para que este apoye la combustin, pero los combustibles o materiales inflamables no reaccionan siempre con el oxigeno, para incendiarse; el cloro constituye un ejemplo de otro gas que puede contribuir a la combustin, a semejanza del oxigeno, puede reaccionar con el hidrgeno, y los compuestos orgnicos, por ejemplo la trementina. Para combatir el fuego se utilizan un aparato diseado especialmente para que permita la descarga de una determinada cantidad de agente extinguidor, almacenado en su interior de acuerdo con las necesidades de su operador y el tipo de material combustible.
Tipos de extinguidores: TIPO A: madera, papel, trapos, etc. Smbolo: tringulo verde con la letra A.
TIPO C: equipos elctricos. Smbolo: crculo azul con la letra C. TIPO D: metales combustibles. Smbolo: estrella amarilla con la letra D.
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TIPO B: nafta, pinturas, Smbolo: cuadrado rojo con la letra B.
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA RIESGO QUMICO La exposicin a sustancias qumicas condiciona la existencia del riesgo qumico en los laboratorios. El conocimiento apropiado de los efectos txicos de las sustancias qumicas, las rutas de exposicin y los riesgos asociados a su manipulacin y transporte es vital para el personal que trabaja en estas reas. Las fichas de seguridad describen los riesgos asociados con el uso de un producto qumico, y estn disponibles en los catlogos de numerosas firmas comerciales, de manera que todos los laboratorios que utilicen sustancias qumicas debern disponer de una copia. Los productos qumicos peligrosos con frecuencia se definen y clasifican acorde a las regulaciones dispuestas para el transporte de material peligroso o por los riesgos y los grados de peligrosidad que poseen. Diversos pictogramas identifican los riesgos para las sustancias qumicas, las cuales son conocidas por el grado de reactividad que poseen, inestabilidad, riesgos para la salud, y efectos txicos, entre otros. Sera aconsejable que cada laboratorio tenga una pancarta donde estn sealizados los pictogramas o smbolos de peligrosidad, como tambin se les conoce.
Pictogramas que identifican los riesgos de las sustancias qumicas Existen, adems, las Frases R, que permiten complementar e identificar determinados riesgos mediante su descripcin; y las Frases S, que a travs de consejos de prudencia establecen medidas preventivas para la manipulacin y utilizacin. Por ejemplo:
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http://www.google.com.ec/search?hl=es&gs_rn=14&gs_ri=psy RECOPILACIN BIBLIOGRAFICA Y EXPERIMENTAL - DOCENTE: NILDA CEDEO ALBAN nrcalban@gmail.com
R1 R2 S1 S2 S3 S4
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Explosivo en estado seco. Riesgo de explosin por choque. friccin. fuego u otras fuentes de ignicin. Consrvese bajo llave. Mantngase fuera del alcance de los nios. Consrvese en lugar fresco. Mantngase lejos de locales habitados
RIESGOS PSICOSOCIALES
Son
los
riesgos
dependientes
de
factores
humanos
que
pueden
acrecentar
considerablemente el riesgo de los otros factores e involucran las aptitudes y habilidades para el trabajo, el estado fsico y psicolgico del trabajador, su capacidad intelectual y entrenamiento laboral, entre otros. Todos ellos pueden ser importantes por el dao individual directo que sean capaces de causar por s mismos, as como por contribuir a quebrar las barreras de contencin biolgica, originando o potenciando en tales circunstancias un riesgo biolgico. Los riesgos psicosociales, que estn determinados y dentro de la propia vida individual de cada humano, pueden incidir en la conducta diaria, y esta a su vez en el desempeo de las personas, sean laboral, docente o domstico. Por todo ello, estos riesgos psicosociales, entre los que podemos citar la familia, el estrs, las adiciones, la sexualidad, los conflictos y/o problemas cotidianos, todos a su vez, determinado por los modos, estilos y calidad de vida, que son los que hacen posible el funcionamiento, normal o anmalo de los seres humanos, y ese comportamiento, puede estar determinando en el mejor desenvolvimiento, en este caso, dentro de las acciones que deben desarrollar en su laboratorio, y por supuesto, la forma en que asumen esta actividad, en su esencia, laboral, educativa, y formativa.
RIESGOS BIOLGICOS
como consecuencia la infeccin del personal expuesto con o sin manifestacin de la
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Es el riesgo derivado de la manipulacin o exposicin a los agentes biolgicos, que trae
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA enfermedad. Para el hombre, es el riesgo de infeccin el ms significativo (por la frecuencia e importancia) y el ms antiguo de los reconocidos por los profesionales de la salud. Dismiles causas son atribuidas a las infecciones del personal de laboratorio, entre las que se destacan: el uso de objetos punzo-cortantes contaminados con fluidos corporales, los derrames o salpicaduras, el trabajo con animales de laboratorio, sin tomar las medidas de proteccin reglamentadas en este caso, y que son procedimientos que se van haciendo habituales que generan aerosoles, siendo estos ltimos, la causa ms frecuente de este fenmeno, como demuestran los estudios de Meyer.
CLASIFICACIN DE LOS AGENTES BIOLGICOS POR GRUPOS DE RIESGO Grupo I: Escaso riesgo individual y comunitario. Microorganismos que tienen pocas posibilidades de provocar enfermedades humanas o de importancia veterinaria en los animales.
Grupo II: riesgo individual moderado, riesgo comunitario limitado. Agente patgeno que puede provocar enfermedades humanas o en los animales, pero que tiene pocas posibilidades de entraar un riesgo grave para el personal de laboratorio, la comunidad, el ganado o el medio ambiente. La exposicin en el laboratorio puede provocar una infeccin grave, pero se dispone de medidas eficaces de tratamiento y de prevencin, y el riesgo de propagacin es limitado.
Grupo III: riesgo individual elevado, riesgo comunitario escaso. Agente patgeno que suele provocar enfermedades humanas graves pero que de ordinario no se propaga de una persona infectada a otra.
Grupo IV: elevado riesgo individual y comunitario. Agente patgeno que suele provocar enfermedades graves en las personas o en los animales y que puede propagarse fcilmente de un individuo a otro, directa o indirectamente.
FACTORES DE RIESGO
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Desconocimiento de las caractersticas de peligrosidad de las sustancias. Empleo de mtodos y procedimientos de trabajo intrnsecamente peligrosos. Malos hbitos de trabajo. Empleo de material de laboratorio inadecuado o de mala calidad. Instalaciones defectuosas. Diseo no ergonmico y falta de espacio. Contaminacin ambiental.
De una manera general, las acciones preventivas para la minimizacin de los riesgos causados por estos factores son:

Disponer de informacin sobre las caractersticas de peligrosidad de las sustancias. Disponer de la adecuada informacin para realizar el trabajo de manera segura. Adquirir y mantener buenas prcticas de trabajo. Trabajar con material suficiente y adecuado a las necesidades y en buen estado. Llevar una buena poltica de mantenimiento preventivo, con revisiones peridicas, y reparar con rapidez las averas.
Considerar los aspectos de seguridad (estructural, de diseo y de distribucin) en la fase de diseo. No acumular materiales en las superficies de trabajo. Disponer del espacio de una manera racional.
Equipar el laboratorio con un sistema de ventilacin general, localizada (vitrinas y cabinas) y de emergencia eficaz.
NIVELES DE BIOSEGURIDAD: CLASES DE LABORATORIOS El centro para el control y prevencin de enfermedades (CDC) de los Estados Unidos, especifica cuatro niveles de bioseguridad para el manejo de agentes biolgicos, los cuales son conocidos como Niveles de bioseguridad del 1 al 4, la clasificacin de cada laboratorio identifica el riesgo biolgico que representan para la salud los agentes que ah se manejan.
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NIVEL DE BIOSEGURIDAD 1
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA En este nivel se trabaja con agentes que presentan un peligro mnimo para el personal del laboratorio y para el ambiente. El acceso al laboratorio no es restringido y el trabajo se realiza por lo regular en mesas estndar de laboratorio. En este nivel no se requiere equipo especial ni tampoco un diseo especfico de las instalaciones. El personal de estos laboratorios es generalmente supervisado por un cientfico con entrenamiento en microbiologa.
NIVEL DE BIOSEGURIDAD 2 Es similar al nivel 1 y en l se manejan agentes de peligro moderado hacia el personal y el ambiente, pero difiere del nivel 1 en las siguientes caractersticas: 1. El personal de laboratorio tiene entrenamiento especfico en el manejo de agentes patgenos 2. El acceso al laboratorio es restringido cuando se est realizando algn trabajo 3. Se toman precauciones extremas con instrumentos punzocortantes contaminados 4. Ciertos procedimientos en los cuales pueden salpicar los agentes o aerosoles se llevan a cabo en gabinetes de trabajo biolgico
NIVEL DE BIOSEGURIDAD 3 Este nivel es el que se encuentra en los laboratorios clnicos, de diagnstico, algunos laboratorios universitarios y tambin de investigacin, en el cual se realiza trabajo con agentes exticos o que pueden causar un dao serio y potencialmente mortal como resultado de la inhalacin o exposicin a los mismos (por ejemplo, el Carbunco). El laboratorio cuenta con un diseo y con caractersticas especiales y todos los materiales son manipulados utilizando vestimenta y equipo de proteccin. Sin embargo, se reconoce que no todos los laboratorios llegan a cumplir con las normas recomendadas para este nivel de bioseguridad. En estas circunstancias, es aceptable el realizar las siguientes prcticas para poder seguir operando de una manera segura: 1. Ventilar el aire del laboratorio al exterior 2. La ventilacin del laboratorio se tiene que hacer con un flujo de aire direccional controlado 3. El acceso al laboratorio est restringido
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA 4. Seguir el estndar de prcticas microbiolgicas y equipamiento de seguridad impuesto para el nivel de bioseguridad 2.
NIVEL DE BIOSEGURIDAD 4
Este nivel es el que se utiliza para trabajar con agentes biolgicos que representan un alto riesgo individual de contagio y que adems son un riesgo para la vida. Los agentes nuevos que tienen un cierto parecido con los antgenos de los agentes conocidos que operan en el nivel 4, son confinados a este nivel hasta que se tiene suficiente informacin para confirmar que pertenecen a este nivel o bien pasarlos al nivel adecuado. El personal de estos laboratorios cuenta con entrenamiento especfico y extensivo en el manejo de agentes infecciosos y cuentan con entrenamiento para trabajar en el ambiente estril y controlado de los mismos. Por lo regular los cientficos que trabajan aqu, utilizan trajes especiales que cubren la totalidad de sus cuerpos y que adems tienen una leve sobrepresin para evitar que entren partculas infecciosas al mismo si es que ste llega a desgarrarse. Los laboratorios se mantienen con una presin de aire negativa, lo cual ayuda a impedir que los agentes nocivos escapen al ambiente.
TIPOS DE LABORATORIOS
TIPOS DE LABORATORIOS Los Laboratorios de Microbiologa segn la OMS, se dividen en 4 tipos, segn el tipo de microorganismos con los que trabaja frecuentemente. En cada uno de los 4 tipos de Laboratorio, deben aplicarse, tanto normas de Bioseguridad generales y algunas particulares, en especial en los niveles 3 y 4. 1. Laboratorio Bsico Nivel de Bioseguridad 1.- Escaso riesgo.- Se trabaja con microorganismos con escasa probabilidad de provocar enfermedad. Ej.: Laboratorios de enseanza. 2. Laboratorio Bsico Nivel de Bioseguridad 2 Riesgo moderado.- Se trabaja con microorganismos que provocan enfermedad, pero que no se consideran de riesgo grave
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA individual o para la comunidad, puesto que se disponen de medidas de prevencin y tratamiento eficaces. Ej.: Servicios de atencin primaria. Laboratorios de enseanza. 3. Laboratorio de Contencin Nivel de Bioseguridad 3.- Se trabaja con microorganismos que provocan enfermedades graves, pero que de ordinario, no se propagan fcilmente deun individuo a otro. (Ej: virus de la Hepatitis, sarampin). Se dispone de medidas de prevencin y tratamiento eficaces. El virus del VIH entrara en esta clasificacin, sin embargo, no se cuenta todava con tratamientos eficaces, slo medidas de proteccin. Ej.: Laboratorios de diagnstico especial. 4.- Laboratorio de Contencin mxima Nivel de Bioseguridad 4.- Se trabaja con microorganismos que provocan enfermedades graves, que se propagan fcilmente de un individuo a otro. Alto riesgo comunitario. (Ej. Virus del Ebola) No se dispone de medidas de prevencin y tratamiento eficaces.
BARRERAS DE CONTENCIN BARRERA PRIMARIA Es aquella que protege al personal y al ambiente inmediato del agente de riesgo (vestimenta de uso exclusivo, gabinete de Bioseguridad y equipos provistos de dispositivos de seguridad). BARRERA SECUNDARIA Es aquella que protege el ambiente externo contra los agentes de riesgo (diseo del laboratorio e implementacin de equipos de seguridad de acuerdo al nivel de Bioseguridad). BARRERA MICROBIOLGICA Es un dispositivo o sistema que evita o limita la migracin de microorganismos entre los espacios situados a ambos lados del mismo y permite controlar la concentracin de microorganismos en el ambiente, dentro de lmites prefijados. Tiene como objetivo
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proteger al operador o al operador y al proceso.
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA BARRERA MICROBIOLGICA PARCIAL Es un dispositivo o sistema que limita la migracin de microorganismos entre los ambientes situados a ambos lados del mismo. En este tipo de barrera se recomiendan Pre filtros, Filtros HEPA as como gabinete de BS clase I o II A o B, lo cual de pender del tipo de trabajo que se efecta en un determinado laboratorio. BARRERA MICROBIOLGICA ABSOLUTA Es un dispositivo o sistema hermtico, a prueba de filtraciones de aire o gas, que evita en forma total la migracin de microorganismos entre el ambiente confinado por la barrera y el ambiente exterior de la misma. La barrera microbiolgica absoluta puede confinar al producto o proceso, dejando al operador fuera de la misma o viceversa. En este caso se recomienda gabinete de BS tipo III BARRERA QUMICA Son dispositivos o sistemas que protegen al operador del contacto con substancias irritantes, nocivas, txicas, corrosivas, lquidos inflamables, sustancias productoras de fuego, agentes oxidantes y sustancias explosivas. En este caso se recomiendan los gabinetes de seguridad qumica clase A, B o C. . MANEJO DE SUSTANCIAS QUMICAS El personal que trabaja en laboratorios (profesionales, estudiantes, personal de limpieza), debido a que en su trabajo utiliza sustancias qumicas, estn expuestos a riesgos relacionados con estas sustancias, que pueden afectar negativamente a su salud y al medio ambiente. El personal profesional del laboratorio, debe establecer un manejo eficaz de las sustancias qumicas que se utilizan, as como capacitar al resto del personal y monitorizar continuamente dicho manejo. De esta manera la responsabilidad del manejo eficaz, es compartida por todo el personal. En los laboratorios de enseanza, el profesor, debe establecer un manejo eficaz de las sustancias qumicas que se utilizan, as como formar e informar a los estudiantes sobre el riesgo en el manejo de sustancias qumicas y monitorizar continuamente dicho manejo. De esta manera la responsabilidad del manejo eficaz, es compartida entre todos. La peligrosidad para la salud humana, animal y para el medio ambiente, constituyen la principal razn para establecer en laboratorios (de servicio, enseanza, investigacin, etc) un manejo
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA adecuado de sustancias qumicas y sus residuos. El manejo eficiente de sustancias qumicas en laboratorios, se refiere al control racional de las diferentes etapas de existencia y utilizacin de dichas sustancias en el laboratorio.
Etapas del manejo de sustancias qumicas Es indudable que el conocimiento cientfico de las propiedades fsicas y qumicas de las sustancias qumicas, constituye la piedra fundamental sobre la cual se basa un manejo eficiente, puesto que a partir del conocimiento de sus propiedades, podemos deducir la PELIGROSIDAD de una sustancia qumico. Por este motivo, el conocimiento de la peligrosidad de una sustancia qumica, constituye la primera etapa, las siguientes estarn en funcin de la primera.
ETAPAS 1. CONOCIMIENTO PELIGROSIDAD SUSTANCIAS QUMICAS DE LA DE
CRITERIOS A CONSIDERAR Marco legal Categoras de peligrosidad Identificacin: etiquetado, simbologa pictograma Incompatibilidades Ordenamiento (incompatibilidades, facilidad manejo, etc) Caractersticas del depsito o almacn. Elaboracin y consulta de fichas de seguridad qumicas. Conocimiento de la reactividad, incompatibilidad. de
2. ALMACENAMIENTO
3. BUENAS PRCTICAS EN LA Uso de equipos e infraestructura de proteccin UTILIZACIN Y EN CASOS Eleccin y manejo adecuado de instrumentos de DE ACCIDENTES Y laboratorio Medidas a tomarse en caso de derrame: primeros auxilios, procedimiento de neutralizacin, limpieza DERRAMES LIMPIEZA
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Marco legal 4. DISPOSICIN DE RESIDUOS Reciclaje Tratamiento disposicin final
ALMACENAMIENTO DE SUSTANCIAS QUMICAS El laboratorio no debe ser un lugar de almacenamiento de sustancias qumicas, slo deben permanecer aquellas que sern usadas con mayor frecuencia y en volmenes pequeos. Grandes volmenes deben ser almacenados en lugares o edificios destinados especialmente para ese fin. La recepcin, almacenamiento y distribucin de sustancias qumicas de alto riesgo (inflamables, reactivos, txicos), debe efectuarse en un lugar ad hoc que cumpla con los requisitos de aislamiento, ventilacin y acceso controlado, y a cargo de personal tcnicamente calificado. Dentro del recinto de bodega, se deben destinar reas especiales para productos qumicos slidos, lquidos y gaseosos, tomando en consideracin el riesgo que representan. Cada rea debe estar equipada con estanteras metlicas, para almacenarlos reactivos, de altura no superior a 2,5 m, con una distancia del suelo mnima de 20 cm y separados a 60 cm de la pared. Las sustancias qumicas deben almacenarse en sus envases unitarios originales, sellados y con sus etiquetas originales. Deben entregarse sellados al usuario y en ningn caso deben fraccionarse en la bodega. Cada Unidad debe mantener un listado actualizado de las sustancias qumicas de riesgo que en ella se manipulan y las correspondientes fichas de Bioseguridad qumica. Donde se incluya los siguientes antecedentes: nombre comercial, frmula qumica, compuesto activo, cantidad almacenada, tipo de riesgo ms probable. Las substancias qumicas de alto riesgo que ingresan a los laboratorios son de responsabilidad del personal tcnico calificado, quien debe tomar las medidas anteriormente sealadas para su almacenamiento y uso. El personal que trabaje con substancias qumicas de alto riesgo debe protegerse con ropa, guantes, mascarillas, anteojos adecuados y segn el elemento que se est manipulando. No almacene sustancias qumicas en o cerca de reas calientes, tales como: hornos o cerca de ventanas donde le d directamente el sol.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Siempre anote la fecha en que se recibe la sustancia, tambin cuando se utiliza. En algunos casos, como por ejemplo para compuestos que forman perxidos, se debe incluir la fecha en que se abre el envase y cundo expira.
Realice una inspeccin visual peridica de las sustancias qumicas y sus envases para detectar cundo debe eliminarse la sustancia. Por ejemplo, se debe eliminar y disponer de una sustancia cuando: 1. 2. 3. 4. 5. 6. Siendo un slido contiene lquido Muestra cambios de color El envase este deteriorado o roto Haya formacin de sales en el exterior del envase Observe cambios en la forma del envase por el aumento de presin El perodo de vigencia haya expirado
INCOMPATIBILIDAD DE SUSTANCIAS QUMICAS Otro aspecto a considerar en la peligrosidad de sustancias qumicas durante el trabajo en laboratorio es la incompatibilidad que se observa entre algunas sustancias qumicas que el mezclarse, debido a sus propiedades fsicas o qumicas, pueden generar una reaccin en cadena, peligrosa para el trabajador, estudiante, el centro de trabajo, para el equilibrio ecolgico o el medio ambiente. Entre algunos ejemplos de incompatibilidad entre sustancias y las reacciones peligrosas que se producen tenemos:
INCOMPATIBILIDAD DE LAS SUSTANCIAS QUMICAS
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Est tabla nos muestra en forma resumida las incompatibilidades de ciertas sustancias, que son importantes de considerar tanto en el almacenamiento como en la manipulacin de sustancias qumicas en los laboratorios de trabajo o enseanza.
TOXICIDAD Y EFECTOS NOCIVOS DE ALGUNAS SUSTANCIAS QUMICAS DE USO COMN EN EL LABORATORIO
Toda sustancia qumica puede presentar un marcado efecto agresivo para la salud humana y debe manejarse con precaucin, en muchos casos incluso sustancias consideradas como no peligrosas, a altas dosis (de ingestin, inhalacin o contacto prolongado con la piel y mucosas) pueden ser txicas. Una sustancia es txica si tiene el potencial de causar la muerte, lesiones graves, efectos perjudiciales para la salud del ser humano, ya sea por ingestin, inhalacin o al entrar en contacto con la piel. Las vas respiratorias, la sangre, los pulmones, el hgado, los riones y el aparato digestivo, as como otros rganos y tejidos, pueden sufrir efectos adversos o padecer lesiones graves. Se sabe que ciertas sustancias qumicas son cancergenas o teratgenas.
Tomando como criterio de clasificacin la cantidad de sustancia qumica peligrosa, las sustancias txicas pueden ser:
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http://www.google.com.ec DOCENTE: NILDA CEDEO ALBAN
INCOMPATIBILIDAD+DE+SUSTANCIA+QUIMICAS&biw=1600&bih=783&bav=on.2,or.r_qf.&um=1&ie=UTF-
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Muy txicos (Es necesaria muy pequea cantidad para observar sus efectos) MUY TOXICO Txicos (es necesaria pequea cantidad para observar sus efectos) Nocivos (posibilidad de presentar efectos agudos o crnicos). Una sustancia es nociva, cuando debido a sus propiedades fsicas y qumicas, es capaz de causar dao en un ser vivo.
EFECTOS NOCIVOS NOTIFICADOS DE ALGUNAS SUSTANCIAS QUMICAS SUSTANCIA QUMICA Acetaldehdo Irritacin de los ojos, vas Bronquitis, lesin heptica EFECTOS AGUDOS EFECTOS CRNICOS
respiratorias, somnolencia Amoniaco Anilina Anhdrido actico Benceno Irritacin ocular Parlisis respiratoria, somnolencia Fuerte irritacin de los ojos y vas respiratorias superiores Somnolencia Leucemia, lesin heptica y renal, anemia Cloroformo Fenol Dolor de cabeza, ictericia, Dolor abdominal, diarrea, Trastornos del sistema nervioso central Trastornos del sistema nervioso central, prdida de fijacin de los sentidos Edema pulmonar
irritacin cutnea Mercurio Vmitos, diarreas, nuseas
FICHAS TCNICAS DE SEGURIDAD Las Fichas de Seguridad Qumica, son herramientas informativas, puesto que engloban informacin sobre las condiciones de seguridad e higiene necesarias para el manejo de sustancias qumicas peligrosas. Sirve como base para programas escritos de comunicacin de peligro en los til para conocer el Grado de Peligrosidad, los riesgos para la salud, equipo de proteccin, precauciones en el manejo de las sustancias qumicas peligrosas que se utilizan en un laboratorio.
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centro de trabajo (laboratorios de servicio o de enseanza). Una Ficha de Seguridad Qumica, es
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Instructivos de llenado de fichas de seguridad qumica Ttulo: Ficha de Seguridad Qumica y el nombre de la sustancia. Es aconsejable que el nombre aparezca arriba y a la derecha el nombre de la sustancia Datos generales: Fecha de elaboracin, fecha de la ltima actualizacin, el nombre o la razn social del que elabora la ficha, nombre y direccin del fabricante o importador. Nombre del responsable de la revisin y actualizacin de la ficha. Datos sobre la sustancia qumica: Nombre qumico o cdigo de acuerdo a la designacin cientfica desarrollada por la Unin Internacional de Qumica Pura y Aplicada ( I U PAC), Nombre comercial, familia qumica a la que pertenece, los sinnimos con que se le conoce. Datos de identificacin de la sustancia qumica peligrosa que se debe anotar: Identificacin : El nmero CAS (nmero establecido por la Chemical Abstract Service). El nmero ONU (Referente al transporte de sustancias peligrosas). Los valores del lmite mximo permisible de exposicin (LMPE).
Clasificacin del grado de riesgo: referido a la peligrosidad de la sustancia qumica (corrosivo, explosivo, txico, etc.): Nmero de identificacin de peligro: 1 a 9 Datos de propiedades fsicas Datos de los riesgos de fuego o explosin Equipo de proteccin personal Datos de reactividad e incompatibilidades Riesgo para la salud: Exposicin aguda y crnica Datos de emergencia y primeros auxilios Indicaciones a seguir en caso de fuga o derrame Datos de informacin sobre ecologa.
NORMAS PARA LA DESCONTAMINACION DE MATERIALES Y MUESTRAS BIOLOGICAS EN EL LABORATORIO
tratamiento previo (descontaminacin) antes de su limpieza o disposicin como residuo.

