Protocolo Muestreo Analisis Contaminantes...

protocolo
de contaminantes emergentes y prioritarios
de tcnicas de muestreo y tcnicas analticas
MINISTERIO DE ECONOMA Y COMPETITIVIDAD
tragua
Consolider
w w w . c o n s o l i d e r - t r a g u a . c o m
protocolo

Grupo C2 Universidad de Jan

Jos Robles Molina Juan Francisco Garca Reyes Antonio Molina Daz
Grupo TC10 Universidad de Almera

Amadeo Rodrguez Fernndez-Alba Ana Agera Lpez Mara Jos Gmez Ramos Mara Jess Martnez Bueno Mara Dolores Hernando Guil Milagros Mezcua Peral Mara del Mar Gmez Ramos Sonia Herrera Lpez
ndice
protocolo
nd
1. Introduccin 2. Normativa
[4] [7] [9]
3. Toma y tratamiento de la muestra 4. Reactivos 5. Anlisis [14] [16]
6. Procedimiento de anlisis de contaminantes emergentes 7. Procedimiento de anlisis de contaminantes prioritarios 8. Determinacin [38] [40] [42]
[18] [27]
9. Pruebas de identificacin
10. Validacin y calidad de los resultados
Anexo I. Aplicacin del protocolo para la evaluacin del contenido de contaminantes emergentes en una planta de tratamiento de aguas residuales en Almera [44] Anexo II. Aplicacin del protocolo para la evaluacin del contenido de contaminantes prioritarios en una finca regada con agua residual tratada en Granada [56] Anexo III. Referencias [63]
introduccin
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El desarrollo y avance de nuestra sociedad, ha trado consigo nuevos problemas de contaminacin ambiental. Durante dcadas, la atencin en la investigacin sobre la contaminacin del agua ha estado centrada en los agentes contaminantes clasificados como peligrosos o prioritarios, en particular, en los contaminantes orgnicos persistentes (COP) contemplados en el mbito legislativo. Dentro de estas sustancias o grupos de sustancias prioritarias se encuentran metales pesados, pesticidas, retardantes de llama o hidrocarburos aromticos policclicos conocidos por ser txicos, bioacumulables y persistentes en el medio ambiente. Sin embargo, los hbitos de consumo actuales de nuestra sociedad, estn generando una serie de residuos y contaminantes de los que, hasta hace tan solo unos aos, no se dispona de informacin que evidenciara su presencia en el medio ambiente. Tales compuestos pueden representar un nuevo problema medioambiental, bien porque pueden presentar algunas de las caractersticas de los COP, o bien como consecuencia de su continua y masiva introduccin en el ciclo del agua. Entre estas substancias, conocidas como contaminantes emergentes, no incluidas en marcos regulatorios de control y prevencin de contaminacin ambiental, se encuentran compuestos biolgicamente activos como frmacos, productos de higiene personal, productos de consumo domstico o de origen agrcola e industrial, que han sido vertidos al medio ambiente sin reparar en las posibles consecuencias. Una caracterstica importante de estos contaminantes es que no necesitan ser persistentes en el medio para causar efectos negativos, ya que sus velocidades de transformacin y/o eliminacin son compensadas por su continua introduccin en el medio ambiente. La incorporacin de los contaminantes tanto prioritarios como emergentes al medio ambiente puede tener lugar mediante diferentes vas, tanto directas, a travs de descargas a las aguas superficiales desde las EDAR o la industria, como indirectas (p.ej., filtraciones, empleo de abonos en agricultura, excrementos de animales, uso de piensos en acuicultura, etc.). De forma esquemtica se representan en la Figura 1 las posibles rutas de entrada de los contaminantes en el medio ambiente, pudindose observar las fuentes de contaminacin, la forma de introduccin en el medio y cmo podran aparecer en el agua de bebida. Hasta la fecha, los procedimientos ms utilizados para llevar a cabo la determinacin de compuestos orgnicos en matrices ambientales acuosas, aplican mtodos de pre-concentracin de la muestra, tales como extraccin en fase slida (SPE) o extraccin lquido-lquido (LLE), seguidos de la separacin y determinacin de los analitos mediante cromatografa de lquidos (LC) o cromatografa de gases (GC), en combinacin con tcnicas de espectrometra de masas (LC-MS o GC-MS). La cromatografa lquida acoplada a espectrometra de masas en tndem (LC-MS/MS) est siendo, por lo general, la tcnica ms empleada en el anlisis de compuestos orgnicos polares y semi-polares en muestras medioambientales. Sin embargo, para la determinacin de analitos no polares, voltiles y trmicamente estables, la metodologa analtica ms utilizada ha sido la cromatografa de gases.
protocolo de tcnicas de muestreo y tcnicas analticas de contaminantes emergentes y prioritarios
Industria
Hospitales
Viviendas
Agricultura
Alcantarilla
EDAR Irrigacin (filtracin, lixiviacin)
Desbordamiento de tormentas
Vertido
Escorrenta
Escapes
Agua superficial
Agua subterrnea
Planta potabilizadora
Agua de bebida
Figura 1. Posibles vas de incorporacin de contaminantes al medio ambiente. Ciclo antropognico del agua con reutilizacin indirecta de la misma (Ternes, 2006)
No obstante, no existe una tcnica de preparacin de muestras universal para todo tipo de muestras y sta depender de la naturaleza de los analitos, de la matriz, y del mtodo del anlisis final seleccionado. Por lo tanto, la seleccin y optimizacin del procedimiento de preparacin de muestras ser un factor clave en el xito final del anlisis, y la eleccin de un procedimiento adecuado influir mucho en la fiabilidad y la precisin del anlisis y por tanto en los resultados.

normativa
protocolo
La Unin Europea ha llevado a cabo, desde los aos 70 y hasta la actualidad, una expansin y reestructuracin de su poltica en materia de agua. Inicialmente la legislacin comunitaria referente al agua estuvo enfocada hacia objetivos y niveles de calidad mnimos para ciertos tipos de agua como las de bao, aguas para la cra de moluscos y las destinadas al consumo humano. Ms tarde, en los aos 90, se trataron de resolver los problemas de contaminacin provenientes de aguas residuales urbanas, del sector agrcola y de las grandes instalaciones industriales, mediante la directiva de Aguas Residuales Urbanas (Directiva
91/271/CEE). sta estableca las medidas a llevar a cabo para la recoleccin y tratamiento de aguas residuales provenientes de asentamientos urbanos y aglomeraciones (de ms de 10.000 habitantes), con la excepcin de los de menor tamao, con el fin de conseguir la mejora de la calidad de las aguas receptoras de aguas residuales tratadas.
Pero es en el ao 2000, con la Directiva Marco del Agua (Directiva 2000/60/EC), cuando realmente se abre una brecha en la poltica de aguas europea, no solamente en lo que se refiere a su alcance en cuanto a la proteccin de la calidad de las aguas, sino en su aplicacin e implementacin. Establece un nuevo rgimen para la prevencin y el control de la contaminacin qumica de aguas superficiales y subterrneas, alcanzando a estuarios y aguas costeras. Su objetivo primordial es prevenir el deterioro del agua en trminos de calidad ecolgica y qumica, as como promover el uso y consumo sostenible, basndose en una proteccin del recurso a largo plazo. Se inicia as, dentro de este proceso, la obligacin de la Comisin a presentar propuestas especficas, para la identificacin de sustancias de preocupacin para su clasificacin como prioritarias o peligrosas y por tanto, de su control ambiental.

toma y tratamiento de la muestra
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El anlisis de este tipo de micro-contaminantes en el medio ambiente requiere de varias etapas. El siguiente esquema (Figura 2) muestra las etapas fundamentales del proceso analtico para el anlisis de compuestos orgnicos en muestras acuosas. Minimizar el nmero de pasos de preparacin de la muestra es muy importante y eficaz, no slo para la reduccin de las fuentes de error, sino tambin para ahorrar tiempo de operacin y costes.
Muestreo
Tratamiento de muestra Pretratamiento: Filtracin Ajuste pH
Anlisis
Calidad de los resultados
Deteccin por: GC-MS-(MS) LC-MS-(MS)
Figura 2. Etapas fundamentales del proceso analtico
3.1. Toma y almacenamiento de muestra

El muestreo se podra definir como el proceso de seleccin de una pequea porcin de material, representativo del medio, la cual ser transportada y manipulada posteriormente en el laboratorio. Es tan importante que, en algunos casos, representa la principal contribucin al error de todo el proceso analtico, siendo esta etapa una de la ms cruciales para obtener datos representativos que permitan la correcta evaluacin de la contaminacin. Por ello, es conveniente una vez establecido el propsito del anlisis, y antes de realizar el muestreo de campo, desarrollar un plan de muestreo. La muestra deber ser homognea, representativa y no modificar las propiedades fisicoqumicas o biolgicas del agua. Se deben tomar preferentemente muestras integradas, de forma que cada muestra integrada est compuesta por la suma de varias muestras recogidas en distintos puntos en el mismo tiempo, o ms o menos seguido, adecuada para grandes extensiones de agua. Sin embargo, las principales dificultades con las que nos enfrentamos a la hora de llevar a cabo la toma de muestras acuosas medioambientales son la falta de representatividad (espacio-temporal) de la matriz y la integridad de la propia muestra hasta su anlisis. Adems, la baja concentracin a la que se encuentran a menudo presentes este tipo de contaminantes, obliga a utilizar elevados factores de pre-concentracin y cantidades elevadas de muestra. El volumen de muestra depende fundamentalmente de las sustancias objeto de estudio y de la concentracin esperada, siendo los volmenes ms habituales los comprendidos entre 1 y 2 litros, aunque los volmenes pueden variar dependiendo de la matriz. Para obtener unos resultados representativos se tiene que asegurar la estabilidad de los analitos durante el muestreo y almacenamiento de la muestra. El correcto almacenamiento de las muestras es crucial para asegurarse de que los analitos no se han
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transformado antes de realizar el anlisis. Debe asegurarse, en la medida de lo posible, que tanto el recipiente como el cierre del envase, no sean capaces de alterar la composicin de las muestras, bien por disolucin, adsorcin o reaccin. Las botellas de vidrio mbar, son las ms recomendadas y frecuentemente utilizadas para el muestreo de micro-contaminantes orgnicos en aguas ambientales. Estos envases evitan la posible degradacin por radiacin UV y deben ser lavadas previamente con agua destilada y la misma agua del muestreo. Sin embargo, para el muestreo de metales en aguas el material de eleccin para el recipiente es el plstico, ya que evita que stos se queden adheridos a las pareces del mismo, as como el intercambio de metales que se producira en una botella de vidrio. El procedimiento habitual para el almacenamiento de las muestras es conservarlas en la oscuridad y en fro (a unos 4C) hasta su anlisis, aunque tambin pueden ser congeladas en botellas medio llenas en posicin horizontal. La adicin de algn tipo de conservantes (que no interfieran en la posterior etapa de anlisis), como la azida sdica o el ajuste del pH a 3 con HCl o H2SO4, es otra estrategia habitualmente utilizada para preservar la integridad de las muestras. De esa manera se inhiben eficientemente los procesos microbianos y adems en el caso de los metales, se evita su precipitacin.
3.2. Pre-tratamiento de muestra

