ECOTOXICOLOGIA

DEFINICIONES:

Es la ciencia que estudia los efectos txicos de sustancias qumicas y agentes fsicos sobre los organismos vivos, especialmente sobre poblaciones y comunidades dentro de ecosistemas definidos. Incluye el estudio de los caminos de transferencia de estos agentes y sus interacciones con el ambiente (TRUHAUT, 1977; BUTLER, 1978) Es la ciencia que investiga los efectos de sustancias sobre los organismos. El peligro sobre las poblaciones de animales y plantas puede ser determinado mediante el uso de datos existentes, tomados del ambiente (Ecotoxicologa retrospectiva) o mediante el desarrollo de ensayos especficos (Ecotoxicologa prospectiva) (RUDOLPH and BOJE, 1986) Es la ciencia que se propone la la evaluacin, el monitoreo y la prediccin del destino y efectos de xenobiticos en el ambiente (MORIARTY, 1988) Es la ciencia que intenta predecir los impactos de las sustancias qumicas sobre los ecosistemas (LEVIN et al., 1989) Es el estudio de los efectos adversos o dainos sobre los ecosistemas (WALKER et al., 1996)

ECOTOXICOLOGIA
OBJETIVOS:

Se propone la evaluacin, monitoreo y prediccin del destino y los efectos de xenobiticos en el ambiente (MORIARTY, 1988) Est motivada por el deseo de mantener las estructura y funcin naturales de los ecosistemas INTEGRIDAD DEL ECOSISTEMA (HARRIS et al., 1990)

[Los ecosistemas son dinmicos; luego, puede resultar no natural mantener el status quo]

La investigacin ecotoxicolgica resulta ser tambin la investigacin del ecosistema (MATHES et al., 1991) Se propone proveer una base cientfica que permitir que las sustancias sean evaluadas con una cantidad razonable de esfuerzo y costo. La informacin obtenida provee la base para evaluaciones que permitan determinar qu sustancias podrn ser liberadas al ambiente, cules de ellas sern ambientalmente tolerables y n qu cantidades (RMBKE and MOLTMANN, 1997)

ECOTOXICOLOGIA
Es el estudio de la relacin dosis o concentracin / efecto de txicos liberados al ambiente sobre los sistemas biticos incluyendo los niveles de organizacin inferiores y superiores al nivel de organismos

DAO AL ECOSISTEMA
Involucra tanto la estructura como la funcin del sistema La funcin slo es posible si se considera la estructura La estructura y la funcin no pueden ser consideradas aisladamente Importancia de las relaciones trficas (transferencia de energa y nutrientes)

TOXICOLOGIA Y ECOTOXICOLOGIA

TOXICOLOGIA: Introduccin directa del txico en el organismo Focaliza su atencin sobre una nica especie, el hombre Dosis (DL, DE - tiempo) ECOTOXICOLOGIA: Introduccin del txico en el medio Focaliza su atencin sobre toda la biota (estructura y funcin del ecosistema) Considera los procesos de: Transformacin Degradacin Secuestracin Redistribucin Bioacumulacin Concentracin (CL, CE - tiempo)

TOXICOLOGIA

ECOTOXICOLOGIA

COMPUESTO A SER ENSAYADO

ADMINISTRACION
A travs del ALIMENTO, INYECCION INHALACION (DOSIS) Introduccin en el MEDIO DE ENSAYO (CONCENTRACION) PARTICION TRANSFORMACION DEGRADACION en el medio CAPTURA por organismos

TRANSPORTE - METABOLISMO
dentro de organismos

REACCION CON EL SITIO SENSIBLE O BLANCO

en organismos

EFECTOS
expresados por el ORGANISMO expresados por ORGANISMOS expresados por POBLACION expresados por COMUNIDAD expresados por ECOSISTEMA

QUIMICA AMBIENTAL
La deteccin de una sustancia no es evidencia de sus efectos potenciales. Su relevancia ecotoxicolgica es sujeto de controversia.

Aporta evidencia cuantitativa de la presencia de la sustancia potencialmente txica = ANALISIS DE RESIDUOS Estudia los mecanismos y modelos de transporte, el destino final y el impacto de los xenobiticos en el ambiente abitico (KORTE, 1980, 1987)

Centra su atencin en la sustancia qumica, su ingreso, presencia (concentracin), transporte, destino y procesos de transformacin en el medio abitico (BOURDEAU et al., 1989) Se centra ms directamente en el destino de los productos qumicos desde el momento de su aplicacin hasta que alcanzan a su receptor biolgico (STEINEMANN et al., 1990)

ECOTOXICOLOGIA (en sentido tcnico):

Estudia los efectos (a nivel infraindividual, individual, supraindividual), mecanismos de accin y transporte, metabolismo y mecanismos de detoxificacin de los xenobiticos sobre el medio bitico

DEFINICIONES

ECOTOXICOLOGIA ACUATICA: Es el estudio cuali y cuantitativo de los efectos adversos de xenobiticos sobre los ecosistemas acuticos

CONTAMINANTE: Sustancia introducida en el ambiente como resultado, por lo menos en forma parcial, de la actividad humana y que produce efectos adversos no deseados sobre los organismos individuales y sobre el ecosistema

ECOTOXICOLOGIA
ECOTOXICOLOGIA PROSPECTIVA O PREDICTIVA: Evaluacin de la toxicidad antes de la produccin y comercializacin del producto