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biolgico, as como los desechables con peligro infeccioso, deben ser sometidos a un
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Los materiales de laboratorio reutilizables, que debido a su utilizacin contienen material
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA As mismo las superficies de trabajo deben ser sometidas a diferentes tipos de tratamiento previo a su limpieza final con detergentes. 1. Todo el equipo reusable (por ej. puntas de micro pipetas, jeringas, cnulas, agujas, tubos para recoleccin de especmenes, etc.) deber ser ubicado en un recipiente metlico o de plstico resistente a punciones o cortaduras. Se recomienda el uso de bidones y botellas de plstico o cualquier recipiente similar acondicionado para tal fin. El recipiente contendr lquido descontaminante (ver Anexo 2, pg. 21) y deber estar ubicado en el mismo lugar de trabajo. 2. Los camisolines, chaquetas y otra prenda protectora que se use en el laboratorio, deber ser colocada, al finalizar la tarea, dentro de un recipiente a prueba de prdidas en el que ser transportado de manera segura al lugar adecuado para proceder a la descontaminacin y posterior preparacin de las prendas para su re uso. 3. Todo elemento descartable (ej. agujas, jeringas, etc.) deber ser colocado en un recipiente de material resistente a punciones y/o cortaduras, similar al descripto en 1), el que ser colocado dentro de un recipiente a prueba de prdidas para ser descontaminado e incinerado siempre que esto sea posible. 4. Para la eliminacin de todo material contaminado, el mtodo de leccin es la incineracin de los mismos si el incinerador est ubicado en el predio del laboratorio y bajo el control del mismo. En caso contrario este material ser auto clavado y luego destruido. 5. ESTERILIZACION Los mtodos utilizados corrientemente en los laboratorios microbiolgicos son:

Calor al rojo (flameado). Calor seco (aire caliente). Vapor a presin (esterilizacin al autoclave). Vapor fluente (tindalizacin). Filtracin.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA La incineracin es tambin un mtodo de esterilizacin, pero se aplica fuera del laboratorio para la eliminacin final de los desechos producidos en l y se considera por separado.
MANIPULACION Y EVACUACION DE DESECHOS CONTAMINADOS
Todo el equipo reusable (puntas de micropipetas, cnulas, tubos, etc.) deber ser ubicado en un recipiente metlico o de plstico resistente a punciones y cortaduras, que contenga liquido descontaminante y deber estar localizado en el mismo lugar de trabajo.
Despus es preciso desinfectar el material con sustancias qumicas antes de limpiarlo e introducirlo en el autoclave.
Todo elemento descartable (agujas, jeringas, etc.) deber ser colocado en un recipiente de material resistente a punciones y cortaduras. Estos recipientes deben ser preferiblemente amplios de paredes rgidas y semirrgidas, con tapa asegurada para su posterior descarte y contener en su interior una solucin descontaminarte, y estar ubicados lo mas cerca posible del lugar de uso de los instrumentos.
Para la eliminacin de todo material contaminado, el mtodo de eleccin es la incineracin de los mismos, o el material puede ser auto clavado y luego destruido o enterrado.
Los residuos lquidos que se sospechen estn contaminados deben ser tratados con desinfectantes antes de su eliminacin o colectados en recipientes que sean eliminados en forma segura
Desinfeccin y limpieza de todas las reas de trabajo la generacin de residuos y desechos debe ser mnima, y la cantidad de materiales de laboratorio para desinfectar y lavar, deben regirse a un criterio racional y cientfico.
DESINFECCIN Y LIMPIEZA DE MATERIALES E INSTRUMENTOS.Todos los materiales desechables que se vayan utilizando en el trabajo de laboratorio, excepto los cortos punzantes, debern ser colocados en basurero de desechos infecciosos que tienen la bolsa roja.
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DESINFECCIN LABORATORIO:
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Y LIMPIEZA DE INSTRUMENTOS
EQUIPOS
DE
Evite contaminar los equipos de laboratorio: Adoptando buenas prcticas procedimentales. Nunca toque o manipule equipos del laboratorio, con guantes contaminados. Si despus de realizar un trabajo, para su proteccin personal debe seguir con guantes, desinfecte los guantes utilizados y cambie por otro par limpio antes de manipular el equipo. Microscopio: Desinfectar al final de la jornada, o en caso de contaminacin accidental, las perillas del macro y del micromtrico, la platina y los oculares, utilizando los productos de desinfeccin recomendados por el fabricante. Recuerde: La mayora de los desinfectantes son corrosivos y pueden daar superficies delicadas del microscopio. Bajo salvedad de la recomendacin del fabricante, si la lente se contamina, puede utilizar solucin al 3% de formaldehido o solucin al 2% de glutaraldehido, desinfectantes que son menos corrosivos y no daan lentes. Limpiar luego, tratando de eliminar todo el desinfectante. Para limpiar los objetivos del microscopio, (de rutina) debe utilizarse solventes en base a alcohol en lugar de xilol. No se recomienda el uso de xilol, debido a que contiene un compuesto carcingeno (benceno). El xilol deja una pelcula oleosa en la lente. Para limpiar los objetivos puede utilizarse hidrxido de amonio o alcohol isoproplico al 70 % utilizando un algodn en un palillo aplicador. No utilizar agua para limpiar los lentes. Centrfuga: Recuerde que son importantes las Buenas Prcticas Procedimentales, para evitar contaminar una centrifuga (No centrifugar tubos destapados, esperar que se detenga la centrfuga antes de destaparla, etc.). Desinfectar y limpiar al final de la jornada diaria o de inmediato en caso de derrame o ruptura de tubos. Desmontar los cestillos y desinfectarlos, si son de plstico, sumergirlos en una solucin de hipoclorito al 0.5%. Si son metlicos, en solucin de formol al 5% o segn instrucciones del fabricante. Dejar 10 a 15 minutos. Lavar con detergente y abundante agua.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA El interior de la centrfuga, puede ser desinfectada, pasando con un pao impregnado con solucin de formol al 5 %, tapar, dejar 10 a 15 minutos. Limpiar con un pao embebido en agua, hasta retirar todo el residuo de desinfectante.
Pipetas automticas: Deben ser desinfectadas y limpiadas al finalizar la jornada o encaso de resultar manchadas con material contaminante. Desinfectar, pasando la superficie con un pao embebido en solucin de hipoclorito al 0.5%. Dejar actuar por 10 a 15minutos. Limpiar con un pao embebido en agua, repetidas veces. Las puntas utilizadas de las pipetas automticas, deben dispensarse en una solucin de hipoclorito al 0.5 %. Dejar actuar 20 minutos. Enjuagar con abundante agua y secarlas en estufa a temperatura baja, para evitar que se daen.
REQUISITOS PARA CONSEGUIR UNA MXIMA EFICACIA: Preparar la dilucin diariamente antes de su empleo Utilizar recipientes que no sean metlicos Mantener el producto en un lugar fresco y protegido de la luz Respetar estrictamente la concentracin segn necesidad
La cantidad de Cloro requerido para un alto nivel de desinfeccin depende de la cantidad de material orgnico presente as: Desinfeccin de material limpio, es decir, sin restos de sangre o lquidos corporales, se requieren diluciones de hipoclorito entre 0.05% y 0.1% (entre500 y 1000 partes por milln). Desinfeccin de material contaminado con sangre, pus, etc., se recomienda concentraciones hasta del 0.5% (5000 partes por milln). A esta concentracin el
objetos y evitar usarlo para la ropa. Desinfeccin de superficies. reas crticas: 0.5%
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producto es muy corrosivo, por ello debe vigilarse el tiempo de inmersin de los
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA reas no crticas: 0.25% Desinfeccin de ropa contaminada y de quirfano: 0.1%
ESTERILIZACION: Es la completa eliminacin o destruccin de toda forma de vida bacteriana, incluyendo las formas esporuladas. El vapor bajo presin, el calor seco, el oxido de etileno y el Glutaraldehido constituyen los elementos ms utilizados para la esterilizacin.
DESCONTAMINACION QUIMICA DESINFECCIN QUMICA: Proceso de destruccin de patgenos por contacto con un producto qumico lquido desinfectante que inactiva y mata a una gran parte de agentes infecciosos contenidos en los desechos. Luego de un perodo de contacto con el agente qumico, este se escurre a la alcantarilla y los desechos son transportados para su traslado final a un relleno sanitario. La eficiencia del tratamiento depende del tipo de patgeno, de la cantidad de material orgnico presente en los desechos, del tipo de desinfectante a utilizar, de su concentracin, tiempo de exposicin, pH etc. El control de desinfeccin puede realizarse utilizando esporas de Bacillus subtilis: La eliminacin de las esporas del Bacillus, garantiza una buena desinfeccin.
Ventajas: No requiere de equipos especiales. El costo de los desinfectantes no es elevado. La capacitacin del personal, tanto para la preparacin de las soluciones desinfectantes, como para su aplicacin a los residuos, es relativamente sencilla. Cuando la cantidad de residuos generados en el laboratorio es pequea, la desinfeccin puede realizarse en el sitio de origen (en el Laboratorio), no requiere de un ambiente muy especializado.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Desventajas: 1. La desinfeccin, no garantiza la destruccin de todos los microorganismos patgenos. 2. La mayora de los desinfectantes poseen propiedades txicas para el hombre y corrosivas para algunos materiales. 3. Los lquidos de escurrimiento, despus del tratamiento por desinfeccin qumica, deben ser tratados antes de proceder a descargarlos al sistema de drenaje, debido a su toxicidad potencial para los sistemas hdricos.
SELECCIN, MANEJO Y ELIMINACION DE DESECHOS BILOGICOS Y QUMICOS DESECHOS CON RIESGO BIOLGICO Se caracterizan por albergar microorganismos patgenos o sustancias txicas, las cuales inciden en el proceso salud enfermedad al entrar en contacto con ellos, tanto en las personas y medio ambiente. Se clasifican en tres (3) grupos: infectantes, no infectantes y txicos.
DESECHOS INFECTANTES Son aquellos que sirven como fuente de infeccin. Transportan agentes infecciosos ocasionando enfermedad a sujetos susceptibles en el momento de entrar en contacto con
http://www.google.com.h&sa=1&q=MANEJO+Y+ELIMINACION+DE+DESECHOS&oq=MANEJO+Y+ELIMINACION+DE+DESE CHOS&gs
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ellos.
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Estos desechos van en bolsa roja, su destino final es la inactivacin del germen por mtodos fisicoqumicos y/o incineracin. Estos desechos, segn sus caractersticas fsicas se clasifican en: desechos slidos y lquidos.
DESECHOS SLIDOS Son aquellos que se generan en gran cantidad en las instituciones de salud y debido a sus caractersticas, composicin y origen, requieren de manejos especficos para evitar propagacin de infecciones, proliferacin de insectos y roedores, malos olores y contaminacin ambiental. Los desechos slidos contaminados con sangre, semen o secreciones vaginales tales como grasas, algodn, elementos corto punzantes, jeringas, residuos anatomopatolgicos y en general materiales absorbentes, debern colocarse en bolsas de color rojo impermeable, impregnado de Cloro a una solucin de 1:10 y posteriormente incinerarse.
DESECHOS LQUIDOS Como sangre entera, excreciones y secreciones (orina, lquido amnitico y secreciones respiratorias) debern depositarse con cuidado en un lavabo o en un sumidero, conectado directamente con un sistema de alcantarillado que tenga el tratamiento adecuado. Si el sistema no cuenta con el tratamiento9para desinfectar los lquidos potencialmente infectantes, se deber agregar algn desinfectante como Hipoclorito de Sodio a la solucin antes de tirarla al sumidero.
DESECHOS NO INFECTANTES Son residuos que no tienen capacidad de causar enfermedad, se clasifican segn su destino final como reciclable y no reciclable.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Desechos reciclables: son los residuos generalmente no biodegradables y reutilizables provenientes de reas sin ningn riesgo txico o biolgico. Debido a sus propiedades se pueden volver a utilizar como materia prima para otros elementos. Estos deben ser separados en su sitio de origen, posteriormente recolectados, almacenados y clasificados mientras se llega a su volumen para su venta (su destino final es la venta a terceros). Entre otros tenemos el papel, plstico, vidrio, placas de Rx, los metales, chatarra, etc. Desechos no reciclables: son desechos que pueden ser o no biodegradables, provienen de reas de atencin a pacientes infectados o sometidos a algn tipo de tratamiento como reas de aislamiento, laboratorios, salas de emergencia, sala de partos. Comprenden: Desechos ordinarios o basuras Residuos de alimentos Piezas anatomopatolgicas Materiales hospitalarios desechables: tales como jeringas, agujas, tubos, sondas, catteres. Material de laboratorio y equipos que por su composicin y uso representan un riesgo biolgico y/o txico. Su destino final es la incineracin, alcantarillado o relleno sanitario.
DESECHOS TXICOS Son aquellos que por sus propiedades fisicoqumicas, pueden producir daos en la salud de las personas, animales o en el medio ambiente; por ejemplo: material radioactivo, sustancias qumicas, pilas, etc. RESIDUO TIPO RECIPIENTE EL QUE SE DEBE DISPONER DE DISPOSICIN EN DESACTIVACIN Y/O
IDENTIFICACIN
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Y ETIQUETA DE
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Bolsa Negra o Son recolectados por la dependencia ORDINARIOS O COMUNES Residuos slidos de oficinas, comn correspondiente en el ramo de recoleccin de basura.
pasillos, reas comunes, cafeteras y dems reas de uso general. RESIDUOS DE RIESGO Bolsa Roja
Desactivacin autoclave. Se
previa envan
en luego
una a
BIOLGICO INFECCIOSOS Residuos que contienen tales como
incineracin.
microorganismos
bacterias, parsitos, virus, hongos, virus oncognicos y recombinantes como sus toxinas, con el suficiente grado de virulencia que una en y
concentracin producir infecciosa
pueden enfermedad huspedes
susceptibles; que no pueden ser sometidos a una desactivacin de alta eficiencia. RESIDUOS DE ANIMALES Animales de experimentacin, Bolsa Negra Se mantienen congelados hasta que se envan luego a incineracin. Indicacin: es importante no
inoculados con microorganismos patgenos y/o provenientes de
mezclar otros desechos que no sean de residuos animales, tales como material de laboratorio, agujas, etc. Recipiente para Se almacenan en los recipientes para punzo cortantes, por despus el son
animales portadores de animales infectocontagiosos. PUNZO CORTANTES Agujas, cuchillas, resto
de punzo cortantes
ampolletas, pipetas, lminas de bistur o vidrio y cualquier otro elemento que por sus
recolectados
personal
autorizado y como disposicin final, estos residuos son incinerados.

