Revista 2009 3

BioTecnologa, Ao 2009, Vol. 13 No.
3 1

Ao 2009 Volmen 13 Nmero 3
ISSN 0188-4786
BioTecnologa, Ao 2009, Vol. 13 No. 3 2

MESA DIRECTIVA
Dra. Mara Luisa Villarreal Ortega
Presidenta
Dr. Alfredo Martnez J imnez
VicePresidente
Dra. Maricarmen Quirasco Baruch
Secretaria
Dra. Mara Soledad Crdova Aguilar
Tesorera
Dra. Ana Carmela Ramos Valdivia
Subsecretaria
Dr. Francisco J avier Cervantes Carrillo
Vocal
I.A. Alaide J imnez Serna
Vocal Estudiante

COORDINADOR EDITORIAL
Lic. Claudia Elyde Cardea Medina

FORMACION EDITORIAL

COMIT EDITORIAL
Dr. Sergio Snchez Esquivel
Editor en Jefe
Instituto de Investigaciones
Biomdicas, UNAM

Dr. Luis Bernardo Flores Cotera
CINVESTAV
Dr. Fernando Luis Garca Carreo
CIBNOR
Dr. Mariano Gutirrez Rojas
UAMI
Dra. Romina Rodrguez Sanoja
Instituto de Investigaciones
Biomdicas, UNAM
Dra. Sara Sols Pereira
Instituto Tecnolgico de Mrida
Dra. Elizabeth Langley McCarron
Instituto Nacional de Cancerologa

DISEO GRAFICO E IMAGEN
Lic. Nayeli Quinto (SODIO NET)

ADSCRIPCIONES Y PUBLICIDAD
Tel./Fax: (55) 5849 5859
Email: smbiotec@yahoo.com.mx

ISSN 0188-4786, revista cuatrimestral publicada por la Sociedad Mexicana de Biotecnologa y
Bioingeniera, A.C. incluida en PERIDICA, ndice de Revista Latinoamericanas en Ciencias (CICH-
UNAM). Certificado de Licitud de Ttulo en trmite y Certificado de Licitud de Contenido en trmite.
Reserva de derechos de Ttulo04-1999-082516265000-101. Los Conceptos que en ella aparecen son
responsabilidad exclusiva de los autores. Se prohbe la reproduccin total o parcial de su contenido
sin previa autorizacin por escrito del Comit editorial. Toda correspondencia deber enviarse a Km.
23.5 Carretera Federal Mxico-Cuernavaca, Av. Cipreses s/n, Col. San Andrs Totoltepec, C.P.
14400, Del. Tlalpan, Mxico, D.F. Tiraje 500 ejemplares.


Editorial 4

Instrucciones para autores 6

ARTCULOS

Lignocelulosa Como Fuente de Azcares Para la
Produccin de Etanol 11

Produccin Microbiolgica de Butanol 26

Biodiesel a Partir de Microalgas 38

Bioelectricidad 62

Etanol Carburante 79

Resea XIII Congreso Nacional y VII SIPAL 103

Resea Cientifica XIII Congreso Nacional y VII SIPAL 106

Informe Financiero del XIII Congreso Nacional de
Biotecnologa y Bioingeniera y del VII Simposio
Internacional de Produccin de Alcoholes y
Levaduras 110

Resea del Premio Alfredo Sanchez Marroquin 2009 116

BioTecnologa, Ao 2009, Vol. 13 No. 3

4
La Biotecnologa en la Sustentabilidad

Las ciencias qumico-biolgicas son fundamentales para sustentar el
desarrollo de cualquier pas; son disciplinas cuya expansin y acumulacin de
conocimiento bsico y aplicado es estratgico, con una enorme complejidad y con
el concurso de otras disciplinas que ha marcado un parte aguas en las sociedades
modernas desde la segunda mitad del siglo pasado. En el presente siglo son
reas de conocimiento indispensables por sus implicaciones en el bienestar
individual y social, en la generacin de bienes y servicios, en la sustentabilidad, en
preservar los ecosistemas y todo tipo de especies biolgicas, en la prolongacin
de la vida con calidad, y en la autosuficiencia. La adquisicin, manejo y
transferencia de conocimiento de frontera en estas disciplinas es, en resumen, un
insumo indispensable para la soberana de las naciones. La biotecnologa en su
forma ms amplia, con componentes de ciencia bsica y aplicada, y por definicin
multidisciplinaria y multisectorial, es la expresin ms incluyente de las disciplinas
qumico-biolgicas.
Las acciones humanas que se han desarrollado y sofisticado durante
milenios para preservar y garantizar la sobrevivencia de los individuos y de las
sociedades han tenido grandes impactos en los diferentes ecosistemas: el uso
indiscriminado de los recursos naturales y el manejo inadecuado de desechos,
necesarios para la produccin de alimentos y de energa para concentraciones
humanas cada vez ms numerosas, ha impuesto grandes presiones sobre el
ambiente, pero el hombre se ha vuelto irreversiblemente dependiente de estas
prcticas.
La visin en pocas recientes ha cambiado, generando una importante
preocupacin por el dao del ambiente, por el agotamiento de los recursos
naturales, y estn surgiendo estrategias que en el futuro cercano y a mediano
plazo nos permitirn seguirnos desarrollando de manera sustentable. Una parte
muy importante de las semillas de sustentabilidad se estn gestando en el mbito
de la biotecnologa, ya que atae en gran medida a las ciencias qumico-biolgicas
el estudio de estos problemas y el planteamiento de soluciones. La biotecnologa
EDITORIAL

5
es y deber ser un actor fundamental en la generacin de recursos eficientemente
renovables y con menos impacto en el ambiente.
En este contexto, la vinculacin de recursos biolgicos con la produccin de
energa es un rea de gran oportunidad que est siendo explorada por muchos
grupos de biotecnlogos en el mundo y en nuestro pas. En el presente nmero de
la revista BioTecnologa, se incluyen cinco artculos que dan cuenta de estas
reas de oportunidad: la produccin de biodiesel a partir de microalgas, el uso de
lignocelulosa para la produccin de azcares con el propsito de producir etanol,
la produccin microbiana de butanol, etanol carburante y la generacin de
bioelectricidad. Esto representa un abanico de importantes alternativas que tienen
como denominador comn vincular a los recursos biolgicos con la produccin de
energa, buscando alternativas sustentables que en el futuro nos den mayor
certidumbre en el desarrollo humano, sobretodo en las grandes colectividades.

Dr. Mariano Garca-Garibay
Departamento de Biotecnologa, Unidad Iztapalapa
y Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud, Unidad Lerma.
Universidad Autnoma Metropolitana.

EDITORIAL
6
Gua de Autores

La revista puede recibir trabajos de investigacin original as como de revisin en los campos de la
biotecnologa y bioingeniera. Todos los manuscritos sern sujetos a revisin por al menos dos
miembros del Comit Editorial y debern contar con una recomendacin de aceptacin para ser
publicados.
Los idiomas de la revista son el Espaol y el Ingls.
Los trabajos se escribirn en hoja tamao carta (21.6 cm x 27.6 cm). Los mrgenes aplicados a
todo el manuscrito sern de 2.5 cm para los extremos superior e inferior, as como 3 cm de cada lado.
Las pginas debern estar numeradas en la parte inferior y central de cada hoja.
Se recomienda que los trabajos completos tengan un mximo de 25 pginas, escritas con un
interlineado de 1.5 renglones, incluyendo las tablas y figuras. Las publicaciones de trabajos originales
y revisiones en la revista Biotecnologa estn exentas de costo para los autores.
Cuando corresponda, se recomienda el uso de abreviaturas para referirse a unidades de tiempo (h,
min, s), de volumen (l, ml, l), de peso (kg, g, mg, g), DNA, RNA y otras comnmente aceptadas en
la literatura cientfica.
Los trabajos de investigacin original pueden tocar cualquiera de los diversos campos que cultivan
la biotecnologa y la bioingeniera, desde sus aspectos fundamentales hasta las aplicaciones de los
mismos, incluyendo: microbiologa, bioqumica y biologa molecular, procesos y proyectos, as como
biotecnologa marina y biotecnologa aplicada a la salud, alimentos, agricultura, veterinaria, enzimas y
ambiente.

Los trabajos de investigacin original sern divididos en las siguientes secciones: Introduccin,
Materiales y mtodos, Resultados, Discusin, Referencias y Agradecimientos. Las secciones de
Resultados y Discusin pueden presentarse combinadas.

Los trabajos de revisin incluirn el tema y subtemas que a juicio de los autores sean necesarios
para la mejor presentacin de la informacin. Estos trabajos pueden cubrir los siguientes contenidos:
1. Qu es y para qu sirve la Biotecnologa?. Es decir: descripciones que ilustren y divulguen los
distintos campos de la biotecnologa, sus alcances y limitaciones, su historia y sus perspectivas.

2. Las fronteras de la biotecnologa: revisiones de nuevos campos o nuevas aplicaciones de la
biotecnologa. Por ejemplo: las perspectivas del uso de los genomas para el desarrollo de nuevas
drogas o para el tratamiento de enfermedades metablicas. Las perspectivas de la genmica
(estudio sistemtico de los genes y sus aplicaciones), la protemica (prediccin de la expresin de
los genes en protenas funcionales) y la fenmica (prediccin de fenotipos o conductas de los
organismos, en base a sus genes y a sus protenas). El uso de la ingeniera gentica para hacer
7
ingeniera metablica. Los nuevos tipos de reactores biolgicos y los fenmenos de transporte
implicados. Los nuevos esquemas de reaccin, separacin y control en procesos biotecnolgicos.

3. Aplicaciones de la Biotecnologa para resolver problemas o atender necesidades de la sociedad,
con especial atencin a sus aplicaciones ya vigentes en Mxico. Esta seccin ser dedicada a
una empresa o institucin (pblica o privada) que desee difundir los logros obtenidos en algn
campo de la biotecnologa. Por ejemplo: empresas productoras de antibiticos o productos
biolgicos, empresas de ingeniera ambiental que usen procesos biotecnolgicos, empresas
agropecuarias, forestales o de acuacultura que usen tecnologas biolgicas avanzadas, o
empresas de transformacin de alimentos que utilicen enzimas, cultivos de microorganismos, etc.
Esta lista es indicativa pero no exhaustiva.

4. Problemas de bioseguridad, biotica y biodiversidad relacionados con las aplicaciones de la
biotecnologa a la sociedad. Por ejemplo: anlisis y comentarios sobre los debates acerca del uso
de semillas transgnicas, los problemas de conservacin y explotacin de la biodiversidad
mediante la biotecnologa, los riesgos del uso de organismos transgnicos en diversos campos de
la industria, los problemas de bioseguridad del uso de antibiticos y otros productos
biotecnolgicos.

5. La educacin, la cultura y la difusin tecnolgica en relacin con la biotecnologa. Por ejemplo:
comentarios de planes y programas, de estilos y necesidades de la enseanza, del enfoque
interdisciplinario, en carreras o planes de estudio directamente ligados con la biotecnologa.
Tambin necesidades y modalidades sobre programas de extensin educativa para la industria,
para el pblico consumidor o para grupos selectos de personas interesadas en la biotecnologa
(polticos, funcionarios de empresas, lderes de opinin). El uso de la informtica en la difusin de
la biotecnologa, y en general, el anlisis de necesidades, mtodos y alternativas para difundir los
conocimientos de la biotecnologa.

6. Oportunidades y propuestas para mejorar la cooperacin y el desarrollo biotecnolgicos. Por
ejemplo: Anlisis de las oportunidades vigentes de intercambio acadmico o comercial en
biotecnologa. Propuestas de nuevas formas de cooperacin entre los sectores de investigacin y
la industria biotecnolgica. Anlisis y propuestas del uso ptimo de recursos humanos, financieros
o materiales para mejorar la cooperacin o el desarrollo de la biotecnologa. En esta seccin se
dar espacio a los anlisis, crticas o propuestas de los aspectos legales y fiscales que afecten e
incluso puedan mejorar el desarrollo de la biotecnologa en Mxico. Tales como: la propiedad
industrial, el rgimen fiscal de las empresas, el costo del desarrollo biotecnolgico y los subsidios
o estmulos econmicos para el desarrollo de la biotecnologa.

Tanto los trabajos de investigacin original como las revisiones debern apegarse al siguiente
formato:
1. El ttulo del manuscrito ser puesto en negritas con letra Arial o equivalente tamao 14. El
ttulo deber estar centrado.

8
2. El nombre de los autores ocupar los siguientes renglones escribiendo el nombre y primer apellido
de cada participante. Se usar letra Arial o equivalente tamao 12. Los nombres de los
participantes debern estar centrados, sealando con un asterisco el autor responsable de la
publicacin. En el siguiente rengln con letra itlica Arial del mismo tamao, se incluir la
direccin postal de la institucin de adscripcin de los autores, as como el e-mail del autor
corresponsal.

3. Se deber aadir un Resumen de no ms de 250 palabras en Espaol y un Abstract en Ingls de
tamao similar.

4. Se incluirn entre 3 a 6 Palabras clave: que permitan clasificar el artculo en una base de datos.
Estas palabras debern de incluirse en Espaol y en Ingls (Key words:).

5. Si el texto inicia con el nombre de algn subtema, ste de pondr como primera lnea en cursivas
con letra Arial o equivalente tamao 10. Despus en el siguiente rengln se iniciar el texto
descriptivo usando letra Arial o equivalente tamao 10. El texto deber ser escrito con un
interlineado de 1.5 renglones. Se deber dejar un espacio de un rengln al inicio de una seccin o
subtema nuevo. Los gneros y especies debern escribirse en letras itlicas.

6. Las figuras debern numerarse con arbigos, correlativamente en orden de aparicin en el texto.
No se integrarn al texto, sino al final del manuscrito. No obstante, para facilitar el trabajo de
edicin, se recomienda indicar la ubicacin de las mismas en el momento en que son
mencionadas por primera vez en el texto. Las figuras deben incluir un breve ttulo explicativo en la
parte inferior de la misma. Si es necesario incluir fotos, stas se debern designar como figuras.
La impresin de las figuras e imgenes se har en blanco y negro, por lo que se recomienda que
muestren un buen contraste, en especial las figuras con varias lneas. Segn el orden de aparicin
en el texto, las tablas tambin se numerarn con arbigos ubicados en la parte superior de las
mismas e incluirn un breve ttulo explicativo. Las notas en las tablas debern ser indicadas con
letras minsculas en superndice. La ubicacin de las tablas ser sealada en el texto pero se
anexarn en hojas separadas despus de las Referencias.

7. La informacin dada como referencias bibliogrficas deber permitir a los lectores llegar con
facilidad a tal fuente de informacin original, si ello fuera necesario. En el texto del trabajo, las
referencias se citan por autor y ao entre parntesis redondos. Por ejemplo: Martnez & Garca
(1999) han demostrado que..., o bien, Datos recientes (Martnez & Garca, 1999) han
demostrado que.... Si la cita posee varios autores se escribira como sigue: Gutirrez et al.
(2003), han demostrado. O bien: Datos recientes (Gutirrez et al., 2003) han mostrado Si
la cita es es una pgina de Internet, sta deber ponerse completa entre parntesis directamente
en el texto donde se mencione. La lista de Referencias se deber escribir con el mismo tipo de
letra del texto principal (Arial tamao 10) de acuerdo al siguiente formato:

9
Para revistas:
Garca-Carreo F, Cota K & Navarrete del Toro MA (2008) Phenoloxidase activity of hemocyanin
in whiteleg shrimp, Penaeus vannamei: conversion, characterization of catalytic properties, and
role in postmortem melanosis. J. Agric. Food Chem. 56: 6454-6459.
Para libros y captulos de libros:
(Libro)
Ullrich M (2009) Bacterial Polysaccharides: Current Innovations and Future Trends. Horizon Scientific
Press, Norwich.
(Captulo de libro)
Snchez S & Demain AL (2009) Metabolic regulation and overproduction of primary metabolites. In:
Encyclopedia of Industrial Biotechnology. Bioprocess, Bioseparation, and Cell Technology
(EIB). Flickinger MC (ed). John Wiley & Sons, Inc. Hoboken, NJ. pp. 396-458.
Para patentes:
Fenical WH, Jensen PR & Kwon HC (2009) Polyol macrolide antitumor-antibiotics from the marine
actinomycete strain CNQ140. US patent 7,521,414.
Para congresos y reuniones: Se aceptarn un mximo de dos citas de este tipo.
Reyes N, Domnguez RM, Islas I & Solis S (2007) Induccin diferencial por pH y temperatura del
Complejo pectinoltico producido por clulas inmovilizadas de Aspergillus HL. XII Congreso
Nacional de Biotecnologa y Bioingeniera. Morelia Mich. Mxico. OIII-12.

Para citas provenientes de internet: Se aceptar un mximo de dos citas de este tipo.

Van Deuren J, Wang Z & Ledbetter J (1997) Remediation Technologies Screening Matrix and
Reference Guide. 3 Ed. Technology Innovation Office, EPA. Disponible en:
http://www.epa.gov/tio/ remed.htm.

Revistas electrnicas:

Sun J, Lu X, Rinas U, & Zeng AP (2007) Metabolic peculiarities of Aspergillus niger disclosed by
comparative metabolic genomics. Genome Biol. 8: R182.

10
Para tesis de pre y posgrado:

Crdenas C (2009) Evaluacin del uso biotecnolgico de la semilla de Ditaxis heterantha para la
Produccin de safranal. Tesis de Maestra en Ciencias Bioqumicas. Universidad Nacional
Autnoma de Mxico. Mxico D.F. pp. 1-78.

Cada autor es responsable de la precisin de las citas que emplea. Las citas de internet,
congresos y reuniones, debern evitarse al mximo.
Una vez que ha sido revisado y aceptado su trabajo, los autores debern enviar una carta de
cesin de los Derechos de Autor, de manera que la Sociedad Mexicana de Biotecnologa y
Bioingeniera pueda hacer uso del artculo aceptado, o parte de l, con fines de divulgacin y
difusin de la actividad cientfica y tecnolgica. En ningn caso, dichos derechos afectan la
propiedad intelectual que es propia de los autores, para usar la totalidad o parte de ese artculo
con fines no lucrativos.
Los trabajos solamente se reciben va correo electrnico en la direccin smbiotec@yahoo.com.mx
Al momento de recibirlo, se enviar un acuse de recibo al autor corresponsal, por lo que se pide
incluir una direccin de correo electrnico para este fin, as como para mantener comunicacin
con el editor sobre la evolucin de la revisin y sobre la aceptacin del mismo.
Una vez aceptados, los trabajos son editados y enviados a los autores para su correccin. En esta
condicin no se permitirn cambios sustanciales en el contenido de los mismos sin la aprobacin
del editor en jefe. Una vez aprobada la prueba, el trabajo se publicar en lnea y podr ser
consultado en la pgina de la Sociedad Mexicana de Biotecnologa y Bioingeniera AC
http://www.smbb.com.mx/ La publicacin en lnea preceder a la publicacin impresa.

Lignocelulosa Como Fuente de Azcares Para la
Produccin de Etanol.

Laura Cuervo
1
, Jorge Luis Folch
1
, Rosa Estela Quiroz
1,2
*

1
Centro de Investigacin en Biotecnologa, UAEM.
2
Instituto de Biotecnologa,
UNAM. Av. Universidad 2001 Col. Chamilpa, Cuernavaca, Mor. 62209, Mxico.
reqc@ibt.unam.mx

RESUMEN
La lignocelulosa es el principal componente de la pared celular de las plantas, esta biomasa
producida por la fotosntesis es la fuente de carbono renovable ms prometedora para solucionar
los problemas actuales de energa. El principal impedimento tecnolgico para la utilizacin de la
biomasa vegetal es, en general, la ausencia de una tecnologa de bajo costo dirigida a la
recalcitrancia de la lignocelulosa. Se han desarrollado diversos mtodos que mejoran la hidrlisis
de la lignocelulosa, como los pretratamientos fisicoqumicos y biolgicos. La finalidad del
pretratamiento es remover la lignina, hidrolizar la hemicelulosa a azcares fermentables, y reducir
la cristalinidad de la celulosa para liberar la glucosa. El propsito de esta revisin es mostrar un
panorama de los mtodos que se han desarrollado para hidrolizar la lignocelulosa.
Palabras clave: celulosa, hidrlisis, pretratamientos qumicos y biolgicos.

ABSTRACT
Lignocellulose, the main component of plant cell wall produced by photosynthesis is the most
promising renewable carbon source to overcome the energy crisis. The central technological
impediment to a more widespread utilization of this resource is the general absence of low-cost
technology for overcoming the recalcitrance of ligcellulosic biomass. Several methods have been
developed to improve lignocellulosic material hydrolysis, such as physicochemical and biological
pretreatments. The goal of both pretreatments is to remove lignin and hemicellulose, as well as
reducing cellulose crystallinity in order to release glucose units that can be used as a carbon source
for fermentation processes to obtain biofuels. The aim of this revision is to show a general view of
the methods developed to hydrolyze cellulosic material.
Key words: cellulose, hydrolysis, chemical and biological pretreatments.

11
INTRODUCCIN
La bioenerga es una de las fuentes de
energa renovables que puede reemplazar en
parte el uso de los combustibles fsiles.
Contribuye a la diversificacin de la energa
de los pases y a la apropiacin de
tecnologas de energas emergentes,
reduciendo las emisiones de gas
invernadero, la generacin de empleo en el
rea rural y la sustitucin de la importacin
de combustibles (Islas et al., 2006). La
agencia internacional de energa (IEA, por
sus siglas en ingls) sugiere que a partir de
la biomasa se puede obtener cerca de un
tercio de la energa necesaria en frica, Asia
y Latinoamrica (Somerville, 2007). El
material lignocelulsico es atractivo por su
bajo costo y alta disponibilidad en diversos
climas y localidades, sin embargo, el principal
impedimento para su utilizacin es la falta de
una tecnologa de bajo costo para degradar
la fraccin recalcitrante de la biomasa.
Aunque existen mtodos fsicoqumicos que
permiten utilizar la biomasa en la produccin
de biocombustibles, una alternativa
prometedora son los mtodos biolgicos que
utilizan organismos celulolticos para obtener
azcares fermentables (Lynd et al., 2002).
Los sustratos ms utilizados para producir
biocombustibles son la caa de azcar y el
maz, siendo Brasil el mayor productor de
bioetanol a partir de caa de azcar y
Estados Unidos que emplea el maz; las
fuentes celulsicas potencialmente utilizables
son los desechos de la industria maderera,
residuos de cosechas (bagazos), hierbas,
aserrn y desechos slidos de animales (Gray
et al., 2006).

COMPOSICIN DEL MATERIAL
LIGNOCELULSICO
La lignocelulosa (celulosa, hemicelulosa y
lignina) es el principal y ms abundante
componente de la biomasa producida por la
fotosntesis, anualmente se forman 200,000
millones de toneladas en el mundo
(Ragauskas et al., 2006). La pared celular de
las plantas est formada por lignocelulosa, la
composicin y porcentajes de los polmeros
varan entre las especies de plantas, incluso
La lignocelulosa (celulosa, hemicelulosa y
lignina) es el principal y ms abundante
componente de la biomasa producida por la
fotosntesis, anualmente se forman 200,000
millones de toneladas en el mundo
(Ragauskas et al., 2006). La pared celular de
las plantas est formada por lignocelulosa, la
composicin y porcentajes de los polmeros
varan entre las especies de plantas, incluso
entre la edad y la etapa de crecimiento
(Jeffries, 1994). La celulosa es un polmero
de D-glucosa unida por enlaces glucosdicos
|-1,4 que se estructuran en largas cadenas
lineales (microfibrillas) unidas por puentes de
hidrgeno y fuerzas de van der Waals
intramoleculares, formando una estructura
cristalina resistente a la hidrlisis y regiones
amorfas susceptibles a la degradacin
enzimtica (Ovando & Waliszewski, 2005;
Bguin & Aubert, 1994). La celulosa es
sintetizada, en menores proporciones, por
bacterias del gnero Acetobacter y los
12
tunicados (Czaja et al., 2007; Sasakura et al.,
2005). La hemicelulosa es un polmero
complejo de heteropolisacridos formado por
pentosas (D-xilosa y L-arabinosa) y hexosas
(D-glucosa, D-manosa y D-galactosa) que
forman cadenas ramificadas y los cidos 4-
O-metilglucurnico, D-galacturnico y D-
glucurnico, los azcares estn unidos por
enlaces |-1,4 y ocasionalmente por enlaces
|-1,3 (Prez, et al., 2002). La lignina es un
heteropolmero amorfo, tridimensional y
ramificado formado por alcoholes aromticos
que da soporte estructural, rigidez,
impermeabilidad y proteccin a los
polisacridos estructurales (celulosa y
hemicelulosa) y es altamente resistente a la
degradacin qumica y biolgica (Aro et al.,
2005) (Fig.1). Existen dos tipos de sistemas
enzimticos extracelulares: los que producen
hidrolasas que degradan la celulosa
(celulasas) y la hemicelulosa (hemicelulasas)
y los que despolimerizan la lignina por
reacciones de oxidacin (peroxidasas y
lacasas) (Prez et al., 2002). En los residuos
lignocelulsicos existe una variacin en el
contenido de celulosa, hemicelulosa y lignina
como se muestra en la Tabla 1.

Fig.1. Estructura de la lignocelulosa. La celulosa, la hemicelulosa y la lignina forman estructuras
llamadas microfibrillas, organizadas en macrofibras que regulan la estabilidad de la pared celular
de las plantas (Tomada de Rubin, 2008).

13

Tabla 1. Contenido de celulosa, hemicelulosa y lignina de residuos agrcolas y desechos
a
Material lignocelulsico Celulosa (%) Hemicelulosa (%) Lignina (%)

Madera dura 40-55 24-40 18-25
Madera suave 45-50 25-35 25-35
Cscara de nuez 25-30 25-30 30-40
Olote de maz 45 35 15
Desechos de pastos 25-40 35-40 18-30
Papel 85-99 0 0-15
Paja de trigo 30 50 15
Hojas 15-20 80-85 0
Algodn 80-95 0 0
Papel peridico 40-55 25-40 18-30
Desecho de papel de pulpeos qumicos 60-70 10-20 5-10
Desechos slidos de aguas residuales 8-15 ND
b
24-29
Desechos animales (cerdos) 6 28 ND
b

Desechos slidos de ganado 1.6-4.7 1.4-3.3 2.7-5.7
Hierba Bermuda 25 35.7 64
Pastos de crecimiento rpido 45 31.4 12

a
Sung & Chen, 2002,
b
ND-No disponible

DEGRADACIN DE LA CELULOSA
Organismos degradadores de la celulosa
Los hongos basidiomicetos y las bacterias
aerobias degradan el material celulsico a
travs de la produccin de celulasas
extracelulares (Lynd et al., 2002). Entre este
grupo se encuentran las bacterias del gnero
Cellulomonas (Elberson et al., 2000) y
Streptomyces (Alani et al., 2008), as como
los hongos basidiomicetos responsables de
la pudricin de la madera (Baldrian &
Valaskova, 2008), que son los organismos
ms estudiados en esta rea porque
producen celulasas y actualmente dominan
las aplicaciones industriales. Entre estos

ltimos se encuentran Sclerotium rolfsii,
Phanerochaete chrysosporium, Volvariella
volvacea, Schizophyllum commune,
Pycnoporus sanguineus, Bjerkandera adusta,
y algunos ascomicetos como Trichoderma
reesei, y especies de Aspergillus, y
Penicillium (Sternberg, 1976; Duff & Murray,
1996; Ding et al., 2006; Quiroz-Castaeda et
al., 2009). Los hongos y bacterias anaerobias
degradan la celulosa a travs de
celulosomas, habitan en aguas residuales y
en el rumen y el tracto intestinal de los
animales herbvoros e insectos como
escarabajos y termitas (Cazemier et al.,
2003; Warnecke et al., 2003). Bacterias
pertenecientes a este grupo son Clostridium
14
y Ruminococcus y los hongos Anaeromyces
mucronatus, Caecomyces communis,
Cyllamyces aberencis, Neocallimastix
frontalis, Orpinomyces sp. y Piromyces sp.
(Doi, 2008; Teunissen & Op den Camp,
1993).
Los microorganismos aerobios producen
celulasas con diferentes especificidades y
modos de accin, actuando en sinergismo
para hidrolizar la celulosa (Henrissat, 1991).
Hay tres tipos de celulasas (Fig.2): las
endoglucanasas (EGs) (EC 3.2.1.4), que
cortan azarosamente en regiones amorfas de
la celulosa generando oligosacridos, esto
causa la disminucin en el largo de las
cadenas y un incremento de los azcares
reductores; las exoglucanasas o
celobiohidrolasas (CBHs) (EC 3.2.1.74),
que actan sobre los extremos reductor y no
reductor de las cadenas de celulosa
liberando glucosa o celobiosa y las |-
glucosidasas (EC 3.2.1.21) que hidrolizan la
celobiosa y las celodextrinas para liberar dos
molculas de glucosa (Lynd et al., 2002).