 ECOTOXICOLOGIA RETROSPECTIVA: Evaluacin de la toxicidad ante la indicacin cierta o sospecha de que el xenobitico produce efectos adversos sobre el ecosistema OBJETIVOS DEL ENSAYO DE TOXICIDAD: Investigacin bsica Criterio de calidad de agua Evaluacin del impacto ecotoxicolgico o del riesgo Monitoreo de un cuerpo de agua

IMPACTO ECOTOXICOLOGICO: Interaccin entre el agente txico y el sistema bitico que conduce a la interrupcin de la funcin armnica del sistema Cadena causal: agente - receptor - efecto Se manifiesta cuando se exceden las variaciones normales de las funciones del sistema

DEFINICIONES
TOXICIDAD:
Es la capacidad de una sustancia de causar algn efecto nocivo sobre organismos vivos

 Depende de: Cantidad administrada o absorbida Va de ingreso al organismo Distribucin a lo largo del tiempo despus de su administracin Naturaleza y severidad del dao producido Tiempo necesario para producir el efecto

RIESGO:
Es la frecuencia esperable de efectos adversos como consecuencia de la exposicin al xenobitico

SEGURIDAD:
Se establece sobre la base del riesgo socialmente aceptable, considerando las frecuencias esperadas de los efectos adversos y de su severidad sobre el hombre y el ecosistema

Ecosistemas Composicin de la comunidad

Cambios en la poblacin

Respuestas a nivel de organismo individual

Cambios fisiolgicos

Cambios bioqumicos

Contaminante

Aumento del tiempo de respuesta Aumento de la dificultad de vinculacin a productos qumicos especficos Aumento de la importancia ecolgica

Relaciones de vinculacin entre respuestas de diferentes niveles de organizacin

NIVELES DE ORGANIZACION BIOLOGICOS

Caractersticas Estructurales y Funcionales

NIVEL

ESTRUCTURA
Descripcin de formas en ciertos segmentos de tiempo

FUNCION
Evaluacin durante un prolongado perodo de tiempo

CELULAS / ORGANOS

Molculas, membranas, tejidos, caminos metablicos, tipos de clulas, tipo de rganos

Crecimiento, metabolismo, conversin energtica, detoxificacin

ORGANISMO

Especie, habitat, edad, estado, sexo Metabolismo, crecimiento y desarrollo, reproduccin, salud, mortalidad, concentracin en tejidos, comportamiento Presencia, nmero de individuos, Fertilidad, reproduccin, densidad, dispersin, pirmide de eficiencia / produccin edades, relacin de sexos Nmero y composicin de especies, relaciones de dominancia Ubicacin geogrfica, clima, tipo, sucesin, equilibrio Regulacin, funcin

POBLACION

COMUNIDAD

ECOSISTEMA

Resiliencia, estabilidad. Degradacin,, filtracin, produccin primaria, bioretencin

TOXICO

Es el agente que puede producir un efecto adverso

 Dao referido a la estructura y funcin del sistema La introduccin puede ser: deliberada (efluentes) accidental (derrames) El sitio de liberacin es: no puntual puntual La cantidad liberada debe superar un nivel umbral para que se manifieste el efecto Se establece la relacin concentracin / respuesta Duracin de la exposicin Ensayos de toxicidad

TIPOS DE TOXICOS
Segn su modo de accin: No selectivos

 Selectivos Dificultad para establecer interpolaciones entre especies Mecanismos: Presencia o ausencia de sitios receptores Alteracin en los procesos de distribucin del txico Relaciones estructura / actividad (QSAR)

TIPOS DE CONTAMINANTES
IONES INORGANICOS

Metales pesados : no biodegradables Aniones: nitratos Fosfatos

COMPUESTOS ORGANICOS

Hidrocarburos Alcanos, alquenos, alquinos Aromticos Bifenilos policlorados (PCBs) Dibenzodioxinas policloradas (PCDDs) Dibenzofuranos policlorados (PCDFs) Bifenilos polibrominados (PBBs) Plaguicidas Detergentes Clorofenoles

COMPUESTOS ORGANOMETALICOS ISOTOPOS RADIOACTIVOS GASES

Ozono Clorofluorocarbonos (CFCs) Oxidos de carbono: CO2 Oxidos de nitrgeno: NO, NO2, NOX Oxidos de azufre: SO2 CLASIFICACION DE PLAGUICIDAS

Segn organismo blanco

PLAGUICIDA Acaricidas Algicidas Bactericidas Fungicidas Herbicidas

ORGANISMO BLANCO Acaros y termitas Algas Bacterias Hongos Plantas, usualmente malezas terrestres o acuticas Insectos Moluscos (caracoles y babosas) Nematodes (parsitos externos) Roedores Termitas

Insecticidas Molusquicidas Nematicidas Rodenticidas Termiticidas

Segn tipo de formulacin

PLAGUICIDA
Sprays

CARACTERISTICAS
Insecticidas, herbicidas o fungicidas como concentrados emulsificables, lquidos miscibles en agua, polvos solubles en agua (mojables), soluciones oleosas Insecticidas y fungicidas como agentes no diludos, aerosoles de polvos Insecticidas, herbicidas y algicidas bajo la forma de un carrier (transportador) inerte impregnado con el plaguicida Insecticidas y fungicidas para tratamiento de semillas Insecticidas. Repelentes y desinfectantes bajo la forma de spray, para aplicacin en interiores Lquidos evaporables o gases para tratamiento de suelos y control de plagas en almacenajes con efecto nematicida e insecticida Prcticamente, sin liberacin del i.a. en el ambiente; el txico es ingerido por el organismo blanco (insectos, moluscos y roedores) atrado por el seuelo Insecticidas microencapsulados, lacas para pinturas y bandas de resina para uso en interiores