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caractersticas
punzo
cortantes
pueda lesionar y ocasionar un

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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA riesgo infeccioso.
RESIDUOS CIDOS O BSICOS Almacenar
en Estos residuos se deben neutralizar con una base o cido dbil segn sea el caso, hasta obtener un pH cercano a la neutralidad y verter al
Residuos lquidos provenientes de recipientes plsticos. sustancias con carcter cido o alcalino.
alcantarillado si no contiene una sustancia txica. SOLVENTES Residuos de solventes Almacenar en Si es posible se puede destilar y
como recipientes de vidrio, reutilizar en el laboratorio; si no es
hidrocarburos, alcoholes, esteres, metlicos o de un posible se debe entregar a una cetonas, otros. organoclorados, entre material segn apropiado empresa especializada para que los las recupere o lo incinere.
caractersticas de la sustancia.
RESIDUOS DE COMPUESTOS Almacenar INORGNICOS. Corresponde sustancias a que residuos de garrafas plsticas.
en Si
no
es
posible
hacer
un
tratamiento o desactivacin de estos residuos, se deben entregar a una compaa para que los disponga. No se deben diluir estos residuos con el fin de cumplir la norma.
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contengan
concentraciones de aniones como nitritos, nitratos, amonio, sulfatos, cloruros, entre otras, con
concentraciones elevadas o que

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superen
los
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA parmetros
establecidos por la norma oficial mexicana NOM-052-ECOL-1993.
METALES PESADOS
Se deben disponer en Segn la naturaleza de cada uno de estos elementos se puede hacer un tratamiento por precipitacin o
Se hace referencia a cualquier envases plsticos. residuo lquidos que contenga
metales como mercurio, plomo, cadmio, nquel, cobalto, estao, bario, cromo, antimonio, vanadio, zinc, plata, selenio, arsnico, entre otros.
floculacin de los metales. Si no se hace un tratamiento previo, se deben entregar a una empresa
especializada para que los disponga. Los lodos resultantes de la
precipitacin se deben desactivar mediante encapsulamiento con cal u otro tratamiento adecuado y
enviarlos a confinamiento.
RECOMENDACIONES 1. Considerar los desechos como potencialmente peligrosos, por ser el producto de todos los procesos biolgicos y qumicos. 2. En el manejo de los desechos se deben tener en cuenta tres elementos bsicos: El Individuo Las acciones Institucionales La coordinacin interinstitucional. 3. Clasificar los residuos en la fuente, utilizando recipientes debidamente marcados
Color verde: desechos ordinarios no reciclables

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que se vaya a desechar.
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y/o bolsas con los cdigos de colores respectivos de acuerdo con el tipo de residuo
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Color rojo: desechos que implican riesgo biolgico Color negro: desechos anatomopatolgicos Color naranja: depsito de plstico. Color blanco: depsito de vidrio. Color gris: papel, cartn, similares. Caractersticas de las bolsas: Material plstico o de polipropileno con calibre de 2 mm., resistentes a temperaturas superiores a la del la autoclave, 121 grados centgrados por 30 minutos. Caractersticas de las canecas: Color acorde a la clasificacin. Impermeables, material plstico. Livianas: facilitan transporte y manejo. Hermticas: con tapa. Tamao adecuado, superficie interna lisa. Marcadas con el rea.
NORMAS GENERALES PARA LOS TRABAJOS REALIZADOS EN EL LABORATORIO DE BIOQUMICA.
1.
Familiarizarse con las bases tericas que fundamentan al experimento que se efectuar en la fecha sealada.
2.
Llegar puntualmente al laboratorio 14:45 H. No utilizar gorra de calle dentro del laboratorio
3.
5.
Comportarse con disciplina y actitud positiva, no olvide practicar
valores
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4.
Poner los celulares en silencio y no utilizarlos dentro del laboratorio.
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA como el respeto, honestidad y solidaridad.
6.
Utilizar correctamente el mandil, dejarlo en el laboratorio si tiene necesidad de salir
7.
No comer, beber, peinarse, maquillarse dentro del laboratorio. Hidrtese antes de entrar al laboratorio. Si es posible utilice zapatos cerrados para los trabajos prcticos. Leer e interpretar los protocolos de los experimentos correctamente, si surge alguna duda consultar a la persona responsable del laboratorio
8.
9.
10.
11.
Seleccione el material que necesitar para el desarrollo del experimento, no utilice materiales en mal estado.
12.
Leer las etiquetas de los reactivos y tomar las medidas de seguridad respectivas, no huela su contenido.
13.
Si fuera necesario utilice elementos de proteccin personal como guantes, mascarilla, anteojos y gorros
14.
No trabaje con reactivos inflamables cerca de hornillas Evite poner las tapas de los reactivos hacia abajo, es posible que sea un riesgo potencial para su salud.
15.
16.
Pipetee utilizando auxiliares para este fin. Trabaje en forma ordenada, no deje portafolio, maletn en el lugar donde desarrolla los trabajos prcticos.
17.
18.
Desarrolle el protocolo de los experimentos sin modificarlo.
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19.
Utilice las cantidades de reactivos necesarias, evite el desperdicio Apagar las hornillas antes de desconectarlas de la toma de energa elctrica. Elimine los reactivos y sustancias con potencial riesgo de infeccin siguiendo las normas para cada caso.
20.
21.
22.
Al terminar su trabajo de laboratorio, deje todo el material completamente limpio y ordenado.
23.
Al trmino de su experimento, realizar el informe con los resultados obtenidos, siguiendo el protocolo establecido previamente, dejar constancia personas participantes del trabajo. de las
24.
Utilizar calculadora cientfica para los clculos, no utilizar el celular para este propsito.
25.
Dejar los asientos en orden. Cuide el laboratorio, no raye las paredes, mesones etc. Lave sus manos antes de abandonar el laboratorio.
26.
27.
TRABAJO 2
PREPARACIN DE SOLUCIONES
INTRODUCCIN
Las soluciones en qumica, son mezclas homogneas a nivel molecular o inico de dos o ms especies qumicas en iguales o distintos estados de agregacin, es decir, componentes
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA slidos, lquidos o gaseosos. Su estudio resulta de inters tanto para la fsica como para la qumica. Algunos ejemplos de soluciones son: agua salada, oxgeno y nitrgeno del aire, el gas carbnico en los refrescos y todas las propiedades: color, sabor, densidad, punto de fusin y ebullicin dependen de las cantidades que pongamos de las diferentes sustancias. COMPONENTES DE UNA SOLUCIN Toda solucin est formada por un soluto y un medio dispersante denominado disolvente o solvente. Se llama soluto a la sustancia minoritaria (aunque existen excepciones) en una disolucin o, en general, a la sustancia de inters. Es una sustancia disuelta en un determinado disolvente o solvente. Lo ms habitual es que se trate de un slido que es contenido en una solucin lquida (sin que se forme una segunda fase). Normalmente, el solvente establece el estado fsico de la disolucin, por lo que se dice que el solvente es el componente de una solucin que est en el mismo estado fsico que la disolucin.
PROPIEDADES GENERALES DE LAS SOLUCIONES Son mezclas homogneas, es decir, las sustancias que la conforman ocupan una sola fase, por lo tanto al dividir la disolucin en n partes iguales o distintas, cada una de las porciones arrojar las mismas propiedades fsicas y qumicas. Son totalmente transparentes, es decir, permiten el paso de la luz.
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Al disolver una sustancia, el volumen final es diferente a la suma de los volmenes del disolvente y el soluto.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA La cantidad de soluto y la cantidad de disolvente se encuentran en proporciones que varan entre ciertos lmites. Por ejemplo, 100 g de agua a 0 C es capaz de disolver hasta 37,5 g de NaCl, pero si mezclamos 40 g de NaCl con 100 g de agua a la temperatura sealada, quedar un exceso de soluto sin disolver. Normalmente el disolvente esta en mayor proporcin que el soluto, aunque no siempre es as. Las propiedades fsicas de la solucin son diferentes a las del solvente puro: la adicin de un soluto a un solvente aumenta su punto de ebullicin y disminuye su punto de congelacin; la adicin de un soluto a un solvente disminuye la presin de vapor de ste. Las propiedades qumicas de los componentes de una disolucin no se alteran; y Sus propiedades fsicas dependen de su concentracin. Sus componentes se separan por cambios de fases, como la fusin, evaporacin, condensacin, etc. Si se dejan en reposo durante un tiempo, las fases no se separan ni se observa sedimentacin, es decir las partculas no se depositan en el fondo del recipiente. Otra propiedad destacable es su capacidad para ejercer una presin osmtica. Si separamos dos soluciones de concentraciones diferentes por una membrana semipermeable (una membrana que permite el paso de las molculas del solvente, pero impide el paso de las del soluto), las molculas del solvente pasarn de la solucin menos concentrada a la solucin de mayor concentracin, haciendo a esta ltima ms diluida. Solubilidad La solubilidad es una medida de la capacidad de una determinada sustancia para disolverse
en algunas condiciones la solubilidad se puede sobrepasar, denominndose a estas
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en otra. Puede expresarse en moles por litro, en gramos por litro, o en porcentaje de soluto;
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA soluciones sobresaturadas. El mtodo preferido para hacer que el soluto se disuelva en esta clase de soluciones es calentar la muestra. No todas las sustancias se disuelven en un mismo solvente, por ejemplo en el agua, se disuelve el alcohol y la sal. El aceite y la gasolina no se disuelven. En la solubilidad, el carcter polar o apolar de la sustancia influye mucho, ya que, debido a este carcter, la sustancia ser ms o menos soluble; por ejemplo, los compuestos con ms de un grupo funcional presentan gran polaridad por lo que no son solubles en ter etlico.
FACTORES QUE INFLUYEN EN LA SOLUBILIDAD Existen algunos factores que influyen en la solubilidad de cuerpos. De ellos los ms importantes son: NATURALEZA DEL SOLUTO Y EL DISOLVENTE: En este caso nos referimos a la clase de valencia que une a los tomos tanto del soluto como del disolvente. Las valencias son: Electrovalentes y Covalentes. En la
Electrovalencia existe transferencia de electrones; y En la covalencia existe compartimiento de electrones. De acuerdo con esto se puede enunciar la siguiente regla: LO IGUAL DISUELVE A LO IGUAL o de otra manera: las sustancias se disuelven en sus semejantes. Lo igual se refiere a que en un cuerpo Electrovalentes disuelve a otro Electrovalentes y un cuerpo covalente disuelve a otro covalente. La palabra igual tambin se refiere al grado de polaridad. Generalmente las sustancias Electrovalentes son generalmente polares y las covalentes son generalmente no polares o tienen polaridad en ntimo grado. Entre una sustancia altamente polar y una no polar se observa que no se disuelven; pero, si se disuelven entre sustancias polares y entre sustancias no polares.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA LA TEMPERATURA:
La cantidad de qu un slido determinado puede contener una disolucin, depende de la temperatura. La solubilidad aumenta por el incremento de la temperatura, especialmente cuando se trata de un lquido con otro lquido, de un slido con un lquido; pero no de un gas con un lquido, pues en este caso disminuye el grado de solubilidad; por ejemplo un litro de agua a 0oC se disuelven en 174g de azcar; en el mismo volumen de agua a 70 oC se disuelven 204g. de azcar y a 100 oC se disuelven 480g de azcar; la temperatura disminuye la solubilidad en soluciones gas-liquido. El grfico muestra las curvas de solubilidad de algunas sales slidas inorgnicas tpica. El proceso de disolucin de una sustancia puede ser endotrmico exotrmico. Un aumento de temperatura favorece la disolucin en los procesos endotrmicos; y una disminucin de temperatura favorece la disolucin en los procesos exotrmicos.
LA PRESIN: Es otro factor que influye en la solubilidad en especial de soluciones gas- liquido, (Experimentalmente se ha comprobado que la solubilidad del gas es directamente proporcional a las presiones aplicadas); pero tiene muy poca importancia entre un lquido con otro lquido y entre un lquido con un slido. GRADO DE DIVISIN DEL SOLUTO: Cuando un cuerpo solido es ms pulverizado, se disolvera con mayor facilidad en un disolvente determinado. LA AGITACIN: Es otro factor que influye en la solubilidad y as vemos que si un slido en un lquido es agitado, se disolver con mayor facilidad; ya que, al agitar la solucin se van separando las
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA capas de disolucin que se forman del soluto y nuevas molculas del solvente continan la disolucin. CLASIFICACION DE LAS SOLUCIONES. POR SU ESTADO DE AGREGACIN: A continuacin una tabla con ejemplos de disoluciones por su estado de agregacin donde se muestran todas las combinaciones posibles. EJEMPLOS DE DISOLUCIONES SOLUTO
GAS
LQUIDO
SLIDO
DISOLVENTE GAS
El oxgeno y otros El vapor de agua en La naftalina se gases (aire) en nitrgeno el aire sublima lentamente en el aire, entrando en solucin
LQUIDO
El dixido de carbono El etanol (alcohol La en agua,
sacarosa
formando comn) en agua; (azcar de mesa) en agua; el
agua carbonatada. Las varios burbujas visibles no hidrocarburos
el cloruro de sodio
son el gas disuelto, uno con el otro (sal de mesa) en sino solamente una (petrleo) agua; oro en
efervescencia. El gas disuelto en s mismo no es visible en la solucin
mercurio, formando amalgama una
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SLIDO
El
hidrgeno en
se El hexano en la El
acero, y
disuelve
los cera de parafina; el duraluminio,
metales; el platino ha mercurio en oro. sido estudiado como medio almacenamiento. de
otras aleaciones metlicas
POR SU CONCENTRACIN
DISOLUCIONES EMPRICAS Tambin llamadas disoluciones cualitativas, esta clasificacin no toma en cuenta la cantidad numrica de soluto y disolvente presentes, y dependiendo de la proporcin entre ellos se clasifican de la siguiente manera:
Disolucin diluida: Es aquella en donde la cantidad de soluto que interviene est en mnima proporcin en un volumen determinado.
Disolucin concentrada: Tiene una cantidad considerable de soluto en un volumen determinado.
Disolucin insaturada: No tiene la cantidad mxima posible de soluto para una
y presin dadas. En ellas existe un equilibrio entre el soluto y el solvente.

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Disolucin saturada: Tienen la mayor cantidad posible de soluto para una temperatura
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temperatura y presin dada.
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Disolucin sobresaturada: contiene ms soluto del que puede existir en equilibrio a una temperatura y presin dadas. Si se calienta una solucin saturada se le puede agregar ms soluto; si esta solucin es enfriada lentamente y no se le perturba, puede retener un exceso de soluto pasando a ser una solucin sobresaturada. Sin embargo, son sistemas inestables, con cualquier perturbacin el soluto en exceso precipita y la solucin queda saturada. Disoluciones Valoradas Las disoluciones valoradas cuantitativamente, s toman en cuenta las cantidades numricas exactas de soluto y solvente que se utilizan en una disolucin. Este tipo de clasificacin es muy utilizada en el campo de la ciencia y la tecnologa, pues en ellas es muy importante una alta precisin. SOLUCIONES VALORADAS EXPRESADAS EN UNIDADES FSICAS, Los trminos diluida o concentrada expresan concentraciones relativas. Para expresar con exactitud la concentracin de las soluciones se usan sistemas como los siguientes: a) Porcentaje peso a peso (% P/P): indica el peso de soluto por cada 100 unidades de peso de la solucin.
b) Porcentaje volumen a volumen (% V/V): se refiere al volumen de soluto por cada 100 unidades de volumen de la solucin.
c) Porcentaje peso a volumen (% P/V): indica el nmero de gramos de soluto que hay en
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cada 100 ml de solucin.
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Porcentuales Para el peso tienen como unidades el gramo y el miligramo: para el volumen tienen mililitros y centmetros cbicos. Estas soluciones se pueden expresar al tato por ciento y al tanto por mil Soluciones al tanto por ciento: (%).- el tanto por ciento, tal vez sea una manera ambigua de representar la concentracin, ya que puede referirse al peso o al volumen. El saco que corresponde al peso indica cuantas partes corresponde al soluto cada cien partes que se encuentra en la solucin. En cuanto al caso del volumen es el nmero de volumen de soluto utilizado. Soluciones al tanto por mil: (o/oo).- expresa que las partes de un soluto estn contenidas en una solucin que posee mil partes de disolucin. Es decir que una cantidad de soluto se encuentra contenida en 1000ml o 1000g de una solucin final. Soluciones Partes por milln (ppm).- Cantidad de miligramos de soluto disuelto en 1 litro ( 1 Kg) de solucin.
SOLUCIONES EXPRESADAS EN UNIDADES QUMICAS Molaridad (M), Es el nmero de moles de soluto por cada litro de disolucin. Por ejemplo, si se disuelven 0,5 moles de soluto en 1000 ml de disolucin, se tiene una concentracin de ese soluto de 0,5 M (0,5 molar). Para preparar una disolucin de esta concentracin habitualmente se disuelve primero el soluto en un volumen menor, por ejemplo 300 ml, y se traslada esa disolucin a un matraz aforado, para despus enrasarlo con ms disolvente hasta los 1000
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ml.
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Se representa tambin como: M = n / V, en donde "n" son los moles de soluto(n=gr soluto/PM) y "V" es el volumen de la solucin expresado en litros. Mtodo ms comn de expresar la concentracin en qumica, sin embargo, este proceso tiene el inconveniente de que el volumen cambia con la temperatura. Molalidad (m), Es el nmero de moles de soluto dividido por kilogramo de disolvente (no de disolucin). Para preparar disoluciones de una determinada molalidad, no se emplea un matraz aforado como en el caso de la molaridad, sino que se puede hacer en un vaso de precipitados y pesando con una balanza analtica, previo peso del vaso vaco para poderle restar el correspondiente valor.
La principal ventaja de este mtodo de medida respecto a la molaridad es que como el volumen de una disolucin depende de la temperatura y de la presin, cuando stas cambian, el volumen cambia con ellas. Gracias a que la molalidad no est en funcin del volumen, es independiente de la temperatura y la presin, y puede medirse con mayor precisin. Formalidad (F), Es el nmero de peso-frmula-gramo por litro de disolucin. F = n PFG / volumen (litro disolucin) El nmero de peso-frmula-gramo tiene unidad de g / PFG. Normalidad (N), Es el nmero de equivalentes de soluto por litro de disolucin .
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA El nmero de equivalentes se calcula dividiendo la masa total por la masa de un equivalente: n = m / meq, o bien total y la cantidad de equivalentes molar: como el producto de la masa por mol, dividido por la masa
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FUNDAMENTO
Su fundamento esencial se basa en el conocimiento y definicin de las diferentes clases de soluciones y su aplicacin en los trabajos experimentales, de investigacin y anlisis que se realizan en los laboratorios.
OBJETIVOS: OBJETIVO GENERAL Preparar diferentes clases de soluciones.
OBJETIVOS ESPECFICOS Conocer las diferencias entre el soluto y disolvente a fin de afianzar conocimientos sobre las combinaciones generales de los diferentes estados de la materia. Realizar clculos para la preparacin y dilucin de diversas clases de soluciones Familiarizar a los estudiantes con el manejo de diversas sustancias qumicas, equipos e instrumentos de laboratorio con el propsito de desarrollar sus habilidades y destrezas en el trabajo prctico.
MATERIALES: Balanza Beakers Esptulas Frascos de vidrio mbar y transparentes Frascos de plsticos Vidrio de reloj Agitadores de vidrio Reverbero Etiquetas Marcadores. Auxiliares de pipetas
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Sorbona
REACTIVOS
Sustancias qumicas slidas y lquidas Agua destilada Etanol
PROCEDIMIENTO:
1. Seleccionar el material a utilizar, cuidando que est limpio, seco y en buen estado.
2. Pesar o medir el volumen de las sustancias qumicas a utilizar
3.
preparar las soluciones, disolviendo el soluto en el disolvente adecuado
4. Enrasar a volumen deseado
5. Envasar
6. Rotular, poniendo el nombre, la concentracin, fecha y la identificacin del riesgo que produce su manejo.
RESULTADOS:
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Clculos respectivos Descripcin del procedimiento que sigui para preparas las soluciones.
DISCUSIN Y CONCLUSIONES
TRABAJO 3
NORMAS PARA EL USO CORRECTO DE LAS MICROPIPETAS
En los trabajos prcticos de Bioqumica los volmenes de las soluciones que se necesitan medir son en muchos casos del orden de los microlitros. Para medir estas cantidades con exactitud y reproducibilidad se emplean las micropipetas o pipetas automticas, sean estas de volumen fijo o variable. Los errores de medida que se pueden cometer depende en gran medida del operador. Para que las medidas sean correctas se debe tener en cuenta las siguientes consideraciones generales. La pipeta debe mantenerse siempre en posicin vertical, durante todo el proceso de medida, nunca inclinada. Cuando la pipetas no se utilice dejarla en el porta pipetas, no en los mesones. Cada pipeta sirve para medir un determinado volumen. Las de volumen fijo miden un nico volumen. Las de volumen variable miden un volumen determinado por el operador y que est sujeto al rango de medida de la pipeta. Por lo general los modelos que miden volmenes inferiores a 200 ul utilizan puntas amarillas y las que miden volmenes superiores a 200 ul hasta 1000 ul, utilizan puntas azules y para aquellas pipetas que miden volmenes superiores a 1 ml, utilizan puntas especificas que pueden ser blancas, verdes, etc. Para medir la pipeta se toma como un pual, el dedo ndice debe reposar sobre la parte superior de la pipeta.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Las pipetas tienen dos topes, para realizar las mediciones recordar que en ellas hay dos topes. La presin del embolo hasta el primer tope sirve para tomar el volumen requerido El segundo tope sirve para expulsar el volumen medido. Es importante que la presin y liberacin del embolo de la pipeta debe hacerse con suavidad para evitar que se formen burbujas dentro de la punta de la pipeta, las mismas que influir en los resultados. Al poner la punta esta debe estar bien ajustada, si no lo est tambin es causas de formacin de burbujas. En resumen el uso de la pipeta conlleva los siguientes pasos. Seleccionar la pipeta adecuada para medir el volumen deseado y que este est dentro del rango de volumen calibrado de la pipeta. Ejemplo si en la pipeta dice rango de 100 1000 ul, usted solo puede medir volumen es que estn dentro de ese rango. Fije el volumen objeto de la medida, girando el embolo suavemente Coloque la punta especfica para la pipeta (desechables) Presione el embolo suavemente con el dedo pulgar hasta llegar al primer tope Introduzca la pipeta con la punta en la muestra, no ms de 3 mm de la superficie del liquido, manteniendo la pipeta en Forma vertical. Se succiona el liquido o muestra soltando suavemente el embolo, se espera unos 3 segundos con la punta dentro del liquido o hasta que este suba completamente. Se retira la punta de la muestra y se lleva esta al tubo donde se va a depositar la misma, presione el embolo hasta el segundo tope para dispensar el volumen. Se retira la punta cuidadosamente, se suelta el embolo para que este vuelva a la posicin normal Se elimina la punta presionando el expulsor de puntas, evite las contaminaciones. Recomendacin: No deje las pipetas en los mesones con la punta llena de muestras o reactivos.
FUNDAMENTO
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA El conocimiento y aplicacin de los procedimientos establecidos para el manejo, limpieza y conservacin correcta de las micropipetas automticas utilizadas para mediciones del orden de los microlitros.
OBJETIVOS OBJETIVOS GENERAL Conocer las normas que permitan el uso correcto de las micropipetas automticas que constituyen una herramienta de trabajo diario en el laboratorio.
OBJETIVOS ESPECIFICOS Manejar correctamente las micropipetas para poder medir con exactitud, precisin y reproducibilidad, los volmenes de microlitos requeridos. Mantener y conservar las micropipetas en las mejores condiciones de limpieza y calibracin a fin de obtener mediciones confiables.
TRABAJO 4
VARIACIONES EN LAS MEDICIONES VOLUMTRICAS
INTRODUCCION Funcin de los laboratorios de anlisis En el laboratorio de Anlisis Qumico se realizan diferentes tcnicas fsico-qumicas y bioqumicas para la determinacin de impureza y pureza de las diferentes protenas que se producen o investigan en el Centro. Tambin se lleva el control analtico de los reactivos y componentes crticos que son utilizados como materia prima en la produccin de los productos farmacuticos. Todas estas tcnicas se realizan bajo un estricto cumplimiento de las Buenas Prcticas de Laboratorio garantizando as resultados confiables, lo cual debe ser demostrada en cada inspeccin realizada tanto por inspectores internos como por la entidad nacional regulatoria y por organizaciones internacionales del nivel de la Organizacin Mundial de la Salud (OMS).
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA En el laboratorio se realizan un sin nmero tcnicas analticas diferentes, las cuales se encuentran validadas Funciones de los laboratorios de anlisis La funcin de los laboratorios de anlisis, sean estos de anlisis qumico, bioqumico, de investigacin cientfica, microbiologa o de cualquier ndole es la de determinar con la mayor exactitud y precisin posibles los resultados de aquellos anlisis en los cuales estn involucrados y de las tcnicas destinadas a la investigacin y de los mtodos que se utilizan frecuentemente. Variaciones en un proceso analtico Se pueden clasificar en fuentes de variaciones: biolgicas y analticas, cada una con numerosas subdivisiones
CONFIABILIDAD DE LOS RESULTADOS