El objetivo principal del pre-tratamiento de la muestra es la conservacin de sta, para asegurar sus propiedades qumico-fsicas, y evitar posibles procesos de degradacin de los analitos. A menudo, previo a la etapa de extraccin y pre-concentracin, es requerido un paso de filtracin de las muestras y otro de ajuste del pH, con el objetivo de preservar la muestra. La filtracin con filtros de fibra de vidrio con dimetro de poro inferior a 1 m o con filtros de tefln (PTFE) de 0.45 m, facilita la posterior preparacin de la muestra y reduce la actividad microbiana. Por otro lado, el ajuste del pH de las muestras se llevar a cabo de acuerdo con sus propiedades analticas.
3.3. Extraccin
La etapa de extraccin puede considerarse como otro punto crtico del anlisis. En la mayora de los casos, la falta de automatizacin hace que sea esta etapa la que consume mayor tiempo, pudiendo superar el 60% del tiempo total del anlisis. Adems, en muchos casos la extraccin lleva asociado un elevado consumo de disolventes orgnicos indeseables debido a su toxicidad. El mtodo de extraccin seleccionado depender de la naturaleza de los compuestos a analizar, as como de sus propiedades fsico-qumicas y de los sistemas analticos disponibles.
Extraccin Lquido-lquido (LLE): La LLE se suele aplicar a la separacin de analitos no polares o semipolares en muestras acuosas. Los disolventes ms empleados son el n-hexano y el ciclohexano. Se lleva a cabo utilizando un embudo de separacin, en el cual se introduce la muestra solvatada y luego se agrega el disolvente inmiscible. El embudo es invertido varias veces para permitir la mezcla de los contenidos. El grifo se debe abrir y cerrar brevemente para permitir la ventilacin de la presin de vapor formada en el embudo durante la agitacin (un exceso de presin puede conducir a derrames). Si se forma una emulsin insoluble, sta se puede acelerar mediante la adicin de unos pocos mililitros de metanol o la adicin de algn tipo de sal, como cloruro sdico. La seleccin del disolvente y el ajuste de la fase acuosa son tambin fundamentales, ya que el pH, el efecto de la adicin de sal y la presencia de reactivos de pares inicos, tienen mucha importancia en el equilibrio de distribucin. Extraccin Slido-lquido (SPE): La SPE permite la extraccin de analitos polares o semipolares. Sus principales objetivos son la limpieza de la muestra, clean-up, la concentracin del analito en sta, y la posibilidad de cambio de disolvente (por ejemplo de acuoso a orgnico). Inicialmente, los analitos quedan retenidos en la fase slida. A continuacin son extrados de sta, con un tampn acuoso o solvente orgnico. A esta etapa se le conoce con el nombre de elucin. La SPE es ms selectiva, reproducible, con un gasto bajo de disolventes orgnicos en comparacin con la LLE y fcilmente automatizable. Muchos factores influyen en la eficiencia del proceso de SPE, pero los dos ms importantes son la capacidad del absorbente y la retencin de los analitos en l. Existe un gran nmero de adsorbentes comerciales, aunque los ms usados para extraer contaminantes emergentes de matrices acuosas son los genricos, concretamente los de slica enlazada (C-18 o C8) y los polimricos (Isolute 101, LiChrolut EN, Isolute ENV+, Oasis HLB, StrataX). Microextraccin en fase slida (SPME). La SPME utiliza una fibra de slice fundida recubierta de un material adsorbente, normalmente es un recubrimiento polimrico, que se utiliza para la extraccin de compuestos orgnicos y/o inorgnicos voltiles derivados del mercurio, arsnico, etc. La fibra se encuentra en el interior de un tubo hueco, de tal forma que sta puede retraerse y sacarse de su interior, quedando as expuesta a la muestra. Su uso implica dos etapas bien diferenciadas, como se muestra en la figura 7: primero la etapa de extraccin (retencin de los analitos en la fase estacionaria mediante procesos de absorcin o adsorcin), que puede llevarse a cabo sumergiendo directamente la fibra en el interior de una disolucin (direct inmersion, DI-SPME), o bien, mantenindola en el espacio en cabeza que est en equilibrio con la disolucin (headspace-SPME, HS-SPME); y, segundo, la etapa de desorcin, que se puede hacer trmicamente (en el inyector de un cromatgrafo de gases), o bien utilizando disolventes orgnicos (de forma manual o acoplado con un cromatgrafo de lquidos). Existen varios tipos de fibras disponibles comercialmente, que difieren en el tipo de adsorbente y en su espesor. La eleccin de la fibra
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depende de la naturaleza fisicoqumica de los compuestos a extraer. La mayora de las fibras puede utilizarse en combinacin con cromatografa de gases (desorcin trmica) y, en menor nmero, con cromatografa lquida (desorcin con disolventes). Extraccin de metales: Aunque en muchos casos el anlisis de metales en muestras de aguas se puede hacer directamente, hay veces que es necesaria una etapa previa de preconcentracin. En este ltimo caso los mtodos de extraccin ms empleados son la extraccin lquido-lquido (LLE) y la extraccin sobre fases slidas. La primera normalmente se realiza complejando el metal con un determinado reactivo presente en la fase hidrofbica, en la segunda la muestra se hace pasar a travs de una columna donde se encuentra la fase slida, que suele ser un agente quelante o una resina de intercambio inico, donde queda retenido el analito.
3.4. Clean-up
El objetivo principal de la etapa de clean-up, es facilitar el anlisis del extracto final obtenido, a travs de la eliminacin de compuestos interferentes de la matriz o de slidos en suspensin, antes del anlisis de la muestra.
reactivos
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Se deben utilizar reactivos de pureza mnima del 95%, y tomarse adems precauciones para evitar la posible contaminacin del agua, disolventes, absorbentes, patrones, etc utilizados. El agua utilizada para el anlisis mediante LC-MS e ICP-MS fue generada a partir de un sistema de agua Ultrapura de Millipore Direct-Q, con una resistencia especfica de 18,2 Mcm.
4.1. Almacenado de soluciones patrn

