El modelo animal en las investigaciones biomdicas

Dra. Silvia Hernndez Mdica Veterinaria. Mster en Epidemiologa Encargada de la Direccin del Bioterio del Instituto de Higiene, Facultad de Medicina (UdelaR)

RESUMEN
El objetivo de este artculo es contribuir a difundir los principios ticos y las buenas prcticas de laboratorio que rigen el manejo y uso de los animales de experimentacin en las investigaciones biomdicas. La investigacin biomdica ha contribuido al logro de importantes avances del conocimiento cientfico y mdico. La ciencia de los animales de laboratorio ha alcanzado un alto nivel de desarrollo con el fin de lograr un trato humanitario a los animales y mejorar la calidad de las investigaciones. A pesar de contar con modelos alternativos, existen pruebas para las cuales continan siendo insustituibles. El diseo de los experimentos que los utilizan exige la definicin detallada de las caractersticas genticosanitarias y ambientales, as como una actitud tica y moral frente al uso de seres vivos. Solo de esta manera se podrn obtener en las investigaciones resultados vlidos, confiables, reproducibles y comparables. Palabras clave: experimentacin animal; animales de laboratorio; modelos animales; bienestar del animal; biomedicina; biotica.

detailed definition of the sanitary, genetic and environmental characteristics, as well as moral and ethical while handling laboratory animals. This is the only way to obtain valid, reliable, comparable and reproducible results. Key words: animal experimentation; animals, laboratory; models, animal; animal welfare; biomedicine; bioethics

INTRODUCCIN
El animal de laboratorio es una de las piezas fundamentales en las ciencias biomdicas. Son usados como modelos para investigar y comprender las causas, diagnstico y tratamiento de enfermedades que afectan al humano y a los animales, adems de sus importantes aportes en la docencia biolgica y en el desarrollo, produccin y control de medicamentos, alimentos y otros insumos, donde en muchos casos hasta la fecha son insustituibles (1,2). El uso de los animales de laboratorio en las investigaciones biomdicas representa un elemento fundamental en el desarrollo de importantes avances en la prevencin y tratamiento de las enfermedades transmisibles y no transmisibles. Basta recordar las vacunas de la rabia, viruela, ttanos, difteria, tos convulsa y poliomielitis; el desarrollo de diversos antibiticos, la insulina y el conocimiento de las bases genticas de la herencia. Los avances de la investigacin en cncer, cardiologa, transplantes de rganos, Sndrome de inmunodeficiencia adquirida, enfermedad de Alzheimer, se deben tambin a las contribuciones de los estudios realizados en animales de laboratorio (2,3). Estos animales son para el investigador un reactivo biolgico, por lo que su pureza debe ser vigilada, controlada y contrastada, al igual que cualquier reactivo, sin descuidar su posible contaminacin bitica. Por esta razn se requiere la produccin de animales estandarizados o definidos con caractersticas genticas y sanitarias definidas, criados en ambientes controlados que respeten los requerimientos de la especie, con el correcto cumplimiento de los principios ticos y de bienestar animal (3).

SUMMARY
The objective of this article is to promote the ethical handling and care of laboratory animals used for scientific testing. Laboratory animals have long contributed to the improvement of medical and scientific knowledge. There is a humanitarian concern to develop scientific models of analysis that minimize the use of laboratory animals, although, in some researches the use of laboratory animals is still necessary. The design of experiments that use these animals requires a

