Facultad de Ciencias Biolgicas Departamento de Ciencias Biolgicas BIO150 Odontologa

Introduccin a la Microbiologa
Antecedentes histricos

Dr. Enrique Vins V

Qu es la microbiologa?
Ciencia que se dedica al estudio de los microorganismos (organismos microscpicos)

Deriva de 3 palabras griegas: mikros (pequeo), bios (vida) y logos (ciencia)

Disciplina cientfica: Estudio sistemtico y metdico que genera conocimiento bsico y aplicado

Tipos de microorganismos:
Bacterias Hongos Parsitos Virus (*)

Principales ramas de la microbiologa

Bacteriologa Virologa

Escherichia coli

Virus Influenza

Micologa

Parasitologa

Penicillium

Trypanosoma cruzi

Microorganismos en la historia del hombre

El vino (levaduras): Producido por todos los pueblos antiguos que cultivaban la vid (chinos, persas, egipcios, pueblos de la cuenca del Mediterrneo y casi toda Europa)

Historia del vino: Inicio de la viticultura (Mesopotamia 6000 A.C.) Cultivos en Fenicia y Egipto (3000 aos A.C.) El vino en Grecia 1000 A.C., difusin por Italia y frica Imperio Romano llevan al vino al Norte de Europa Espaoles llevan el vino a Amrica
La cerveza (Levaduras): La mencin ms antigua de la produccin de cerveza (siraku) aparece en unas tablas de arcilla escritas en lenguaje sumerio ( 4000 AC). Antiguos egipcios: Primeros productores conocidos de cerveza (atribuyen su origen al capricho de Osiris)

Microorganismos en la historia del hombre

Queso (bacterias, a veces hongos filamentosos) : Nace gracias a la aparicin de la ganadera (11.000 A.C.) en Europa y el Medio oriente. Aparicin fortuita del queso a partir de la leche de bovinos (uro) almacenada en bolsas de cuero. Pan (levaduras): Los antiguos egipcios consolidaron las tcnicas de panificacin (primeros hornos datan del ao 4000 A.C.). Se cree que los egipcios "inventaron" la costumbre gastronmica de colocar un pequeo pan de trigo en el lugar de cada comensal.

Yogurt (bacterias y levaduras): Su produccin y consumo se remonta al ao 2000 A.C. por los Trtaros. La expansin de los trtaros por Europa (con los ejrcitos de Gengis Kan) permiti su rpida difusin.

Antecedentes histricos de la microbiologa. El Microscopio

Anton van Leeuwenhoek (1684):

Padre de la microbiologa. Realiz la primera observacin de microorganismos libres (animculos). Creador de un microscopio primitivo.

Antecedentes histricos de la microbiologa. El Microscopio

Microscopio de Leeuwenhoek

Dibujo original de los animculos observados por Leeuwenhoek

Antecedentes histricos de la microbiologa. El Microscopio

l no es Leeuwenhoek, pero construy una rplica de su microscopio.
Instrucciones:
http://www.microscopy-uk.org.uk/mag//artapr07/hl-scope.html http://www.microscopy-uk.org.uk/mag//artjul07/hl-loncke2.html

Microfsiles fotografiados con ayuda de su microscopio de Leeuwenhoek

Antecedentes histricos de la microbiologa. El Microscopio

Robert Hooke (1635 - 1702)

Construy un microscopio similar a los actuales. Observ las estructuras reproductivas de un hongo.

Generacin espontnea

Francesco Redi (1626 - 1697)

Lazzaro Spallanzani (1729 - 1799)

Generacin espontnea
Louis Pasteur (1864) Experimentos con matraces "cuello de cisne.

Antecedentes Histricos de la microbiologa. Fermentacin

Louis Pasteur (1822 - 1895) y Theodore Schwann (1810 - 1882)

Descubrieron el origen microbiolgico de procesos de fermentacin lctica, alcohlica y la existencia de microorganismos anaerobios.

Antecedentes Histricos de la microbiologa. El contagio

El Seor dijo a Moiss y a Aarn: Cuando alguno tenga una inflamacin, una erupcin o una mancha en la piel y se le produzca la lepra, ser llevado ante el sacerdote Aarn o cualquiera de sus hijos sacerdotes. Se trata de un hombre con lepra, y es impuro. El sacerdote le declarar impuro de lepra en la cabeza. El que haya sido declarado enfermo de lepra, andar harapiento y despeinado, con la barba tapada y gritando: Impuro, impuro! Mientras le dure la lepra, seguir impuro: vivir solo y tendr su morada fuera del campamento. Levtico 13:1-2,45-46

Antecedentes Histricos de la microbiologa. El contagio

Leproso Lepra. Causada por Mycobacterium leprae.