Las soluciones estndar se deben almacenar en botellas de vidrio en el congelador tomando todas las precauciones convenientes para evitar la contaminacin. Los patrones de concentracin entre 1-2 mg/ml, si se mantiene a -20 C, son generalmente estables durante al menos 1 ao. Antes de abrir los recipientes, permitir que la disoluciones alcancen el equilibrio con la temperatura ambiente. Debemos tambin asegurarnos de que las soluciones diluidas se preparan frecuentemente, y de que stas, no estn directamente expuestas a la luz solar o a la luz ultravioleta por perodos prolongados de tiempo.
anlisis
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El anlisis de micro-contaminantes orgnicos y metabolitos en muestras acuosas ambientales requiere de su identificacin y cuantificacin en matrices complejas y, a niveles muy bajos, de ultra traza. Por lo tanto, las tcnicas analticas tienen que ser especficas para la deteccin de estos analitos y ser lo suficientemente sensibles para permitir alcanzar bajos niveles de cuantificacin. El anlisis de contaminantes puede ser una tarea difcil ya que muchos son muy polares, tienen bajos pesos moleculares o son sensibles a la temperatura. Por consiguiente, para la correcta cuantificacin de este tipo de sustancias en matrices acuosas medioambientales, se necesitan tcnicas analticas avanzadas, como la cromatografa gaseosa o lquida y la espectrometra de masas. Las investigaciones ms recientes van dirigidas hacia la necesidad de analizar ms y ms analitos en un mismo mtodo (mtodos multi-analito), entre los que cada vez se estn incorporando de forma mayoritaria los micro-contaminantes polares e ionizables. Las metodologas analticas multi-analito, se estn convirtiendo en una de las herramientas ms utilizadas y requeridas para conocer de forma fiable y ms amplia, la presencia y destino de estos contaminantes en el medio ambiente y en aguas residuales. Hasta mediados de los 80, la mayora de los mtodos descritos en literatura para el anlisis de frmacos, productos de cuidado personal y pesticidas, no polares, voltiles y semivoltiles, estaban basados en tcnicas de cromatografa gaseosa (GC) (Ternes, 2001). Sin embargo, el anlisis de compuestos muy polares a menudo requera de procesos de derivacin, con el propsito de convertir estos compuestos en sustancias anlogas menos polares y aumentar la estabilidad termal y la volatilidad de los analitos. Desde mediados de los aos 90, la cromatografa lquida acoplada a espectrometra de masas (LC-MS) ha empezado a ser un mtodo rutinario y robusto, a raz del desarrollo de las nuevas tcnicas de ionizacin con electrospray (ES) y la ionizacin qumica a presin atmosfrica (APCI). La eleccin entre GC y LC, por tanto, est generalmente basada en las propiedades fsico-qumicas de los analitos de inters. Respecto a las tcnicas para realizar el anlisis de los metales, entre las ms utilizadas se encuentran la espectroscopa de absorcin atmica con atomizacin electrotrmica (GFAAS), la espectroscopa de emisin atmica con plasma acoplado por induccin (ICP-AES) y la espectrometra de masas con plasma acoplado por induccin (ICP-MS). La utilizacin de equipos de ICP-MS permite realizar un anlisis multielemental con bajos lmites de deteccin, por lo que en la actualidad su uso est muy extendido para realizar el anlisis de metales en muestras acuosas.
procedimiento de anlisis de contaminantes emergentes
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Con el fin de lograr la identificacin y cuantificacin simultnea de un gran nmero de compuestos orgnicos, LC-MS/MS y GC-MS fueron las tcnicas analticas seleccionadas para llevar a cabo la evaluacin de la contaminacin ambiental en diferentes EDAR de Espaa, como parte del programa de investigacin (TRAGUA), financiado por el Gobierno espaol. El trabajo se centr en el anlisis de un grupo de 92 nuevos contaminantes orgnicos, tambin llamados contaminantes emergentes, representativos de diferentes familias de sustancias qumicas, como productos farmacuticos, productos de higiene personal y/o pesticidas, as como la determinacin de algunos de sus principales metabolitos. El inters de llevar a cabo el anlisis de tales sustancias radica en que se trata de sustancias altamente consumidas por la sociedad moderna y que, por lo tanto, pueden ser continuamente introducidas en el medio acutico a travs de plantas de tratamiento de aguas residuales (EDAR). Para llevar a cabo el anlisis de las muestras de aguas residuales, se aplicaron dos procedimientos distintos: una extraccin en fase slida (SPE) combinada con LC-MS y una extraccin lquido-lquido (LLE) combinada con GC-MS.
6.1. SPE-LC-MS/MS
El tratamiento de la muestra por SPE se basa en el uso de cartuchos comerciales OasisTM HLB (200 mg, 6 cc) y un sistema automatizado de procesado de muestras ASPEC XL. En este caso, antes de la extraccin, las muestras eran previamente enriquecidas con 0,1 mg de cada uno de los estndares marcados (13C-phenacetin y 13C-cafeine), y el pH era ajustado a 8 con un 20% NH4OH. Inicialmente, los cartuchos eran acondicionados con 6 ml de metanol, seguido de 5 ml de agua MilliQ a pH 8, a un caudal de 1 mL / min. Despus de la etapa de acondicionamiento, alcuotas de 200 ml de muestra de efluentes de aguas residuales o 100 ml de influentes, eran pasados a travs de los cartuchos, con un caudal de 10 mL / min, para luego lavar con 5 ml de agua desionizada antes de la elucin. Los cartuchos eran secados al vaco durante 5 minutos y eluidos con 2 x 4 ml de metanol, a 1 ml / min. Finalmente, los extractos eran analizados por cromatografa de lquidos. Antes del anlisis, una dilucin 1:1 con ACN/H2O (10:90) era aplicada. Un triple cuadrupolo/trampa lineal de iones 3200 QTRAP MS/MS, equipado con una fuente turbo de iones (AB Sciex Instruments, Foster City, CA), fue el equipo utilizado para el anlisis de los analitos polares o semi-polares. Todos los parmetros y condiciones de operacin utilizados para el anlisis han sido descritos en detalle (Martnez Bueno et al., 2010 y 2007). La optimizacin de los parmetros del MS (declustering potential (DP), entrance potential (EP), para el ion precursor y collision energy (CE), collision cell exit potential (CXP) para los iones obtenidos) se realiz mediante anlisis por inyeccin en flujo para cada compuesto. La siguiente tabla muestra los valores de los parmetros optimizados y las transiciones SRM seleccionadas.
Tabla 1. Valores de los parmetros optimizados con el mtodo desarrollado por LC-QLITMS/MS.
tr Precursor (min) Ion (m/z) 5,1 5,8 6,8 6,8 6,8 6,9 7,0 7,5 7,9 9,1 10,0 10,3 10,4 10,9 12,0 12,1 14,3 16,6 16,8 17,0 17,2 17,4 17,6 17,7 18,1 18,2 18,3 18,6 19,0 19,2 19,4 20,6 20,8 20,9 163,1 177,0 240,3 267,4 338,0 226,3 366,2 315,3 273,3 218,2 232,2 204,2 181,2 152,2 172,1 300,3 407,1 251,2 310,2 195,1 246,2 232,2 256,2 291,3 250,1 320,0 362,3 332,3 456,1 247,4 445,3 268,2 219,2 279,0
COMPUESTOS POSITIVO Nicotine Cotinine Salbutamol Atenolol Famotidine Terbutaline Amoxicilin Ranitidine Sotalol 4-MAA 4-DAA 4-AA 1,7-dimethylxanthine Acetaminophen Metronidazole Codeine Lincomycin Sulfadiazine Nadolol Caffeine 4-AAA 4-FAA Sulfathhiazole Trimethoprim Sulfapyridine Norfloxacin Ofloxacin Ciprofloxacin Cefotaxime Mepivacaine Tetracycline Metoprolol Primidone Sulfamethazine
DP 40 45 44 330 25 47 32 38 45 35 48 45 50 40 35 35 50 40 45 40 46 45 45 45 47 50 47 50 40 28 40 30 35 42
SRM1 117,2 80,0 148,2 145,2 189,3 152,2 114,2 176,2 133,2 56,1 113,2 56,2 124,2 110,1 128,1 165,2 126,3 92,1 254,4 138,2 83,1 214,2 156,0 230,2 156,1 276,4 261,3 231,2 324,1 98,1 154,2 116,2 91,1 186,2
CE1 34 36 26 35 24 20 27 21 37 30 17 30 25 20 20 50 45 35 20 25 40 18 18 28 21 23 33 48 15 23 37 25 35 20
SRM2 130,1 98,0 222,2 190,2 259,4 107,1 208,0 130,1 213,2 97,2 111,2 159,2 69,2 64,8 82,1 199,2 359,3 156,3 236,1 110,2 228,1 104,1 92,2 123,2 108,3 233,3 318,3 314,3 396,1 70,1 410,2 159,2 162,3 124,1
CE2 27 26 14 20 15 40 15 30 22 16 21 16 43 45 30 35 23 17 25 30 18 28 34 30 34 30 25 25 10 53 28 28 16 30
SRM3 84,1 166,2 116,1 70,7 125,2 349,1 224,2 255,2 159,2 98,2 94,2 96,1 93,0 111,1 153,2 108,1 201,2 123,1 104,2 83,1 108,4 261,2 184,3 302,3 245,1 241,3 337,1 133,2 119,2 156,1
CE3 27 16 25 40 32 10 20 14 17 25 28 32 35 30 55 30 30 40 28 28 33 30 20 18 32 20 40 30 20 26
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COMPUESTOS POSITIVO Azithromycin Antipyrine Omeprazole Venlafaxine Propanolol Ifosfamide Sulfamethoxazole Cyclophosphamide monohydrate Erythromycin Carbamazepine 10,11-epoxide Lanzoprazole Citalopram hydrobromide Paroxetine Clarithromycin Amitriptyline hydrochloride Carbamazepine Fluoxetine Simazine Ketorolac Clomipramine hydrochloride Clotrimazole Propyphenazone Methylprednisolone Loratadine Isoproturon Atrazine Ketoprofen Naproxen Diazepan Biphenylol Indomethacine Fenofibric acid
tr Precursor (min) Ion (m/z) 21,0 21,2 22,2 23,0 24,4 24,5 24,8 24,9 25,1 25,2 25,7 25,9 26,9 28,1 28,5 28,6 28,8 28,9 30,0 30,1 30,4 30,9 31,1 31,4 32,3 32,5 33,0 33,3 35,4 35,6 37,4 37,6 749,6 189,2 346,3 278,4 260,0 261,1 254,2 261,1 734,6 253,2 370,0 325,3 330,0 784,4 278,4 327,2 310,3 202,2 256,3 315,2 344,9 231,3 475,3 383,1 207,3 216,1 255,2 231,2 285,2 171,2 358,2 319,1
DP 65 48 35 50 35 60 47 55 58 75 45 42 70 45 30 50 30 45 70 40 30 55 40 50 45 45 47 35 50 40 50 65
SRM1 83,1 77,1 198,2 58,1 116,2 91,9 108,2 140,1 158,3 180,2 252,2 109,1 192,2 158,4 233,1 194,3 44,2 124,2 105,1 58,1 277,3 189,2 457,2 337,3 72,1 174,1 209,2 185,3 154,2 153,2 139,1 233,1
CE1 84 51 15 45 23 33 30 29 40 40 15 30 25 35 22 25 25 23 25 60 15 22 9 29 35 24 16 20 35 23 25 22
SRM2 158,2 104,1 151,2 260,4 183,2 154,3 156,1 120,1 576,5 236,2 119,2 262,1 151,2 590,4 91,2 192,1 148,2 132,0 178,1 86,1 165,0 201,2 321,1 267,2 134,2 104,1 105,1 170,1 193,2 152,0 174,3 139,1
CE2 51 32 25 15 23 29 21 31 28 11 27 25 30 18 35 28 10 26 34 27 43 30 17 40 29 40 33 32 40 37 15 42
SRM3 591,4 106,2 136,2 121,3 155,2 182,2 147,2 233,2 316,1 210,2 205,4 234,1 123,2 558,4 117,0 104,1 242,1 241,2 339,3 259,4 165,1 132,1 177,2 222,3 127,2 121,0
CE3 42 40 35 38 30 21 22 16 25 20 25 35 30 25 30 34 27 40 16 40 19 31 22 35 45 40
COMPUESTOS POSITIVO Tamoxifen Mefenamic acid Chlorfenvinphos Mevastatin Chlorpyriphos methyl Simvastatin Fenofibrate NEGATIVO Salicylic acid Furosemide Clofibric acid Paravastatin Benzafibrate Hydrochlorothiazide Bisphenol A Diclofenac Fenoprofen Diuron Ibuprofen Chlorophene Gefibrozil
tr Precursor (min) Ion (m/z) 38,1 40,4 40,5 41,2 43,4 45,1 46,5 3,1 11,1 11,3 11,6 11,8 12,0 14,0 14,1 14,5 14,7 15,6 16,0 16,5 372,2 242,2 359,1 391,3 322,1 419,1 361,2 137,1 329,1 213,0 423,1 360,1 296,0 227,1 294,0 241,1 231,1 205,1 217,0 249,2
DP 50 36 55 55 43 45 60 28 35 30 43 30 56 60 25 17 50 30 61 35
SRM1 72,1 180,2 155,2 229,3 125,1 199,1 139,1 93,0 205,1 127,1 100,8 274,2 205,0 133,0 250,0 197,1 186,1 161,2 181,2 121,0
CE1 42 53 15 20 21 15 35 25 30 25 47 30 29 35 15 13 23 10 27 25
SRM2 129,0 224,2 127,1 185,2 290,1 285,3 233,1 65,0 285,1 85,0 321,1 154,1 269,1 211,2 214,1 93,1 149,8 153,0 127,1
CE2 35 34 21 25 19 15 25 45 20 17 22 40 25 40 28 48 33 30 15
SRM3 91,1 209,2 205,1 159,3 109,1 243,1 121,1 126,2 143,0 85,0 126,0 92,8 122,1 101,0 -
CE3 35 20 24 30 30 15 40 45 32 35 41 40 46 43 -
DP: declustering potential (V); CE: collision energy (eV); EP: entrance potencial, 5V; CXP: collision cell exit potencial, 2,5 V; SRM 1: quantitation; SRM 2-3: confirmation
Cada anlisis se llev a cabo en los modos de trabajo positivo y negativo. Los anlisis fueron realizados en modo selection reaction monitoring (SRM). As mismo, fue necesario desarrollar un experimento adicional para llevar a cabo la correcta identificacin del compuesto ibuprofeno, para el cual era necesario obtener una mayor informacin estructural con el fin de lograr su adecuada confirmacin. Para este caso, se tuvo que trabajar en el modo de operacin enhanced product ion (EPI) que permite la obtencin de iones producto (ver figura 3).
p. 22-23
Figure 3. (A) Total ion chromatogram (TIC) en SRM, (B) extracted ion chromatogram (XIC) para el ibuprofen, y (C) espectro en modo EPI del ibuprofen, obtenido utilizando un sistema LC-QLIT-MS/MS.
Por otra parte, un sistema de tiempo de vuelo acoplado a un detector de espectrometra de masas LC-ESI-TOF MS (MSD-TOF, Agilent Technologies, Santa Clara, CA), en ambos modos de ionizacin (positiva y negativa), fue tambin utilizado para confirmar los compuestos polares o semi-polares detectados y llevar a cabo la identificacin de otros nuevos contaminantes, inicialmente no incluidos en el mtodo, mediante anlisis retrospectivos. Todos los parmetros y condiciones de operacin utilizados para el anlisis han sido descritos en detalle (Martnez Bueno et al., 2007). Un segundo spray ortogonal con una solucin de referencia era utilizado para llevar a cabo una calibracin continua de las masas de referencia: m/z 121.0509 y 922.0098 (anlisis en modo positivo), o m/z 119.036 y 966.000 (en modo negativo). Los espectros de masas se adquirieron en el rango de m/z de 50-1000, a una velocidad de barrido de
1 s/espectro. Los datos de los espectros de masas registrados eran procesados mediante el software de Applied Biosystems/MDS-Sciex analista QS software (Frankfurt, Alemania) y la aplicacin del software para masa exacta de Agilent MSDTOF. Todas las posibles composiciones elementales de los iones fragmento eran calculados con una desviacin mxima de 5 ppm a partir de la masa exacta medida. La separacin de los analitos, en ambos sistemas cromatogrficos, se realiz con un HPLC (serie 1100, Agilent Technologies, Palo Alto, CA) equipado con una columna C-18 analticas, 250 mm x 3,0 mm de dimetro y 5 micras (ZORBAX SB, Agilent Technologies). Para el anlisis en modo positivo, los compuestos fueron analizados empleando acetonitrilo (AcN) y agua MiliQ al 0,1% de cido frmico (pH 3,5), y AcN y agua MiliQ fueron las fases mviles utilizadas para el anlisis en modo negativo. Para el anlisis en modo positivo, el mtodo de cromatografa comenzaba con un 10% de AcN, y se mantena constante durante 2 min. Despus, un gradiente lineal aumentaba la proporcin de AcN hasta el 100% en 40 min, tras lo cual la composicin se mantena durante 10 min, todo ello a un flujo de 0,2 mL/min. Por otro lado, los compuestos analizados en forma negativa eran separados utilizando AcN y agua MilliQ (pH 6,5) con un flujo de 0,3 mL/min. El gradiente comenzaba con un 30% de AcN hasta llegar al 100%, en 7 minutos, tras lo cual la composicin se mantena durante 8 minutos. El volumen de inyeccin fue de 20 l en ambos modos.
6.2. LLE-GC-MS
Los compuestos no polares eran extrados de las muestras de aguas residuales por LLE. En este caso, 500 ml de muestras (no filtradas) eran ajustadas a pH 3 con HCl 2N y extradas en dos etapas, utilizando n-hexano (100/50 ml). En la primera etapa, las fases inmiscibles eran agitadas durante 3 minutos, seguida de una segunda etapa de agitacin de 2 minutos. Para facilitar la extraccin, eran aadidos 5 g de cloruro de sodio. La fase orgnica era recogida y pasada a travs de sulfato de sodio anhidro para eliminar los restos de agua, para despus ser evaporadas usando un Bchi Syncore Polyvap System (Flawil, Suiza) hasta un volumen final de 3 ml, antes de su anlisis por cromatografa de gases acoplada a espectrometra de masas (GC-MS). Un cromatgrafo de gases Agilent 7890 series combinado con un detector de masas Agilent 5975 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) fue el equipo utilizado para la determinacin de compuestos lipoflicos o no-polares en aguas residuales. Las muestras eran analizadas en el modo de trabajo SIM selection ion monitoring. Todas las condiciones operativas utilizadas para el anlisis pueden verse en la siguiente publicacin (Gmez et al., 2009). Los analitos fueron separados en una columna capilar Agilent HP-5MSi (5% biphenyl/95% dimetilsiloxano), 15 m x 0,25 mm, 0,25 mm espesor de la pelcula. Un limitador desactivado de slice fundida (0,171 m x 0,120 mm de dimetro x 0,1 m espesor de la pelcula) se coloc en la lnea de transferencia, que esta-
p. 24-25
ba conectado a la columna capilar a travs de un dispositivo QuickSwap. Este dispositivo es una conexin de purgado en forma de T, que se coloca entre el extremo de la columna de GC y la entrada de la lnea de transferencia de MSD. Las condiciones de operacin de entrada fueron: volumen de inyeccin 10 l. El programa de temperatura se fij en 79 C durante 0,25 min, programada desde 300 C a 710 C min-1, y se mantuvo a esta temperatura durante 2 min. El flujo del gas portador helio se mantuvo a una presin constante de 17,296 psi, mientras que la temperatura del horno era programada de 70 C a 280 C. El programa de temperatura del horno fue de 70 C durante 1 min, programada desde 150 C a 50 C min-1, y luego a 200 C a 6 C min-1 y, finalmente, desde 280 C a 16 C min-1, durante 5 min. Los espectros de masas por impacto electrnico (EI) se obtuvieron a 70 eV, monitorizando un rango de masas desde 50 a 400 m/z. La fuente de iones y el analizador de cuadrupolo se mantuvieron a temperaturas fijas de 230 y 150 C, respectivamente. La siguiente tabla (Tabla 2) muestra los iones usados para la identificacin y cuantificacin de los compuestos de inters en modo de funcionamiento SIM.
Tabla 2. Tiempos de retencin (min) y los iones de las masas utilizados para la identificacin y cuantificacin de los compuestos de inters seleccionados.
Compound BHT Celestolide Phantolide TCPP Traseolide Galaxolide Musk xylene Tonalide Musk ketone 4-MBC Benzophenone-3 Triclosan Endosulfan Endosulfan 2-EHMC Endosulfan sulfate 2,3,7,8-TCDD Octocrylene BHT Rt (min) 4.359 6.243 6.711 7.151 7.785 7.938 7.947 7.968 9.528 10.499 10.065 11.050 11.308 12.582 11.890 13.392 13.532 15.571 4.359 Iones de cuantificacin e identificacin (m/z) (A.R %) 205 (100), 220 (26), 177 (10) 229 (100), 244 (44), 173 (22) 229 (100), 244 (24), 230 (17) 125 (100), 157 (38), 277 (37) 215 (100), 258 (18), 173 (17) 243 (100), 258 (31), 213 (30) 282 (100), 283 (14), 297 (9) 243 (100), 258 (29), 244 (19) 279 (100), 294 (27), 280 (20) 254 (100), 211 (48), 239 (31) 227 (100), 151 (84), 228 (66) 288 (100), 290 (95), 218 (82) 241 (100), 195 (92), 207 (84) 195 (100), 237 (85), 207 (82) 178 (100), 161 (52), 290 (9) 272 (100), 274 (84), 387 (66) 322 (100), 320 (79), 324 (48) 249 (100), 204 (96), 232 (84) 205 (100), 220 (26), 177 (10)
BHT: butylated hydroxytoluene; TCPP: Tris(2-chloroisopropyl) phosphate; 4-MBC: 4methylbenzyledene camphor; 2-EHMC: 2-ethylhexyl methoxycinnamate; 2,3,7,8-TCDD: 2,3,7,8tetrachlorodibenzo-p-dioxin. Negrita: Iones de cuantificacin. A.R %: Abundancia relative
Figura 4. Cromatogramas obtenidos mediante GC-MS en modo SIM/Scan, a partir de una muestra de aguas residuales fortificada a una concentracin de 50 ng/L

procedimiento de anlisis de contaminantes prioritarios
protocolo
En este caso se escogieron las tcnicas analticas GC-MS/MS e ICP-MS para evaluar la contaminacin por sustancias prioritarias de diferentes tipos de aguas recogidas en una finca regada con agua residual tratada en Granada, como parte del programa de investigacin TRAGUA. Estas tcnicas proporcionan los requerimientos necesarios para la identificacin inequvoca y cuantificacin de un nmero elevado de compuestos orgnicos, y metales, respectivamente.
7.1. Compuestos orgnicos

