NEUROTRANSMISORES, RECEPTORES Y PROTENAS TRANSPORTADORAS EN LA TRANSMISIN DE SEALES EN LA SINAPSIS

Los receptores de los neurotransmisores estn dentro de dos clases: los canales inicos regulados por ligando, que permiten el pasaje de iones cuando estn abiertos, y los receptores asociados con protenas G, que estn unidos a un canal de iones diferente. En la sinapsis los impulsos son transmitidos por los neurotransmisores liberados desde la terminal del axn de la clula presinptica y la unin subsiguiente a receptores especficos sobre la clula postsinptica. Los neurotransmisores de bajo peso molecular (la acetilcolina, la dopamina, la adrenalina) son transportados desde el citosol hacia las vesculas sinpticas por antiportadores ligados a H+.Las bombas de protones de clase V mantienen el pH intravesicular bajo que conduce al ingreso del neurotransmisor en contra de un gradiente de concentracin. El arribo de un potencial de accin a una terminal axonal presinptica abre los canales del Ca 2+ regulados por voltaje, lo que lleva a un aumento localizado en el nivel citoslico de Ca2+ que desencadena la exocitosis de las vesculas sinpticas. Despus de la liberacin del neurotransmisor, las vesculas son captadas por endocitosis y recicladas. El funcionamiento coordinado de canales inicos regulados en la sinapsis de una neurona motora y de una clula muscular estriada conduce a la liberacin de acetilcolina de la terminal axonal, la despolarizacin de la membrana muscular, la generacin de un potencial de accin y luego la contraccin. El receptor nicotnico de acetilcolina, un canal de cationes regulado por ligando, contiene cinco subunidades, cada una de las cuales tiene una hlice transmembrana (M2) que reviste el canal. Una neurona postsinptica genera un potencial de accin solo cuando la membrana plasmtica en el cono de inicio del axn es despolarizada hasta el potencial umbral mediante la sumatoria de despolarizaciones e hiperpolarizaciones pequeas provocadas por la activacin de mltiples receptores neuronales.

Los neurotransmisores son liberados por exocitosis, un proceso en el cual las vesculas sinpticas llenas de neurotransmisores se fusionan con la membrana axonal, liberando sus contenidos en la hendidura sinptica. La exocitosis de los neurotransmisores desde las vesculas sinpticas involucra la seleccin de vesculas y episodios de fusin similares a los que tienen lugar durante el transporte intracelular de protenas secretadas y de la membrana plasmtica. Dos caractersticas crticas para la sinapsis difieren de otras vas secretorias: a) La secrecin est estrechamente acoplada al aaribo de un potencial de accin en las terminales axonales.

b) Las vesculas sinpticas son recicladas localmente en las terminales del axn, luego de la fusin con la membrana plasmtica.