Correspondencia: silher@adinet.com.uy 252

BIOMEDICINA, 2006, 2 (3) - 252-256 ISSN: 1510-9747

El modelo animal en las investigaciones biomdicas Silvia Hernndez

En los pases desarrollados, fundamentalmente, existe toda una estructura en torno a los animales de laboratorio, tanto gubernamental como privada. A partir de 1940 se inici la creacin de una nueva especialidad dentro de la medicina veterinaria: la ciencia de los animales de laboratorio. Esta ciencia se basa en investigaciones, normas, principios y legislaciones. En Pases como Estados Unidos, Canad, la Comunidad Econmica Europea y Japn, existen legislaciones nacionales y/o institucionales que regulan el uso de los animales de laboratorio como son: International Council for Laboratory Animal Science (ICLAS); Canadian Council of Animal Care (CCAC) y Federation of European Laboratory Animal Science (FELASA), entre otras. Estas instituciones han publicado guas con reconocimiento internacional donde se detallan las normas y las recomendaciones generales para el cuidado y uso de los animales en forma cientfica, tcnica y humanitariamente apropiada, as como sobre la planificacin y conduccin de los experimentos con animales (4,6). El eje central de estas regulaciones esta dado por la aplicacin del Principio de las 3 Rs formulados por Russel y Burch, en Inglaterra en 1959 y por la constitucin de comits institucionales de cuidado y uso de animales de laboratorio quienes tienen como misin evaluar los protocolos de investigacin y asegurar que todos los procedimientos se realicen acorde a las reglamentaciones vigentes (8,9). El objetivo de esta publicacin es contribuir a difundir los principios ticos y las buenas prcticas de laboratorio que rigen el uso de los animales de experimentacin en las investigaciones biomdicas.

EL REACTIVO BIOLGICO
El Animal de laboratorio es cualquier especie animal que se mantiene bajo condiciones determinadas y se utiliza con fines cientficos (2,5). El reactivo biolgico es un animal estandarizado, lo que significa que tiene una composicin gentico-sanitaria definida, son criados y mantenidos en ambientes controlados que cumplen con los requerimientos especficos para cada especie, los cuales garantizan, adems el bienestar animal. El estado sanitario de los animales de laboratorio esta determinado por un complejo multifactorial en el que interactan: adems de la biologa del animal, y el perfil gentico, las condiciones ambientales del alojamiento, as como las prcticas y manejo al que son sometidos estos animales y sus insumos (2,4,7). Es bien conocido que el estado sanitario de los animales in-

terfiere en el resultado de las investigaciones y esta ligado a la capacidad de respuesta. El uso de animales con un estado de salud deficiente conduce irreversiblemente a la obtencin de resultados errneos. En estos casos es necesario repetir las pruebas siendo esto, motivo de aumento del costo de las mismas y adems una irresponsabilidad desde el punto de vista tico y moral porque estamos trabajando con seres vivos. Con el fin de proveer a los investigadores de animales sanitariamente definidos, se han desarrollado animales libres de grmenes (axnicos); con flora bacteriana o vrica conocida (gnotobiticos) y libres de grmenes patgenos especficos (SPF) (6,10,11). Las lneas consanguneas (cepas endocriadas o inbred strain) son los animales genticamente estandarizados. Son el resultado de 20 o ms generaciones consecutivas de acoplamiento hermano x hermana (eventualmente, padre/madre x cra). Estos animales se caracterizan por: tener genes iguales; perfil gentico propio; son estables por largos periodos de tiempo; uniformes fenotpicamente; sensibles a cambios del ambiente y son de distribucin mundial. La homogeneidad gentica de estos animales permite que la composicin gentica no tenga que ser considerada como una variable confundente en las investigaciones. Por lo que la variabilidad de los resultados de las investigaciones se pueden deber a factores ambientales o metodolgicos. Esto es lo que hace posible la comparacin de resultados experimentales entre animales de diferentes laboratorios. La asociacin de las caractersticas fijadas en cada cepa, genera una individualidad en relacin a sus cualidades, particularidad que deber tomarse en cuenta en el momento de elegir el modelo para un trabajo de investigacin (12,14). Los animales exogmicos (out bred stocks) o stocks se han utilizado ampliamente en la investigacin biomdica. Las poblaciones fundadoras deben ser lo suficientemente grandes para asegurar la heterogeneidad de las colonias a largo plazo. Estos animales son los que mejor representan la variabilidad gentica de una poblacin humana, por eso son muy usados en toxicologa y farmacologa. Hay que destacar que estos animales no son definidos genticamente por lo que, actualmente, su uso est cada vez ms cuestionado. Se recomienda que sean sustituidos por un conjunto de cepas consanguneas o por hbridos F1 de lneas bien distantes, obtenindose de esta forma un polimorfismo muy alto, cercano a las poblaciones humanas (7,14). Las adecuadas condiciones de vida de los animales de laboratorio y las adecuadas prcticas de manejo a las que son sometidos les permiten crecer, madurar, reproducirse y mantener 253