Se desarroll un mtodo multiresiduo para analizar 57 contaminantes orgnicos, de los cuales 13 eran hidrocarburos aromticos policclicos y el resto pesticidas o sustancias relacionadas con la produccin y degradacin de los mismos. La importancia de la medida de estos compuestos radica en que la mayora estn incluidos en la lista de sustancias prioritarias establecida por la Directiva 2008/105/CE del Parlamento europeo, relativa a las normas de calidad ambiental en el mbito de la poltica de aguas. En dicha directiva se considera necesaria la mejora de los conocimientos y datos disponibles sobre el origen de las sustancias prioritarias y las vas de contaminacin, para lo que es necesario el desarrollo de metodologas analticas que permitan analizar este tipo de contaminantes en matrices acuosas de distinta naturaleza, como el agua de rio o agua residual. Para llevar a cabo el anlisis de las muestras se desarrollaron y evaluaron 3 mtodos de tratamiento de muestra distintos como son la LLE, SPE y microextraccin por fase slida en espacio de cabeza (HS-SPME), para su posterior anlisis por GC-MS/MS
7.1.1. LLE La muestra sin filtrar se acidifica con H2SO4 1M hasta pH 3 y se le aaden 250 mg de NaCl. Una alcuota de 200 ml de agua se carga en un embudo de decantacin de 250 ml, se aaden 25 ml de n-hexano y se agita vigorosamente durante 3 minutos. Se separan las fases y la acuosa se vuelve a extraer dos veces ms con 25 ml de n-hexano. Se juntan las fases orgnicas y se secan con Na2SO4 anhidro. A continuacin el extracto se evapora hasta casi sequedad en un rotavapor (Bchi Rotavapor R200) equipado con un bao de agua (Bchi B-490) y un controlador del vaco (Bchi V800). Finalmente el residuo se reconstituye con nhexano hasta un volumen final de 1 ml (preconcentracin 200:1). A continuacin se muestra un esquema del procedimiento en la figura 5.
p. 28-29
Figura 5. Esquema del procedimiento de extraccin lquido-lquido previo anlisis del multiresudio de sustancias prioritarias por GC-MS/MS.
1 ml n-henano 5-Anlisis por GC-QqQMs Muestra sin filtrar Aadir 250 mg NaCl 1-Ajuste pH 3-4 200 ml de muestra 3x25 ml n-hexano 2-LLE Evaporar hasta casi sequedad 3-Evaporacin Preconcentracin 200:1 4-Reconstitucin
7.1.2. SPE La muestra filtrada se somete al proceso de extraccin con cartuchos Bond Elut C18 (6mL, 500 mg). El primer paso de la extraccin es el acondicionamiento de la fase slida dejando pasar a vacio primero 6 mL de MeOH, despus 6 mL de una mezcla AcEt-diclorometano (1:1), posteriormente se vuelven a pasar 6 mL de MeOH y finalmente 6 mL de agua ultrapura. A continuacin se cargan 200 mL de muestra una velocidad de 3-5 mL/min. Una vez que pasa todo el volumen de muestra, se lavan los cartuchos con 3 mL de agua ultrapura y se secan a vacio durante 5 minutos. Seguidamente, se eluyen los compuestos retenidos en la fase slida con dos alcuotas de 4 mL de la mezcla AcEt-diclorometano (1:1). A continuacin, se evapora el disolvente hasta casi sequedad, utilizando un Turbo Vap LV, que utiliza una corriente de Nitrgeno a una presin de 5 psi junto con un bao de agua a 27 C. El extracto final se reconstituye con n-hexano hasta un volumen final de 1 mL, por lo que la preconcentracin que se consigue es de 200:1. A continuacin se muestra la figura 6 con el esquema del procedimiento.
Figura 6. Esquema del procedimiento de extraccin por fase slida previo al anlisis del multiresudio de sustancias prioritarias por GC-MS/MS.
Cartuchos Bond elut C18
Reconstitutir en 1 ml n-hexano 5-Anlisis por GC-QqQMs Evaporar hasta casi sequedad 3-Evaporacin Preconcentracin 200:1 4-Reconstitucin
1-Filtracin
2-SPE
7.1.3. HS-SPME En un vial de vidrio de espacio de cabeza de 20 mL se introducen 10 mL de muestra al 10% de MeOH, 1 g de NaCl y un imn para agitarla. A continuacin se calienta la muestra hasta 80 C (temperatura de incubacin) y se introduce la fibra (Poliacrilato) en el vial de forma automtica, dejndose transcurrir 50 minutos (tiempo de incubacin) para conseguir el equilibrado termodinmico entre las fases presentes y adsorcin de los analitos en la fibra. En estas condiciones, la cantidad de cada compuesto en el volumen de espacio de cabeza es proporcional a su concentracin en la matriz. Pasado ese tiempo de incubacin, los analitos son desorbidos en el inyector del cromatgrafo de gases a una temperatura de 280 C. En la siguiente figura (figura 7) se muestra un esquema del proceso de extraccin con la fibra polimrica.
Figura 7. Proceso de adsorcin y desorcin de los analitos por microextraccin por fase slida (fibra polimrica).
7.1.4. Anlisis por GC-MS/MS Se utiliz un un Cromatgrafo de gases (Varian CP-3800), equipado con control de flujo electrnico (EFC), un inyector capilar universal 1079 en el que se utiliza un liner fritado (Restek) y un automuestreador (Combipal autosampler, CTC Analytics). La temperatura del inyector se mantiene durante 2 minutos a 280 C, despus sube hasta 325 C a una velocidad de 40 Cmin-1, mantenindose en este valor durante 10 minutos. La separacin de los analitos se lleva a cabo utilizando una columna capilar Varian FactorFour VF-5-ms (30m x 0.25mm
p. 30-31
i.d. x 0.25 m) y He como gas portador a un flujo de 1.0 mLmin-1. La rampa de temperatura utilizada comienza a 70 C durante 2 minutos, despus sube hasta 180 C a una velocidad de 10 C min-1, a continuacin sube hasta los 260 C a 6 C min-1 y por ltimo se alcanzan 300 C a una velocidad de 4 C min-1, para un tiempo total de anlisis de 43 minutos. El cromatgrafo de gases est acoplado a un espectrmetro de masas de triple cuadrupolo (Varian 300-MS) equipado con una fuente de ionizacin que opera en modo de impacto electrnico (EI, 70eV) con una corriente de filamento de 50 A y el voltaje del multiplicador se mantiene en mximo EDR. Las temperaturas de la lnea de transferencia, fuente de iones y manifold son 280, 250 y 40 C, respectivamente. Se establece un tiempo de retardo para el encendido del detector de 6.4 minutos para evitar daos en la instrumentacin. El espectrmetro de masas se autocalibra cuando sea necesario con Perfluorotributylamine (PFTBA). Se utiliza Ar como gas de colisin. El modo de trabajo del espectrmetro es MRM (multiple reaction monitoring) para lo que se hizo una optimizacin previa de las condiciones necesarias para el correcto anlisis de cada analito (ver tabla 3). El control del instrumento, adquisicin y evaluacin de los datos se lleva a cabo utilizando el software Varian MS Workstation (versin 6.9).
Tabla 3. Compuestos analizados y condiciones experimentales optimizadas para el mtodo MRM.