La despolarizacin de la membrana plasmtica, en s misma, es incapaz de inducir la fusin de las vesculas sinpticas con la membrana plasmtica. Para desencadenar la fusin vesicular, un potencial de accin debe ser convertido en una seal qumica: a saber, un aumento localizado en la concentracin citoslica del Ca 2+. Los transductores de las seales elctricas son canales del Ca 2+ regulados por voltaje localizados en la regin de la membrana plasmtica adyacente a las vesculas sinpticas. La despolarizacin de la membrana debido al arribo de un potencial de accin abre estos canales y permite el ingreso de iones Ca 2+ desde el medio extracelular hacia el interior de la terminal del axn. Este flujo de iones aumenta la concentracin citoslica de Ca 2+ cerca de las vesculas sinpticas desde < 0,1 M, valor caracterstico del estado de reposo, hasta 1-100 M.La unin del Ca 2+ a las protenas que conectan la vescula sinptica con la membrana plasmtica induce la fusin de la membrana y la exocitosis del neurotransmisor. La salida siguiente de iones Ca 2+ adicionales por las bombas del Ca 2+ impulsadas por ATP en la membrana plasmtica disminuye rpidamente el nivel citoslico del Ca 2+ al del estado de reposo, permitindole a la terminal del axn responder al arribo de otro potencial de accin. Un experimento simple demuestra la importancia de los canales del Ca 2+ regulados por voltaje en la liberacin de neurotransmisores. Una preparacin de neuronas en un medio que contiene Ca 2+ es tratada con tetradotoxina, una droga que bloquea los canales del Na+ regulados por voltaje y por lo tanto impide la conduccin de potenciales de accin. Como era lo esperado, ningn neurotransmisor es secretado al medio de cultivo. Si la membrana axonal se despolariza artificialmente de manera que el medio 100 mM KCl, los neurotransmisores se liberan desde las clulas debido al ingreso de Ca 2+ a travs de los canales del Ca 2+ regulados por voltaje abiertos. En efecto, los experimentos de patch clamp muestran que los canales del Ca 2+ regulados por voltaje se abren transitoriamente ante la despolarizacin de la membrana. Dos grupos (pool) de vesculas sinpticas llenas de neurotransmisores estn presentes en las terminales; las adosadas a la membrana plasmtica, que pueden ser exocitadas rpidamente y las que estn en reserva en la zona activa cerca de la membrana plasmtica. Cada aumento de Ca 2+ desencadena la exocitosis de alrededor del 10% de las vesculas adosadas. Las protenas de membrana exclusivas de las vesculas sinpticas son luego internalizadas especficamente mediante endocitosis, casi siempre a travs de los mismos tipos de vesculas revestidas de clatrina utilizadas para recuperar otras protenas de la membrana plasmtica por otros tipos de clulas. Luego de que las vesculas endocitadas pierden su recubrimiento de clatrina, son llenadas rpidamente de nuevo con neurotransmisores. La capacidad de muchas neuronas para disparar 50 veces por segundo en una clara evidencia de que el reciclado de protenas de membrana vesiculares tiene lugar con bastante rapidez.

La sealizacin en las sinapsis es usualmente terminada por degradacin o recaptacion de los neurotransmisores

Despues de su liberacin desde una celula presinaptica, los neurotransmisores deben ser eliminados para evitar la estimulacin continua de la celula postsinaptica. La sealizacin puede ser terminada por difusin de un transmisor lejos de la hendidura sinptica, pero este es un proceso lento.En cambio, uno o dos mecanismos mas rapidos terminan la accin de los neurotransmisores en la mayora de las sinapsis. La sealizacin mediante acetilcolina se termina cuando es hidrolizada a acetato y colina por la acetilcolinesterasa, una enzima localizada en la hendidura sinptica. La colina liberada en esta reaccin es transportada nuevamente hacia la terminal axonal presinaptica mediante un simportador de colina/ Na+ y es utilizada en la sntesis de mas acetilcolina. El funcionamiento de este transportador es similar al de los simportadores ligados al Na + utilizados para transportar glucosa dentro de las clulas en contra de un gradiente de concentracin. Con excepcin de la acetilcolina, todos los neurotransmisores mostrados son eliminados desde la hendidura mediante el transporte hacia las terminales axonales que los liberaron. De este modo, estos transmisores son reciclados intactos. Los transportadores de GABA, noradrenalina, dopamina y serotonina, fueron los primeros en ser clonados y estudiados. Estas cuatro protenas transportadoras son simportadoras ligadas al Na+. Presentan un 60.70& de identidad en sus secuencias de aminocidos y se cree que cada una contiene 12 hlices transmembrana. Al igual que con otros simportadores de Na+, los movimietos del Na + hacia el interior de la clula a favor de su gradiente electroqumico provee la energa para la recaptacion del neurotransmisor. Al fin de mantener la electroneutralidad, el Cl a menudo es transportado por un canal de iones junto con el Na+ y el neurotransmisor. La cocana inhibe los transportadores para la noradrenalina, la serotonina y la dopamina. La unin de la cocana al transportador de dopamina inhibe la recaptacion de dopamina, prolongando as la sealizacin en sinapsis cerebrales clave: en efecto, el transportador de dopamina es el principal receptor de cocana del cerebro. Los agentes teraputicos, como los frmacos antidepresivos fluoxetina e imipramina, bloquean la recaptacion de serotonina y el antidepresivo tricclico desipramina bloquea la recaptacion de noradrenalina.

