MANUAL PRCTICO DE TOMA Y MANEJO DE MUESTRAS EN PERROS Y GATOS
TRABAJO RECEPCIONAL EN LA MODALIDAD DE:
Trabajo Prctico Educativo
COMO REQUISITO PARCIAL PARA OBTENER EL TTULO DE
MDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA
PRESENTA:
Erika Gordillo Cabrera
ASESOR:
MVZ. Nancy Prez Cisneros
VERACRUZ, VER. JULIO 2010 ii
DEDICATORIAS
A Dios Por permitirme realizar esta meta, por darle salud a mis seres queridos y principalmente por cuidar a mi Pap que est en el cielo apoyndome y dndome sus bendiciones en todo momento.
A mi mam Gloria M. Cabrera Zamudio Por haberme apoyado desde el inicio de mi carrera, dndome sus bendiciones, sus consejos, y por transmitirme su paz y tranquilidad en los momentos que ms necesitaba. Por desvelarse conmigo, en mis semanas de exmenes. Gracias
A mis hermanos Armando, Delia y Gloria Por apoyarme desde siempre, por preocuparse siempre por m, por darme sus consejos.
A mis Tos y primos Por su apoyo a lo largo de mi carrera, y por sus consejos.
A mi novio Rogelio Caldern Olmos Por darme su apoyo, amor y comprensin, durante mis trabajos, exmenes etc. Por siempre decirme si puedes, por ayudarme a estudiar inmunologa, por cuidarme y valorarme.
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AGRADECIMIENTOS
A mi asesora Mvz. Nancy Prez Cisneros: Por ayudarme a realizar las tcnicas de cada toma de muestra, por preocuparse por m trabajo, por haber aceptado ser mi asesora, por estar ah con su cmara cuando yo no traa la ma, por dejarme reali zar las tcnicas y poder aprender, por su paciencia, apoyo y comprensin. Y sobre todo a su perro roco por su disponibilidad en las tcnicas.
A mis maestros que estuvieron a lo largo de mi carrera.
Al mdico Canseco (Yopo) por apoyarme en la presentacin del trabajo, por aclarar mis dudas, por su apoyo, y sobre todo enorme paciencia.
A Mvz. Jacqueline Pantoja O. (Jackita) por dejarme tomar fotos a sus pacientes, y por dejarme realizar las tcnicas necesarias para este manual, tambin por proporcionarme informacin sobre el tema.
Al Qumico Francisco J. Lpez Vzquez (Pakito), por dejarme entrar a su laboratorio y tomar mis fotos. Tambin por ayudarme a conseguir el material adecuado para mis fotos.
A Mvz. Genaro Cocom P. (Kokis), y a Ren por ayudarme a tomar las fotos, incluso por estar en ellas.
A Rogelio Caldern por apoyarme en todo momento.
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INDICE GENERAL
Introduccin 1 Justificacin 2 Objetivo general 3 Objetivos especficos 3 1. Recoleccin, manejo y envo de muestras para hematologa en perros y gatos 4 1.1. Material 4 1.2. Tcnica vena yugular 8 1.3. Toma de muestra vena ceflica 11 1.4. Manejo 12 1.5. Envo 12 2. Toma, conservacin y envo de muestra de heces 14 2.1 Material 14 2.2 Tcnica con asa rectal 15 2.3 Conservacin 16 3. Toma de muestra de semen 17 3.1. Material 17 3.2. Tcnica 3.3. Conservacin 17 19 4. Toma, conservacin y envo de muestras en piel 20 4.1. Raspados 20 4.1.1. Raspado superficial de piel 20 4.1.1.1. Material 20 4.1.1.2. Tcnica 21 4.1.2. Raspados profundos de piel 23 4.1.2.1. Material 4.1.2.2. Tcnica 23 23 5. Toma de muestra de cultivo para dermatofitos 26 v
5.1. Material 26 5.2. Tcnica 5.3. Conservacin 26 28 5.4. Tricograma 5.4.1 Material 5.4.2 Tcnica 29 29 29 6. Examen con lmpara de Word 6.1 Material 6.2 Tcnica 30 30 30 7. Cultivo bacteriano 7.1 Material 7.2 Tcnica 8. Tcnicas de coleccin con hisopos de algodn 8.1 Material 8.2 Tcnica 8.3 Envo 9. Tcnica para muestras en cinta adhesiva 9.1 Material 9.2 Tcnica 9.3 Tincin 10. Obtencin de muestras para citologa 10.1 Aspiracin con aguja fina 10.1.1 Aspiracin de ndulos 10.1.1.1 Material 10.1.1.2 Tcnica 10.2 Aguja fina simple sin aspiracin 10.2.1 Material 10.2.2 Tcnica 10.3 Preparacin de los frotis 10.3.1 Frotis en cruz 10.3.2 Frotis estndar 32 32 33 34 34 35 38 39 39 39 40 41 42 42 42 42 44 44 44 46 46 46 vi
10.3.3 Frotis lineales 10.3.4 Impresiones 11. Biopsia de piel (tcnica de sacabocados). 11.1 Preparacin del sitio 11.2 Biopsia excisional o incisional vs. Biopsia de perforacin 11.3 Material 11.4 Tcnica 11.5 Envo 12. Obtencin de muestras para biopsia 12.1 Tcnica 12.2 Tipos de biopsia 12.3 Biopsias escisionales e incisionales 12.4 Biopsia con aguja y con trocar 12.4.1 Material 12.5 Manipulacin de los tejidos y de las biopsias 12.5.1 Muestras lquidas 12.5.2 Muestras histolgicas 12.5.3 Fijacin de la muestra 13. Toma, conservacin y envo de muestras de orina 13.1 Miccin espontnea 13.1.1 Material 13.1.2 Tcnica 13.2 Cistocentsis 13.2.1 Material 13.2.2 Tcnica 13.3 Cateterizacin 13.3.1 Material 13.3.2 Tcnica 13.4 Conservacin 14. Obtencin de muestras de cavidades corporales 14.1 Toracocentsis 47 48 50 51 51 52 52 55 56 56 60 61 61 62 63 63 64 66 67 67 67 67 69 69 69 71 72 72 74 76 76 vii
14.1.1 Material 14.1.2 Tcnica 14.2 Abdominocentsis 14.2.1 Material 14.2.2 Tcnica 14.2.3 Conservacin 14.2.4 Envo 15. Bibliografas
76 76 79 79 79 81 82 84
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NDICE DE FIGURAS Y CUADROS
FIGURAS Figura 1. Agujas 4 Figura 2. Tubos 4 Figura 3. Sistema vacutainer 7 Figura 4. Vena yugular 8 Figura 5. Vena ceflica 8 Figura 6. Vena safena 8 Figura 7. Embrocado 9 Figura 8. Presin dedo pulgar 10 Figura 9. Puncin con sistema vacutainer 10 Figura 10. Conservacin y envo de la muestra 13 Figura 11. Material, recoleccin de heces 14 Figura 12. Lubricante 16 Figura 13. Toma de muestra 16 Figura 14. Portaobjetos 16 Figura 15.Cubreobjetos 16 Figura 16. Extremo de vagina artificial bovina, adherida a un tubo estril. 17 Figura 17. Estimulacin del pene 18 Figura 18. Paciente en posicin para eyacular 18 Figura 19. Material, raspado de piel 21 Figura 20. Aceite para inmersin 22 Figura 21. Raspado superficial en gato 22 Figura 22. Portaobjetos 22 Figura 23. Cubreobjetos 23 Figura 24. Observacin al microscopio 23 Figura 25. Presin de la piel 24 Figura 26. Raspado profundo. 24 Figura 27. Extendido de la muestra 25 ix
Figura 28. Cubreobjetos 25 Figura 29. Un cepillo dental estril puede ser empleado para recolectar pelos. 27
Figura 30. La superficie del agar es tocada delicadamente con las cerdas del cepillo. 27
Figura 31. Inoculando el medio cultural 27 Figura 32. Toma de muestra 29 Figura 33. Toma de muestra 29 Figura 34. muestra en portaobjetos 29 Figura 35. Lmpara de Wood 30 Figura 36. No se muestra fluorescencia en este paciente 31 Figura 37. Material para hisopados 34 Figura 38. Citologa vaginal 36 Figura 39. Hisopado conjuntival 36 Figura 40. Hisopado en mucosa oral 36 Figura 41. Hisopado de odo 36 Figura 42. Hisopado en ano 37 Figura 43. Muestra de mucosa conjuntival 37 Figura 44. Muestra de heces 37 Figura 45. Muestra de citologa vaginal 37 Figura 46. Embrocado 42 Figura 47. Aspirado 42 Figura 48. Liberacin de presin 43 Figura 49. Aspirado para presin 43 Figura 50. Portaobjetos 43 Figura 51. Frotis en cruz 43 Figura 52. Rasurado 44 Figura 53. Embrocado 44 Figura 54. Puncin de masa 45 Figura 55. Puncin en varias direcciones 45 Figura 56. Expulsin del contenido 45 x
Figura 57. Frotis en cruz 45 Figura 58. Frotis estndar 47 Figura 59. Frontis lineal 48 Figura 60. Se traza un cuadrado alrededor de la muestra para biopsia 53 Figura 61. El anestsico local se inyecta subcutneamente 53 Figura 62. El instrumento de perforacin se coloca verticalmente sobre la superficie y se hace rotacin en una sola direccin. 54 Figura 63. La muestra es quitada sujetando su base con una pinza y cortndola. 54 Figura 64. Si la muestra de la biopsia es delgada, sta se coloca sobre un cartn o abate. 55 Figura 65. Miccin espontnea 68 Figura 66. Material para cistocentsis 69 Figura 67. Se introduce la aguja 71 Figura 68. Obtencin de la muestra 71 Figura 69. Frasco estril de boca ancha 71 Figura 70. Se retrae la piel y se introduce la sonda previamente lubricada 73 Figura 71. Obtencin de muestra 74 Figura 72. Obtencin de muestra 74 Figura 73. Embrocado del paciente 77 Figura 74. Puncin en perro 77 Figura 75. Puncin en gato 77 Figura 76. Toracocentsis en perro 78 Figura 77. Toracocentsis en gato 78 Figura 78. Obtencin de muestra 78 Figura 79. Vlvula de tres vas 78 Figura 80. Embrocado 79 Figura 81. Puncin 80 Figura 82. Obtencin de muestra 80
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CUADROS Cuadro 1. Tubos para la obtencin de muestras 6 Cuadro 2. Sistemas orgnicos y sus correspondientes tcnicas de biopsias 57 Cuadro 3. Diferentes tipos de biopsias 60 Cuadro 4. Tipos de agujas de biopsias 62 Cuadro 5. Ventajas y desventajas de las tcnicas con aguja 62
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INTRODUCCIN
Diariamente durante la prctica mdica profesional tenemos la necesidad de establecer diagnsticos precisos que nos permitan seleccionar y administrar la terapia adecuada, de manera que est plenamente justificada en una situacin y una patologa particular. (Aguilar et al, 2005).