BIOMEDICINA, 2006, 2 (3) - 252-256 ISSN: 1510-9747

El modelo animal en las investigaciones biomdicas Silvia Hernndez

las caractersticas genticas y sanitarias, as como asegurar el bienestar animal (2,15). El ambiente en el cual se mantienen los animales debe ser el apropiado para cada especie, permitiendo el despliegue completo de las conductas especficas y disminuir al mnimo conductas inducidas por estrs (16,18). El ambiente de los animales de laboratorio esta constituido por el microambiente y el macroambiente. El macro ambiente o encierro secundario est constituido por la habitacin: tamao, iluminacin, temperatura, ventilacin y humedad relativa, ausencia de ruido y polvo, entre otros (2,4,6). El microambiente constituye el encierro primario del animal, determinado por el habitculo o jaula y todo lo que en l se incorpora, como: lecho; agua; alimento, nmero de animales y objetos de enriquecimiento. Sus componentes deben satisfacer las necesidades fisiolgicas, de conducta y las interacciones sociales entre individuos de la misma especie, as como el establecimiento de jerarquas dentro del encierro (4,6). La informacin disponible indica que la temperatura, humedad y concentraciones de gases son ms altas en el microambiente que en el macroambiente. Las condiciones del ambiente pueden inducir cambios en los procesos metablicos y fisiolgicos o alteraciones en la susceptibilidad a enfermedades. Las alteraciones en la intensidad lumnica, as como en los periodos de luz-oscuridad pueden afectar la morfologa, fisiologa y conducta de los animales, como: problemas reproductivos, alteraciones en la ganancia de peso y en la ingestin de alimento. El ruido puede producir eosinopenia, aumento de las glndulas adrenales, disminucin de la fertilidad, aumento de la presin sangunea y canibalismo (19,22). Las caractersticas del macro y microambiente para cada especie se encuentran perfectamente definidas en las guas de cuidado y uso de animales de experimentacin como: Canadian Council on Animal Care (CCAC), American Veterinary Medical Association (AVMA), Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (ILAR), European Federation of Animal Associations (FELASA). La definicin de estas condiciones implica la generacin de un animal experimental que nace, crece y muere en ambientes de laboratorio donde las condiciones se ajusten a normas ISO 17025, que cuenta con protocolos de procedimientos definidos y que se trabaja en el marco de las buenas prcticas de laboratorio (23,24).

tn es el ms conocido y utilizado en la mayor parte de las experiencias in vivo de biologa y medicina, es en general el modelo elegido para conocer la reaccin de un organismo mamfero frente a una agresin, una intoxicacin o una infeccin experimental (parasitaria, bacteriana o vrica); reacciones o trastornos inmunolgicos, oncologa, teratologa y embriologa. Muchos investigadores consideran al ratn como un modelo animal casi perfecto porque adems de su corto tiempo generacional, alta performance reproductiva y fcil mantenimiento, son los animales ms sofisticados que pueden ser utilizados por los investigadores (13,14). La Rata ocupa el segundo lugar, es utilizada adems en investigaciones nutricionales, comportamentales y endocrinolgicas. El conejo es utilizado fundamentalmente en la produccin de antisueros; farmacologa; toxicologa; teratogenicidad y reproduccin. Los cobayos son modelos de estudios inmunolgicos, farmacolgicos y nutricionales. El Hamster se utiliza fundamentalmente en la reproduccin, citognesis e inmunologa (12,14). En la actualidad se ha desarrollado y perfeccionado una gran variedad de modelos animales, a fin de cubrir las exigencias de los investigadores para llevar a cabo los experimentos cada vez ms sofisticados. Existen ms de 478 cepas consanguneas de ratn y 234 de rata de laboratorio. Dentro de stas, las hay de uso general o especial, como los modelos para enfermedades autoimnunes, endcrinas y tumorales. Tambin se destacan los hbridos F1, cepas congnitas, coisognicas, transgnicos y knock-out. Se puede acceder a la ltima informacin consultando la pgina del principal proveedor el Jackson Laboratory de Maine, Estados Unidos (http//www.informatics.jax.org/strains) (12-14).

