LABORATORIO DE ANALISIS BIOQUIMICO CLINICO GUIA DE PRACTICAS PRACTICA N 2 HEMATOLOGIA I 1OBJETIVOS - Adiestrar al estudiante en la toma de muestra de sangre: por

puncin venosa como por puncin capilar. - Conocer la composicin de la sangre y el concepto de plasma, suero y hematocrito. - Conocer los diferentes tipos de clulas sanguneas y sus funciones - Conocer los valores normales de estas clulas en un individuo sano - Relacionar alteraciones de algunos de estos valores normales con ciertas patologas - Aprender la tcnica de extensin o frotis sanguneo y de tincin - Manejar el microscopio utilizando aceite de inmersin - Cargado del tubo capilar para determinar el hematocrito. - Cargado de la pipeta de glbulos blancos, para el recuento de stos y sus diferenciacin morfolgica

2- MARCO TERICO La sangre est formada por un liquido de composicin complicada y variable: el plasma que contiene eritrocitos, leucocitos y plaquetas en suspensin impidiendo la coagulacin, los elementos formes pueden ser separados del plasma, que tiene un color paja plido. Cuando la sangre se coagula, el liquido que queda despus de separar el cogulo se denomina suero. La diferencia fundamental entre plasma y suero consiste en que ste ltimo pierde el fibringeno proteico que se convierte en filamentos insolubles de fibrina en el curso de la coagulacin. El suero y plasma se utilizan en muchas investigaciones e inmunologa clnica. Las exploraciones de la sangre tienen valor para el diagnstico de los pacientes en cuanto se relacionan estrechamente con la totalidad del cuadro clnico. El frotis sanguneo es realizado en forma rutinaria en todo hemograma, ya sea que se realice en forma manual o automatizada. En este ltimo sistema, cuando hay normalidad en todos los elementos, se obtienen los datos grficamente desde el equipo y es opcional el uso del frotis ( lectura total , parcial o nada). Esto depender del laboratorio y de la experiencia del profesional. La importancia de un buen extendido y su correcta tincin son fundamentales a la hora de la observacin al microscopio, ya que un frotis mal hecho entrega muy poca informacin acerca de la morfologa celular, by en algunos casos es esta observacin la que entrega al Clnico la informacin que requiere para realizar su diagnstico. TINCIONES HEMATOLGICAS La realizacin de extensiones y tinciones es prctica habitual en el laboratorio. La correcta realizacin, as como una buena interpretacin de lo observado, permite en muchos casos el diagnstico de hematopatas.

3- PARTE EXPERIMENTAL: PROCEDIMIENTO OBTENCIN DE LA SANGRE VENOSA 3.1. PRINCIPIO La sangre venosa se extrae por puncin de una vena del brazo por medio de una aguja y una jeringa. 3.2 MATERIALES Para desinfectar la piel: Etanol 70 o tintura de yodo Algodn Para la puncin de la vena: Un torniquete hecho con un tubo de goma de 2 5 mm de calibre ( ligador). Agujas N 201918 de 3040 mm de longitud. Para nios menores de 5 aos agujas calibre 23 Para obtener sangre: Jeringas de 2,5, 10 o 20 ml debe ser estril y seca de preferencia descartable. Frascos o tubos: Debern estar vacos y contener un anticoagulante y debern tener marcas que correspondan a la cantidad requerida de sangre. MTODO. Decida la cantidad de sangre que se necesitar Prepare el frasco o tubo adecuado que se usar en el ensayo correspondiente. Antes de extraer la sangre lvese las manos con agua y jabn. Si el paciente se encuentra en el Laboratorio: a) b) Haga que se siente de manera que quede colocado paralelamente a la mesa de trabajo donde se har la extraccin de sangre. Ponga el brazo del paciente sobre la mesa de trabajo apoyndolo en un pequeo cojn dispuesto bajo el codo, con la palma de la mano vuelta hacia arriba. Los puntos para la extraccin de sangre: El sitio ms adecuado es la vena que se encuentra en el pliegue anterior del codo, en el punto donde sea ms gruesa y fcilmente visible, aprovechando de preferencia una de las ramas que forman una Y inmediatamente arriba del lugar donde se juntan. Colocar firmemente el torniquete de 7 10 cm ms arriba del sitio de puncin alrededor del brazo y sujete los extremos. El torniquete deber ajustarse solo lo suficientemente para aminorar la corriente sangunea y dilatar las venas, sin apretarla tanto que reduzca el paso de sangre por las arterias. El paciente debe abrir y cerrar la mano varias veces para favorecer la dilatacin de las venas.