La muerte negra Peste Negra o Peste bubnica. Causada por Yersinia pestis. Mat 25 millones de personas a lo largo de 5 aos en el siglo XIV.

Antecedentes Histricos de la microbiologa. Enfermedad

Louis Pasteur Colabor en la identificacin de microorganismos como causantes de enfermedad. Desarroll la vacuna para la rabia.

Antecedentes Histricos de la microbiologa

Joseph Lister (1860) Gener el concepto de la antisepsia. (Uso de soluciones de fenol para desinfectar material quirrgico, ropa y manos).

Joseph Lister y sus ayudantes durante un procedimiento quirrgico

Antecedentes Histricos de la microbiologa. Enfermedad

Robert Koch (1876)

Defini los postulados sobre la identificacin de microorganismos como causantes de enfermedad (Actualmente vigentes). Trabaj en la etiologa del carbunco (Bacillus anthracis) y la tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis). Desarroll medios de cultivo lquidos y slidos y mtodos para la obtencin de cultivos puros.

Postulados de Koch
El microorganismo debe estar presente en todos los individuos con la misma enfermedad y ausente en individuos sanos. El microorganismo debe ser recuperado del individuo enfermo y poder ser aislado en medio de cultivo. El microorganismo proveniente de ese cultivo debe causar la misma enfermedad cuando se lo inocula a otro hospedero. El individuo experimentalmente infectado debe contener el micoorganismo.

Antecedentes Histricos de la microbiologa. Vacunas

Edward Jenner (1798) Vacun con xito a un nio contra la viruela. La vacuna se obtuvo de las pstulas de una vaca enferma de viruela.

Edward Jenner en el proceso de vacunacin.

Antecedentes Histricos de la microbiologa. Vacunas

Muere

Cepa virulenta

Vive

Bacteria 42C Cepa vieja

Cepa virulenta

Teora de la resistencia adquirida: Jenner, Pasteur y Koch

Antecedentes Histricos de la microbiologa. Virus

Martinus W. Beijerinck (1865 - 1939) Dio origen a una nueva ciencia: La Virologa. Defini agentes infecciosos ms pequeos que las bacterias pues podan atravesar un filtro de porcelana. Adems, postul que los virus slo podan ser cultivados en presencia de clulas.

Antecedentes Histricos de la microbiologa. Bacterifagos

Flix dHrelle (1873 - 1949) Descubre el primer virus capaz de infectar y destruir bacterias. Estos virus son denominados hoy en da bacterifagos.

Antecedentes Histricos de la microbiologa. Antibacterianos

Treponema pallidum

Paul Ehrlich (1908) Cre el primer compuesto qumico sinttico (Salvarsan) que poda curar una enfermedad, la sfilis.

Salvarsan

Antecedentes Histricos de la microbiologa. Antibiticos

Alexander Fleming (1928 - 1955) Uso de los antibiticos. Observ que el hongo Penicillium notatum impeda el crecimiento de Staphylococcus aureus

Antecedentes Histricos de la microbiologa. Antibiticos

Alexander Fleming (1928): Uso de los antibiticos.

Howard Florey (1940) Ernest Chain Purificacin y aislamiento de penicilina G para su uso como antibitico. Junto con Fleming, ganaron el premio Nobel de Medicina en 1945.

Microbiologa actual
La microbiologa actual es una de las disciplinas con mayor impacto y futuro. Puede dividirse en dos reas de trabajo: Microbiologa bsica. Estudia la naturaleza y propiedades de los microorganismos: morfologa, fisiologa, bioqumica, gentica, ecologa y taxonoma. Microbiologa aplicada. Utiliza los conocimientos generados por la Microbiologa bsica para resolver problemas

- Microbiologa sanitaria. - Microbiologa de los alimentos. -Microbiologa ambiental. -Industrial y Biotecnologa

Objeto de estudio de la microbiologa

Qu estudiar?
Caractersticas estructurales Funciones bsicas (Fisiologa) Metabolismo Gentica (Genmica) Taxonoma Patogenicidad y virulencia Antgenos

Objeto de estudio de la microbiologa

Cmo estudiar? Observacin directa (Estructura, morfologa, etc.) Determinacin de requerimientos nutricionales y energticos Determinacin de resistencia a sustancias txicas Construccin y/o seleccin de mutantes (anlisis fenotipos y genotipos) Biologa molecular Ensayos de patogenicidad (modelos in vivo e in vitro) Estudios de virulencia (modelos in vivo e in vitro)

Medios de Cultivo

Medios de cultivo
Corresponden a soluciones acuosas de nutrientes de distinta naturaleza que permiten el crecimiento de los microorganismos. Se utilizan en el laboratorio para aislar e identificar microorganismos.