Fig. 2. Representacin esquemtica de la hidrlisis de la celulosa amorfa y cristalina en el sistema
de celulasas complejo (A) y no complejo (B) (Modificado de Lynd et al., 2002).

Degradacin del material lignocelulsico:
Pretratamientos.
Existen tres pasos principales en el
proceso de conversin de la lignocelulosa:
1) Pretratamiento: mejora el acceso de las
enzimas a la celulosa.
2) Sacarificacin enzimtica: uso de
celulasas y ocasionalmente hemicelulasas.
15
3) Fermentacin: de los azcares liberados.
La finalidad del pretratamiento es remover
la lignina y la hemicelulosa, reducir la
cristalinidad de la celulosa e incrementar la
porosidad del material, mejorando la
liberacin de azcares y evitando la
degradacin o prdida de carbohidratos as
como la formacin de compuestos inhibitorios
para la posterior fermentacin. Existen
diversos procesos para el pretratamiento de
materiales lignocelulsicos (Sun & Cheng,
2002).
MTODOS FSICOS
Fragmentacin mecnica y pirlisis
El material lignocelulsico es
fragmentado, triturado y molido (hasta 0.22
mm) para aumentar el rea de contacto,
facilitando el acceso de las celulasas a las
fibras de celulosa y aumentando su
conversin (Millet et al., 1976). En la pirlisis
la lignocelulosa se descompone en diferentes
productos gaseosos y carbn residual
cuando es tratada con temperaturas altas de
hasta 300C (Kilzer & Broido, 1965). Aunque
es un mtodo eficiente para tratar el material
lignocelulsico tiene un costo elevado en
comparacin con otros mtodos.

MTODOS FSICO-QUMICOS
Explosin por vapor
Es uno de los pretratamientos ms efectivos
para las maderas duras y desechos
agrcolas, pero menos eficiente para
maderas suaves (Clark & Mackie, 1987). La
biomasa es tratada con vapor saturado a una
temperatura de 160260C (0.694.83 MPa)
durante cierto tiempo causando reacciones
de autohidrlisis, donde la hemicelulosa y
lignina son convertidos en oligmeros
solubles. La adicin de H
2
SO
4
mejora la
posterior hidrlisis enzimtica y disminuye la
produccin de compuestos inhibitorios. Los
factores que afectan el proceso son el tiempo
del tratamiento, la temperatura, el tamao de
partcula y el contenido de humedad (Duff &
Murray, 1996). Las ventajas de este mtodo
son un requerimiento bajo de energa
comparado con los mtodos fsicos
convencionales que requieren 70% ms
energa para alcanzar el mismo tamao de
reduccin de las partculas (Holtzapple et al.,
1989). Las limitantes del proceso son la
destruccin parcial del xilano y la separacin
incompleta de la lignina y los carbohidratos,
as como la generacin de compuestos
inhibitorios para los microorganismos
utilizados en procesos de fermentacin
(Mackie et al., 1985).

Explosin de fibra de amonaco (AFEX)
Este pretratamiento mejora
significativamente la tasa de sacarificacin de
diversos sustratos lignocelulsicos (Mes-
Hartree et al., 1988; Vlasenko et al., 1997;
Reshamwala et al., 1995) los cuales son
tratados con amoniaco a alta temperatura y
presin. Es eficiente para sustratos con poca
lignina, logrando hasta el 90% de la hidrlisis
de la celulosa y hemicelulosa (Holtzapple et
al., 1991) y no se producen inhibidores ni se
requiere que el material lignocelulsico sea
triturado. Para reducir los costos y proteger el
ambiente, el amoniaco se recicla despus del

16

reducir los costos y proteger el ambiente, el
amonaco se recicla despus del
pretratamiento (Dale et al., 1984). El efecto
de los mtodos fsicoqumicos vara de
acuerdo al material lignocelulsico, como se
observa en la Tabla 2.
MTODOS QUMICOS
Ozonlisis
El ozono degrada la lignina y la
hemicelulosa de sustratos como la paja de
trigo y de algodn, el bagazo de caa y el
aserrn de pino y lamo (Ben-Ghedalia &

Tabla 2. Solubilizacin de los componentes lignocelulsicos despus de pretratamientos
fisicoqumicos
a
Proceso Celulosa Hemicelulosa Lignina

Explosin de vapor Despolimerizacin 80-100% de Poca o nula
Hidrlisis cida Despolimerizacin Solubilizacin a Poca o nula
Solventes orgnicos Solubilizacin Solubilizacin
Termlisis Poca 80-100% de
AFEX Descristalizacin 0-60% de Solubilizacin
Hidrlisis alcalina Relajamiento >50% de Solubilizacin

a
Lynd et al., 2002
Miron, 1981). Las reacciones ocurren a
presin y temperatura ambiente, se remueve
la lignina hasta en un 8% y el rendimiento
aumenta en un 57%, no produce residuos
txicos pero se requiere una gran cantidad
de ozono lo que eleva los costos (Vidal &
Molinier, 1988).
17

Hidrlisis cida
Los cidos como el H
2
SO
4
y HCl
concentrados son poderosos agentes que
hidrolizan la celulosa, pero son txicos,
corrosivos y peligrosos por lo que requieren
reactores que resistan su corrosin. Se
emplean altas temperaturas y cidos diluidos
que hidrolizan la hemicelulosa en azcares
solubles en agua, en los residuos queda la
celulosa y la lignina, esta ltima se extrae
con solventes orgnicos. El pretratamiento
con cidos mejora la hidrlisis de la celulosa,
pero su costo es alto en comparacin con
otros pretratamientos y requiere una
neutralizacin del pH para evitar la inhibicin
de la fermentacin (Eggeman & Elander,
2005).

Hidrlisis alcalina
Es la adicin de bases diluidas a la
biomasa y su eficiencia depende del
contenido de lignina de los materiales. El
hidrxido de sodio diluido produce un
hinchamiento, permitiendo un incremento en
el rea de superficie interna reduciendo el
grado de polimerizacin y cristalinidad de la
celulosa, causando la separacin de las
uniones estructurales entre la lignina y los
carbohidratos (Fan et al., 1987). En las
maderas duras hay un incremento en la
digestibilidad y un descenso del contenido de
lignina, en maderas suaves con lignina hasta
en un 26% no se han obtenidos resultados
eficientes; en general la utilizacin de bases
permite la disolucin de la lignina, pero sus
costos son altos, haciendo estos mtodos no
competitivos a gran escala (Sun & Cheng,
2002).

Deslignificacin oxidativa
El pretratamiento con perxido de
hidrgeno (agente oxidante) aumenta la
susceptibilidad a la hidrlisis enzimtica al
eliminar cerca del 50% de la lignina y la
mayora de la hemicelulosa, las cuales son
solubilizadas liberando la glucosa durante la
sacarificacin (Azzam, 1989).

Proceso organosolvente
Se utilizan solventes orgnicos como
metanol, etanol y acetona as como tambin
cidos inorgnicos como catalizadores
(H
2
SO
4
HCL) que rompen los enlaces de la
lignina y la celulosa. La remocin de
solventes del sistema es necesaria, ya que
inhiben el crecimiento de los organismos, la
hidrlisis enzimtica y la fermentacin (Zhao
et al., 2009).

MTODOS BIOLGICOS
Los tratamientos biolgicos son
amigables con el ambiente e incrementan la
accesibilidad al material celulsico
favoreciendo una subsecuente hidrlisis y
fermentacin, sin embargo, es un proceso
lento que limita su aplicacin a nivel industrial
(Hatakka, 1983). Las principales ventajas son
el alto rendimiento del producto, las
condiciones moderadas de la reaccin, la
poca generacin de compuestos txicos y
una mnima demanda de energa (Kirk &
Jeffries, 1996). Algunas bacterias y hongos
de podredumbre blanca y parda oxidan
completamente la madera, por lo que tienen
aplicaciones biotecnolgicas en la conversin
de la lignocelulosa a productos de valor
industrial (Balan et al., 2008; Martnez et al.,
1998). Se han llevado a cabo bsquedas de
organismos con capacidades celulolticas,
como en el trabajo de Li et al. (2008) que
evaluaron la capacidad de Fusarium concolor
para deslignificar la paja de trigo en 5 das, y
proponen que podra utilizarse en
pretratamientos de materiales
lignocelulsicos usados en la industria del
biopulpeo y la bioconversin a etanol. Zhang
et al. (2007) utilizaron Coriolus versicolor en
el pretratamiento del bamb, observando una
disminucin en la cantidad de lignina y
hemicelulosa y un aumento hasta del 37% en
la tasa de sacarificacin despus del
tratamiento. Schilling et al. (2009) trataron
restos de pino y abeto con hongos de
podredumbre parda, Gloeophyllum trabeum y
Fomitopsis pinicola, logrando un incremento
en el proceso de sacarificacin. Algunas
bacterias celulolticas utilizadas en
pretratamientos biolgicos son
Sphingomonas paucimobilis y Bacillus
circulans que incrementan la liberacin de
azcares hasta en un 94% a partir de papel
de oficina (Kurakake et al., 2007). El
descubrimiento de enzimas con propiedades
importantes resulta muy valioso, Quiroz-
Castaeda et al. (2009) reportaron la
caracterizacin de la actividad celuloltica de
los hongos P. sanguineus y B. adusta en paja
de trigo, cuyas enzimas son capaces de
18
tolerar condiciones elevadas de temperatura
y funcionan en un amplio rango de pH, lo que
los hace potenciales candidatos para ser
utilizados en procesos industriales que
requieren la hidrlisis de la celulosa.
Una alternativa atractiva a la
bioconversin es la sacarificacin y
fermentacin simultnea (SSF), en donde las
enzimas hidrolticas y los microorganismos
fermentativos estn en un mismo reactor
(Chandrakant & Bisaria, 1998). La SSF
consolida la hidrlisis de la celulosa y la
fermentacin de los azcares en un solo
paso, sin embargo, la actividad de las
celulasas puede ser inhibida por productos
finales como la celobiosa y la glucosa. Entre
los organismos usados en la sacarificacin y
fermentacin simultnea estn S. cerevisiae,
diversas especies de Kluyveromyces y
Candida (van Markis et al., 2006). El proceso
de SSF tiene las siguientes ventajas: (1)
aumentar la tasa de hidrlisis por conversin
de los azcares que inhiben la actividad de
las celulasas; (2) disminuir los requerimientos
de enzimas; (3) elevar el rendimiento del
producto; (4) remover inmediatamente la
glucosa al producir el etanol; (5) duracin
corta del proceso y (6) utilizacin de un nico
reactor. En cuanto a las desventajas se
encuentran la incompatibilidad entre la
temperatura de hidrlisis y de fermentacin,
la tolerancia de los microorganismos al etanol
as como la inhibicin de las enzimas por el
producto (Sun & Cheng, 2002).

OBTENCIN DE ETANOL A PARTIR DE
CELULOSA CON LEVADURAS
Los azcares obtenidos de la biomasa
celulsica pueden ser utilizados en la
produccin de bioetanol. La produccin de
etanol a partir de celulosa se logra a travs
de la degradacin de sta para obtener celo-
oligosacridos y glucosa, seguido de la
conversin de la glucosa a etanol por
diferentes microorganismos como levaduras
y bacterias (Kotaka et al., 2008). En los
siguientes prrafos se describen las
estrategias que se han seguido para generar
levaduras que puedan hidrolizar celulosa
mediante la expresin heterloga de genes
que codifican para celulasas.
La levadura Saccharomyces cerevisiae es
un husped atractivo para la produccin de
protenas recombinantes de importancia
mdica y alimenticia, debido a que es un
organismo no patgeno libre de endotoxinas
para el hombre y su utilizacin a escala
industrial se remonta hace siglos. Presenta
como ventajas su fcil manejo y alta
velocidad de crecimiento en comparacin con
las bacterias en condiciones anaerobias,
posee una organizacin subcelular
eucarionte capaz de realizar los procesos
postraduccionales de protenas complejas.
Las levaduras adems, secretan protenas
por medio de un sistema de
multicomponentes, permitiendo la
maduracin, el plegamiento correcto y la
formacin de enlaces disulfuro en stas, as
como la glicosilacin y otros procesos
postraduccionales (Barnett, 1992).
La produccin de etanol a partir del
material celulsico ha sido motivo de
numerosas investigaciones y se ha utilizado
a S. cerevisiae para expresar genes de
19
celulasas con la finalidad de sacarificar y
fermentar simultneamente. En S. cerevisiae
se han expresado genes que codifican para
celulasas de hongos y bacterias con la
finalidad de evaluar la hidrlisis de los
diferentes polisacridos de la pared celular.
Penttil et al. (1988) expresaron
eficientemente en S. cerevisiae dos
celobiohidrolasas, CBHI and CBHII, del
hongo ascomiceto Trichoderma reesei, se
encontr que ambas enzimas fueron capaces
de hidrolizar celulosa amorfa e incluso
celulosa cristalina. En esta levadura, tambin
se ha expresado de manera eficiente el gen
de una endoglucanasa (cen1) del hongo
basidiomiceto Irpex lacteus, observando un
fuerte efecto sinrgico en la degradacin de
celulosa cristalina (Avicel) y amorfa cuando
se coexpres con el gen de una
celobiohidrolasa (ex1) del mismo hongo
(Toda et al., 2005).
Existe evidencia que demuestra que la
expresin de genes de celulasas en S.
cerevisiae permite incrementar la utilizacin
del material celulsico para la obtencin de
combustibles como el etanol, por ejemplo,
Fujita et al. (2002) coexpresaron los genes
de una |-glucosidasa (bgl1) del hongo
Aspergillus aculeatus y de una
endoglucanasa (egII) de T. reesei en clulas
de levadura para producir etanol utilizando
como sustrato un |-glucano de cebada
(polisacrido de 1200 residuos de glucosa
unidas por enlaces |-1,4), las levaduras
recombinantes fueron capaces de fermentar
45 g/l del |-glucano para producir 16.5 g/l de
etanol en un periodo de 50 horas. El
rendimiento fue de 0.48 g/g en trminos de
gramos de etanol producidos por gramo de
carbohidrato y corresponde al 93.3% del
rendimiento terico. Este resultado muestra
una sacarificacin y fermentacin simultnea
eficiente de la celulosa para obtener etanol
empleando clulas recombinantes de
levadura que expresan enzimas celulolticas.
La expresin en S. cerevisiae de los
genes que codifican para tres enzimas
celulolticas: una |-glucosidasa (bgl1) de A.
aculeatus y una endoglucanasa (egII) y una
celobiohidrolasa (cbhII) de T. reesei permiten
una fermentacin directa y eficiente de la
celulosa amorfa a etanol logrando un 88.5%
del rendimiento terico; este biocatalizador
tiene la habilidad de inducir de manera
sinrgica y secuencial la degradacin de
celulosa para la produccin de etanol (Fujita
et al., 2004).
Se han realizado diversos esfuerzos
enfocados en la expresin de genes de
enzimas hidrolticas en levaduras que
permitan la utilizacin del material vegetal
como materia prima en la produccin de
bioetanol; sin embargo, el crecimiento y la
produccin de etanol utilizando cepas de
levadura de laboratorio es mucho menor si se
compara con cepas utilizadas en la industria,
como las levaduras empleadas en la
elaboracin de bebidas como el sake, estas
levaduras proliferan rpidamente, fermentan
vigorosamente y tienen una alta resistencia al
etanol, como lo reportado por Kotaka et al.
(2008) quienes expresaron en S. cerevisiae
GRI-117-UK tres genes de betaglucosidasas
y dos genes de endoglucanasas de
20
Aspergillus oryzae, utilizando como sustrato
un |-glucano de cebada con caractersticas
similares al material celulsico. La conversin
del |-glucano a etanol fue del 69.6 % del
rendimiento terico y se obtuvo una
concentracin de 7.94 g/l de etanol en 24
horas, lo que hace atractivo el uso de este
tipo de levaduras para la conversin de la
biomasa en energa.
Cabe mencionar que la degradacin de la
biomasa vegetal genera adems de las
hexosas, grandes cantidades de azcares
como la xilosa y la arabinosa que no pueden
ser fermentados por S. cerevisiae. Como se
describe en otro captulo de este nmero, S.
cerevisiae y otras levaduras han sido
manipulada genticamente para transportar y
fermentar pentosas (Becker & Boles, 2003;
Jeffries, 2006). La integracin de ambas
estrategias, la de metabolizar toda la
variedad de azcares presentes en los
hidrolizados de lignocelulosa, as como la de
hidrolizar celulosa mediante la expresin
heterloga de celulasas en cepas de
levaduras industriales productoras de etanol,
permite preveer los alcances que tendr la
biotecnologa en la produccin de etanol que
no proviene de alimentos.
CONCLUSIONES
Actualmente la obtencin de los
energticos derivados del petrleo atraviesa
una fuerte crisis debido a una disminucin en
sus reservas, por lo cual la aplicacin de
nuevas tecnologas dirigidas a generar
combustibles a partir de materiales
renovables como la lignocelulosa, y no de
alimentos, representa una alternativa viable a
la demanda energtica mundial. En el
material lignocelulsico se dispone de una
gran cantidad de azcares fermentables, sin
embargo, su utilizacin se puede ver
impedida por la recalcitrancia intrnseca del
material, una solucin a este problema han
sido los diversos mtodos fsicoqumicos y
biolgicos que se han desarrollado para
liberar los azcares fermentables y obtener
bioetanol. Algunas estrategias utilizando
microorganismos como las levaduras se han
enfocado en la obtencin de etanol a partir
de lignocelulosa mediante la expresin de
enzimas celulolticas y aprovechando la
capacidad fermentadora de la levadura. En
este proceso de sacarificacin y fermentacin
simultnea se han obtenido cantidades y
rendimientos significativos de etanol lo cual
representa un punto de partida que conducir
al desarrollo de tecnologas encauzadas a
satisfacer las necesidades energticas en el
futuro.

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25
Produccin Microbiolgica de Butanol

Etienne Rajchenberg-Cecea, Jos Alberto Rodrguez-Ruiz, Katy Jurez Lpez,
Alfredo Martnez Jimnez*, Sandra Morales Arrieta*

Instituto de Biotecnologa, Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Apdo.
Postal 510-3 Cuernavaca, Mor, 62250
alfredo@ibt.unam.mx; sandy@ibt.unam.mx

RESUMEN
Durante los ltimos 30 aos la produccin de bio-etanol como combustible renovable se ha
incrementado de forma considerable. A pesar de que actualmente varios pases generan y utilizan
cantidades importantes de etanol en el sector transporte, ste alcohol dista de ser el reemplazo
ideal para la gasolina pues posee un menor contenido energtico que la gasolina y es
higroscpico. Recientemente, ha aumentado el inters en el uso de butanol como un complemento
o sustituto de gasolina, pues posee varias caractersticas que lo hacen superior al etanol como
carburante. Tanto Clostridium acetobutylicum como Escherichia coli han demostrado ser bacterias
tiles en la biosntesis de butanol, y es por eso que con stas se han realizado esfuerzos para
mejorar su produccin empleando diversas estrategias de cultivo y modificaciones genticas. A
pesar de que actualmente los rendimientos y productividades obtenidos mediante estas
aproximaciones son relativamente bajos y quedan grandes retos por superar, la produccin
microbiana de butanol es un proceso prometedor. En este trabajo se revisa la viabilidad en la
produccin microbiolgica de butanol como una fuente alterna a los combustibles lquidos fsiles.
Palabras clave: Biocombustibles, butanol, Clostridium, Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae

ABSTRACT
Bio-ethanol production as a renewable fuel has increased during the last 30 years. In spite that
many countries generate and use important amounts of ethanol in the transportation sector, this
alcohol is not an ideal replacement for gasoline because it is hygroscopic and has lower energy
content than the gasoline. Recently, the interest of using butanol as a gasoline substitute had
increased because it has several features that make it better than ethanol like a fuel. Either
Clostridium acetobutylicum or Escherichia coli had proved to be useful in butanol biosynthesis, and
many efforts to improve production, using fermentation and genetic engineering strategies, are
being carried out. Despite that actual yields and productivities are relatively low and that there are
many challenges to overcome, butanol production using microorganisms is a promising process. In
this work a review related to the microbiological production of butanol, as an alternative of liquid
fossil fuels is presented.
Key words: Biofuels, butanol, Clostridium, Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae
26
INTRODUCCIN
A nivel mundial, el consumo de energa
se ha incrementado en el ltimo siglo,
ocasionado principalmente por el crecimiento
de la poblacin y por la industrializacin de
muchas ciudades. Aunado a esto, la crisis
ecolgica inminente, de forma relevante y
global ya observable en el calentamiento del
planeta, debida sobre todo al alto consumo
de petrleo como energtico principal, obliga
al replanteamiento urgente de estructuras
alternativas tanto industriales como
econmicas viables para sustituir, o por lo
menos disminuir, el uso de ste combustible
fsil y sus derivados. Varios pases han
enfocado e intensificado sus esfuerzos en
desarrollar programas de investigacin en
biocombustibles los cuales puedan proveer
combustibles lquidos tiles para la
transportacin (Himmel et al., 2007). Aunque
el uso de microorganismos para la
produccin de combustibles ha existido
desde hace un siglo, resurge en esta
coyuntura con mucho mayor vigor y como
una promesa factible para el futuro de dichos
productos. En el presente trabajo, se
discuten las ventajas que tiene el butanol
sobre el etanol como carburante, y se revisa
la produccin microbiolgica de butanol
usando microorganismos silvestre y
modificados genticamente.

GENERALIDADES DEL BUTANOL
El butanol (alcohol butlico o 1-butanol) es
un alcohol primario constitudo por 4
carbonos cuya frmula es C
4
H
10
O; es un
lquido incoloro, flamable, con un olor
caraterstico, su vapor irrita las membranas
mucosas produciendo un efecto narctico a
altas concentraciones. El butanol es miscible
en solventes orgnicos comunes y
parcialmente miscible en agua (Lee et al.,
2008).
Hasta hoy, el butanol es considerado una
mejor alternativa que el etanol como
biocombustible ya que es menos corrosivo y
menos soluble en agua que el etanol, siendo
un combustible mas adecuado para las
mquinas de combustin interna utilizadas
actualmente en los automviles (Keasling et
al., 2008).
Aunque el primer reporte que existe en la
literatura sobre la produccin biolgica del 1-
butanol fue escrito por Louis Pasteur en
1862, es hasta 1915 con la patente de Chaim
Weizmann donde se describe una idea clara
del proceso de fermentacin butlica. Apenas
35 aos despus, en 1950, el 66% del
butanol utilizado en el mundo provena de
procesos fermentativos. En aos posteriores
la industria petroqumica tomara casi la
totalidad del mercado del butanol
producindolo industrialmente mediante la
reaccin oxo del propileno, con el
intermediario butiraldehdo.
La produccin biolgica del butanol
ocurre naturalmente en algunas especies de
microorganismos, como las bacterias
Butyribacterium methylotrophicum,
Clostridium butyricum o la arquea
Hyperthermus butylicus. Sin embargo, el
gnero ms estudiado es el de Clostridium ya
que son capaces de convertir diversas
fuentes de carbono, como la glucosa,
27
galactosa, celobiosa, manosa, xilosa y
arabinosa, en combustibles y qumicos como
el butanol, acetona y etanol (Ezeji et al.,
2007). Sin embargo, la presencia de butanol,
as como la acetona y etanol en los
microorganismos resulta ser txica, lo cual
limita su concentracin en el medio de
cultivo, originando bajos rendimientos y un
alto costo durante su recuperacin en las
soluciones diluidas. En el caso de Clostridium
su metabolismo se detiene cuando la
presencia de solventes alcanza una
concentracin de 20 g/L, lo cual limita la
concentracin de fuentes de carbono que
pueden ser utilizados en la fermentacin,
ocasionando una baja productividad y baja
concentracin de productos.
Concentraciones de alrededor de 0.1 M de
butanol generan un 50% de inhibicin del
crecimiento celular y consumo de azcares.
El butanol es ms txico que otros solventes,
ya que ste desestabiliza la membrana e
interrumpe funciones asociadas a la
membrana, tales como procesos de
transporte, incluyendo el transporte de
azcares, entre otras (Lee et al., 2008).
Antes de la primera mitad del siglo 20, la
fermentacin ABE (acetona-butanol-etanol)
fue uno de los primeros procesos biolgicos
que produjo solventes, usando Clostridium
como microorganismo solventognico.
Inicialmente, el inters estaba centrado en la
produccin de acetona, ya que era utilizada
en la produccin de un tipo de plvora sin
humo. Posteriormente, el inters se movi
hacia el butanol, ya que ste era empleado
como disolvente de laca de secado rpido
para el recubrimiento de los automviles.
Entre los aos 1950-1960, el proceso de
fermentacin ABE ces en plantas
industriales de Europa y Norteamrica debido
a la competencia y menores costos de
produccin de acetona y butanol mediante
procesos petroqumicos. En aos recientes y
en ciertos pases como China, ha resurgido
el inters en la produccin fermentativa ABE
como una alternativa al uso de combustibles
fsiles (Ni & Sun, 2009).
Desde hace una dcada, varios
investigadores han tratado de desarrollar
cepas hiperproductoras de butanol,
apoyndose con las herramientas de biologa
molecular, ingeniera de vas metablicas, as
como en la optimizacin del proceso de
fermentacin mediante la produccin y
extraccin simultnea de butanol.

Propiedades importantes del butanol como
carburante
El inters en el biobutanol se ha
incrementado a pesar del uso actual del
etanol como combustible en el sector
transporte. La razn para buscar alternativas
al etanol se deben principalmente a que ste
tiene un contenido energtico bajo, tiene una
alta presin de vapor lo cual ocasiona que se
evapore fcilmente, es higroscpico y por
tanto no puede ser transportado en las
tuberias ni en los contenedores existentes en
la industria petroqumica ya que tiende a
atrapar agua, adems su destilacin es
costosa. Si el etanol atrapa agua del
ambiente se provocan problemas en las
mezclas de gasolina-etanol ocasionando una
separacin de fases y en el proceso de
28
combustin en el motor (Steen et al., 2008).
Por su parte el biobutanol, su contenido
energtico es muy similar al de la gasolina
(Tabla 1) y su presin de vapor es 11 veces
menor que la del etanol (Atsumi et al., 2008).
La capacidad higroscpica de un
combustible es de particular importancia, la
tendencia del etanol a mezclarse con el agua
ambiental hace imposible que ste sea
agregado al combustible con mucha
anterioridad a su uso. Por esto, el etanol
debe ser transportado de forma
independiente, implicando un costo adicional.
En el caso del butanol al ser menos
higroscpico y presentar una mayor
compatibilidad con la gasolina, hace posible
que el butanol sea adicionado a las gasolinas
desde la refinera.

Tabla 1. Comparacin de propiedades relevantes del butanol y etanol como carburantes,
(Lee et al., 2008).
Butanol Gasolina Etanol
Densidad de energa (MJ/L) 29.2 32 19.6
Proporcin aire-combustible 11.2 14.6 9
Calor de vaporizacin (MJ/Kg) 0.43 0.36 0.92
Nmero de octanos en investigacin 96 91-96 129
Nmero de octanos en motor 78 81-89 102

La Tabla 1 muestra un resumen
comparativo de las propiedades del butanol,
etanol y la gasolina. Esto indica que los
motores de gasolina pueden funcionar
indistintamente con butanol sin requerirse
una modificacin previa, como sucede en el
caso del etanol. En este punto radica una de
las mayores ventajas tcnicas y econmicas
del butanol como biocombustible. Aunque el
butanol tiene un nmero de octano de
investigacin y en motor considerablemente
menor que el del etanol, sus valores son
similares a los de la gasolina, por tanto esta
caracterstica no representa una desventaja
para ser usado en mezclas con gasolina, an
a elevadas concentraciones de butanol.
PRODUCCIN DE BUTANOL CON
Clostridium
Las cepas ms usadas para la
fermentacin industrial ABE son
principalmente del gnero Clostridium:
Clostridium acetobutylicum, Clostridium
beijerinkii, Clostridium saccharobutylicum y
Clostridium saccharobutylacetonicum. Las
especies de acetobutylicum y beijerinkii son
adecuadas para la fermentacin acetona-
butanol a partir de maiz mientras que las
saccharobutylicum y
saccharobutylacetonicum utilizan melaza
como sustrato (Ni & Sun, 2009).