EL PRINCIPIO DE LAS TRES RS COMO IMPERATIVO ETICO Y DE CALIDAD

En 1959 William Russell y Rex Burch, en Inglaterra, en su famoso libro The principles of humane animal experimental techniques, exponen por primera vez que la excelencia cientfica est fuertemente ligada al uso humanitario de los animales de laboratorio. Definen claramente las normas en las que se basan los principios ticos en la investigacin con animales: las tres Rs: Reducir, Reemplazar y Refinar. Estos son los fundamentos para una racional e inteligente estrategia para minimizar el uso de animales y las causas de dolor y de diestres (25-27). Los proyectos de investigacin que requieren el uso de animales de laboratorio deben ser realizados con el nmero m-

MODELOS Y CARACTERSTICAS
Dentro de los modelos de experimentacin sin duda, el ra254

BIOMEDICINA, 2006, 2 (3) - 252-256 ISSN: 1510-9747

El modelo animal en las investigaciones biomdicas Silvia Hernndez

nimo necesario de animales que permitan obtener resultados cientficamente validos. El perfeccionamiento del diseo de los experimentos y la seleccin del modelo mas adecuado, contribuyen al cumplimiento de este principio (10,26,27). Los procedimientos in vivo deben ser reemplazados siempre que sea posible por mtodos alternativos que no usen animales vivos, como modelos matemticos, simulacin por computador, test serolgicos, cultivos celulares y sistemas biolgicos in vitro (28,29). El refinamiento involucra fundamentalmente la estandarizacin segn parmetros internacionales: definicin gentico-sanitaria y la calidad del ambiente donde son criados y mantenidos los animales antes y durante la experimentacin. Incluye todos los procedimientos para minimizar y eliminar el dolor, as como todos los mtodos de enriquecimiento para asegurar el bienestar animal (11,30,31). Estos principios han sido adoptados para su aplicacin a travs de normas bioticas, tales como la Declaracin de la Asociacin Mdica Mundial Sobre el Uso de Animales en la investigacin Biomdica, adoptada por la 41 Asamblea Mdica Mundial celebrada en Hong Kong, en 1989; la Gua del Consejo Internacional de Organizaciones de Ciencias Mdicas para la investigacin biomdica que involucre animales; las Guas para el cuidado y uso de los animales de laboratorio de los Institutos Nacionales de Salud de Estados Unidos (4,6).

EL DISEO DE LA EXPERIMENTACIN
El diseo del experimento es solo una parte del desarrollo de la investigacin, su xito tambin depende de las condiciones de vida del animal y de la calidad de los recursos humanos (especializacin y acreditacin) (5,32). Para el diseo del experimento se han especificado una serie de pautas y recomendaciones a seguir, como: 1. Seleccionar el modelo animal adecuado, el cual depende de la especie, cepa y de la calidad del animal (animal definido) (2,6). 2. Todas las investigaciones debern justificar el nmero de animales seleccionados. El clculo de la muestra se har por procedimientos estadsticos y la misma no deber superar el mnimo necesario para asegurar la confiabilidad de los resultados. El nmero de animales a utilizar depende de las caractersticas mencionadas anteriormente y del protocolo de experimentacin. La seleccin del inculo: dosis, va y frecuencia de inoculacin y la determinacin del punto final del experimento, son elementos que tambin se deben definir (23,24)