La apertura de los canales de cationes regulados por acetilcolina conduce a la contraccin muscular La acetilcolina es el neurotransmisor en la sinapsis entre las neuronas motoras y las clulas musculares, a menudo denominadas uniones neuromusculares. Una nica terminal axonal de una neurona motora de una rana puede contener un milln o ms vesculas sinpticas, cada una de las cuales posee 1000-10000 molculas de acetilcolina; estas vesculas a menudo se acumulan en hileras en la zona activa.

Tal neurona puede formar sinapsis con una nica celula del musculo esqueltico en varios cientos de puntos. El receptor nicotnico de acetilcolina, que se expresa en las clulas musculares, es un canal regulado por ligando que admite tanto K+ como Na+. El efecto de la acetilcolina sobre este receptor puede determinarse mediante estudios con la tcnica de patch clamp sobre porciones aisladas con el exterior afuera de las membranas plasmticas musculares. Estas mediciones demostraron que la acetilcolina induce la apertura de una canal catinico en el receptor capaz de transmitir 15000-30000 iones Na+ o K+ por milisegundo. Sin embargo, puesto que el potencial de reposo de la membrana plasmtica muscular es cercano a E, el potencial de equilibrio del potasio, la apertura de los canales receptores de acetilcolina produce un pequeo aumento en la salida de iones K+; por otra parte los iones Na+ entran en la clula muscular conducidos por el gradiente electroqumico de Na+. El incremento simultneo en la permeabilidad a los iones de Na+ y K+ que siguen a la fijacin de la acetilcolina produce una despolarizacin neta de alrededor de 15 mV respecto del potencial del musculo en reposo de 85 a 90 mV. Esta despolarizacin localizada de la membrana plasmtica muscular desencadena la apertura de los canales del Na+ regulados por voltaje, que conduce a la generacin y conduccin de un potencial de accin en la superficie de la membrana de la celula muscular mediante el mismo mecanismo descrito para las neuronas. Cuando la despolarizacin de la membrana alcanza los tubulos T, invaginaciones especializadas de la membrana plasmtica, afecta a los canales del Ca2+ en la membrana plasmtica aparentemente sin causar su apertura. De alguna manera esto induce la apertura de canales de liberacin de Ca2+ adyacentes en la membrana del retculo sarcoplasmtico. El consiguiente flujo de iones Ca2+ almacenados en el retculo sarcoplasmtico hacia el citosol incrementa la concentracin de Ca2+ citoslico lo suficiente para inducir la contraccin muscular. El monitoreo cuidadoso del potencial de membrana de la membrana muscular en una sinapsis con una neurona motora colinrgica ha demostrado despolarizaciones de 2 ms intermitentes, espontneas y fortuitas de alrededor de 0,5-1,0 mV en ausencia de estimulacin de la neurona motora. Cada una de estas despolarizaciones es causada por la liberacin espontnea de acetilcolina a partir de una nica vescula sinptica. En efecto, la demostracin de tan pequea despolarizacin espontanea condujo a la nocin de la liberacin cuntica de acetilcolina (luego aplicada a otros neurotransmisores) y, por ende, a la hiptesis de la exocitosis vesicular en la sinapsis. La liberacin de una vescula sinptica que contiene acetilcolina produce la apertura de alrededor de 3000 canales inicos en la membrana postsinaptica, mucho menos que el nmero necesario para alcanzar la despolarizacin umbral que induce una potencial de accin. Sin duda, la estimulacin de la contraccin muscular por una neurona motora requiere la liberacin casi simultnea de acetilcolina de numerosas vesculas sinpticas.