Como se mencion anteriormente, C.
acetobutylicum es la especie ms estudiada
la secuencia completa de su genoma fue
liberada en el 2001. Es una especie
29
anaerbica obligada, con forma de bastn,
que posee un cromosoma de 3.94 Mbp y un
plsmido de 192 Kbp. En cepas silvestres
ste plsmido resulta indispensable para la
solventognesis (Lee et al., 2008). C.
acetobutylicum tiene la ventaja de ser muy
diverso en los sustratos que metaboliza;
utilizando glucosa, galactosa, celobiosa,
manosa, xilosa y arabinosa. Adems, es
tambin diversa la batera de enzimas que
libera al medio, incluyendo: y -amilasas,
y -glucosidasas, pululanasas,
amilopululanasas, entre otras.
Para llevar a cabo la ingeniera
metablica exitosa de Clostridium es
necesario contar con herramientas de
ingeniera gentica eficientes para la
manipulacin de genes y recientemente se
estn desarrollando metodologas para este
propsito. Aunque se conoce la secuencia
completa de Clostridium, recientemente, uno
de los problemas que se suscit fue que la
introduccin de genes resultaba limitante,
debido a un sistema de restriccin intrnseco
en todas las especies de Clostridium, la cual
reconoce segmentos palindrmicos 5-
GCNGC-3, y que inactiva la mayora de las
secuencias transferidas de otras especies
(Lee et al., 2008). La solucin (parcial) a este
problema se di a partir de la construccin de
un vector de transferencia de Bacillus subtilis
reportado por Mermelstein et al. (1993), que
permite expresar genes exgenos con
niveles elevados, tales como los de la va de
sntesis de acetona.
Una vez que los azcares son
metabolizados a piruvato, la fermentacin a
butanol en Clostridium es catalizada por
diversas enzimas: una acetato/butirato CoA
transferasa, varias deshidrogenasas y una
acetato descarboxilasa, como se muestra en
el flujo general de la Fig. 1. Los genes que
codifican para estas enzimas se encuentran
agrupados en operones activados por
sustrato. Adems, anlisis genmicos de C.
acetobutylicum han demostrado que posee
11 genes para la formacin de celulasas,
dispuestos de forma similar que en especies
celulolticas, como Clostridium cellulolyticum
y aunque C. acetobutylicum no hidroliza
celulosa, la hacen un blanco interesante para
la ingeniera metablica y poder desarrollar
un microorganismo que pueda hidrolizar, al
menos parcialmente celulosa, para utilizar
directamente lignocelulosa como materia
prima para la produccin de butanol.
Durante el proceso de produccin de
butanol con Clostridium se presenta, entre
otros, un cambio fisiolgico importante en la
bacteria: los cidos actico y butrico son
liberados al medio durante la fase de
crecimiento exponencial los cuales son
reabsorbidos al interior de la clula, para ser
metabolizados a butanol, acetona y, en
mucho menor medida en etanol. Esto se
debe a que C. acetobutylicum carece de
homeostasis al nivel de pH, por lo que
depende ntimamente del pH extracelular. La
presencia de cidos en el medio puede
provocar una prdida del potencial protnico
de la clula, inactivndola.
El pH es muy importante durante la
fermentacin acetona-butanol, ya que la
solventognesis inicia con un pH bajo; sin
embargo si ste se encuentra por debajo de
4.5 (antes de que se forme una cantidad
30

Fig. 1 Vas fermentativas de C. acetobutylicum (tomado de Lee et al., 2008).

suficiente de cidos orgnicos), la
solventognesis ser disminuida e
improductiva. Una forma sencilla de
incrementar el crecimiento, utilizacin de los
carbohidratos as como la produccin de
butanol es incrementando la capacidad
amortiguante del medio. Dependiendo de las
condiciones de cultivo y el tipo de sustrato
empleado, las fermentaciones tipo lote toman
de 2 a 6 das en completarse, la
concentracin final total de solventes
producidos alcanza de 12 a 20 g/L, los cuales
pueden ser separados por destilacin del
medio de fermentacin (Lee et al., 2008).
Como se muestra en la Fig. 1, el hierro es
un importante componente en la dieta de
Clostridium, ya que se requiere de una
profusa produccin de ferredoxina en la
conversin de piruvato en acetil-CoA.
Tambin se ha demostrado que en
condiciones limitantes de fosfato es posible
prevenir la prdida del plsmido pSOL1 que,
como se mencion anteriormente, es
necesario para la sntesis fermentativa de
butanol en cepas silvestres (Lee et al., 2008).

ESTRATEGIAS MOLECULARES Y DE
PROCESO PARA MEJORAR LA
PRODUCCIN DE BUTANOL CON
Clostridium
La formacin de butanol marca el inicio
de una fase de esporulacin en Clostridium,
causando la inactivacin del cultivo. Se ha
observado que los cultivos continuos con
sistemas integrados de separacin in situ dan
los mayores ttulos de butanol. As, el grupo
31
de Ezeji et al., en el 2004, obtuvo
productividades de 0.91 g/L/h de butanol
removiendo ste del medio de cultivo activo
por medio de un gas acarreador. En 1983 Lin
& Blaschek caracterizaron una cepa de C.
acetobutylicum que alcanz ttulos de
produccin de butanol de 7.9 g/L en un
medio que contiene extracto de maz al 6%.
En ese trabajo, los autores reportan el
desarrollo de mutantes tolerantes al butanol,
que obtuvieron mediante transferencias
consecutivas a medios con cantidades
gradualmente mayores de butanol. En efecto,
una de sus cepas tolerantes report el
mximo porcentaje de consumo de
carbohidrato, el mejor rendimiento de
conversin a butanol y la mayor
concentracin alcanzada (18.6 g/L de
butanol). Sin embargo, como C.
acetobutylicum posee una fermentacin
mixta, tambin se produjeron cantidades
importantes de acetona y etanol, an en la
cepa adaptada (Lin & Blaschek, 1983).
Utilizando cultivos lote con 6% de glucosa y
cepas de C. beijerinckii, se alcanzaron ttulos
de hasta 18.6 g/L de butanol (Formanek et
al., 1997), aunque desafortunadamente
tambin se produjeron 8.6 g/L de acetona.
Complementariamente, grupos como el de
Liyanage han disminuido la toxicidad del
butanol hacia el cultivo mediante la
generacin de ARN antisentido contra la
glicerol deshidrogenasa en C. beijerinckii
(Liyanage et al., 2000). En un estudio
subsecuente (Nair & Papoutsakis, 1994) con
la finalidad de hacer el proceso ms
especfico, transformaron mutantes de C.
acetobutylicum deficientes en la produccin
de butanol y acetona con un plsmido
portador del gen que codifica para la enzima
aldehdo/alcohol deshidrogenasa (AAD). Esta
sobre-expresin reestableci la produccin
de butanol (84 mM) sin la formacin de
acetona ni un incremento en la produccin de
etanol.
Aunque algunos grupos han intentado la
seleccin adaptativa para aumentar la
resistencia de los cultivos ante el butanol,
este no ha sido el enfoque ms adecuado
debido a que la regulacin de la
solventognesis est ntimamente acoplada a
la esporulacin y por tanto es necesario
manipular genticamente cepas de
Clostridium para evitar que las bacterias
detecten las seales de inicio del proceso de
esporulacin y no formen cuerpos de
resistencia, ya que estos no son productores
de butanol. Algunos grupos estn intentando
modificar el factor de transcripcin Spo0A
para interrumpir la capacidad de regulacin
de esporulacin, pero hasta ahora sin mucho
xito (Lee et al., 2008). Otros puntos del
metabolismo regulatorio pueden ser
interrumpidos, el reciente desarrollo del
sistema ClosTron, que funciona mediante el
apareamiento de un intrn modificado y que
permite interrumpir genes en cualquier
especie de Clostridium, de una manera
estable, potencialmente podr solventar
estas limitantes para inactivar genes que
hasta hace poco no se saba que existan.
Este sistema ha sido probado con cuatro
especies diferentes con xito (Heap et al.,
2007).

32
USO DE Escherichia coli COMO
MICROORGANISMO PRODUCTOR DE
BUTANOL
En un intento para aminorar los
problemas asociados al uso de C.
acetobutylicum, tales como formacin de
subproductos, baja velocidad de crecimiento
y dificultades para realizarle ingeniera
gentica, se ha empleado a Escherichia coli
como sistema de expresin de genes
heterlogos para generar vas metablicas
que den lugar a la formacin de butanol. E.
coli es una bacteria con una fisiologa y
gentica ampliamente estudiadas, por lo que
se puede hacer uso de toda una gama de
herramientas para su manipulacin. E. coli ha
probado ser un microorganismo adecuado
para la produccin de diversos metabolitos
(Martin et al., 2003), sin embargo no produce
butanol de forma natural, por lo que es
necesario emplear tcnicas de ingeniera de
vas metablica, para introducirle la ruta
bioqumica de sntesis. Un estudio importante
al respecto, evalu la produccin de butanol
en una cepa de E. coli en la cual se
expresaron inicialmente seis genes de la va
de C. acetobutylicum utilizando plsmidos
con promotores inducibles (Fig. 2). La sola
expresin de la va permiti la obtencin de
butanol (0.0139 g/L) en condiciones
anaerbicas. Posteriormente, se expres el
gen que codifica para la enzima que ayuda a
dirigir el acetil-CoA hacia la va de sntesis de
butanol. Este cambio, junto con el uso de
condiciones microaerbicas aumentaron el
ttulo de 1-butanol a ms de 0.060 g/L,
(Atsumi et al., 2008a). Finalmente, para
complementar la actividad de estas enzimas,

Fig. 2. Esquema de produccin de butanol en E. coli modificada genticamente. La ruta modificada
est formada de seis pasos enzimticos a partir de acetil-CoA, AtoB, (acetil-CoA aciltransferasa),
Thl (tiolasa), Hbd (3-hidroxibutiril-CoA deshidrogenasa), Crt (crotonasa), Bcd (butiril-CoA
deshidrogenasa), Etf (flavoprotena transportadora de electrones), (aldehdo/alcohol
deshidrogenasa). (Tomado de Atsumi et al., 2008a).

33
se realizaron interrupciones en los genes que
codifican para otras enzimas de vas
competitivas del acetil-CoA, as como del
regulador transcripcional Fnr. La combinacin
de estas estrategias mejor la produccin de
butanol, alcanzando concentraciones de
0.373 g/L en medio mnimo adicionado con
2% de glucosa, (Atsumi et al., 2008a).
En una aproximacin diferente, que utiliza
una mayor parte de vas nativas de E. coli,
tambin se logr producir butanol en E. coli
(Shen & Liao, 2008). Este trabajo hizo uso de
las vas de sntesis de los cetocidos
norvalina y treonina, bloqueando las rutas
competitivas de produccin de otros
aminocidos como valina, leucina, metionina
e isoleucina. El razonamiento contempl el
uso del oxaloacetato producido como
intermediario de oxidacin de la glucosa,
para redirigirlo hacia 2-cetobutirato y 2-
cetovalerato. Estos dos compuestos pueden
ser transformados a 1-propanol y a 1-butanol,
respectivamente, mediante la accin de dos
enzimas: la 2-cetocido descarboxilasa y la
alcohol deshidrogenasa, dichos genes que
codifican para stas enzimas y que provienen
de la bacteria Lactococcus lactis y de la
levadura Saccharomyces cerevisiae se
introdujeron a E. coli.
Otras modificaciones han incluido la sobre-
expresin de enzimas de la va de sntesis de 2-
cetovalerato resistentes a retroinhibicin y el
aumento de disponibilidad intracelular de treonina.
La mejor cepa modificada con los puntos
anteriores sobrepas los 0.8 g/L de butanol en
fermentaciones con 30 g/L de glucosa y 5 g/L de
extracto de levadura (Atsumi et al., 2008b).
MODIFICACIN DE Saccharomyces
cerevisiae PARA PRODUCIR n-BUTANOL
En la bsqueda de nuevos
microorganismos productores de butanol en
el 2008 Steen et al., modificaron vas
metablicas en S. cerevisiae para la
produccin de n-butanol, ya que es un
organismo bien caracterizado y
genticamente manejable. Estos
investigadores tambin razonaron que la
nica diferencia entre el butanol y el etanol
son dos carbonos por lo que S. cerevisiae
puede ser capaz de tolerar altas
concentraciones de n-butanol por los mismos
mecanismos que tolera el etanol.
En la Fig. 3 se observa la ruta biosinttica
que se gener en S. cerevisae para la
produccin de n-butanol. Los genes fueron
clonados en dos diferentes plsmidos y
transformados en S. cerevisiae BY4742. Las
cepas denominadas por los autores ESY2,
ESY3 y ESY4 fueron modificadas con genes
de Ralstonia eutropha (pha y phaB),
Streptomyces collinus (crr), Clostridium
beijerinckii (crt y adhe2), E. coli (atoB) y S.
cerevisiae (erg10). Los autores reportan que
la cepa que gener el nivel mas alto de n-
butanol (0.001 g/ml) fue EYS2, sugiriendo
que la PhA es una de las tiolasas clave en
esta ruta metablica. En una segunda etapa,
tambin probaron diferentes isoenzimas para
el 3-hidroxibutiril-CoA (HbCoA)
deshidrogenasa, sta ltima utiliza NADPH
(PhaB) como cofactor. La mejor cepa, la
ESY7 produjo 0.0025 g/ml de n-butanol
utilizando 2% de galactosa como fuente de
34

Fig. 3. Ruta heterloga para la biosntesis de butanol en S. cerevisiae. Enzimas en negro son de
otros microorganismos: AtoB, E. coli; Erg10, S. cerevisiae: PhaA, R. eutropha; PhaB, R. eutropha;
Ccr, S. collinus. Enzimas en verde son de C. beijerinckii, thl, enzima nativa de Clostridium.

carbono. En esta cepa se sobre-expres la
tiolasa nativa (ERG10) y la HbCoA
deshidrogenasa.

COMENTARIOS FINALES
La fermentacin ABE fue ampliamente
utilizada en el siglo pasado, su aplicacin
industrial es todava muy limitada: tanto por
el elevado costo de re-cuperacin-separacin
de los productos por su baja concentracin;
en el caso particular que atae a esta
revisin, por los bajos rendimientos del
butanol; as como tambin por la inactivacin
del microorganismo durante la produccin de
acetona-butanol-etanol. El inters reciente en
la produccin de butanol a partir de biomasa
ha permitido la re-examinacin de la
fermentacin ABE, incluyendo estrategias
para reducir o eliminar la toxicidad del
butanol en el medio de cultivo o para
modificarlo para obtener una mejor
especificidad del producto y rendimiento
(Chukwuemeka et al., 2007). Aunque
actualmente, los rendimientos y
productividades obtenidos de este alcohol
son bajos, su obtencin mediante
microorganismos es un proceso prometedor
a mediano plazo. Entre los grandes retos que
se tienen que superar para que la obtencin
35
microbiolgica del butanol pueda desplazar a
otros biocombustibles como el etanol, estn
el aumentar el rendimiento de conversin de
azcares en butanol minimizando la
formacin de subproductos y optimizar las
condiciones de fermentacin para alcanzar
mayores concentraciones de producto. Una
solucin indirecta proviene de la
implementacin de sistemas de separacin
del solvente in situ, y aunque estos sistemas
resultan todava muy costosos se reporta que
ya se cuenta con algunas alternativas
econmicamente factibles (Lee et al., 2008).
A la fecha, la comparacin de niveles de
produccin de butanol con microorganismos
modificados genticamente (mximo de 0.8
g/L), en comparacin con los obtenidos en
cultivos de cepas silvestres de Clostridium
(hasta 20 g/L), parece indicar que la
aplicacin industrial a corto plazo favorece a
este ltimo microorganismo, principalmente
con la ayuda de la extraccin in situ del
alcohol para mejorar la productividad y
factibilidad econmica del proceso.

AGRADECIMIENTOS
Se agradece el apoyo del Consejo
Nacional de Ciencia Tecnologa Mxico a
travs de los proyectos FOMIX Estado de
Morelos: MOR-2007-CO1-80360 y de Redes
de Fuentes de Energa, as como del
Proyecto UNAM-PAPIIT-DGAPA: IN220908.

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butanol. Microbial cell Factories. 7-36: 1-
8.

Biodiesel a Partir de Microalgas

1
Adriana Garibay Hernndez*,
1
Rafael Vzquez-Duhalt,
2
M. del Pilar Snchez
Saavedra,
1
Leobardo Serrano Carren,
1
Alfredo Martnez Jimnez*

1
Postal 510-3 Cuernavaca, Mor., 62250
2
Centro de Investigacin Cientfica y de Educacin Superior de Ensenada, Km.
107 Carretera Tijuana Ensenada, Ensenada, Baja California, 22860
adriagh@ibt.unam.mx; alfredo@ibt.unam.mx

RESUMEN
La situacin actual debida al agotamiento de los combustibles fsiles, incremento del precio del
petrleo y dificultades ambientales, demanda urgentemente fuentes alternas de energa siendo una
opcin promisoria el biodiesel; biocombustible producido primordialmente a partir de aceites
provenientes de plantas oleaginosas, cuya disponibilidad desafortunadamente, es incapaz de
sustituir el mercado de petrodiesel en Mxico y el mundo. El uso de microalgas para la produccin
de biodiesel es una alternativa ventajosa debido al elevado contenido de lpidos y perfil idneo para
la obtencin del biocombustible que stas ofrecen. Aunado a lo anterior, otros atributos de las
microalgas son su elevada eficiencia fotosinttica, su capacidad de crecer tanto en aguas marinas,
dulces, residuales y salobres, as como su velocidad de crecimiento relativamente alta. No
obstante, los sistemas de cultivo de microalgas actualmente presentan ciertas limitantes tales como
la escasez de informacin para su escalamiento, la dificultad para el mantenimiento de
monocultivos, los elevados costos de operacin para la produccin y recoleccin de la biomasa de
microalgas, entre otros. Ante estos inconvenientes, la optimizacin de los sistemas de cultivo de
microalgas es imprescindible. El propsito de esta revisin es el de proporcionar un panorama
general y crtico de esta alternativa bioenergtica, mediante el anlisis de los fundamentos de la
misma.
Palabras clave: Biodiesel, microalgas, biocombustible, lpidos, fotobioreactores

ABSTRACT
The current situation due to the exhaustion of the fossil energy resources, the increase of oil
prices and the environmental challenges related to the accumulation of greenhouse gases, urgently
demands the development of alternative energy sources, where one of the most prominent is
biodiesel. Biodiesel is a biofuel mainly produced from plant oils, which are raw materials that are not
enough to replace the majority of Mexicos and also the worlds petroleum-based diesel demand.
Microalgae appear to be a satisfactory feedstock for biodiesel production that provides several
advantages such as: high photon conversion efficiency; ability to grow in marine, salt, fresh and
waste waters; sustained high growth rates; elevated oil productivity; and acceptable fatty acid
composition that complies with existing standards. However, there are significant limitations

38
associated with microalgae culture systems, such as lack of information for scaling them up,
difficulty for maintaining axenic cultures and the high costs for algal biomass production and
harvesting; consequently, optimization of the microalgal culture systems is necessary. This review
provides a critical overview of microalgae technology by the analysis of its basic principles.
Keywords: Biodiesel, microalgae, biofuels, lipids, photobioreactors

INTRODUCCIN
En este siglo la humanidad afronta una
grave problemtica debido al aumento de la
demanda energtica mundial, agotamiento
de los combustibles fsiles, incremento del
precio del petrleo y las dificultades
ambientales causadas por los gases de
invernadero tales como la contaminacin
local del aire y el calentamiento global. Esta
situacin demanda urgentemente fuentes
alternativas de energa basadas en procesos
sustentables, renovables y amigables con el
ambiente, que adems posibiliten la captura
de CO
2
. Una alternativa energtica
promisoria que ha resultado muy atractiva en
aos recientes es el biodiesel (Donohue &
Codgell, 2006; Schenk et al., 2008; Meng et
al., 2009; Rodolfi et al., 2009).

SITUACIN ACTUAL DEL BIODIESEL
El biodiesel consiste en monoalquil-
steres de alcoholes de cadena corta,
usualmente etanol y metanol, con cidos
grasos de cadena larga obtenidos a partir de
biomasa renovable y que es tcnicamente
capaz de sustituir al diesel derivado de
petrleo como combustible (Sheehan et al.,
1998; Liu & Zhao, 2007; Song et al., 2008).
En contraste con el petrodiesel, el
biodiesel ofrece varias ventajas ya que es
una fuente de energa renovable y
biodegradable (se degrada cuatro veces ms
rpido que el diesel fsil) y produce menos
emisiones indeseables (CO, hidrocarburos
aromticos policclicos, partculas de holln,
xidos de azufre y nitrgeno, metales)
durante su combustin a causa de su estado
oxigenado, siendo stas por ende menos
nocivas. Adems, posee propiedades
lubricantes que reducen el desgaste del
motor y es un material seguro para su
transporte, almacenamiento y manejo debido
a su baja volatilidad y elevado punto de
inflamacin (100 - 170C). El biodiesel puede
utilizar la infraestructura actual de
almacenamiento y distribucin para el diesel
de petrleo.

Asimismo, debido a la similitud
de las propiedades fsicas y qumicas del
diesel fsil con las del biocombustible, su uso
no requiere de modificacin alguna en los
motores diesel convencionales, por lo que
puede ser empleado en ste ya sea
directamente (B100) o en mezclas biodiesel-
petrodiesel al 2% (B2), 5% (B5) y 20% (B20)
(Al-Zuhair, 2007; Annimo, 2007; Liu & Zhao,
2007; Song et al., 2008; Vasudevan & Briggs,
2008).
Existen diversas metodologas para la
produccin de biodiesel, cuatro de ellas han
sido estudiadas exhaustivamente: uso directo
de aceites o mezclas de stos con diesel
fsil, microemulsiones, pirolisis y
transesterificacin. La aplicacin de las tres
primeras alternativas en motores diesel es

39
imprctica e insatisfactoria, ya que ocasiona
problemas tales como la obstruccin de los
inyectores, la formacin de depsitos de
carbono, la combustin incompleta, el
golpeteo en el motor, el desgaste excesivo
del mismo, el dao del lubricante y, en el
caso especfico de la pirlisis, la eliminacin
de los beneficios ambientales inherentes al
uso de combustibles oxigenados. La
transesterificacin o alcohlisis (Fig. 1) es la
reaccin qumica ocurrida entre los aceites
(triacilglicridos) y un alcohol (comnmente
metanol, etanol, propanol o butanol) para
producir glicerol y alquil steres de cidos
grasos, los cuales son conocidos como

CH
2
-OOC-R
1
R
1
-COO-R CH
2
-OH
| Catalizador |
CH

-OOC-R
2
+ 3 ROH R
2
-COO-R + CH-OH
| |
CH
2
-OOC-R
3
R
3
-COO-R CH
2
-OH

Triacilglicrido Alcohol Alquil steres Glicerol
(Biodiesel)

Fig. 1. Reaccin general de transesterificacin. R
1
, R
2
, R
3
y R son radicales alquilo. Los
catalizadores pueden ser lcalis, cidos o enzimas (lipasas) (Ma & Hanna, 1999; Fukuda et al.,
2001; Sharma et al., 2008).
biodiesel. Los principales factores que
influyen en el proceso son la relacin molar
alcohol:glicridos, el tipo de catalizador
(lcali, cido, lipasas), la temperatura, el
tiempo de reaccin y el contenido de agua y
cidos grasos libres en la materia prima. En
la actualidad, la mayora del biodiesel es
producido mediante transesterificacin
alcalina, a causa de su rapidez y condiciones
moderadas que la caracterizan (Ma & Hanna,
1999; Al-Zuhair, 2007; Liu & Zhao, 2007;
Sharma et al., 2008; Vasudevan & Briggs,
2008).
La Unin Europea, con una produccin
de 8,812 millones de litros (ML) en el 2008,
es el lder mundial en la industria del
biodiesel y se estima que lo seguir siendo
durante la dcada prxima. Alemania
encabeza la lista de pases productores
(3,203 ML), seguido por EUA (3,182 ML),
Francia (2,063 ML) e Italia (676 ML); pases
en desarrollo tales como Malasia, China,
Brasil, Colombia, Argentina e Indonesia, son
prometedores en la industria del biodiesel. Se
estima un mercado de biodiesel de 168,206
ML para el 2016 (European Biodiesel Board,
2008; Li et al., 2008; US National Biodiesel
Board, 2008). La introduccin exitosa y
comercializacin del biodiesel en varios
pases ha dado lugar al establecimiento de
normas que regulan sus propiedades y
aseguran su calidad. Los estndares
usualmente utilizados como referencia son la
norma ASTM D6751 en EUA y las normas
europeas EN 14213 (biodiesel para
calefaccin) y EN 14214 (biodiesel para uso

40
vehicular). El cumplimiento de tales
disposiciones precisa de biodiesel
enriquecido en cidos grasos de cadena
larga con elevado grado de saturacin
(preferentemente los cidos palmitoleico
(16:1), oleico (18:1) y mirstico (14:0)) que
permitan disminuir las emisiones txicas y
mejorar las propiedades del biocombustible
(nmero de cetanos, poder calorfico y
estabilidad oxidativa) sin comprometer sus
caractersticas de flujo, viscosidad y
lubricidad (Knothe, 2005; Chisti, 2007;
Schenk et al., 2008).

FUENTES DE MATERIA PRIMA
Los aceites vegetales son la principal
materia prima para la produccin de
biodiesel, razn por la cual el uso de cultivos
de alto contenido oleaginoso ha sido
estudiado exhaustivamente. Los principales
materiales oleaginosos utilizados derivan de
la palma, colza y soya, adems del girasol,
coco, cacahuate, oliva, mostaza, entre otros
(Ma & Hanna, 1999; Al-Zuhair, 2007;
Annimo, 2007; Li et al., 2008; Meng et al.,
2009; Song et al., 2008). El mercado
creciente de produccin de biodiesel a partir
de aceites vegetales comestibles, requerira
del uso de enormes extensiones de terreno
frtil, situacin que podra conllevar a crisis
alimentarias ante la escasez de suelos
cultivables. En el caso particular del sureste
asitico y Brasil, el considerable incremento
en su tasa de produccin de biodiesel a partir
de palma y soya, ha ocasionado problemas
ambientales inherentes a la deforestacin de
regiones tropicales (Dismukes et al., 2008;
Schenk et al., 2008). En consecuencia se ha
planteado el uso de aceites no comestibles
procedentes de cultivos marginales tales
como Jatropha curcas (pin), Calophyllum
inophyllum (tamanu), Pongamia pinnata
(haya de la India, karanja), Madhuca indica,
Swida wilsoniana, Ricinus communis
(higuerilla) y Vernicia fordii (tung). Estos
cultivos marginales no requieren de terrenos
frtiles, ya que proliferan en suelos ridos,
pobres en nutrientes, con altos niveles de
radiacin y baja precipitacin pluvial
(Fairless, 2007; Liu & Zhao, 2007; Sharma et
al., 2008; Song et al., 2008). El elevado costo
de la materia prima, que contribuye del 50 al
90% del precio de produccin del biodiesel,
ha obstaculizado la comercializacin del
biocombustible, motivo por el que se ha
propuesto el uso de aceites de desecho y de
grasas animales, alternativa que no ha sido
satisfactoria a causa de los gastos
adicionales necesarios para el refinamiento y
la transesterificacin del material (Al-Zuhair,
2007; Liu & Zhao, 2007; Song et al., 2008;
Meng et al., 2009). En el 2007, la produccin
de biodiesel a partir de aceites vegetales
(comestibles y no comestibles, vrgenes y
usados) y grasas animales (12 Mtons)
correspondi al 0.3% del consumo global de
petrleo (3952.8 Mtons), situacin que
constata la incapacidad de estas fuentes
para desplazar la demanda actual y futura de
combustible (BP Statistical Review of World
Energy 2008; Schenk et al., 2008). Asimismo,
la obtencin de biodiesel a partir de plantas
oleaginosas (comestibles y no comestibles)
est limitada por varios inconvenientes tales
como los largos periodos de produccin
(meses o aos) inherentes a la tecnologa

41
agrcola, el rendimiento lipdico restringido
(menor al 5% del peso seco total) y la
dependencia a las condiciones climticas, la
ubicacin geogrfica, la fertilidad de los
suelos y la variedad cultivada; no obstante, el
principal obstculo es la extensa superficie
de cultivo requerida y el enorme volumen de
agua necesario para el riego (Annimo, 2007;
Li et al., 2007; Chisti, 2007; Chisti, 2008;
Schenk et al., 2008). La sustentabilidad de la
industria del biodiesel requiere de materias
primas alternas que permitan operar
continuamente y superar las limitaciones
sealadas (Liu & Zhao, 2007); una alternativa
prometedora es la obtencin de aceites a
partir de cultivos de microalgas.