3. Realizar los procedimientos experimentales adecuados. Estos estn condicionados a los conocimientos y calificacin de los recursos humanos. Involucran desde la experiencia a la profesionalidad en el mtodo a aplicar, adems del reconocimiento del dolor, al manejo del alivio y la sedacin. Cualquier estudio con animales puede producir en estos diestres o dolor, por lo que cualquier esfuerzo es poco para tratar de minimizarlo sin afectar el objetivo del experimento. Hasta, el momento, se considera que cualquier procedimiento que cause dolor o diestres en humanos, tambin puede causarlo en los animales. El incremento o disminucin de la defecacin y de la orina, la prdida de peso, los cambios en el comportamiento y la inmovilidad son algunos de los signos clnicos. En roedores, son indicadores del dolor los cambios de actitud y de la apariencia del pelo corporal (28,29). 4. La realizacin de pruebas piloto es fundamental para madurar y definir la investigacin, en lo que concierne a la muestra y sus procedimientos. La prueba piloto posibilita la elaboracin del protocolo y de cuantos protocolos sean necesarios para el registro disciplinado de las observaciones y de los datos obtenidos durante las diversas etapas de la experimentacin. Durante la experiencia piloto el investigador aprende a manejar el animal de la mejor manera y adquiere el entrenamiento en la tcnica a utilizar (4,32). 5. Especificar el mtodo de Eutanasia y definir el punto final humanitario del experimento. La eutanasia se define como la muerte sin dolor y diestres. La verdadera eutanasia supone una insensibilizacin rpida, mantenida hasta que se produzca la muerte. Se aplica al final del protocolo o puede ser necesaria antes de finalizado el mismo, por razones de dolor o distres, en todo caso que no pueda ser aliviado con analgsicos o sedantes u otros tratamientos. Los mtodos aplicables son los establecidos en el 2000 Report of the AVMA Panel on Eutanasia (32,33).

CONCLUSIONES
El respeto y cumplimiento de las recomendaciones internacionales sobre el cuidado y uso de los animales de laboratorio, permite alcanzar resultados vlidos, confiables, reproducibles y comparables, as como adoptar una actitud responsable desde el punto de vista tico y moral frente al uso de seres vivos. La constitucin de comits de tica, comit de uso y cuidado 255

BIOMEDICINA, 2006, 2 (3) - 252-256 ISSN: 1510-9747

El modelo animal en las investigaciones biomdicas Silvia Hernndez

de los animales de experimentacin (CICUAL) es el paso inicial para instrumentar las normas y recomendaciones a nivel institucional.

BIBLIOGRAFIA
1. Von Hoosier G, The age of biology: opportunities and challenges for Laboratory Animal Medicine. Scand J Lab Anim Sci 1999; 26 (4): 176-184. 2. Zuiga J, Tur M, Milocco S, Pieiro R. Ciencia y tecnologa en proteccin y experimentacin animal. Mxico: McGraw-Hill Interamericana, 2001; p. 682. 3. Balch C, Bleyer A, Krakoff I, et al. The vital role of animal research in advancing cancer diagnosis and treatment. Cancer Bulletin 1990; 42: 266-269. 4. Institutional Animal Care and Use Committee Guidebook. 2nd ed. Office of Laboratory Animal Welfare. National Institutes of Health Department of Health and Human Services. Bethesda, MD. 2002; p. 210. 5. Gua para el cuidado y uso de animales de laboratorio. Institute of laboratory animals National Research Council. Mxico: Academia Nacional de Medicina, 2002, p. 148. 6. Olfert ED, Cross BM and Mc William AA. Guide to the care and use of experimental animals, Vol 1. 2nd ed. Ontario: Canadian Council on Animal Care, 1998; p. 211. 7. Festing M, Vaughon S. The choice of animal model and reduction. ATLA Alternatives to Laboratory Animals 2004: 32(supplement 2) 59-64. 8. Clark JD, Rager DR, Calpin JP. Animal well-being. I. General considerations. Lab Anim Sci. 1997; 47(6): 564-579. 9. Obrink K, Rehbinder. Animal definition: a necessity for the validity of animal experiments? Laboratory Animals 2000: 34,121-130. 10. Festing M. Reduction of animal use: experimental design and quality of experiment. Laboratory Animals 1994; 28: 212221. 11. Hau J, Craver J. Refinement in Laboratory Animal Science. Its is Cinderella subject, and is there conflict and imbalance within the 3 Rs? Scand J Lab Anim Sci. 1994; (4): 161-167. 12. Festing M. Imbred Strains in Biochemical Research. London: Macmillan Press, 1979; 483 p. 13. Atchley W, Fitch W. Genes trees and the origins of inbread strain of mice. Science 1991; 254: 554-558. 14. Benavides F, Gunet J. Manual de gentica de roedores de laboratorio: principios bsicos y aplicaciones. Alcal: Sociedad Espaola para las Ciencias del Animal de Laboratorio (SECAL)- Universidad de Alcal, 2003; 312. 15. Weerd H. Environment enrichment: room for reduction? ATLA Alternatives to Laboratory Animals 2004; 32 (supplement 2): 69-71. 16. Balcombe J. Laboratory environments and rodents behavioural

