Tincin general. Una de las tinciones ms comnmente usada en histologa es la hematoxilina-eosina sobre cortes de parafina.

Como vemos se usa un colorante bsico y otro cido para teir de diferente color a las estructuras cidas y bsicas de la clula. Antes de proceder a la tincin, si partimos de cortes de parafina, tenemos que llevar a cabo unos tratamientos previos sobre las secciones como es el desaparafinado, puesto que estos cortes son hidrosolubles. Si partimos de cortes de criostato esto no se lleva a cabo.

Seccin de un glomrulo de un rin de mamfero obtenida a partir de una inclusin en parafina y teido con hematoxilinaeosina. Los ncleos aparecen de color violceo (hemtoxilina) y el citoplasma de color rosado (eosina).

Pasos que se siguen durante una tincin general de hematoxilina-eosina. Los tiempos son aproximativos porque dependen del grosor de los cortes y de la concentracin de los colorantes. El desparafinado permite eliminar el medio de inclusin, la parafina. El paso por agua de grifo es tpico de la hematoxilena y se denomina diferenciacin. Las sales del agua permiten obtener una coloracin ms violcea, en vez de prpura. La deshidratacin final es necesaria porque el medio de montaje no suele ser hidrosoluble. Estos medios de montaje no afectan al tejido, ni a los colorantes y tienen unas propiedades pticas excelentes. Adems, conservan las preparaciones durante aos en buenas condiciones. Tras el montado y secado (evaporacin del xileno), las secciones se puede observar con el microscopio ptico.

Esquema del proceso histolgico.

PROTOCOLO GENERAL A continuacin se presenta el protocolo de trabajo utilizado por nuestra ctedra para la tcnica de Hematoxilina - Eosna para preparados de uso didctico: I. Fijacin En formol al 10% (1 parte de formol y 9 partes de agua destilada) por lo menos durante 6 hs. II. Corte Se le da el tamao deseado a la pieza y se la coloca en una bolsa de gasa, con el fin de enjuagarla en agua corriente durante, por lo menos, 15'.

III. Deshidratacin 1) 2) 3) 4) 5) Alcohol 70, 1h30'. Alcohol 96, 1h30'. Alcohol 100 (l), 1h30'. Alcohol 100 (ll), 1h30'. Toluol, entre 1h30' y 3hs.

IV. Inclusin 1) 2) 3) 4) 5) 6) Secado de la muestra con gasa. Parafina 56 (l), 1h30'. Parafina 56 (ll), 1h30'. Formacin de la barra. 30' de frezzer. Fractura del taco

V. Corte VI. Coloracin 1) Secado de los cortes en estufa a 58C, 15'. 2) Xilol o toluol (I), 15' en estufa. 3) Xilol o toluol (II), 2'. 4) Alcohol 100, 30". 5) Alcohol 96, 30". 6) Alcohol 70, 30". 7) Alcohol 50, 30". 8) Agua destilada, 30". 9) Hematoxilina, 130". 10) Agua corriente, 2. 11) Alcohol 50, 15". 12) Eosina, 30". 13) Alcohol 96, 10". 14) Alcohol 100, 10". 15) Xilol, 1 por lo menos. 16) Montaje con Blsamo de Canad sinttico. RECOMENDACIONES TILES - Las tcnicas histolgicas pertenecen al tipo denominado "tcnicas contrarreloj". Si Ud. est apurado no las empiece, djelas para cuando su trabajo le permita dedicarse solo a esa actividad. - Mantenga su laboratorio en orden, con todos los elementos de vidrio que va a utilizar perfectamente limpios. - Rotule todos los frascos inmediatamente luego de preparar cualquier solucin. - Guarde siempre las soluciones en frascos de color caramelo. - Mantenga los recipientes que contienen xilol, toluol y alcohol 100 siempre tapados. - Nunca coloque xilol o toluol en recipientes plsticos porque resultan atacados por estas sustancias. - Si debe trabajar con cidos hgalo bajo campana. Si se derraman o salpican la piel, lave inmediatamente con abundante agua con bicarbonato de sodio. - Cuando coloree prepare primero todas las soluciones, solo despus comience con los pasajes del material. - Si debe realizar simultneamente varios procesos de inclusin, confeccione planillas de tiempos para cada uno de los materiales. Esto evitar confusiones. - Controle cuidadosamente los tiempos establecidos para cada tcnica. Es muy importante respetarlos para obtener resultados satisfactorios. - Antes de iniciar cualquier tcnica, primero lala atentamente. Prepare el material de vidrio necesario, rena los reactivos y colorantes, haga las diluciones, determine los tiempos, y despus comience el proceso. - Tenga mucha paciencia y voluntad. Sea perseverante, si durante las primeras experiencias sus resultados no son lo que Ud. esperaba, verifique cada paso y repita tantas veces como sea necesario.