Las cinco subunidades en el receptor nicotnico de acetilcolina contribuyen al canal inico El receptor de acetilcolina del musculo esqueltico es una protena pentamrica con una composicin de subunidades de ,

. Las subunidades , tienen una

homologa de secuencia considerable; en promedio, alrededor del 35-40% de los residuos en dos subunidades cualesquiera son similares. El receptor completo tiene una simetra pentamrica y el canal catinico real es un poro central ahusado revestido por segmentos homlogos de cada una de las cinco subunidades. El canal se abre cuando el receptor une cooperativamente dos molculas de acetilcolina en los sitios ubicados en las interfaces de las subunidades y . Una vez que la acetilcolina est unida a un receptor, el canal se abre en microsegundos. Estudios de medicin de la permeabilidad de distintos cationes pequeos sugieren que el canal inico abierto mide, en su parte ms estrecha, alrededor de 0,65-0,80 nm de dimetro, de acuerdo con estimaciones de microfotografas electrnicas. Esto sera suficiente para permitir el pasaje tanto de iones Na+ como K+ con sus cubiertas de molculas de agua unidas. De esta manera, el receptor de acetilcolina probablemente transporta iones hidratados, a diferencia de los canales del Na+ y del K+, que permiten solo el pasaje de iones no hidratados. Aunque se desconocen los detalles moleculares de la estructura del canal inico central, gran parte de la evidencia indica que est revestido por cinco hlices M2 transmembrana, una

por cada una de las cinco subunidades. Las hlices M2 estn compuestas en gran parte de aminocidos polares hidrfobos no cargados, pero los residuos de glutamato cargados negativamente estn ubicados en cada extremo, cerca de las caras de la membrana y varios residuos de serina y tneonina estn cera del centro. Se han expresado en los ovocitos de rana receptores mutantes de acetilcolina en los cuales un nico glutamato o aspartato cargado negativamente en una hlice M2 es reemplazado por una lisina cargada positivamente. Las mediciones por patch clamp indican que tales protenas alteradas pueden funcionar como canales, pero el nmero de iones que las atraviesan durante el estado abierto est reducido. Cuanto mayor sea el nmero de residuos de glutamato o aspartato mutados (en una o en mltiples hlices M2), ms disminuir la conductividad de iones. Estos hallazgos sugieren que los residuos de glutamato o aspartato forman un anillo de cargas negativas sobre la superficie extrema del poro que ayuda a descartar aniones y atraer iones Na+ o K+ a medida que entran en el canal. Un anillo similar de cargas negativas que reviste la superficie citoslica del poro tambin ayuda a seleccionar cationes para el pasaje. Los dos sitios de fijacin de acetilcolina en el dominio extracelular del receptor se encuentran a 4 a 5 nm delc entro del poro. En consecuencia, la unin de la acetilcolina debe desencadenar cambios conformacionales en las subunidades del receptor que pueden provocar la apertura del canal a cierta distancia desde el sitio de unin. Los receptores de membranas postsinpticas aisladas pueden quedar atrapados en el estado abierto o cerrado mediante el congelamiento rpido en nitrgeno lquido.