Polvos

Granulados

Coatings Aerosoles

Fumigantes

Cebos

Formulaciones de liberacin lenta

Segn estructura qumica

HERBICIDAS
Algunos criterios usados para

INSECTICIDAS

FUNGICIDAS
Inorgnicos

Organoclorados

(hidrocarburos clorados)

la clasificacin:

Organofosforados (steres de cido fosfrico)

En relacin a la poca de siembra del vegetal a ser protegido En relacin al mecanismo de exposicin (va suelo u hojas) En relacin al modo de accin (herbicidas de contacto, sistmicos) En relacin a la estructura qumica: Acidos fenoxialifticos Nitroanilinas Ureas sustitudas

(Sulfuro, cobre o mercurio)

Orgnicos (ditiocarbamatos) Sistmicos (bencimidazoles) Antibiticos

Carbamatos Piretroides naturales y sintticos Dinitrofenoles Organotinas Microbianos

(Existe gran heterogeneidad qumica)

Carbamatos y tiocarbamatos Triazinas (heterocclicos nitrogenados) Derivados del fenol y dinitrofenoles

BIODISPONIBILIDAD DE TOXICOS

En solucin

Adsorbidos sobre:

Slidos en suspensin Sedimentos Biota

Incorporados a la biota

CONCENTRACION DE TOXICOS EN EL AMBIENTE

Concentracin

TOXICO Propiedades fsicas

Transporte

Propiedades qumicas Fuentes Tasa de ingreso

Transformacin Destino

ECOSISTEMAS Propiedades fsicas Propiedades qumicas

TRANSPORTE
Involucra, generalmente, mltiples medios:

aire, agua, suelo Numerosos modelos, desde difusin simple a ecuaciones multidimensionales complejas
AGUA:

 Varios

modelos matemticos, etc.

distintos:

fsiscos,

Caracterizados por: Simulacin de movimientos del agua, Concentracin o tasa de carga del

contaminante

Dimensionalidad: una (mayora) dos (algunos) tres o ms (muy pocos)

MEDIOS Y COMPARTIMIENTOS AMBIENTALES

MEDIO AIRE

COMPARTIMIENTOS Atmsfera Partculas en aire Aerosoles Nubes (vapor) Biota

AGUA (MEDIO ACUATICO)

Aguas superficiales Sedimentos Slidos en suspensin Agua subterrnea Biota Ambiente marino Ambiente dulceacucola Ambientes salobres Suelo Agua retenida entre los poros del suelo Atmsfera del suelo Vegetacin superficial Biota del suelo

TIERRA (MEDIO TERRESTRE)

PRINCIPALES RUTAS DE INGRESO DE CONTAMINANTES ORGANICOS EN LOS ORGANISMOS

TIPO DE ORGANISMO Vertebrados Terrestres Piel Pulmones RUTA DE INGRESO Sistema digestivo FUENTE DE CONTAMINANTES Alimento y agua ingeridos Superficies contaminadas Aerosoles y partculas en aire Vapor; gotas y partculas en aire

Invertebrados Tracto alimentario terrestres Cutcula (insectos) Paredes del cuerpo (lombrices) Trqueas (artrpodos), vas areas Peces Branquias

Alimento y agua Superficies contaminadas Ambiente contaminado (suelo) Gotas y partculas en aire Contaminantes suspendidos sedimentos Alimento Alimento Cantidades pequeas de agua ambiental o agua ingerida (aves) Alimento Cantidades ingerida disueltos en agua o y

Sistema digestivo Mamferos acuticos y aves Anfibios Sistema digestivo

Sistema digestivo

pequeas

de

agua o y

Piel Invertebrados Tracto alimentario acuticos Superficies respiratorias Plantas Hojas

Contaminantes suspendidos sedimentos Alimento Agua ingerida Contaminantes suspendidos sedimentos Contaminantes partculas Vapores

disueltos en agua

disueltos en agua en gotas

o y o

Races

Contaminantes disueltos en agua del suelo

CRITERIOS PARA EL ESTABLECIMIENTO DE PRIORIDADES EN LA EVALUACION DE TOXICOS

TIPOS DE XENOBIOTICOS: Consumidos directamente por el hombre Liberados directamente al ambiente

 Contaminantes de otros productos CARACTERISTICAS: Indicacin cierta o sospecha de alta toxicidad Alta persistencia en el ambiente Capacidad para inhibir mecanismos de detoxificacin de organismos vivos Acumulacin potencial en la biota y en el ambiente Tipo y tamao de las poblaciones potencialmente

DEFINICIONES
DOSIS: Es la cantidad de sustancia administrada a un organismos, expresada como unidad / peso corporal CONCENTRACION: Es la cantidad de sustancia aplicada en el medio, expresada como unidad de peso o volumen / volumen del medio

 EFECTO: Es el cambio biolgico producido tanto en el nivel de organismo individual como en niveles de organizacin inferiores o superiores al individuo, asociado a la exposicin al txico RESPUESTA: Proporcin de la poblacin expuesta al txico que manifiesta el efecto definido EFECTO CUANTAL: No medible mediante una escala de intensidad o severidad graduada; se expresa como presente o no presente EFECTO NO CUANTAL: Medible mediante una escala de intensidad graduable