La confiabilidad se refiere a la consistencia de los resultados. En el anlisis de la confiabilidad se busca que los resultados de un cuestionario concuerden con los resultados del mismo cuestionario en otra ocasin. Si esto ocurre se puede decir que hay un alto grado de confiabilidad.
ERRORES EN LAS MEDICIONES ANALTICAS Errores Sistemticos o Determinados Son aquellos que pueden determinarse y probablemente evitarse o corregirse. Afectan al resultado, siempre en el mismo sentido, bien por exceso o por defecto. Su magnitud puede ser constante para todas las muestras de una serie, o ser proporcional al tamao de la muestra, o bien variar de un modo ms complicado, por ejemplo el error cometido al pesar una muestra higroscpica, que es siempre positivo, ya que aumenta con el tamao de la muestra y vara con el tiempo que se emplea en la pesada, con la humedad atmosfrica y con la temperatura. Otros errores comunes de este tipo son causados por impurezas en los reactivos, tambin por errores instrumentales, por ejemplo: mal calibrado de las balanzas, pH-metros.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Errores de operacin, errores del mtodo, por ejemplo: co precipitacin de impurezas, solubilidad de precipitados, interferencias en la muestra. Estos errores sistemticos o determinados, afectan a la exactitud del mtodo analtico. Hay tres fuentes principales de errores determinados, que son: 1. Errores instrumentales 2. Errores de metodologa 3. Errores personales Exactitud Es el grado de concordancia entre el valor medido y aquel considerado como verdadero
ERRORES ALEATORIOS O INDETERMINADOS Son errores fortuitos cuya magnitud y signo no pueden predecirse ni calcularse. Son producidos por el efecto de variables que no se pueden controlar, y se caracterizan porque se presentan por exceso o defecto con igual probabilidad. Se revelan por las pequeas diferencias en mediciones sucesivas efectuadas por el mismo analista. Producen este tipo de errores los pequeos cambios en la T, P, humedad del ambiente, fluctuaciones en el suministro elctrico, corrientes de aire a la hora de la pesada en balanzas de precisin. Estos errores afectan a la precisin de un experimento, y si se realiza un nmero elevado de experiencias, la exactitud puede no resultar necesariamente aceptada. Los errores sistemticos dan lugar a una prdida de exactitud pudiendo o no afectar a la precisin segn que dicho error sea constante o variable.
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Precisin
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Es el grado de concordancia entre replicas de mediciones de la misma cantidad, es decir, es la repetitividad de un resultado.
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
OBJETIVOS ESPECFICOS
MATERIALES Micropipetas de volumen ajustable Pipetas serolgicas Auxiliares de pipeteo Tubos de ensayos 100 x 16 mm Tuberas Reloj Espectrofotmetro
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA REACTIVOS Solucin de permanganato de potasio 0.4 % Agua destilada.
PROCEDIMIENTO
Tubos
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MnO4K 0.4 % (ul) 50 Agua Destilada 5
50 5
50 5
50 5
50 5
50 5
50 5
50 5
50 5
50 5
50 5
Mezclar bien, dejar en reposo 5 minutos. Leer las absaorbancias a 530 nm contra agua destilada
RESULTADOS
Con los resultados de las absorbancias calcule:
Media Suma de todos los valores de una variable dividida por el nmero total de valores
Desviacin estndar
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Coeficiente de Variacin
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA = +/- 5 %
% de error.
% de error =
-/+ 10 %
TRABAJO 5
SEPARACIN DE AMINOCIDOS POR CROMATOGRAFA EN PAPEL
INTRODUCCIN Un aminocido es una molcula orgnica con un grupo amino (-NH2) y un grupo carboxilo (-COOH; cido). Los aminocidos ms frecuentes y de mayor inters son aquellos que forman parte de las protenas. Dos aminocidos se combinan en una reaccin de condensacin que libera agua formando un enlace peptdicos; estos dos "residuos" de aminocido forman un di pptido. Si se une un tercer aminocido se forma un tripptido y as, sucesivamente, para formar un polipptido. Esta reaccin tiene lugar de manera natural en los ribosomas. Todos los aminocidos componentes de las protenas son L-alfa-aminocidos. Por lo tanto, estn formados por un carbono alfa unido a un grupo carboxilo, a un grupo amino, a un hidrgeno y a una cadena (habitualmente denominada cadena lateral o radical R) de
diferentes aminocidos; existen cientos de radicales por lo que se conocen cientos de
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estructura variable, que determina la identidad y las propiedades de cada uno de los
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA aminocidos diferentes, pero slo 20 forman parte de las protenas y tienen codones especficos en el cdigo gentico. La unin de varios aminocidos da lugar a cadenas llamadas polipptidos o simplemente pptidos, que se denominan protenas cuando la cadena polipeptdica supera los 50 aminocidos o la masa molecular total supera las 5.000 uma y, especialmente, cuando tienen una estructura tridimensional estable, definida. Estructura general de un aminocido La estructura general de un aminocido se establece por la presencia de un carbono central alfa unido a: un grupo carboxilo (rojo en la figura), un grupo amino (verde), un hidrgeno (en negro) y la cadena lateral (azul):
CLASIFICACIN Existen muchas formas de clasificar los aminocidos; las dos formas que se presentan a continuacin son las ms comunes. Segn las propiedades de su cadena
Otra forma de clasificar los aminocidos de acuerdo a su cadena lateral. Los aminocidos se clasifican habitualmente segn las propiedades de su cadena lateral:
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Neutros polares, polares o hidrfilos : serina (Ser, S), treonina (Thr, T), cistena (Cys, C), glutamina (Gln, Q), asparagina (Asn, N), tirosina (Tyr, Y) y glicina (Gly, G).
Neutros no polares, apolares o hidrfobos: alanina (Ala, A), valina (Val, V), leucina (Leu, L), isoleucina (Ile, I), metionina (Met, M), prolina (Pro, P), fenilalanina (Phe, F) y triptfano (Trp, W).
Con carga negativa, o cidos: cido asprtico (Asp, D) y cido glutmico (Glu, E).
Con carga positiva, o bsicos: lisina (Lys, K), arginina (Arg, R) e histidina (His, H).
Aromticos: fenilalanina (Phe, F), tirosina (Tyr, Y) y triptfano (Trp, W) (ya incluidos en los grupos neutros polares y neutros no polares FUNCIN DE ALGUNOS AMINOACIDOS:
Alanina: Funcin: Interviene en el metabolismo de la glucosa. La glucosa es un carbohidrato simple que el organismo utiliza como fuente de energa.
Arginina: Funcin: Est implicada en la conservacin del equilibrio de nitrgeno y de dixido de carbono. Tambin tiene una gran importancia en la produccin de la Hormona del Crecimiento, directamente involucrada en el crecimiento de los tejidos y msculos y en el mantenimiento y reparacin del sistema inmunolgico.
Asparagina:
Funcin:
Interviene
especficamente
en
los
procesos
metablicos del Sistema Nervioso Central (SNC).
Hgado y su correcto funcionamiento. El cido L- Asprtico se combina con

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Acido Asprtico: Funcin: Es muy importante para la desintoxicacin del
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA otros aminocidos formando molculas capases de absorber toxinas del torrente sanguneo.
Cistina: Funcin: Tambin interviene en la desintoxicacin, en combinacin con los aminocidos anteriores. La L - Cistina es muy importante en la sntesis de la insulina y tambin en las reacciones de ciertas molculas a la insulina.
Cistena: Funcin: Junto con la L- cistina, la L- Cistena est implicada en la desintoxicacin, principalmente como antagonista de los radicales libres. Tambin contribuye a mantener la salud de los cabellos por su elevado contenido de azufre.
Acido Glutmico: Funcin: Tiene gran importancia en el funcionamiento del Sistema Nervioso Central y acta como estimulante del sistema inmunolgico.
Glicina: Funcin: En combinacin con muchos otros aminocidos, es un componente de numerosos tejidos del organismo.
Histidina: Funcin: En combinacin con la hormona de crecimiento (HGH) y algunos aminocidos asociados, contribuyen al crecimiento y reparacin de los tejidos con un papel especficamente relacionado con el sistema cardio-vascular.
Serina: Funcin: Junto con algunos aminocidos mencionados, interviene en la desintoxicacin del organismo, crecimiento muscular, y metabolismo de grasas y cidos grasos.
Tirosina: Funcin: Es un neurotransmisor directo y puede ser muy eficaz en el tratamiento de la depresin, en combinacin con otros aminocidos necesarios.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Prolina: Funcin: Est involucrada tambin en la produccin de colgeno y tiene gran importancia en la reparacin y mantenimiento del msculo y huesos.
La Metionina adems de un aminocido esencial, es un antioxidante de gran alcance y una buena fuente de azufre para el cuerpo. Es uno de los principales elementos de consolidacin de las protenas implicadas en la formacin de clulas y tejidos.
Aminocidos esenciales.
Isoleucina: Funcin: Junto con la L-Leucina y la Hormona del Crecimiento intervienen en la formacin y reparacin del tejido muscular.
Leucina: Funcin: Junto con la L-Isoleucina y la Hormona del Crecimiento (HGH) interviene con la formacin y reparacin del tejido muscular.
Lisina: Funcin: Es uno de los ms importantes aminocidos porque, en asociacin con varios aminocidos ms, interviene en diversas funciones, incluyendo el crecimiento, reparacin de tejidos, anticuerpos del sistema inmunolgico y sntesis de hormonas.
Metionina: Funcin: Colabora en la sntesis de protenas y constituye el principal limitante en las protenas de la dieta. El aminocido limitante determina el porcentaje de alimento que va a utilizarse a nivel celular.
Fenilalanina: Funcin: Interviene en la produccin del Colgeno, fundamentalmente en la estructura de la piel y el tejido conectivo, y tambin en la formacin de diversas neurohormonas.
Triptfano: Funcin: Est inplicado en el crecimiento y en la produccin hormonal, especialmente en la funcin de las glndulas de secrecin adrenal.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Tambin interviene en la sntesis de la serotonina, neurohormona involucrada en la relajacin y el sueo.
Treonina: Funcin: Junto con la con la L-Metionina y el cido Asprtico ayuda al hgado en sus funciones generales de desintoxicacin.
Valina: Funcin: Estimula el crecimiento y reparacin de los tejidos, el mantenimiento de diversos sistemas y balance de nitrgeno.
Debido a la crtica relacin entre los diversos aminocidos y los aminocidos limitantes presentes en cualquier alimento. Solo una proporcin relativamente pequea de aminocidos de cada alimento pasa a formar parte de las protenas del organismo. El resto se usa como fuente de energa o se convierte en grasa si no debe de usarse inmediatamente.
CROMATOGRAFA La cromatografa es un mtodo fsico o de separacin para la caracterizacin de mezclas complejas, la cual tiene aplicacin en todas las ramas de la ciencia y la fsica. Es un conjunto de tcnicas basadas en el principio de retencin selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes. Las tcnicas cromatogrficas1 son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase mvil que consiste en un fluido (gas, lquido o fluido supercrtico) que arrastra a la muestra a travs de una fase estacionaria que se trata de un slido o un lquido fijado en un slido. Los componentes de la mezcla interaccionan en distinta forma con la fase estacionaria. De este modo, los componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van separando. Despus de que los componentes hayan pasado por la fase estacionaria,
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concentracin y del tipo de compuesto.
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separndose, pasan por un detector que genera una seal que puede depender de la
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Diferencias sutiles en el coeficiente de particin de los compuestos da como resultado una retencin diferencial sobre la fase estacionaria y por tanto una separacin efectiva en funcin de los tiempos de retencin de cada componente de la mezcla. La cromatografa puede cumplir dos funciones bsicas que no se excluyen mutuamente:
Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos ms puros y que puedan ser usados posteriormente (etapa final de muchas sntesis).
Medir la proporcin de los componentes de la mezcla (finalidad analtica). En este caso, las cantidades de material empleadas son pequeas.
Clasificacin Mtodos de separacin: Clasificacin de la cromatografa Tipos Cromatografa en papel Fase mvil Lquido Fase estacionaria Lquido (molculas de agua contenidas en la celulosa del papel) Cromatografa en capa Lquido fina Cromatografa de gases Gas Slido o lquido Slido (menos polar) Slido (polar) o lquido o lquido Slido
Cromatografa lquida Lquido en fase inversa (polar)
Cromatografa lquida Lquido en fase normal (menos polar) Cromatografa lquida Lquido de intercambio inico (polar)
Slido
Cromatografa lquida Lquido de exclusin Cromatografa lquida Lquido de absorcin
Slido
Slido
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fluidos supercrticos
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Cromatografa
de Lquido
Slido
CROMATOGRAFA EN PAPEL La cromatografa en papel es una tcnica utilizada para anlisis inorgnico cualitativo, permite llevar a cabo la separacin e identificacin de iones, trabajando con cantidades mnimas de sustancia. Pertenece al tipo de Cromatografa de particin se fundamenta en que las sustancias problema, pueden tener diferentes coeficientes de reparto en dos disolventes de inmiscibilidad limitada, uno permanece fijo en la superficie del papel fase estacionaria generalmente en agua, la fase mvil constituida generalmente por una mezcla de de cromatografa, la
disolventes parcialmente miscibles en ella. Hay varios tipos
ascendente (papel hacia arriba), descendente (papel invertido), radial y de separacin de zonas y sectores. 1- Cromatografa ascendente: el disolvente se encuentra en el fondo del recipiente que sostiene al papel y va subiendo a travs de el por capilaridad. 2- Cromatografa descendente: el disolvente esta en un recipiente esta en un recipiente del que cuelga el papel, fluye por l hacia abajo por una combinacin de capilaridad y gravedad. Al entrar en contacto con los disolventes empieza su fase de movilidad lo que produce unas manchas caractersticas sobre el papel, generalmente, estas no son coloreadas y se revelan con una lmpara fluorescente, los contornos se marcan con lpiz. Como medida en
cromatografa sobre papel se emplea el Rf (Retencin factor), el cual se define como el cociente de dividir el recorrido de la sustancia por el disolvente, esto es, la distancia media desde el origen hasta el centro de la mancha (X) dividida por la distancia que media desde el origen hasta el frente del disolvente En la cromatografa en papel se utiliza como fase estacionaria una hoja de papel de celulosa de elevada pureza recubierta de una capa de agua asociada a las fibras de celulosa. La fase mvil, en la que ir disuelta la muestra, se forma por disolventes cuya naturaleza se elige en funcin de los componentes que se pretenden separar.
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OBJETIVOS
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA OBJETIVO GENERAL Separar aminocidos mediante la aplicacin de la cromatografa ascendente de papel y su posterior identificacin mediante el reactivo de ninhidrina.
OBJETIVOS ESPECFICOS Calcular el factor de retencin para cada aminocido separado Identificar las muestras desconocidas Diferenciar la reaccin de los alfa aminocidos de los iminocidos.
MATERIALES Cmara de cromatografa Tubos capilares sin anticoagulante Probeta Embudo Pipetas serolgicas Papel filtro 3 MM Horno T 100 - 120 C Cinta adhesiva
REACTIVOS Soluciones de aminocidos 100 mg % Solvente de desarrollo compuesto de: Butanol 1 Propanol 2 Ac. Brico 0.5 % Revelador Solucin de ninhidrina 0.5 %
PROCEDIMIENTO
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA En un papel filtro que debe tener dimensiones aproximadas a la cmara a utilizar
Realizar con un lpiz una lnea a 2 cm del borde inferior del papel
Aplique aproximadamente 5 ul de las soluciones de aminocidos y muestras sobre la lnea trazada, deje una distancia entre aplicaciones de 2 cm Espere a que el papel se seque. En la cmara para cromatografa agregue 50 ml de solvente de desarrollo. Pegue el papel en la tapa de la cmara e introduzca en la cmara que tiene el solvente de desarrollo. Espere a que el solvente suba por capilaridad como mnimo 10 cm o 1:30 horas Retire el papel y marque con lpiz hasta donde migro el solvente de desarrollo. Lleve el papel a una estufa por 3 a 5 minutos a temperatura de 100 - 120 C Retire el papel y con atomizador moje el papel con una solucin de ninhidrina al 0.5 % Lleve el papel al horno entre 5 a 10 minutos a una temperatura de 100 - 120 C. Retire el papel y marque el perfil de cada aminocido separado .
MECANISMO DE ACCIN DE LOS AMINOACIDOS CON LA NINHIDRINA
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RESULTADOS
Calcule el factor de retencin para cada aminocido separado aplicando la formula
La identificacin
se realiza por comparacin numrica de los Rf de las sustancias
conocidas y desconocidas.
DISCUSIN Y CONCLUSIONES.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA TRABAJO 6 REACCIONES GENERALES PARA IDENTIFICAR AMINOCIDOS. Las propiedades de los aminocidos presentan gran inters ya que estos constituyen el alfabeto de la estructura proteica y determinan muchas de las propiedades importantes de las protenas. Los aminocidos participan en muchas reacciones en las cuales intervienen las funciones - amino, carboxilo y los diversos grupos R. Los aminocidos suelen ser slidos, nada voltiles insolubles en disolventes que poseen poca polaridad y solubles en agua en las que originan soluciones electrolticas. Son anfolitos ya que poseen grupos cidos y bsicos y se presentan en disolucin como molculas cargadas. Los aminocidos dan reacciones caractersticas gracias a los grupos funcionales que presentan los grupos alfa carboxilo, alfa amino y grupos funcionales de la cadena lateral, siendo de gran utilidad en el estudio y separacin de mezclas de aminocidos y por tanto son fundamentales para el conocimiento de la qumica de las protenas ya que permiten la identificacin y anlisis de aminocidos en los hidrolizaos de protena
Por la estructura peptdica y la presencia de determinados grupos (grupos R), las protenas pueden reaccionar con una variedad de agentes originndose productos coloreados. Estas reacciones son la base para la determinacin cuantitativa y cualitativa de las protenas. Por presentarse variaciones en la composicin de los aminocidos de las diferentes protenas, se manifiestan diferentes colores y grados de intensidad para una misma reaccin, ntimamente relacionado con la naturaleza de la protena analizada.
aminocido no esencial en los mamferos ya que su sntesis se produce a partir de la hidroxilacin de otro aminocido: la fenilalanina, es un slido que forma cristales y que
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Tirosina: es uno de los 20 aminocidos que forman las protenas. Se clasifica como un
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA generalmente presenta un color blanquecino, aunque tambin puede ser incoloro. Se considera un aminocido polar y protonable. Aunque normalmente se clasifica como aminocido hidrofbico a causa de su anillo aromtico. Hay que tener en cuenta que tambin contiene un grupo hidroxilo. Normalmente se encuentra sin carga, aunque a pH muy bsico presenta carga negativa. Por lo que respecta a su solubilidad sabemos que es soluble en agua y ligeramente soluble en alcohol. Tambin conocemos su insolubilidad en ter. Triptfano: es un aminocido esencial en la nutricin humana. Es uno de los 20 aminocidos incluidos en el cdigo gentico. Se clasifica entre los aminocidos apolares, tambin llamados hidrfobos. Es esencial para promover la liberacin del neurotransmisor serotonina, involucrado en la regulacin del sueo y el placer. Su punto isoelctrico se ubica a pH=5.89. La ansiedad, el insomnio y el estrs se benefician de un mejor equilibrio gracias al triptfano. Cistena: es un -aminocido con la frmula qumica HO2CCH (NH2) CH2SH. Se trata de un aminocido no esencial, lo que significa que puede ser sintetizado por los humanos. Los codones que codifican a la cistena son UGU y UGC. La parte de la cadena donde se encuentra la cistena es el tiol que es no polar y por esto la cistena se clasifica normalmente como un aminocido hidrofbico. Cistina: La cistina es un dmero de dos cistenas a travs de un puente disulfuro. Tiene un punto de ebullicin entre 247 y 249 C. Prolina: es uno de los aminocidos que forman las protenas de los seres vivos. La prolina est involucrada en la produccin del colgeno. Est tambin relacionada con la reparacin y mantenimiento de los msculos y huesos. Se trata del nico aminocido proteinognico cuya -amina es una amina secundaria en lugar de una amina primaria. Aunque no posee un grupo imino, en ocasiones es referida errneamente como un iminocido. Se forma directamente a partir de la cadena pentacarbonada del cido glutmico, y por tanto no es un aminocido esencial. Hidroxiprolina: es un aminocido no esencial constituyente de protenas y derivado de la prolina. Para esta hidroxilacin, existe una protena llamada prolinhidroxilasa, que reconoce a la prolina como su sustrato.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Arginina: es uno de los 20 aminocidos que se encuentran formando parte de las protenas. En el tejido heptico, la arginina puede ser sintetizada en el ciclo de la ornitina (o ciclo de la urea). Se clasifica, en poblacin peditrica, como un aminocido esencial. Este aminocido se encuentra involucrado en muchas de las actividades de las glndulas endocrinas Fenilalanina: es un aminocido. Se encuentra en las protenas como L-fenilalanina (LFA), siendo uno de los diez aminocidos esenciales para humanos. La fenilalanina es parte tambin de muchos psicoactivos. Posee un pK de 8.5, un pH de 8 Tiene un peso molecular de 69.000, un pI de 4,9. Casena: es una fosfoprotena (un tipo de heteroprotena) presente en la leche y en algunos de sus derivados (productos fermentados como el yogur o el queso). En la leche, se encuentra en la fase soluble asociada al calcio (fosfato de calcio) en un complejo que se ha denominado caseingeno. Precipitan cuando se acidifica la leche a pH 4,6. Por ello, a la casena tambin se le suele denominar protena insoluble de la leche. Gelatina: es una mezcla coloide (sustancia semislida), incolora, translcida, quebradiza y casi inspida que se obtiene a partir del colgeno procedente del tejido conectivo de despojos animales hervidos con agua. Tambin existe una gelatina vegetal conocida como agar-agar. La gelatina es una protena compleja, es decir, un polmero compuesto por aminocidos. Como sucede con los polisacridos, el grado de polimerizacin, la naturaleza de los monmeros y la secuencia en la cadena proteica determinan sus propiedades generales. Una notable propiedad de esta molcula es su comportamiento frente a temperaturas diferentes: se derrite con el agua caliente y se solidifica nuevamente y se hincha con el agua fra.
FUNDAMENTO
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA OBJETIVOS ESPECFICOS
MATERIALES Pipetas serolgicas de 2, 5, 10 ml Tubos de ensayos 180 x 16 mm Reverberos Jarros enlozados Varillas de vidrio REACTIVOS Solucin de albumina 1 % Solucin de casena al 1 % Solucin de gelatina 1 % Soluciones de aminocidos al 0.2 % Reactivo de Millon Reactivo de Hopkinn- Cole NaOH 40 % Acetato de plomo 2 %, Metionina, triptfano, cistena, prolina, fenilalanina, histidina, glicina, arginina Reactivo de Millon Reactivo de Hopkinn- Cole NaOH 40 % Acetato de plomo 2 % Reactivo de Ehrlich.- p dimetilaminobenzaldehido al 10 % en acido clorhdrico concentrado Urea 0.1 %
Hidrxido de amonio Urea 40 %