Tricrmica de Gomori
Se trata de una solucin actica estabilizada que contiene Chromotrope 2R, Azul de Anilina y Acido Fosfotngstico. Listo para usar. No requiere

dilucin. Colorante Histolgico. Tie citoplasma y fibras musculares de rojo, mientras que el colgeno toma un color azulado.

Tricrmica de Masson
Soluciones colorantes destinadas a la tincin segn tcnica de Masson y sus modificaciones (Lillie). Los colorantes se presentan listos para usar. No requieren diluciones. Para su empleo pueden combinarse de acuerdo a las necesidades del usuario para lograr la tincin deseada. A diferencia de otros productos comerciales que poseen slo 2 colorantes, Biopur dispone de los 4 colorantes desarrollados para la tcnica. La ventaja principal de poder realizar estas combinaciones radica en la posibilidad de teir con colores diferentes de acuerdo a los tipos de tejidos en estudio. Se dispone de soluciones de: Fucsina Acida - Punz de Xilidina Fucsina Acida - Escarlata de Biebrich Azul de Anilina Fast Green FCF

Verde de Metilo - Pironina

Se trata de una solucin de Verde de Metilo asociada con Pironina G segn Tarf-Kurnick. Colorante Histolgico. Empleado para la investigacin histolgica del cido nucleico contenido en los tejidos, as como para demostrar la presencia de clulas de la serie linftica y clulas plasmticas. Tambin es til en la identificacin de clulas plasmticas y RNA en secciones de tejidos y preparaciones citolgicas.

Carbohidratos PAS
Se trata de un kit compuesto por soluciones de: Acido Peridico al 1% (Conservar en Refrigerador 2-10C) Reactivo de Schiff Biopur (Conservar en Refrigerador 2-10C) Para la demostracin histoqumica de componentes celulares que contienen Glicoles, tales como Carbohidratos, Glicoprotenas, etc. Permite la observacin de Membranas Basales y algunas Mucinas

Mucicarmn
Se trata de un kit que contiene soluciones de: Mucicarmn Concentrada Biopur Actica de Tartrazina Biopur Colorante Histolgico. Usado en la identificacin de sitios de tumores primarios, ayudando a la distincin de clulas escamosas indiferenciadas mucina-negativas de los adenocarcinomas mucina-positivos. La cpsula de los criptococos (hongos) se tie de rosa oscuro. La tartrazina tie el citoplasma de amarillo.

Rojo Congo
Se trata de un kit que contiene soluciones de: Rojo Congo (Alcohlica Clorurada) (Stock) Alcohlica al 80%, clorurada (Stock) Hidrxido de Sodio 0.25 M Colorante Histolgico (Bennhold-Puchtler). Destinado a la determinacin de protena amiloide en secciones de tejidos con el empleo de microscopios de luz comn o polarizada.

Bacterias Gram
Se trata de un kit para la coloracin de bacterias con la tincin segn Gram Se dispone de soluciones de: Violeta Cristal Solucin Concentrada de Iodo Decolorante Safranina La tincin de Gram fue desarrollada en el ao 1884 por Christian Gram. La tincin hoy en da es aplicada para la clasificacin como paso inicial en la identificacin de las bacterias. Tambin, como consecuencia de la tincin, las bacterias muestran su forma, tamao, etc., lo que ayuda significativamente al diagnstico.

Ziehl
Se trata de un kit compuesto por colorantes y decolorante.

Se dispone de soluciones de: Fucsina Bsica Decolorante Azul de Metileno Mtodo tradicional para la deteccin del bacilo tuberculoso. Para empleo con esputo, concentrado o por extensin directa, lquido cefalorraqudeo u otros fluidos corporales, incluyendo orina cateterizada y material homogeneizado de tejidos.