Precursor Product ion ion (m/z) (m/z) 181.8 181.8 181.8 7.834 6.50-9.20 1,2,4-TCB 181.8 181.8 181.8 8.313 6.50-9.20 Hexachlorobutadiene 224.9 224.9 224.9 8.372 6.50-9.20 1,2,3-TCB 181.8 181.8 181.8 8.560 6.50-9.20 Isoproturon 161.1 161.1 161.1 8.723 6.50-9.20 Chlorlotoluron 167.0 167.0 167.0 146.8 108.8 110.9 108.8 146.8 110.9 189.8 154.9 152.7 108.8 146.8 110.9 146.1 128.0 91.0 132.0 77.0 104.0 Dwell time (s) 0.042 0.042 0.042 0.042 0.042 0.042 0.042 0.042 0.042 0.042 0.042 0.042 0.042 0.042 0.042 0.042 0.042 0.042 Collision Energy (ev) 20 30 25 30 20 25 20 25 45 30 20 25 10 20 30 10 30 20 33.4 11.8 49.1 15.3 98.7 61.4 36.1 9.7 99.7 59.8 99.3 54.4 Ratio Q/q (%)
tR (min) 7.048
Window (min)
Compounds
Q, q1, q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2
6.50-9.20 1,3,5-TCB
tR (min) 9.795
Window (min)
Compounds
Precursor Product ion ion (m/z) (m/z) 186.9 186.9 186.9 123.9 158.8 96.8 152.1 151.1 214.8 142.0 107.8 165.1 166.0 264.0 206.0 159.8 105.0 172.1 94.0 182.8 146.9 108.8 248.7 213.0 178.7 173.0 186.1 138.0 57.9 200.1 138.1 58.0 214.1 187.0 182.8 144.8 108.9 182.8 144.8 108.9
Q, q1, q2 Q q1 q2 Q q1 Q q1 q2 Q q1 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2
Dwell time (s) 0.167 0.167 0.167 0.100 0.100 0.100 0.100 0.100 0.100 0.100 0.083 0.083 0.083 0.083 0.083 0.083 0.083 0.083 0.083 0.083 0.083 0.083 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033
Collision Energy (ev) 20 10 35 10 15 20 40 50 10 10 10 15 25 10 10 15 10 25 35 20 30 50 10 10 15 10 10 15 15 10 10 10 25 35 10 25 35
Ratio Q/q (%) 68.8 14.0 43.5 80.5 39.4 66.6 23.8 19.3 84.3 82.4 41.1 22.8 84.2 34.6 52.4 43.2 59.6 20.6 55.8 48.9 40.3 26.0 40.6 24.1
9.20-10.50 Diuron
11.909 10.50-12.20 Acenaphtylene 12.595 12.20-14.00 Pentaclhorobenzene
152.0 152.0 249.8 249.8 249.8
13.682 12.20-14.00 Fluorene 14.597 14.00-15.10 Trifluralin
166.0 166.0 306.1 306.1 306.1
14.715 14.00-15.10 Atrazin desethyl
172.0 187.0 172.0
15.528 15.10-16.00 Alfa-HCH
218.9 218.9 218.9
15.612 15.10-16.00 Hexaclorobenzene
283.8 283.8 283.8
16.340 16.00-17.40 Simazin
201.0 201.0 201.0
16.504 16.00-17.40 Atrazin
215.1 215.1 215.1
16.633 16.00-17.40 Propazine
229.0 229.0 229.0
16.785 16.00-17.40 Beta-HCH
218.9 218.9 218.9
16.949 16.00-17.40 Ganma-HCH
218.9 218.9 218.9
p. 32-33
tR (min)
Window (min)
Compounds
Precursor Product ion ion (m/z) (m/z) 214.1 214.1 214.1 132.0 119.0 136.1 179.1 137.0 122.0 178.1 152.1 178.1 152.1 182.8 144.8 108.9 160.0 130.9 132.0 109.11 127.1 246.0 237.0 272.1 143.0 58.0 185.0 212.1 185.1 170.0 111.2 258.0 314.0 286.0 192.7 190.8 228.0 109.0 81.0 142.0
Q, q1, q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 Q q1 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2
Dwell time (s) 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.250 0.250 0.250 0.250 0.167 0.167 0.167 0.050 0.050 0.050 0.050 0.050 0.050 0.050 0.050 0.050 0.050 0.050 0.050 0.167 0.167 0.167 0.056 0.056 0.056 0.056 0.056 0.056 0.056 0.056 0.056
Collision Energy (ev) 10 10 10 15 15 25 10 15 10 15 10 25 35 10 20 15 10 10 5 15 5 35 10 10 10 10 15 25 15 10 5 30 35 20 10 30 5
Ratio Q/q (%) 57.1 45.5 88.8 79.5 24.9 17.9 29.9 20.8 61.4 55.2 14.0 14.0 78.5 11.3 73.7 51.6 96.2 18.0 55.3 52.9 68.2 58.0 46.9 24.7
17.125 16.00-17.40 Terbutilazine
17.312 16.00-17.40 Diazinon
304.0 179.0 179.0
17.665 17.40-18.20 Phenantrene 17.960 17.40-18.20 Anthracene 18.593 18.20-19.50 Delta-HCH
178.0 178.0 178.0 178.0 218.9 218.9 218.9
20.093 19.50-20.80 Alachlor
188.1 188.1 188.1
20.113 19.50-20.80 Parathion methyl
263.0 263.0 263.0
20.357 19.50-20.80 Heptachlor
272.0 272.0 272.0
20.549 19.50-20.80 Ametryn
227.0 227.0 227.0
21.236 20.80-21.50 Terbutrin
241.1 241.1 241.1
21.875 21.50-22.70 Chloropyrifos ethyl
314.0 314.0 314.0
21.917 21.50-22.70 Aldrin
262.8 262.8 262.8
22.263 21.50-22.70 Parathion ethyl
291.0 291.0 291.0
tR (min)
Window (min)
Compounds
Precursor Product ion ion (m/z) (m/z) 262.8 262.8 262.8 192.7 190.8 228.0 267.0 159.0 295.0 267.0 159.0 295.0 95.5 67.0 255.1 202.0 201.2 160.1 194.9 230.9 246.0 248.0 283.0 192.7 190.8 227.9 300.0 317.0 252.0 192.7 190.8 228.0 160.0 266.7 230.8 129.0 157.0 185.0 252.9 288.9 205.7
Q, q1, q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 q2
Dwell time (s) 0.056 0.056 0.056 0.056 0.056 0.056 0.056 0.056 0.056 0.056 0.056 0.056 0.037 0.037 0.037 0.037 0.037 0.037 0.037 0.037 0.037 0.037 0.037 0.037 0.037 0.037 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033
Collision Energy (ev) 30 30 20 10 10 30 10 10 30 10 20 10 10 10 15 10 10 15 10 10 30 35 15 10 10 15 35 35 20 10 15 10 25 15 10 10 10 35
Ratio Q/q (%) 68.2 54.2 40.6 30.4 38.6 29.9 39.7 18.6 46.8 79.9 48.5 74.7 21.4 67.7 50.3 50.1 27.7 64.5 56.1 89.7 50.4 33.6 32.9 88.7 44.8
23.140 22.70-24.50 Isodrin
23.286 22.70-24.50 Chlorfenvinfos A
323.0 323.0 323.0
23.705 22.70-24.50 Chlorfenvinfos B
323.0 323.0 323.0
24.089 22.70-24.50 Procimydone
283.0 283.0 283.0
24.975 24.50-26.40 Pyrene 24.984 24.50-26.40 Alfa-endosulfan
202.1 202.1 338.8 338.8 338.8
25.860 24.50-26.40 4,4-DDE
318.0 318.0 318.0
26.006 24.50-26.40 Dieldrin
262.8 262.8 262.8
26.152 24.50-26.40 Oxyfluorfen
361.0 361.0 361.0
26.755 26.40-28.85 Endrin
262.8 262.8 262.8
27.198 26.40-28.85 Beta-endosulfan
338.8 338.8 338.8
27.339 26.40-28.85 Ethion
231.0 231.0 231.0
28.526 26.40-28.85 Endosulfan sulfate
386.8 386.8 386.8
p. 34-35
tR (min)
Window (min)
Compounds
Precursor Product ion ion (m/z) (m/z) 235.0 235.0 235.0 164.9 200.0 199.0 245.0 271.0 55.9 228.0 226.0 228.0 226.0 169.0 212.1 184.0 252.0 250.0 252.0 250.0 252.0 250.0 93.0 174.0 90.9 276.0 274.0 278.0 250.0 276.0 274.0
Q, q1, q2 Q q1 q2 Q q1 q2 Q q1 Q q1 Q q1 q2 Q q1 Q q1 Q q1 Q q1 q2 Q q1 Q q1 Q q1
Dwell time (s) 0.033 0.033 0.033 0.062 0.062 0.062 0.062 0.062 0.062 0.062 0.062 0.062 0.062 0.250 0.250 0.250 0.250 0.250 0.250 0.167 0.167 0.167 0.125 0.125 0.125 0.125 0.125 0.125
Collision Energy (ev) 25 10 15 10 10 20 10 25 10 25 25 10 15 10 30 10 30 10 30 20 10 25 10 40 10 45 10 40
Ratio Q/q (%) 27.9 26.6 59.4 46.6 36.1 36.4 59.7 44.6 27.5 27.5 28.0 78.1 60.8 22.6 2.9 23.5
28.646 26.40-28.85 4,4-DDT
30.030 28.85-30.70 Iprodion
314.0 314.0 314.0
30.320 28.85-30.70 Benzo(a)anthracene 30.466 28.85-30.70 Chrysene 30.507 28.85-30.70 Metoxychlor
228.0 228.0 228.0 228.0 227.0 227.0 227.0
34.698 30.70-37.50 Benzo(b)fluoranthene 34.810 30.70-37.50 Benzo(k)fluoranthene 35.987 30.70-37.50 Benzo(a)pyrene 38.378 37.50-39.50 Deltamentrin
252.0 252.0 252.0 252.0 252.0 252.0 252.9 252.9 252.9
40.367 39.50-43.33 Indene(1,2,3-cd)pyrene 40.520 39.50-43.33 Dibenzo(a,h)anthrazene 41.326 39.50-43.33 Benzo(g,h,i)perylene
276.0 276.0 278.0 278.0 276.0 276.0
Los 3 mtodos de extraccin se desarrollaron de forma satisfactoria, obtenindose buenos porcentajes de recuperacin para la mayora de compuestos. A continuacin se muestra una tabla (tabla 4) donde se comparan las distintas condiciones de los mtodos de extraccin desarrollados.
Tabla 4. Estudio comparativo de los 3 procedimientos de extraccin para el anlisis de 57 contaminantes por GC-MS/MS
PARMETRO Nmero de compuestos analizables Tiempo de tratamiento + tiempo de anlisis por muestra Consumo de disolvente por muestra ~ 73 min 76 mL n-hexano ~ 53 min 12 mL MeOH 14 mL EtAc+DCM (1:1) LODs-LOQs Recuperacin Precisin (RSD) Rango lineaL Linearidad (r2 ) 0.03 5.10 ng L-1 70-110 % 3 -15 % 1-500 ng/L Al menos 0.999 para la mayora de compuestos 0.03 5.00 ng L-1 70-120% 1-10 % 1-500 ng/L Al menos 0.999 para la mayora de compuestos 0.10 150.00 ng L-1 83-119% 7-20% 1-500 ng/L Al menos 0.99 para la mayora de compuestos ~ 60 min 1 mL MeOH LLE 57 SPE 57 HS-SPME 49
Teniendo en cuenta este estudio comparativo se puede concluir de forma general que la HSSPME es el procedimiento menos nocivo para el medioambiente, la SPE permite una mayor frecuencia de muestreo y la LLE da lugar a los lmites de deteccin ms bajos.
7.2. Metales
Se seleccionaron para el anlisis Ni, Hg, Pb y Cd por estar incluidos en la lista de sustancias prioritarias y Zn, Cr y Cu por estar definidos como sustancias preferentes por el Real Decreto 60/2011, de 21 de Enero, sobre las normas de calidad ambiental en el mbito de la poltica de aguas. Para la puesta a punto del mtodo analtico se analiz una muestra de agua residual (un material de referencia certificado) que contena los elementos a medir, y los resultados fueron satisfactorios, observndose adems la ausencia de efecto matriz al emplear patrn interno. Las muestras recibidas no son sometidas a ningn tratamiento previo al anlisis, simplemente se filtran a vaco, para evitar que se obstruya el capilar del instrumento. Para preparar la recta de calibrado se usa una disolucin multipatrn conteniendo todos los elementos necesarios. A las muestras se les realiza una dilucin 1+1 antes de proceder a su medida. Todas las disoluciones, tanto patrones como muestras, estn preparadas en un 3% de HNO3 sub-boiling y agua Milli-q, empleando 10 g l-1 de In como patrn interno y 5 g ml-1 de Au para evitar el efecto memoria causado por el Hg.
p. 36-37
Para el anlisis de las muestras se utiliza un espectrmetro de masas con un plasma acoplado por induccin (ICP-MS, Agilent Technologies 7500 Series), que est equipado con el software Agilent 7500 ICP-MS ChemStation, un nebulizador Babington, una doble cmara de pulverizacin refrigerada (2 C) de cuarzo Peltier tipo Scott y un automuestreador Agilent I-AS. Se optimiza diariamente la sensibilidad (Li, Y, y Tl), nivel de xidos (Ce) y los iones doble cargados (Ce) con una solucin de tuning que contiene 10 g/L de Li, Y, Tl y Ce al 3% de HNO3 (v/v), se siguieron los criterios especificados en el manual del fabricante para la optimizacin de las condiciones de trabajo, establecindose los siguientes valores: RF power, 1500 W; flujo del gas del plasma, 15 L min-1; flujo del gas nebulizador, 1 L m-1; flujo de gas auxiliar, 0.9 L min-1; velocidad de aspiracin de la muestra, 0.25 mL min-1.
determinacin
protocolo
p. 38-39
Como se ha comentado anteriormente, LC-MS/MS y GC-MS(MS) son las tcnicas analticas ms utilizadas, habitualmente, para la determinacin de contaminantes orgnicos (emergentes y prioritarios) en muestras acuosas medioambientales, e ICP-MS para el anlisis de metales. Los detectores deben estar correctamente ajustados, de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Las variaciones en la sensibilidad del detector se deben comprobar peridicamente mediante la verificacin de la linealidad de las curvas de calibracin con soluciones estndar.
pruebas de identificacin
protocolo
p. 40-41
Los criterios de identificacin y confirmacin para el anlisis de contaminantes ambientales estn definidos en la Decisin de la Comisin Europea 2002/657/EC (Commission Decision (2002/657/EC). Esta directiva se defini originalmente para la determinacin de contaminantes orgnicos en muestras alimentarias, y se ha expandido a otras matrices, incluyendo muestras ambientales. Esta decisin se basa en la utilizacin de puntos de identificacin (IP), los cuales se obtienen de acuerdo con los criterios de calidad para la identificacin y confirmacin espectromtrica. De acuerdo con estas directrices de la UE, para confirmar la presencia de un compuesto en el medio ambiente utilizando LC(GC)-QqQ-MS/MS y en modo SRM, se deben usar dos transiciones, la adquisicin de stas al tiempo de retencin correcto y tener en cuenta la relacin SRM2/SRM1. En modo de trabajo EPI, el criterio de confirmacin aplicado en este caso debe ser la presencia de al menos una transicin caracterstica en el tiempo de retencin correcto y una buena concordancia entre el espectro de referencia de la biblioteca y el espectro obtenido en las muestras (valor superior al 70%). Por otro lado, cuando se utilizan instrumentos TOF-MS, se pueden obtener fcilmente los IPs requeridos (3 IPs), porque tiene la caracterstica de generar espectros de iones producto en full-scan con masa exacta. En GC-MS la forma ms sencilla de confirmar la identidad de un analito en una muestra, es la comparacin de su tiempo de retencin y de su espectro de masas, obtenido con ionizacin por impacto electrnico (EI) y en el rango completo de masas full-scan, con los proporcionados por el estndar analtico correspondiente en las mismas condiciones. La concordancia de los tiempos de retencin en una ventana del 2% y una concordancia entre espectros, igual o superior al 80% son considerados criterios de identificacin inequvocos. Sin embargo, la complejidad de las matrices ambientales y la baja concentracin de los contaminantes en las mismas, hacen que estos criterios no sean efectivos en muchos casos, y sea necesario aplicar conjuntamente otros mtodos ms selectivos y sensibles que garanticen la obtencin de resultados fiables. Algunos de estos mtodos empleados en GC-MS incluyen el uso de tcnicas de seleccin de iones (SIM), ionizacin qumica (CI) o espectrometra de masas en tndem (MS/MS). La utilizacin del modo SIM proporciona mtodos altamente selectivos que permiten obtener incrementos de sensibilidad de varios rdenes de magnitud. En la actualidad, considerando el criterio de IPs, se requieren 3 4 iones diagnsticos para la correcta confirmacin de los contaminantes. La variacin de las abundancias relativas debe estar dentro de los rangos establecidos por la Decisin.
validacin y calidad de los resultados
protocolo
10
p. 42-43
Como ya se ha mencionado a lo largo de esta memoria, el anlisis de compuestos orgnicos en aguas medioambientales requiere el desarrollo de mtodos analticos muy sensibles y selectivos, como consecuencia de los bajos niveles de concentracin de los contaminantes en estas matrices complejas. En este contexto, la confirmacin de los resultados analticos es un aspecto crucial para garantizar la validez de los mismos. Un requisito para caracterizar la eficiencia de los mtodos de anlisis y asegurar la calidad de los resultados es disponer de mtodos convenientemente validados que cumplan ciertos requisitos en aspectos tales como la sensibilidad, selectividad/especificidad, linealidad, precisin y exactitud. Adems es necesario establecer procedimientos u operaciones de control (ej. blancos, muestras fortificadas, etc), que garanticen que los resultados que obtenemos, cumplen con tales requisitos propios de la calidad. La nica forma de garantizar estos dos puntos es la aplicacin sistemtica y rigurosa de un sistema de calidad a los resultados. Este sistema de calidad debe afectar a todas las etapas del proceso analtico y debe disponer de controles que evalen su correcto funcionamiento. La validacin es un proceso que pretende demostrar experimentalmente que un mtodo es apropiado para el propsito para el que fue desarrollado y que genera resultados de calidad verificable. Diferentes organismos de carcter internacional, como la US EPA (US Environmental Protection Agency), EURACHEM (European Analytical Chemistry) la IUPAC (Union of Pure and Applied Chemistry) y otros han desarrollado directrices generales para la validacin de mtodos. Los criterios generales fijados por las diferentes directrices son similares y proporcionan la base para asegurar la confiabilidad de los mtodos validados. De forma general el estudio de validacin de un mtodo de anlisis debe incluir informacin sobre: Exactitud y precisin (en trminos de repetitividad y reproducibilidad) Rango lineal de trabajo Lmite de deteccin y cuantificacin del mtodo Recuperacin de los analitos Utilizacin de estndares instrumentales y estndares internos o surrogate Especificidad (posibles efectos matriz) Empleo de blancos instrumentales
anexo I
protocolo
p. 44-45
Aplicacin del protocolo para la evaluacin del contenido de contaminantes emergentes en una planta de tratamiento de aguas residuales en Almera
TOMA DE LA MUESTRA Las muestras de aguas residuales utilizadas en este estudio se obtuvieron de una planta de tratamiento de aguas residuales situada en el sureste de Espaa (Almera). Esta EDAR, se caracteriza por estar situada en una zona con una importante actividad agrcola y por su proximidad a un hospital que emite aguas residuales a la red de alcantarillado urbana sin llevar a cabo tratamiento de las mismas. La planta depuradora aplica inicialmente un tratamiento primario para la eliminacin del material en suspensin, un tratamiento biolgico de lodos activados y finalmente un proceso de aclaracin. La toma de muestras se llev a cabo de forma integrada, es decir, las muestras eran representativas de 1-da de trabajo en la EDAR. Para ello, se utiliz un dispositivo automtico, el cual tomaba 0.5 L de agua (efluente e influente) cada 3 horas, durante todo un da. Las muestras eran recogidas en botellas de vidrio mbar (pre-lavadas) y enviadas al laboratorio. Una vez all, se filtraban a travs de un filtro de 0,7m de fibra de vidrio y eran congeladas hasta su anlisis.
COMPUESTOS ANALIZADOS Para la caracterizacin de las aguas residuales, fueron seleccionados un grupo de contaminantes representativos de diferentes categoras, en base a algunos de los siguientes criterios: Literatura cientfica disponible sobre su presencia en aguas residuales, Datos de uso de compuestos de origen industrial y agrcola del Ministerio de Agricultura, Medio Rural y Medio Marino (MARM) (http://www.marm.es/es/) y la Agencia Europea de Sustancias y Preparados Qumicos (http://echa.europa.eu/home_es.asp), Datos de consumo de frmacos y productos de cuidado personal del Ministerio de Sanidad, poltica social e igualdad. Agencia espaola de medicamentos y productos sanitarios (AEMPS) http://www.aemps.es/profHumana/observatorio/informes.htm). La siguiente tabla (Tabla 5) incluye todos los compuestos seleccionados para su anlisis en aguas residuales, tanto por GC como por LC, as como la eficacia de los mtodos de extraccin y la sensibilidad de los mtodos de anlisis desarrollados, en trminos de lmites de cuan-
tificacin y deteccin. Es de destacar, que se trata de un grupo de compuestos muy heterogneos, en cuanto a sus propiedades fsico-qumicas, cubrindose un amplio rango de polaridades (1< Log KOW < 4), lo que en consecuencia limita, en algunos casos, la extraccin y anlisis de forma conjunta. Tabla 5. Compuestos seleccionados para su anlisis en aguas residuales, tanto por GC como por LC.
INFLUENTE COMPUESTOS MTODO ANALTICO MQL (ng/L) MDL (ng/L) EFLUENTE MQL (ng/L) MDL (ng/L) R% (RSD%) n=3
Analgesicos/anti-inflamatorios Acetaminofeno Indometacina Codeina Acid mefenmico Ketorolaco Naproxeno Ibuprofeno Fenoprofeno Ketoprofeno Propifenazona Diclofenaco Antibioticos Metronidazol Sulfamethoxazol Trimetoprim Ciprofloxacina Cefotaxima Ofloxacin Eritromicina Lincomicina Sulfadiazina Sulfatiazol Sulfapiridina Norfloxacina Tetraciclina Sulfametazina Azitromicina Claritromicina LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) 33,4 30,2 57,6 20,6 113,6 66,4 197,8 12,4 24,8 50,4 49,3 30,3 235,3 12,3 47,1 19,4 10,0 9,0 17,2 6,2 34,0 20,0 59,4 3,7 7,5 15,1 14,8 9,1 70,6 3,7 14,1 5,8 16,7 15,1 28,8 10,3 56,8 33,2 98,9 6,2 12,4 25,2 24,6 15,1 117,6 6,1 23,5 9,7 5,0 4,5 8,6 3,1 17,0 10,0 29,7 1,9 3,7 7,6 7,4 4,5 35,3 1,8 7,1 2,9 25 (14) 57 (2) 104 (13 70 (13) 23 (11) 102 (5) 107 (8) 87 (25) 67 (9) 84 (17) 79 (2) 55 (20) 15 (15) 67 (21) 78 (13) 80 (16) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (-) LC (-) LC (+) LC (+) LC (-) 65,4 6,4 20,4 6,0 7,0 48,2 7,4 7,3 210,8 8,9 2,4 19,6 2,0 6,2 1,8 2,0 14,4 2,2 2,2 63,2 2,7 0,7 32,7 3,2 10,2 3,0 3,5 24,1 3,7 3,7 105,4 4,5 1,2 9,8 1,0 3,1 0,9 1,0 7,2 1,1 1,1 31,6 1,3 0,4 34 (12) 81 (12) 120 (23) 67 (13) 83 (2) 98 (3) 116 (3) 105 (12) 100 (12) 91 (7) 120 (14)
p. 46-47
INFLUENTE COMPUESTOS Reguladores lipdicos Fenofibrato Bezafibrato Gemfibrozil Pravastatin Mevastatin Simvastatin -bloqueantes Atenolol Propranolol Sotalol Metoprolol Nadolol LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) 11,8 8,8 23,4 27,4 24,7 3,6 2,6 7,0 8,2 7,4 LC (+) LC (+) LC (-) LC (+) LC (+) LC (+) 9,0 16,6 0,3 162,4 31,9 12,2 2,8 5,0 0,1 48,7 11,8 3,7 MTODO ANALTICO MQL (ng/L) MDL (ng/L)
EFLUENTE MQL (ng/L) MDL (ng/L) R% (RSD%) n=3
4,5 8,3 0,2 81,2 15,9 6,1
1,4 2,5 0,1 24,4 5,9 1,8
25 (3) 85 (7) 114 (1) 82 (14) 40 (46) 77 (22)
5,9 4,4 11,7 13,7 12,4
1,8 1,3 3,5 4,1 3,7
83 (11) 95 (9) 111 (14) 100 (5) 55 (29)
Antidepresivos/ Antiepilpticos Fluoxetina Paroxetina Venlafaxina Citalopram Amitriptilina Clomipramina Diazepam Primidona Carbamazepina Corticosteroides Methilprednisolona Diureticos Furosemida Hidroclorotiazida Protectores ulcerosos Ranitidina Omeprazol Famotidina Lansoprazol Loratadina LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) 306,8 12,4 57,4 37,3 1,8 92,0 3,8 17,2 11,2 0,5 153,4 6,2 28,7 18,7 0,9 46,0 1,9 8,6 5,6 0,3 109 (8) 74 (6) 47 (41) 45 (20) 55 (21) LC (-) LC (-) 331,9 5,0 99,6 1,5 165,9 2,5 49,8 0,8 83 (6) 96 (9) LC (+) 71,4 21,4 35,7 10,7 95 (5) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) 5,8 29,0 25,2 8,7 10,9 5,0 6,4 202,2 2,4 1,8 8,6 7,6 2,6 3,3 1,5 2,0 60,7 0,8 2,9 14,5 12,6 4,4 5,4 2,5 3,2 101,1 1,2 0,9 4,3 3,8 1,3 1,6 0,8 1,0 30,3 0,5 47 (13) 45 (18) 89 (21) 72 (10) 58 (22) 32 (21) 106 (8) 73 (2) 88 (2)
INFLUENTE COMPUESTOS Broncodilatadores Salbutamol Terbutalina Anestsicos Mepivacaina Agentes antineoplsticos Ciclofosfamida Iofosfamida Pesticidas Clorpirifos metil Endosulfan sulfato Desinfectantes Bifenilol Cloropheno Triclosan Antioxidantes BHT Retardantes de llama TCPP Fragancias sintticas Celestolida Galaxolida Phantolida Tonalida Traseolida Musk ketona Musk xylene Filtros UV 4-metilbenzilideno camfor Benzofenona-3 2-EHMC Octocrileno Estimulantes Nicotina Cafena LC (+) LC (+) 143,8 29,4 43,2 8,8 GC GC GC GC 110,0 113,0 88,0 83,0 33,0 36,0 25,0 19,0 GC GC GC GC GC GC GC 24,0 145,0 103,0 61,0 85,0 112,0 35,0 7,0 43,0 31,0 20,0 26,0 35,0 17,0 GC 433,0 130,0 GC 57,0 18,0 LC (+) LC (-) GC 952,4 3,3 393,0 285,7 1,0 133,0 LC (+) GC 50,8 313,0 15,2 103,0 LC (+) LC (+) 19,4 9,9 5,8 3,0 LC (+) 3,8 1,2 LC (+) LC (+) 7,2 5,4 2,2 1,6 MTODO ANALTICO MQL (ng/L) MDL (ng/L)
3,6 2,7
1,1 0,8
59 (4) 39 (15)
1,9
0,6
91 (6)
9,7 5,0
2,9 1,5
79 (7) 77 (9)
25,4 117,0
7,6 35,0
16 (7) 94 (19)
500,0 1,6 147,0
150,0 0,5 44,0
53 (9) 104 (9) 97 (13)
53,0
16,0
48 (8)
120,0
36,0
118 (14)
23,0 57,0 57,0 53,0 60,0 70,0 3,0
7,0 17,0 17,0 16,0 18,0 21,0 1,0
70 (7) 117 (19) 71 (7) 85 (11) 73 (4) 79 (2) 74 (3)
100,0 80,0 33,0 37,0
30,0 24,0 10,0 11,0
71 (3) 105 (15) 52 (8) 74 (7)
71,9 14,7
21,6 4,4
86 (16) 100 (16)
p. 48-49
INFLUENTE COMPUESTOS Metabolitos Cotinina Paraxantina cido clofbrico cido fenofbrico cido saliclico 4-MAA 4-AAA 4-FAA 4-DAA 4-AA Antipirina cido nicotnico Trigonelina LC (+) LC (+) LC (-) LC (+) LC (-) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) 21,3 109,4 35,2 12,2 15,2 35,7 9,6 199,6 67,0 16,2 76,0 33,0 730 800 6,4 32,8 10,6 3,7 4,6 10,7 3,0 59,8 20,0 4,8 22,8 10,0 500 600 MTODO ANALTICO MQL (ng/L) MDL (ng/L)
10,7 54,7 17,6 6,1 7,6 17,9 4,8 99,8 33,5 8,1 38,0 16,5 550 540
3,2 16,4 5,3 1,8 2,3 5,4 1,5 29,9 10,0 2,4 11,4 5,0 400 260
107 (12) 35 (0) 127 (12) 75 (7) 70 (11) 17 (29) 101 (7) 94 (11) 90 (12) 77 (5) 112 (7) 114 (8) I.D I.D
Carbamazepina 10,11-epoxido LC (+)
Drogas de abuso y metabolitos Nicotina LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) LC (+) 250 210 200 550 10 20 60 75 100 50 500 500 700 50 400 50 680 10 40 50 40 90 200 180 200 550 3 10 30 40 55 50 500 500 700 50 400 20 680 5 30 30 20 50 200 200 200 450 3 10 50 65 85 50 500 500 700 50 400 50 600 10 30 50 40 80 150 170 200 450 1 5 20 40 50 50 500 500 700 50 400 20 600 5 20 30 20 40 I.D I.D I.D I.D I.D I.D I.D I.D I.D I.D I.D I.D I.D I.D I.D I.D I.D I.D I.D I.D I.D I.D
Cotinina
Cafena
Paraxanthina
Cocana
Benzoilecgonina
Morfina
Acetylmorphina Etilmorfina
Ephedrina
Fenilefrina
Amphetamina
Methamphetamina Etilamfetamina MDA MDEA MDMA