En la actualidad para reali zar stos diagnsticos contamos con la patologa clnica veterinaria, que constituye una disciplina que ha tenido una evolucin muy significativa en los ltimos trei nta aos. (Aguilar et al, 2005).
Con los resultados o diagnsticos que se obtienen a travs del anlisis de laboratorio, tambin se puede hacer un pronstico para tomar decisiones teraputicas. (Aguilar et al, 2005).
La patologa clnica como especialidad incluye la formacin en hematologa clnica, bioqumica clnica y citologa clnica, los avances que se han tenido en stas reas, ahora nos permiten efectuar diagnsticos que, antes, eran muy difciles. Es importante la participacin de esta disciplina en gastroenterologa, dermatologa, endocrinologa, urologa, neurologa, oftalmologa, neumologa, neonatologa, i nfectologa, geriatra, etc. (Aguilar et al, 2005).
La exactitud de las evaluaciones de laboratorio depende, en gran parte, de la calidad del procedimiento realizado durante la coleccin, la preparacin y el transporte de las muestras; por tanto, el xito del empleo del laboratorio esta relacionado con el cuidado que se procure desde la toma de las muestras, hasta la ejecucin de las tcnicas de anlisis y el informe de los resultados. (Aguilar et al, 2005).
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JUSTIFICACIN
Como se mencion anteriormente, los exmenes laboratoriales son una herramienta indispensable para complementar un diagnstico, por lo que es necesario conocer las tcnicas adecuadas para la obtencin, preparacin y manejo de dichas muestras, con el fin de evitar errores en los resultados que conlleven a un diagnstico equivocado.
Aunque existe una gran variedad de libros, revistas, pginas de internet, etctera, donde podemos encontrar tcnicas para la toma de muestras, no siempre podemos obtenerlas en un mismo texto, y nos vemos en la necesidad de acudir a varios, esa fue la razn por la cual se decidi realizar un manual donde explique de manera sencilla y didctica, las tcnicas ms comunes que se utilizan en la prctica diaria de clnica de perros y gatos.
ste trabajo rene los mtodos necesarios para la obtencin, conservacin y envo de la muestra en un solo manual, evitando con esto que el mdico tenga que acudir a diversos textos, que tenga como consecuencia una prdida de tiempo que podra aplicar al paciente.
Ya que no hay material fotogrfico en un solo texto, que contenga las tcnicas ms comunes que se practican en clnica de perros y gatos, en este manual se incluyen imgenes, que explique detalladamente las tcnicas y procedimientos adecuados para la toma, conservacin y envo de muestras en perros y gatos, tanto para mdicos que estn en la prctica profesional, as como para los que estn en formacin, ya que es la mejor forma de conocer la tcnica y poder realizarla adecuadamente.
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OBJETIVO GENERAL
Reunir en un solo trabajo los procedimientos ms comunes que se realizan en un consultorio veterinario para la obtencin y manejo de muestras.
OBJETIVOS ESPECFICOS
Que los profesionistas obtengan una gua para obtencin de muestras de manera adecuada.
Un material didctico que sirva de apoyo para las experiencias educativas de clnica y medicina y ciruga de perros y gatos.
ste manual est diseado con el fi n de apoyar a estudiantes que estn interesados en la clnica de pequeas especies y a mdicos que ya estn en la prctica mdica profesional, apoyando con imgenes las tcnicas ms comunes en la toma de muestras en perros y gatos.
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1. RECOLECCIN, MANEJO Y ENVO DE MUESTRAS PARA HEMATOLOGA EN PERROS Y GATOS. 1.1. MATERIAL Agujas con tubos al vaco normalmente agujas de calibre 20 G, color amarillo, 21 G color verde, 22 G color negro con longitudes de 1 a 1 pulgada, a seleccionar de acuerdo con el vaso sanguneo a puncionar. (Nez et al, 2007).
Figura 1. Agujas Tomado de: www.klinika-medical.del/.../venble/kanuelen.jpg
Figura 2. Tubos Tomado de: www.proveedormedico.com/TUBOSVACUTAINER.jpeg
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Tubos con EDTA, tapn lila, de capacidades 3.0 a 10.0 ml. Tubos con Citrato de Sodio, tapn azul claro, de capacidades de 3.0 a 10.0 ml. Tubos con hepari na, tapn verde. Tubos sin anticoagulante tienen tapn rojo, y vienen en capacidades de 3.0, 5.0, 7.0 y 10.0 ml. Tubos de tapn amarri llo. Si no se tienen Vacutainer disponibles, se pueden utilizar jeri ngas de 3 ml con agujas del No. 22 de 1 a 1 1\2 pulgadas. (Nez et al, 2007). Torundas de algodn Alcohol al 70% Isodi ne espuma Ligadura Mqui na para rasurar
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CUADRO 1. TUBOS PARA OBTENCIN DE MUESTRAS
Tomado de: Hematologa serie blanca, prcticas de laboratorio, Lpez, 2007.
TAPON ANTICOAGULANTE SECTOR MATERIAL
EDTA Hematologa Vidrio o plstico
Gel separador com ati vador de cogulo Serologa y bioqumica Vidrio o plstico
Citrato de Sodio Hematologa (Coagulacin) Vidrio
Siliconizado sin anti-coagulante Serologa y bioqumica Vidrio o plstico
Heparina Sdica Bioqumica e Inmunologa Vidrio
Fluorato de sdio + EDTA Bioqumica Vidrio o plstico 7
SISTEMA VACUTAINER
AGUJA. CAMISA. TAPN. ETIQUETA. TUBO.
Figura 3. Sistema Vacutainer Tomado de: Hematologa serie blanca, prcticas de laboratorio, Lpez, 2007.
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1.2. TCNICA VENA YUGULAR
Para obtener una muestra de sangre en perros y gatos se recomienda puncionar las venas ceflicas, safenas yugulares. (Figuras 4, 5, 6). Dependiendo de la talla de los animales, por ejemplo para perros pequeos y gatos, se recomienda tomar la muestra sangunea de vena yugular. (Nez, 2005).
Figura 4. Vena yugular Figura 5. Vena Ceflica
Figura 6. Vena safena
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Un primer ayudante debe sujetar al perro en posicin decbito esternal sobre el borde de la mesa de exploracin. (Tachika, 2008).
El ayudante sujetar el cuello y la cabeza del animal con una mano y con la otra mano sujetar ambos miembros torcicos, para evitar que el perro los mueva durante el procedimiento.
El ayudante debe procurar que el cuello del perro se encuentre extendido para reali zar la preparacin antisptica del mismo y prepararse para la venopuncin yugular.
Se limpia la zona que va a puncionar con antispticos, como isodine espuma y alcohol al 70%, este debe secarse con una torunda, para evitar que penetre por capilaridad y se produzca hemolisis; que afecte la calidad de la muestra. Esto afecta la calidad de la misma, tanto para hemograma como para bioqumica y citologa. (Aguilar et al, 2005).
Figura 7. Embrocado
Para que la sangre se acumule en el i nterior de la vena seleccionada, se puede hacer presin sobre la regin lateral a la lnea media del cuello, justo craneal a la entrada del trax, para hacer que resalte la vena yugular. 10
Figura 8. Presin dedo pulgar
Posteriormente se introduce en la vena, la aguja con el sistema Vacutai ner, y se coloca el tubo segn el examen que se va a realizar, se deja llenar partes del tubo, y posteriormente se retira la aguja de la vena, y se coloca un algodn con alcohol, haciendo presin en donde se hi zo la puncin. (Nez et al, 2005).
Figura 9. Puncin con sistema vacutainer.
Cuando se utili za una jeri nga sin anticoagulante para tomar la muestra, la transferencia al tubo se efecta sin aguja y el Vacutainer color lila sin tapn, dejando deslizar la sangre por la pared del tubo para evitar la hemlisis. 11
Inmediatamente despus se tapa y se mezcla suavemente con el EDTA k3 con un movimiento de sube y baja unas 10 veces, evitando agitar vigorosamente para mantener sin hemlisis la muestra.
Si hay presencia de cogulos en la muestra, se debe realizar nuevamente.
1.3. TOMA DE MUESTRA VENA CEFLICA
Un primer ayudante debe sujetar al perro en posicin decbito esternal sobre la mesa de exploracin. El ayudante sujetar el cuello y la cabeza del animal con una mano y con la otra mano se toma la articulacin del codo del miembro torcico que le quede ms cmodo, tratando de extender el antebrazo del perro. (Tachika, 2008).
Se realiza la preparacin asptica (rasurado, lavado y embrocado) de la regin dorsal del tercio medio distal del radio y ulna, que es la zona que se va a puncionar. El ayudante que est sujetando el brazo del perro aplica una ligadura sobre la articulacin del codo para interrumpir el retorno venoso y hacer resaltar la vena, durante un mximo de diez segundos antes de la venopuncin, el mantenerlo por ms tiempo, produce un falso aumento del hematocrito por mayor retencin de eritrocitos que en el plasma y podra ocultar la presencia de anemia en algunas ocasiones.
Para tomar la muestra se debe tomar con una mano el miembro torcico del perro, de manera de evitar movimiento i ndeseable.
La venopuncin se reali za introduciendo la aguja de la jeringa, con el bisel de la misma apuntando hacia arriba, en un ngulo de 45 grados aproximadamente, sobre la vena ceflica que se encuentra resaltada por la 12
presin. Una vez que se ha atravesado la piel, el tejido subcutneo y la pared del vaso sanguneo, se realizar una ligera aspiracin del mbolo, para verificar que efecti vamente se i ntrodujo la aguja al vaso sanguneo.
Se colecta la muestra y se deposita inmediatamente en los tubos especficos para su transporte (con o si n anticoagulante).
1.4. MANEJO DEL PACIENTE
El paciente debe encontrarse lo menos excitado posible para minimizar las variaciones fisiolgicas que stos estados provocan. (Aguilar et al, 2005).
La adecuada contencin facilita una venopuncin limpia y precisa y evita la contami nacin de la muestra.
Cuando se requiera muestra de sangre y orina, se deben colectar antes de cualquier tratamiento. Pero cuando el paciente se encuentra en tratamiento por va intravenosa (venas ceflicas o safena), la muestra sangunea debe tomarse del miembro opuesto o de las venas yugulares.
1.5. ENVO
Las muestras deben estar identificadas: Nombre del paciente, especie, raza, edad, hora y fecha de muestreo. (Aguilar et al, 2005).
Esto para cualquier determinacin, ya sea para hematologa, bioqumica, urianlisis y citologa de lquidos etc.
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Sealar con tinta roja si el animal es sospechoso de rabia, tuberculosis, brucelosis, leptospirosis, salmonelosis u otra enfermedad transmisible al hombre, para aumentar las precauciones en el manejo.