EFECTOS
AGUDO: Corto tiempo de exposicin (horas, das) Severidad (mortalidad) Determinacin de la concentracin que causa la mortalidad del 50% de la poblacin expuesta (CL50) CRONICO, SUBCRONICO: Exposicin simple o exposiciones repetidas de largo tiempo de duracin Tiempo de aparicin de los efectos Efectos seleccionados: Letal o subletal Cambios en el comportamiento

Cambios fisiolgicos Cambios bioqumicos Cambios histolgicos Reversible - irreversible (ensayos de recuperacin)

INTERACCION por exposicin a mezclas de txicos EFECTO LETAL: Causa la muerte por accin directa como consecuencia de la exposicin a una determinada concentracin del agente txico EFECTO SUBLETAL: Se produce por debajo del nivel que causa la muerte directamente, como resultado de la exposicin a una determinada concentracin del agente txico

EFECTOS
CURVA CONCENTRACION-EFECTO: Expresa la relacin entre concentracin y magnitud de un efecto determinado, tanto a nivel individual como poblacional CURVA CONCENTRACION-RESPUESTA: Expresa la relacin entre concentracin y proporcin de individuos que responden a un efecto determinado

MEZCLA DE AGENTES TOXICOS

La accin conjunta puede ser: ADITIVA:

 Magnitud del efecto o respuesta numricamente igual a la suma de los efectos o respuestas de txicos individuales COMBINADA: Los txicos producen efectos diferentes o tienen distintos modos de accin MAYOR QUE LA ADITIVA - SINERGISMO: La toxicidad de la mezcla es mayor que la esperada por la simple suma de la toxicidad de los txicos individuales MENOR QUE LA ADITIVA - ANTAGONISMO: La toxicidad de la mezcla es menor que la esperada por la simple suma de la toxicidad de los txicos individuales

CRITERIO PARA LA SELECCION DE EFECTOS

Inequvoco Relevante Rpidamente observable De fcil descripcin Mensurable Biolgicamente significativo Reproducible

 Screening tests: mortalidad Subletalidad: Crecimiento Reproduccin Cualitativo Cuantitativo Se establecen como ndices de toxicidad: CL50,CE50 - tiempo

TEMPORAL SCALE
100000 years 10000 years 1000 years 100 years 10 years 1 year 1 month 1 day
PESTICIDE

CAMBIO CLIMATIC O

ROUTINE EFFLUEN TS

ACID DEPOSITION

PESTICIDE USE SPILLS

APPLICATION

1 second 1 m

1 mm

1m

1 km

1000 km

10000 km

SPATIAL SCALE
ARRANGEMENT OF A VARIETY OF ANTHROPOGENIC HAZARDS ON SPATIAL AND TEMPORAL SCALES (Suter, 1994)

TEMPORAL SCALE
100000 years 10000 years 1000 years
MICROORGANISM POPULATIO N ECOSYSTEM DYNAMICS

REGIONAL DYNAMICS

100 years 10 years 1 year 1 month 1 day 1 second 1 m 1 mm 1m 1 km

POPULATION DYNAMICS
MACROORGANISM PHYSIOLOGY MICROORGANISM PHYSIOLOGY

1000 km

10000 km

SPATIAL SCALE
ARRANGEMENT OF LEVELS OF BIOLOGICAL ORGANIZATION ON SPATIAL AND TEMPORAL SCALES (Suter, 1994)

DEFINICIONES
BIOENSAYO: Mtodo para evaluar la potencia relativa de un agente sobre organismos vivos, mediante la comparacin del efecto del agente con el de una solucin patrn o standard ENSAYO DE TOXICIDAD: Permite la deteccin y evaluacin de la capacidad de un agente de producir efectos txicos adversos sobre organismos vivos

ENSAYOS DE ECOTOXICIDAD
CARACTERISTICAS COMUNES:
Exposicin de grupos de organismos misma poblacin en buenas condiciones de salud con aclimatacin previa Mantenimiento de condiciones ambientales

constantes y estandarizadas Exposicin a concentraciones graduadas del agente Grupos control adecuados Observacin de signos del efecto presentes Medicin y registro detallado de efectos biolgicos en grupos control y tratados Observacin patolgica de grupos control y tratados Anlisis estadstico de resultados

TIPOS DE ENSAYOS

 DE LABORATORIO: Reproduccin parcial de las condiciones reales del ambiente DE CAMPO: Organismos mantenidos en contenedores adecuados (limnocorrales) sometidos a las condiciones del medio Segn sea la renovacin del medio: ESTATICO: Se establece la concentracin del txico al principio del ensayo; el medio no se renueva SEMIESTATICO: Renovacin medio de ensayo y del txico peridica del

FLUJO CONTINUO: Renovacin contnua del medio de ensayo y txico

TIPOS DE ENSAYOS
Segn el tiempo de exposicin:

 AGUDO: Perodo de exposicin corto en relacin al tiempo de generacin del organismo de prueba SUBCRONICO: El perodo de exposicin cubre, al menos, el 10% del tiempo de generacin del organismo de prueba CRONICO: El perodo de exposicin cubre, al menos, una generacin del organismo de prueba DE REPRODUCCION: El perodo de exposicin cubre, al menos, tres generaciones del organismo de prueba DE RECUPERACION: El perodo de exposicin es seguido por la transferencia y observacin en un medio no txico

