LABORATORIO DE BIOLOGA

FACULTAD:
-Medicina Veterinaria y Zootecnia

PRCTICA N 4:
-Clula procariota. Reconocimiento de estructuras bacterianas

INTEGRANTES:
-Giomar Paredes Cornejo -Emely Zapata Portilla

PROFESORAS:
-Joyce Del Pino Robles -July Rodrguez Ubillus

HORARIO:
-Mircoles 13:10 15:00

CICLO:
-2013 II

MARCO TERICO

Las clulas procariotas estructuralmente son las ms simples y pequeas. Como toda clula, estn delimitadas por una membrana plasmtica que contiene pliegues hacia el interior (invaginaciones) algunos de los cuales son denominados laminillas y otro es denominado mesosoma y est relacionado con la divisin de la clula. La clula procariota por fuera de la membrana est rodeada por una pared celular que le brinda proteccin. El interior de la clula se denomina citoplasma. En el centro es posible hallar una regin ms densa, llamada nucleoide, donde se encuentra el material gentico o ADN. Es decir que el ADN no est separado del resto del citoplasma y est asociado al mesosoma. En el citoplasma tambin hay ribosomas, que son estructuras que tienen la funcin de fabricar protenas. Pueden estar libres o formando conjuntos denominados poli ribosomas. Las clulas procariotas pueden tener distintas estructuras que le permiten la locomocin, como por ejemplo las cilias (que parecen pelitos) o flagelos (filamentos ms largos que las cilias).

OBJETIVOS
- Conocer algunos de los mtodos de coloraciones bacterianas ms usados en microbiologa. - Reconocer algunas formas y estructuras bacterianas. - Manipular adecuadamente material microbiolgico observando las normas de bioseguridad.

PROCEDIMIENTO DEL EXPERIMENTO

1. COLORACION GRAM MATERIALES Cultivo bacteriano de 24 horas Batera Gram: Cristal violeta, Lugol, alcohol-acetona, safranina o fucsina bsica. Lminas porta objeto limpias Lpices de cera o plumn marcador Asas de siembra. Mecheros Microscopio, aceite de inmersin, papel lente Solucin desinfectante Guantes de ltex Pinzas de madera

PROCEDIMIENTO 1. Del cultivo de bacterias Gram +, tomarnos un inoculo segn indicaciones. Extendimos sobre la lmina conforme se indica. 2. Fijamos la preparacin a la llama con ligeras pasadas. 3. Cubrimos con solucin de Cristal violeta por 1 minuto 4. Lavamos ligeramente con agua corriente. 5. Cubrimos la preparacin con Lugol por 30 a 1 minuto. 6. Diferenciamos con alcohol-acetona 7. Lavamos con agua corriente. 8. Contrastamos con el colorante Fucsina bsica o safranina por 1 minuto. 9. Lavamos con agua corriente para evitar formacin de precipitados. 10. Secamos al ambiente o con ayuda del mechero 11. Repetimos el procedimiento con microorganismos Gram 12. Observamos con objetivo de inmersin (100x) y aceite de inmersin.

2. COLORACIN DE ESPORAS: MTODO DE WIRTZ-CONKLIN

MATERIALES Cultivo de 5 das de Bacillus subtilis Batera de coloracin: Verde de malaquita al 5%, safranina o fucsina bsica al 0.5%, agua destilada o corriente Mecheros Gradillas Lpiz de cera o plumn marcador Asa de siembra Guantes de ltex. Pinzas de madera

PROCEDIMIENTO 1. Fijamos la muestra al calor y cubrimos con Verde de Malaquita coloreando en caliente 7. 2. Lavamos con agua corriente. 3. Contrastamos con safranina o fucsina por 1 minuto. 4. Lavamos con agua corriente. 5. Secamos y observamos al 1000x.

3. COLORACIN DE CORPSCULOS METACROMTICOS

MATERIALES Muestra de sarro dental Solucin colorante de Azul de Metileno de Loeffler Agua corriente Lminas portaobjeto limpias Asa de siembra Plumn marcador Microscopio Aceite de inmersin. Guantes de ltex Pinzas de madera Mecheros

PROCEDIMIENTO 1. Extendimos y fijamos la muestra al calor. 2. Coloreamos con Azul de Metileno de Loeffler por 7 minutos. 3. Lavamos con agua corriente. 4. Secamos y observamos.

CONCLUSIONES
Que las esporas son muy difciles de teir, ya que se necesita color para teir esporas.

Los bacilos son largos y ligeramente gruesos, con granulaciones de color azul intenso.

Observamos que el gram negativo se vuelve de color rosado y el gram positivo de color violeta.

Gracias a la coloracin Gram pudimos identificar el gran positivo y el gran negativo.

Para la observacin del conirebacterium fue difcil de encontrar, pues requerimos ayuda del docente presente.

REFERENCIAS

- Campbell, N. "Biology:Concepts & Connections". Pearson

Education. San Francisco: 2003.

- L. Margulis , Origins of Eukaryotic Cells. Yale University Press,

New Haven: 1975

- Cecie Starr, Ralph Taggart , Biologia/ Biology: La unidad y

diversidad de la vida, 2006

Acob Poehlsgaard & Stephen Douthwaite , the bacterial ribosome as a target for antibiotics Department of Biochemistry & Molecular Biology, University of Southern Denmark, 2005