42

LAS MICROALGAS COMO MATERIA
PRIMA ALTERNA
Caractersticas generales de las microalgas
Las microalgas son un conjunto
heterogneo de microorganismos
fotosintticos unicelulares procariontes
(cianobacterias) y eucariontes, que se
localizan en hbitats diversos tales como
aguas marinas, dulces, salobres, residuales o
en el suelo, bajo un amplio rango de
temperaturas, pH y disponibilidad de
nutrientes; se les considera responsables de
la produccin del 50% del oxgeno y de la
fijacin del 50% del carbono en el planeta. Su
biodiversidad es enorme, se han identificado
alrededor de 40,000 especies aunque se
estima que existen ms de 100,000, de las
cuales con frecuencia se desconoce su
composicin bioqumica y metabolismo. Las
microalgas se clasifican de acuerdo a varios
parmetros tales como pigmentacin, ciclo
de vida, morfologa y estructura celular
(Tabla 1). Las especies ms estudiadas para
aplicaciones biotecnolgicas corresponden a
las algas verdes y a las diatomeas
(Arredondo & Vzquez-Duhalt, 1991;
Sheehan et al., 1998; Hu et al., 2008).
Desde la antigedad las microalgas se
han usado como alimento humano, sin
embargo es hasta ahora que han atrado la
atencin para la investigacin de su potencial
biotecnolgico. El inters por las microalgas
surgi en Alemania en los aos cincuenta y
sesenta al ser consideradas como una fuente
abundante de protena de bajo costo para la
nutricin humana, inters que despus se
extendi a pases de todos los continentes.
El atractivo de las microalgas posteriormente
fue encauzado hacia otras aplicaciones tales
como la acuacultura (cultivo de especies
acuticas vegetales y animales en medios
naturales y artificiales), el tratamiento de
aguas residuales, la obtencin de sustancias
qumicas finas, la produccin de
farmacuticos y los procesos de
bioconversin energtica. La produccin de
bioenerga a partir de microalgas fue
contemplada desde los aos cincuenta, sin
embargo a partir de la crisis energtica de
1975, el potencial econmico de esta
tecnologa fue reconocido por varios pases
como EUA, Japn y Australia (Arredondo &
Vzquez-Duhalt, 1991; Huntley & Redalje,
2007).

Tabla 1. Clasificacin de las microalgas. Se describen las principales divisiones en las cuales las
microalgas han sido clasificadas de acuerdo a parmetros diversos tales como pigmentacin, ciclo
de vida, estructura celular, etc. (AlgaeBase, www.algaebase.org; Hu et al., 2008; Sheehan et al.,
1998).

Clase Caractersticas
Chlorophyta
(algas verdes)
Divisin conformada por una gran cantidad de especies, en particular por las
que proliferan en ambientes dulceacucolas. Pueden existir ya sea como
clulas individuales o colonias. Su principal reserva de carbono es el almidn,
sin embargo pueden almacenar lpidos bajo determinadas condiciones. En
esta divisin destaca la clase Prasinophyceae, caracterizada por incluir
especies que forman parte del pico-plancton.
Bacillariophyta
(diatomeas)
Las diatomeas predominan en aguas ocenicas, no obstante tambin se les
puede encontrar en aguas dulces y residuales. Se caracterizan por contener
silicio en sus paredes celulares. Almacenan carbono de maneras diversas, ya
sea como aceites o como crisolaminarina (polmero glucdico).
Heterokontophyta
Divisin constituida por una gran diversidad de clases dentro de las cuales
destaca la Crysophyceae (algas doradas), conformada por especies similares
a las diatomeas en trminos de composicin bioqumica y contenido de
pigmentos. Las algas doradas se distinguen por los complejos pigmentos que
las conforman, los cuales les proporcionan tonalidades amarillas, cafs o
naranjas. Las especies de este grupo son principalmente de agua dulce. Sus
reservas de carbono son los lpidos y los carbohidratos. Asimismo, otras clases
relevantes de esta divisin son: Phaeophyceae (algas cafs), Xantophyceae
(algas verde-amarillas), Eustigmatophyceae (forma parte del pico-plancton),
entre otras.
Cianobacteria
Las cianobacterias son microorganismos procariotes cuya estructura y
organizacin son similares a las de las bacterias. Las cianobacterias
desempean un papel relevante en la fijacin del nitrgeno atmosfrico.
Otras divisiones Rhodophyta (algas rojas), Dinophyta (dinoglagelados).

Destaca el proyecto solventado por el
Departamento de Energa de los EUA (DOE,
Department of Energy) con ms de 25
millones de dlares, y el programa de
especies acuticas del Laboratorio Nacional
de Energa Renovable (NREL, National
Renewable Energy Lab) con una duracin de
18 aos (1978-1996), cuyas importantes
aportaciones en las reas de aislamiento,
caracterizacin, fisiologa, bioqumica e
ingeniera gentica de especies microalgales
aunadas a los avances en el anlisis
econmico y escalamiento de cultivos en
sistemas eficientes, constituyen las bases
actuales para el desarrollo de
biocombustibles a partir de microalgas.
Asimismo sobresale el programa
subvencionado por el gobierno japons
(1990-2000), el cual estuvo dirigido al estudio
de la fijacin de CO
2
y a la optimizacin del
crecimiento microalgal. Estos proyectos
fueron suspendidos en parte, ante la falta de
competitividad del biocombustible ante los
precios del combustible fsil. No obstante,
debido a la condicin actual de agotamiento
de los combustibles fsiles, incremento de
los precios del petrleo y calentamiento
global como consecuencia de la acumulacin
de gases de invernadero, el panorama para
la produccin de bioenerga a partir de
microalgas es alentador (Arredondo &
Vzquez-Duhalt, 1991; Sheehan et al., 1998;

43
Huntley & Redalje, 2007; Hu et al., 2008;
Rodolfi et al., 2009; Waltz, 2009).

Caractersticas relevantes de los cultivos
microalgales para la produccin de biodiesel
En la actualidad se ha detectado el uso
de lpidos microalgales para la produccin de
biodiesel, ya que es una alternativa que
asegura satisfacer o reemplazar la demanda
global de petrodiesel. Esta tecnologa es
prometedora dadas las ventajas que ofrece
en contraste con las plantas oleaginosas,
tales como: mayor eficiencia fotosinttica;
eficacia superior en la asimilacin de
nutrientes; y periodos cortos de produccin
sostenida durante todo el ao, a causa de los
breves tiempos de duplicacin de las
microalgas. Los cultivos microalgales son
independientes de la estacionalidad
inherente a los cultivos agrcolas y de la
fertilidad del suelo, condicin que posibilita
prescindir de herbicidas y pesticidas y
adems, permite emplear territorios
marginales e inclusive zonas no aptas para la
agricultura, ganadera, industria y turismo.
Asimismo, en contraste con los cultivos
tradicionales, requieren de menores
cantidades de agua y son flexibles ante el
tipo y la calidad de sta, por lo que prosperan
convenientemente tanto en aguas marinas,
como dulces, salobres y residuales.
Igualmente, el contenido oleaginoso y el perfil
de composicin lipdica de las microalgas,
puede ser controlado en funcin de las
condiciones de cultivo, principalmente
mediante la limitacin de nutrientes. Adems,
esta tecnologa puede ser acoplada al
reciclaje del CO
2
liberado en las emisiones
industriales, especialmente por las plantas de
produccin de electricidad a partir de
combustibles fsiles. Una ventaja adicional
estriba en la posibilidad de obtener
subproductos (protena, carbohidratos,
biopolmeros, pigmentos, biogs, etc.) a partir
de la biomasa microalgal residual una vez
que los lpidos han sido extrados. Inclusive,
resulta factible el empleo de algunos de estos
residuos en la alimentacin humana o animal
y en la produccin de fertilizantes o de otros
biocombustibles. Finalmente, la ventaja
competitiva ms importante del biodiesel de
microalgas, consiste en los rendimientos
lipdicos por unidad de rea
considerablemente superiores a los
obtenidos con plantas oleaginosas
(Arredondo & Vzquez-Duhalt, 1991;
Sheehan et al., 1998; Chisti, 2007; Li et al.,
2007; Williams, 2007; Dismukes et al., 2008;
Hu et al., 2008; Rittmann, 2008; Schenk et
al., 2008; Gouveia & Oliveira, 2009; Meng et
al., 2009; Rodolfi et al., 2009; Waltz, 2009).
Una de las estimaciones ms
conservadoras para el rendimiento anual de
biodiesel microalgal, como se indica en la
Tabla 2, por lo menos duplica los
rendimientos obtenidos a partir de plantas
oleaginosas. En el 2008 la demanda de
petrodiesel en Mxico fue de 23,630 ML
(Indicadores Petroleros, 2008), el reemplazo
de esta demanda con biodiesel de origen
vegetal, incluso con aqul derivado de
cultivos de elevada productividad lipdica


44
Tabla 2. Comparacin de distintas fuentes de materia prima para la produccin de biodiesel en
Mxico. Se indican las proporciones de suelo frtil y de superficie total del pas necesarias para
reemplazar con biodiesel el 100% de la demanda de petrodiesel en Mxico. Las fracciones de
superficie total slo se sealan para materias primas que no precisan de suelos frtiles (CIA World
Factbook, 2009; Schenk et al., 2008).

Materia prima
Productividad
De Biodiesel

(L/ha/ao)
Superficie
equivalente
requerida
(ha x 10
6
)
Porcentaje
equivalente de
la superficie
frtil requerida
Porcentaje equivalente
de la superficie total
(no necesariamente
frtil) requerida
Palma 5,950 3.972 16.14 --
Jatropha 1,892 12.490 50.75 6.43
Colza 1,190 19.859 80.69 --
Girasol 952 24.823 100.9 --
Soya 446 52.986 215.3 --
Microalgas
a
12,000 1.969 8.00 1.01
Microalgas
b
20,000 1.181 4.80 0.61
a
Rendimiento conservador de productividad de biodiesel microalgal acorde con Schenk et al.
(2008).
b
Productividad de biodiesel microalgal asequible a travs de la tecnologa actualmente disponible,
acorde con Wijffels (2008).

como la palma, requerira de extensas
regiones frtiles. Igualmente, el uso de
plantas marginales como Jatropha curcas,
precisara de superficies mayores a las
comprendidas por cultivos microalgales
independientemente de la fertilidad de los
suelos. La tecnologa de microalgas es una
alternativa prometedora, ya que para
satisfacer el 100% de la demanda actual de
diesel de petrleo en Mxico, sera necesario
emplear slo 1% de la extensin total del
pas, al considerar el rendimiento lipdico y la
independencia a la calidad de los suelos por
parte de los cultivos de microalgas (Schenk
et al., 2008; CIA World Factbook, 2009).

Potencial de produccin de biodiesel
microalgal
Recientemente, el potencial de las
microalgas para la produccin de biodiesel
ha sido sobreestimado por empresas
diversas que aseguran productividades
iguales o superiores al mximo terico
posible (Wijffels, 2008; Waltz, 2009). La
determinacin de la productividad mxima
terica se fundamenta en la eficiencia
fotosinttica, la cual se define como la
fraccin de la energa luminosa absorbida
que es fijada como energa qumica en la
biomasa durante el crecimiento
fotoautotrfico. La fijacin fotosinttica de un
mol de CO
2
en biomasa microalgal con una
composicin representativa (CH
1.78
O
0.36
N
0.12
)
en sistemas con amonio como fuente de
nitrgeno, se considera que requiere de la
absorcin de 14 fotones, aunque de acuerdo
a las estimaciones de autores diversos, esta

45
magnitud puede variar de 6 a 16. La
incorporacin de un mol de carbono resulta
as en la produccin de 21.25 g de peso seco
con un contenido energtico (entalpa de
combustin) de 547.8 kJ (Wijffels, 2008).
Cabe destacar que la totalidad de la
radiacin solar no es aprovechada en la
fotosntesis microalgal, slo es til el
espectro comprendido entre los 400 y 700
nm de longitud de onda denominado
radiacin fotosintticamente activa (PAR por
sus siglas en ingls), regin que solo
representa el 42.3% del total. La energa
promedio de los fotones comprendidos en
este rango es de 218 kJ. Los datos anteriores
posibilitan determinar una eficiencia
fotosinttica mxima para las microalgas del
7.6% respecto a la radiacin solar total
(Apndice 1.A), valor que a pesar de ser
reportado por varios investigadores en un
intervalo del 3 al 10%, es cercano o superior
al mximo terico precisado para plantas C3
(2.4 - 4.3%) y C4 (1.3 - 3.7%). El
aprovechamiento parcial de la radiacin
fotosintticamente activa es atribuido a
fenmenos diversos, principalmente a la
disipacin de energa en los aparatos
fotosintticos en manera de calor o
fluorescencia con la intencin de evitar el
dao de stos por radiacin excesiva
(fotoinhibicin) (Pulz & Scheibenbogen, 1998;
Janssen et al., 2003; Dismukes et al., 2008;
Wijffels, 2008).
La energa solar es un recurso renovable
abundante y de alta calidad en Mxico, ya
que la radiacin solar promedio es de 1,825
kWh/m
2
/ao (Jimnez et al., 2007). En el
Apndice 1.B, se describe que al considerar
una eficiencia fotosinttica del 7.6%, se
determina que la mxima productividad
terica de biomasa seca microalgal en
Mxico sera de 194 tons/ha/ao; asimismo,
al suponer un contenido de triglicridos del
30% (g
TAG
/g
Biomasa
), una eficiencia de
transesterificacin del 96% (Al-Zuhair, 2007)
y una densidad del biodiesel microalgal de
0.864 kg/L (Xu et al., 2006), se estima una
produccin hipottica del biocombustible
(biodiesel) de 64,500 L/ha/ao, magnitud
inasequible hasta ahora. Acorde con Wijffels
(2008), la tecnologa actualmente disponible
permitira producir alrededor de 20,000
L/ha/ao de biodiesel. No obstante, este
valor podra ser cercano al mximo terico a
travs de avances en la seleccin de
especies, las estrategias y sistemas de
cultivo, los procedimientos de cosecha y
extraccin de aceites, aunados a la
optimizacin del metabolismo de los
microorganismos mediante recursos
moleculares (Wijffels, 2008; Waltz, 2009).
Estos datos indican la superioridad del
potencial de produccin de biodiesel a partir
de cultivos microalgales en contraste con el
uso de aceites vegetales (comestibles y no
comestibles) como materia prima para la
obtencin de biodiesel (Tabla 2).

El contenido lipdico de las microalgas
Las microalgas con elevadas
productividades lipdicas son deseables para
la elaboracin de biodiesel, razn por la cual
la cantidad de lpidos contenidos en la
biomasa y la velocidad de crecimiento,
sumados a la eficiencia metablica y la
robustez del microorganismo, son

46
parmetros relevantes para su seleccin
(Chisti, 2007; Rosenberg et al., 2008).
La determinacin del contenido
oleaginoso de las microalgas resulta
complicada a causa de su variacin ante
condiciones distintas de cultivo; el
crecimiento en ambientes desfavorables o
bajo situaciones de estrs, frecuentemente
conlleva al incremento de la fraccin lipdica,
aunque en detrimento de la productividad
lipdica del cultivo. Los lpidos comprendidos
en las microalgas por lo general constituyen
del 20 al 50% de su peso seco, sin embargo
se han reportado valores en un rango del 1 al
80%, o incluso superiores, como se seala
en la Tabla 3 (Arredondo & Vzquez-Duhalt,
1991; Chisti, 2007; Hu et al., 2008; Schenk et
al., 2008; Meng et al., 2009; Rodolfi et al.,
2009). Las especies que producen ms de un
30% de materias grasas se denominan
oleaginosas (Arredondo & Vzquez-Duhalt,
1991).
Los grupos taxonmicos a los cuales
pertenecen las microalgas oleaginosas son
diversos. En los ejemplares eucariontes, el
contenido lipdico es considerado como
propio de la especie y no del gnero, de
manera tal que este parmetro vara
notablemente entre las especies individuales
de cada grupo taxonmico (Ben-Amotz et al.,
1985; Hu et al., 2008). No obstante, de
acuerdo con Hu et al. (2008), es posible
generalizar que microalgas oleaginosas
eucariontes de grupos diversos (clorofitas,
diatomeas, crisofitas, haptofitas,
eustigmatofitas, dinofitas, xantofitas y
rodofitas) presentan, bajo condiciones
normales de cultivo, una fraccin lipdica
promedio del 25.1%, magnitud que es
superior (45%) en situaciones de estrs.
Cabe destacar que la ubicuidad de las algas
verdes (clorofitas) en hbitats diversos,
adems de la facilidad para su aislamiento y
desarrollo en condiciones de laboratorio, ha
favorecido la identificacin de numerosas
especies oleaginosas en este grupo,
condicin que no necesariamente es
distintiva del mismo. Las cianobacterias por
su parte presentan bajos contenidos lipdicos
promedio (9.8%; Hu et al., 2008), sin
embargo su aplicacin en la produccin de
biodiesel ha sido sugerida por Rittmann
(2008) a causa de la produccin de lpidos
paralela al crecimiento y la sencillez para la
manipulacin gentica que ofrecen, en
contraste con las especies eucariontes.
Qumicamente los lpidos son sustancias de
origen biolgico que, siendo escasamente
solubles en agua, pueden ser extradas con
solventes orgnicos de baja polaridad.
Las estructuras de estas biomolculas
comprenden largas cadenas
hidrocarbonadas, unidades de isopreno y
grupos funcionales diversos (oxigenados
principalmente). En las microalgas los
principales componentes de la fraccin
lipdica son triacilgliceroles, cidos grasos
libres, ceras, esteroles, hidrocarburos,
glicolpidos (predominantes en membranas
cloroplsticas), fosfolpidos (abundantes en
plasmalema y diversos sistemas
endomembranosos) y pigmentos
(carotenoides, clorofilas, ficobilinas, etc.),
aunque compuestos inusuales tales como
cidos grasos halogenados e hidroxilados,
alquenonas de cadena larga, entre otros,

47
Tabla 3. Contenido lipdico de algunas microalgas en condiciones autotrficas.
%Contenido lipdico %Contenido lipdico
Especie
(g
Lpidos
/g
Peso-seco
x100)
Especie
(g
Lpidos
/g
Peso-seco
x100)
Ankistrodesmus sp.
2,4,6
24.5 40.3 Hormotilopsis gelatinosa
2
49.1
Botryococcus braunii var. A
2,5
43.0 63.0 Isochrysis sp.
4,8
7.1 47.0
Botryococcus braunii var. B
2,5
53.0 86.0 Monallantus salina
1,2
20.0 72.2
Botryococcus sudeticus
7
9.39 23.09 Monodus subterraneus
2,10
39.3 - 40.0
Chaetoceros gracilis
2
46.0 Nannochloris sp.
1,8
20.0 47.8
Characium polymorphum
2
42.0 Nannochloropsis salina
8
40.8 72.2
Chlamydomonas applanata
2
32.8 Nannochloropsis sp.
1,9
28.7 68.0
Chlorella emersonii
9,10
63.0 Naviculla pelliculosa
2,8
22.0 44.8
Chlorella minutissima
9,10
57.0 Neochloris oleoabundans
2,3
18.9 88.8
Chlorella protothecoides
10
23.0 Nitzschia laevis
10
69.1
Chlorella pyrenoidosa
2,8
14.4 35.8 Nitzschia pelea Kutz
2,8
27.2 39.5
Chlorella sorokiana
9,10
22.0 Nitzschia sp.
1,4
22.1 47.0
Chlorella sp.
1
28.0 32.0 Ochromonas danica
2,8
39.0 71.0
Chlorella vulgaris
9
5.1 - 56.0 Oocystis polymorpha
2
34.7
Chlorococcum oleofaciens
2
44.3 Parietochloris incisa
10
62.0
Chlorosarcinopsis nagevensis
2
32.2 Ourococcus sp.
2,8
27.0 49.5
Chroomonas salina
8
44.0 Peridinum cinetum fa. Westi
2
36.0
Chrysochromulina kappa
2,8
32.6 Phaeodactylum tricornutum
2
31.0
Chrysochromulina polylepsis
2,8
47.6 Protosiphon botryoides
2,8
37.0
Cosmarium laeve
2,8
15.0 - 33.0 Prymnesium parvm
2,8
22.0 - 38.2
Crypthecodinium cohnii
1
20.0 Radiosphaera nagevensis
2,8
43.0
Cyclotella cryptica
2
36.8 Scenedesmus dimorphus
2,8,9
6.0 40.0
Cyclotella sp.
2
54.0 Scenedesmus obliquus
9
11.0 - 55.0
Cylindrotheca sp.
1
16.0 37.0 Scotiella sp.
2,8
34.5 48.0
Dunaliella primolecta
1,2,8
23.0 53.8 Schizochytrium sp.
1
50.0 - 77.0
Dunaliella salina
2,4,8
9.2 47.2 Skeletonema costatum
2
30.3
Euglena gracilis
2
55.0 Stichoccus bacillaris
2
38.9
Hantzchia sp.
2
61.0 Tetraselmis sueica
1
15.0 23.0
1
Chisti, 2007;
2
Arredondo & Vzquez-Duhalt, 1991;
3
Gatenby et al., 2003;
4
Ben-Amotz et al., 1985;
5
Metzger & Largeau, 2005;
6
Sheehan et al., 1998;
7
Vzquez-Duhalt & Greppin, 1987;
8
Cohen,
1986;
9
Gouveia & Oliveira, 2009;
10
Li et al., 2008.

tambin ocurren (Cohen, 1986; Arredondo &
Vzquez-Duhalt, 1991; Metzger & Largeau,
2005; Guschina & Harwood, 2006; Hu et al.,
2008). No todos los lpidos microalgales son
satisfactorios para la produccin de biodiesel,
sin embargo los apropiados para ello (cidos
grasos, libres y unidos covalentemente al
glicerol y sus derivados) son producidos con
frecuencia y constituyen la mayor fraccin de
los lpidos totales, usualmente del 20% al
40% (Cohen, 1986; Chisti, 2007). Un perfil de
cidos grasos de cadena larga con un bajo

48
grado de insaturacin es deseable para la
elaboracin de biocombustible de calidad
(Knothe, 2005).

SNTESIS DE LPIDOS
La composicin de cidos grasos de las
microalgas comnmente incluye molculas
lineales de 12 a 22 tomos de carbono en
nmero par, saturadas e insaturadas, donde
la posicin y el nmero de enlaces dobles (1
a 6) es variable, siendo por lo general cis la
configuracin de stos. Los cidos grasos de
16C a 18C son los ms frecuentes, no
obstante molculas de cadena media (10C,
12C, 14C) o demasiado larga (> 20C)
predominan en algunas especies. Por lo
general, en las microalgas dulceacucolas
prevalecen los cidos grasos saturados y
mono-insaturados, observndose en menor
proporcin compuestos poli-insaturados
(PUFAs, Polyunsaturated Fatty Acids). Estos
ltimos, ocasionalmente constituyen la mayor
fraccin de cidos grasos en especies
marinas. La variacin del perfil de cidos
grasos entre grupos algales diversos es
considerable, variabilidad que igualmente se
exhibe bajo distintas condiciones de cultivo
(Cohen, 1986; Hu et al., 2008; Griffiths &
Harrison, 2009).
El metabolismo lipdico de las algas es
similar al de plantas superiores,
particularmente en la biosntesis de cidos
grasos y triglicridos, como consecuencia de
las homologas de secuencia y la similitud de
caractersticas bioqumicas observadas entre
ciertos genes y enzimas, de origen vegetal y
algal, involucrados en la produccin de
lpidos. En el cloroplasto ocurre la sntesis de
novo de cidos grasos, cuyo paso inicial
consiste en la carboxilacin de acetil-CoA
dependiente de ATP para su conversin en
malonil-CoA. Esta reaccin es catalizada por
la acetil-CoA carboxilasa y es considerada el
paso limitante del proceso, ya que
compromete el flujo de acetil-CoA hacia la
biosntesis de lpidos, donde las unidades de
acetil-CoA probablemente derivan del
piruvato proveniente de la gluclisis. La
reaccin anterior es seguida por ciclos de
adicin descarboxilativa de malonil-CoA a
unidades acilo y |-reduccin, catalizados por
el sistema cido graso sintetasa, hasta
producir molculas de 16C y 18C saturadas.
Los cidos palmtico (16:0) y oleico (18:1e9)
son los precursores de las molculas poli-
insaturadas, a su vez producidas mediante
mecanismos de desaturacin aerobia y
elongacin. Por su parte, se sugiere que la
biosntesis de triglicridos sucede en el
citosol y en el retculo endoplsmico
esencialmente a travs de la catlisis por
acil-transferasas del traslado secuencial de
cidos grasos a las posiciones 1, 2 y 3 del
glicerol-3-fosfato, donde antes de la ltima
transferencia, se requiere de la
defosforilacin del cido fosfatdico
previamente formado (Fischer et al., 2008;
Hu et al., 2008). En la Fig. 2, se presenta un
esquema que describe en trminos generales
la biosntesis de lpidos microalgales.

CONDICIONES AMBIENTALES QUE
AFECTAN LA ACUMULACIN DE LPIDOS
La produccin de lpidos al igual que su
composicin en las microalgas, a pesar de

49

Fig. 2. Biosntesis de lpidos microalgales. En trminos generales, en el sistema fotosinttico a
partir de la energa proporcionada por los fotones presentes en el flujo luminoso, se lleva a cabo la
oxidacin cataltica del agua con la consecuente formacin de protones, electrones y O
2
, los cuales
a su vez posibilitan la obtencin de los productos fotosintticos: ATP y NADPH. Estos productos
fotosintticos son el sustrato del Ciclo de Calvin en el cual el CO
2
es fijado en molculas de 3
tomos de Carbono (3 C), las cuales a su vez son asimiladas como carbohidratos, lpidos y
protenas. En el caso particular de los lpidos microalgales, las molculas de 3 C son transformadas
a piruvato y acetil-CoA en el cloroplasto, donde las molculas de acetil-CoA son carboxiladas y
sometidas a numerosos ciclos de adicin descarboxilativa y |-reduccin para la sntesis de novo de
cidos grasos (grupos acilo: ACIL-ACP). El mecanismo de transporte de cidos grasos al exterior
del citoplasma se desconoce. Posteriormente, como se indica en el texto, los cidos grasos son
secuencialmente transferidos a las posiciones 1, 2 y 3 del glicerol-3-fosfato, donde algunos
intermediarios son desviados hacia la sntesis de lpidos de membrana (Fischer et al., 2008; Hu et
al., 2008; Rosenberg et al., 2008; Beer et al., 2009).

depender principalmente de la especie, y en
ltima instancia de su constitucin gentica,
son afectados por diversas condiciones
fsicas y qumicas de cultivo, tales como la
fase de crecimiento, la disponibilidad y la
clase de nutrientes, la salinidad, el tipo,
periodos e intensidad de luz, la temperatura,
el pH, e incluso, la asociacin con otros
microorganismos. La aclimatacin de las
microalgas a la restriccin de nutrientes se
caracteriza por la manifestacin de
respuestas especficas para el elemento
limitado (induccin de sistemas de transporte
de alta afinidad y de la sntesis de enzimas
hidrolticas para la liberacin intra- o extra-
celular del nutriente), adems de respuestas

50
generales tales como cambios morfolgicos,
cese de la divisin celular, alteraciones en la
permeabilidad de las membranas,
acumulacin de lpidos y/o polisacridos,
reduccin de la actividad fotosinttica y
modificacin de procesos metablicos. La
limitacin de Nitrgeno es considerada como
la estrategia ms eficiente para incrementar
el contenido de lpidos neutros en las
microalgas, en particular el de triglicridos
conformados por cidos grados con un
elevado grado de saturacin. Respuestas
similares son inducidas por la deficiencia de
fsforo, azufre y silicio, siendo el efecto de
este ltimo especfico para las diatomeas.
Asimismo, la disponibilidad de Hierro (+3)
influye en el contenido oleaginoso, aunque el
mecanismo se desconoce. Sin embargo, el
comportamiento de las microalgas ante la
restriccin de nutrientes es
considerablemente variable y por tanto, no es
posible establecer una tendencia
generalizada entre las especies microalgales
(Ben-Amotz, et al.,1985; Cohen, 1986;
Arredondo & Vzquez-Duhalt, 1991;
Thompson, 1996; Sheehan et al., 1998;
Grossman & Takahashi, 2001; Gatenby et al.,
2003; Guschina & Harwood, 2006; Huntley &
Redalje, 2007; Dismukes et al., 2008; Hu et
al., 2008; Li et al., 2008; Rosenberg et al.,
2008; Gouveia & Oliveira, 2009; Rodolfi et al.,
2009). La acumulacin de lpidos en especies
oleaginosas, a pesar de la atenuacin de la
divisin celular, es consecuencia de la
asimilacin continua de carbono y su
orientacin hacia la sntesis activa de cidos
grasos. Los lpidos bajo tales circunstancias,
fungen como una reserva de carbono y
energa, adems de proteger al organismo
contra el estrs fotooxidativo (Thompson,
1996; Grossman & Takahashi, 2001; Hu et
al., 2008; Rosenberg et al., 2008; Meng et al.,
2009; Rodolfi et al., 2009).
La temperatura, por su parte, afecta
notablemente el perfil lipdico de las
microalgas, de manera tal que a bajas
temperaturas incrementa el grado de
insaturacin. Las altas intensidades
luminosas son otra de las condiciones que
favorecen sustancialmente la acumulacin de
triglicridos con un elevado perfil de
saturacin, donde intensidades bajas a su
vez promueven la sntesis de lpidos polares
altamente insaturados, estructural y
funcionalmente asociados con las
membranas. El pH y la salinidad son otros
factores que modifican la sntesis de lpidos
de diversas microalgas, sin embargo el tipo y
cantidad de lpidos producidos tambin
dependen de la especie y de la magnitud del
cambio de stas variables (Cohen, 1986:
Arredondo & Vzquez-Duhalth, 1991;
Thompson, 1996; Andersen, 2005; Guschina
& Harwood, 2006; Hu et al., 2008; Rodolfi et
al., 2009).