Requerimientos nutricionales de las bacterias

Micronutrientes: Aquellos que se necesitan en pequeas cantidades para el crecimiento bacteriano. Macronutrientes: Aquellos que se necesitan en grandes cantidades para el crecimiento bacteriano. Ambos tipos de nutrientes deben estar presentes en un medio de cultivo para que el microorganismo se pueda desarrollar.

Macronutrientes

Micronutrientes

Micronutrientes

Medios de cultivo
Cmo se observa el crecimiento bacteriano en los medios de cultivo?

En medio lquido
Enturbiamiento Aparicin de grumos Formacin de un velo o pelcula en la superficie En medio slido Formacin de colonias

Colonia: Agrupacin visible de bacterias provenientes de la divisin de una nica clula bacteriana.

Medios de cultivo
Cul es la utilidad de los medios de cultivo? Aislamiento de bacterias a partir de una muestra (agua, secreciones, aire, alimentos, muestras clnicas). Obtencin de cultivos puros, para el estudio de propiedades fisiolgicas e identificacin. Conservacin de cepas. Evaluacin de antibiticos. Pruebas de esterilidad. Fabricacin de sueros, vacunas, etc.

Clasificacin de los medios de cultivo

1.- Segn su estado fsico

Medio slido (agar 1,5%)

Medio lquido

Medio semi slido (agar 0,8%)

Clasificacin de los medios de cultivo

2.- Segn su presentacin

Medio de cultivo en tubo

Medio de cultivo en placa

Clasificacin de los medios de cultivo

3.- Segn su contenido de nutrientes Medios qumicamente definidos: Contienen cantidades precisas y bien formuladas de diversos componentes inorgnicos y orgnicos. Renen los requerimientos nutricionales para el desarrollo de un determinado microorganismo. Medios complejos (indefinidos): No poseen una formulacin precisa. Se preparan en base a infusiones de digeridos proteicos (carne, soya, casena, extracto de levadura). La mayora de estos medios se venden deshidratados, lo que facilita su preparacin.

Clasificacin de los medios de cultivo

4.- Segn su utilidad.
Agar Chocolate

1.- Corriente (bsicos): Contienen slo los elementos nutritivos esenciales. Ej.: caldo Luria (medio lquido) y agar corriente (medio slido). 2.- Especiales: Mejorados o enriquecidos: Son medios corrientes adicionados de Agar sustancias de alto valor nutritivo (sangre, suero, vitaminas, extractos MacConkey de levaduras), que permiten el desarrollo de bacterias ms exigentes. Ej.: Agar sangre (medio slido), agar chocolate (medio slido). Medios selectivos: Contienen sustancias inhibidoras para determinadas bacterias. Ej.: Agar SS para Salmonella y Shigella, Thayer Martin para N. gonorrhoeae y Agar MacConkey para Gram (-). Agar Medios diferenciales: Permiten establecer si una bacteria desarrolla Sangre una determinada funcin metablica que la diferencia de otras bacterias. Ej.: Citrato de Simmons, TSI, MIO, LIA, Caldo urea.

Clasificacin de los medios de cultivo

Enriquecidos

Agar Sangre

Agar Chocolate

Medios de cultivo
Enriquecido y diferencial

-hemlisis: Parcial (se observa halo verdoso)

-hemlisis: Total (se observa halo transparente)

-hemlisis: No produce hemlisis

Medios de cultivo
Selectivo y diferencial. Agar MacConkey

E. coli Gram (-), lac+

S. Typhimurium Gram (-), lac-

S. aureus Gram (+)

Selectivo: Selecciona lo que crece, en ste caso slo Gram (-) debido a la presencia de cristal violeta y sales biliares. Diferencial: Dentro de lo que crece, marca diferencias. En este caso los que utilizan lactosa como fuente de carbono (lac+) de los que no (lac-)

Medios de cultivo
Selectivo y diferencial. Agar Manitol Salado

En ste medio crecen microorganismos halotolerantes, principalmente staphylococci.

Es selectivo por su alta concentracin de sal. Diferencia segn la capacidad de utilizar manitol

S. aureus Utiliza manitol

S. epidermidis No utiliza manitol