METODOS DE ENSAYO (1)

Concentracin de efecto no observado (NOEC) Mnima concentracin de observacin de efecto

(LOEC)

ENSAYOS DE TOXICIDAD AGUDA

Peces: mortalidad Invertebrados: inmovilidad Microalgas: crecimiento Indices: CL50 - CE50 - tiempo Ensayo independiente del tiempo (TI) (CL50 - CE50 incipiente)

ENSAYOS DE TOXICIDAD CRONICA Ciclo de vida completo Ciclo de vida parcial Concentracin mxima aceptable de txico (MATC) Valor crnico (VC) NOEC < VC < LOEC

METODOS DE ENSAYO (2)

ENSAYOS CON ESTADIOS TEMPRANOS DE VIDA

 Huevo - embrin - larva - alevino Duracin: 1 2 meses

ENSAYOS DE BIOACUMULACION Compuestos polares (hidroflicos) Compuestos no polares (hidrofbicos) Factor de bioacumulacin (BCF) Coeficiente de particin n-octanol - agua Bioconcentracin - biacumulacin biomagnificacin

INCERTEZAS EN DISTINTOS NIVELES DE INVESTIGACION

TIPO DE ENSAYO / INCERTEZAS POSIBLES EN EXTRAPOLACION FUENTE DE DATOS Influencia de condiciones ambientales sobre la funcin concentracin - respuesta y el rgimen de exposicin ENSAYOS MONOESPECIFICOSDE Un cierto estado del ciclo de vida como representativo del ciclo completo Pocas especies seleccionadas por su facilidad de mantenimiento como representativas de la comunidad natural LABORATORIO

MICROCOSMOS

MESOCOSMOS O MANIPULACION DE ECOSISTEMAS NATURALES

MODELOS

No se considera la relacin con otras especies Los efectos a nivel individual son aplicados a nivel poblacional sin mecanismos de compensacin o ajustes por comportamiento Relaciones artificiales entre especies Se excluyen importantes relaciones trficas Los efectos de borde pueden causar alteraciones en resultados No se considera la heterogeneidad espacial de los ecosistemas naturales en los que se toman las muestras El enfoque y la metodologa se modifican sobre la base de su aplicabilidad y replicabilidad ms que en relacin con su acercamiento a los efectos reales Se excluyen factores climticos naturales Se considera un ecosistema especfico como representativo de un tipo general de ecosistema El "stress" generado por la aplicacin de una sustancia qumica determinada se supone representativo del "stress" generado por sustancias no ensayadas No se consideran los efectos de condiciones fsicas ambientales y climticas ni de eventos histricos sobre el comportamiento del ecosistema Replicabilidad insuficiente Dificultad en recopilar datos relevantes para la determinacin de la relacin concentracin - respuesta en el ecosistema Prolongada duracin del experimento, relacionado con el tiempo requerido por el ecosistema para manifestar una reaccin adecuada, medible y recuperable Formulaciones matemticas imprecisas o incorrectas Efectos basados en una poco uniforme distribucin de los organismos en el campo (agregacin) Insuficientes bases de datos para la verificacin del modelo El modelo es aplicado a un nivel que excede el alcance de su capacidad a fin de obtener una evaluacin relevante Sensibilidad de los resultados frente a la variacin de los parmetros seleccionados o del diseo del modelo.

DISEO DE ENSAYOS

Acercamiento por fases (TIER) Ensayos simples de corto exposicin Ensayos ms complejos tiempo de

Controles concurrentes Control de agua no tratada Ensayo de control de solventes Ensayo de referencia (producto qumico de referencia)

CRITERIOS PARA LA SELECCION DE PROTOCOLOS DE ENSAYO

Aceptacin de la comunidad cientfica Capacidad de prediccin de los efectos de un amplio rango de txicos sobre diferentes organismos Base estadstica - reproducibilidad Rango de concentracin - duracin de la exposicin Datos obtenidos utilizables para la evaluacin de riesgo Costo - eficiencia Sensibilidad - realismo Ensayos uniespecficos Ensayos multiespecficos Experimentos de laboratorio en condiciones controladas Experimentos de campo con un alto nmero de variables Validacin

ESCALAS DE OBSERVACION EN ENSAYOS DE TOXICIDAD

Espacial Temporal Organizacional Estructural Ensayo de laboratorio uniespecfico (cc - m2) Horas - das Organismo Funcional Crecimiento Reproduccin

Microcosmos Das - meses (cc-m)

Organismo Poblacin Comunidad Idem

Produccin Ciclo de vida Cadena trfica Idem

Ensayos de campo Monitoreo ambiental

Das - aos

Aos

dem

dem

MEDIO TERRESTRE - ENSAYOS

EXPOSICION AGUDA

ORGANISMO DE PRUEBA Lombriz de tierra Ave (dosis oral nica) Ave (dietaria)

EFECTOS OBSERVADOS Mortalidad (CL50) Mortalidad (CL50) Mortalidad, peso corporal, comportamiento, tasa de alimentacin Mortalidad (CL50) Mortalidad (CL50) Mortalidad, tasa de alimentacin Mortalidad, tamao al alcanzar el acoplamiento, cambios morfolgicos de huevos, efectos sobre cras Actividad deshidrogenasa, respiracin a corto plazo, ciclo del nitrgeno Reproduccin (NOEC) Reproduccin (NOEC)