Describir la historia clnica con los hechos ms relevantes: Diarrea, vmito, anorexia, hiporexia, fiebre, etc. Con una duracin de x das.
Indicar si el animal est recibiendo tratamiento y el tiempo de recibirlo. Particularmente en el caso de fluidoterapia, corticoterapia de larga accin, transfusiones sanguneas, etc., en stos dos ltimos, aunque su administracin haya sido concluida, sus efectos pueden perdurar por 5 o ms das.
El envo de la muestra para sangre entera con o sin anticoagulante debe estar refrigerada entre +4 y +8C, y debe llegar al laboratorio antes de las 24 horas tras su extraccin. Se debe proteger los tubos frente a los golpes.
Se recomienda dejar la muestra a la temperatura de la pieza durante unos 15 minutos y no exponerla al sol antes de refrigerarla (4C), para evitar un choque trmico y hemlisis de la muestra.
Figura 10. Conservacin y envo de la muestra
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2. TOMA, CONSERVACIN Y ENVIO DE MUESTRA DE HECES
Hay dos formas en las que se puede recolectar excremento en perros y gatos: (Corona, 2009).
a) Con asas rectales, en el i nterior del recto del paciente. b) Del suelo tan pronto como defeque el animal.
2.1. MATERIAL
Asas rectales de plstico Recipiente recolector de plstico limpio o estril. Gel lubricante Portaobjetos Cubreobjetos Solucin sali na
Figura 11. Material para recoleccin de heces
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2.2. TCNICA CON ASA RECTAL
Un primer ayudante debe sujetar al perro que deber estar en cuadripedestacin sobre la mesa de exploracin. El ayudante sujetar el cuello y la cabeza del animal con una mano y con la otra mano sujetar la parte caudal del perro, abrazando el abdomen del mismo, para evitar que el perro se mueva durante el procedimiento. (Tachika, 2008)
Se lubrica el asa rectal y se introduce en el recto del paciente, dando giros para poder extraer la muestra de excremento, se necesitan aproximadamente de 1 a 2gr, dependiendo el examen que se va a reali zar. Como se muestra en las figuras 12 y 13. Se retira el asa rectal y la pequea cantidad de excremento que salga pegada a la punta, se extiende sobre un portaobjetos.
Posteriormente se coloca la muestra en un recipiente de plstico de tapa ancha, en caso de ser para un examen para microbiologa debe ser un recipiente estri l.
Se aaden unas cuantas gotas de solucin sali na isotnica a la muestra, con la fi nalidad de convertirla en una suspensin acuosa, y se coloca un cubreobjetos para poder visuali zar la muestra a travs del objetivo panormico y seco dbil (10X) de un microscopio ptico, en busca de huevos de parsitos. Figuras 14 y 15. (Quiroz, 2002).
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Figura 12. Lubricante Figura 13. Toma de muestra
Figura 14. Portaobjetos Figura 15. Cubreobjetos
2.3. Conservacin
Se recomienda no refrigerar la muestra, se debe llevar cuanto antes al laboratorio con el fin de obtener resultados confiables, mantenerse alejada de la luz, y en un sitio fresco. [consultado el 15 de abril del 2010]. (http://www.cenavece.salud.gob.mx/.../procedimientos_basicos_en_la_toma_de_m uestras_finales.pdf). 17
3. TOMA DE MUESTRA DE SEMEN
3.1. MATERIAL
Vagina artificial Tubo recolector estril
3.2. TCNICA
El semen se obtiene en una vagina artificial. (Feldman et al, 2000).
Figura 16 Extremo de vagi na artificial bovina, adherida a un tubo estril.
La tarea ms difcil es la estimulacin del macho, por lo general no se necesita una hembra.
Se da masaje al pene y bulbo erctil dentro del prepucio, cuando el bulbo erctil comienza a aumentar de tamao se desli za el prepucio en direccin posterior y se exterioriza el pene con el bulbo erctil.
Extrado el pene y el bulbo erctil el recolector sostiene con firmeza la base del pene en direccin proximal al bulbo, se utili zan los dedos pulgar e ndice 18
proporcionando masaje y presin; durante la ereccin o inmediatamente despus inician los impulsos plvicos con una duracin de 5-30 seg.
Figura 17. Estimulacin del pene
Figura 18. Paciente en posicin para eyacular
La fase inicial del eyaculado consta de lquido prosttico sin esperma y la segunda fraccin es rico en esperma.
El semen se obtiene de 2 a 5 mi nutos, es relati vamente resistente al choque trmico.
Se colectar semen mientras su consistencia sea blanquecina o cremosa y turbio. 19
3.3 CONSERVACIN
3.3.1. SEMEN REFRIGERADO
Mediante la agregacin de diluyentes es posible refrigerar el semen, disminuyendo el metabolismo de los espermatozoides mantenindolo a temperaturas de 4 C, logrando la viabilidad de estos aproximadamente de 24 a 48 hrs., como mnimo. Antes de reali zar la IA el eyaculado debe alcanzar la temperatura ambiente lentamente. Debido a que mediante los diluyentes los espermatozoides se mantienen en buenas condiciones es factible reali zar una IA vaginal. De esta manera se ampla la posibilidad de uso de un reproductor, permitiendo la comercializacin de semen y facilitando el intercambio gentico ent re deferentes establecimientos. (http://www.foyel.com/cartillas/20/citologiavaginalcanina.html,2008). [consultado el 20 de marzo del 2010].
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4. TOMA, CONSERVACIN Y ENVO DE MUESTRAS EN PIEL
4.1 RASPADOS
Son adecuados para las lesiones externas, en biopsias, cirugas y en necropsias. Cualquier perro o gato con prurito o escamoso puede estar infestado con Cheyletiella spp., Otodectes cynotis, Scabies scabiei, o Notoedres cati y debe hacrsele raspado. [Consultado el 7 de abril del 2010]. (http//:www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).
Si se sospecha de sarna, las reas preferidas para el raspado son los hombros, corvejones y vientre. El borde de las orejas debe rasparse minuciosamente si se observa algn prurito o descamacin en esta rea. Alguna veces, la descamacin es ligera y solo se hace evidente durante un examen detallado.
Debe hacrsele raspado a cualquier perro o gato con una posible demodicosis. De esta manera, todo paciente alopcico y todo paciente con ppulas, pstulas, costras y particularmente con pododermatitis interdigital, debe ser raspado en busca de demodicosis. Para un raspado profundo eficaz de la piel de las patas puede necesitarse sedacin o anestesia general.
4.1.1. RASPADO SUPERFICIAL DE PIEL
4.1.1.1. MATERIAL
Portaobjetos Cubreobjetos Aceite de inmersin Hoja de bistur 21
Figura 19. Material, para raspado de piel
4.1.1.2. TCNICA
Un primer ayudante debe sujetar al perro que deber estar en cuadripedestacin sobre la mesa de exploracin. El ayudante sujetar el cuello y la cabeza del animal con una mano y con la otra mano sujetar la parte caudal del perro, abrazando el abdomen del mismo, para evitar que el perro se mueva durante el procedimiento. (Tachika, 2008).
Se deben identificar las zonas de la piel que presentan lesiones primarias.
Los sitios son rasurados suavemente con navajas #40. Los caros son difciles de encontrar (especialmente los caros de la sarna demodcica), de tal manera que entre ms grande sea el rea raspada, se tendr mayor oportunidad de obtener un raspado de piel positi vo.
Se aplican varias gotas de aceite mineral directamente sobre la piel rasurada o sobre la hoja de bistur y se distribuye uniformemente en el rea. Como se muestra a continuacin. [Consultado el 8 de abril del 2010]. (http//:www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2). 22
Figura 20. Aceite para i nmersin
El aceite es raspado con una hoja de bistur # 11 en direccin del crecimiento del pelo, la muestra recolectada se coloca sobre una lami nilla y se extiende con la hoja con un movimiento de untar mantequi lla al pan. Se raspa de 10 a 15 veces especialmente cuando se sospecha sarna demodcica, como se muestra en las figuras 21 y 22.
Figura 21. Raspado superficial en gato Figura 22. Portaobjetos
Se recomienda realizar de 3 a 5 lami nillas por cada sitio de muestreo.
Se utiliza un cubreobjetos para permitir una evaluacin rpida y completa de los restos recolectados y se examinan la(s) lmina(s) sistemticamente con bajo aumento (x10 x40) del ngulo superior izquierdo al ngulo i nferior derecho, como se muestra en las figuras 23 y 24.
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Figura 23. Cubreobjetos Figura 24. Observacin al microscopio
4.1.2. RASPADOS PROFUNDOS DE PIEL
4.1.2.1. MATERIAL
Portaobjetos Cubreobjetos Aceite de inmersin Hoja de bistur Mqui na para rasurar
4.1.2.2. TCNICA
Puesto que los caros de Demdex canis y felis viven en el folculo piloso, es til presionar la piel tan fuerte como lo tolere el paciente antes del raspado con el fin de sacar a los caros de la profundidad de los folculos. Como se muestra en la figura 25. [Consultado el 8 de abril del 2010]. (http//:www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).
24
Figura 25. Presin de la piel
Se utili za una hoja recubierta con aceite mineral en direccin del crecimiento del pelo hasta que se observe sangrado capilar.
Figura 26. Raspado profundo
Para evaluar un paciente con demodicosis, el raspado debe ser profundo, hasta que se observe sangrado capilar. La piel debe ser presionada al mximo para maximi zar la recoleccin de caros.
Los miembros y la cara son raspados fuertemente, de tal manera que pueda ser til el raspar las reas eritematosas adyacentes a las ppulas y costras interdigitales para maximizar el material recolectado y minimi zar el sangrado asociado con el raspado.
25
La muestra recolectada se coloca sobre una lami nilla y se extiende con la hoja con un movimiento de untar mantequilla al pan. Y se le coloca un cubreobjetos para observar al microscopio en el objeti vo 10x y 40x.
Figura 27. Extendido de la muestra
Figura 28. Cubreobjetos
Los raspados negativos o el depilado de pelos de las reas interdigitales no descartan la pododemodicosis; puede ser necesaria una biopsia para confirmar o descarta el diagnstico.
El hallazgo de ms de un caro debe considerarse como diagnstico. 26
5. TOMA DE MUESTRA DE CULTIVO PARA DERMATOFITOS
Est indicado un culti vo de hongos en cualquier perro o gato con posible infeccin por hongos y por ello en cualquier paciente con alopecia, ppulas, pstulas y/o costras. [Consultado el 8 de abril del 2010]. (http//:www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).
5.1. MATERIAL
Portaobjetos Hoja de bistur Cinta adhesiva Papel higinico
5.2. TCNICA
Deben tomarse pelos y escamas del borde de la lesin (preferiblemente aquellos que fluorescan bajo la lmpara de Wood).