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Nitroprusiato de sodio al 2 %
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Hipoclorito de sodio alcalino. Alfa naftol al 0.02 % en etanol Urea Consideraciones generales sobre algunos reactivos utilizados en la prctica. ClH: Es muy corrosivo y cido. Se emplea comnmente como reactivo qumico y se trata de un cido fuerte que se disocia completamente en disolucin acuosa. A temperatura ambiente, el cloruro de hidrgenos un gas ligeramente amarillo, corrosivo, no inflamable, ms pesado que el aire, de olor fuertemente irritante. Cuando se expone al aire, el cloruro de hidrgeno forma vapores corrosivos densos de color blanco. El cloruro de hidrgeno puede ser liberado por volcanes. Por ingestin puede producir gastritis, quemaduras, gastritis hemorrgica, edema, necrosis. Se recomienda beber agua o leche y NO inducir el vmito. Por inhalacin Puede producir irritacin, edema y corrosin del tracto respiratorio, bronquitis crnica. Se recomienda llevar a la persona a un lugar con aire fresco, mantenerla caliente y quieta. Si se detiene la respiracin practicar reanimacin cardio pulmonar. Al contacto con la piel Puede producir quemaduras, lceras, irritacin. Retirar de la zona afectada toda la vestimenta y calzados y lavar con agua abundante durante al menos 20 minutos. Y al contacto con la piel puede producir necrosis en la crnea, inflamacin en el ojo, irritacin ocular y nasal, lcera nasal.
cido Ntrico concentrado, HNO3: es un lquido incoloro que se descompone lentamente por la accin de la luz, adoptando una coloracin amarilla por el NO2 que se produce en la reaccin. En el aire hmedo despide humos blancos, su punto de fusin es de -43C y su punto de ebullicin es de 83 C pero a esa temperatura se acenta su descomposicin. Es soluble en agua en cualquier proporcin y cantidad y su densidad es de 1,5 g/ml.
Hidrxido de Sodio, NaOH: el hidrxido de sodio es un slido blanco cristalino sin olor que absorbe humedad del aire (higroscpico). Es una sustancia manufacturada. Cuando se disuelve en agua o se neutraliza con un cido libera una gran cantidad de calor que puede ser suficiente como para encender materiales combustibles. El hidrxido de sodio es muy corrosivo. Generalmente se usa en forma slida o como una solucin de 50%.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA cido Actico Glacial: Inflamable. Provoca quemaduras graves.
Acetato de Plomo II: es un compuesto qumico cristalino de color blanco con un sabor ligeramente dulce. Se obtiene tratando litargirio (xido de plomo (II) PbO) con cido actico. Al igual que otros compuestos plmbeos, es una sustancia muy txica. El acetato de plomo es soluble en agua y glicerina. Con agua, forma el trihidrato, Pb (CH3COO)23H2O, una sustancia cristalina monoclnica eflorescente de color blanco o incoloro . cido Pcrico: slido, cristales amarillos, inflamable, de frmula qumica C6H2OH (NO2)3, cido Tricloroactico: Sustancia custica y corrosiva, hemosttica eficaz, que aplicadas sobre la piel, mucosas o tejidos patolgicos- heridas, ulceraciones, provocan destruccin de la clulas por accin qumica originando una masa o tejido muerto, alrededor acta como irritante, dando lugar a una zona inflamada ocasionada por el medicamento. Se puede emplear para destruir lesiones intra epiteliales, cervicales, uterinas o displasias cervicales.
PROCEDIMIENTO
LA REACCIN XANTOPROTEICA (GRUPO BENCENICOS) Los aminocidos, que contienen un ncleo aromtico forman nitro derivados dan color amarillo cuando se calientan con cido ntrico concentrado. Las sales de estos derivados son de color naranja intenso en medio alcalino. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali, se torna color amarillo oscuro. La fenilalanina, la tirosina y en cierto grado el Triptfano, as como todas las protenas que los contienen, dan positiva la prueba. Esta reaccin caracteriza al triptfano Este aminocido se condensa fcilmente con varios aldehdos en presencia de cidos fuertes para dar compuestos coloreados. En la reaccin se utiliza el reactivo de Ehrlich (pdimetilaminobenzaldehdo al 10% en HCL concentrado.) que reacciona con un buen nmero de compuestos orgnicos tales como ndoles, aminas aromticas y compuestos ureicos para dar complejos coloreados.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA REACCIONES PARA CISTENA Y CISTINA (NITROPRUSIATO) Cuando los aminocidos y las protenas que contienen grupos tilicos se calientan en medio fuertemente alcalino, el azufre presente reacciona para formar sulfuros. Este sulfuro puede detectarse por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de plomo por adicin de acetato de plomo. Los grupos tioles tambin reaccionan con el nitroprusiato de sodio en presencia de un exceso de amonaco para dar un complejo de color rojo.
REACCIN CON ACETATO DE PLOMO ALCALINO
Los Aminocidos azufrados como Metionina, Cistena y Cistina se reconocen por la formacin de precipitados de Sulfuro de Plomo de color gris oscuro o negro que se forman cuando reacciona con Acetato de Plomo en medio alcalino.
REACCIN DE MILLON.- Especfico para aminocidos fenlicos como la tirosina
REACCIN DE SAKAGUCHI, especifica para aminocidos que contengan grupo guadininio como la arginina . PROCEDIMIENTO
A. REACCIN XANTOPROTECA (NITRODERIVADOS)
0.5 ml de soluciones aminocidos y 0.5 ml de protenas agregar 0.5 ml de cido ntrico dejar enfriar y observar el cambio de color, agregar hidrxido de sodio 10 M para lograr alcalinidad el cambio de color de amarillo a naranja brillante es reaccin positiva.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA B. PRUEBA DEL CIDO GLIOXLICO (TRIPTFANO)
El grupo indlico del triptfano reacciona con el acido glioxlico en presencia del cido sulfrico concentrado dando un color purpura.
2 ml solucin de aminocido triptfano, tirosina, glicina y muestra aada 2 ml de cido actico glacial, luego aada 2 ml de cido sulfrico concentrado por las paredes hasta formar 2 capas la formacin de un anillo violeta en la interface de los lquidos, la reaccin es positiva
C.- REACCIN DE PAULY ( IMIDAZOL)
El cido sulfanlico diazotado se una con las aminas, fenoles e imidazoles para dar compuestos azo fuertemente coloreados .Los compuestos de diazonio se forman nicamente en el frio, por lo que las soluciones deben enfriarse en hielo antes de la diazotizacin
2 ml de muestra agregue 1 ml de acido sulfanlico mezcle enfre en hielo agregue 1 ml de nitrito de sodio y deje en frio durante 3 minutos alcalinice la solucin aadiendo 2 ml de carbonato de sodio y anote el resultado.
D.- REACCIN DEL NITROPRUSIATO (TIOLES)
Los grupos tioles reaccionan con grupos de nitroprusiato de sodio en presencia de un exceso de amoniaco para dar un color rojo.
aada 2 ml de hidrxido de amonio
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Mida 0.5 ml de una solucin de nitroprusiato de sodio con 2 ml de muestra mezcle y
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA E.- REACCION DCE MILLON (TIROSINA)
Mida 3 ml de solucin de tirosina y 3 ml de solucin de muestra agregue 5 gotas del reactivo de millon. Caliente a bao de mara y observe el resultado, la solucin de tirosina debe tener pH acido, acidificar si es necesario con cido ntrico 2 M
F.- REACCIN DE SAKAGUCHI (GUANIDINIO)
2.5 ml de solucin de arginina y 3 ml de solucin de muestra aada 0.5 ml de NaOH 2 N y 0.5 ml de solucin alcohlica de alfa naftol al 0.02 %, aadir 0.5 de solucin de hipoclorito alcalino mezclar bien y despus de 30 segundos aadir 0.5 de urea. Observe los resultados,
RESULTADOS
Determine la clase de aminocidos presente en las muestras
DISCUSION Y CONCLUSIONES
TRABAJO 7
DETERMINACIN DEL PUNTO ISOELECTRICO DE LA GELATINA
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INTRODUCCIN
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA IONIZACION DE AMINOACIDOS Y PROTEINAS
Los aminocidos forman una sal interna debido a la transferencia de un protn del grupo carboxilo cido al grupo amino bsico. La estructura carboxilato de amonio resultante se conoce como el zwitterion.
CH3CH(NH2)CO2H
CH3CH(NH3)+CO2-
PROPIEDADES ACIDAS-BASICAS
Cualquier aminocido puede comportarse como cido y como base, se denominan sustancias anfteras. Los aminocidos presentan distintos estados de ionizacin dependiendo del pH: Cuando el pH es cido, en el medio abundan los protones y todos los grupos funcionales estn saturados de H+: la carga del aminocido (sin tener en cuenta el radical) es (+) Cuando una molcula presenta carga neta cero est en su punto isoelctrico. Si un aminocido tiene un punto isoelctrico de 6,1 su carga neta ser cero cuando el pH sea 6,1. Los aminocidos y las protenas se comportan como sustancias tampn. A medida que el pH se va neutralizando, la [H+] va disminuyendo y el/los grupos cidos van perdiendo primero los protones, conservndolos el grupo amino (bsico). El aminocido adquiere el estado de ion dipolar, con dos extremos con cargas opuestas Cuando la [H+] se hace mnima, el medio adquiere carcter bsico. En este punto, el grupo amino pierde un H y el aminocido adquiere carga (-)
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DEFINICION DEL PUNTO ISOLECTRICO
El punto isoelctrico se define como el pH en el cual el nmero de cargas positivas se iguala al nmero de cargas negativas que aportan los grupos ionizables de una molcula. En el punto isoelctrico la carga neta de la molcula es cero (0). En los aminocidos los grupos ionizables corresponden a grupos carboxilos, amino, fenlicos y tilicos.
Los puntos isoelctricos proporcionan informacin til para razonar sobre el comportamiento de los aminocidos y protenas en solucin. As, la presencia de grupos ionizables en estas molculas tiene importantes consecuencias sobre la solubilidad.
Los aminocidos y las protenas son menos solubles en su punto isoelctrico si las dems condiciones permanecen iguales. Esto se debe a que los iones dipolares no presentan carga neta y cristalizan en forma de sales insolubles a ese pH.
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ECUACION DE HENDERSON-HASSELBACH La ecuacin de Henderson-Hasselbalch es una frmula qumica que se utiliza para calcular el pH, de una solucin buffer, o tampn, a partir del pKa (la constante de disociacin del cido) y de las concentraciones de equilibrio del cido o base, del cido o la base conjugada.
PUNTO ISOELECTRICO DE LA GELATINA
En su calidad de protena, la gelatina exhibe una conducta anfotrica debido a la presencia de grupos funcionales de aminocidos y grupos amino y carboxil terminales. En medios acdicos, es decir en presencia de altas concentraciones de iones H+, la gelatina tiene carga positiva. En medios alcalinos, es decir en presencia de iones OH-, la gelatina tiene carga negativa. En el punto isoelctrico (IEP) las cargas positivas de los radicales NH3+ igualan a las cargas negativas de los radicales COO-.
materias primas y el tipo de proceso: Las gelatinas Tipo A (cidas) presentan un IEP que oscila entre 6 - 9.5. Sin embargo, el
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El IEP es una propiedad intrnseca de la gelatina, determinada por los tratamientos de las
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA tratamiento previo de ciertas materias primas (como por ejemplo el proceso de depilado del cuero o piel) pueden bajar el IEP a menos de 6. Las gelatinas Tipo B (alcalinas) tienen un IEP que oscila entre 4.5 5.6. La gelatina con un IEP bajo se debe al fenmeno de de amidacin de aminocidos. Las gelatinas de Tipo A y B provenientes de materias primas tratadas o pre tratadas con sustancias alcalinas que eliminan los grupos de amidas, presentan un IEP bajo.
COMO SE CALCULA EL PI Para calcularlo se deben utilizar los pKa
(Los pKa a considerar para esta ecuacin, en una tabla de pH, son los que contienen a la especie qumica con carga igual a cero, cuando tienen ms de un pKa).
Las molculas complejas, tales como las protenas, se combinan con los iones hidrgeno y con otros iones presentes en la disolucin, dando lugar a la carga neta de la molcula. A la concentracin de iones hidrgeno, o al pH, para el cual la concentracin del ion hbrido de una protena es mxima y el movimiento neto de las molculas de soluto en un campo elctrico es prcticamente nulo, se le denomina punto isoelctrico.
Los aminocidos pueden existir como sal interna, llamada zwitterin Esto ocurre porque el protn del grupo carboxilo es abstrado por el grupo amino NH2 que est en posicin alfa y quedando este como grupo amonaco NH3+.
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SOLUCIONES BUFFER
Las soluciones amortiguadoras, tambin conocidas como buffer o tampn, son disoluciones que por el agregado de cantidades moderadas de cidos o bases fuertes mantienen prcticamente constante el pH Tambin se dice que una solucin es amortiguadora, reguladora o tampn si la concentracin de protones H+, es decir el pH de una solucin no se ve afectada significativamente por la adicin de pequeas cantidades o volmenes de cidos y bases.
MTODOS DE OBTENCIN DE LA GELATINA
La conversin del colgeno insoluble a la gelatina soluble constituye la transformacin esencial de su elaboracin industrial. El proceso puede llevar a diferentes gelatinas dependiendo de las rupturas en las uniones intramoleculares. La materia prima requerida para su produccin se obtiene de las curtiembres y mataderos. Se realizan diferentes pretratamientos: Los cueros son tratados con sales para su preservacin. Las pieles se congelan para su almacenamiento y transporte.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Los huesos de ganado vacuno, se desgrasan y se trituran antes de su transporte y procesamiento. Todos los das se recogen huesos frescos que deben ser procesados dentro de las 24 h del sacrificio del animal. Los huesos se tratan con una solucin cida para extraer los minerales (fosfato de calcio) sin afectar los contenidos orgnicos. Despus de un lavado, este producto llamado osena, se vuelve flexible. Los fosfatos se separan por precipitacin con cal. La osena y las pieles se procesan con cidos para su hidrlisis a temperatura ambiente por un tiempo relativamente corto. Por otra parte, los cueros y la osena se ponen en contacto con una solucin de cal durante 5 a 10 semanas a temperatura ambiente. Luego se ajusta al pH requerido para la extraccin de gelatina propiamente dicha. Una vez realizada la extraccin se filtra y concentra en forma continua en un evaporador al vaco. La solucin se esteriliza a 145 C (293F) y se enfra rpidamente para gelificar la solucin. Este gel es extrusado en forma de granos y secado con aire filtrado y asptico.
UTILIDAD NUTRICIONAL E INDUSTRIAL DE LA GELATINA
Utilidad nutricional:
Al ser protena en estado puro, sa es su mayor composicin nutritiva: protena (84-90%), sales minerales (1-2%) y agua (el resto). La gelatina se utiliza en la fabricacin de alimentos para el enriquecimiento protenico, para la reduccin de hidratos de carbono y como sustancia portadora de vitaminas.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Utilidad industrial:
La gelatina tiene un amplio uso en la industria alimenticia, principalmente como : Emulsificante en la repostera y heladera; Se usa tambin en la industria farmacutica como cubierta de las cpsulas, y En la fotografa como base para la emulsin de cristales de haluros de plata (la parte sensible a la luz) de las pelculas y papeles fotogrficos.
FUNDAMENTO
Todas las protenas presentan un valor de pH en el cual la carga elctrica se encuentra internamente balanceada. Es decir, que el nmero de cargas positivas es igual al nmero de cargas negativas. A ese valor de pH se lo conoce con el nombre de punto isoelctrico ( pI). En el pI la protena pierde su estabilidad en disolucin y precipita, presenta mnima solubilidad y carece de movilidad electrofortica. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Determinar el comportamiento de la protena gelatina en diversas soluciones de pH, con la finalidad de establecer el valor de pH donde se encuentra su punto isoelctrico. .
OBJETIVOS ESPECFICOS Determinar el punto Isoelctrico de la protena gelatina, en base a su solubilidad en soluciones buffer a diferente valor de pH.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Calcular el valor de pH, donde la gelatina presenta su pI. Graficar el grado de precipitacin y grado de solubilidad Vs Ph
MATERIALES Pipetas serolgicas de 1,2, 5, 10 ml Tubos de ensayos con tapones de goma 180 x 16 mm Tuberas
REACTIVOS Acido actico 0.1 M Acetato de sodio 0.1 M Etanol absoluto Gelatina 2 %
PROCEDIMIENTO Tubos 1 2 3 4 5 Acido actico 0.1 M (ml) 4.6 4.0 2.5 1.0 0.4 Acetato de sodio 0.1 M (ml) 0.4 1.0 2.5 4.0 4.6 Valor de pH
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Agregar a cada tubo 2 ml de gelatina 2 %
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Mezclar bien para obtener soluciones homogneas
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Al tubo 3 agregue lentamente etanol absoluto de 95 %, hasta que obtenga una turbidez permanente (mezclar despus de cada adicin
A los tubos restantes agregue el mismo volumen que agreg al tubo 3, manteniendo el mismo procedimiento.
Dejar en reposo de 40 60 minutos, observe los resultados en los tubos.
RESULTADOS El comportamiento de la gelatina vara con el pH en que se encuentra, por tal razn en valores diferentes a su PI permanece soluble, en el valor de pH, don se encuentra su PI, se vuelve insoluble y precipitara de la solucin. Esta reaccin Bioqumica permite determinar
GRFICOS
Graficar el grado de precipitacin Vs pH Graficar el grado de solubilidad Vs pH
TRABAJO 8
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AISLAMIENTO
DE
LA
CASENA
DE
LA
LECHE
DE
VACA
DETERMINACIN DE SU PUNTO ISOELCTRICO