Abejas (por contacto) Abejas (oral) Organismos benficos Ave (reproduccin) CRONICA

Microflora

Lombriz de tierra Organismos benficos

MEDIO ACUATICO - ENSAYOS

EXPOSICION ORGANISMO DE PRUEBA Dos especies diferentes de peces dulceacucolas, Cnesterodon decemmaculatus, Poecilia reticulata AGUDA Microcrustceo del zooplancton (Daphnia sp.), Daphnia magna, Daphnia spinulata Alga dulceacucola, Scenedesmus acutus, S. quadricauda, Selenastrum capricornutum Crustceo bentnico, Hyalella curvispina, Hyalella azteca EFECTOS OBSERVADOS Mortalidad (CL50 96 hs)

Inmovilidad (CE50 48 hs)

Inhibicin del crecimiento (CI50 96 hs)

Mortalidad o inmovilidad (CL50 10, 14 das, CE50)

Pez dulceacucola (estados tempranos del ciclo de vida) Pez dulceacucola (reproduccin) CRONICA

Mortalidad de alevinos y juveniles, peso corporal, longitud del cuerpo, tasa de crecimiento

Mortalidad de adultos, mortalidad de alevinos, tiempo de puesta, xito en la eclosin, peso y longitud del cuerpo de adultos y alevinos, tasa de crecimiento, comportamiento

Microcrustceo del Inmovilidad de adultos, nmero de huevos / hembra, zooplancton (ciclo de nmero de efipios / hembra, xito en la eclosin, tiempo de vida completo) eclosin, inmovilidad de nuevos ejemplares, tasa de reproduccin, tasa de crecimiento, comportamiento Crustceo bentnico (ciclo de vida completo) Inmovilidad de adultos, nmero de huevos / hembra, xito en la eclosin, tiempo de eclosin, inmovilidad de nuevos ejemplares, tasa de reproduccin, tasa de crecimiento, comportamiento

CALCULATION METHODS
GRAPHICAL METHOD
LC50 Can be performed with 0 or 1 partial kill(s) Subjective

BINOMIAL METHOD
LC50 (= 95% confidence intervals) Can be performed with 0 or 1 partial kill(s)

MOVING AVERAGE ANGLE METHOD

LC50 + 95% confidence intervals Can be performed with 0 or 1 partial kill(s) Can be performed manually, but labor intensive

MODIFIED SPEARMAN-KARBER METHOD

LC50 + 95% confidence intervals Can be performed with 0 or 1 partial kill(s) The concentrations tested must cover the range 0% - 100% response

LICHFIELD AND WILCOXON METHOD

LC50 + 95% confidence intervals At least 2 partial kills required Can easily be performed manually Subjective to a certain extend

PROBIT ANALYSIS
LC50 + 95% confidence intervals At least 2 partial kills required Is difficult to be performed manually

METODOS ESTADISTICOS RECOMENDADOS PARA ENSAYOS DE TOXICIDAD CRONICA

DATOS OBSERVADOS
ESTIMACION DE CE50
Anlisis Probit Test de Shapiro-Wilks

NORMALIDAD DE DATOS

DISTRIBUCION NORMAL

DISTRIBUCION NO NORMAL

HOMOGEINEIDAD DE VARIANZAS
Test de Bartlett

HOMOGENEIDAD IGUAL NUMERO DE REPLICAS NO

Test de t con ajuste de Bonferroni

HETEROGENEIDAD IGUAL NUMERO DE REPLICAS SI NO

SI
Test de Dunnett con ajuste de Bonferroni

Test de Steel Test de Wil-(ranks) coxon (ranks)

FACTORES A CONSIDERAR EN EL DISEO DE ENSAYOS DE TOXICIDAD

Propiedades fsico-qumicas del producto Pureza qumica Presencia de impurezas Seleccin del organismo de prueba Variables ambientales

PROPIEDADES FISICO-QUIMICAS DEL PRODUCTO

Estructura qumica: grupos funcionales Estabilidad frente a distintos valores de pH Propiedades fotoqumicas Coeficiente de particin n-octanol/agua Naturaleza lipoflica Potencial de ionizacin Tamao y forma de las partculas Densidad

EL ORGANISMO DE PRUEBA
Diferencias en la sensibilidad entre las distintas especies Accesibilidad al txico Tasa y modelo de metabolismo y excrecin Mayor sensibilidad de los individuos juveniles Influencia del estado salud / stress sobre la sensibilidad

CRITERIOS PARA LA SELECCION DEL ORGANISMO DE PRUEBA

Amplio rango de sensibilidad (batera de ensayos con distintos organismos) Sensibilidad constante de la poblacin utilizada Alta disponibilidad y abundancia (amplia distribucin geogrfica) Estabilidad gentica y uniformidad de las poblaciones usadas en los ensayos Organismos autctonos o representativos del ecosistema que se evala Conocimiento de su biologa, fisiologa y hbitos nutricionales Preferencia por especies de importancia recreacional, comercial o ecolgica Disponibilidad de ejemplares a lo largo de todo el ao Sencillo mantenimiento y cultivo en condiciones de laboratorio Preferencia por especies de tamao reducido para facilitar la obtencin de gran nmero de datos Existe un limitado nmero de especies standard: algas fitoplanctnicas crustceos: Daphnia, camarones, Artemia peces rotferos anfpodos En ensayos de campo pueden utilizarse especies no estandarizadas