Si las lesiones no estn bien circunscritas o si se sospecha de un portador asintomtico, se recomienda el mtodo McKenzie del cepillo de dientes.
En sta tcnica, el pelo es cepillado con un cepillo de dientes estril (cualquier cepillo de dientes nuevo en una caja sellada est lo suficientemente estril micolgicamente). Las escamas y los pelos desprendidos recolectados en el cepillo de dientes son colocados suavemente en agar. Figura 29.
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Figura 29. Un cepillo dental estril puede ser empleado para recolectar pelos.
Figuras 30 y 31. La superficie del agar es tocada delicadamente con las cerdas del cepillo, i noculando el medio cultural. Tomado de: (http://www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).
El medio agar Sabouraud es el medio para culti vo de hongos ms comn. En la prctica se usa frecuentemente el medio de prueba para dermatofito (DTM). El DTM es esencialmente un agar Sabouraud con indicador de color e ingredientes adicionados que inhiben el sobrecrecimiento de saprfitos y bacterias.
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5.3 CONSERVACIN
Despus de ser inoculado, la caja de cultivo debe ser i ncubada entre 25C y 30C con 30% de humedad, o en un rincn oscuro y calientito, sin cerrar la tapa de rosca completamente hasta abajo.
Los cultivos deben ser i ncubados durante 2 a 3 semanas y ser evaluados diariamente. [Consultado el 8 de abril del 2010]. (http://www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).
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5. 4. TRICOGRAMA
Los tricogramas pueden ser tiles en cualquier animal alopcico as como tambin en animales sospechosos de dermatofitosis ppulas, pstulas o costras asociadas. (Ackerman, 2008).
5.4.1. MATERIAL
Pinzas si n diente Portaobjetos cubreobjetos Aceite mineral
5.4.2. TCNICA
Se utili zan unas pinzas para arrancar fuertemente los pelos de la piel afectada. Ver figuras 32 y 33.
Los pelos son colocados sobre una lmi na y se evala con bajo aumento. Se coloca aceite mineral y cubre objeto para prevenir que la muestra de pelo se vuele sobre la mesa en vez de permanecer bajo el microscopio. Figura 34.
Figura 32 y 33 Toma de muestra Figura 34 Muestra en portaobjetos 30
6. EXAMEN CON LMPARA DE WOOD
Cualquier perro o gato con posible infeccin con Microsporum canis debe ser exami nado con la lmpara de Wood. Cualquier paciente con alopecia, ppulas, pstulas y/o costras pueden beneficiarse de este procedimiento. (Ackerman, 2008).
6.1. MATERIAL
Lmpara de wood
6.2. TCNICA
La lmpara de Wood debe entibiarse por 5 minutos antes de utili zarse pues la estabilidad de la longitud de onda de la luz y la intensi dad dependen de la temperatura.
El animal se examina bajo la lmpara en cuarto oscuro.
Figura 35. Lmpara de wood 31
Los pelos invadidos por M. canis pueden mostrar una fluorescencia amarilla verdosa. Esta fluorescencia se presenta lo largo del tallo del pelo, a diferencia de la fluorescencia discreta de escamas i ndividuales ocasionales que puede verse en animales y humanos normales.
Algunos medicamentos, jabones y bacterias tales como la Pseudomonas aeruginosa pueden tambin producir fluorescencia pero usualmente no est asociada con los tallos del pelo.
La fluorescencia positiva es diagnstico de dermatofitosis y el M. canis es por mucho el dermatofito fluorescente ms comn en medicina veterinaria. Figura 36.
Otros dermatofitos pueden mostrar fluorescencia, pero estos no son relevantes en dermatologa veterinaria.
La ausencia de fluorescencia no debe descartar la dermatofitosis. Los siguientes pasos son el cultivo de hongos y/o la biopsia.
Figura 36. Fluorescencia de los metabolitos dermatofticos sobre la cola de un paciente felino, uti lizando la lmpara de Wood. Tomado de: Atlas de dermatologa en pequeos animales, 1 ed. Buenos aires: Inter-Mdica, Ackerman, Lowell 2008. 32
7. CULTIVO BACTERIANO
Los culti vos bacterianos se emplean con poca frecuencia en dermatologa veterinaria. La mayora de las afecciones bacterianas de la piel son causadas por Staphylococcus intermedius. Si los cocos se identifican citolgicamente, la terapia antibacteriana emprica es suficiente en la mayora de los pacientes. [Consultado el 20 de abri l del 2010]. (http://www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).
La terapia emprica en dosis apropiadas por un tiempo apropiado no ha logrado resolver la pioderma (las lesiones estn an presentes y la citologa an revela cocos). Numerosas bacterias en forma de bastn son identificadas en las muestras citolgicas de los canales auditivos. Estos organismos juegan rara vez un papel importante en las infecciones cutneas de los pacientes que clnicamente no responden a la terapia emprica.
7.1. Material
Gasas Solucin sali na Recipiente estril
33
7.2. TCNICA
Los frotis son tomados de los canales auditi vos como se describe en las muestras para citologa. [consultado el 25 de abril del 2010]. (http://www.ivis.org/advances/mueller/part1chap3-es/chapter.asp?LA=2).
Los aspirados de pstulas intactas son tiles en pacientes con pioderma superficial.
Los frotis de la superficie de la piel para el cultivo de organismos de pacientes con pioderma profundo no son convenientes. Las muestras son tomadas de manera similar a la que se utili za en biopsias bajo condiciones aspticas (lavado de la superficie de la piel y la utili zacin de instrumentos y guantes estriles). La mitad superior de la muestra de tejido con la epidermis y el pelo se corta y la mitad inferior se introduce en un recipiente estril colocado sobre una compresa de gasa estril empapada en solucin salina estril para cultivo de macerado. Esto previene el sobrecrecimiento en el culti vo de bacterias superficiales no relevantes a la infeccin profunda.
Cada muestra para cultivo y sensibilidad debe estar acompaada por un examen citolgico y los resultados del cultivo deben ser i nterpretados en relacin a los hallazgos citolgicos.
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8. TCNICAS DE COLECCIN CON HISOPOS DE ALGODN
Se usan en sitios donde no hay fcil acceso para las otras tcnicas de coleccin, como en el canal del odo, en la vagina, prepucio, ano, mucosa conjunti val, mucosa oral o en lesiones fistulosas. (Feldman y Nelson, 2000).
8.1. MATERIAL
Hisopos estriles Portaobjetos Solucin sali na
Figura 37. Material para hisopados
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8.2. TCNICA Se introduce el hisopo dentro del canal lentamente, en los pacientes con piel seca, (Figuras 38, 39, 40, 41 y 42), el hisopo de algodn puede humedecerse con solucin salina y frotarlo sobre la superficie de la piel afectada antes de ser rotada sobre la lmi na. (Aguilar et al, 2005).
Se hace girar rotndolo con los dedos ndice y pulgar, y se retira con cuidado para no contaminarlo con otros tejidos.
Estar bien tomada si observamos un ligero color caf en el hisopo. Una vez tomada la muestra se introduce el hisopo hasta el fondo en un tubo con medio de transporte Cary-Blair que debe estar bien tapado (tapn de rosca).
Despus, se rueda el hisopo sobre una lami nilla, ejerciendo una ligera presin con el dedo sobre la varilla para hacer impresiones lineales. Y se deja secar al aire. Figuras 43, 44 y 45.
Se recomienda realizar dos o tres impresiones en cada laminilla.
En pacientes con piel hmeda o grasosa, se puede frotar la lmina o tomar directamente la impresin sobre la piel afectada.
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Figura 38. Citologa vaginal Figura 39. Hisopado conjunti val
Figura 40. Hisopado en mucosa oral Figura 41. Hisopado de odo
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Figura 42. Hisopado en ano
Figura 43. Muestra de mucosa conjuntival Figura 44. Muestra de heces
Figura 45. Muestra de citologa vaginal 38
8.3 ENVO
Para estudios bacteriolgicos se enva inmediatamente despus de haberse tomado. No hay que refrigerar la muestra. [consultado el 2 de mayo del 2010].(http://www.cenavece.salud.gob.mx/.../procedimientos_basicos_en_la _toma_de_muestras_fi nales.pdf).
En caso de ser para estudios virales mandarlo en refrigeracin, aunque no se recomienda usar hisopo para el caso de virus, en sta tcnica s se recomienda refrigerar la muestra.
39
9. TCNICA PARA MUESTRAS EN CINTA ADHESIVA
9.1. MATERIAL
Cinta adhesiva Portaobjetos Azul de metileno Cubreobjetos Aceite de inmersin
9.2. TCNICA
La tcnica de impresin directa uti liza ci nta adhesi va transparente para recolectar desechos de la superficie de la piel. Aunque rpido, este mtodo necesita prctica para establecer que es "normal." (Ackerman, 2008).
La cinta se presiona con el lado adhesi vo hacia abajo sobre la piel.
La cinta se presiona por el lado pegante sobre la piel afectada.
Luego, se presiona (de nuevo con el lado adhesi vo hacia abajo) sobre una gota de azul de metileno o tincin azul de DiffQuick sobre una laminilla.
Se presiona luego con el lado pegante hacia abajo sobre una gota de azul de metileno sobre una lmina.
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La cinta sirve como cubreobjeto: La lmina puede ser evaluada an bajo aceite de inmersin (con una pequea gota de aceite colocada directamente encima de la ci nta). Esta tcnica es especialmente til para la evaluacin de Malassezia. Otros elementos de inters que pueden ser identificados incluyen clulas inflamatorias tales como neutrfilos (los cuales pueden haber pasado a travs de la epidermis en respuesta a una infeccin superficial), clulas epiteliales nucleadas (lo cual no es normal y reflejan una anomala de querati nizacin), cocos (bacterias esfricas), bacilos (bastones rectos), macrfagos, caros de Demdex de cuerpo pequeo, Cheyletiella y ocasionalmente caros de Sarcoptes.
9.3. Tincin
Se puede utili zar una coloracin de Wright modificada (por ejemplo, Diff Quick) para colorear las lami nillas secadas al aire. Es mucho ms rpida y ms fcil que la coloracin de Gram y suficiente para evaluar casi todas las muestras citolgicas de piel. Sin embargo, la coloracin de Gram es igualmente adecuada. (Ackerman, 2008).
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10. OBTENCIN DE MUESTRAS PARA CITOLOGIA
La tcnica para la coleccin de muestras en citologa depende de la localizacin y de las caractersticas del tejido. (De buen et al, 2001).
Para las diferentes muestras el envo es el mismo:
Los portaobjetos que han de enviarse a un laboratorio deben secarse al aire y colocarse en contenedores adecuados para el transporte de portaobjetos, los cuales por lo general son provistos por el laboratorio.