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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA COMPOSICIN DE LA LECHE Agua: La leche es 90% de agua, lo que hace al agua el ms importante componente de la leche. Protena: La leche contiene entre 3 y 4 % de protena, dependiendo en la raza de la vaca. Leche con mucha grasa tambin tiene mucha protena, y viceversa. Grasa: La grasa est entre 3.5 y 5.25%, dependiendo en la raza de la vaca y su nivel de nutricin. La grasa da a la leche un color amarillo, cuando esta cuenta con poco contenido graso entonces se torna ms blanca Lactosa: La lactosa es el azcar de la leche y est presente en un 5%, da a la leche su sabor dulce y forma el 52% de los slidos en leche. Vitaminas y Minerales: Vitamina A: Protege contra enfermedades y mantiene la piel. Vitamina D: Ayuda a absorber el calcio. Calcio: Regula el corazn, ayuda a los nervios, y hace huesos y dientes fuertes. Contenido y tipos de protenas, valor biolgico La leche es una mezcla de protenas, lpidos y glcidos en un medio acuoso. Adems contiene vitaminas y sales minerales. Las protenas estn formadas por aminocidos, que son como los eslabones que componen una cadena que sera la protena.
Segn la combinacin y proporcin de estos aminocidos existen varios tipos de protenas (Casena, Beta-lacto globulina Alfa-lacto albmina Lactoferrina,
Lactoperoxidasa, Inmunoglobulinas, Lisozima) que tienen funciones especializadas, pero todas: - Protegen el recin nacido y a la glndula mamaria de las infecciones. - Intervienen en la formacin de otros componentes de la leche como la lactosa y la grasa.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA La cantidad de protenas que contiene la leche es diferente segn la especie de que se trate. En la leche de vaca aparecen 3,50 gr de protenas por cada 100 ml. En la leche humana aparecen 1,10 gr por cada 100 ml. Casena La casena comprende varios tipos de molculas que son la alfa-casena, la beta-casena, la kappa-casena y la gamma-casena.
Son partculas slidas que permanecen en suspensin. En la leche de vaca es la protena ms abundante, constituyendo el 80% del total de sus protenas. En la leche humana constituyen el 40%. En la leche humana no hay ni alfa ni gamma casena. Cuando esta protena se encuentra en un medio cido o alcalino (limn, vinagre, etc.) se produce su desnaturalizacin, tiene lugar una reaccin qumica que altera su estructura, y deja de ser soluble en agua lo que provoca que precipite en forma de grumos. Beta-lacto globulina La beta-lactoglobulina es una protena que no se encuentra en la leche humana, pero si en la leche de vaca. Cuando se hierve la leche esta protena forma parte de la capa de nata que aparece en la superficie. Alfa-lacto albmina La alfa-lacto albmina es una protena que favorece la unin de la glucosa con la galactosa para la sntesis la lactosa. Se encuentra tanto en la leche de vaca como en la humana. Forma parte de la capa de nata que aparece en la superficie de la leche hervida. Lactoferrina La lactoferrina es una protena de color rojo debido al hierro al que esta unida. Tiene una importante funcin defensiva antibacteriana y anti fngica ya que altera la pared de los
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA microorganismos causando su muerte y adems fija el hierro del medio quitndoselo a estos que ya carecen de l para su proliferacin. Parece ser que tambin acta protegiendo la glndula mamaria. Adems de en la leche, se encuentra en la saliva, las secreciones vaginales y bronquiales, y en los grnulos de los neutrfilos -una de las clases de clulas blancas de la sangre. En la leche de vaca es elevada en el calostro pero luego desciende mucho. En la leche materna es especialmente elevada en el calostro pero se mantiene a lo largo a lo largo de toda la lactancia. Lactoperoxidasa La lactoperoxidasa es una protena casi inexistente en la leche humana, pero muy abundante en la saliva.
Tambin es muy abundante en la leche de vaca. Es una enzima con funcin defensiva que en presencia de agua oxigenada, procedente de los microorganismos o producida por otros enzimas, cataliza la formacin de una serie de sustancias con gran poder antimicrobiano. Inmunoglobulinas Las inmunoglobulinas son protenas que reconocen las estructuras extraas al organismo, como las membranas de los microorganismos, y se unen a ellas permitiendo que sean destruidas por el sistema inmune. Son muy abundantes en el calostro y menos en la leche.
En los bebs estas inmunoglobulinas no se absorben sino que permanecen en el tubo
Lisozima
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digestivo para protegerlo frente a microorganismos patgenos.
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA La lisozima es una protena presente en la leche humana pero ausente de la leche de vaca. Su funcin es disolver la pared de los microorganismos patgenos. Acta adems potenciando la accin de los leucocitos. La lisozima y la lactoferrina se potencian mutuamente en su accin contra los agentes infecciosos.
La lisozima se encuentra tambin en la clara del huevo. Qu tipo de protena es la casena La casena es una protena de la leche del tipo fosfoprotena (un tipo de heteroprotena) que se separa de la leche por acidificacin y forma una masa blanca. Las fosfoprotenas son un grupo de protenas que estn qumicamente unidas a una sustancia que contiene cido fosfrico, por lo tanto su molcula contiene un elemento fsforo. La casena representa cerca del 77 al 82 por ciento de las protenas presentes en la leche y el 2.7 por ciento en la composicin de la leche lquida. Cuando coagula con renina, es llamada paracasena, y cuando coagula a travs de la reduccin del pH es llamada casena cida. Cuando no est coagulada se le llama caseingeno. La casena es un slido blanco-amarillento, sin sabor ni olor, insoluble en agua. Se dispersa bien en un medio alcalino, como una solucin acuosa de hidrxido de sodio: NaOH, formando caseinatos de sodio. La casena se obtiene coagulando leche descremada con cido clorhdrico diluido, as se imita la acidificacin espontnea. Los cogulos se decantan, se lavan con agua, se desecan y finalmente se muelen. Usos y aplicaciones de la casena La casena generalmente se emplea en la industria para la fabricacin de pinturas especiales y la preparacin de tejidos, clarificacin de vino, elaboracin de preparados farmacuticos,
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA la fabricacin de plsticos (botonera, peines y mangos de utensilios), pinturas, la cual ha sido usada desde la antigedad por los egipcios, pegamento en relojera, carpintera (recomendadas para maderas terciadas), papel, vidrio, porcelana. Tipos de casena Las protenas que se denominan casenas son especficas de cada especie, se clasifican en los siguientes grandes grupos de acuerdo con su movilidad electrofortica: s1-casena, s2casena, -casena y -casena. Esta ltima es de especial inters en la industria quesera, ya que su hidrlisis enzimtica por el cuajo (la enzima quimosina) genera una nueva protena, denominada para--casena. Cuando esta ltima reacciona con el calcio genera
paracaseinato de calcio. Durante el proceso de maduracin del queso, y a partir de la para-casena, se forman unos macro pptidos denominados -casenas, responsables de las caractersticas reolgicas y organolpticas de los quesos. Como se pueden separar las diferentes protenas de la leche Precipitacin de la casena Una propiedad caracterstica de la casena es su capacidad para precipitar. Dada la naturaleza compleja de las molculas de casena, y de las micelas formadas con ellas, la precipitacin puede ser originada por diferentes agentes. Debe observarse que hay gran diferencia en las condiciones ptimas de precipitacin de la casena en forma micelar y la que se encuentra en forma no micelar, como por ejemplo el caseinato sdico. Las explicacin es que siguen se refieren principalmente a la precipitacin de la casena micelar.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Composicin de aminocidos de la casena
FUNDAMENTO
OBJETIVO GENERAL
MATERIALES Fiola de 125 ml Varilla de vidrio Placa con excavaciones Tubos 100 x 16 mm Tubos 180 x 16 mm Pipetas serolgicas de 2, 5, 10 ml
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Tuberas Centrifuga Marcadores
REACTIVOS
Acido clorhdrico 0.1 M Hidrxido de sodio 0.1 M Indicador verde de bromocresol 0.04 % Agua acidulada Acido actico 0.1 M Acetato de sodio 0.1 M Acetato de sodio 0.2 M Muestra: leche de vaca y una gota
PROCEDIMIENTO
Aislamiento de la casena
En una fiola aada 5 ml de leche Agregue gotas de ClH 0.1 N, hasta obtener un precipitado Deje que el precipitado se deposite en el fondo de la fiola, y tome el pH del suero sobrenadante por medio del indicador verde de bromocresol, tomando con una varilla un poco de suero y depostelo junto con el indicador, en una excavacin de la placa de reacciones a la gota. Compare la reaccin con una gota del indicador con una gota de buffer pH 4.6 (referencia). Si las coloraciones no son iguales ajuste el pH agregando ClH NaOH 0.1 M y repitiendo el procedimiento anterior. Despus de ajustado el pH, centrifugue a 3000 rpm por 5 minutos.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Descartar el lquido sobrenadante Agregue al residuo 8 ml de agua acidulada, remueva el precipitado Centrifugue a 3000 rpm por 5 minutos Descarte el lquido sobrenadante Al residuo agregue 6 ml a cada tubo de acetato de sodio 0.2 M Remueva el precipitado hasta obtener una suspensin fina y homognea. Diluya la suspensin de casena mezclando 1 ml de suspensin de casena ms 9 ml de agua destilada.
DETERMINACIN DEL SOLUBILIDAD
PI DE LA CASENA POR ESTUDIO DE LA
Prepare una serie de soluciones buffer utilizando acido actico y acetato de sodio 0.1 M. Estas soluciones deben tener diferentes valores de pH pero que se encuentren cerca del pI de la casena
SOLUCIONES AMORTIGUADORAS
N tubo 1 2 3 4 5 6 7
cido actico 0.1 M (ml) 9.0 8.0 7.5 5.5 3.0 2.0 1.0
Acetato de sodio 0.1 M (ml) 1.0 2.0 2.5 4.5 7.0 8.0 9.0
Valor de pH
Deje en reposo de 30 a 45 minutos y observe la turbidez en cada tubo.

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Mezclar bien y a cada tubo agregue 0.5 ml de casena diluida en agua, mezcle bien
RESULTADOS
Valore el grado de precipitacin dando valor de 0 a 4 cruces Valore el grado de solubilidad dando valores de 0 a 4 cruces
GRFICOS
Realice los grficos de precipitacin y solubilidad Vs pH
TRABAJO 9
PREPARACIN DE UNA CURVA ESTNDAR PARA PROTENAS TOTALES POR EL MTODO DE BIURET.
Determinacin de protenas totales en la clara de huevo.
INTRODUCCIN Las protenas son macromolculas; son biopolmeros, es decir, estn constituidas por gran nmero de unidades estructurales simples repetitivas (monmeros). Debido a su gran tamao, cuando estas molculas se dispersan en un disolvente adecuado, forman siempre
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molculas ms pequeas.
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dispersiones coloidales, con caractersticas que las diferencian de las disoluciones de
Por hidrlisis, las molculas de protena se escinden en numerosos compuestos relativamente simples, de masa pequea, que son las unidades fundamentales constituyentes de la macromolcula. Estas unidades son los aminocidos, de los cuales existen veinte especies diferentes y que se unen entre s mediante enlaces peptdicos. Cientos y miles de estos aminocidos pueden participar en la formacin de la gran molcula polimrica de una protena. Todas las protenas tienen carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno y casi todas poseen tambin azufre. Si bien hay ligeras variaciones en diferentes protenas, el contenido de nitrgeno representa, por trmino medio, 16% de la masa total de la molcula; es decir, cada 6,25 g de protena contienen 1 g de N. El factor 6,25 se utiliza para estimar la cantidad de protena existente en una muestra a partir de la medicin de N de la misma. La sntesis proteica es un proceso complejo cumplido por las clulas segn las directrices de la informacin suministrada por los genes. Las protenas son largas cadenas de aminocidos unidas por enlaces peptdicos entre el grupo carboxilo (-COOH) y el grupo amino (-NH2) de residuos de aminocido adyacentes. La secuencia de aminocidos en una protena est codificada en su gen (una porcin de ADN) mediante el cdigo gentico. Aunque este cdigo gentico especifica los 20 aminocidos "estndar" ms la seleno cistena y en ciertos Archaea la pirrolisina, los residuos en una protena sufren a veces modificaciones qumicas en la modificacin postraduccional: antes de que la protena sea funcional en la clula, o como parte de mecanismos de control. Las protenas tambin pueden trabajar juntas para cumplir una funcin particular, a menudo asocindose para formar complejos proteicos estables. MTODOS PARA CUANTIFICAR PROTENAS Existen diferentes mtodos para la cuantificacin de protenas. Muchos de estos mtodos se basan en:
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA a) la propiedad intrnseca de las protenas para absorber luz en el UV. b) para la formacin de derivados qumicos c) la capacidad que tienen las protenas de unir ciertos colorantes.
Principales mtodos para la cuantificacin de protenas, principales ventajas y desventajas
Mtodo Mtodos de Absorcin
Ventajas No se pierden las muestras
Desventajas Interfieren muchos
compuestos que absorben en Mtodos Derivados Colorimtricos Biuret Bastante protenas Muestra interferencias Es barato Lowry Tiene bastante sensibilidad No todas las protenas pocas especfico para Tiene poca sensibilidad
reaccionan igual Muestra interferencias detergentes no muchas como inicos,
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sulfato amnico etc.
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Bradford
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Muy sensible Muestra interferencias con detergentes
BCA
Es el mtodo mas sensible Es el que muestra menos interferencias
Mtodos Derivados Fluorimtricos o-ftalaldehido Muy sensible La interferencia de aminas contaminantes en la muestra No todas las muestras
reaccionan igual
QU ES Y CMO SE PREPARA UNA CURVA ESTNDAR, PARA QUE SE UTILIZA? Una curva estndar es una herramienta cuantitativa de la investigacin, un mtodo de trazar anlisis datos que se utilizan para determinar concentracin de una sustancia, particularmente protenas y DNA. Puede ser utilizado biolgicos El anlisis primero se realiza con varias concentraciones sabidas de una sustancia similar a sa que es medida. Por ejemplo una curva estndar para la concentracin de la protena se crea a menudo usando concentraciones sabidas de albmina del suero vacuno. El procedimiento de anlisis puede medir absorbancia, densidad ptica, luminiscencia, fluorescencia, radiactividad, o algo ms. Un anlisis para la protena se llama Anlisis de Bradford; es un anlisis colorimtrico. La intensidad del color se mide lo ms mejor posible en 595 nanmetro, que es el mximo
en
muchos
experimentos
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA absorbencia (A mximo) frecuencia del tinte azul, usando a espectrofotmetro. En este caso cuanto mayor es la absorbencia, ms alta es la concentracin de la protena. Estos datos se utilizan para hacer la curva estndar, trazando la concentracin en el eje de X, y la medida del anlisis (absorbancias) en el eje de Y. El mismo anlisis entonces se realiza con las muestras de la concentracin desconocida. Para analizar los datos, se localiza la medida de absorbancia en el eje Y que corresponde a la medida del anlisis de la sustancia desconocida y se sigue una lnea hasta llegar a la lnea estndar, una vez ubicada en la recta se lee directamente la concentracin en la abscisa. El valor
correspondiente en el eje X es la concentracin de la sustancia en la muestra desconocida. La curva estndar sirve para determinar la relacin que existe entre la absorbancia y la concentracin, la cual es reflejada con una lnea recta. LEY DE LAMBERT Y BEER La Ley Lambert y Beer es un medio matemtico de expresar cmo la materia absorbe la luz. Esta ley afirma que la cantidad de luz que sale de una muestra es disminuida por tres fenmenos fsicos: 1. La cantidad de material de absorcin en su trayectoria (concentracin) 2. La distancia que la luz debe atravesar a travs de la muestra (distancia de la trayectoria ptica) 3. La probabilidad de que el fotn de esa amplitud particular de onda sea absorbido por el material (absorbencia o coeficiente de extincin) TRANSMITANCIA.- A medida que un haz de luz atraviesa un medio absorbente, la cantidad de luz absorbida en cualquier volumen es proporcional a la intensidad de luz incidente multiplicado por el coeficiente de absorcin. Consecuentemente, la intensidad de un haz incidente decae exponencialmente a medida que pasa a travs del absorbente ABSORBANCIA.- Cuando un haz de luz incide sobre un cuerpo traslcido, una parte de esta luz es absorbida por el cuerpo, y el haz de luz restante atraviesa dicho cuerpo. A mayor
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA cantidad de luz absorbida, mayor ser la absorbancia del cuerpo, y menor cantidad de luz ser transmitida por dicho cuerpo.
PROPIEDADES DE LOS HUEVOS DE GALLINA
En aspecto nutricional el huevo es un alimento con un importante aporte de colesterol, vitamina D, vitamina B9, retinol, cidos grasos monoinsaturados, vitamina E, vitamina B2, grasa, fsforo, cidos grasos poliinsaturados, vitamina A, hierro, cinc, cidos grasos saturados, protenas, agua, caloras y yodo. El resto de nutrientes presentes en este alimento, ordenados por relevancia de su presencia, son: selenio, vitamina B, calcio, vitamina B3, vitamina B12, vitamina B6, sodio, potasio, magnesio, carotenoides, hidratos de carbono y vitamina C.
2) Composicin de la clara
La albmina es una solucin viscosa (coloidal), que rodea a la yema y se encuentra contenida entre las membranas del cascarn. Constituyentes Sus constituyentes son 88% agua, 11% protenas, 1% carbohidratos y 0.5% minerales. Bsicamente se trata de una solucin de protenas globulares que contienen fibras de ovo mucina (existen ms de treinta protenas diferentes). Son ricas en aminocidos esenciales. Esta tres glicoprotenas suma ms del 80% del total de protenas en la clara de huevo. OVOALBMINA: La principal protena de la clara del huevo, ms de la mitad del total, es la ovoalbmina. Esta protena (o grupo de molculas proteicas estrechamente relacionadas) se desnaturaliza fcilmente por el calor, una caracterstica de inters cuando los huevos se utilizan en la preparacin de alimentos. Es llamada fosfoglucoprotena integrada por tres fracciones, A1, A2 y A3, en una proporcin de 85:12:3, respectivamente, que se diferencian
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Es rica en cistena y metionina y presenta grupos sulfhidrilos.
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por su contenido en fsforo.
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA CONALBMINA: Otra protena que suma alrededor del 14% del total de las protenas en la clara de huevo es la conalbmina y tambin se coagula por el calor. Es una protena no fosforilada formada por dos cadenas polipeptdicas. No presenta grupos sulfhidrilo pero es rica en enlaces disulfuro. Contiene restos de manosa y glucosamina. Tiene gran poder quelante de metales, en especial el hierro, y en este caso se vuelven ms termo resistente. La capacidad secuestrante del hierro le confiere propiedades antioxidantes y antimicrobianas. OVOMUCOIDE: Una tercera protena, el ovomucoide representa el 12% del total. El ovomucoide no se coagula con el calor. Es una glicoprotena rica en glucosamina (14%) y aminocidos azufrados (12%). Presenta manosa, galactosa y cido neuramnico. Es rica en enlaces disulfuro. Es un factor antitripsina y alergnico. LISOZIMA: Adems la clara de huevo contiene aproximadamente un 7 % de globulinas, incluyendo la lisozima, una protena interesante ya que disuelve las paredes celulares de ciertas bacterias, en especial los mucopolisacridos de los microbios Gram positivos.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA OVOMUCINA: Existe aproximadamente menos de un 2% de otra protena llamada ovomucina que contribuye al espesor de la clara gruesa. Es una glicoprotena ms rica que el ovomucoide en cido neuramnico y silico. Es un inhibidor de la hemoaglutinacin vrica. Es una protena muy electronegativa. Estable a la desnaturalizacin por calor. AVIDINA: Existe un pequeo porcentaje de sta y posee la capacidad de fijar y sintetizar la biotina. La avidina se desnaturaliza fcilmente cuando se cuecen los huevos. OVOFLAVOPROTENA: Existe una cantidad pequea de esta protena a la que se fija la riboflavina de la clara de huevo.
HUEVOS DE CODORNIZ
La cantidad de protenas de los huevos de codorniz, es de 13,05 g. por cada 100 gramos. El tomar los huevos de codorniz y otros alimentos ricos en vitamina B2, puede ayudar a superar las migraas y es beneficioso para mantener una buena salud ocular y de la piel. Los alimentos ricos en vitamina B2 o riboflavina como este alimento, tambin son tiles para mejorar problemas nerviosos como el insomnio, la ansiedad o el estrs. La vitamina B5 o cido pantotnico, que se encuentra de forma abundante en los huevos de codorniz hace que este alimento sea til para combatir el estrs y las migraas. El contenido de vitamina B5 de este alimento tambin hace de este un alimento recomendable para reducir el exceso de colesterol. FUNDAMENTO DE LA REACCIN DE BIURET. Cuando a una solucin de protenas se trata con iones cobre en medio moderadamente alcalino, se forma un complejo coloreado entre los grupos carbonilos y aminos de los enlaces peptdicos. OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Realizar una curva estndar que sirva de base para la cuantificacin de protenas totales en muestras como la clara de huevo
OBJETIVOS ESPECFICOS Realizar el grafico de la curva estndar utilizando papel milimetrado Calcular el factor de calibracin para la curva estndar Determinar la concentracin de protenas totales en la clara de huevo.
MATERIALES Tubos de ensayos 100 x 16 mm Pipetas serolgicas de 2, 5 y 10 ml Pipetas automticas Auxiliar para pipetas Tuberas Marcadores Espectrofotmetro REACTIVOS Solucin salina 0.9 % Reactivo de Biuret Muestra: clara de huevo.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA PROCEDIMIENTO Tubos Estndar (ul) Muestra (ul) S. salina 0.9 % (ml) 4,9 4,75 4,5 E1 100 E2 250 E3 500 250 4,75 Muestra
Mezclar bien, rotular otros tubos y medir de las diluciones realizadas Tubos Dil. E1 (ml) Dil. E2 (ml) Dil. E3 (ml) Dil- M (ml) Dil. E1 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 Dil. E2 Dil, E3 Dil. M Blanco
S. salina 0.9 % (ml) R. Biuret (ml)
Mezclar bien, reposo en la oscuridad 15 minutos Leer las Absorbancias a 540 nm, frente al blanco
RESULTADOS
Con los datos obtenidos grafique La curva estndar y calcule la concentracin de la muestra.
Factor de calibracin
Conc. Muestra g/dl = FC * Abs. Muestra