PRODUCCIN DE MICROALGAS
La produccin de biodiesel a partir de
microalgas es un proceso conformado, en
trminos generales, por las etapas
elementales de produccin de biomasa rica
en lpidos, recuperacin o cosecha de la
biomasa, extraccin de lpidos y
transesterificacin, como se indica en la Fig.
3 (Chisti, 2008; Schenk et al., 2008).

51

Fig. 3. Esquema conceptual del proceso de produccin de biodiesel a partir de microalgas. El
proceso de produccin de biodiesel est conformado en trminos generales por las etapas
elementales indicadas en el esquema. El agua, los nutrientes, el CO
2
y la luz, son proporcionados
a los sistemas de cultivo (abiertos, cerrados o hbridos) para la produccin de biomasa de
microalgas rica en lpidos. El CO
2
suministrado puede provenir del aire ambiente, o bien, los
sistemas de cultivo pueden ser acoplados a flujos ricos en este gas procedente de emisiones
industriales, tales como las de las plantas generadoras de energa elctrica. La biomasa producida
es separada del agua y los nutrientes residuales son recirculados hacia la etapa inicial de
produccin de biomasa. Los aceites son extrados a partir de la pasta de microalgas, siendo
despus transformados en biodiesel y glicerol, mediante la reaccin de transesterificacin (alcalina,
cida o enzimtica). Este esquema conceptual puede incluir etapas adicionales que posibiliten
acoplar la produccin de biodiesel al aprovechamiento de los co-productos, es decir, del glicerol y
de la biomasa microalgal libre de lpidos, ya sea directamente como insumos industriales, en la
alimentacin humana, animal y/o acucola, o indirectamente a travs de su transformacin en
productos alternos tales como biogs o bioetanol, entre otros (Chisti, 2008; Schenk et al., 2008).

En relacin a la etapa de produccin de
biomasa de microalgas, actualmente existen
sistemas de cultivo de microalgas destinados
a la obtencin de productos de alto valor
agregado (pigmentos carotenoides, cidos
grasos esenciales - e3 y e6 -, compuestos
isotpicos, ficobiliprotenas, farmacuticos -
anticancergenos y antibiticos -, vitaminas C
y E, etc.), no obstante ante la escasa
flexibilidad econmica del mercado de los
biocombustibles, la optimizacin de tales

sistemas de produccin resulta necesaria
(Arredondo & Vzquez-Duhalt, 1991; Schenk
et al., 2008; Wijffels, 2008). Los sistemas
empleados con mayor frecuencia en la
produccin de biomasa microalgal son los de
tipo abierto, que a pesar de sus formas y
tamaos diversos, destacan por asemejar el
entorno natural de las microalgas. Los
cultivos abiertos comprenden sistemas
naturales (lagos, lagunas, estanques),
artificiales, de superficie inclinada y

52
estanques tipo circuito (raceway ponds),
donde estos ltimos son los de uso ms
extendido (Fig. 4A). Los estanques tipo
raceway consisten en circuitos de 15 a 30
cm de profundidad, en los cuales una rueda
de paletas mantiene un flujo constante del

A. Estanque tipo circuito. B. Fotobioreactor Tubular.

*

Fig. 4. Sistemas para produccin de microalgas. (A) Sistema tipo circuito: es el tipo de sistema
abierto de uso ms frecuente; *Paletas giratorias para la circulacin del agua. (B) Fotobioreactor
tubular: es una clase de sistema cerrado de cultivo microalgal de uso comn. Las flechas indican la
direccin del flujo de agua.

cultivo; las producciones y productividades
biomsicas factibles en estos sistemas son
bajas, prximas a 1 g/L y a 10-25 g/m
2
/d,
respectivamente. Las ventajas inherentes a
los cultivos abiertos radican en su sencillez y
su bajo costo de inversin en contraste con
sistemas cerrados, a causa de la diversidad
de materiales tiles para su construccin
(concreto, tierra, plstico, etc.) y la facilidad
que ofrecen para su operacin y
mantenimiento. Sin embargo, acorde con
Wijffels (2008), un factor determinante del
costo de produccin de biomasa de
microalgas en sistemas abiertos es la
cosecha de la biomasa, debido a la baja
concentracin que sta alcanza. De este
modo, al considerar la operacin de cosecha
de la biomasa y la tecnologa actualmente
disponible, los costos de produccin de los
sistemas abiertos no son tan bajos e incluso,
son del mismo orden de magnitud que los
correspondientes a los sistemas cerrados.
Los sistemas abiertos presentan diversos
inconvenientes tales como prdidas de agua
por evaporacin, transferencia limitada de
CO
2
al cultivo por su baja concentracin en el
aire (0.035% v/v) y su difusin hacia la
atmosfera, control limitado de las condiciones
de cultivo, alta susceptibilidad de
contaminacin (excepto en cultivos de
especies extremfilas), requerimiento de
superficies extensas, amplios periodos de
produccin (6 a 8 semanas), producciones
reducidas de biomasa y penetracin limitada
de la luz (Pulz & Scheibenbogen, 1998; Pulz,
2001; Chisti, 2007; Li et al., 2008; Rittmann,
2008; Schenk et al., 2008; Wijffels, 2008).
Los sistemas cerrados, en contraste con
los abiertos, ofrecen numerosas ventajas
tales como prdidas mnimas de CO
2
, riesgo

53
reducido de contaminacin, control y
reproducibilidad de las condiciones de
cultivo, ahorro de agua y nutrientes, menores
requerimientos de superficie, flexibilidad de
diseo, cortos periodos de produccin (2 a 4
semanas) y productividades
considerablemente superiores (5 a 13 veces).
Los fotobioreactores cerrados, con el
propsito de colectar la mayor cuanta
posible de energa solar por unidad de
superficie, presentan configuraciones
diversas, tubulares (vertical, horizontal,
helicoidal, conformacin o), pneles planos y
columnas de burbujeo, principalmente. Los
reactores tubulares (Fig. 4B) y de pnel plano
son los de uso ms frecuente; habitualmente
estn conformados por dos unidades, una de
recoleccin de luz y otra de transferencia de
gases. La consideracin de factores tales
como la luz, la razn CO
2
/O
2
, la temperatura,
los nutrientes, la salinidad, el pH, entre otros,
resulta trascendental para el diseo de
sistemas cerrados. Las altas productividades
inherentes a estos sistemas precisan de una
penetracin y distribucin ptima de la luz,
condicin que a su vez requiere de
materiales de construccin transparentes y
de relaciones superficie/volumen elevadas,
sin embargo, la intensidad de la luz incidente
debe ser moderada, de lo contrario se
presentan fenmenos de fotoinhibicin y
fotoblanqueo. Asimismo, la relacin CO
2
/O
2

debe ser tal que la proporcin de O
2
sea
mnima y por ende, sean impedidos procesos
de fotorespiracin y dao fotooxidativo.
Actualmente, la principal desventaja de los
sistemas cerrados consiste en sus elevados
costos, atribuidos en mayor medida a la
energa invertida en la agitacin mecnica de
los cultivos con la finalidad de evitar la
sedimentacin y favorecer la transferencia de
gases (Pulz & Scheibenbogen, 1998; Pulz,
2001; Carvalho et al., 2006; Chisti, 2007;
Chisti, 2008; Rittmann, 2008; Schenk et al.,
2008; Wijffels, 2008).
Los sistemas hbridos han sido
propuestos como una alternativa econmica
para la produccin de biodiesel microalgal a
gran escala. En trminos generales, tales
sistemas consisten en una etapa inicial de
produccin de biomasa en fotobioreactores
cerrados, en la cual los microorganismos son
mantenidos en crecimiento continuo bajo
condiciones de suficiencia de nutrientes,
etapa que es seguida por una fase de
acumulacin de producto (lpidos) en
estanques abiertos, inducida mediante la
deficiencia de nutrientes (Schenk et al.,
2008).
Una vez que la biomasa de microalgas ha
sido producida en alguno de los sistemas
descritos, se da inicio a la etapa de cosecha
o recoleccin, cuyo propsito es el de
remover el agua y concentrar las clulas
microalgales para su posterior
procesamiento. Esta etapa, como se ha
mencionado, influye notablemente en los
costos de produccin del biodiesel, por lo que
la seleccin de una tcnica de recoleccin
eficiente y de bajo costo es trascendental. La
centrifugacin, sedimentacin, filtracin y
floculacin, ya sea individualmente o
combinados, son los procedimientos de
cosecha ms comunes, cuya aplicacin
depende de las propiedades de la especie de

54
microalga cultivada (morfologas particulares,
presencia de vacuolas gaseosas, etc.), ya
que algunas presentan caractersticas que
facilitan su recoleccin (Dismukes et al.,
2008; Schenk et al., 2008; Lee et al., 2009).
La filtracin resulta conveniente para
especies microalgales de forma filamentosa o
capaces de formar colonias; cabe mencionar
que esta operacin a gran escala presenta
inconvenientes tales como la obstruccin de
los filtros, formacin de tortas de filtracin
compresibles y altos costos de
mantenimiento. La aplicacin de la
sedimentacin o de la centrifugacin podra
ser factible en microalgas con dimetros
mayores a los 5 m y paredes celulares
relativamente gruesas. A pesar del frecuente
empleo de la sedimentacin en la
acuacultura, su principal desventaja es la
larga duracin de esta operacin. Por su
parte, la centrifugacin slo resulta
conveniente para productos de alto valor
agregado, ya que implica altos costos y
demanda un elevado consumo de energa.
La floculacin es otro procedimiento comn
de cosecha, el cual consiste en la
aglomeracin y posterior sedimentacin o
flotacin de la biomasa de microalgas; esta
puede ser inducida de diversos modos. La
floculacin mediante la adicin de sales
inorgnicas (almina, cloruro frrico, xido de
calcio) no es recomendada por su alto costo
y por contaminar la biomasa, de manera tal
que sta no puede ser utilizada
posteriormente como alimento. El uso de
polmeros orgnicos catinicos como
floculantes no presenta estos inconvenientes,
sin embargo su efectividad puede ser
disminuida en aguas salobres como
consecuencia de la elevada fuerza inica que
las caracteriza. Por su parte, la biofloculacin
es un procedimiento alterno de cosecha que
consiste en el uso de especies de microalgas
que naturalmente floculan o cuya
aglomeracin puede ser inducida mediante la
aplicacin de condiciones de estrs tales
como cambios de pH, temperaturas extremas
y restriccin de nutrientes. No obstante, la
modificacin de las condiciones de cultivo
puede alterar la composicin bioqumica de
la microalga y por tanto el rendimiento
lipdico. Finalmente, se ha propuesto la
floculacin microbiana o co-biofloculacin,
procedimiento en el cual se adicionan
microorganismos autofloculantes (tales como
levaduras) al cultivo microalgal, de manera
tal que se promueve la aglomeracin
conjunta de stos con la biomasa que se
desea cosechar (Belter et al., 1988; Schenk
et al., 2008; Lee et al., 2009).
A partir de la biomasa cosechada se
extraen los aceites mediante procedimiento
tales como lixiviacin con solventes
orgnicos, principalmente hexano. Sin
embargo, algunos inconvenientes de esta
tcnica de extraccin son los costos y la
energa adicionales necesarios para la
recuperacin del solvente, adems de la
contaminacin de la biomasa microalgal libre
de lpidos, restringiendo as las posibilidades
para el posterior aprovechamiento de este
co-producto. En esta dcada, se han
propuesto variantes para la lixiviacin con
solventes orgnicos, tales como la extraccin
in situ a partir de clulas vivas de microalgas

55
o el acoplamiento de la etapa de extraccin
lipdica con la de transesterificacin, no
obstante, tanto su aplicacin a gran escala,
como su factibilidad econmica, deben ser
evaluadas. Asimismo, la extraccin mediante
prensado ha sido sugerida aunque, a pesar
de no implicar el uso de solventes, su
eficiencia es menor a la de la lixiviacin
(Hejazi & Wijffels, 2004; Chisti, 2008; Schenk
et al., 2008).

FACTIBILIDAD ECONMICA DEL
BIODIESEL DE MICROALGAS
La factibilidad de la produccin de
biodiesel de microalgas depende de su
competitividad con los combustibles fsiles,
de manera tal que los costos de produccin
resultan decisivos. La estimacin de la
viabilidad de esta tecnologa es posible
mediante una evaluacin anloga a la
realizada por Chisti (2008), en la cual se
determina el mximo costo de produccin de
biomasa microalgal con un contenido
oleaginoso especfico, que posibilitara su
competencia con los precios actuales del
petrleo. El clculo se fundamenta en la
definicin de la cantidad de biomasa que, a
partir del biodiesel y biogs derivados de la
misma, proporciona una cantidad de energa
equivalente a la de un barril de crudo (159 L).
Acorde con la OPEC (OPEC Annual Report,
2008), en el 2008 el costo promedio del barril
de petrleo fue de US$ 94.45. Para poder
contender con este precio, el gasto en la
obtencin de biomasa microalgal con un
contenido lipdico del 55% (g
Lpidos
/g
Biomasa
)
debe ser inferior a los US$ 323 ton
Biomasa
-1

(Chisti, 2008). Recientemente, compaas
productoras de biomasa microalgal han
reportado costos de produccin de US$ 370
ton
Biomasa
-1
o inferiores, por ende la tecnologa
actual podra ser econmicamente viable
(Schenk et al., 2008). Sin embargo, las
fluctuaciones en el precio del crudo deben
ser consideradas ya que en el transcurso del
2009, el costo del barril ha disminuido
considerablemente (OPEC Basket Price,
2008), situacin que demanda la reduccin
de los costos de produccin de biomasa
microalgal a alrededor de la mitad del valor
antes estimado para el 2008 (US$ 142
ton
Biomasa
-1
).

COMENTARIOS FINALES
La tecnologa microalgal presenta
limitaciones diversas, siendo las ms
destacadas la dificultad para mantener
monocultivos con altos rendimientos de
biomasa, la seleccin de cepas de
microalgas oleaginosas, la escasez de
informacin relativa al escalamiento de
sistemas de produccin y el consumo
elevado de energa por procesos de bombeo,
transferencia de gases, mezclado,
recoleccin y deshidratacin de la biomasa.
No obstante, los costos de produccin de
biodiesel microalgal pueden ser aminorados
a travs de distintas estrategias. Avances en
la ingeniera de fotobioreactores, adems del
desarrollo de procesos econmicos para la
recoleccin de biomasa y su posterior
transesterificacin sin el requerimiento previo
de procedimientos de deshidratacin, son
aspectos trascendentales para la reduccin
de costos. Con tal propsito, tambin se ha
sugerido el acoplamiento de los cultivos de

56
microalgas a los flujos ricos en CO
2

derivados de emisiones industriales y al
tratamiento de aguas residuales. Asimismo,
se ha propuesto el aislamiento y seleccin de
especies oleaginosas, adems de su
modificacin mediante procedimientos de
ingeniera gentica y metablica con
propsitos diversos, tales como incrementar
la eficiencia fotosinttica, mejorar la
productividad, aumentar la fraccin
oleaginosa, reducir los fenmenos de
fotoinhibicin y dao fotooxidativo, entre
otros. Finalmente, resulta imprescindible la
consideracin de estrategias de produccin
basadas en el concepto de biorefineras,
donde los componentes restantes de la
biomasa microalgal despus de extraer los
lpidos, pueden ser transformados en
productos comercializables tales como:
alimento para ganado, extraccin de
pigmentos naturales, otras sustancias
qumicas de alto valor agregado y hasta el
uso de la digestin anaerobia para obtener
biogas o metano (Chisti, 2007; Chisti, 2008;
Dismukes et al., 2008; Hu et al., 2008;
Schenk et al., 2008; Song et al., 2008;
Wijffels, 2008; Rodolfi et al., 2009).

AGRADECIMIENTOS
Se agradece el apoyo del Fondo Sectorial
CONACyT-SAGARPA y de la Red de
Fuentes de Energa del CONACyT.

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Apndice 1. Clculo de la eficiencia fotosinttica y de la mxima productividad terica de biodiesel
de microalgas a partir de la radiacin solar promedio de Mxico.
A. Eficiencia fotosinttica.
La eficiencia fotosinttica se define como la fraccin de energa luminosa absorbida que es
fijada como energa qumica en la biomasa microalgal durante el crecimiento fotoautotrfico. El
clculo de la eficiencia fotosinttica es posible si se considera que la fijacin de un mol de CO
2
en
la biomasa microalgal requiere de la absorcin de 14 fotones y resulta en la produccin de 21.25 g
de peso seco con una composicin representativa CH
1.78
O
0.36
N
0.12
(esto es un peso molecular
promedio de la microalga de 21.25 g/mol) y un contenido energtico de 547.8 kJ. Asimismo, se
considera que la radiacin fotosintticamente activa (PAR) slo comprende el 42.3% de la
radiacin solar total y que la energa promedio de los fotones PAR es de 218 kJ (Wijffels, 2008). De
este modo, la eficiencia fotosinttica respecto a la radiacin total, se determina de la siguiente
manera:
100
absorbida luminosa Energa
fijada qumica Energa
ica fotosintt Eficiencia % =
% 7.6 100
PAR 1fotn
kJ 218
fotones 0.423
PAR fotn 1
fotones 14
kJ 547.8
ica fotosintt Eficiencia %
Radiacin
Biomasa
=

=
|
.
|
\
|
|
.
|
\
|

B. Mxima productividad terica de biodiesel de microalgas en Mxico.
La mxima productividad terica de biomasa microalgal (Q
Mxima Terica
) en Mxico se estima al
considerar la radiacin solar promedio en el pas de 1,825 kWh/m
2
/ao (Jimnez et al., 2007) y la
eficiencia fotosinttica de las microalgas en relacin a la radiacin solar incidente calculada en el
Apndice 1.A.
C mol
Algas Biomasa Promedio Solar
Terica Mxima
fijada qumica Energa
molecular Peso ica fotosintt Eficiencia Radiacin
Q

=
/ha/ao tons 194 Q
Biomasa Terica Mxima
=
De este modo, al suponer un contenido de triglicridos en la biomasa microalgal del 30%
(g
TAG
/g
Biomasa
x 100), una eficiencia de transesterificacin del 96% (Al-Zuhair, 2007) y una densidad
de biodiesel proveniente de microalgas de 0.864 kg
Biodiesel
/L (Xu et al., 2006), se estima una
produccin hipottica mxima de 64,500 L
Biodiesel
/ha/ao.

61
Bioelectricidad

Axel Falcn, J. Esteban Lozano y Katy Jurez

Instituto de Biotecnologa, Universidad Nacional Autnoma de Mxico.
Apdo. Postal 510-3 Cuernavaca, Mor, 62250, Mxico. katy@ibt.unam.mx

RESUMEN
El desafo tecnolgico ms grande para la sociedad humana es el reemplazo de combustibles
fsiles con fuentes de energa renovable y carbono neutrales. Los microorganismos son capaces
de producir energa renovable sin dao del ambiente o la interferencia con suministro de alimentos.
Las celdas microbianas de combustible, ofrecen la posibilidad de convertir eficientemente
compuestos orgnicos en electricidad. Los microorganismos que pueden oxidar totalmente
compuestos orgnicos empleando un electrodo como nico aceptor de electrones, son los que
contribuyen principalmente a la produccin de energa. Existen varios mecanismos para la
transferencia del electrones al nodo: transferencia directa va citocromos tipo c de la membrana
externa, transferencia mediante nanocables bacterianos, y transportadores de electrones solubles.
La investigacin en esta rea se ha centrando principalmente en el estudio de los mecanismos de
la transferencia de electrones entre los microorganismos y el electrodo, para disear mejores
electrodos o en la manipulacin gentica de microorganismos que permitan incrementar la
produccin de electricidad. En esta revisin abordamos el tema de la produccin de bioelectricidad
y los avances y los retos tecnolgicos que hay que vencer para convertirla en una fuente de
energa renovable competitiva.
Palabras Clave: Celdas microbianas, Bioelectricidad, Energa renovable

ABSTRACT
The greatest technological challenge for todays human society is the replacement of fossil fuels
with energy sources that are renewable and carbon neutral. Microorganisms can produce
renewable energy without damaging the environment or disrupting food supply. Microbial fuel cells
offer the possibility of efficiently converting organic compounds into electricity. Microorganisms that
can completely oxidize organic compounds with an electrode serving as the sole electron acceptor
are the primary contributors to power production. Several mechanisms for electron transfer to
anodes have been proposed including: direct electron transfer via outer-surface c-type
cytochromes, long-range electron transfer via microbial nanowires, electron flow through a
conductive biofilm matrix containing cytochromes, and soluble electron shuttles. Research in this
area is focusing on elucidating the mechanisms of electron transfer between the microorganisms
and the electrode in order to design better electrodes or genetically engineer better microbes for
higher rates of electricity production. In this review we are examining the advances of the
62
bioelectricity generation and the technological challenges that there are to face in order to turn it
into a competitive renewable energy source.
Key words: MFC, Bioelectricity, Renewable energy

INTRODUCCIN

La creciente demanda de energa en el
mundo y el uso excesivo de combustibles
fsiles han provocado serios problemas de
contaminacin ambiental y el calentamiento
global de la tierra. Por lo que en la
actualidad, numerosos grupos de
investigacin a nivel mundial se han
enfocado en la bsqueda de fuentes alternas
de energa que contribuyan de manera
sustentable a mitigar dicha demanda. Sin
embargo, aun no se cuenta con la
infraestructura ni la tecnologa necesaria para
dejar de depender del petrleo como fuente
principal de energa. Una de las
consideraciones importantes, en la bsqueda
de fuentes alternativas, es la liberacin de
CO
2
a la atmsfera, ya que algunas de ellas,
como por ejemplo el proceso de combustin
de los hidrocarburos contenidos en el
petrleo libera grandes cantidades de CO
2
,
favoreciendo problemas como el calenta-
miento global. Debido a lo anterior, se busca
que las nuevas tecnologas de produccin de
energa sean carbono-neutrales, es decir que
solo liberen el carbono recin fijado a la
atmsfera. En los ltimos aos se han
desarrollado diversas tecnologas que se
enfocan en la utilizacin de la energa
acumulada en la biomasa de desechos, para
ser redirigida a otras formas de energa que
la humanidad pueda utilizar como son: la
metanognesis (CH
4
), el biohidrgeno (H
2
) y
la bioelectricidad (Logan et al., 2006).
Las celdas de combustible microbianas,
conocidas tambin como MFC por sus siglas
en ingls (Microbial Fuel Cell), resultan ser
una opcin prometedora para la generacin
de energa renovable que se pueda emplear
como electricidad (Logan & Regan, 2006).
Avances importantes se han logrado para
incrementar la eficiencia de estos dispositivos
tanto para la generacin de electricidad como
para la generacin de hidrgeno,
emplendolas como celdas de electrlisis
microbianas o MEC por sus siglas en ingls
(Microbial Electrochemical Cell) (Liu et al.,
2005b). Una gran variedad de substratos se
han empleado en el nodo para la
generacin de energa, incluyendo acetato,
celulosa, aguas residuales municipales e
industriales, etc. Se ha mejorado la
tecnologa y funcionamiento de la celda
misma, sin embargo un factor comn y que
tiene gran relevancia, es la formacin de la
biopelcula microbiana en el nodo (Kim et
al., 2006). Se han identificado y caracterizado
el tipo de organismos que conforman los
consorcios bacterianos que participan en la
formacin de la biopelcula y de manera
importante en el aporte de energa (Lovley,
2008). Aunque existen estudios de la
ecologa microbiana de dicha biopelcula, las
relaciones entre los miembros de las
comunidades microbianas y como
63
contribuyen al flujo de electrones del nodo
al ctodo, aun no estn completamente
comprendidas, as como los mecanismos que
favorecen su formacin y los procesos
metablicos que intervienen en su
establecimiento. Los cultivos mixtos se sabe
que generan una mayor energa en
comparacin al empleo de cultivos puros,
esto se debe a las interacciones sinrgicas
que se presentan en el nodo y a la
participacin de cepas con capacidades
metablicas complementarias (Lee et al.,
2003). Reportes recientes describen que
biopelculas constitudas por consorcios
enriquecidos, han generado densidades de
potencia de hasta 6.9 W por m
2
(rea
expuesta del nodo) lo cual lo acerca incluso
a los lmites tericos (Logan, 2009).
En este trabajo hacemos una revisin de
los avances realizados en el campo de la
bioelectricidad empleando MFCs, analizando
los aspectos generales, las limitaciones y los
retos que presentarn en esta rea de
investigacin en el futuro.

ESTRUCTURA BSICA DE UNA MFC
La estructura bsica de una MFC para la
produccin de electricidad se puede observar
en la Fig. 1; consta de dos cmaras una
catdica y una andica separadas por una
membrana de intercambio de protones (MIP)
(Min et al., 2005).

Fig. 1. Esquema de celda de combustible microbiana (MFC) tipo H. Los microorganismos en la cmara
andica oxidan los compuestos orgnicos como parte de su metabolismo y durante este proceso generan
electrones y protones. Los electrones son transferidos al nodo y son transportados a hacia el ctodo a travs
de un circuito externo. Para mantener el balance de cargas, los protones generados en la reaccin
atraviesan una membrana permeable a protones o un puente salino y una vez en la cmara catdica se unen
con el oxgeno, para formar agua (Logan et al., 2006; Cheng et al., 2000a)
64
El mecanismo por el cual son liberados
los electrones al electrodo en las MFCs es
uno de los principales objetivos de estudio
para llegar a entender el funcionamiento de
este tipo de dispositivos y mejorar su
eficiencia. El factor ms importante para que
una MFC genere una corriente de electrones
que pueda ser utilizada es, sin duda alguna,
el microorganismo o microorganismos
utilizados para llevar a cabo el proceso de
degradacin de la materia orgnica a
compuestos como CO
2
y H
2
O y la liberacin
de electrones al sistema. Otro factor es el
tipo de inculo, se pueden emplear diferentes
tipos de inculos en las MFCs. El inculo
puede provenir de lodos activados (Lee et al.,
2003), lodos anaerbicos (Rabaey et al.,
2003), aguas residuales domesticas (Min &
Logan, 2004), aguas residuales industriales
(Prasad et al., 2006) sedimentos marinos
(Bond et al., 2002) o sedimentos acuticos
(Holmes et al., 2004). Aunque los mejores
resultados se han obtenido empleando lodos
activados o anaerbicos (Rabaey et al.,
2003).

nodo
Los materiales con los que se deben
construir los nodos deben ser conductivos,
biocompatibles y qumicamente estables en
la solucin del reactor. nodos metlicos
consistentes de malla de acero inoxidable no
corrosivo pueden ser utilizados. El material
de electrodo ms verstil es el carbn,
disponible como placas de grafito compacto,
barras o grnulos.
Los materiales utilizados ms simples son
las placas y las barras de grafito ya que son
relativamente baratos, fciles de manejar y
tienen un rea de contacto definida. Diversos
tipos de productos de carbn como son
papel, fibra, entre otros han sido utilizados
extensivamente como electrodos. Mayores
reas superficiales pueden ser alcanzadas
usando materiales compactos como carbn
vtreo reticulado, el cual se encuentra
disponible con diferentes tamaos de poro o
usando capas de grnulos de carbn o
esferas. El efecto a largo plazo del
crecimiento de la biopelcula o de las
partculas en el flujo en cualquiera de las
superficies no ha sido debidamente
examinado todava.
Para incrementar el desempeo del
nodo, diferentes estrategias qumicas y
fsicas han sido utilizadas. Materiales
electrocatalticos como son compuestos de
polianilinas han mostrado que mejoran la
generacin de corriente ayudando a la
oxidacin directa de metabolitos microbianos.
Dirigir el flujo de agua a travs del material
del nodo puede utilizarse para incrementar
la potencia. El flujo hacia el nodo ha sido
tambin usado en reactores utilizando
mediadores exgenos. (Sell et al.. 1989)

Ctodo
Debido a su buen desempeo,
ferrocianuro es muy popular como un aceptor
experimental de electrones en MFCs. La
ventaja del ferrocianuro es el bajo
sobrepotencial, y la desventaja de su empleo
es la oxidacin insuficiente por oxgeno, el
cual requiere el catolito para ser
regularmente reemplazado. El desempeo a
largo plazo del sistema puede ser afectado
65
por difusin del ferrocianuro a travs de la
MIP y en la cmara andica.
El oxgeno es el aceptor ms adecuado
de electrones para una MFC debido a su alto
potencial de oxidacin, disponibilidad, bajo
costo, sustentabilidad, y la carencia de
residuos qumicos. La eleccin del material
del ctodo afecta de manera importante el
desempeo, y su variedad de aplicaciones
(Cheng et al., 2006b ) Para incrementar la
velocidad de reduccin de oxgeno, los
catalizadores de platino son usualmente
usados para oxgeno disuelto o ctodos de
difusin de gas. Para bajar el costo de la
MFC, la cantidad de platino puede
mantenerse a 0.1 mgcm
-2
. La estabilidad a
largo plazo del platino necesita ser
investigada todava. Recientemente, metales
nobles han sido propuestos como ctodos
para las MFCs (Logan et al., 2006).

