INSTITUTO TECNOLGICO SUPERIOR DE MISANTLA Reporte Cintica Microbiana Efecto Crabtree Ing. Biorreactores Docente: M.C.

Oswaldo Ortiz Zamora Presentan: Nani Fonseca Cynthia Gpe. Camarero Arellano Yemitzel Cuellar Sanchez Vernica De La Rosa Almora Christian M. IBQ Curso de verano

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Introduccin
La respiracin aerbica.-En la mayora de las clulas, incluyendo la levadura, la respiracin comienza en el citoplasma con la oxidacin de la glucosa a piruvato por un proceso de diez pasos llamado gluclisis. Este proceso requiere de un "empuje" de dos ATPs para empezar, pero una vez rodando produce cuatro ATPs directamente por un proceso llamado fosforilacin nivel de sustrato. La energa adicional se almacena mediante la adicin de electrones de alta energa para el transportador de electrones NAD1+ (Nicotinamida adenina di nucletido) convertir a NADH + H+. Este proceso se llama reduccin (el positivo carga se reduce por la adicin de electrones cargados negativamente). Gluclisis se produce con o sin la presencia de oxgeno. Si el oxgeno est presente, la mayora de los organismos (incluyendo la levadura) siguen la respiracin por oxidacin de los dos piruvatos producidos por la gluclisis a CO a travs de la formacin de acetil CoA y ciclo del cido ctrico de Krebs. Dos molculas de ATP adicionales son producida directamente por el ciclo de Krebs, de nuevo por la fosforilacin nivel de sustrato. La formacin de acetil CoA y el almacn de ciclo de la energa adicional Krebs en NADH + H2 y FADH 2 (Flavina adenina di nucletido). Una vez ms esta energa se almacena por reduccin, la proceso de adicin de electrones de alta energa para la NAD NADH + H+ y FADH 2. NADH + H+ y FADH 2 + y FAD convertirlos a despus transferir su alta energa electrones a la serie de componentes que comprenden la cadena de transporte de electrones. A medida que el electrones pasan por la cadena de transporte de electrones la energa que pierden es atrapado como til energa en ATP a travs del mecanismo de quimiosmosis. El oxgeno es el ltimo electrn aceptor en la electrn transportar cadena, que es por qu la Krebs de ciclo y electrn transportar cadena no puede proceder si oxgeno es ausente. La todo proceso de aerobio respiracin que consiste de gluclisis, acetilo CoA formacin, la Krebs ctrico cido ciclo, la electrn transportar cadena y quimiosmosis producir 3032 ATPs para cada molcula de glucosa dependiente en el tipo de clula. En corazn y hgado clulas para ejemplo 32 ATPs son producido mientras en cerebro clulas 30 ATPs son producido. La fermentacin produce slo 2 ATP por molcula de glucosa (a travs de la gliclisis). La respiracin aerbica produce 30-32 ATPs de una molcula de glucosa. Por lo tanto la capacidad de levadura de vivir en ausencia de oxgeno tiene un precio la fermentacin produce 19 veces un menor nmero de ATP por molcula de glucosa que hace la respiracin aerbica.

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Reino: Fung Divisin: Ascomycota Clase: Hemiascomycetes Orden: Saccharomycetales Familia: Saccharomycetaceae Gnero: Saccharomyces Especie: S. cerevisiae

La cintica del crecimiento de microorganismos que crecen en un cultivo realizado en un volumen finito se le denomina cultivo Bath y podramos traducirlo por cultivo discontinuo

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Se pueden distinguir cuatro fases en el cultivo: Fase de Latencia. Fase lag en la que el microorganismo se adapta a las nuevas condiciones y pone en marcha su maquinaria metablica para poder crecer activamente. La duracin de esta fase es variable y en general es mayor cuanto ms grande sea el cambio en las condiciones en las que se encuentra el microorganismo. Fase exponencial. La fase log es aquella en la que se tiene el mximo crecimiento de microorganismos. Fase estacionaria. En la que no hay aumento neto de microorganismos, lo que no significa que no se dividan algunos, sino que la aparicin de nuevos individuos se compensa por la muerte de otros. Fase de muerte. En la que el nmero de microorganismos vivos disminuye de forma exponencial con una constante k que depende de diferentes circunstancias.