Los portaobjetos deben transportarse a temperatura ambiente para evitar que el agua se condense en la superficie y produzca la lisis de las clulas.
Lo ideal sera que las muestras citolgicas se enven al laboratorio en forma separada de los tejidos fijados en formalina para evitar el contacto con los vapores de formali na, los cuales pueden i nhibir la ptima ti ncin de los frotis secados al aire.
Las muestras citolgicas deben entregarse al laboratorio junto con la siguiente informacin:
a) Descripcin detallada b) Breve historia clnica c) Hallazgos relevantes del examen fsico, d) Terapia previa, e) Resumen de los resultados de los exmenes f) Diagnsticos pertinentes, g) Diagnstico tentati vo, y sitio donde se tom la muestra. h) Esta informacin es til para que patlogo realice la interpretacin.
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10.1. ASPIRACIN CON AGUJA FINA
10.1.1. ASPIRACIN DE NDULOS
Esta tcnica ayuda a obtener muestras de masas, lquidos y lesiones cutneas.
Mientras ms blando sea el tejido a muestrear, menor ser el calibre de la aguja y menor, tambin, la presin negati va que se ejerza al momento de la aspiracin. (El mbolo se retrae hasta la marca de 3 a 7ml). (Aguilar et al, 2005).
10.1.1.1 MATERIAL Jeringas de 10, 12 ml y aguja calibre 21 a 25. Mqui na para rasurar Alcohol al 70% Torundas de algodn o gasas estriles.
10.1.1.2 TCNICA
El sitio de la aspiracin, se rasura y se limpia bien con alcohol, se agarra firmemente el ndulo y entonces se inserta la aguja, aspirando varias veces, en varias direcciones en el centro y en la periferia de la masa (hasta la marca de 10 ml si es posible), se libera la presin y se saca la jeringa con la aguja an adherida. (Aguilar et al, 2005).
Figura 46. Embrocado Figura 47. Aspirado 43
Es importante liberar la presin antes de retirar la aguja, si no el aspirado puede ser succionando dentro del tubo de la jeri nga, de la cual este puede no ser recuperado. (Davidson et al, 2000).
Se desconecta la aguja, el mbolo se jala hacia atrs y la aguja se vuelve a reconectar, como se muestra en las figuras 48 y 49.
Figura 48. Liberacin de presin Figura 49 Aspirado para presin
Las clulas son vertidas sobre un portaobjetos. Figura 50.
Y se reali za un frotis lineal o en cruz, posteriormente se tie, se deja secar al aire y se observa al microscopio. En un objetivo de 10x, 40x, 100x. Ver figura 51.
Figura 50. Portaobjetos Figura 51. Frotis en cruz
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10.2 AGUJA FINA SIMPLE SIN ASPIRACIN
10.2.1 MATERIAL
Jeringas de 3ml, 5ml y aguja calibre 21 a 25. Mqui na para rasurar Alcohol al 70% Torundas de algodn
10.2.2. TCNICA
ste mtodo se ha convertido en una prctica muy comn hoy en da. (Aguilar et al, 2005).
Se inicia rasurando la zona donde se va a puncionar, se desinfecta el rea con isodine espuma y se retira con alcohol al 70%, con torundas de algodn, como se muestra en las figuras, 52 y 53.
Figura 52. Rasurado Figura 53. Embrocado
45
Se realiza en forma similar al aspirado, con la di ferencia de que la aguja no est conectada a una jeri nga no se ejerce una presin negativa.
Solamente se introduce la aguja al tejido de inters y se imprime un movimiento de vaivn para obtener una muestra limpi a y sin contaminacin sangunea, como se muestra en la figura 54.
Se punciona en varias direcciones y posteriormente se retira y se coloca el contenido en un portaobjetos conectando la jeri nga a la aguja para expulsar el contenido obtenido, como se muestra en la figura 55 y 56.
Se realiza un frotis li neal en cruz, se tie y se observa al microscopio en 10x, 40x.100x (con aceite de i nmersin), como se muestra en la figura 57.
Figura 54. Puncin de masa Figura 55. Puncin en varias direcciones
Figura 56. Expulsin del contenido Figura 57. Frotis en cruz 46
10.3. PREPARACIN DE LOS FROTIS
10.3.1 FROTIS EN CRUZ
Las dos lami nillas se mantienen en forma de cruz y si n ejercer presin.
La laminilla superior se desliza hacia donde marca la flecha, para efectuar el extendido de las clulas, y el frotis se obtiene en la lami nilla inferior, como se muestra en la figura 57.
Se debe secar al aire para la fijacin de los frotis.
Se recomienda realizar siempre un mnimo de tres a cinco frotis de cada muestra obtenida. Los frotis no se refrigeran.
Si el material es de viscosidad moderada, como la sangre, se puede hacer un frotis estndar, cuya fuerza de separacin celular es ligeramente i nferior a la de las lami nillas en cruz. (Aguilar et al, 2005).
10.3.2 FROTIS ESTNDAR
Se coloca una pequea gota de material sobre una lami nilla portaobjetos.
Con otra laminilla se forma un ngulo de aproximadamente 45.
La laminilla superior se desliza hacia atrs, hasta tocar la muestra, y despus hacia delante, para efectuar el extendido de las clulas.
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El resultado es un frotis en forma de pluma que muestra tres diferentes densidades, como el frotis sanguneo. Vase figura 58. (Davidson et al, 2000).
Figura 58. Frotis estndar Tomado de: Manual de patologa clnica en pequeos ani males, Davidson et al, 2000.
10.3.3 FROTIS LINEALES
Se mantiene la lamini lla superior en un ngulo cercano a los 80.
El extendido sobre la laminilla i nferior se suspende a la mitad del camino.
Con este procedimiento se obtiene un frotis que, en su eje hori zontal, contiene pocas clulas, mientras que en su eje vertical (el frotis li neal, propiamente dicho) hay ms clulas. En la mayora de los casos, se recomienda centrifugar previamente la muestra, con lo cual se obtienen mejores resultados.
Se recomienda realizar rutinas de tres a cinco frotis por cada muestra obtenida. 48
Este mtodo se recomienda si la muestra es un lquido no viscoso y casi transparente, ya que no hay fuerza de separacin de las clulas o es mnima. Ver figura 59.
Figura 59. Frotis lineal Tomado de: Manual de patologa clnica en pequeos ani males, Davidson et al, 2000.
5.3.4. IMPRESIONES
Son las huellas que quedan en una lami nilla cuando se pone en contacto con un tejido. Resultan adecuadas para las lesiones externas o durante cirugas, biopsias o necropsias. (Agui lar et al, 2005).
Cuando la lesin cutnea esta ulcerada, hay que tomar tres i mpresiones antes de limpiar la lcera y tres despus de limpiarla.
En el caso de las biopsias o de material de necropsias, se cortan cubos de tejido de 0.5 a 1.0 cm de dimetro. Cuando hay lesiones con exceso de lquido o de sangre que impiden la adhesin adecuada de las clulas a la laminilla, se sugiere hacer impresiones suaves sobre papel absorbente (toallas de papel para secar las manos). 49
Las impresiones se efectan hasta que el papel absorba poco lquido, esto indica que la muestra esta lista para realizar las impresiones sobre las laminillas.
Una vez que el tejido esta seco, se recomienda realizar varias impresiones sobre la misma laminilla para tener mayor superficie de evaluacin.
Se sugiere hacer de tres a ci nco laminillas de diferentes cortes, para tener una mejor idea del tipo de poblacin celular que se encuentra en el tejido, y para efectuar coloraciones especiales en los casos que lo requieran.
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11. BIOPSIA DE PIEL (tcnica de sacabocados).
La biopsia para examen histopatolgico (evaluacin microscpica de los tejidos) es de especial importancia en dermatologa, puesto que el tejido de i nters (la piel) es de acceso inmediato. Si bien es una herramienta valiosa, no se debe aguardar que la biopsia defina todo el cuadro. Revela cambios en una regin diminuta de la superficie cutnea en un momento temporal particular.
Las biopsias pueden ser obtenidas mediante escisin de toda la patologa, incisin lesional y remocin de una parte representativa o, con mayor frecuencia, con sacabocados. Cuando se reali za el procedimiento, es importante brindar preferencias a lesiones primarias o secundarias tempranas.
Los cambios ms profundos, como ulceracin, fibrosis y alopecia completa, tienden a resultar menos diagnsticos. Por este moti vo, es mejor remitir varias secciones para evaluacin, a partir de una variedad de diferentes lesiones y estadios de desarrollo. Junto a la muestra, el patlogo debe recibir el historial clnico con los posibles diagnsticos diferenciales.
No deben hacerse biopsias de lceras ni erosiones. No hay que esperar que un patlogo sea capaz de describir en forma ms especfica "una lcera" si hace biopsia de una lcera o "erosin costrosa" si se selecciona un rea excoriada. (Ackerman, 2008).
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11.1. Preparacin del sitio
Con excepcin de la biopsia incisional de los ndulos, no se emplea la preparacin quirrgica del sitio. An la aplicacin tpica de alcohol y el secado al aire puede alterar la epidermis.
Si hay presencia de costras, estas deben dejarse sobre la piel. Si stas son desalojadas accidentalmente stas deben ser colocadas en formali na y se debe aadir una nota "por favor corte en la costra" en el formulario de solicitud.
Las costras pueden contener microorganismos o clulas acantolticas que pueden ayudar a obtener el diagnstico. La i nfeccin como resultado de una ausencia de preparacin quirrgica no parece ser un problema. (Ackerman, 2008).
11.2. Biopsia excisional o incisional vs. Biopsia de perforacin
Hay dos tcnicas de biopsia utili zadas comnmente en medicina veteri naria
1. Biopsia incisional 2. Biopsia de perforacin
La segunda se emplea corrientemente como una tcnica de extirpacin cuando se quitan ndulos solitarios. Tambin est i ndicada para vesculas (las cuales son tpicamente ms frgiles para sobrevivir a la biopsia de perforacin sin que se rompan), en casos sospechosos de paniculitis (en la cual la suficiente profundidad de la biopsia no puede lograrse con la puncin) y cuando se biopsia el extremo de una lesin en forma de huso (lo cual permite la orientacin correcta de la lesin en 52
el laboratorio donde las lesiones en forma de huso se cortan siempre longitudi nalmente).
La biopsia de perforacin es rpida, relati vamente atraumtica y generalmente se emplea cuando se sospecha de dermatosis infecciosa, inflamatoria y endocrina. Los instrumentos desechables para la biopsia de perforacin estn disponibles en varios tamaos. Estos pueden ser esteri lizados al fro y utili zados nuevamente. Con excepcin de la biopsia de cara y patas, se debe utili zar un i nstrumento de 8 mm. Se emplean los instrumentos de perforacin ms pequeos con un dimetro de 4 o 6 mm para biopsias de cara y pie. Los instrumentos de perforacin muy pequeos (por ejemplo 2 a 3 mm) no son tiles en la prctica de pequeos animales con excepcin de biopsias de prpado. (Ackerman, 2008).