Metadona
EDDP
Ketamina Codena Herona
MQL: lmite de cuantificacin del mtodo (SPE); MDL: lmite de deteccin del mtodo (SPE); R%: Recuperaciones; I.D: Inyeccin directa; Cursiva: metabolito.
Comparando los dos modos de operacin del sistema QqQLIT, se pudo comprobar que el modo SRM proporcionaba excelentes resultados en cuanto a la sensibilidad y selectividad para el anlisis cuantitativo de frmacos y drogas de abuso en aguas residuales, pero no era posible realizar la confirmacin de aquellos contaminantes que no presentan una segunda transicin (caso del ibuprofeno), o cuando no era posible detectar esta segunda transicin a bajas concentraciones de analito (caso de la anfetamina y algunos de sus metabolitos). En esos casos, el modo EPI permiti obtener lmites de cuantificacin de hasta un orden de magnitud inferior. Como se muestra en la siguiente figura (Figura 8), el mtodo SRM no proporcion una adecuada identificacin del compuesto ketoprofen en una muestra de agua residual, debido a la baja intensidad de SRM2, sin embargo, fue posible su confirmacin en la misma muestra mediante la aplicacin del modo EPI. Por otra parte, el sistema TOF-MS permiti, adems de confirmar compuestos problemticos con una sola transicin o una relacin SRM2/SRM1<0.3, llevar a cabo la identificacin de otros nuevos contaminantes, mediante anlisis retrospectivos. La Figura 9 muestra un ejemplo de identificacin de un nuevo compuesto 4-AAA por LC-TOF-MS, inicialmente no incluido en el mtodo de anlisis, a travs del anlisis retrospectivo de una muestra de agua residual. Por ltimo, el sistema GC-MS permiti la deteccin de compuestos no polares en muestras de aguas residuales, extrados mediante LLE. La siguiente figura (Figura 10) muestra la identificacin de cinco compuestos de inters en una muestra de agua residual, en modo SIM y un ejemplo del espectro obtenido en SIM para el compuesto octocryleno.
p. 50-51
Figura 8. Determinacin de ketoprofeno en una muestra de efluente de aguas residuales mediante dos modos de funcionamiento del LC-QTRAP-MS/MS (SRM y EPI) (Martinez-Bueno et al. 2009).
(A) TIC; (B y C) XIC; (D) Espectro de masas del ketoprofeno obtenido mediante el modo EPI
Figura 9. Pasos seguidos en la identificacin del compuesto 4-AAA por LC-TOF-MS en una muestra de agua residual: (A) seleccin del ion (XIC) objetivo de una cierta m/z (0,02 uma), (B) obtencin de los espectros de masas (C) verificacin de la masa exacta y la composicin elemental de la molcula y los fragmentos de iones (Martinez-Bueno et al. 2007).
p. 52-53
Figura 10. Ejemplo de identificacin de 5 compuestos en una muestra de agua residual, mediante GC-MS. Cromatograma en modo SIM y espectro obtenido en SIM para el compuesto octocryleno (Gmez et al. 2009).
RESULTADOS ANALTICOS La siguientes tablas (Tabla 6 y 7) recogen los rangos y valores medios de concentracin detectados mediante LC-MS y GC-MS, respectivamente, para algunos de los compuestos estudiados en 20 muestras recogidas en cinco EDAR diferentes.
Tabla 6. Resultados obtenidos mediante LC-MS