Las clulas nerviosas toman una decisin de todo o nada para generar un potencial de accin En las uniones neuromusculares, virtualmente cada potencial de accin en la neurona motora presinptica desencadena un potencial de accin en la clula muscular postsinptica. La situacin en las sinapsis entre neuronas, sobre todo en las que estn en el cerebro, es mucho ms compleja porque la neurona postsinptica recibe seales de muchas neuronas presinpticas. Los neurotransmisores liberados de las neuronas presinpticas pueden unirse a un receptor excitador sobre la neurona postsinptica, abriendo as un canal que admite iones Na+ o tanto iones Na+ como K+. El receptor de acetilcolina recin tratado es uno de los muchos receptores excitadores y la apertura de estos canales inicos conduce a la despolarizacin de la membrana plasmtica postsinptica, promoviendo la generacin de un potencial de accin. En cambio, la unin de un neurotransmisor a un receptor inhibidor sobre la clula postsinptica provoca la apertura de los canales del K+ o del Cl-, conduciendo a una salida adicional de iones K+ desde el citosol al ingreso de iones Cl-. En cualquier caso, el flujo de iones tiende a hiperpolarizar la membrana plasmtica, lo que inhibe la generacin de un potencial de accin en la clula postsinptica. Una nica neurona puede ser afectada simultneamente por seales recibidas en mltiples sinapsis excitadoras e inhibidoras. La neurona integra continuamente estas seales y determina si genera o no un potencial de accin. En este proceso, las diversas despolarizaciones e hiperpolarizaciones pequeas generadas en las sinapsis se mueven a lo largo de la membrana plasmtica desde las dendritas al cuerpo celular y luego al cono de inicio axonal, donde se suman. Un potencial de accin se genera donde sea que la membrana en el cono de inicio axonal se torna despolarizada a un cierto voltaje llamado el potencial umbral. Por ende, un potencial de accin es generado de una manera en la que es todo o nada: la despolarizacin que alcanza el umbral conduce siempre a un potencial de accin, mientras que cualquier despolarizacin que no alcanza el potencial de umbral nunca la induce.
Que la neurona genere un potencial de accin en el cono de inicio del axn depende del balance del ritmo, la amplitud y la localizacin de las diversas seales que recibe; este cmputo de la seal difiere para cada tipo de neurona. En cierto sentido, cada neurona es una pequea computadora que promedia todas las activaciones del receptor y las alteraciones elctricas sobre su membrana y decide si dispara un potencial de accin y lo conduce a lo largo del axn. Un potencial de accin siempre tendr la misma magnitud en cualquier neurona. La frecuencia con la cual se generan los potenciales de accin en una neurona es un parmetro importante de su capacidad para enviar seales a otras clulas. El sistema nervioso utiliza circuitos de sealizacin compuestos de mltiples neuronas En los animales multicelulares complejos, como los insectos y los mamferos, diversos tipos de neuronas forman circuitos sealizadores. En el tipo simple de circuitos, denominado arco reflejo, las interneuronas conectan mltiples neuronas sensoriales y motoras, permitindole a una neurona sensorial afectar a mltiples neuronas motoras y a una neurona motora ser afectada por mltiples neuronas sensoriales; en este sentido las interneuronas integran y amplifican los reflejos. Por ejemplo, el reflejo patelar en los seres humanos involucra un arco

reflejo complejo en el cual un msculo es estimulado a contraerse mientras otro es inhibido a hacerlo. Tal circuito permite a un organismo responder a una seal mediante la accin coordinada de juegos de msculos que juntos logran un nico propsito. Sin embargo, estos circuitos de sealizacin simples no explican directamente las funciones cerebrales de orden ms alto, como el razonamiento, el clculo y el desarrollo de la memoria. En el cerebro, las neuronas tpicas reciben seales de hasta otras mil neuronas, y por otra parte pueden dirigir seales qumicas a muchas otras. El rendimiento del sistema nervioso depende de las propiedades de sus circuitos, es decir, las conexiones o interconexiones. Los aspectos complejos del sistema nervioso, como la visin y la conciencia, no pueden ser entendidos en un nivel celular aislado sino de las redes de clulas nerviosas que pueden ser estudiadas por tcnicas de anlisis de sistemas. El sistema nervioso cambia constantemente; las alteraciones en el nmero y la naturaleza de las interconexiones entre las neuronas individuales suceden, por ejemplo, en el desarrollo de nuevas memorias.