Tinciones Nucleares
Se trata de soluciones de Hematoxilina a diferentes concentraciones y con aplicaciones especficas. Hematoxilina Biopur est basada en la frmula de Gill #1 conteniendo 2g/L de Hematoxilina. Se trata de una solucin acuosa preparada por va qumica en fro, evitando de esta manera la perjudicial ebullicin. No precipita. No requiere filtrado para su empleo. Posee cido actico en su frmula, permitiendo su empleo inmediato, sin necesidad de aditivo alguno. Por esto, no requiere el agregado de cidos ni de mordientes. Lista para usar. Hematoxilina Biopur encuentra aplicacin en tcnicas citolgicas fundamentalmente. Hematoxilina "Activada" Biopur est basada en la frmula de Gill #2 conteniendo 4g/L de Hematoxilina. Se trata de una solucin acuosa preparada por va qumica en fro, evitando de esta manera la perjudicial ebullicin. No precipita. No requiere filtrado para su empleo. Posee cido actico en su frmula, permitiendo su empleo inmediato, sin necesidad de aditivo alguno. Por esto, no requiere el agregado de cidos ni de mordientes. Lista para usar. Hematoxilina Activada Biopur encuentra aplicacin en tcnicas histolgicas fundamentalmente. Hematoxilina Frrica de Weigert Biopur se compone de 2 soluciones para la preparacin de la misma. Una Solucin de Hematoxilina Alcohlica y una Solucin de Cloruro Frrico. Hematoxilina Frrica de Weigert Biopur encuentra aplicacin especfica en coloraciones especiales que requieren hematoxilina (Mucicarmn, Tricrmica de Masson, Tricrmica de Gomori)

Clsicas May Grunwald - Giemsa

Se trata de productos que se complementan para la tcnica de tincin segn May-Grnwald y Giemsa. Los colorantes segn May-Grnwald y Giemsa son combinaciones de azul y azures de metileno asociados con eosina. Estabilizador es un buffer fosfatos pH 6.5 regulador del pH del agua a ser utilizada en tinciones hematolgicas. Estabilizador Biopur asegura la tincin salmn de los hemates, descartndose los accidentes de las tonalidades rojo fucsia, que dificultan la tincin de los leucocitos, y de las azuladas, que entorpecen la metacromasia.

Wright
Se trata de una solucin May-Grnwald-Giemsa compuesta. Tincin panptica diferencial en un solo paso.

Tincin 15
Se trata de un kit de tincin diferencial rpida compuesto por 3 soluciones: Fijador Solucin 1 (Xantnicos) Solucin 2 (Tiaznicos) Coloracin de extendidos. Tincin diferencial rpida (15 segundos) Puncin aspirativa Tejidos Biopsias por congelacin Muestras hematolgicas Recuento leucocitario diferencial

Shorr
En contraste con la tincin de Papanicolaou, la tincin de Shorr se usa solamente en citodiagnstico hormonal en el cual es superior. Permite lograr la diferenciacin neta de las clulas del epitelio vaginal. Tincin nuclear intensa y coloracin citoplasmtica homognea.

Coloracin Hematoxilina & Eosina Hematoxilina

Si bien tanto Hematoxilina Biopur como Hematoxilina Activada Biopur pueden ser usadas para la tcnica de coloracin Hematoxilina-Eosina, recomendamos el uso de Hematoxilina Activada Biopur dada su doble concentracin que permite lograr resultados en tiempos menores.

Eosina
Se trata de una solucin de eosina. Colorante cido. Utilizado como colorante de contraste de la hematoxilina en la tincin Hematoxilina-Eosina.

Coloracin de Papanicolaou
Se trata de una tcnica citolgica compuesta por 3 soluciones: Hematoxilina Biopur OG Biopur EA Biopur

Hematoxilina Biopur
Colorante nuclear. Las caractersticas y recomendaciones para el uso de Hematoxilina Biopur fueron expuestas en la seccin anterior. Rogamos referirse a la misma para informacin adicional.

OG Biopur
Se trata de una solucin alcohlica de cido fosfotngstico y Orange G. El cido fosfotngstico acidifica la solucin y aumenta la unin del Orange G a zonas citoplasmticas densas.

EA Biopur
Se trata de una solucin alcohlica, fotoestable que elimina los problemas causados por las tradicionales e inestables frmulas numeradas EA36/50/65/etc. No requiere filtracin. Listo para usar. Tie selectivamente el citoplasma de clulas que tuvieron actividad metablica poco antes de la recoleccin de la muestra. Tie de rosa a rojo las clulas escamosas superficiales, cilios, nucleolo y eritrocitos.

Mujer de 64 aos con ascitis y derrame pleural. En las semanas previas al ingreso present disnea a moderados esfuerzo y aumento del permetro abdominal. En la exploracin exista hipoventilacin en base derecha y una sensacin de masa en fosa iliaca derecha. En la analtica estaba elevado el Ca 125. El liquido pleural era un trasudado con citologa negativa para malignidad. Tras histerectoma y doble anexectoma qued asintomtica y se resolvi el derrame pleural. Se muestra la radiografa de torax, la TC abdominal y la imagen anatomopatolgica macro y microscpica de la masa anexial derecha.