Curvas de titulacin de los aminocidos. Conceptos de pK, pI. Capacidad tampn.

Debido a que los aas contienen grupos ionizables, la forma inica predominante de estas molculas en disolucin depende del pH. Esto va les va a proporcionar a los aas unas propiedades acido-base que condicionaran a las propiedades acido-base de las protenas. La TITULACIN o valoracin de un aa muestra el efecto del pH sobre su estructura. La titilacin tambin es una herramienta til para determinar la reactividad de las cadenas laterales de los aas. Vamos a explicarlo con un ejemplo: La alanina, que es un aa sencillo y que tiene dos grupos titulables. Durante la titulacin con una base fuerte, como NaOH, la alanina pierde dos H+ de forma escalonadas. Por otro lado, en una solucin muy cida, por ejemplo a pH 1, casi todas las molculas de alanina se encuentran de la forma en la que el grupo carboxilo no est cargado. En estas circunstancias la carga neta de la molcula es +1 ya que el grupo amonio esta protonado (NH4+). Si se reduce la concentracin de H+, el grupo carboxilo pierde su protn y se trasforma en un grupo carboxilato (coo-) con carga negativa. (En un ac poliprtico los 1 protones que se pierden son los del grupo con el pKa menor). El pKa es la fuerza que tienen las molculas de disociarse. ste nos permite ver de una manera sencilla los cambios asociados a variaciones grandes de Ka. Valores pequeos de pKa equivalen a valores grandes de Ka (constante de disociacin) y, a medida que el pKa decrece, la fortaleza del cido aumenta. Un cido ser ms fuerte cuanto menor es su pKa y en una base ocurre al revs, que es ms fuerte cuanto mayor es su pKa. Esas constantes de disociacin no son fijas, dependen de otras variables. Por ejemplo, la constante de disociacin cambia a temperaturas diferentes. Sin embargo, mantiene su valor a la misma temperatura, ante cambios de la concentracin de alguna de las especies o incluso ante la accin de un catalizador.

Volviendo al ejemplo, una vez que el grupo carboxilo ha perdido su protn, la alanina no tiene carga neta y es elctricamente neutral. El pH al que se produce esto se denomina PUNTO ISOELCTRICO (pI)

PUNTO ISOELCTRICO (pI) es el valor del pH en el que una protena no tiene carga neta. El valor pI se calcula haciendo la media aritmtica de los valores de pKa entre los que se encuentra la forma neutra (carga neta 0) La carga neta es la suma algebraica de todos los grupos con carga presentes. Para ver en un ejemplo todas estas propiedades vamos a estudiar el comportamiento de la alanina en funcin del pH. El pI de la alanina puede calculase de la siguiente manera, sabiendo que los valores de pK1 y pK2 de la alanina son respectivamente, 2.34 y 9.7 :

Siguiendo en la valoracin, el grupo amonio pierde su protn, dejando el grupo amino sin carga. Entonces la molcula tiene una carga enta negativa debida al grupo carboxilato (coo-). Los aas con cadenas laterales ionizables tienen curvas de titulacin ms complejas debido a la presencia de 3 fases que corresponden a cada uno de los grupos con capacidad de ceder protn. Un ejemplo de esto es el acido glutmico el cual tiene un grupo carboxilo en la cadena lateral. A pH bajo, el acido glutmico tiene una carga neta de +1. Al aadir la base, el grupo carboxilo pierde un h+ para transformarse en un grupo carboxilato (coo-). El glutamato ahora no tiene carga neta.

Conforme se aade ms base el segundo grupo carboxilo pierde un protn y la molcula tiene una carga de -1. La adiccin de ms base hace que el ion amonio pierda su protn. En ese punto, el glutamato tiene una carga neta de -2. El valor de pI del glutamato es el del pH que se encuentra entre los valores de pKa de los dos grupos carboxilo.

INFORMACIN QUE NOS APORTAN LAS CURVAS DE VALORACIN: 1.- proporciona la medida del pKa de cada uno de los grupos que se ioniza. 2.- nos informa de las regiones del pH donde el aminocido es un buen tampn. 3.- nos informa de la relacin que existe entre la carga neta del aa y el pH de la disolucin (es el punto isoelctrico) 4.- A cualquier valor de pH mayor que el pI el aa posee carga neta negativa y se desplazara hasta el electrodo + (nodo) en un campo elctrico. A pH inferior al pI el aa tendr carga neta y se desplazara hacia el polo (ctodo) en un campo elctrico. 5.- El pI se calcula haciendo la media aritmtica del valor de los dos pK.

Cuando incorporamos un aa a un polipptido los grupos amino y carboxilo- pierden sus cargas. En consecuencia, excepto los residuos terminales N y C todos los grupos ionizables de las protenas son los grupos de las cadenas de 7 aas Histidina, Lisina, Arginina, Aspartato, Glutamato, Cistena y Tirosina. Es importante resaltar que los valores de pKa de estos grupos difieren de los diferentes aas libres. Los valores de pKa de grupos R individuales son afectados por sus posiciones dentro de los ambientes proteicos.