Membrana de intercambio de protones (MIP)
La mayora de los diseos de las MFCs
requieren la separacin de la cmara andica
y la cmara catdica por una membrana de
intercambio de protones. La MIP ms
comnmente utilizada es Nafion (DuPont
Co., USA) aunque existen otras opciones
como Ultrex CMI-7000 que tambin son
adecuadas para MFCs. El mercado para las
MIPs esta en constante crecimiento, y ms
estudios se requieren para evaluar los
efectos de la membrana en el desempeo y
la estabilidad a largo plazo (Logan & Regan,
2006, Logan et al., 2006).

Condiciones de operacin
Hasta este momento, el desempeo de
las MFCs a nivel laboratorio es mucho menor
que el desempeo ideal de estos sistemas.
Puede haber muchas razones posibles. El
desempeo de una MFC es alterado por
muchos factores incluyendo el tipo de
microbios utilizados, el tipo y concentracin
de biomasa utilizada como combustible,
fuerza inica, pH, temperatura, y la
configuracin del reactor. (Liu et al., 2005a)
Los parmetros de operacin pueden ser
regulados para bajar la polarizacin para
poder aumentar el desempeo de una MFC.

pH y electrolito
Sin una solucin amortiguadora en una
MFC, obviamente existir una diferencia de
pH entre la cmara andica y la cmara
catdica, aunque tericamente no habra
cambio de pH cuando la velocidad de
reaccin de protones, electrones y oxgeno
en el ctodo es igual a la velocidad de
produccin de protones en el nodo. La
membrana de intercambio de protones causa
una barrera en el transporte a travs de la
membrana de difusin de protones, y el
transporte de protones a travs de la
membrana es ms lenta que su velocidad de
produccin en el nodo y su velocidad de
consumo en la cmara catdica en la etapa
inicial de la operacin de la MFC, as trae
una diferencia de pH. Sin embargo, la
diferencia de pH incrementa la fuerza motriz
de la difusin de protones de la cmara
andica a la cmara catdica y finalmente
forma un equilibrio dinmico. Algunos de los
protones generados con la biodegradacin
sustratos orgnicos transferidos a la cmara
catdica pueden reaccionar con el oxgeno
66
disuelto mientras algunos protones son
acumulados en la cmara andica cuando
ellos no se transfieren a travs de la
membrana de intercambio de protones o de
puentes salinos rpidamente a la cmara
catdica. Gil et al. (2003), detect una
diferencia de pH de 4.1 despus de 5 horas
de operacin con un pH inicial de 7 sin
utilizar amortiguadores. Con la adicin de de
un amortiguador de fosfatos (pH 7), el
cambio de pH en el nodo y ctodo fue de
menor de 0.5 unidades y la salida de
corriente se incremento alrededor de 1 a 2
veces.
Sin embargo, el proceso microbiano
andico prefiere un pH neutral y las
actividades microbianas disminuyen en un
pH mas alto o mas bajo, por lo que
el empleo de amortiguadores es fundamental
(He et al., 2008).

MECANISMOS DE TRANSFERENCIA DE
ELECTRONES
La transferencia extracelular de electrones
se puede definir como el proceso en el cual
los electrones derivados de la oxidacin de
compuestos orgnicos son transferidos a la
superficie externa de la clula para reducir un
aceptor terminal de electrones extracelular
(Lovley, 2008). Se han planteado diferentes
mecanismos para explicar cmo los
microorganismos liberan los electrones al
electrodo: a) transferencia directa con la
participacin de citocromos, b) transferencia
con ayuda de mediadores externos o
producidos por el mismo organismo y c)
transferencia por medio de los nanocables
bacterianos o pili.

a) Transferencia directa de electrones al
electrodo
Electrgenos
Los electrgenos son microorganismos
que conservan la energa permitiendo el
crecimiento por la oxidacin de compuestos
orgnicos a dixido de carbono y con la
transferencia directa de electrones a los
nodos de las MFC. (Lovley & Kevin, 2008)
Estos microorganismos son conocidos
tambin como anodoflicos. Entre los
microorganismos ms estudiados de esta
clase se encuentran los antes mencionados
Geobacter y Rhodoferax; los cuales poseen
mecanismos de transporte de electrones
internos y no requieren la ayuda de
mediadores para liberar dichos electrones al
nodo. La produccin de electricidad
utilizando microorganismos electrgenos en
MFC tiene algunas ventajas significativas
(Bond & Lovley, 2003). Una de ellas es la
completa oxidacin de la materia orgnica a
dixido de carbono que estos microorga-
nismos hacen posible y que se traduce en
una alta eficiencia coulombica en el proceso
(Lovley & Nevin, 2008). Otra ventaja
utilizando electrgenos es su sustentabilidad
a largo plazo. Se han reportado MFCs que
han sido operadas por ms de 2 aos sin
bajar la produccin de electricidad (Lovley &
Nevin, 2008).
La reaccin de una MFC que se lleva
acabo en el nodo sin mediadores se ha
estudiado principalmente en los Geobactera-
ceae, en este proceso el nodo acta como
aceptor final de electrones de manera similar
a como lo hacen con los xidos minerales
67
slidos que se encuentran en el subsuelo, su
hbitat natural. Los Geobacteraceae son un
grupo de microorganismos capaces de
acoplar la respiracin anaerbica a la
reduccin de metales en el ambiente. Debido
a su metabolismo son capaces de
biorremediar varios metales pesados
incluyendo Uranio(VI), Vanadio(VI)
Cromo(VI); as como biodegradar varios
contaminantes orgnicos como por ejemplo
los hidrocarburos monoaromticos.
Recientemente dicha especie se ha usado
para generar electricidad a partir de
deshechos orgnicos, ya que su metabolismo
nico la hace sobresaliente en este campo
(Lovley, 2008).
Geobacter pertenece a los microorganis-
mos reductores de metales, los cuales
producen energa til biolgicamente en
forma de ATP durante la reduccin de xidos
de metales bajo condiciones anaerobias en
suelos y sedimentos. Su caracterstica
principal es la habilidad para oxidar
compuestos orgnicos como cidos grasos,
alcoholes, compuestos monoaromti-cos por
la va de los cidos tricarboxlicos, mediante
la transferencia de electrones a xidos de
Fe(III) insolubles, sustancias hmicas u
xidos de Mn(IV) (Nevin & Lovley 2002,
Lovley 2008).
La mayora de los estudios relacionados
con la transferencia de electrones se han
hecho utilizando Geobacter sulfurreducens,
ya que su genoma se conoce completamente
y se sabe que es un gran generador de
potencia. La manera en que esta bacteria
transfiere electrones al electrodo, es a travs
de una serie de citocromos tipo c (mas de
100 codificados en su genoma), asociados a
la membrana interna, periplasma y
membrana externa (Methe et al., 2003,
Lovley, 2008).
Rhodoferax ferrireducens, es tambin una
bacteria de especial importancia en la
produccin de bioelectricidad, fue aislada de
sedimentos del subsuelo como un reductor
de Fe(III), oxida azcares como glucosa,
fructosa, sacarosa, lactosa y xilosa a CO
2
con
el 80% de la recuperacin de los electrones
en forma de electricidad. La gran produccin
de energa le es atribuida a la cantidad de
clulas adheridas a la superficie del electrodo
durante largos periodos de tiempo y a su
habilidad para mantenerse activa. Por lo que,
debido a la conversin de varios tipos de
azcares a electricidad y a su capacidad de
mantenimiento sin disminuir su desempeo,
Rhodoferax es un candidato ideal para ser
utilizado en MFCs. (Du et al., 2007,
Chaudhuri & Lovley, 2003; Risso et al.,
2009).

b) Transferencia con ayuda de mediadores
externos o producidos por el mismo
organismo
Un mediador es un compuesto que puede
entrar en la clula, aceptar electrones de
varios acarreadores intracelulares de
electrones, salir de la clula en estado
reducido y entonces donar los electrones al
nodo. Estos mediadores juegan un papel
fundamental en la transferencia de electrones
en aquellos microorganismos que son
incapaces de transferir electrones al nodo
directamente.
68

-Mediadores producidos por el mismo
microorganismo
Los microorganismos que tienen la
capacidad de reducir Fe(III) enfrentan el
problema de cmo tener acceso
efectivamente a un aceptor de electrones que
no puede difundirse a la clula. Las bacterias
del genero Shewanella han resuelto este
problema liberando quinonas solubles que
pueden acarrear electrones de la superficie
celular a xido de Fe(III) aunque ste se
encuentre a una distancia considerable de la
clula. Se ha reportado que Shewanella tiene
la capacidad de transferir electrones a
metales localizados a ms de 50 m de la
superficie de la clula (Nevin & Lovley, 2002).
Las bacterias del gnero Shewanella son
miembros de las Proteobacterias son
microorganismos acuticos con una amplia
distribucin alrededor del mundo: forman un
grupo diverso de bacterias anaerobias
facultativas que se encuentran en ambientes
marinos y de agua dulce (Hau & Gralnick,
2007). Son fisiolgicamente diversos, por lo
que pueden tener varias aplicaciones
biotecnolgicas, como son, la bio-
remediacin de compuestos clorados,
radioactivos y otros contaminantes
ambientales, as como la generacin de
energa.
Los Shewanellae pueden respirar
empleando un diverso grupo de aceptores de
electrones lo que les ha permitido adaptarse
a ambientes extremos y variados. Estos
organismos son fciles de crecer y manejar
en un laboratorio, por lo que muestran un
gran potencial para la biorremediacin de
varios contaminantes ambientales y en las
MFCs para producir electricidad.
Diversos estudios han sugerido que las
clulas de Shewanella tienen la capacidad
para producir y secretar acarreadores
endgenos de electrones para promover la
reduccin de xidos de Fe(III), aunque dichos
compuestos no han sido totalmente
identificados han surgido reportes que
intentan identificarlos. Recientemente se
demostr que este microorganismo produce
flavinas que emplean como mediadores para
la transferencia de electrones fuera de la
clula (Marsili et al., 2008; Von Canstein et
al., 2007).
El mecanismo de transferencia de
electrones hacia la superficie del electrodo,
por esta bacteria, no ha sido elucidado, pero
son de vital importancia los citocromos
localizados en la membrana externa y las
rutas de secrecin tipo II. Sin embargo, se
cree que los nanocables o pili de Shawenella,
puede facilitar la transferencia de electrones
en distancias muy largas. Las aplicaciones
de esta bacteria en los aparatos generadores
de corriente incluyen el tratamiento de aguas
residuales, la conversin de biomasa de
deshecho y el uso como proveedor de
electricidad a sensores ambientales en
cuerpos acuticos como lagos, ros y
ocanos, donde los sedimentos ricos en
materia orgnica proveen de una fuente de
electrones (Hau & Gralnick, 2007).
69
-Mediadores adicionados exgenamente
En el caso de microorganismos que no
son capaces de producir sus propios
mediadores y que son incapaces de transferir
eficientemente los electrones derivados del
metabolismo central afuera de la clula ,
requieren de la adicin de mediadores
exgenos que transporten los electrones al
nodo.
Las propiedades que se buscan en un
compuesto para se utilizado como un buen
mediador son: Un potencial bastante
diferente del potencial del organismo para
facilitar la transferencia de electrones
mientras se mantiene un alto potencial
electroqumico en la celda, un alto coeficiente
de difusin en el electrolito y en la membrana
celular, rpida transferencia de electrones de
el organismo al electrodo, capacidad para
repetidos ciclos redox, no citotoxicidad y
buenos perfiles de absorcin-adsorcin-
resorcin al organismo, electrodo y otras
superficies de la MFC, de forma que
permanezca en la solucin y permanezca
disponible para el proceso. (Bullen et al.,
2006). Ejemplos de compuestos de este tipo
son; rojo neutro, fenazinas, fenotiazinas,
benzilviolgeno, entre otros (Lovley, 2006).
Existen varios problemas y desventajas
en el uso de mediadores para facilitar el
transporte de electrones, entre ellos se
encuentra el hecho de que los compuestos
utilizados suelen ser txicos para los seres
humanos, por lo que se debe evitar utilizar
estos compuestos en los procesos de
produccin de electricidad en lugares que se
exponga el medio ambiente a ellos, como
puede ser en plantas de tratamiento de
aguas residuales, sedimentos acuticos,
entre otros.
Otra desventaja es el corto tiempo que se
mantienen estables estos compuestos, lo
cual, limita el tiempo de vida de la MFC.
Adems, incluso en presencia de mediadores
los microorganismos fermentativos producen
cidos por fermentacin, lo que
eventualmente desestabiliza el sistema, ya
que la mayora de los electrones presentes
inicialmente en el combustible se recuperan
en la fermentacin de estos cidos, en mayor
cantidad que como electricidad, y, por lo
tanto, la eficiencia es baja en estos sistemas
sin importar el uso de los mediadores.

c) Transferencia por medio de los nanocables
bacterianos o pili.
En estudios recientes se ha descubierto la
presencia de nanocables en algunos
microorganismos electriigenos. Estos pili se
han identificado en bacterias como
Geobacter sulfurreducens, Shewanella
oneidensis, una cianobacteria fototrpica
Synechocystis y un microorganismo
fermentador termoflico Pelotomaculum
thermopropionicum (Gorby et al., 2006)
Existen opiniones encontradas con
respecto a la presencia de estas estructuras
en las bacterias que pueden reducir xidos
de Fe(III) o Mn(IV). El crecimiento en Fe (III)
requiere de la presencia de pili
especializados, los cuales son conductores
de electrones y se encuentran localizados a
un costado de la clula. Estos pili son los
encargados de realizar la conexin elctrica
entre la clula y los xidos de Fe(III) y deben
estar en contacto directo con el nodo de la
70
MFC o formando una red entre las clulas
para facilitar la transferencia de electrones a
travs de la biopelcula lo mejor posible, pues
se sabe que Geobacter crece en monocapas
y los pili proveen soporte estructural en la
formacin de dicha biopelcula y son
esenciales en la generacin de corriente
(Lovley, 2006).
Utilizando G. sulfurreducens se realiz un
estudio en el que se evala en presencia de
Fe(III) soluble e insoluble la transferencia de
electrones y el papel que juega la presencia
o ausencia de pili en este proceso. G.
sulfurreducens produce pili durante su
crecimiento en xido de Fe(III) pero no en
Fe(III) soluble, lo que hace suponer que la
produccin de pili es una manera de alcanzar
el Fe(III) no soluble en los sedimentos.
Reguera et al. (2005), evaluaron la
conductividad elctrica a travs de los pili
mediante microscopia de fuerza atmica.
(AFM por sus siglas en ingls). Los
resultados en esos estudios muestran que
los pili de G. sulfurreducens son altamente
conductivos e indican que Geobacter
requiere de estas estructuras para poder
reducir xidos de Fe(III) en el ambiente.
Estos resultados nos llevan a pensar que la
produccin de apndices conductores en
bacterias que reducen xidos metlicos es un
mecanismo de transferencia de electrones de
la clula hacia el aceptor externo de
electrones (Reguera et al., 2005).

CONSORCIOS MICROBIANOS Y
SINTROFIA
La sintrofia se puede definir como la
asociacin o dependencia de 2 o ms tipos
diferentes de organismos que combinan sus
capacidades metablicas para catabolizar un
sustrato que no puede ser catabolizado por
alguno de estos organismos de manera
independiente. (Rittmann et al., 2008, Torres
et al., 2008; Torres et al., 2007).Este
concepto es aplicable para las MFC ya que
para dar el siguiente paso y disearlas para
la produccin a escala industrial, se debe
pensar en utilizar sustratos complejos, los
cuales poseen diversos nutrientes, y los
microorganismos utilizados deben ser
capaces de procesarlos o por lo menos no
verse afectados por su presencia. Un buen
ejemplo de esto es la produccin de metano
e hidrgeno o electricidad por sintrofia en
sistemas de bioenerga microbianos.
La materia orgnica compleja debe ser
hidrolizada y fermentada a productos simples
que pueden ser convertidos directamente a
los productos finales deseados. Para producir
CH
4
, los metanognicos usan solo acetato o
H
2
y CO
2
y todos los electrones deben ser
transportados hacia H
2
y acetato. Para
generacin de biohidrgeno, el producto final
de la fermentacin debe ser H
2
, lo cual
significa que otros productos de la
fermentacin como acetato, propionato,
etanol y butirato, son consumidores
indeseables de electrones. La sntesis de
estos productos reduce la produccin global
de H
2
. As mismo, la oxidacin de H
2
para
formar CH
4
debe ser suprimida cuando el
objetivo principal es la produccin de
hidrgeno. En un proceso de este tipo, la
acumulacin excesiva de hidrgeno puede
detener termodinmicamente el proceso de
fermentacin que lo produce, y por lo tanto
71
una sintrofia balanceada entre bacterias que
producen por fermentacin hidrgeno y
microorganismos metanognicos que oxidan
el hidrgeno, es la clave para llevar acabo la
metanognesis de manera efectiva. En
procesos de produccin de biohidrgeno, los
metanognicos deben ser suprimidos, lo cual
significa que el H
2
debe ser recolectado
rpidamente para evitar su acumulacin. En
una MFC, la acumulacin de hidrgeno
puede llevar a dos resultados indeseables:
Disminucin de la velocidad de fermentacin
o desviacin del flujo de electrones hacia CH
4

(Freguia et al., 2008).

APLICACIONES DE LAS MFC
Las MFC se encuentran en un proceso de
investigacin y desarrollo. Los reactores ms
grandes que se han reportado a la fecha,
tienen un volumen interno del nodo de
0.388 litros (Liu et al., 2004b). Sin embargo,
la intensa investigacin que se ha venido
realizando por diversos grupos de
investigacin a nivel mundial, ha logrado
grandes avances en el desarrollo de MFC y
ha encontrado usos alternativos para esta
tecnologa que ya pueden aplicarse para
solucionar problemas de gran importancia a
nivel mundial. A continuacin
mencionaremos algunas de las aplicaciones
alternativas ms importantes de las MFC.

Produccin de hidrgeno
Las MFCs pueden ser modificadas de
manera que se utilicen para la produccin de
H
2
, por medio del proceso de electrlisis,esta
modificacin se puede realizar mediante la
remocin del oxgeno de la cmara catdica
y aadiendo un pequeo voltaje. Bajo
condiciones normales de operacin, los
protones liberados por la reaccin andica
migran al ctodo para combinarse con el
oxgeno y formar agua. La generacin de
hidrgeno a partir de los electrones y
protones producidos por el metabolismo de
microorganismos en una MFC es
termodinmicamente desfavorable. Por ello
la aplicacin de un potencial externo para
incrementar el potencial del ctodo en un
circuito de MFC permite superar la barrera
termodinmica. As, los protones y electrones
producidos por la reaccin andica se
combinan en el ctodo para formar hidrgeno
(esto se logra en ausencia de oxgeno). El
potencial externo requerido terico para una
MFC es 110mV, el cual es mucho menor que
los 1210mV requeridos para llevar a cabo la
electrlisis directa de agua a pH neutro, esto
se debe a que algo de energa proviene del
proceso de oxidacin de la biomasa en la
cmara andica. (Du et al., 2007)
Las MFCs pueden potencialmente
producir alrededor de 8-9 mol H
2
/mol glucosa
comparado con el tpico 4 mol H
2
/mol glucosa
alcanzado en fermentaciones convencio-
nales. (Logan & Reagan, 2006, Liu et al.,
2005b) Entre las ventajas que presenta este
sistema para la produccin de hidrgeno se
encuentra la mejora en eficiencia debida a la
ausencia de oxgeno en la cmara catdica y
que el hidrgeno producido puede ser
acumulado y almacenado para su uso
posterior.

Tratamiento de aguas residuales

72
Recientemente, el tratamiento
bioelectroqumico de aguas residuales ha
emergido como una tecnologa
potencialmente interesante para la
produccin de energa de aguas residuales.
El tratamiento bioelectroqumico de aguas
residuales es basado en el uso de
microorganismos electroqumicamente acti-
vos. Los microorganismos electroqumica-
mente activos son capaces de transferir
electrones extracelularmente y pueden usar
este mecanismo para transferir electrones a
un electrodo mientras oxidan la materia
orgnica presente en las aguas residuales.
Los microorganismos funcionan como un
catalizador para la oxidacin electroqumica
de la materia orgnica, y el electrodo es por
lo tanto descrito como un binodo
microbiano. El proceso de tratamiento
bioelectroqumico de aguas residuales puede
ser modificado por una conexin elctrica del
binodo a un electrodo auxiliar (ctodo) que
desempear una reaccin de reduccin.
Como resultado de esta conexin elctrica
entre el nodo y el ctodo, las reacciones de
los electrodos pueden ocurrir y los electrones
pueden fluir del nodo al ctodo produciendo
as una corriente elctrica (Rozendal et al.,
2008).
Las aguas residuales provenientes de la
industria, la agricultura y de las casas
contienen materia orgnica disuelta que
requiere ser removida antes de ser
descargada al medio ambiente. Actualmente,
existen procesos para remover los
contaminantes orgnicos presentes en esta
agua de deshecho, la mayora de estos
procesos son tratamientos aerbicos, los
cuales consumen grandes cantidades de
energa en el proceso de aeracin. Sin
embargo, el tratamiento de aguas residuales
ha empezado a ser reconocido como una
fuente renovable para la produccin de
electricidad lo cual podra emplearse para el
mismo proceso de tratamiento de efluentes.
(Aelterman et al., 2006, Logan & Reagan,
2006).

Biorremediacin
Existe tambin la posibilidad de modificar
una MFC para utilizarla en procesos de
biorremediacin de suelos y aguas
subterrneas. Aunque hay quienes
argumentan que al ser modificadas ya no son
MFC reales, ya que no producen electricidad,
el principio de operacin es similar y se usa
la tecnologa de las MFCs para cumplir estos
objetivos. Las bacterias no son solo capaces
de donar electrones a un electrodo, tambin
pueden aceptar electrones del mismo. Al
modificar una MFC convencional, esta no se
usa para producir electricidad, en lugar de
esto, se aplica una corriente al sistema para
llevar a cabo la reaccin deseada y as
remover o degradar, por ejemplo U(VI)
soluble a U(IV) insoluble. Es por esto que se
ha propuesto su aplicacin en sitios
contaminados por metales pesados como
U(VI). Una estrategia simple para prevenir
posibles contaminaciones con uranio es
adicionar un donador orgnico de electrones,
como acetato a las aguas subterrneas. El
acetato estimula el crecimiento de especies
de Geobacter, las cuales obtienen la mayora
de su energa con la oxidacin del acetato y
la reduccin de los xidos de Fe(III), los
73
cuales son abundantes en la mayora del
subsuelo. Como las aguas subterrneas que
contienen U(VI) entran a una zona de adicin
de acetato, las especies de Geobacter
tambin transfieren electrones de U(VI)
soluble reducindolo a U(IV) el cual es
altamente insoluble. Esto previene la futura
migracin de uranio, ya que queda
secuestrado en el suelo. As, cuando un
electrodo sirve como donador de electrones
al U(IV) que es producido, precipita en la
superficie del electrodo. El uso de esta
tecnologa para este fin ayuda con los
problemas de contaminacin ambiental, ya
que no solo previene la movilidad del uranio,
si no tambin, se puede extraer con
bicarbonato cuando se retiran los electrodos
de los lugares en los que operaron y
posteriormente pueden reutilizarse dichos
electrodos (Gregory & Lovley, 2005; Gregory,
et al., 2004).

Biosensores
Datos del medio ambiente pueden ser
tiles para entender y modelar respuestas de
los ecosistemas, aqu nace una aplicacin
importante para las MFCs, las cuales pueden
emplearse para monitorear ambientes de
tres maneras diferentes como se explica a
continuacin.
Los sistemas distribuidos en ambientes
naturales requieren energa para su
operacin. Las MFCs pueden ser usadas
como dispositivos que proporcionan dicha
energa, particularmente en ros y aguas
profundas marinas donde es difcil acceder
de manera continua al sistema para
remplazar bateras. Celdas combustibles en
sedimentos han sido desarrolladas para
monitorear sistemas ambientales como son
arroyos, ros y ocanos. (Logan & Reagan,
2006)
Otra aplicacin importante en el campo de
los biosensores es el monitoreo de
compuestos txicos. Las bacterias muestran
una baja actividad metablica cuando son
inhibidas por compuestos txicos. Esta
inhibicin causa una baja transferencia de
electrones hacia el electrodo. De esta forma,
un biosensor puede ser construido,
inmovilizando una bacteria en el electrodo de
una MFC y protegindola detrs de una
membrana. Si un compuesto txico se
difunde a travs de la membrana, este puede
ser medido por el cambio en el potencial del
sensor. Dichos sensores pueden ser de
utilidad como indicadores de sustancias
txicas en ros o en la entrada de plantas de
tratamiento de aguas. (Meyer et al., 2002,
Chang et al., 2004, Rabaey et al., 2005)
Aparte de las aplicaciones antes
mencionadas, otra aplicacin potencial de la
tecnologa de las MFCs es usarlas como un
sensor para anlisis de poblaciones y un
control de procesos in situ.

PERSPECTIVAS
Las celdas microbianas de combustible
son una prometedora tecnologa para la
generacin de energa en un corto plazo. Sin
embargo, anlisis de la literatura muestran
que el desempeo de las MFC esta limitado
por diversos factores, que evitan la
comercializacin de esta tecnologa y que la
clasifican como una tecnologa en desarrollo.
Los problemas que actualmente restringen el
74
desempeo de las MFC son diversos, entre
ellos se encuentra la limitacin existente en
su resistencia interna derivada de la
transferencia de protones y su pobre cintica
de reduccin de oxigeno al ctodo, el
escalamiento del proceso que no ha
permitido disear MFC a gran escala que nos
permitan actualmente generar las cantidades
necesarias de electricidad, entre otras
limitantes que se han reportado en diversos
estudios. Lovley propone que el flujo de
electrones en una MFC puede incrementarse
hasta en 4 rdenes de magnitud si Geobacter
transportara electrones al nodo a la misma
velocidad que lo hace hacia su aceptor
natural de electrones (Holzman et al. 2005).
Utilizando mutagnesis e incluso tecnologas
de DNA recombinante se pudieran crear
algunas cepas de microorganismos que
cumplan con todas las funciones requeridas
de manera optima para el desarrollo de
bioelectricidad en MFC. En conclusin, la
tecnologa de las MFC esta todava en
proceso de desarrollo para la produccin de
electricidad de manera eficiente y a gran
escala. Sin embargo, diversas aplicaciones
como son biorremediacin, tratamiento de
aguas residuales, biosensores ya estn
disponibles y pueden aplicarse para resolver
algunos problemas presentes en la
actualidad.
La produccin de bioelectricidad junto a
otras tecnologas de produccin de energa
limpia de fuentes renovables de segunda y
tercera generacin se perfila como una gran
alternativa para el proceso de transicin de
energa que se debe iniciar lo ms pronto
posible para evitar los efectos adversos que
la crisis energtica y el calentamiento global
han y seguirn desatando.