PROCEDIMIENTOS Y CONDICIONES PARA UNA BUENA PRACTICA DE LABORATORIO

PERSONAL -Calificacin -Responsabilidades -Direccin -Funciones para garantizar la calidad INSTALACIONES -Mantenimiento y manipulacin de organismos de prueba -Manipulacin y almacenamiento de reactivos -Espacio para el desarrollo de los ensayos

EQUIPAMIENTO -Localizacin -Mantenimiento -Calibracin

OPERACIONES TOXICO DE LABORATORIO -Procedimientos operacio- -Manipulacin nales para ensayos, man- y almacenatenimiento de organismos miento y preparacin de solucio-Caracterizanes cin REGISTRO DE DATOS INFORME DE RESULTADOS -Localizacin -Recuperacin

GOOD LABORATORY PRACTICE

OECD :

Organisation for Economic Cooperation and ISBN 92-64-12367-9, Paris 1982.

Development,

U.S.A.:

United States Environmental Protection Agency, Title 40 Code of Federal Regulations Part 160 (FIFRA) Federal Register, 29 November 1983, and Subsequent Amendment Federal Register 17 August 1989. United States Environmental Protection Agency, U.S. EPA 2185, Good Automated Laboratory Practices, 8 October 1995

Japan:

Japan Ministry of Agriculture, Forestry and Fisheries, 59 NohSan, Notification N 3850, Agricultural Production Bureau, 10 August 1984.

U.K.:

Good Laboratory Practice, the United Kingdom Compliance Program, Department of Health and Social Security 1986 and Subsequent Revision, Department of Health 1989.

INTERRELACIONES ENTRE LOS FACTORES QUE DETERMINAN LA SELECCION DE UN PROTOCOLO DE ENSAYO

Mnimo

VALOR ECONOMICO
Costo Duracin Equipamiento Entrenamiento del personal Captura y mantenimiento de organismos.

Costo, representatividad, sensibilidad

PROTOCOLO DE ENSAYO
Eleccin del organismo Eleccin del criterio

Representatividad ecolgica

Sensibilidad

Mximo

VALOR BIOLOGICO

SECTION 12

REPORT PREPARATION
(Adapted from USEPA, 1989c)
The following general format and content are recommended for the report:

12.1 INTRODUCTION
1. Permit number 2. Toxicity testing requirements of permit 3. Plant location 4. Name of receiving water body 5. Contractor (if contracted) a. Name of firm b. Phone number c. Adress

12.2 PLANT OPERATIONS

1. Product(s) 2. Raw materials 3. Operating schedule 4. Description of waste treatment 5. Schematic of waste treatment 6. Retention time (if applicable) 7. Volume of discharge (MGD, CFS, GPM) 8. Design flow of treatment facility at time of sampling

12.3 SOURCE OF EFFLUENT, RECEIVING WATER AND DILUTION WATER

1. Effluent samples a. Sampling point b. Sample collection method c. Collection dates and times d. Mean daily discharge on sample collection date e. Lapsed time from sample collection to delivery f. Sample temperature when received at the laboratory g. Physical and chemical data 2. Receiving Water Samples a. Sampling point b. Sample collection method c. Collection dates and times d. Streamflow at time of sampling and 7Q10

e. Lapsed time from sample collection to delivery f. Sample temperature when received at the laboratory g. Physical and chemical data 3. Dilution Water Samples a. Source b. Collection date(s) and time(s) (when applicable) c. Pretreatment d. Physical and chemical characteristics (pH, hardness, salinity, etc.)

12.4 TEST CONDITIONS

1. Toxicity test method used (title, number, source) 2. Endpoint(s) of test 3. Deviations from reference method, if any, and reason(s) 4. Date and time test started 5. Date and time test terminated 6. Type and volume of test chambers 7. Volume of solution used per chamber 8. Number of organisms per test chamber 9. Number of replicate test chambers per treatment 10. Feeding frequency, and amount and type of food 11. Acclimation temperature of test organisms (mean and range) 12. Test temperature (mean and range)

12. 5 TEST ORGANISMS

1. Scientific name 2. Age 3. Life stage 4. Mean lenght and weight (where applicable) 5. Source 6. Diseases and treatment (where applicable)

12.6 QUALITY ASSURANCE

1. Reference toxicant used routinely, source 2. Date and time of most recent reference toxicant test; test results current cusum chart 3. Dilution water used in reference toxicant test 4. Physical and chemical methods used and

12.7 RESULTS

1. Provide raw toxicity data in tabular form, including daily records affected organisms in each concentration ( including 2. Provide table of endpoints: LC50, NOEC, LOEC, etc. 3. Indicate statistical methods used to calculate endpoints 4. Provide summary table of physical and chemical data 5. Tabulate QA data

of controls)

12.8 CONCLUSIONS AND RECOMMENDATIONS

1. Relationship between test endpoints and permit limits 2. Action to be taken

BIOMARCADOR

Son las respuestas biolgicas a los txicos ambientales los que dan una medida de la exposicin y, a veces, del efecto txico (WALKER et al., 1997)

Pueden ser respuestas a nivel molecular, celular o del organismo entero. Representan una medida del efecto relacionado con la presencia de niveles particulares de un contaminante. Proveen un medio de interpretar niveles ambientales de contaminantes en trminos biolgicos.