Compound paraxanthine biphenylol 4-aaa caffeine ofloxacin Hydrochlorothiazide 4-FAA ibuprofen gemfibrozil 4-AA naproxen atenolol ketDrolac chlorophene nicotine paroxethine 4-MAA furosemide codeine ciprofloxacin diclofenac ranitidine ketoprofen erythromycin indomethacine fluoxethine trimethoprim antipyrine sulfamethoxazole omeprazole benzafibrate fenofibric acid positive samples 11 11 14 15 14 17 14 15 17 11 14 16 14 8 8 1 15 15 15 15 18 12 15 15 16 10 14 11 15 11 18 15 range (ng L) 131-80875 2504-18900 2109-25030 262-24658 217-13426 872-14857 40-10114 42-10639 2-28571 131-9286 359-4200 275-4850 13-4070 14-2850 92-7S22 9-9253 155-2957 297-4826 40-3353 6-5922 144-2722 225-954 106-973 30-3819 19-929 99-1264 11-2760 91-794 8-922 61-484 14-349 mean (ng/L) 15001 7662 7260 5753 4422 3683 3386 2567 2337 2098 1840 1720 1289 1279 1201 1141 1051 1050 1039 923 826 684 553 519 405 398 331 311 275 247 233 186
p. 54-55
Compound chlorfenvinphos metronidazole diuron mefenamic acid carbamazepine 4DAA Cefotaxime isoproturon metoprolol carbamazepine epoxide acetaminophen propanolol sotalol clofibric acid fenofibrate simazine diazepan mepivacaine salbutamol terbutaline fenoprophen atrazine
positive samples 4 14 19 15 16 1 2 2 7 8 6 15 10 16 1 4 13 13 14 7 1 1
range (ng L) 67-238 41-331 2-759 1-554 69-273 9-151 47-105 18-154 13-110 11-164 16-100 12-155 7-81 9-28 3-87 2-40 5-60 5-30
mean (ng/L) 163 160 136 138 136 122 80 76 61 52 59 44 36 27 23 16 16 15 15 15 11 9
Tabla 7. Resultados obtenidos mediante GC-MS

Compounds BHT Celestolide Phantolide TCPP Traseolide Galaxolide Muskxylene Tonalide Muskketone 4-MBC Benzophenone-3 Triclosan 2-EHMC Octocrylene Concentration range (ng/l) 44579 1130 1316 3032784 2022 12598697 59203 56981 34218 42326 42260 60719 16177 1570 Mean concentration (ng/l) 216 23 14 920 20 4120 104 365 107 104 93 209 55 42 Frequency(%) 100 20 15 100 15 100 25 100 90 50 80 95 65 40
anexo II
protocolo
p. 56-57
Aplicacin del protocolo para la evaluacin del contenido en contaminantes prioritarios en una finca regada con agua residual tratada en Granada
TOMA DE LA MUESTRA Se tomaron muestras de agua superficial y de agua subterrnea. Entre las muestras de agua superficial se incluyen muestras de agua de ros (R). Se trata de muestras de agua tomadas antes de cualquier ncleo urbano, otras afectadas con efluentes de cortijadas prximas al cauce y a lo largo del cauce del Genil, antes de la ciudad de Granada, donde ya ha recibido vertidos de aguas residuales urbanas tratadas y no tratadas, aguas abajo de ambas EDAR de la ciudad, y en el extremo noroeste del acufero. Las muestras de agua subterrnea (S) fueron tomadas en la mayora de los casos durante bombeo, con la excepcin de las muestras de los sondeos de la finca en estudio que se tomaron con tomamuestras. Todas ellas son muestras procedentes del acufero detrtico (A) de la Vega de Granada. Las muestras fueron tomadas en envases estriles de un litro de vidrio mbar para el anlisis de los compuestos orgnicos y de plstico para el anlisis de metales, conservadas en nevera porttil con hielo como mximo tres horas antes de ser congeladas y conservadas en este estado hasta su entrega en el laboratorio.
COMPUESTOS ANALIZADOS Para la caracterizacin de las distintas aguas que se muestrearon, fueron seleccionados un grupo de 64 contaminantes entre los que se incluy la mayora de los descritos como sustancias prioritarias segn la Directiva 2008/105/CE del parlamento europeo. Adems se incluyeron otros analitos como la terbutilazina, Ni, Cu y Cr que se han definido como sustancias prioritarias a nivel estatal. En la tabla 8 se recogen los compuestos orgnicos analizados por GC-MS/MS y los parmetros analticos y de validacin conseguidos cuando se aplica la LLE.
Tabla 8. Parmetros analticos y valores de recuperacin al aplicar la LLE seguida del anlisis por GC-MS/MS.
COMPUESTOS 1,3,5, TCB 1,2,4, TCB Hexachloro-1,3-butadiene 1,2,3, TCB Isoproturon Chlorotoluron Diuron Acenaphthylene Pentachlorobenzene Fluorene Trifluralin Atrazine desethyl -HCH Hexachlorobenzene Simazine Atrazine Propazine -HCH -HCH Terbuthylazine Diazinon Phenanthrene Anthracene -HCH Alachlor Parathion methyl Heptachlor Ametryn Terbutryn Chlorpyrifos ethyl Aldrin Parathion ethyl Isodrin Chlorfenvinphos A Chlorfenvinphos B Procymidone Linealidad 0.999 0.999 0.999 0.999 0.993 0.998 0.998 0.999 0.999 0.999 0.999 0.998 0.999 0.999 0.999 0.997 0.998 0.999 0.999 0.999 0.998 0.998 0.998 0.997 0.998 0.998 0.998 0.997 0.997 0.998 0.998 0.999 0.998 0.999 0.999 0.998 LOQ (ng L-1) 0.21 0.33 0.13 0.30 0.83 0.37 0.16 0.15 0.11 0.21 0.13 0.93 0.21 0.15 2.36 0.80 0.46 0.75 0.32 0.95 0.26 0.33 0.44 0.45 1.11 1.17 0.17 2.45 0.71 0.15 0.84 1.03 2.17 1.20 0.17 0.21 %Recup (15 ng L-1) 77.31 88.18 51.97 76.05 41.99 54.85 54.03 101.96 105.35 123.36 102.61 52.11 106.96 96.53 74.47 120.13 164.13 94.94 138.99 111.98 108.11 140.66 133.75 136.60 101.71 115.00 47.21 104.18 104.59 102.12 112.39 103.94 154.25 100.12 125.35 RSD (%) 8.08 9.88 15.27 10.89 8.52 7.25 12.59 4.06 7.13 2.97 4.58 17.01 5.84 3.06 6.10 3.02 7.80 10.76 3.82 5.24 5.79 3.68 3.71 2.69 3.66 5.70 19.35 5.10 16.37 7.32 5.10 5.21 8.70 5.69 4.96 %Recup (150 ng L-1) 42.95 45.76 31.57 52.5 29.82 20.02 17.49 88.22 72.91 79.39 82.73 44.43 92.99 73.88 25.20 53.85 82.10 112.72 101.23 88.81 90.47 74.87 84.25 93.65 92.67 102.44 67.10 33.46 89.08 73.83 62.09 100.90 73.01 68.80 96.63 84.40 RSD (%) 15.56 9.50 18.97 9.90 13.84 17.45 21.05 6.70 9.24 12.80 1.01 19.58 5.17 12.40 15.44 9.71 7.25 14.78 12.28 9.21 10.36 14.10 7.93 12.99 12.16 10.11 11.62 11.56 15.41 18.08 17.80 8.40 12.47 8.38 9.38 9.10
p. 58-59
COMPUESTOS Pyrene -Endosulfan 4,4-DDE Dieldrin Oxyfluorfen Endrin -Endosulfan Ethion Endosulfan sulfate 4,4-DDT Iprodione Benzo(a)anthracene Chrysene Metoxychlor Benzo(k)fluoranthene Benzo(b)fluoranthene Benzo(a)pyrene Deltamethrin Indene(1,2,3-cd)pyrene Dibenzo(a,h)anthracene Benzo(ghi)perylene
Linealidad 0.997 0.999 0.999 0.996 0.999 0.998 0.998 0.999 0.998 0.999 0.998 0.999 0.999 0.998 0.998 0.999 0.999 0.998 0.998 0.999 0.998
LOQ (ng L-1) 0.12 2.55 0.20 0.97 0.69 2.25 2.50 0.24 2.40 0.16 1.68 0.18 0.19 0.23 0.16 0.17 0.18 0.80 0.14 0.15 0.15
%Recup (15 ng L-1) 43.01 175.13 103.71 88.75 142.31 98.91 119.78 74.48 111.29 93.87 51.67 85.29 98.91 94.19 63.01 61.61 71.29 75.66 76.76 132.44
RSD (%) 20.21 7.52 6.93 8.21 7.39 13.66 8.81 4.83 5.98 9.32 13.89 7.43 6.13 1.42 7.09 7.37 7.42 4.77 4.09 1.63
%Recup (150 ng L-1) 70.85 85.57 69.44 76.32 90.11 81.06 75.55 66.60 69.23 69.44 56.51 62.18 86.51 78.86 63.74 64.44 57.55 32.13 53.96 54.54 52.14
RSD (%) 13.40 8.67 19.19 7.07 18.00 11.57 9.88 22.55 18.17 18.45 7.68 16.24 13.46 17.56 14.57 20.42 15.41 22.36 11.58 11.89 6.84
El mtodo ofrece suficiente sensibilidad para la deteccin de las sustancias prioritarias a los niveles establecidos en la legislacin. Adems los valores de recuperacin para la mayora de compuestos se encuentran entre 70% y 120%. Los otros dos mtodos de extraccin tambin demostraron ser vlidos para este tipo de anlisis como se mostr anteriormente en la tabla 4.
RESULTADOS ANALTICOS Los mtodos desarrollados se utilizaron para evaluar muestras de distinto origen (rio, acequia, acufero) recogidas en la finca objeto de estudio. Los resultados aparecen en la tabla 9.
Tabla 9. Resultados en ng L -1 del anlisis de distintos tipos de agua muestreadas en una finca regada con agua residual tratada, al aplicar los 3 tratamientos de muestra (LLE, SPE y HS-SPME) y posterior anlisis por GC-MS/MS.
Analito/ Tratamiento de muestra Diuron/LLE Diuron/SPE Diuron/HS-SPME Fluorene/LLE Fluorene/SPE Fluorene/HS-SPME Trifluralin /LLE Trifluralin /SPE Trifluralin/HS-SPME Atrazine des/LLE Atrazin des/SPE Atrazine des/HS-SPME HCB/LLE HCB/SPE HCB/HS-SPME Simazine /LLE Simazine/SPE Simazine/HS-SPME Atrazine /LLE Atrazine/SPE Atrazine/HS-SPME gamma-HCH/LLE gamma-HCH/SPE gamma-HCH/HS-SPME Terbuthylazine /LLE Terbuthylazine/SPE Terbuthylazine/HS-SPME Diazinon/LLE Diazinon/SPE Diazinon/HS-SPME Phenanthrene/LLE Phenanthrene/SPE Phenanthrene/HS-SPME 9.4 9.8 7.8 3.9 2.1 33.4 38.3 36.5 2.1 1.9 1.0 0.4 1.1 5.9 2.5 0.8 1.0 1.2 3.1 1.8 4.4 1.4 3.2 1.3 4.2 1.1 1.2 1.1 5.3 1.3 1.8 1.6 23.5 7.3 5.0 2.0 7.7 9.9 7.9 10.6 8.8 7.8 9.4 9.9 12.0 < LOQ 2.9 2.3 6.2 4.9 15.6 24.5 10.3 16.0 2.7 4.0 7.0 11.9 < LOQ < LOQ 87.3 < LOQ < LOQ 1.5 0.2 6.3 13.5 10.8 11.7 23.2 11.5 26.0 0.3 0.2 0.8 0.9 0.6 0.8 1.5 1.3 0.8 0.8 0.7 0.7 0.9 0.5 0.9 0.5 0.4 0.5 0.7 0.6 0.9 0.7 6.4 3.3 0.9 0.7 A1 8.4 21.2 A2 7.1 23.4 R1 3.6 3.1 R2 1.8 5.1 R3 1.1 Muestras S1 S2 S3 1.0 1.1 S4 S5 1.2 S6 S7
p. 60-61
Analito/ Tratamiento de muestra Terbutryn/LLE Terbutryn/SPE Terbutryn/HS-SPME Chloropyrifos/LLE Chloropyrifos/SPE Chloropyrifos/HS-SPME Parathion ethyl/LLE Parathion ethyl/SPE Parathion ethyl/SPME-HS Chlorfenvinfos B/LLE Chlorfenvinfos B/SPE Chlorfenvinfos B/HS-SPME 2.8 < LOQ 28.7 14.7 5.0 24.4 216.4 45.7 10.1 3.6 8.4 1.9 < LOQ 19.7 6.0 22.2 3.6 0.7 A1 A2 R1 R2 R3 < LOQ
Muestras S1 S2 S3 S4 S5 1.7 S6 S7
< LOQ < LOQ < LOQ < LOQ
17.2 2.5 1.2
7.9 1.4 0.7
7.5 1.9 0.8
23.7 1.6 1.7
32.4 4.1
23.0 3.6 0.8
13.2 3.4
(A) muestra de acufero; (R) muestra de rio; (S) muestra subterrnea.
Teniendo en cuenta los lmites de deteccin, el porcentaje de recuperacin, la precisin de los distintos mtodos y las bajas concentraciones encontradas, se puede concluir que se obtienen resultados coincidentes con los tres tratamientos de muestra desarrollados. Como ejemplo de este hecho se presenta en la figura 11 el cromatograma de las tres transiciones utilizadas para la identificacin de Diazinon, un insecticida organofosforado ampliamente utilizado y detectado en muestras de agua (J. C. Molt et al, 1991). As mismo se muestra en la figura 12 el cromatograma de las tres transiciones seleccionadas para identificar a la sustancia prioritaria clorpirifos, que tambin es un insecticida organofosforado que aparece de forma frecuente en muestras de agua (E. Pitarch et al. 2007).
Figura 11. Positivo de Diazinon en una muestra de agua residual tratada mediante a) LLE b) SPE y c) HS-SPME.
Figura 12. Positivo de Clorpirifos en una muestra de agua residual tratada mediante a) LLE b) SPE y c) HS-SPME.
En general las concentraciones de los contaminantes encontrados en las muestras son bajas del orden de ng L-1 en el caso de los orgnicos y la concentracin de los metales cuyo anlisis dio positivo est siempre por debajo de los lmites establecidos por la legislacin.