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78
Etanol Carburante

Ofelia Edith Carren Rodrguez, Andrea Sabido Ramos Lpez, Sara Centeno
Leija, Laura Julieta Leal Reyes, Alfredo Martnez Jimnez*, Marco Tulio Fernndez
Sandoval

Postal 510-3 Cuernavaca, Mor, 62250
alfredo@ibt.unam.mx; marcot@ibt.unam.mx

RESUMEN
Mxico se encuentra ante una eventual crisis energtica debido a la acelerada produccin y
reduccin en las reservas probadas del petrleo. Para solventar este problema es necesario
desarrollar tecnologas alternativas, que de manera progresiva vayan sustituyendo la variedad de
combustibles derivados del crudo. En el caso de los combustibles para el transporte, el etanol
anhidro representa una opcin viable para oxigenar y complementar el uso de la gasolina como
carburante. Brasil y Estados Unidos son los principales productores de etanol carburante
(bioetanol) de primera generacin, esto es utilizando como fuente de carbono sacarosa (caa de
azcar) y glucosa (maz), respectivamente. Mxico por otro lado, no es autosuficiente en ninguna
de estas dos materias primas, ya que el empleo de las mismas, representa una competencia con el
uso como alimentos y con la reducida superficie cultivable en Mxico. La segunda generacin de
etanol plantea el uso de lignocelulosa para su produccin, la biotecnologa est realizando grandes
avances para poner a punto estas tecnologas. En este trabajo se revisa, de manera general, las
propiedades y el estado del arte de produccin de etanol carburante de primera generacin, y en
una segunda parte se describen los avances que existen en los aspectos biotecnolgicos y de
ingeniera de vas metablicas para la produccin microbiolgica de etanol de segunda generacin.
Palabras clave: Etanol, biocombustibles, Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae

ABSTRACT
Due to accelerated declination in production and reduction in oil proved reserves, in the near
future Mexico can have an energy crisis. To gradually replace the variety of fuels derived from
crude oil, alternative technologies must be developed to produce renewable energy. In the case of
transport fuels, anhydrous ethanol is a viable option to oxygenate and complement the use of
gasoline. Brazil and the U.S. are the main producers of first generation fuel ethanol (bioethanol),
that uses sucrose (cane sugar) and glucose (corn) as carbon sources, respectively. However,
Mexico is not self sufficient in the production of these two commodities for food and feed purposes.
The second-generation technologies uses lignocellulose as a raw material for the production of fuel
ethanol, and biotechnology is a key disciple that is helping to develop these technologies. In this
paper, a general overview about properties and the state of the art in the production of first-
79
generation fuel ethanol is presented. In a second part, the advances in biotechnology and metabolic
pathway engineering are described for microbiological production of second-generation ethanol.
Key words: Ethanol, biofuels, Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae

PANORAMA ENERGTICO ACTUAL EN
MXICO
El desarrollo tecnolgico ha ido de la
mano con el suministro de energa a travs
de la historia de la humanidad. En la Fig. 1 se
muestra la distribucin porcentual de energa
que diferentes recursos o tecnologas
suministran en el planeta. Desde los inicios
de la era industrial, la principal fuente de
energa mundial ha sido el petrleo; sin
embargo, en los ltimos aos ha existido un
uso

Fig. 1. Fuentes primarias de energa a nivel mundial (Cala, 2007).

desenfrenado de los recursos energticos,
por lo cual se pronostica escasez y aumento
en sus precios para un futuro cercano. En la
actualidad este energtico abastece el 40%
de la demanda mundial (ver Fig. 1). En el
2005 el consumo se ubic en 77,237 millones
de barriles de petrleo crudo, equivalentes a
211 millones diarios de barriles. Estados
Unidos, Canad y Mxico representan el 5%
de las reservas probadas de petrleo a nivel
mundial
(www.un.org/esa/population/publications), y
en particular para Mxico, sin aumentar su
consumo diario, el horizonte previsto para el
agotamiento de las reservas probadas no
rebasa los nueve aos. Resulta entonces
obvio que la oferta de energa requiere de
una transicin desde su actual dependencia
de los hidrocarburos hacia fuentes de
energa alternativas y renovables. Esta
transicin debe realizarse de forma gradual y
ordenada, logrando el aprovechamiento de
diferentes fuentes de energa, prestando
particular atencin a fuentes renovables de
energa como la: elica, hidrulica,
geotrmica, maremotriz, solar y la obtenida a
partir del biomasa. A diferencia de la mayora
de las energas renovables, con las cuales se
obtiene principalmente energa elctrica o
calor; por medio del uso de biomasa se
80
pueden obtener combustibles slidos,
gaseosos y lquidos, en los dos ltimos casos
haciendo uso de procesos biotecnolgicos
para obtenerlos.
En Mxico, de acuerdo con la Comisin
Federal de Electricidad y la Secretara de
Energa, dos tercios de la energa elctrica
que se consume se produce en
termoelctricas a partir de combustibles
fsiles derivados del petrleo: diesel,
combustleo, aceites pesados y gas natural
(Martnez et al., 2006). El otro tercio lo
produce en plantas hidroelctricas,
carboelctricas, geotrmicas, elicas y
nucleares.
En trminos de volumen 50 por ciento del
petrleo extrado en Mxico se exporta a los
Estados Unidos (Martnez et al., 2006), el 25
por ciento se emplea para producir
combustleo y diesel, el 14 por ciento para
producir gasolina, el 2 por ciento para
obtener turbosina y 9 por ciento para
petrolferos y petroqumicos. Sin embargo
PEMEX debido a acuerdos comerciales
exporta e importa gasolina, resultando en un
balance del 40% de importacin en el 2008.
Otro aspecto importante a considerar
respecto a la energa en Mxico es que
prcticamente 100% de los medios de
transporte pblico y particular emplean
directamente derivados de combustibles
fsiles.
En especial para el sistema de transporte
y no obstante el amplio desarrollo tecnolgico
actual, no existen muchas alternativas
disponibles para sustituir la gasolina y el gas
natural como formas porttiles y
concentradas de energa para automotores.
De las opciones posibles destacan el
almacenamiento de energa solar y elctrica
en bateras, la generacin de energa
elctrica mediante celdas de combustible de
hidrgeno y la combustin de metano,
metanol, biodiesel o etanol producido
mediante tecnologas biolgicas. En cuanto a
la energa solar y elctrica en bateras su
desventaja radica en que los mdulos de
almacenamiento todava son difciles de
implementar a escala comercial por sus
costos y tecnologa empleada. Los
combustibles lquidos, en particular el etanol
producido mediante procesos
biotecnolgicos, son una opcin ms viable
para Mxico.

IMPLICACIONES AMBIENTALES DEL USO
DE COMBUSTIBLES
El uso del petrleo crudo y sus productos
(combustibles) han modificado de manera
importante el medio ambiente. Como
principal evidencia de la influencia humana,
se encuentra el aumento en las
concentraciones atmosfricas de gases de
efecto invernadero (GEI); tales como el
dixido de carbono, metano y xidos de
nitrgeno, los cuales contribuyen al cambio
climtico actual.
Para contender con el problema de
contaminacin generado por los
combustibles fsiles, afrontar la dependencia
energtica que representa el petrleo y su
alza de precio se ha propuesto el uso de
biocombustibles como el bioetanol (Ingram et
al., 1999). Las tecnologas biotecnolgicas
son favorables y sustentables ya que se
encuentran basadas en la conversin de
81
material biolgico renovable por medio de
microorganismos o enzimas, abatiendo los
problemas de contaminacin originados por
los combustibles fsiles. En comparacin con
los combustibles derivados del petrleo,
mediante el empleo de combustibles
generados por procesos biotecnolgicos, no
se incrementa la concentracin neta de CO
2

en la atmsfera, sino que ste nicamente se
recicla, integrando la actividad industrial al
ciclo de carbono en nuestro planeta. Como
resultado el uso de bioetanol, obtenido por
medio de tecnologas biotecnolgicas,
permite disminuir las emisiones globales de
gases de efecto invernadero y de otros gases
contaminantes.
PRODUCCIN DE ETANOL EN EL MUNDO
Y MXICO
En la ltima dcada el inters por los
biocombustibles ha crecido de manera
significativa en todo el mundo. Brasil fue
pionero en desarrollar estas fuentes
alternativas de energa desde el ao 1975
(Wheals et al., 1999), las cuales despus
fueron retomadas por otros pases europeos
y ms intensamente por Estados Unidos.
Brasil y Estados Unidos actualmente son
los dos pases que producen la mayor
cantidad de etanol como biocombustible, con
tecnologas consolidadas a partir de caa de
azcar (sacarosa) y maz (glucosa),
respectivamente (Wheals et al., 1999). Para
esto se utiliza a la levadura Saccharomyces
cerevisiae para llevar a cabo el proceso de
fermentacin y cultivos alimentados o
continuos a escalas mayores de cien metros
cbicos de fermentacin (Wheals et al., 1999;
Mielenz, 2001; Vasconcelos et al., 2004; Xu
et al., 2005).
Bajo la actual poltica de estmulo a la
produccin de etanol que el gobierno de
Estados Unidos est llevando acabo, la
produccin del biocombustible en este pas
alcanz los 9 billones de galones en 2008
(datos del departamento de agricultura de los
EUA). Como resultado de este impulso en la
oferta de etanol, se ha incrementado la
superficie cultivada con maz que se destina
a la produccin de este biocombustible,
desplazando el rea cultivable de frijol de
soya, y adems ocasionando el alza en el
precio del maz en el mercado internacional.
Desde hace ms de cuatro mil aos el
etanol es producido por el hombre a travs
de procesos de fermentacin utilizando
principalmente levaduras. En Mxico es
usado principalmente en bebidas y en menor
proporcin como solvente y material de
curacin; su produccin est basada en la
fermentacin de azcares provenientes de
melazas, de ingenios azucareros, de
azcares obtenidos del agave y de granos en
general. Sin embargo, el uso de etanol
producido por estas material primas, utilizado
para la produccin de bebidas alcohlicas, no
puede canalizarse hacia la generacin de
etanol carburante debido a la limitada
cantidad de etanol que se produce.
La capacidad de produccin de las
destileras mexicanas es de
aproximadamente 346,000 litros/da; con
rendimientos entre 230 y 250 litros/tonelada
de melaza procesada. Los Ingenios La Gloria
y San Nicols (ubicados en Veracruz)
cuentan con destileras con la capacidad
82
para producir etanol anhidro, sta asciende a
115,000 litros/da. La produccin de los
efluentes de la destilacin, denominados
vinazas, es superior actualmente a 750
millones de litros, cuyo destino principal es la
ferti-irrigacin de los caaverales aledaos a
los ingenios dada la gran cantidad de materia
orgnica y como fuente de potasio para el
cultivo de la gramnea, subsecuentemente.
No existen reportes del empleo del jugo de
caa directo como materia prima en las
destileras de nuestro pas.
Los excedentes de la industria azucarera
nacional ascienden en promedio a 500 mil
toneladas anuales (aunque durante el 2009
no hubo excedentes). El mercado nacional es
aproximadamente de cien millones de litros
diarios de gasolina. Considerando los
rendimiento tericos de conversin y la
eficiencia de fermentacin y recuperacin de
etanol, a partir de los excedentes de
sacarosa nicamente se puede obtener el
equivalente al 0.8 por ciento del volumen de
gasolina (0.8 millones de litros por da), por lo
tanto esta alternativa no llegara a solventar
el consumo equivalente de oxigenante para
la gasolina, ya que se sabe que la
caracterstica oxgenante del MTBE (metil
terbutil ter), el cual se importa en parte en
Mxico, puede ser sustituida agregando 3%
en volumen de etanol a la gasolina (Schifter
et al., 2001); aunado a que el precio de
produccin de este etanol sera mayor que el
de venta actual de la gasolina (Martnez et
al., 2006).
Es de vital importancia reconocer que la
superficie agrcola actual del pas es
insuficiente para producir materias primas
(tales como el maz o la caa de azcar) para
la elaboracin de biocombustibles que
sustituyan por completo a los hidrocarburos y
simultneamente satisfagan la demanda
alimenticia de la poblacin.
Segn las Secretaras de Agricultura,
Ganadera, Desarrollo Rural, Pesca y
Alimentacin (SAGARPA), y de Energa
(SENER) existe una oportunidad importante
para que Mxico emprenda la produccin de
etanol a gran escala, pero antes deben
superarse varios retos polticos, econmicos,
de seguridad alimentaria y de desarrollo de
tecnologa. Sin embargo, la produccin de
etanol a partir caa de azcar o diversos
granos con las tecnologas maduras
existentes no es factible en Mxico, debido a
la demanda de estos productos para
consumo humano (Martnez et al., 2006), y a
que en Mxico no existe una tecnologa
madura de produccin de bioetanol como
combustible carburante, a pesar de que
Mxico ocupa el sptimo lugar entre los
pases productores de azcar en el mundo.
La agroindustria de la caa de azcar es
una de las ms antiguas en Mxico, y su
cultivo ocupa alrededor de 658 mil hectreas
que se procesan en 59 ingenios distribuidos
en 217 municipios de 15 estados de la
Repblica. A pesar de que su valor en el
Producto Interno Bruto se ha reducido, de
esta actividad dependen ms de 3 millones
de personas, genera miles de empleos
directos e indirectos y es el sustento de casi
6 mil familias por ingenio. Por ello, esta
industria se considera de inters pblico y
detonadora del desarrollo regional. Los 22
ingenios que se localizan en el estado de
83
Veracruz producen ms del 40% del total
nacional de azcar, para lo que se utilizan
alrededor de 240 mil hectreas.
Por otro lado, el precio de la caa de
azcar en Mxico es elevado (cerca de 38
dlares americanos por tonelada), cifra que
comparada, por ejemplo con pases de
Centro y Sudamrica, es prcticamente del
triple. Esto desde luego, est ntimamente
relacionado con el costo de produccin,
debido a factores tales como: el minifundio
(<4.5 Ha/agricultor); agroinsumos; agua y
energa; as como a las fluctuaciones del
precio de las melazas, que inhiben
frecuentemente la produccin de alcohol. A la
Agro Industria de la Caa de Azcar en
Mxico, se le ha denominado sector en crisis
permanente, por la recurrencia de los
problemas que la aquejan; no obstante, la
importancia que en lo econmico, lo poltico y
social tiene, obliga a los involucrados a la
bsqueda de formulas que ayuden a su
sostenimiento. Por todo lo anterior, se puede
concluir que la viabilidad econmica de la
produccin de etanol anhidro en nuestro pas,
depende de varios aspectos a considerar
como el costo de la materia prima a emplear,
la autosuficiencia energtica, la economa de
escala (mayor tamao de las destileras), la
incorporacin de la cogeneracin, la
introduccin de la biotecnologa para mejorar
los procesos de fermentacin y los subsidios
a la agricultura (produccin de caa
destinada para etanol y/o exportacin de
azcar al mercado mundial).
Basados en los hechos citados en los
prrafos anteriores, la lignocelulosa, que en
Mxico pueden ser los residuos
agroindustriales, como el bagazo de caa,
residuos derivados del maz, arroz, sorgo,
trigo, entre otros, as como bagazos y hojas
de agaves, pastos de crecimiento rpido, e
incluso lignocelulosa proveniente de zonas
semiridas, parecen ser una buena
alternativa para la produccin de etanol;
desde el punto de vista econmico, de
abundancia y de desarrollo rural. A manera
de ejemplo, la industria azucarera obtiene
como co-producto alrededor de 14.1 millones
de toneladas de bagazo de caa por zafra,
los cuales estn concentrados en los 59
ingenios del pas. Este bagazo de caa, con
tecnologas y procesos biotecnolgicos de
punta, pueden ser convertidos en 7.05
millones de litros de etanol por da, esto es
aproximadamente el 7% en volumen de la
gasolina consumida por da. Esto es, si el
43% del bagazo de caa se convierte en
etanol se puede oxigenar toda la gasolina
que se consume en el pas con un 3% de
etanol, (Martnez et al., 2006), el 47%
restante del bagazo podra seguir usndose
en los ingenios como combustible, pero se
requerira una reconversin en los ingenios
para usar calderas ms eficientes, a base de
bagazo y no usar las actuales que tienen
ms de cincuenta aos de vida, para
satisfacer sus necesidades energticas.

VENTAJAS Y DESVENTAJAS DEL
ETANOL COMO CARBURANTE
El etanol a presin y temperatura
ambiente es lquido, incoloro, inflamable,
soluble en agua, de tal manera que es
fcilmente almacenado y transportado. No
obstante, es un lquido higroscpico y forma
84
un azetropo con el agua, dando lugar a un
producto que tiene el 96% v/v de etanol en
agua, l cual no debe ser usado en mezclas
gasolina-etanol debido a que puede ocurrir
separacin de fases. Por otro lado, el etanol
anhidro (<0.4% v/v de humedad) se utiliza
para la oxigenacin de gasolinas y para
aumentar el octanaje de las mismas. En
comparacin con las gasolinas, el contenido
energtico del etanol es aproximadamente de
un tercio menor con respecto a la gasolina o
diesel, sin embargo, su calor de vaporizacin
es casi tres veces mayor y su nmero de
octanos tambin es superior. Los motores de
combustin interna que utilizan gasolina
pueden emplear como energtico mezclas de
sta conteniendo hasta 20% de etanol. El
desarrollo tecnolgico en Brasil a permitido la
comercializacin de automviles que pueden
emplear mezclas de etanol hasta del 95% en
gasolina, y desde el 2003 se comercializan
los vehculos denominados Flex-Fuel (de
combustible flexible), los cuales tienen un
sistema modificado de inyeccin de
combustible que permite llenar el tanque de
combustible con gasolina oxigenada con
MTBE, cualquier mezcla de gasolina-etanol
anhidro o bien etanol anhidro puro.
En relacin a la emisin de gases, el
Instituto Mexicano del Petrleo (IMP) realiz
una investigacin probando mezclas en
relacin de 3%, 6% y 10% de etanol anhidro
con gasolina (Schifter et al., 2001). Las
pruebas de emisiones se realizaron en 12
motores, representativos del parque vehicular
que se utiliza en la Zona Metropolitana de la
Ciudad de Mxico a 2,200 m.s.n.m. (con y sin
convertidor cataltico). Los resultados
claramente muestran que hay una reduccin
del 33% en las emisiones de monxido de
carbono, 10% en hidrocarburos totales, 15%
en benceno, 15% en 1,3, butanedieno, una
ligera disminucin de xidos de azufre, pero
un incremento en un 5% para las emisiones
de xidos de nitrgeno. No debe descuidarse
de modo alguno el impacto del etanol sobre
algunos elastmeros y juntas del motor;
situacin que ya fue superada por la industria
de automotores brasilea.

ETANOL A PARTIR DE LIGNOCELULOSA
Procesamiento de lignocelulosa
Como se cit antes, la produccin de
etanol a partir de residuos agroindustriales
(lignocelulsicos) no atenta contra cultivos
que son utilizados principalmente para
consumo humano. La lignocelulosa es un
polmero natural ms abundante en el
planeta, representando cerca del 50% de la
biomasa en la tierra y se encuentra en
residuos agrcolas, industriales, forestales,
municipales, pastos de crecimiento rpido,
material vegetal del mar, y biomasa
proveniente de zonas semiridas. La
lignocelulosa est constituida de tres
principales fracciones: celulosa (40-50%),
compuesta de molculas de celulosa;
hemicelulosa (25-35%), un heteropolmero
ramificado que contiene hexosas (15%),
pentosas (85%), cidos urnicos y
generalmente esta acetilada (Gray et al.,
2006); y lignina (15-20%), la cual es un
polmero de carcter fenlico (Zaldivar et al.,
2001) (Fig. 2).

85

Fig. 2. Composicin de la lignocelulosa

La conversin de las materias primas a
etanol involucra: el pretratamiento
(procesamiento e hidrlisis de la
lignocelulosa), detoxificacin de la
hemicelulosa, sacarificacin enzimtica de la
celulosa, fermentacin y recuperacin del
etanol [destilacin y deshidratacin (Fig. 3)].
Cualquier biomasa lignocelulsica en su
forma nativa, es resistente a la sacarificacin
enzimtica, por lo que estos residuos
necesitan ser pretratados para facilitar la
depolimerizacin de la celulosa e hidrolizar la
hemicelulosa (Saha, 2004). As pues, el
objetivo del procesamiento consiste, por un
lado, en incrementar el rea expuesta de la
materia prima, permitiendo con ello una
mayor accesibilidad de las enzimas que
hidrolizan la celulosa (Galbe & Zacchi, 2002)
y por otro generar jarabes de azcares ricos
en pentosas y hexosas.

Fig. 3. Esquema del proceso de produccin de etanol carburante a partir de lignocelulosa.
86
Hidrlisis cida
Aunque existen otros mtodos, el
procesamiento con cido diluido a altas
temperaturas se ha convertido en una
operacin comn para el pretratamiento de
muchos materiales lignocelulsicos, por su
relativa facilidad para realizarlo y por su bajo
costo. Como se cit, este proceso permite la
hidrlisis de la hemicelulosa en pentosas y
hexosas, remueve parte de la lignina, y hace
ms accesible la estructura de la celulosa, a
tal punto que una fraccin pueda ser
convertida a glucosa enzimticamente (Saha,
2008). El primer paso en la hidrlisis con
cidos diluidos, es mezclar una proporcin de
1-2 % de cido sulfrico con la biomasa para
que la hemicelulosa se hidrolice a
temperaturas mayores a 130C (Sun et al.,
2002). Con este mtodo se obtienen jarabes
de hemicelulosa que contienen pentosas
(xilosa y arabinosa) y hexosas
(principalmente glucosa y manosa), adems
de presentar una concentracin de 310 g L
-1
de cido actico, pequeas concentraciones
de furanos (furfural e hidroximetil-furfural) y
fenlicos derivados de la hidrlisis parcial de
la lignina (Martnez et al., 2001). Los furanos,
fenlicos y el actico inhiben el crecimiento
de los microorganismos y tienen un efecto
sinrgico de toxicidad, por tanto es necesario
detoxificar los hidrolizados para mejorar la
fermentabilidad de estos jarabes (Fig. 3).
Para llevar a cabo la detoxificacin de los
hidrolizados, la adicin de Ca(OH)
2
es un
mtodo de los ms efectivos y menos
costosos, este mtodo es conocido
generalmente como overliming
(alcalinizacin). La metodologa consiste en
adicionar el hidrxido hasta llevar a un pH
aproximado de 10 a temperatura ambiente
60C, con la finalidad de reducir las
concentraciones de furfural,
hidroximetilfurfural y compuestos fenlicos y
permitir la formacin de una sal insoluble en
funcin del tipo de cido utilizado, adems
reduce de esta forma la concentracin de
sales solubles durante la fermentacin
(Martnez et. al., 2001).

Hidrlisis enzimtica
Por otro lado, la sacarificacin de la
celulosa (Fig. 3) se lleva a cabo
enzimticamente mediante celulasas. Las
enzimas provenientes de hongos, son
consideradas como una de las mejores
alternativas para la hidrlisis de fuentes
lignocelulsicas, para lo cual se requiere de
la accin combinada de diferentes tipos de
actividades: 1) endoglucanasas, las cuales
cortan internamente enlaces - 1, 4 de
glucosa; 2) celobiohidrolasas, que cortan en
los extremos de las molculas de celulosa
generando disacridos de glucosa
(celobiosa), y 3) - glucosidasas, las cuales
hidrolizan celobiosa y productos de cadena
corta en monmeros de glucosa (Ingram et
al., 1998). Debido a que las celulasas son
inhibidas por su producto (glucosa, celobiosa,
celotriosa, etc.), adems de tener una baja
actividad especfica, baja tasa de reaccin y
un alto costo, este procesamiento presenta
limitantes para aplicarse a escala comercial.
Una alternativa para mitigar la inhibicin por
producto es mediante la sacarificacin y
fermentacin simultnea (SSF por sus siglas
en ingls), en la cual el microorganismo
87
convierte los azcares en etanol tan pronto
como stos son liberados por accin
enzimtica en un mismo reactor (Saha,
2008). No obstante, los procesos de SSF
requieren que las condiciones del cultivo y
las de la actividad enzimtica sean
compatibles, principalmente con respecto al
pH y temperatura (Galbe & Zacchi, 2002;
Zaldivar et al., 2001). A lo largo de los ltimos
aos, se ha hecho un gran progreso en
cuanto al desarrollo de nuevas enzimas
hidrolticas se refiere y se espera que pronto
las compaas productoras de enzimas
lancen al mercado nuevas generaciones de
mezclas enzimticas con mejores
propiedades y ms baratas que las que
actualmente se comercializan. Cabe aclarar,
que un pretratamiento eficiente es
fundamental para que la estructura de la
celulosa quede lo suficientemente expuesta
para que las celulasas puedan liberar
glucosa de eficientemente (van Maris et al.,
2006).

MICROORGANISMOS PARA LA
PRODUCCIN DE ETANOL A PARTIR
LIGNOCELULOSA
Actualmente, en diferentes partes del
mundo, y teniendo como principales
exponentes a Brasil y a Estados Unidos, la
tecnologa madura de produccin de etanol
utiliza cepas de levaduras, siendo el gnero
Saccharomyces sp. el ms ampliamente
utilizado; las cualidades que hacen que este
microorganismo sea el ms empleado, son
su capacidad de convertir rpidamente los
azcares a etanol, alta tolerancia al etanol
(ms de 80 g/l), elevada osmotolerancia,
tolerancia a variaciones en la temperatura,
resistencia a un ambiente cido y tiene una
amplia aceptacin en los procesos
industriales ya que es un microorganismo
que ha sido utilizado por siglos por el ser
humano (Ingram & Buttke, 1984).
En el proceso de produccin de etanol a
partir de caa de azcar, estn presentes
microorganismos intrnsecos que vienen en
la caa, en especial levaduras, algunas que
se han identificado son del gnero
Saccharomyces sp., Torula sp. y Pichia sp.
Sin embargo, en el proceso de obtencin de
etanol para fines carburantes, la
permanencia de linajes diferentes a
Saccharomyces sp. no es deseable debido a
los altos rendimientos y niveles de etanol
requeridos (Schwan et al., 2001; Pataro et
al., 2000). A partir de los aos 90, en Brasil
se empezaron a utilizar inculos de
Saccharomyces cerevisiae para sustituir las
levaduras nativas de la caa y tener un mejor
control de la fermentacin.
Por otro lado, el desarrollo de
microorganismos que sean capaces de
metabolizar la amplia variedad de azcares
presentes en la lignocelulosa, principalmente
glucosa, xilosa, arabinosa, galactosa y
manosa, de preferencia de manera
simultanea y con mnimos requerimientos
nutricionales, es necesario para simplificar el
proceso y reducir los costos de la produccin
de etanol a partir de lignocelulosa. As
mismo, adems de poseer altas
productividades y rendimientos de etanol, los
microorganismos deben reducir la formacin
de subproductos indeseables, tolerar la
liberacin de inhibidores generados por la
88
hidrlisis de la lignocelulosa, tener una
elevada tolerancia al etanol y al estrs
osmtico ocasionado por la elevada
concentracin de azcares fermentables
(Zaldivar et al., 2001). A pesar del uso
extensivo de S. cerevisiae para la obtencin
de etanol a partir de sacarosa, glucosa o
fructosa, este microorganismo presenta una
serie de desventajas para su aplicacin en la
produccin del mismo a partir de hidrolizados
de hemicelulosa, tales como: altos costos de
aireacin, elevada produccin de biomasa, y
principalmente su incapacidad para
metabolizar pentosas (componentes
principales de la hemicelulosa), por lo que a
lo largo de las ltimas dos dcadas se han
seleccionado y generado diferentes
microorganismos capaces de producir etanol
con el fin de cumplir los requisitos de un
proceso fermentativo a partir de hidrolizados
de hemicelulosa. Entre los microorganismos
ms promisorios se encuentran Escherichia
coli, Klebsiella oxytoca y Zymomonas mobilis
y la misma S. cerevisiae modificadas por
ingeniera de vas metablicas (Dien et al.,
2003).
La falta de microorganismos con
capacidad industrial para la produccin de
etanol a partir de biomasa, es uno de los
principales obstculos para el desarrollo de la
produccin de etanol a partir de residuos
agroindustriales. Recientemente, mediante el
uso de tcnicas de biologa molecular,
evolucin dirigida e ingeniara de vas
metablicas, diversos grupos de
investigacin se han dedicado a la
modificacin de la fisiologa y de vas
metablicas de diferentes microorganismos
con la finalidad de obtener cepas con la
capacidad de metabolizar todos los azcares
provenientes de los residuos
agroindustriales, y al mismo tiempo para
obtener mejores rendimientos y
productividades de etanol. Un paso limitante
en el desarrollo de cepas etanolognicas, es
la integracin de genes recombinantes y la
expresin eficiente de stos en el
microorganismo hospedero en condiciones
no aireadas, as como la sobreexpresin de
los genes propios del microorganismo para
incrementar la produccin de etanol,
manteniendo un balance entre la fisiologa
microbiana y las altas productividades (Dien
et al., 2003).