11.3. MATERIAL
Mqui na para rasurar Marcador de agua Jeringas de 3ml Gasas Sacabocados Formalina al 10%
11.4. TCNICA
Se rasura la capa de pelo retirando suavemente y el sitio donde se har la biopsia se delimita con un marcador a prueba de agua. Si hay presencia de costras, puede ser menos traumtico usar tijeras. (Ackerman, 2008). 53
Figura 60. Se traza un cuadrado alrededor de la muestra para biopsia.
Figura 61. El anestsico local se inyecta subcutneamente.
Se debe aplicar anestesia local, inyectar como mnimo 0.5 cc o ms de lidocana en el espacio subcutneo.
Utili zar sacabocados del tamao adecuado (4 a 8 mm) para muestrear la lesin, manteniendo el rea de i nters en el centro del instrumento, como se muestra en la figura 53.
Aplicar presin mientras se gira el instrumento, a los efectos de avanzar con mnimo retorcimiento del tejido. Para evitar el dao del tejido subyacente, es mejor levantar un pliegue de piel para alejarse de aquel.
Alcanzar el espacio subcutneo con pinza, socavar el subcutis por debajo de la muestra y recortar con tijera de ciruga. No asir el tejido de i nters.
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Sacar la muestra y colocar en un recipiente con formol. El volumen requerido de formalina es de por lo menos 10 veces el volumen de la muestra.
El defecto que queda se puede curar con suturas o grapas.
Los ndulos deben ser seccionados en pedazos de 1 cm de grosor para permitir la adecuada penetracin de la formali na al centro de la lesin.
Figura 62 El instrumento de perforacin se coloca vertical mente sobre la superficie y se hace rotacin en una sola direccin. Tomado de: Atlas de dermatologa en pequeos animales, Ackerman 2008.
Figura 63 La muestra es quitada sujetando su base con una pinza y cortndola.
55
Figura 64 Si la muestra de la biopsia es delgada, sta se coloca sobre un cartn o abate
11.5. ENVO
Para aumentar las posibilidades de recibir un reporte que sea diagnstico, es importante el completar cuidadosamente los formularios apropiados para solicitar el examen de la biopsia de la piel, incluyendo la historia clnica y el examen fsico.
Es importante una lista de diagnsticos diferenciales en cualquier caso clnico pero es esencial en pacientes dermatolgicos. La seborrea o tractos de drenaje pueden ser el resultado de un amplio rango de procesos de enfermedad. Esta lista es importante para que el clnico este seguro que l o ella ha considerado todas las opciones y ha obtenido tanta informacin como sea posible tanto de la mascota como del propietario ya antes de tomar la biopsia. Es igualmente importante para el patlogo y puede ayudar en la eleccin de la tincin especial para descartar o confirmar afecciones inusuales. (Ackerman, 2008).
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12. OBTENCIN DE MUESTRAS PARA BIOPSIA
Obtenidas a partir de pacientes vivos para establecer la naturaleza de un tejido anormal que puede observarse macroscpicamente, detectarse clnicamente o mediante el uso de tcnicas de imagen (radiografa, tomografa o ecografa). El examen histolgico puede ayudar a establecer la naturaleza de una enfermedad, es decir, puede ayudar a diferenciar una neoplasia de una inflamacin o de un cambio degenerati vo. (Davidson et al, 2000).
La recogida de muestras y el examen citolgico implican la obtencin y la preparacin de clulas indi vidualizadas o de pequeos grupos de clulas. Estas clulas se obtienen in vivo a travs de disti ntas vas.
Estas incluyen: desprendimiento o exfoliacin natural (por ejemplo, descamacin a partir de la piel o de las mucosas oral, vaginal, anal etc.); elimi nacin natural a travs de la orina, esputos u otras secreciones (por ejemplo, oculares, nasales, auriculares); o aspiracin mediante agujas de varios calibres, cnulas o catteres (por ejemplo, a partir de cavidades corporales o de rganos maci zos).
12.1. TCNICA
Las muestras celulares se depositan sobre portaobjetos i nmediatamente despus de recogerlas. (Davidson et al, 2000).
Se extienden y se secan rpidamente al aire o se fijan en alcohol al 95%, antes de teirlas y examinarlas con el microscopio.
Cuando las muestras son predomi nantemente liquidas suelen centrifugarse suavemente para concentrar las clulas o se procesan mediante el uso de una citocentrfuga.
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CUADRO 2. Sistemas orgnicos y sus correspondientes tcnicas de biopsia
rgano o locali zacin Tipo de biopsia Comentarios
Piel
Escisional Incisional -Consideraciones de lugar y tamao. -Lesiones solitarias, mltiples o generalizadas -Agujas normalmente no tiles. -Perforador de keyes.
Incisional (aguja) Escisional (impronta) -til en ulceraciones o neoplasias. -Las agujas son tiles
Aparato reproductor: Macho: Testculos
Prstata
Hembra: Vagina
Mamas
Escisional
Incisional (aguja fina)
Exfoliacin
Incisional (aguja)
Exfoliacin Escisional/incisional
Escisional; incisional
Escisional Incisional
Exfoliacin (secreciones)
-Se acostumbra a reali zar una orquidectoma bilateral. -Dificultad para i nterpretar la aspiracin con aguja fina.
Masaje prosttico a travs del recto Las tcnicas con aguja son difciles; evitar va recto.
-Consideraciones de lugar y tamao.
-Incluir ndulos linfticos cuando sea necesario. -Problemas de cicatrizacin. -Agujas tiles si el paciente es de avanzada edad o est debilitado. -til en mastitis o neoplasias. Aparato urinario: Rin
Vejiga
Incisional
Escisional
Exfoliacin
-Normalmente con agujas Vim- silverman; posible hemorragia. -Si todo el rgano es claramente anormal. -Centrifugar o sedimentar la muestra completa; rpido 58
Hgado
Incisional
Incisional deterioro. -Consideraciones de tamao y lugar -La reseccin en forma de cua requiere laparotoma. -til aguja de gran calibre (Menghi ni) -Dificultad para i nterpretar la aspiracin con aguja fina.
Tracto digestivo:
Cavidad oral
Tracto superior: Esfago
Estmago
Tracto intermedio: Intesti no delgado
Tracto inferior: Colon Recto
Ano
Exfoliacin (improntas)
Escisional; incisional
Exfoliacin Escisional
Escisional; incisional
Escisional Pocas veces i ncisional
Escisional Pocas veces i ncisional
Escisional; incisional Exfoliacin (improntas)
til si hay abrasin de la superficie. Consideraciones de lugar y tamao.
Endoscopia y fibra ptica con recogida de muestras con cepillo de citologa o con pinzas de biopsia.
Consideraciones de tamao; endoscopia con pinzas de biopsia si es pequea. Normalmente requiere laparotoma.
No es posible usar la endoscopia; requiere laparotoma o capsulas de biopsia. Puede alcanzar el leon distal.
Consideraciones de tamao; endoscopia con pinzas de biopsia si es pequea.
Consideraciones de lugar y tamao. til si es accesible o mediante legrado de la lesin.
Tracto respiratorio: Cavidad nasal
Exfoliacin
Secreciones nasales o 59
Vas areas
Pulmones
Escisional; incisional
Exfoliacin
Escisional; incisional
Escisional Incisional
irrigacin con solucin isotnica. Consideraciones de tamao y grado de invasin.
Esputos o irrigacin mediante broncoscopio. Muestreo con pi nzas de biopsia mediante broncoscopio.
Lobectoma va toracotoma Agujas (de gran calibre o finas) mediante la tcnica abierta o percutnea. Reseccin va toracotoma
Tomado de: Manual de patologa clnica veterinaria en pequeos animales, Davidson et al, 2000.
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12.2. TIPOS DE BIOPSIA
CUADRO 3. Diferentes tipos de biopsia
Tipos de biopsia Breve descripcin y caractersticas
Escisional -Extirpacin quirrgica -A menudo requiere anestesia general -Son importantes las consideraciones de lugar y tamao.
Incisional -Eliminacin nicamente de una parte representativa de la lesin. -Problemas de cicatrizacin si es una neoplasia -Permite la planificacin de abordajes teraputicos adicionales. Con trocar -Eliminacin de un cili ndro de tejido -Normalmente uso limitado a la piel
Con aguja -Eliminacin de un pequeo ncleo cilndrico de tejido o nicamente de clulas. -Es importante la precisin; es til guiarlas mediante ecografa -Poco invasiva
Endoscpica -Eliminacin de pequeas muestras por avulsin o por escisin mediante pinzas de biopsia de los tractos digestivo y respiratorio y de los orificios corporales. -Pequeas muestras de tejido -Poco invasiva -Requiere sedacin o anestesia general en funcin del lugar de muestreo.
Exfoliativa Recogida de clulas descamadas (de forma natural o por legrado) procedentes de superficies externas o internas. Normalmente se realiza un estudio citolgico. Simple y fcil, en funcin de la localizacin. Poco invasi va, en funcin de la locali zacin.
Tomado de: Manual de patologa clnica veterinaria en pequeos animales, Davidson et al, 2000.
A conti nuacin se explica de forma general como se obtienen las muestras por biopsia.
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12.3. BIOPSIAS ESCISIONALES E INCISIONALES
La biopsia escisional permite extirpar la lesin entera en una sola operacin. En cambio la biopsia incisional elimina de forma deliberada solo una parte (idealmente representati va) de la lesin. Por lo general basta con este tejido para los propsitos diagnsticos o de planificacin, ya que es posible que la lesin est situada cerca de un tejido u rgano vital y la extirpacin comprometa la integridad del rgano, que la lesin sea infiltrativa o que sea necesario determinar su naturaleza (neoplsica, maligna o benigna) antes de ir ms all.
No se necesitan i nstrumentos especiales para las biopsias escisionales o incisionales; es suficiente con el instrumental quirrgico estndar, es decir, bistur, pinzas con dientes, tijeras, mosquitos e instrumental de sutura. Hay que tener cuidado con la biopsia escisional cuando existe alguna duda sobre la capacidad de coagulacin sangunea del paciente.
Cuando se obtiene una biopsia por incisin para realizar un estudio histopatolgico antes de planificar una ciruga ms radical, se recomienda que el tejido incluya un margen de tejido normal siempre que sea posible. (Davidson et al, 2000).
12.4. BIOPSIA CON AGUJA Y CON TROCAR
El trocar de keyes, que es ampliamente utili zado para obtener ncleos circulares de epidermis y dermis de 5 mm de dimetro o menores. Estos i nstrumentos son adecuados para la obtencin de mltiples muestras cutneas de perros y gatos y tambin cuando la lesin es pequea, focal y puede ser abarcada por el trocar de biopsia. Las biopsias elpticas pueden realizarse bajo sedacin y anestesia local, al igual que se hacen normalmente las biopsias de sacabocados. (Davidson et al, 2000).