BIOMARCADORES A DIFERENTES NIVELES DE ORGANIZACIN

NIVEL DE ORGANIZACIN

EJEMPLO DE BIOMARCADOR

Molcula receptor

unida

un TCDD unido a un acetilcolina Nonilfenoles unidos receptor de estrgeno

receptor a un

Respuesta bioqumica

Induccin de monooxigenasas Inhibicin de

acetilcolinesterasas Alteraciones fisiolgicas

Grosor de la cscara de huevo

(aves) Feminizacin de embriones Efectos a nivel del individuo Cambios de comportamiento Crecimiento

EVALUACION DEL RIESGO

Proceso de estimacin de la probabilidad de que ciertas actividades produzcan determinados efectos adversos

SEGURIDAD Y SALUD HUMANAS

ECOSISTEMAS

EVALUACION DEL RIESGO HUMANO

EVALUACION DEL RIESGO ECOLOGICO

EVALUACION DEL RIESGO GLOBAL

INVOLUCRA

EVALUACION DE LA EXPOSICION
Define el movimiento del agente desde la fuente hasta su destino final ltimo. Origen o fuente Transporte Destino final

EVALUACION DE LOS EFECTOS

Define el impacto asociado a distintos niveles de stress.

EVALUACION DEL RIESGO RELATIVO

OBJETIVO: Desarrollo de indicadores del riesgo total, los que pueden ser utilizados en el proceso de toma de decisiones. Es el paso ms difcil en el proceso de Evaluacin del riesgo Existe carencia de una metodologa de evaluacin slida, ampliamente aceptada

 Integracin de los factores de riesgo con el costo econmico y social de la toma de decisin El apropiado balance entre estas dos clases de factores conduce a acuerdos entre la comunidad cientfica y los organismos polticos encargados de la toma de decisiones

EVALUACION DE EFECTOS ECOLOGICOS

Sobre la base de:

1. CLASIFICACION AMBIENTAL
Ambiente urbano Ambiente productivo Ambiente natural Ambiente de uso mltiple

2. DESARROLLO DE FACTORES DE PESO

3. EVALUACION DE RECEPTOR/ES REPRESENTA-TIVOS

Seleccin de especies representativas a nivel poblacional, de comunidad y de procesos ecolgicos Seleccin de indicadores apropiados de los efectos que se manifiestan sobre los receptores representativos

4.

EVALUACION RESPUESTA

DE

LA

FUNCION

CONCENTRACION-

Recoleccin de datos, teniendo en cuenta: Tipo de efecto medido Condiciones de exposicin Forma de experimentacin Determinacin de la potencial recuperacin de poblaciones y procesos expuestos

EL PROBLEMA DE LA EVALUACION DE LA RELACION CONCENTRACION - RESPUESTA

1. ENFOQUE DIRECTO Completa batera de ensayos Implementacin simultnea Resultados altamente confiables Alto consumo de tiempo y elevado costo

2. ENFOQUE EN FASES O ETAPAS Secuencia de actividades de ensayo Utilizacin de los resultados de las etapas precedentes para el diseo de cada fase subsiguiente FASE 1

 Exposicin aguda Ensayos monoespecficos Evaluacin rpida y grosera del riesgo relativo FASE 2 Y SUBSIGUIENTES Exposiciones de mayor duracin Ensayos multiespecficos Mejor utilizacin de los recursos disponibles Rpido acercamiento a los problemas prioritarios Optima relacin costo - efectividad Potencialmente, resulta posible omitir aspectos importantes del riesgo ecolgico durante la FASE 1 3. ENFOQUE INTERMEDIO Acercamiento en FASES, incluyendo ensayos de mayor tiempo de exposicin durante la FASE 1 Puede existir redundancia de informacin en la FASE 1

LEGISLACION NACIONAL Y PROVINCIAL NACIONAL:

Resolucin No. 440/98 y modificacin 2000 Secretara de Agricultura, Ganadera, Pesca y Alimentacin

Ley Reglamentario No. Peligrosos

24051/92 831/93 -

Decreto Residuos y -

Ley 17319/67 Decretos Disposiciones modificatorias

Disposicin 52/97 Hidrocarburos, Exploracin, extraccin, refineras, construccin, operacin y abandono de oleoductos y poliductos - Proteccin ambiental.

PROVINCIA DE BUENOS AIRES:

Ley 11720 y Decreto Reglamentario No. 806/97 - Residuos Especiales

Resolucin No. 601/98 - Secretara de Poltica Ambiental Residuos txicos con prohibicin de ingreso al territorio de la Provincia de Buenos Aires.

CLASE DE NACIONES UNIDAS 6.1

No. DE CODIGO (LEY 11720)

CARACTERISTICAS

H6.1

Txicos (venenos) agudos: Sustancias o desechos que pueden causar la muerte o lesiones graves o daos a la salud humana, si se ingieren o inhalan o entran en contacto con la piel.

9 H10 Liberacin de gases txicos en contacto con el aire o el agua: Sustancia o desechos que, por reaccin con el aire o el agua, pueden emitir gases txicos en cantidades peligrosas.-

9 H11 Sustancias txicas (con efectos retardados o crnicos) : Sustancias o desechos que, de ser aspirados o ingeridos o de penetrar en la piel pueden entraar efectos retardados o crnicos, incluso la carcinogenia.-

9 H12 Ecotxicos: Sustancias o desechos que, si se liberan, tienen o pueden tener efectos adversos inmediatos o retardados en el ambiente debido a la bioacumulacin o los efectos txicos en los sistemas biticos.-