3.3

c)

d)

e) f) g)

h) i)

Con el dedo ndice de la mano izquierda palpe la vena en que introducir la aguja. Desinfecte la piel con una pieza de algodn embebido en tintura de yodo o etanol. Tome la jeringa con, la mano derecha, colocando la yema del dedo ndice sobre la base de la aguja y coloque la aguja sobre la vena con el bisel hacia arriba e introduzca la aguja 1 1.5 cm. en el centro de la vena sin titubeos; con la mano izquierda tire hacia atrs el mbolo de la jeringa muy lentamente hasta llenar la cantidad necesaria. Retire el torniquete luego aplique una pieza de algodn sobre la parte donde se encuentra oculta la punta de la aguja y saque la aguja con movimiento rpido por debajo de la pieza de algodn. Pida al paciente que presione firmemente la pieza de algodn durante 3 minutos con el brazo extendido. Separe la aguja de la jeringa, llene los tubos o frascos con la muestra de sangre hasta la marca correspondiente e invierta varias veces los frascos que contengan anticoagulante.

3.4

PREPARACIN DE LA EXTENSIN 3.4.1 PRINCIPIO. La extensin se prepara repartiendo uniformemente una gota pequea de sangre sobre un portaobjetos de manera que slo se deposite una capa pequea de clulas. Despus de teir las extensiones de sangre se usan: Para determinar las fracciones de nmero de los tipos de leucocitos. Para detectar glbulos rojos normales. Para identificar ciertos parsitos. MATERIAL. Porta objetos limpios y desgrasados.

3.4.2

3.4.3

PROCEDIMIENTO. Recoger una gota de sangre (dedo anular = sangre capilar), en una cara del porta objetos cerca del extremo de este. Sostenga el porta objetos con una mano, y con la otra mano coloque el borde del porta objetos frente a la gota de sangre desplace el portaobjetos hacia atrs, hasta que toque la gota de sangre y deje que se extienda por el borde del portaobjetos y formando un ngulo de 45 deslice el portaobjetos hacia el extremo opuesto del portaobjetos que contiene la gota de sangre con movimiento suave, el extendido deber ser uniforme lo ms delgado posible con una cola aparente. Luego dejarlo secar para la tincin correspondiente.

3.5

TINCIN DE LA EXTENSIN

3.5.1

PROPSITO. Teir las clulas sanguneas para hacer recuento diferencial.

3.5.2. PROCEDIMIENTO. Se realiza mediante la tincin de Wright; una vez realizado el extendido de sangre se deja secar para posteriormente cubrir el extendido con el reactivo de Wright por 2 minutos, para despus aadir la solucin buffer y dejar que acte por 7 minutos y homogenizar con un soplador la mezcla, transcurrido el tiempo indicado se lava con agua destilada, se deja secar para observar el microscopio.

3.6

CARGADO DEL TUBO CAPILAR PARA DETERMINAR EL HEMATOCRITO. MATERIALES: Capilares heparinizados. Lanceta. Plastilina. Centrfuga El hematocrito mide el volumen de glbulos rojos y el volumen plasmtico en 100 ml de sangre. La determinacin se realizar por el siguiente mtodo: MICROMETODO: Se emplea tubos capilares heparinizados de 7 cm. de largo, por 1 mm de dimetro interior. El tubo se llena hasta 1 cm. de su extremo y se cierra con plastilina y se centrifuga a alta velocidad de 5000 a 10000 r.p.m. por 510 minutos. Despus se lee la proporcin del volumen ocupado por los hemates con una regla milimetrada.

Longitud de eritrocitos sedimentados Ht = Longitud total de la muestra .

x 100

4- GRAFIQUE TODO EL PROCEDIMIENTO E INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS 5- CONCLUSIONES 6- CUESTIONARIO Y ACTIVIDADES A REALIZAR 1- Describa la venas ms comunes para extraccin de sangre, sus ventajas y desventajas. 2- Pegue o grafique, las distintas clulas sanguneas (estructura vista al microscopio) a todo color y consigne las principales caractersticas.

3- Desde el punto de vista estructural de las clulas sanguneas de el fundamento de la tincin wright. 4- Seale y grafique las principales hemopatologas por exceso y defecto de los glbulos rojos 5- Trabajo de todo el grupo segn su manual de buenas prcticas laboratoriales elabore un manual corto y con grafico didcticos para el laboratorio de anlisis clnico en formato a- 4 anillado.