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DISCUSION Y CONCLUSIONES
TRABAJO 10 CURVA ESTNDAR PARA PROTENAS POR EL MTODO DE LOWRY INTRODUCCIN Las protenas constituyen un grupo complejo de macromolculas que realizan muchas funciones para que la vida sea posible. El 50 % aproximadamente de su peso seco de las clulas son protenas. Los genomas de la mayora de los organismos codifican miles de protenas, debido a que estas son polmeros lineales constituidos por 20 aminocidos diferentes unidos por enlace covalente. Considerando la importancia vital de las protenas en los seres vivos las investigaciones sobre sus propiedades, estructura y funciones son prioridad de los bioqumicos. Las protenas pueden distingurselas en base a su nmero de aminocidos y la secuencia de estos en la cadena polipeptdica. Entre las diversas funciones que desempean las protenas estn: Gracias a su gran heterogeneidad estructural, las protenas asumen funciones muy variadas. Describir las funciones de las protenas equivale a describir en trminos moleculares todos los fenmenos biolgicos. Podemos destacar las siguientes:
gracias a la presencia de un catalizador de naturaleza proteica especfico para cada
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Funcin enzimtica. La gran mayora de las reacciones metablicas tienen lugar
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA reaccin. Estos biocatalizadores reciben el nombre de enzimas. La gran mayora de las protenas son enzimas. Funcin hormonal. Las hormonas son sustancias producidas por una clula y que una vez secretadas ejercen su accin sobre otras clulas dotadas de un receptor adecuado. Algunas hormonas son de naturaleza proteica, como la insulina y el glucagn (que regulan los niveles de glucosa en sangre) o las hormonas segregadas por la hipfisis como la hormona del crecimiento, o la calcitonina (que regula el metabolismo del calcio). Reconocimiento de seales qumicas. La superficie celular alberga un gran nmero de protenas encargadas del reconocimiento de seales qumicas de muy diverso tipo (figura de la izquierda). Existen receptores hormonales, de neurotransmisores, de anticuerpos, de virus, de bacterias, etc. En muchos casos, los ligandos que reconoce el receptor (hormonas y neurotransmisores) son, a su vez, de naturaleza proteica. Funcin de transporte. En los seres vivos son esenciales los fenmenos de transporte, bien para llevar una molcula hidrofbica a travs de un medio acuoso (transporte de oxgeno o lpidos a travs de la sangre) o bien para transportar molculas polares a travs de barreras hidrofbicas (transporte a travs de la membrana plasmtica). Los transportadores biolgicos son siempre protenas. Funcin estructural. Las clulas poseen un cito esqueleto de naturaleza proteica que constituye un armazn alrededor del cual se organizan todos sus componentes, y que dirige fenmenos tan importantes como el transporte intracelular o la divisin celular. En los tejidos de sostn (conjuntivo, seo, cartilaginoso) de los vertebrados, las fibras de colgeno forman parte importante de la matriz extracelular y son las encargadas de conferir resistencia mecnica tanto a la traccin como a la compresin Funcin de defensa. La propiedad fundamental de los mecanismos de defensa es la de discriminar lo propio de lo extrao. En bacterias, una serie de protenas llamadas endonucleasas de restriccin se encargan de identificar y destruir aquellas molculas de
los vertebrados superiores, las inmunoglobulinas se encargan de reconocer molculas u
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DNA que no identifica como propias (en color blanco en la figura de la derecha). En
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA organismos extraos y se unen a ellos para facilitar su destruccin por las clulas del sistema inmunitario Funcin de movimiento. Todas las funciones de motilidad de los seres vivos estn relacionadas con las protenas. As, la contraccin del msculo resulta de la interaccin entre dos protenas, la actina y la miosina. El movimiento de la clula mediante cilios y flagelos est relacionado con las protenas que forman los microtbulos Funciones de reserva. La ovoalbmina de la clara de huevo, la lacto albmina de la leche, la gliadina del grano de trigo y la hordena de la cebada, constituyen una reserva de aminocidos para el futuro desarrollo del embrin. Funciones reguladoras. Muchas protenas se unen al DNA y de esta forma controlan la transcripcin gnica. De esta forma el organismo se asegura de que la clula, en todo momento, tenga todas las protenas necesarias para desempear normalmente sus funciones. Las distintas fases del ciclo celular son el resultado de un complejo mecanismo de regulacin desempeado por protenas como la ciclina Otras funciones. Los fenmenos de transduccin (cambio en la naturaleza fsicoqumica de seales) estn mediados por protenas. As, durante el proceso de la visin, la rodopsina de la retina convierte (o mejor dicho, transduce) un fotn luminoso (una seal fsica) en un impulso nervioso (una seal elctrica) y un receptor hormonal convierte una seal qumica (una hormona) en una serie de modificaciones en el estado funcional de la clula. Existen varios mtodos para la determinacin cuantitativa de protenas, entre los cuales, los fotocolorimtricos y espectrofotomtricos son los ms utilizados debido a su rapidez y sencillez. Dentro de stos se selecciona el ms adecuado en base a su sensibilidad ya la pureza del extracto sobre el que se realizar la determinacin
El mtodo de Lowry es 10 a 100 veces ms sensible que el anterior y depende de los residuos tirosina y triptfano de la protena.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA MTODO DE LOWRY (O DE FOLIN-CIOCALTEAU MODIFICADO)
FUNDAMENTO
Se realiza en dos etapas: A.- Los iones Cu2+ en medio alcalino se unen a las protenas en los tomos de nitrgeno de los enlaces peptdicos formando complejos. Estos complejos Cu2+ - protenas dan un color azul plido provocan el desdoblamiento de la estructura tridimensional de la protena exponiendo hacia la superficie a los residuos fenlicos de tirosina que van a participar en la segunda etapa de la reaccin. El cobre se mantiene en solucin alcalina en forma de complejo con el tartrato. B.- El cobre acta como catalizador de la reduccin tambin en medio bsico del reactivo de foln cicalteau por parte de los grupos fenlicos de los residuos de tirosina. El acido fosfomolibdotngstico de color amarillo que al ser reducido por los residuos fenlicos da lugar a un complejo de un color azul intenso.
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
MATERIALES
Pipetas serolgicas Pipetas automticas Auxiliares de pipetas

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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Tubos de ensayos 100 x 16 mm Marcadoras Tuberas Espectrofotmetro Gasa Embudo Probeta
REACTIVOS
1.- Carbonato de sodio al 2 % en hidrxido de sodio 0.1 N Carbonato de sodio Hidrxido de sodio 4g 0.8 g
Agua destilada cantidad para 200 ml
2.- Sulfato de cobre 1 %
3.- Tartrato de sodio y potasio al 2 % 4.- Solucin de Folin Ciocalteu 2 N
Diluir en agua destilada
Estndar de protenas 50 mg/dl
REACTIVO DE TRABAJO
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10 ml de reactivo 1 + 100 ul del reactivo 2 y 3
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA PROCEDIMIENTO Tubos BSA (ul) H2O (ul) Muestra (ul) 1 50 450 0 2 100 400 0 3 200 300 0 4 300 200 0 5 400 100 0 6 500 0 0 7 0 500 0 8 0 0 500
Mezclar bien, y agregar a cada tubo R. trabajo (ml) 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5
Mezclar bien, dejar en reposo 10 minutos Reactivo 4 (ul) 250 250 250 250 250 250 250 250
Mezclar bien, dejar en reposo 30 minutos Leer a 700 nm de longitud de onda, contra el blanco de reactivo.
RESULTADOS
Con los datos obtenidos Realice la curva estndar y Calcule la concentracin de protenas totales en la muestra.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA TRABAJO 11
DESNATURALIZACIN DE LAS PROTENAS Conformacin de las protenas Las protenas son las molculas orgnicas ms abundantes en las clulas. Qumicamente las protenas estn formadas por la unin de muchas molculas relativamente sencillas y no hidrolizables, denominadas aminocidos. Los aminocidos se unen entre si originando pptidos. Segn su tamao se originan el polipptidos y Oligopptidos. Cuando el nmero de aminocidos supera los 50 y el polipptido tiene una estructura tridimensional especifica, se habla entonces de protenas.
1. CONFORMACIN DE LAS PROTENAS ESTRUCTURA DE LAS PROTENAS: NIVELES DE ORGANIZACIN Las cadenas de polipptidos que forman una protena se encuentran enrolladas o plegadas de modo que forman una macromolcula con una conformacin especfica, tridimensional. Esta conformacin determina la funcin de la protena. Por ejemplo, la conformacin nica de una enzima le permite "identificar" y actuar sobre su sustrato, sustancia que dicha enzima regula. La forma de una protena hormonal le permite combinarse con su receptor en el sitio de la clula blanco. (La clula sobre la cual la hormona est diseada para actuar.) Hay varios niveles de organizacin en una molcula protenica: primario, secundario, terciario y cuaternario. ESTRUCTURA PRIMARIA La secuencia de aminocidos en una cadena de polipptidos determina su estructura primaria. Esta secuencia, se especifica por la informacin gentica. ESTRUCTURA SECUNDARIA
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA La estructura secundaria de las protenas implica que las cadenas se pliegan y forman un hlice u otra estructura regular. Esta uniformidad se debe a las interacciones entre los tomos del esqueleto regular de la cadena peptdica. Los grupos funcionales no intervienen en la formacin de enlaces de la estructura secundaria. Las cadenas peptdicas no suelen encontrarse aplanadas ni se pliegan al azar sino que se pliegan y dan lugar a una estructura tridimensional especfica. Una estructura secundaria que se observa con frecuencia en las molculas de protena es la llamada hlice alfa. Esto abarca la formacin de espirales de una cadena peptdica. La hlice alfa es una estructura geomtrica muy uniforme y en cada giro se encuentra 3,6 aminocidos. La estructura helicoidal se determina y mantiene mediante puentes de hidrgeno entre los aminocidos en los giros sucesivos de la espiral. En la estructura alfa helicoidal, los puentes de hidrgeno ocurren entre tomos de una misma cadena peptdica. La hlice alfa es la unidad estructural bsica de las protenas fibrosas como la lana, cabello, piel y uas. Las fibras son elsticas porque los enlaces de hidrgeno pueden reformarse. Este es el motivo por el cual el cabello humano puede estirarse hasta cierto largo y luego recupera su longitud. Otro tipo de estructura secundaria es la denominada lmina plegada beta. En stas los puentes de hidrgeno pueden ocurrir entre diferentes cadenas polipeptdicas (lmina intercatenaria); cada cadena en forma de zigzag est completamente extendida y los enlaces de hidrgeno ocasionan la formacin de la estructura en forma de lmina. Pero tambin se pueden formar lminas plegadas entre regiones diferentes de una misma cadena peptdica (lmina intracatenaria). Esta estructura es ms flexible que elstica. La fibrona, la protena de la seda, est caracterizada por una estructura de lmina plegada beta; el ncleo de muchas protenas globulares tambin est formado por lminas beta. Las estructuras laminares intracatenarias ocurren sobre todo en protenas globulares, en tanto que las intercatenarias entre las fibrosas. En ambos casos son posibles dos formas laminares, segn el alineamiento de las diferentes cadenas o segmentos: si stos se alinean en la misma direccin (de extremo N- a C-terminal, por ej.) la disposicin es una lmina beta paralela, en tanto que si estn alineados en sentido opuesto, la lmina es beta antiparalela. Si bien ambos casos ocurren en la naturaleza, la estructura antiparalela es ms estable porque los dipolos C=O y N-H estn mejor orientados para una interaccin ptima.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA En las protenas fibrosas la estructura es exclusivamente helicoidal (colgeno) o exclusivamente laminar, pero en las protenas globulares la estructura secundaria siempre tiene una porcin que no es ni helicoidal ni laminar, denominada aleatoria (zonas de
conexin); estas protenas pueden ser parcialmente helicoidales y aleatorias, parcialmente laminares y aleatorias, totalmente aleatorias o una mezcla variable de partes de ordenamiento helicoidal, laminar y aleatorio. Un concepto muy utilizado en la estructura tridimensional de una protena es el dominio, que corresponde a una zona de la molcula que tiene caractersticas estructurales definidas. En una molcula de protena puede haber ms de un dominio y este hecho est relacionado con la funcin de la misma. Los dominios suelen ser muy conservados a lo largo de la evolucin: las proteasas tipo papana de virus, bacterias, plantas y animales tienen una estructura compuesta de dos dominios entre los cuales se ubica el sitio activo de la enzima.
ESTRUCTURA TERCIARIA La estructura terciana de una molcula de protena est determinada por la forma que adopta cada cadena polipeptdica. Esta estructura tridimensional est determinada por cuatro factores que se deben a interacciones entre los grupos R: 1. Puentes de hidrgeno entre los grupos R de las subunidades de aminocidos en asas adyacentes de la misma cadena de polipptidos. 2. Atraccin inica entre los grupos R con cargas positivas y aqullos con cargas negativas. 3. Interacciones hidrfobas derivadas de la tendencia de los grupos R no polares para asociarse hacia el centro de la estructura globular, lejos del Lquido que los rodea. 4. Los enlaces disulfuro, que son covalentes (-S-S-), unen los tomos de azufre de dos
cadena o dos cadenas distintas. ESTRUCTURA CUATERNARIA