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12.4.1. MATERIAL
Las agujas para reali zar biopsias son de dos tipos: las de gran calibre y las de pequeo calibre, y su longitud vara entre los 12 mm y los 15 cm.
CUADRO 4. Tipos de aguja de biopsia
Denominacin Nombre G Muestra
Gran calibre Vim-silverman modificada Tru-cut
Osgood
Jamshidi
Menghini 14
14
15/16
15
15 Cilindro de tejido (ri n).
Cilindro de tejido (todos los rganos y tejidos). Medula sea (tejido medular + sangre). Trepano seo (hueso + medula). Cilindro de tejido (hgado) Aguja fina Hipodrmica 21-25 Clulas (aspiracin de cualquier rgano).
Tomado de: Manual de patologa clnica veterinaria en pequeos animales, Davidson et al, 2000.
CUADRO 5. Ventajas y desventajas de las tcnicas con aguja
Ventajas Desventajas -Poco invasivas pero depende de la localizacin.
-Rpidas, citologa por aguja fina en menos de una hora. -Repetibles; depende del tamao, localizacin y naturaleza de la lesin.
-Anestesia; sedacin con anestesia local ms que anestesia general.
-Adecuadas para pacientes debilitados o geritricos. -Tamao de muestra pequeo; puede estar fragmentada.
-Es posible que no sea representativa de toda la lesin. -Es posible que no se muestree la lesin focal, a menos que sea guiada mediante ecografa. -puede dar falsos negativos.
-La interpretacin requiere un experto (especialmente la aspiracin con aguja 63
-Relacin coste-eficacia, ya que el instrumental de muestreo no es caro. fina).
-diseminacin de las clulas de una neoplasia maligna (raro).
Tomado de: Manual de patologa clnica veterinaria en pequeos animales, Davidson et al, 2000.
12.5. MANIPULACIN DE LOS TEJIDOS Y DE LAS BIOPSIAS
El manejo correcto de las muestras liquidas y tisulares despus de reali zar la biopsia o la extraccin es una fase importante a la que a menudo no se le presta la suficiente atencin.
El manejo inicial tras su obtencin, la fijacin y el transporte de la muestra pueden influir en el xito del diagnostico; las muestras mal fijadas o mal manipuladas, especialmente si son pequeas (por ejemplo, biopsia endoscpica), pueden impedir que se realice un diagnostico lgico. (Davidson et al, 2000).
12.5.1. MUESTRAS LQUIDAS
La clave del xito est en que sean procesadas rpidamente, idealmente en el mismo da. Cuando las muestras pueden llevarse al laboratorio para ser exami nadas el mismo da de su obtencin, debe disponerse un volumen representati vo, no ms de 20 ml, en un contenedor estril sin fugas.
Si el lquido tiende a coagularse, debe emplearse EDTA o un anticoagulante similar.
Cuando no sea posible procesar un lquido fresco sin fijar, deben realizarse extensiones sobre portaobjetos. Si el lquido tiene una de gran densidad celular, 64
puede extenderse una pequea gota de la suspensin utili zando la tcnica hematolgica convencional. Es un mtodo similar a la tcnica estndar utili zada para hacer extensiones sanguneas, las clulas ms grandes y los agregados celulares tienden a distribuirse en el rea con forma de pluma de la extensin. Por consiguiente, el extremo con forma de pluma debe terminar dentro del portaobjetos. Si se coloca demasiado material se perdern estas clulas, especialmente si la viscosidad es baja o se aplica un ngulo o una velocidad incorrectos a la hora de hacer avanzar el portaobjetos superior.
Cuando la densidad celular sea baja, el contenido celular debe concentrarse, si es posible, mediante centrifugacin a 1.500 rpm durante 3-5 mi nutos o, si no hay una centrifuga disponible, mediante la sedimentacin por gravedad de la muestra durante unos 30 minutos. Las muestras de lquido cefalorraqudeo requieren un manejo especial (Jannison y Lumsden, 1988) y deben estar listas para su examen antes de pasada una hora desde su extraccin para evitar las alteraciones morfolgicas.
Las extensiones deben secarse lo ms rpido posible al aire agitndolas vigorosamente o utili zando un pequeo secador de manos a baja temperatura. Entonces pueden ser enviadas al laboratorio en un contenedor apropiado. No es recomendable realizar la fijacin y el transporte en alcohol al 95%. (Davidson et al, 2000).
12.5.2. MUESTRAS HISTOLGICAS
El tamao de las muestras histolgicas vara desde unos pocos milmetros de dimetro, en el caso de las biopsias endoscpicas y de los fragmentos exfoliados, hasta grandes masas neoplsicas de 15-20 cm de dimetro o ms.
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Las muestras histolgicas pequeas deben colocarse en una placa de Petri sobre un soporte de espuma no vellosa o una base similar y deben humedecerse con suero sali no isotnico estril o con medio de cultivo para tejidos hasta el momento de su fijacin, alternati vamente, y si es posible, se fijan dentro de los 5-20 minutos posteriores a su obtencin.
Las muestras grandes se colocan sobre placas o bandejas limpias y estriles (por ejemplo, placas de petri o bandejas de acero inoxidable) antes de seleccionar las reas que van a ser fijadas para el examen histopatolgico o utili zadas para otros exmenes (por ejemplo, bacteriolgico o bioqumico).
Las muestras grandes siempre plantean un problema para los clnicos remitentes, ya que el dogma tradicional de la fijacin de las muestras de tejido con formali na a razn de un volumen de tejido por 10 volmenes de formalina, dejado de lado por los anatomopatologos, a menudo queda anulado por el tamao y complejidad de estas muestras. En el caso de masas bien defi nidas o encapsuladas, como las neoplasias de la superficie cutnea de unos 3-4 cm de dimetro, la fi jacin con formali na a razn 1:10 todava es factible, pero permanece el problema de la penetracin adecuada del fi jador en la muestra. Si no se produce una correcta penetracin, la muestra de tejido sufre una autolisis, lo que dificulta o imposibilita la interpretacin histopatolgica.
El problema tiene una solucin lgica que puede aportar una informacin til adicional para el diagnostico. En el caso de masas pequeas o de lesiones bien definidas, nicamente con una biseccin es suficiente y la muestra puede fijarse en forma de dos mitades (preferiblemente seccionadas de forma longitudi nal). Si la lesin debe ser dividida en dos, hay que hacerlo completa y uniformemente.
Muy a menudo el anatomopatolgico recibe muestras deformadas, que son difciles de orientar y de convertir en bloques porque la muestra fresca fue seccionada de forma incorrecta. Es posible que las lesiones de mayor tamao y 66
las lesiones irregulares tengan que ser sometidas a ms de una seccin o seccionadas en ms de un plano. En estos casos es importante que el clnico remitente informe al anatomopatlogo sobre lo que se ha hecho y de que partes de la lesin, si no es completa, se han enviado. Esto puede hacerse mediante una descripcin escrita, pero probablemente la mejor forma y la ms fcil de hacerlo es enviando un diagrama comentado.
Nunca deben colocarse en un mismo contenedor las diferentes muestras tisulares de un mismo animal (por ejemplo, una verruga cutnea, un pulis oral y un tumor anal no deben depositarse juntos). La colocacin de mltiples muestras sin identificar y procedentes de disti ntos lugares en un mismo contenedor provoca una gran i nquietud a los anatomopatlogos. (Davidson et al, 2000).
12.5.3. FIJACIN DE LA MUESTRA
La fijacin es el proceso por el cual se evitan o se previenen los cambios autolticos que se producen en los tejidos, a menudo favorecidos por agentes infecciosos, inflamaciones y por un mal manejo fsico despus de obtener la muestra. El objetivo es utili zar un producto para fijar y conservar la arquitectura celular para la interpretacin y la valoracin histopatolgica. El mejor fi jador para la mayora de propsitos diagnsticos es aun la solucin de formali na, relati vamente barata, fcil de usar y, si se maneja prudentemente, no es toxica ni irritante para sus usuarios. Una gran ventaja es que la formalina es tan buen conservante como fijador, por lo que los tejidos fijados con esta sustancia pueden guardarse durante meses si es necesario. (Davidson et al, 2000).
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13. TOMA, CONSERVACIN Y ENVO DE MUESTRAS DE ORINA
La orina es una sustancia potencialmente peligrosa porque pueden haber en ella organismos causantes de zoonosis como, por ejemplo, los del gnero Leptospira; por lo tanto hay que llevar guantes desechables durante la obtencin y el manejo de las muestras de orina. (Davidson et al, 2000). Es importante emplear el mtodo adecuado para la obtencin de orina. Los principales son:
13.1. MICCIN ESPONTNEA
13.1.1. MATERIAL
Tubo recolector estril
13.1.2. Tcnica
La orina se recoge durante la miccin o mientras se exprime manualmente la vejiga de la orina. La primera fraccin de orina es la mejor muestra cuando se sospecha que la lesin se encuentra en la parte ms distal del tracto urinario, por lo que sirve para obtener e identificar tapones uretrales, cristales, urolitos, bacterias, infecciones vricas o hemorragias. Sin embargo, tambin es la muestra con ms probabilidad de estar contami nada con clulas, bacterias y restos celulares/ espermatozoides del tracto genital y pelo circundante. Figura 65. (Davidson et al, 2000).
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Figura 65. Miccin espontnea
La fraccin intermedia es la mejor muestra para la mayora de pruebas, y la fraccin final de orina resulta optima para evaluar la existencia de una enfermedad prosttica y, en algunos casos para obtener el sedimento o la hemorragia que puede estar depositada en el suelo de la vejiga.
Hay que recoger la mayor cantidad de ori na posible en un recipiente inerte y estril de plstico, acero o cermica y luego transferido a un recipiente estril.
La orina obtenida por miccin espontanea esta casi siempre contaminada por bacterias; sin embargo es un mtodo aceptable para reali zar el examen fsico, examen qumico, medir el pH y evaluar el aspecto microscpico.
Este mtodo no es adecuado para realizar un cultivo uri nario. (Davidson et al 2000).
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13.2. CISTOCENTSIS
13.2.1. MATERIAL
Jeringas de 5ml 10ml Torundas de algodn Alcohol al 70% Yodo Recipiente estril de plstico Mqui na para rasurar
Figura 66. Material para cistocentsis
13.2.2. TCNICA
Se debe sujetar al perro en posicin decbito lateral sobre la mesa de exploracin. Es necesario que el perro o gato cuente con la vejiga pltora o lo suficientemente llena como para palparse con facilidad a travs de la pared abdominal. (Tachika, 2008).
Se prepara de manera antisptica la regin del abdomen caudal y ventral (rasurado, lavado y embrocado).