anexo III. referencias
protocolo
Commission Decision (2002/657/EC) of 12th August 2002. Implementing Council Directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and the interpretation of results. Official Journal of the European Communities L221, Brussels, Belgium, 8-36. Directiva 91/271/CE del Consejo de 21 de Mayo de 1991, sobre el tratamiento de las aguas residuales urbanas (91/271/CE). Diario oficial de las Comunidades Europeas L135/40. Directiva 2000/60/CE del Parlamento Europeo y del Consejo de 23 de Octubre de 2000, por la que se establece un marco comunitario de actuacin en el mbito de la poltica de aguas. Diario oficial de las comunidades europeas L327/1. Directiva 2008/105/CE del Parlamento Europeo y del Consejo de 16 de Diciembre de 2008, relativa a las normas de calidad ambiental en el mbito de la poltica de aguas, por la que se modifican y derogan ulteriormente las Directivas 82/176/CEE, 83/513/CEE, 84/156/CEE, 84/491/CEE y 86/280/CEE del Consejo y por la que se modifica la Directiva 2000/60/CE. Diario oficial de la Unin Europea L348/84. Gmez M.J, Malato O., Ferrer I., Agera A., Frnandez-Alba A., 2007a. Solid-phase extraction followed by liquid chromatography-time-of-flight-mass spectrometry to evaluate pharmaceuticals in effluents. A pilot monitoring study. J. Environ. Monit. 9, 718-729. Gmez M.J, Martnez Bueno M.J., Lacorte S., Fernndez-Alba A.R, Agera A., 2007b. Pilot survey monitoring pharmaceuticals and related compounds in a sewage treatment plant located on the Mediterranean coast. Chemosphere 66, 993-1002. Gmez M.J., Agera A., Mezcua M., Hurtado J., Mochol F., Fernndez-Alba A.R., 2007c. Simultaneous analysis of neutral and acidic pharmaceuticals as well as related compounds by gas chromatography-tandem mass spectrometry in wastewater. Talanta 73, 314-320. Gmez, M.J., Gmez-Ramos, M.M., Malato, O., Mezcua, M., Frnandez-Alba, A.R., 2010. Rapid automated screening, identification and quantification of organic micro-contaminants and their main transformation products in wastewater and river waters using liquid chromatography-quadrupole-time-of-flight mass spectrometry with an accurate-mass database. Journal of Chromatography A 1217, 7038-7054. M a r t i n e z - B u e n o M . J . , A g er a , A . , G m e z , M . J . , H e r n a n d o , M . D . , G a r c a - R e y e s J . F . , y F e r nndez-Alba, A.R., 2007. Application of liquid chromatography /quadrupole-linear ion trap mass spectrometry and time-of-flight mass spectrometry to the determination of pharmaceuticals and related contaminants in wastewater. Analytical Chemistry, 79, 93729384.
p. 64-65
Martinez-Bueno M.J., Agera, A., Hernando, M.D., Gmez, M.J., y Fernndez-Alba, A.R., 2009. Evaluation of various liquid chromatography-quadrupole-linear ion trap-mass spectrometry operation modes applied to the analysis of organic pollutants in wastewater. Journal of Chromatography A, 1216, 59956002. Martnez Bueno, M.J., Hernando, M.D., Herrera, S., Gmez, M.J., Fernndez-Alba, A.R., Bustamante, I., Garca-Calvo, E., 2010. Pilot survey of chemical contaminants from industrial and human activities in river waters of Spain. Int. J. Environ. Anal. Chem. 90, 321343. Martnez Bueno, M.J., Ucls, S., Hernando, M.D., Dvoli E., y Fernndez-Alba A.R., 2011. Evaluation of selected ubiquitous contaminants in the aquatic environment and their transformation products. A pilot study of their removal from a sewage treatment plant. Water Research, 45, 2331-2341. . Determination of triazines and organophospMolt, J.C., Pic, Y., Font, T., Maes, J., 1991. horous pesticides in water samples using solid-phase extraction. JCA, 555(1991)137-145. Real Decreto 60/2011, de 21 de Enero, sobre las normas de calidad ambiental en el mbito de la poltica de aguas. Boletn oficial del Estado N 19, Sec. I, pg. 6854. Pitarch, E., Medina, C. Portols, T., Lpez, F.J., Hernndez, F., 2006. Determination of priority organic micro-pollutants in water by gas chromatography coupled to triple quadrupole mass spectrometry. Analytica chimica acta. 583 (2007) 246-258. Ternes, T.A., 2001. Analytical methods for the determination of pharmaceuticals in aqueous environmental samples. Trends Anal. Chem. 20 (2001) 419-434. Ternes, T.A, Joss A., 2006. Human Phramaceuticals, Hormones and Fragance. IWA Publishing, London, England.
editor Consolider Tragua
diseo y maquetacin base 12 diseo y comunicacin
ISBN 978-84-695-4039-8
entidades participantes
Universidad de Jan
protocolo
MINISTERIO DE ECONOMA Y COMPETITIVIDAD
tragua
Consolider

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de contaminantes emergentes y prioritarios

de tcnicas de muestreo y tcnicas analticas

MINISTERIO DE ECONOMA Y COMPETITIVIDAD

de tcnicas de muestreo y tcnicas analticas

Grupo C2 Universidad de Jan

Grupo TC10 Universidad de Almera

[4] [7] [9]

3. Toma y tratamiento de la muestra 4. Reactivos 5. Anlisis [14] [16]

10. Validacin y calidad de los resultados

protocolo de tcnicas de muestreo y tcnicas analticas de contaminantes emergentes y prioritarios

EDAR Irrigacin (filtracin, lixiviacin)

de tcnicas de muestreo y tcnicas analticas

protocolo de tcnicas de muestreo y tcnicas analticas de contaminantes emergentes y prioritarios

de tcnicas de muestreo y tcnicas analticas

toma y tratamiento de la muestra

protocolo de tcnicas de muestreo y tcnicas analticas de contaminantes emergentes y prioritarios

Tratamiento de muestra Pretratamiento: Filtracin Ajuste pH

Calidad de los resultados

Deteccin por: GC-MS-(MS) LC-MS-(MS)

Figura 2. Etapas fundamentales del proceso analtico

3.1. Toma y almacenamiento de muestra

3.2. Pre-tratamiento de muestra

protocolo de tcnicas de muestreo y tcnicas analticas de contaminantes emergentes y prioritarios

4.1. Almacenado de soluciones patrn

procedimiento de anlisis de contaminantes emergentes

protocolo de tcnicas de muestreo y tcnicas analticas de contaminantes emergentes y prioritarios

protocolo de tcnicas de muestreo y tcnicas analticas de contaminantes emergentes y prioritarios

protocolo de tcnicas de muestreo y tcnicas analticas de contaminantes emergentes y prioritarios

protocolo de tcnicas de muestreo y tcnicas analticas de contaminantes emergentes y prioritarios

de tcnicas de muestreo y tcnicas analticas

procedimiento de anlisis de contaminantes prioritarios

protocolo de tcnicas de muestreo y tcnicas analticas de contaminantes emergentes y prioritarios

7.1. Compuestos orgnicos

protocolo de tcnicas de muestreo y tcnicas analticas de contaminantes emergentes y prioritarios

Tabla 3. Compuestos analizados y condiciones experimentales optimizadas para el mtodo MRM.

protocolo de tcnicas de muestreo y tcnicas analticas de contaminantes emergentes y prioritarios

Collision Energy (ev) 20 10 35 10 15 20 40 50 10 10 10 15 25 10 10 15 10 25 35 20 30 50 10 10 15 10 10 15 15 10 10 10 25 35 10 25 35

11.909 10.50-12.20 Acenaphtylene 12.595 12.20-14.00 Pentaclhorobenzene

152.0 152.0 249.8 249.8 249.8

13.682 12.20-14.00 Fluorene 14.597 14.00-15.10 Trifluralin

166.0 166.0 306.1 306.1 306.1

14.715 14.00-15.10 Atrazin desethyl

172.0 187.0 172.0

15.528 15.10-16.00 Alfa-HCH

218.9 218.9 218.9

15.612 15.10-16.00 Hexaclorobenzene

283.8 283.8 283.8

16.340 16.00-17.40 Simazin

201.0 201.0 201.0

16.504 16.00-17.40 Atrazin

215.1 215.1 215.1

16.633 16.00-17.40 Propazine

229.0 229.0 229.0

16.785 16.00-17.40 Beta-HCH

218.9 218.9 218.9

16.949 16.00-17.40 Ganma-HCH

218.9 218.9 218.9

Collision Energy (ev) 10 10 10 15 15 25 10 15 10 15 10 25 35 10 20 15 10 10 5 15 5 35 10 10 10 10 15 25 15 10 5 30 35 20 10 30 5

17.125 16.00-17.40 Terbutilazine

17.312 16.00-17.40 Diazinon

304.0 179.0 179.0

17.665 17.40-18.20 Phenantrene 17.960 17.40-18.20 Anthracene 18.593 18.20-19.50 Delta-HCH

178.0 178.0 178.0 178.0 218.9 218.9 218.9