needs, a review. Laboratory Animals 2006; 40 (3): 217-235. 17. Roberts S, Loo P, Schultz P, et al. Stress and distress: discussion by the refinement and enrichment. Forum. Animal Technology and Welfare 2006; 5 (2): 99-102. 18. Gent N. A study in refining husbandry techniques for the in house breeding of rats and mice. Animal Technology and Welfare 2006; 5(1): 3-8. 19. Loo P, Meer E, Kruitwagen C, Koolhaas J, Zutphen Z, Boumons V. Long term effects of husbandry procedures on stress- related parameters in male mice of two strains. Laboratory Animals 2004; 38 (2): 169-177. 20. Tsai P. Impact of environmental enrichment in mice: effect of housing conditions on body weight and haematology in different strains. Welfare 2005; 4 (1): 17-23. 21. Smith A. Effects of housing density and cage floor space on three strains of young adult inbred mice. Comparative Medicine 2005; 55 (4): 368-376. 22. Meijer M. The effect of routine experimental procedures on physiological parameters in mice kept under different husbandry conditions. Animal Welfare 2006; 15 (1): 31-38. 23. Whiting E. The 3 Rs a breeders perspective. Animal Technology and Welfare 2006; 5 (1): 37-40. 24. Hawkins P. Reduccing suffering through refinement of procedures: report of the 2003. RSPCA/UFAW rodent welfare group meeting. Animal Technology and Welfare 2004; 3 (2): 79-85,98,101,104. 25. Russell W, Burch R. The principles of humane experimental technique. London: Methuen, 1992 (reprint is available from UFAW). 26. Goldberg A, Zurlo J, Rudacille D. The three Rs and biomedical research. Science 1996; 272: 1403. 27. Vanda-Cantn B. La experimentacin biomdica en animales en los cdigos bioticos. Lab Acta 2003;15: 69-73. 28. Rehbinder C, Obrink K. Lab Anim Scie: a definition. In: O Donoghue PN, ed. Proccedings of the sixth FELASA Symposium, 19-21 june 1996; Basel Switzerland. London: Royal Society Medicine Press, 1996; p. 144-145. 29. Statistics of scientifics procedures on living animals. London: The Stationary Office, 1999. 30. Branchi I. Refining learning and memory assessment in laboratory rodents an ethological perspective. Anuali dell Istituto Superiore di Sanita 2004 (2): 231-236. 31. Lawrence H, Smaje L, Smith J, Combes R, Ewbank R, Gregory J, Jennings G, Moore D, Morton B. Advancing refinement of laboratory animal use. Laboratory Animals 1998;32: 137142. 32. Smith J, Jennings M. Ethics training for laboratory animal users. Laboratory Animals 1998, 32 (2): 128-137. 33. Report of the AVMA Panel on Eutanasia. J AVMA, 2001; 212(5): 669-696.

256