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Para reali zar la cistocentsis, se debe ubicar perfectamente bien la vejiga uri naria, a travs de palpacin abdominal externa, la vejiga llena de orina se identifica por palpacin y se encuentra apoyada sobre la pared abdominal ventral caudal.
Una vez que se ha locali zado la vejiga urinaria, se procede a realizar la puncin trans-abdominal con la jeringa de 5 o 10ml, en un ngulo de 45 grados, con un movimiento firme, pero cuidadoso y delicado. Ver figura 67.
Se succiona un poco el mbolo de la jeringa, para verificar si se obtiene lquido (orina) y en caso de una muestra positiva, se termi na de llenar la jeringa, para despus retirarla del paciente rpidamente. Posteriormente se coloca por unos segundos una torunda de algodn mojada con alcohol en el sitio de puncin abdominal
La orina se recoge con una jeringa o en un recipiente estril, de tal modo que pueda emplearse para el anlisis y/o para el culti vo microbiolgico y el antibiograma. Ver figuras 68 y 69. (Davidson et al, 2000).
La cistocentsis se considera el mtodo de eleccin para la obtencin de orina debido a que proporciona muestras no contaminadas por bacterias y clulas procedentes de la uretra distal, lo que permite interpretar de forma ms exacta los resultados de los cultivos y de los antibiogramas. (Elliot, 1996; Scott-Moncrieff, 1996). 71
Figura 67. Se introduce la aguja Figura 68. Obtencin de muestra
Figura 69. Frasco estri l de boca ancha
13.3. CATETERIZACIN
Es un mtodo til para identificar la locali zacin de las obstrucciones parciales o totales de la uretra, especialmente cuando son debidas a urolitos, estenosis o cuerpos extraos. (Davidson et al, 2000).
La cateteri zacin tambin se emplea en los estudios diseados para controlar el volumen de orina y la tasa de produccin en estudios sobre insuficiencia renal, 72
para administrar el medio de contraste radiogrfico y para determinar el volumen de orina que queda en la vejiga tras la miccin.
La cateteri zacin es un procedimiento poco invasi vo y bien tolerado por muchos perros adultos, pero las perras, gatas y los gatos enteros requieren con frecuencia la admi nistracin de sedantes o de anestsicos generales. (Smarick et al, 2004).
Aunque es un procedimiento muy utilizado, tiene sus i nconvenientes, pueden transportarse los organismos presentes en la parte distal de la uretra y del tracto genital a la vejiga y provocar con ello una infeccin del tracto urinario. (Biertuempfel et al, 1981).
13.3.1. MATERIAL
Mqui na para rasurar Sondas flexibles rgidas Rin de plstico o metal Tubo recolector estril Gasas estriles Solucin sali na
13.3.2. TCNICA
Un ayudante debe sujetar al perro en posicin decbito lateral sobre la mesa de exploracin. (Tachika, 2008).
Un segundo ayudante debe limpiar con una gasa que contenga un poco de solucin salina isotnica la punta del prepucio del perro. Con otra gasa, se realiza el mismo procedimiento sobre la punta del pene. 73
El ayudante, quien previamente se ha puesto guantes estriles, recibe el catter uretral estril y si n tocar al paciente, calcula la longitud que va a introducir del mismo. Esto se realiza trazando de manera imaginaria el trayecto que seguir el catter a travs de la uretra peneana, la uretra prosttica hasta llegar finalmente a la vejiga uri naria.
Se retrae la piel del prepucio de manera que quede expuesta la punta del pene y se visualice el orificio uretral, por donde se introducir gentilmente el catter urinario, previamente lubricado con gel estril. Ver figura 70
Figura 70. Se retrae la piel y se introduce la sonda previamente lubricada.
Una vez que se ha introducido el catter y comienza a salir la orina a travs del mismo, se obtiene la muestra en un recipiente estril. Figuras 71 y 72.
74
Figura 71. Obtencin de muestra Figura 72. Obtencin de muestra
13.4. CONSERVACIN
El mtodo de conservacin es igual en las tres tcnicas mencionadas anteriormente. (Agui lar et al, 2005).
Una vez que se ha obtenido, la muestra de orina debe ser analizada lo ms pronto posible.
Existen diferencias de criterio entre autores, pero en ningn caso se recomienda que se analice despus de dos horas cuando se dispone a temperatura ambiente; si no se va a cumplir esta condicin, es necesario refrigerarla y realizar el anlisis antes de cuatro horas. Si se requiere mantener la muestra por ms tiempo, se deber dividir en dos porciones, y conservar cada una de la siguiente forma:
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-Formali na amortiguada al 40%. Se agrega 1 gota por cada 20 ml de orina. Se utili za para el examen del sedimento, con el fi n de conservar las clulas y otros componentes del sedimento; produce cambios pequeos en el pH, si n embargo, interfiere con algunas determi naciones qumicas.
-Congelacin: se emplea para llevar a cabo los exmenes fsico y qumico. Este mtodo es til cuando se van a hacer determinaciones fotomtricas o colorimtricas como urea, creati nina y mi nerales.
Es muy importante que cuando se vaya a analizar una muestra que ha estado en refrigeracin, se permita que esta alcance nuevamente la temperatura ambiente (15-25C) para que se disuelvan los solutos que se precipitaron con la baja temperatura. Antes de implementar cualquier tipo de terapia, es necesario realizar un urianlisis o cualquier otra prueba de laboratorio.
76
14. OBTENCIN DE MUESTRAS DE CAVIDADES CORPORALES
El lugar y el modo de eleccin para recoger la muestra varan en funcin de la especie, del lugar donde se sospecha que se encuentra la lesin y del operador. Hay que utili zar tcnicas aspticas, incluyendo la preparacin quirrgica de la superficie cutnea. Pueden usarse sedantes y anestsicos locales, pero suelen ser muy necesarios. (Davidson et al, 2000).
14.1. TORACOCENTSIS
14.1.1. MATERIAL
Mqui na para rasurar Torundas de algodn Alcohol al 70 % yodo Agujas de calibre 20-22 G Tubo recolector estril
14.1.2. TCNICA
La toracocentsis se lleva a cabo con el animal de pie o en decbito esternal. Suele reali zarse en el tercio ventral del sptimo o el octavo espacio intercostal. Se rasura y se embroca al paciente con isodine espuma y alcohol al 70%. Ver figura 73. 77
Figura 73. Embrocado del paciente
Se introduce una aguja de 20-22 G de calibre cerca del borde anterior de la costilla para reducir la probabilidad de lesi onar los vasos sanguneos y los nervios locali zados en el borde caudal de cada costilla. Ver figuras 74 y 75.
Figura 74. Puncin en perro
Figura 75. Puncin en gato 78
Para disminuir el riesgo de lacerar los pulmones se uti liza una granula. Si hay que drenar mucho liquido, se emplea una vlvula de tres vas para evitar en lo posible un neumotrax. Ver figuras 76, 77, 78, 79.
Figura 76. Toracocentsis en perro Figura 77. Toracocentsis en gato
Figura 78. Obtencin de muestra Figura 79. Vlvula de tres vas
79
14.2. ABDOMINOCENTSIS
14.2.1. MATERIAL
Mqui na para rasurar Torundas de algodn Alcohol al 70% yodo Aguja de 20-22 G catter negro Rin de plstico o metal Tubo recolector estril
14.2.2. TCNICA
La abdominocentsis se lleva a cabo con el animal de pie o en decbito lateral. (Davidson et al, 2000).
Se rasura toda el rea abdominal del paciente, y posteriormente con torundas de algodn se embroca con isodine espuma y alcohol al 70%.
Figura 80. Embrocado 80
La puncin suele reali zarse 1-2 cm por detrs del ombligo en la lnea media ventral.
Se utiliza una aguja de 20-22 G, con una longitud suficiente para penetrar el grosor de la pared abdomi nal, catter color negro.
Se introduce la aguja y se obtiene el lquido por gravedad. Puede utilizarse una branula y una vlvula de tres vas. Ver figuras 81, 82.
Figura 81. Puncin
Figura 82. Obtencin de muestra 81
14.3. CONSERVACIN
En las tcnicas de toracocentsis y abdominocentsis se utili za el mi smo mtodo de conservacin y envo.
El recuento de clulas nucleadas se hace mediante mtodos manuales o automticos. Si el recuento celular determinado ya sea por recuento ya sea por el grado de turbidez del lquido es elevado, es decir, superior a 10 x 109 clulas por litro, deben realizarse frotis directos para teir y exami nar. Si no es as, hay que concentrar las clulas centrifugando la muestra y reali zar una extensin a partir del sedimento. Todo esto debe realizarse lo antes posible para que se conserve la morfologa celular. Si las clulas no pueden ser concentradas en la clnica ni ser procesadas en un laboratorio de referencia al cabo de pocas horas, hay que realizar frotis directos inmediatamente.
La concentracin de hemoglobina y /o el valor hematocrito se utilizan para estimar la cantidad de sangre presente en los lquidos cavitarios.
La concentracin de protenas se determina con un refractmetro o haciendo un anlisis qumico. Las muestras para reali zar otras pruebas de bioqumica clni ca deben depositarse en tubos sin anticoagulante.
Hay que anotar el aspecto del lquido aspirado. El color y la turbidez i ndican la presencia de pigmentos y de clulas respectivamente; hay que anotar y tener en cuenta el aspecto original para poder reali zar una interpretacin correcta. (Davidson et al, 2000).
82
14.4. ENVO Las muestras de lquidos hay que depositarlas en tubos con acido etilen- diamino tetractico (EDTA) para poder reali zar el recuento celular y el examen citolgico. (Davidson et al, 2000).
Los frascos, viales, tubos, etc., deben estar tapados lo ms hermticamente posible, colocando bien las tapas y tapones los cuales se asegurarn con tela adhesi va. [consultado el 8 de mayo del 2010]. http://www.cenavece.salud.gob.mx/.../procedimientos_basicos_en_la_toma _de_muestras_finales.pdf.
Cuando se manden varios tubos se aseguran con ligas y se colocan en bolsas cerradas.
Los frascos se colocan en bolsas de plstico resistentes y hermticamente cerradas.
Las lami nillas se deben enviar secas, envueltas indi vidualmente en papel de China y cada una estar bien identificada con un nmero o el nombre del paciente.
Las muestras se colocan en cajas trmicas resistentes empaquetndolas con relleno de papel, plstico o madera (viruta), para amortiguar los golpes. 83
No olvidar que las muestras deben estar acompaadas de una carta u oficio en el que se especifique claramente que tipo de prueba se solicita y un resumen clnico enfatizando la fecha de i nicio del padecimiento y la fecha de la toma de la muestra, edad y sexo, estos documentos (original y copia), se colocan dentro del paquete en una bolsa de plstico sellada para evitar la prdida de esta informacin.
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15. BIBLIOGRAFIAS
LIBROS
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