Efecto Pasteur y efecto Crabtree: En el desarrollo de la fermentacin alcohlica se pueden observar dos efectos muy importantes que influyen y pueden afectar todo el proceso. Estos son el efecto Pasteur y el efecto Crabtree. El efecto Crabtree o mejor conocido como efecto glucosa se refiere a que, cuando la concentracin de azcar en el medio es elevada, S. cerevisiae slo metaboliza los azcares por va fermentativa; incluso en presencia de oxgeno, la respiracin es imposible. Entonces, para un proceso de fermentacin, se debera aprovechar las propiedades del efecto Crabtree (elevadas concentraciones de azcar en el medio que favorezcan la fermentacin) y evitar en lo posible el efecto Pasteur (que induce la respiracin en detrimento de la fermentacin).

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JUSTIFICACION
El efecto Crabtree enuncia que cuando la concentracin de azcar es elevada, S. cerevisiae slo metaboliza los azcares por va fermentara; incluso en presencia de oxgeno la respiracin es imposible y se lleva a cabo la fermentacin para la obtencin de etanol. Es por eso, que para comprobar dicho efecto se realiz la presente cintica trabajando bajo condiciones aerobias y anaerobias para obtener etanol de las dos formas comprobndolo mediante la medicin del pH, grados Brix y absorbancia.

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DISEO EXPERIMENTAL

4 Matraces 500 ml 1 Autoclave 2 Pipeta Pasteur 3 Vasos de Precipitados 100 ml 1 Pipeta 5ml 1 Pipeta 10ml 1 Microscopio 1 Cmara de Neubauer 1 Mechero de Bunsen 1 reflectometro

1 1

Esptula Piceta de Agua Destilada espectrofotmetro Algodn gasas Cerillos Agitador Azul de Metileno

3 1

Bombas pHimetro

Preparacin del medio mnimo de sales. El medio mnimo de sales es un medio qumicamente definido de uso general para el cultivo de bacterias poco exigentes. Reactivos (NH4)2SO4 MgSO47H2O K2HPO4 FeSO47H2O pH Reactivos (NH4)2SO4 MgSO47H2O K2HPO4 FeSO47H2O pH Medio (g/L) 5.0 2.0 2.0 0.1 6.5-7.0 Medio (g/300ml) 1.50 0.6 0.6 0.3 6.5-7.0

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Preparacin de los medios de sacarosa Reactivo Sacarosa Sacarosa (g/L) 27 3

Para llevar a cabo la cintica y comprobar el efecto Crabtree, se realiz por dos vas, la aerobia y anaerobia. Para trabajar con la anaerobia se utiliz un matraz en el que todo el tiempo se mantuvo cerrado y en agitacin, teniendo una concentracin de 50gr de sacarosa/lt. Por otro lado en la aerobia se adaptaron tres matraces a diferentes concentraciones, con 100, 150 y 200gr de sacarosa/lt a los cuales se les suministr oxigeno por medio de bombas.

RESULTADOS A continuacin se presentan los resultados obtenidos en la cintica microbiana llevada a cabo en un total de 84 horas consecutivas realizando el conteo de numero de clulas en lapsos de 4 horas y su respectiva medicin del pH. La activacin se llev a cabo el da domingo 02 de septiembre a las 12 hrs, teniendo un nmero inicial de clulas de 2.5625 E19. La inoculacin en los matraces en medios tanto aerobios como anaerobios se realiz el da lunes 03 de septiembre a las 18:30 hrs, momento en el cual se inici la cintica microbiana, terminando el da 07 de septiembre a las 10:30 hrs, ya que las pruebas de viabilidad mostraban la muerte de las levaduras.

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