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subunidades de cistena. Estos enlaces pueden unir dos porciones de una misma
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Las protenas compuestas de dos o ms cadenas de polipptidos adquieren una estructura cuaternaria: cada cadena muestra estructuras primaria, secundaria y terciaria y forma una molcula protenica biolgicamente activa. La hemoglobina, protena de los glbulos rojos encargada del transporte de oxgeno, es un ejemplo de protena globular con estructura cuaternaria. La hemoglobina est compuesta por 574 aminocidos dispuestos en cuatro cadenas polipeptdicas: dos cadenas alfa idnticas y dos cadenas beta idnticas entre s. Su frmula qumica es C3032H48160872S8Fe4 La estructura de las protenas determina su funcin La estructura de las protenas determina la actividad biolgica de stas. De entre las innumerables conformaciones tericamente posibles de una protena, generalmente hay una que predomina. Esta conformacin es generalmente la ms estable y en ese caso se dice que la protena se encuentra en estado nativo (protena nativa). La actividad biolgica de una protena puede ser afectada por cambios en la secuencia de aminocidos o en la conformacin de la protena. Cuando ocurre una mutacin (cambio qumico en un gen) que ocasiona un cambio en la secuencia de aminocidos de la hemoglobina, puede producirse un trastorno: anemia de clulas falciformes. Las molculas de hemoglobina en una persona con anemia de clulas falciformes tienen el aminocido valina, en vez de cido glutmico en la posicin 6, es decir, el sexto aminocido del extremo terminal de la cadena beta. La sustitucin de la valina con una cadena lateral sin carga por glutamato con una cadena lateral con carga hace que la hemoglobina sea menos soluble y ms propensa a formar estructuras en forma de cristal, lo que provoca un cambio en la forma de los glbulos rojos. Los cambios en la estructura tridimensional de una protena tambin alteran su actividad biolgica. Cuando una protena se calienta o se trata con algunas sustancias qumicas, su estructura terciaria se distorsiona y la cadena peptdica en espiral se desdobla para dar lugar a una conformacin ms al azar. Este desdoblamiento se acompaa de una prdida de su
forma de la protena y la prdida de su actividad biolgica se Llama desnaturalizacin. En general, la desnaturalizacin no puede revertirse; sin embargo, en determinadas
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actividad biolgica; por ejemplo de su capacidad de actuar como enzima. Este cambio en la
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA condiciones, algunas protenas que han sido desnaturalizadas recuperan su forma original y su actividad biolgica cuando se restauran las condiciones normales del medio.
Las protenas no son eternas y en las clulas es frecuente que las molculas de protena se sinteticen y se degraden de acuerdo a las necesidades celulares. La degradacin de una protena es llevada a cabo por proteasas o peptidasas que hidrolizan algunas o todas las uniones peptdicas, con lo que la protena puede quedar reducida a sus unidades constitutivas, los aminocidos, que pueden luego ser utilizados para construir molculas de la misma o de otra protena. El proceso de hidrlisis destruye la estructura primaria y en el laboratorio puede ser llevado a cabo por la accin de enzimas o por cidos o lcalis concentrados y a elevadas temperaturas. 2. PERDIDA DE LA CONFORMACIN : DESNATURALIZACIN Desnaturalizacin y renaturalizacin de las protenas Desnaturalizacin: Es el proceso en el cual una protena cambia su estructura tridimensional, y de esta manera originar la prdida de la funcin de la misma. No necesariamente ocurre un desplegamiento total. Las protenas funcionan correctamente en entornos celulares concretos. Condiciones diferentes originan la desnaturalizacin. La desnaturalizacin ocurre por ciertas condiciones fsicas y qumicas, llamadas factores desnaturalizantes. Estos pueden ser: La Temperatura Extremos de pH Accin de disolventes orgnicos Accin de detergentes La mayora de las protenas se pueden desnaturalizar mediante un aumento de la temperatura; Si en una disolucin la concentracin, de protenas se producen cambios de pH, alteraciones en molecular o variaciones bruscas de temperatura,
agitacin
su precipitacin. Esto se debe a que los enlaces que mantienen la conformacin globular se rompen y la protena adopta la conformacin filamentosa. De este modo, la capa de molculas de agua no recubre completamente a las molculas proteicas, las cuales tienden a
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la solubilidad de las protenas puede verse reducida hasta el punto de producirse
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA unirse entre s dando lugar a grandes partculas que precipitan. Adems, sus propiedades biocatalizadores desaparecen al alterarse el centro activo. Las protenas que se hallan en ese estado no pueden llevar a cabo la actividad para la que fueron diseadas, en resumen, no son funcionales. Esta variacin de la conformacin se denomina desnaturalizacin. La desnaturalizacin no afecta a los enlaces peptdicos: al volver a las condiciones normales, puede darse el caso de que la protena recupere la conformacin primitiva, lo que se denomina renaturalizacin. Ejemplos de desnaturalizacin son la leche cortada como consecuencia de la
desnaturalizacin de la casena, la precipitacin de la clara de huevo al desnaturalizarse la ovoalbmina por efecto del calor o la fijacin de un peinado del cabello por efecto de calor sobre las queratinas del pelo.
3. AGENTES DESNATURALIZANTES: FSICOS Y QUMICOS Factores desnaturalizantes. Los agentes que provocan la desnaturalizacin de una protena se llaman agentes desnaturalizantes. Se distinguen agentes fsicos (calor) y qumicos (detergentes, disolventes orgnicos, pH, fuerza inica). Como en algunos casos el fenmeno de la desnaturalizacin es reversible, es posible precipitar protenas de manera selectiva mediante cambios en: 1. La polaridad del disolvente. 2. La fuerza inica. 3. El pH. 4. La temperatura.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Efecto de la polaridad del disolvente sobre la estructura de las protenas La polaridad del disolvente disminuye cuando se le aaden sustancias menos polares que el agua como el etanol o la acetona. Con ello disminuye el grado de hidratacin de los grupos inicos superficiales de la molcula proteica, provocando la agregacin y precipitacin. Los disolventes orgnicos interaccionan con el interior hidrfobo de las protenas y desorganizan la estructura terciaria, provocando su desnaturalizacin y precipitacin. La accin de los detergentes es similar a la de los disolventes orgnicos. Estructura de las protenas Un aumento de la fuerza inica del medio (por adicin de sulfato amnico, urea o cloruro de guanidinio, por ejemplo) tambin provoca una disminucin en el grado de hidratacin de los grupos inicos superficiales de la protena, ya que estos solutos (1) compiten por el agua y (2) rompen los puentes de hidrgeno o las interacciones electrostticas, de forma que las molculas proteicas se agregan y precipitan. En muchos casos, la precipitacin provocada por el aumento de la fuerza inica es reversible. Mediante una simple dilisis se puede eliminar el exceso de soluto y recuperar tanto la estructura como la funcin original. A veces es una disminucin en la fuerza inica la que provoca la precipitacin. As, las protenas que se disuelven en medios salinos pueden desnaturalizarse al dializarlas frente a agua destilada, y se renaturalizan cuando se restaura la fuerza inica original. Efecto del pH sobre la estructura de las protenas Los iones H+ y OH- del agua provocan efectos parecidos, pero adems de afectar a la envoltura acuosa de las protenas tambin afectan a la carga elctrica de los grupos cidos y bsicos de las cadenas laterales de los aminocidos. Esta alteracin de la carga superficial de las protenas elimina las interacciones electrostticas que estabilizan la estructura terciaria y a menudo provoca su precipitacin. La solubilidad de una protena es mnima en su punto isoelctrico, ya que su carga neta es cero y desaparece cualquier fuerza de repulsin electrosttica que pudiera dificultar la formacin de agregados. Efecto de la temperatura sobre la estructura de las protenas Cuando la temperatura es elevada aumenta la energa cintica de las molculas con lo que se desorganiza la envoltura acuosa de las protenas, y se desnaturalizan. Asimismo,
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA un aumento de la temperatura destruye las interacciones dbiles y desorganiza la estructura de la protena, de forma que el interior hidrfobo interacciona con el medio acuoso y se produce la agregacin y precipitacin de la protena desnaturalizada.
4. DESNATURALIZACION REVERSIBLE E IRREVERSIBLE Reversibilidad e irreversibilidad En muchas protenas la desnaturalizacin no es reversible; esto depende del grado de modificacin de las estructuras de la protena. Aunque se ha podido revertir procesos de desnaturalizacin quitando el agente desnaturalizante, en un proceso que puede tardar varias horas incluso das; esto se debe a que el proceso de reestructuracin de la protena es tentativo, es decir, no asume su forma original inmediatamente, as muchas veces se obtienen protenas distintas a la inicial, adems con otras caractersticas como insolubilidad (debido a los agregados polares que puedan unrsele).
Recientemente se ha descubierto que, para una correcta renaturalizacin, es necesario agregar trazas del agente desnaturalizante. Esto fue importante histricamente, porque condujo a la nocin de que toda la informacin necesaria para que la protena adopte su forma nativa se encuentra en la estructura primaria de la protena, y por lo tanto en el ADN que la codifica. Algunos ejemplos comunes Cuando se cocina el alimento, algunas de sus protenas se desnaturalizan. Esta es la razn por la cual los huevos hervidos llegan a ser duros y la carne cocinada llega a ser firme. Un ejemplo clsico de desnaturalizacin de protenas se da en la clara de los huevos, que son en gran parte albminas en agua. En los huevos frescos, la clara es transparente y lquida; pero al cocinarse se torna opaca y blanca, formando una masa slida intercomunicada. Esa misma desnaturalizacin puede producirse a travs de una desnaturalizacin qumica, por ejemplo volcndola en un recipiente con acetona. Otro ejemplo es la nata (nombre que proviene de la desnaturalizacin), que se produce por calentamiento de la lacto albmina de la leche (y que no tiene nada que ver con la crema) La protena de la leche se llama casena y se desnaturaliza cuando el pH de la leche se modifica. Esto se le conoce en lo cotidiano Se cort la leche. La casena se
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA desnaturaliza cuando le agregas a un vaso de leche suficiente jugo de limn para modificar el pH de la leche. Tipo de enlace que se destruye durante la desnaturalizacin En la desnaturalizacin de la estructura cuaternaria, las subunidades de protenas se separan o su posicin espacial se corrompen. La desnaturalizacin de la estructura terciaria implica la interrupcin de: o Enlaces covalentes entre las cadenas laterales de los aminocidos (como los puentes disulfuros entre las Cistenas). o Enlaces no covalentes dipolo-dipolo entre cadenas laterales polares de aminocidos. o Enlaces dipolo inducidos por fuerzas de Van Der Waals entre cadenas laterales no polares de aminocidos. En la desnaturalizacin de la estructura secundaria las protenas pierden todos los patrones de repeticin regulares como las hlices alfa y adoptan formas aleatorias. La estructura primaria, la secuencia de aminocidos ligados por enlaces peptdicos, no es interrumpida por la desnaturalizacin
Propiedades de las protenas desnaturalizadas La desnaturalizacin provoca diversos efectos en la protena: Cambios en las propiedades hidrodinmicas de la protena: aumenta la viscosidad y disminuye el coeficiente de difusin Una drstica disminucin de su solubilidad ya que los residuos hidrfobos del interior aparecen en la superficie Perdida de las propiedades biolgicas
Composicin y funciones de las protenas de la clara de huevo, suero sanguneo,
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Protenas de la clara de huevo
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leche.
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA La principal protena de la clara de huevo es la ovoalbmina, un tipo de albmina que constituye entre el 60% y el 65% del peso de la clara de huevo. Adems de tener el mejor perfil proteico que se puede encontrar en un alimento, la clara contiene vitaminas y minerales y aporta aproximadamente 17 caloras. Adems de la ovoalbmina, la clara de huevo tiene otras protenas como la ovomucina (2%), responsable de cuajar el huevo pochado o frito, la conalbmina (14%) y el ovomucoide (2%). FUNDAMENTO La disminucin de la hidratacin de las molculas coloidales de protenas se logra fcilmente agregando a sus disoluciones sustancias deshidratantes, como el alcohol, la acetona, disoluciones de sales de metales alcalinos etc. Estas sustancias precipitan las protenas sin el fenmeno de la desnaturalizacin. Este fenmeno consiste en la perdida de las propiedades hidrfilas, adquiriendo propiedades hidrofbicas, con prdida de la carga elctrica. OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL Provocar la desnaturalizacin de las protenas utilizando diversos agentes qumicos y fsicos. OBJETIVOS ESPECFICOS Observar el efecto de los agentes desnaturalizantes en la conformacin nativa de las muestras de protenas utilizadas en el experimento. Establecer diferencias entre la desnaturalizacin reversible e irreversible. Determinar que agente qumico afecta en mayor grado la estructura de las muestras de protenas utilizadas.
Tubos de ensayo 100 x 16 mm

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Fiolas
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MATERIALES
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Tubos de ensayo 180 x 16 mm Pipetas serolgicas de 1, 2, 5 ml Beakers de 100 ml Probeta de 100 ml embudo Gasa Reverbero Jarro enlozado Pinzas para tubos
REACTIVOS Solucin saturada de sulfato de amonio Solventes orgnicos: alcohol, acetona Bicloruro de mercurio al 5 % Sulfato de cobre al 5 % cidos orgnicos: acido tricloactico al 5 %, cidos de reconocimiento de alcaloides: acido fofotngstico al 5 %, acido pcrico al 5 %, acido tnico al 5 % Muestras: leche, clara de huevo, plasma.
PROCEDIMIENTO Precipitacin con sulfato de sodio 1 ml de muestra + 1 ml de sulfato de sodio saturado Agregar de 3 a 4 ml de agua destilada mezclar mezclar observar el resultado observar y anotar el resultado
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Precipitacin con alcohol o acetona 2 ml de muestra + 2 ml de alcohol o acetona mezclar resultado
Precipitacin con metales pesados
2 ml de muestra + 1 ml de bicloruro de mercurio al 5 %, mezclar
resultado
2 ml de muestra + 1 ml de sulfato de cobre al 5 %, mezclar
resultado
2 ml de muestra + 1 ml de acetato de plomo al 5 %, mezclar
resultado
Precipitacin con reactivo de reconocimiento de alcaloides
2 ml de muestra + 1 ml de acido tnico, mezclar
resultado
2 ml de muestra + 1 ml de acido pcrico, mezclar
resultado
Precipitacin con cidos orgnicos 2 ml de muestra + 1 ml de acido tricloroactico, mezclar resultado
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Efecto de la temperatura
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2 ml de muestra
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA llevar a un bao de agua hirviendo 5
resultado
RESULTADOS Explique el comportamiento de cada una de las protenas utilizadas, frente a cada agente desnaturalizante. Determine cul fue el desnaturalizante ms agresivo para cada muestra utilizada Investigue que protenas estn presentes en cada muestra. Explique por qu la leche no se coagula al ser sometida a temperatura de ebullicin
TRABAJO 12
AISLAMIENTO DE LA OVOALBMINA
En bioqumica es muy comn aislar y purificar protenas para estudiar su composicin, su estructura y de ser posible su funcin, como es e caso de las enzimas. Para dicha purificacin se emplean mtodos basados en sus propiedades de solubilidad.
Cada protena tiene una composicin de aminocidos especfica que las hace diferentes unas de otras y, por lo tanto, su comportamiento en disoluciones tambin es diferente. Por lo general las protenas fibrosas son solubles en agua y resistentes a la degradacin enzimtica, sin embargo, con soluciones de cierta fuerza inica se pueden solubilizar. Las protenas globulares son relativamente ms solubles en agua y en soluciones de baja fuerza inica, aunque algunas coagulan cuando se calientan.
La composicin de aminocidos, es tambin responsable del comportamiento de las protenas en diferentes condiciones de pH. As al acidificar o alcalinizar una determinada protena, sta puede llegar a su punto isoelctrico, es decir, alcanzar una
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA carga neta de cero y por lo tanto precipitar. La leche es un producto rico en protenas, tales como las casenas y globulinas, adems de contener carbohidratos y cidos grasos. De la leche se puede separar la casena por precipitacin en su punto isoelctrico (pH 4.6).
El huevo tambin es un producto con una buena cantidad de nutrientes, tal como la ovoalbmina, la cual se clasifica como fosfoglucoprotena por tener hidratos de carbono y fsforo. La precipitacin de esta protena con una solucin saturada de (NH4)2SO4 permite aislarla del resto de las protenas que se encuentran en la clara del huevo.
Existen factores que afectan el estado nativo de las protenas, sin embargo, stas pueden someterse a una purificacin parcial empleando tcnicas bioqumicas sencillas como la centrifugacin, dilisis y cromatografa.
OBJETIVO GENERAL Aplicar los mtodos bioqumicos para la purificacin parcial de protenas, basados en sus propiedades de solubilidad.
OBJETIVOS ESPECIFICOS Aislar la ovoalbmina de la clara de huevo por precipitacin con sulfato de amonio. Purificar parcialmente la protena para su posterior cuantificacin Determinar cuntos gramos de ovoalbmina se obtuvieron muestra utilizada. por 100 ml de
MATERIALES
Probetas de 100, 50 ml Gasa
Pipetas serolgicas de 5 ml Tubos de Centrifuga Agitador de Vidrio

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Vasos de Precipitados de 250, 100 ml
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Matraz Reverbero
REACTIVOS
Acido actico 1 M Acetona Solucin amortiguada de (NH4)2SO4 Preparacin: Agregar 780 g de (NH4)2SO4 a un litro de agua y calentar por agitacin. Adicionar 12.3 g de acetato de sodio. Enfriar y aadir 9 ml de cido actico glacial. Dejar que sedimenten los cristales, use solo el sobrenadante.
Obtencin de Albmina. PROCEDIMIENTO 1 Colocar la clara de huevo en una probeta y medir su volumen. 2 Verter la clara en un vaso de precipitados, agregar la dcima parte de su volumen de cido actico 1.0 M y agitar. 3 Filtrar la albmina acidificada a travs de cuatro capas de gasa, agitando fuertemente con una varilla de vidrio para acelerar el proceso. 4 Al filtrado aadir un volumen igual de la solucin de sulfato de amonio amortiguado, y agitar. Dejar reposar la solucin durante 15 minutos en un bao de hielo. 5 Separar el precipitado que contiene ovoalbmina y ovomucina centrifugando a 3000 rpm durante diez minutos. 6 Al sobrenadante que contiene la albmina, aadir pequeas cantidades de la disolucin de sulfato de amonio: se notar una ligera turbidez que desaparecer al agitar. Siga vertiendo sulfato de amonio y agite hasta que la turbidez ya no desaparezca, agregar un poco ms para permitir que la albmina precipite. 7 Dejar la mezcla a temperatura ambiente durante aproximadamente una hora
9 Suspender la albmina en 5 ml de acetona y recuperar filtrando en un embudo. 10 Colocar el residuo en un papel aluminio y dejar que seque completamente al
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8 Eliminar el sobrenadante por centrifugacin, 10 minutos a 3000 rpm
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA aire. Guardar en un vial etiquetado.
RESULTADOS
1 Cuntos gramos de albmina obtuvo? 2. Cul fue el volumen total de la clara de huevo? 3. De acuerdo con lo reportado en la literatura: Cunta albmina tiene el huevo?, comprelo con su resultado. 4. Qu tipo de protena es la albmina estructural y funcionalmente?
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA BIBLIOGRAFIA
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lient=psyab&q=COMPOSICION+DE+AMINOACIDOS+DE+LA+GELATINA&oq=CO MPOSICION+DE+AMINOACIDOS+DE+LA+GELATINA&gs_l=hp.3...1672.
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA 18962.0.19972.45.29.2.14.15.0.310.5364.0j23j5j1.29.0...0.0...1c.1.14.psyab.1PzpGa3wYPc&pbx=1&fp=1&biw=1600&bih=783&bav=on.2,or.r_qf.&cad =b
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

LABORATORIO DE BIOQUMICA MANUAL DE PRCTICAS

DOCENTE: NILDA CEDEO

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93 102 108 120 124

RECOPILACIN BIBLIOGRAFICA Y EXPERIMENTAL nrcalban@gmail.com

DOCENTE: NILDA CEDEO ALBAN

UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA

BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE BIOQUMICA

PRINCIPIOS DE LA BIOSEGURIDAD Los principios de la Bioseguridad pueden resumirse en:

profesionales de todos los servicios, independientemente de conocer o no su serologa.

1- Universalidad: Las medidas deben involucrar a todos los pacientes, trabajadores y

RIESGOS EN EL LABORATORIO DE BIOQUIMICA

aquellos dependientes de factores humanos.

UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA RIESGO FSICO

qumicas, normalmente denominadas de combustin. En la mayora de los fuegos, la

TIPO B: nafta, pinturas, Smbolo: cuadrado rojo con la letra B.

http://www.google.com.ec/search?hl=es&gs_rn=14&gs_ri=psy RECOPILACIN BIBLIOGRAFICA Y EXPERIMENTAL - DOCENTE: NILDA CEDEO ALBAN nrcalban@gmail.com

como consecuencia la infeccin del personal expuesto con o sin manifestacin de la

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Es el riesgo derivado de la manipulacin o exposicin a los agentes biolgicos, que trae

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proteger al operador o al operador y al proceso.

ETAPAS 1. CONOCIMIENTO PELIGROSIDAD SUSTANCIAS QUMICAS DE LA DE

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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA

INCOMPATIBILIDAD DE LAS SUSTANCIAS QUMICAS

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TOXICIDAD Y EFECTOS NOCIVOS DE ALGUNAS SUSTANCIAS QUMICAS DE USO COMN EN EL LABORATORIO

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irritacin cutnea Mercurio Vmitos, diarreas, nuseas

centro de trabajo (laboratorios de servicio o de enseanza). Una Ficha de Seguridad Qumica, es

NORMAS PARA LA DESCONTAMINACION DE MATERIALES Y MUESTRAS BIOLOGICAS EN EL LABORATORIO

tratamiento previo (descontaminacin) antes de su limpieza o disposicin como residuo.

Los materiales de laboratorio reutilizables, que debido a su utilizacin contienen material

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MANIPULACION Y EVACUACION DE DESECHOS CONTAMINADOS

UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA Y LIMPIEZA DE INSTRUMENTOS

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BIOLGICO INFECCIOSOS Residuos que contienen tales como

concentracin producir infecciosa

pueden enfermedad huspedes

inoculados con microorganismos patgenos y/o provenientes de

animales portadores de animales infectocontagiosos. PUNZO CORTANTES Agujas, cuchillas, resto

autorizado y como disposicin final, estos residuos son incinerados.

pueda lesionar y ocasionar un

UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA riesgo infeccioso.

RESIDUOS CIDOS O BSICOS Almacenar

como recipientes de vidrio, reutilizar en el laboratorio; si no es

concentraciones elevadas o que

UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LABORATORIO DE BIOQUMICA parmetros