INGENIERA METABLICA DE
MICROORGANISMOS PARA LA
PRODUCCIN DE ETANOL
Escherichia coli
E. coli presenta diferentes ventajas como
biocatalizador para la produccin de etanol,
dentro de las cuales se encuentran: su
capacidad para fermentar una amplia gama
de azcares (hexosas y pentosas, adems
de cidos urnicos), su amplio conocimiento
en cuanto a su uso a nivel industrial en la
produccin de protenas recombinantes.
Actualmente existen muchos procesos
aerobios a escala comercial con este
microorganismo, requerimientos mnimos
para su crecimiento, y una mayor tolerancia a
inhibidores generados por la hidrlisis de la
hemicelulosa en comparacin con S.
cerevisiae y Z. mobilis (Zaldivar et al., 1999;
Zaldivar & Ingram, 1999).
Durante el metabolismo anaerobio, las
89
las cepas silvestres de E. coli forman acetil
Co-A a partir de piruvato por la enzima
piruvato formato liasa (PFL). Al utilizar acetil
CoA, la enzima alcohol deshidrogenasa
(ADHE) forma acetaldehdo, para despus
formar etanol usando la misma enzima. Esta
va fermentativa est desbalanceada, debido
a que se genera una molcula de NADH por
cada molcula de piruvato formada a partir
de glucosa, pero se requiere de dos
molculas de NADH para convertir el piruvato
en etanol. Razn por la cual el flujo de
carbono hacia la formacin de etanol no es
considerable en cepas silvestres de E. coli
(ver Fig. 4a). Un balance similar se obtiene
para el consumo de otras hexosas y tambin
para pentosas. En cambio S. cerevisiae y Z.
mobilis convierten piruvato a etanol utilizando
las enzimas piruvato descarboxilasa (PDC) y
alcohol deshidrogenasa (ADHB), y esta va
slo consume una molcula de NADH por
cada molcula de etanol producida (Dien et
al., 2003) (Fig. 4b).

Fig. 4. Vas de formacin de etanol en: a) Escherichia coli; y b) Zymomonas mobilis. PDC, piruvato
decarboxilasa de Z. mobilis; ADH, alcohol deshidrogenasa de Z. mobilis; PFL, piruvato formato
liasa; PTA, fosfotransacetilasa; ADHE, alcohol deshidrogenasa de E. coli; ACK, acetato cinasa;
LDH, lactato deshidrogenasa.

Para mantener el balance redox en E. coli
una cantidad igual de acetil-CoA debe ser
convertida a acetato. As, los rendimientos
tericos de etanol por la va nativa de E. coli
son menores a los posibles con la va basada
en las enzimas PDC y ADHB de Z. mobilis.
Adicionalmente, la enzima PDC de Z. mobilis
permite canalizar el piruvato a etanol en
cepas modificadas de E. coli, debido a que la
PDC tiene una km ms baja por el piruvato
(0.4 mM) que otras enzimas que compiten
por este metabolito en condiciones de
fermentacin (por ej. 2 mM para el caso de la
piruvato formato liasa y 7 mM para la lactato
deshidrogenasa). Como se muestra adelante,
se ha comprobado que altos niveles de
90
glucosa o xilosa son fermentados
eficientemente a etanol por cepas
modificadas de E. coli que sobreexpresan
PDC y ADH de Z. mobilis (Ingram et al.,
1998).
Mediante tcnicas de biologa molecular
e ingeniera de vas metablicas se han
construido diferentes cepas etanolognicas
de E. coli, entre ellas, de una primera
generacin, la cepa de E. coli denominada
KO11 ha sido una de las ms estudiadas.
Esta cepa tiene integrado en cromosoma el
opern PET (production of ethanol), el cual
contiene los genes que codifican para las
enzimas piruvato descarboxilasa (pdc) y
alcohol deshidrogenasa (adhB) de Z. mobilis,
bajo el control del promotor de la piruvato
formato liasa (Ppfl), el cual se expresa
fuertemente en condiciones anaerobias (Fig.
5). Adems E. coli KO11 tiene integrado el
gen cat, que codifica para la cloramfenicol
acetil transferasa y le confiere resistencia a
cloramfenicol. Cabe resaltar que en E. coli
KO11 se gener una interrupcin en el gen
frd, que codifica para la enzima fumarato
91
Formato
Acetaldehdo
pflB
Acetil-CoA
Acetil-P
Acetato
Oxalacetato
Succinato
frd
PEP
Piruvato Lactato
ldhA
pdc
Etanol
adhB
pta
ackA
Acetaldehdo
Etanol
adhE
NADH
+
H NAD
+

ADP

ATP
NADH
+
H

NAD
+

NADH
+
H

NAD
+

Glucosa
adhE
NADH
+
H
NAD
+

Acetil-AMP
Acetato
acs
acs
PPi ATP
Gliceraldehdo 3P
Fructosa 6P
Va de las
Pentosas
ATP ADP
xylFGH
Xilosa

Fig. 5. Metabolismo fermentativo y vas de asimilacin de glucosa y xilosade E. coli.El opern PET
consiste de los genes pdc, piruvato descarboxilasa y adhB, alcohol deshidrogenasa de Z. mobilis.
Abreviaturas: frd, fumarato reductasa; adhE, alcohol deshidrogenasa; pflB, piruvato formato liasa;
ldhA, lactato deshidrogenasa; pta, fosfotransacetilasa; ackA, acetato cinasa; acs, acetil-CoA
sintetasa, xylFGH transportador de xilosa ABC dependiente de ATP de E. coli.
reductasa, impidindole generar succinato a
partir de fumarato en anaerobiosis (Ohta et
al., 1991a). Se ha encontrado que cuando
KO11 es cultivada utilizando hidrolizados de
hemicelulosa de bagazo de caa o medios
minerales suplementados con glucosa y
xilosa, la cepa slo alcanza rendimientos de
etanol menores al 70% del terico, en
comparacin al 95% alcanzado en medios
ricos (Huerta et al., 2007). Esto se debe a
que parte del carbono se desva a la
produccin de cidos orgnicos como lactato
y acetato. Esto ha dado origen a la
generacin de variantes de esta cepa.
Mientras que la productividad de etanol con
la cepa KO11 es similar a la obtenida con
levaduras en cultivos lote, la tolerancia al
etanol es mucho menor. Utilizando esta
misma cepa, se seleccionaron por evolucin
metablica en medio lquido, mutantes con
un incremento en la tolerancia al etanol, as
como en medio slido, con un incremento en
su produccin. Como resultado de esta
evolucin, se obtuvo la cepa E. coli LY01,
capaz de crecer en presencia de 50 g/l de
etanol (Jarboe et al., 2007).
Otras cepas modificadas genticamente
de E. coli, incluyen las denominadas E. coli
FBR1 y FBR2, las cuales fueron construidas
transformando la cepa FMJ39 (E. coli pfl,
ldh) con dos conversiones del opern PET
(conteniendo los genes pdc y adh de la va
etanolognica de Z. mobilis),
respectivamente. Una ventaja de estas cepas
es que la nica va que tienen para oxidar el
NADH es la va heterloga para la
produccin de etanol. Razn por la cual en
condiciones anaerobias estas cepas son
estables, debido a que requieren del
plsmido para poder sobrevivir (Hespell et
al., 1996).
Una tercera generacin de cepas
etanolognicas derivadas de E. coli, incluye
interrupciones en todos los genes que
codifican para enzimas que catalizan
reacciones hacia la formacin de productos
de fermentacin y que compiten con la
disponibilidad de piruvato para ser convertido
en etanol por la va heterloga. Un ejemplo
de esto es la cepa LY160, derivada de E. coli
KO11, con el gentipo: adhE, ackA,
ldhA, PrrlE::pdc
Zm
-adhA
Zm
-adhB
Zm
, mgsA
(Fig. 5) a la cual se le insert el opern
conteniendo los genes pdc, adhA y adhB de
Z. mobilis mediante un transposn bajo el
promotor ribosomal rrnB. Esta cepa ha
demostrado ser eficiente al crecer en medio
mineral con 1 mM de betana suplementado
con 9% de xilosa con rendimientos del 95%
del terico mximo (0.51 g de etanol por g de
azcar) (Martinez et al., 2007; Yomano et al.,
2008).
La capacidad de estas cepas de E. coli
para la produccin de etanol a partir de la
biomasa ha sido demostrada con mltiples
sustratos como bagazo de caa, residuos
agroindustriales, madera, etc (a nivel
laboratorio). Los rendimientos, con respecto
al terico, se encuentran entre el 70% -100%
dependiendo medio utilizado: medios
complejos con glucosa o xilosa; mezclas de
estos azcares en medios minerales; y
fermentacin de todos los azcares que se
encuentran en hidrolizados de hemicelulosa
con alto contenido de pentosas (Jarboe et al.,
2007). No obstante una de las principales
92
limitantes an para que E. coli sea aplicada a
nivel industrial para producir etanol es su
baja tolerancia al mismo etanol. Actualmente,
de forma independiente dos compaas, una
de Japn y otra de los EUA, estn utilizando
cepas etanolgenicas de E. coli para
demostrar a escala semicomercial la
produccin de etanol a partir de
lignocelulosa.
93
Zymomonas mobilis
Uno de los microorganismos ms
estudiado para la produccin de etanol es la
bacteria Gram negativa (Z. mobilis), sta
presenta mayores tasas especficas de
consumo de azcares y velocidades de
produccin de etanol que las levaduras.
Adems, Z. mobilis produce menos biomasa
y presenta mayor tolerancia hacia el etanol
(hasta 120 g/l) (Dien et al., 2003).
Desafortunadamente este microorganismo no
puede asimilar las pentosas presentes en los
jarabes de hemicelulosa. Diferentes cepas de
Z. mobilis han sido modificadas con la
finalidad de expresar enzimas hidrolticas de
microorganismos capaces de utilizar
polmeros de glucosa. Gunasekaran &
Chandra-Raj (1999) produjeron cepas con la
capacidad de metabolizar tanto hexosas
como pentosas.
Z. mobilis presenta altos rendimientos y
productividades de etanol debido a que este
microorganismo metaboliza la glucosa
anaerbicamente mediante la va de Entner-
Doudoroff (ED) en lugar de la de Embden-
Meyerhof-Parnas (EMP) (Dien et al., 2003).
La va ED genera slo la mitad del ATP
generado por la va EMP por mol de glucosa,
como consecuencia, Z. mobilis genera
menos biomasa y por lo tanto una mayor
cantidad de carbono es dirigida hacia los
productos de fermentacin. Adems, todas
las enzimas relacionadas con la fermentacin
se expresan de manera constitutiva y
comprenden aproximadamente el 50% de la
biomasa (Sprenger, 1996).
Una limitante importante para el uso de Z.
mobilis en la produccin de etanol a partir de
biomasa, es su capacidad de fermentar
nicamente glucosa, fructosa y sacarosa
(Dien et al., 2003). Por lo que se han
realizado diversos trabajos para lograr que
este microorganismo pueda fermentar
azcares como xilosa y arabinosa.
Zhang et al. (1995) mediante la
introduccin y expresin de cuatro genes de
E. coli: xilosa isomerasa (xylA), xilulosa
cinasa (xylB), transcetolasa (tktA) y
transaldolasa (talB), lograron obtener la cepa
Z. mobilis (pZB5) capaz de fermentar xilosa y
producir etanol con un rendimiento del 86%.
Las enzimas xilosa isomerasa y xilulosa
cinasa convierten a la xilosa en xilulosa-5-
fosfato, intermediario en la va de las
pentosas fosfato, y posteriormente la
transcetolasa y la transaldolasa convierten a
la xilulosa-5-fosfato en intermediarios de la
va ED (Fig. 6).
Utilizando una estrategia similar, Deanda
et al. (1996) lograron construir una cepa de
Z. mobilis capaz de fermentar arabinosa a
travs de un plsmido que expresa cinco
genes de E. coli: L-arabinosa isomerasa
(araA), L-ribulosa cinasa (araB), L-ribulosa-5-
fosfato-4-epimerasa (araD), trancetolasa
(tktA) y transaldolasa (talB). Los tres

Fig. 6. Metabolismo fermentativo de glucosa a etanol de Zymomonas mobilis y va heterloga para
el metabolismo de xilosa a piruvato.

primeros genes codifican para las enzimas
responsables de convertir la arabinosa en
xilulosa-5-fosfato, posteriormente este
compuesto es convertido en intermediarios
de la va ED por la transcetolasa y la
transaldolasa. La cepa obtenida, Z. mobilis
ATCC39676 (pZB206), fue capaz de
fermentar arabinosa a etanol con un
rendimiento del 98% con respecto al terico.
La cepa Z. mobilis AX101 construida por
Zhang et al. (1995), tiene integrado en su
genoma los 7 genes necesarios (antes
mencionados) para metabolizar tanto xilosa
como arabinosa. Esta cepa metaboliza la
arabinosa a menor velocidad con respecto a
la xilosa, y generalmente de forma
incompleta (50% de la arabinosa inicial). Sin
embargo, cuando Z. mobilis AX101 crece con
mezclas de azcares se ha observado que el
rendimiento y la productividad de la
fermentacin de arabinosa se incrementan.
En cultivos que con 40 g/l de glucosa, 40 g/l
de xilosa y 20 g/l de arabinosa, Z. mobilis
AX101 logr fermentar el 100 % de la
glucosa y xilosa inicial y el 75 % de la
arabinosa en 50 h (Lawford & Rousseau,
2002; Mohagheghi et al., 2002).
La principal desventaja de la cepa Z.
mobilis AX101 radica en su baja tolerancia a
los furanos, fenlicos y cido actico,
especialmente en presencia de etanol. El
cido actico se encuentra comnmente en
hidrolizados de hemicelulosa en
concentraciones de 2 a 10 g/l. La adicin de
2.5 g/l de cido actico (pH 5.5) y 30 g/l de
etanol en los cultivos gener una disminucin
en la produccin de etanol a partir de xilosa
cercana al 50% (Lawford & Rousseau, 2002).
Por lo que es necesario mejorar la tolerancia
de Z. mobilis AX101 hacia el acido actico.
94
Klebsiella oxytoca
K. oxytoca es una bacteria entrica que
ha sido aislada creciendo en papel y en
madera. Este microorganismo es capaz de
crecer en un pH tan bajo como 5 y a una
temperatura de 35C, puede utilizar para su
crecimiento una gran variedad de azcares
incluidos hexosas y pentosas, as como
celobiosa y celotriosa, lo cual lo hace muy
interesante para producir etanol a partir de
celulosa. En los procesos de sacarificacin
con celulasas las enzimas son inhibidas por
la presencia de la celobiosa (Freer & Detroy,
1983), por lo tanto para realizar procesos de
sacarificacin y fermentacin simultnea
(SFS) con K. oxytoca disminuira la cantidad
de celulasas que se agrega a los cultivos.
K. oxytoca fermenta la glucosa hacia una
gran variedad de cidos orgnicos y
productos neutros. En particular la
produccin de etanol en K. oxytoca se lleva a
cabo mediante la va de la piruvato formato
liasa (PFL). La introduccin del opern PET
(conteniendo los genes pdc y adh de la va
etanolognica de Z. mobilis) en K. oxytoca
(M5A1), logr aumentar la concentracin de
etanol hasta el 90% del total de productos de
fermentacin (Ohta et al., 1991b). Esta cepa
tiene a la vez la capacidad de fermentar
xilosa tan rpido como la glucosa (2 g/l h),
esto es aproximadamente 2 veces ms
rpido que la cepa E. coli KO11.
Wood & Ingram (1992) lograron integrar
el opern PET en el cromosoma de K.
oxytoca y tras mtodos de mutagnesis y
seleccin (con el objeto de incrementar su
produccin de etanol), la cepa resultante se
denomin K. oxytoca P2 y tuvo la capacidad
de metabolizar glucosa (100 g/l) o celobiosa
(100 g/l) en 48 horas, con producciones entre
44-45 g/l de etanol. Tambin se han
integrado en el cromosoma de esta bacteria
dos genes de endoglucanasas extracelulares
(celZ y celY) de Erwinia chrysanthemi,
adems del transportador auxiliar (out), la
cepa celuloltica fue denominada K. oxytoca
SZ21 (Zhou & Ingram, 2000). Esta cepa fue
capaz de fermentar lentamente celulosa
(Sigmacell 50), sin la necesidad de agregar
celulasas adicionales (Zhou et al., 2001).

Saccharomyces cerevisiae
S. cerevisiae es la levadura que se utiliza
por excelencia para la produccin de etanol,
sta, a pesar de ser un microorganismo
etanolognico por naturaleza, es incapaz de
metabolizar pentosas. Por lo que uno de los
grandes retos a desarrollar, es la expansin
de los azcares fermentables a utilizar por S.
cerevisiae (van Maris et al., 2006).
Las cepas silvestres de S. cerevisiae
pueden fermentar glucosa, manosa y
fructosa, as como los disacridos sacarosa y
maltosa a travs de la va EMP, mientras que
en el caso de la D-galactosa, sta se
metaboliza por la accin conjunta de la va
Leloir y la gluclisis (van Maris et al., 2006).
Por su parte, la produccin de etanol a partir
de otras fuentes de carbono (D-xilosa, L-
arabinosa, cido galacturnico y L-ramnosa),
requiere de una extensa investigacin y
aplicacin de ingeniera vas metablicas
para que las pueda metabolizar hacia etanol.
95
A pesar de que S. cerevisiae no puede
fermentar ni asimilar xilosa, sta no es una
caracterstica general para todas las
levaduras. Slo un pequeo nmero de
levaduras facultativas pueden metabolizar
dicho azcar y fermentarlo hasta etanol, esto
gracias a la accin conjunta de las enzimas
xilosa reductasa y xilitol deshidrogenasa, que
convierten la D-xilosa en xilitol, y ste ltimo
en D-xilulosa, respectivamente (Fig. 7). Sin
embargo, debido a que ambas enzimas
tienen especificidad por diferentes cofactores
(NADPH y NADH respectivamente, aunque la
xilosa reductasa puede utilizar ambos), existe
un desequilibrio redox que al no ser
balanceado, puede ocasioar que la xilosa no
sea fermentada (van Maris et al., 2006).

Fig. 7. Va heterloga para la utilizacin de xilosa y su metabolismo hacia la va Embden-Meyerhof-
Parnas de Saccharomyces cerevisiae.

Debido a que S. cerevisiae es capaz de
metabolizar xilulosa, una de las alternativas
para la produccin de etanol a partir de
xilosa, es la introduccin de una enzima
heterloga capaz de convertir la xilosa en
xilulosa sin generar desbalances de
cofactores. Una estrategia de este tipo se
puede llevar a cabo utilizando la xilosa
isomerasa, enzima que tiene la capacidad de
convertir la D-xilosa en D-xilulosa en una
reaccin de oxido-reduccin neutra (Fig. 7).
Sin embargo, la introduccin de esta enzima
no ha tenido resultados satisfactorios, lo cual
se debe a plegamientos incorrectos de la
protena expresada, modificaciones
postraduccionales, formacin de puentes
disulfuro y el pH interno de la levadura.
96
Una excepcin a esta investigacin, fue
la expresin de la enzima xilosa isomerasa
(xylA) de la bacteria Thermus thermophilus,
sta fue la primera xilosa isomerasa funcional
en ser expresada en S. cerevisiae, no
obstante, la actividad de dicha enzima a la
temperatura de crecimiento de la levadura,
no fue lo suficientemente alta como para
permitir la fermentacin eficiente de la xilosa
(van Maris et al., 2006). Por otra parte, se
logr expresar satisfactoriamente la xilosa
isomerasa del hongo Piromyces sp. E2 en la
cepa S. cerevisiae RWB 202 permitiendo con
ello el crecimiento en xilosa como nica
fuente de carbono, sin embargo es necesario
utilizar condiciones aerbicas para que
pueda crecer y metabolizar la xilosa.
Posteriormente, esta cepa se someti a
evolucin metablica, resultando la cepa S.
cerevisiae RWB 202-AFX capaz de crecer en
anaerobiosis, produciendo principalmente
etanol, CO
2
, glicerol y biomasa, y pequeas
cantidades de xilitol a partir de xilosa como
nica fuente de carbono (van Maris et al.,
2006). Sin embargo, la tasa de produccin de
etanol de esta nueva cepa (0.14 g/g clula-h)
fue an muy baja como para ser considerada
en aplicaciones industriales, por lo que
adems de la expresin del gene xylA, se
sobreexpresaron todos los genes
involucrados en la conversin de xilosa en
intermediarios de la gluclisis. Esta nueva
cepa denominada S. cerevisiae RWB 217
sobreexpresa las enzimas: xilulocinasa
(xyl3), ribulosa 5-fosfato isomerasa (araA),
ribulosa 5-fosfato epimerasa (araD),
transcetolasa (tktA) y transaldolasa (talB); as
mismo, el gen que codifica para la aldosa
reductasa se elimin para minimizar la
produccin de xilitol (van Maris et al., 2006).
La cepa resultante crece en condiciones
anaerobias y hasta este momento presenta la
tasa de produccin especfica de etanol ms
alta reportada utilizando xilosa (0.46 g/g
clula-h).
Con el objetivo de mejorar el consumo de
xilosa de esta ltima cepa en mezclas de
glucosa-xilosa, a sta se le someti a
evolucin metablica en una primera etapa
por 85 generaciones en un quimiostato
limitado de xilosa. Posteriormente este cultivo
se utiliz para inocular un cultivo lote con una
mezcla de glucosa-xilosa y de ah se obtuvo
la cepa S. cerevisiae RWB 218 que es capaz
de fermentar ambos azcares (20 g/l de cada
uno) en 24 horas. Al utilizar xilosa como
nica fuente de carbono, esta cepa present
una velocidad especfica de crecimiento de
0.12 h
-1
, de consumo de xilosa de 1.2 g/g
clula-h y una tasa de produccin de etanol
de 0.49 g/g clula h.
Al igual que la xilosa, slo un nmero
reducido de especies de levaduras pueden
de manera natural asimilar L-arabinosa y
fermentarla a etanol bajo condiciones
microaerobias. Sin embargo, el perodo de
fermentacin es muy largo, entre 7-14 das.
La va de asimilacin de la arabinosa ha sido
descrita en los hongos Penicillium
chrysogenum y Aspergillus niger por accin
de las enzimas: aldosa (xilosa) reductasa
(GRE3), L-arabinitol 4-deshidrogenasa (lad1),
L-xilulosa reductasa (lxr1), D-xilulosa
reductasa y D-xilulocinasa (XKS1). De
manera similar a lo que sucede con la va de
asimilacin de xilosa, estas enzimas
97
presentan afinidad por diferentes cofactores,
lo que resulta en un desequilibrio redox bajo
condiciones anaerobias.
Una alternativa para la generacin de una
cepa de S. cerevisiae fermentadora de
arabinosa es la sobreexpresin de la va de
utilizacin de arabinosa en bacterias (Fig. 8).
En los primeros pasos de esta va no estn
involucradas reacciones redox, y son las
enzimas L-arabinosa isomerasa, L-
ribulocinasa y L-ribulosa 5-fosfato 4-
epimerasa, las encargadas de convertir la L-
arabinosa a L-ribulosa, L-ribulosa-5-P y D-
xilulosa-5-P respectivamente. Cada una de
estas enzimas est codificada por los genes
La primera cepa de S. cerevisiae en
producir etanol a partir de arabinosa, sobre
expres todos los genes estructurales de la
va de asimilacin de arabinosa de hongos,
sin embargo, esta cepa nicamente produjo
0.35 mg de etanol/g clula-h en condiciones
anaerobias, debido probablemente a los
desbalances en los cofactores redox (van
Maris et al., 2006).

Fig. 8. Metabolismo de D-xilosa y L-arabinosa para cepas modificadas por ingeniera de vas
metablicas en S. cerevisiae. Las letras en cursiva son los nombres de los genes que codifican
para las enzimas. Las enzimas subrayadas no se encuentran presenten en el metabolismo de la
levadura progenitora. GRE3/xyl1, aldosa/xilosa reductasa; xyl2, xilitol deshidrogenasa; xyl3,
xilulocinasa; xylA, xilosa isomerasa; lad1, arabinitol 4-deshidrogenasa; lxr1, L-xilulosa reductasa;
araA, L-arabinosa isomerasa; araB, L-ribulocinasa; araD, L-ribulosa-5-fosfato-4-epimerasa; G-3-P,
gliceraldehdo-3-fosfato; PPP, ruta de las pentosas fosfato.

araA, araB y araD, los cuales fueron
expresados en S. cerevisiae, no obstante,
esta cepa nicamente acumul L-arabinitol y
no produjo etanol a partir de arabinosa (van
Maris et al., 2006). Utilizando una estrategia
similar y junto con la sobreexpresin de un
gen que codifica para una permeasa de
galactosa de levadura (GAL2), se someti a
98
esta cepa a evolucin metablica bajo
condiciones limitadas de oxgeno. La tasa
especfica de produccin de etanol a partir de
arabinosa de la cepa evolucionada fue entre
0.06-0.08 g/g clula-h y el rendimiento del
60% con respecto al mximo terico (van
Maris et al., 2006). A pesar de los resultados
obtenidos, la sobre expresin de la va de
arabinosa bacteriana, resulta una de las
alternativas ms promisorias para generar
cepas de S. cerevisiae capaces de producir
etanol a partir de este azcar.

CONCLUSIONES
Con la valoracin de los datos integrados
en la presente revisin se pone de manifiesto
que si bien, el etanol carburante no es la
nica solucin a la problemtica energtica y
ambiental, ha probado ser una alternativa
slida y suficientemente madura, como en el
caso de Brasil, para atenuar de manera
transitoria la escasez inminente de los
combustibles fsiles, participar de la
transicin energtica de combustibles fsiles
a renovables y permitir a la vez el desarrollo
de nuevas formas de bioenerga, con mayor
sustentabilidad, ms limpias, con mejor
rendimiento energtico y adems que
satisfagan la demanda de combustibles sin
competir con el abasto de alimentos.
No podemos ignorar que la produccin de
bioetanol actualmente implementada compite
con la industria alimenticia y que su
tecnologa requiere optimizarse. Por lo que
para contender con lo anterior, es necesario
implementar a nivel industrial el uso de
lignocelulosa y mejorar varios aspectos para
el aprovechamiento de la misma, tales como
la optimizacin de las condiciones de
hidrlisis, la eliminacin de inhibidores
generados y la generacin de
microorganismos etanolognicos, ya que la
biomasa representa una materia prima ms
barata, con un alto contenido de azcares
fermentables, no interviene con el sector
alimenticio y no se requiere de la
sobreexplotacin del suelo. El uso de la
biologa molecular, la ingeniera de vas
metablicas y la evolucin dirigida, han
permitido la obtencin de diferentes cepas
bacterianas capaces de producir etanol con
elevados rendimientos, resistiendo
concentraciones elevadas de etanol e
inhibidores, adems de fermentar tanto
hexosas, pentosas y polisacridos como la
celulosa.

AGRADECIMIENTOS
Se agradece el apoyo del Consejo
Nacional de Ciencia Tecnologa Mxico a
travs de los proyectos FOMIX Estado de
Morelos: MOR-2007-CO1-80360 y Red de
Fuentes de Energa; as como del Proyecto
UNAM-PAPIIT-DGAPA: IN220908.

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RESEA XIII CONGRESO NACIONAL Y VII SIPAL

XIII Congreso Nacional de Biotecnologa y Bioingeniera y VII Simposio
Internacional de Produccin de Alcoholes y Levaduras
Dra. Mara Luisa Villarreal Ortega
Presidenta de la Sociedad Mexicana de Biotecnologa y Bioingeniera (2008-2010)
Dr. Alfredo Martnez Jimnez
Vicepresidente de la Sociedad Mexicana de Biotecnologa y Bioingeniera (2008-2010)

En el XIII Congreso Nacional de Biotecnologa y Bioingenera y el VII Simposio
Internacional de Produccin de Alcoholes y Levaduras, eventos organizados por la
Sociedad Mexicana de Biotecnologa y Bioingeniera, se dieron a conocer los adelantos
ms recientes alcanzados en diversas reas de la biotecnologa.
Ambos eventos se celebraron en forma conjunta en Acapulco Guerrero del 22 al 26 de
junio pasados, con el propsito de dar a conocer los avances cientficos de alcance
internacional en las reas de la biotecnologa y bioingeniera, intercambiar experiencia y
crear una red de colegas, as como involucrar a las nuevas generaciones de estudiantes
en estos campos del conocimiento.
Para el dcimo tercer congreso se cont con ms de 1,050 participantes nacionales,
as como colegas provenientes de varios pases de Amrica (Norte, Centro y Sur), y
tambin de Europa, quienes compartieron sus experiencias ms sobresalientes en las
diversas vertientes de esta multidisciplina. En esta ocasin se incorpor el simposio
bianual itinerante de alcoholes y levaduras que se realiza en diversos pases
latinoamericanos, habindose seleccionado Mxico para su sptima edicin. La mesa
directiva de la SMBB decidi integrarlo a su congreso por contener reas temticas
compatibles.
Siendo la SMBB la principal agrupacin cientfica y profesional en el rea de la
biotecnologa en Mxico, en este evento participaron los ms destacados biotecnlogos
del pas, as como socios numerarios, profesionales, empresarios y estudiantes
Ms del 65% de los asistentes al congreso fueron jvenes estudiantes provenientes de
85 universidades, institutos tecnolgicos y centros de investigacin de todo el pas. Este
hecho refleja dos de las principales filosofas de la SMBB; que son promover la
divulgacin de conocimientos de frontera entre las nuevas generaciones, y fomentar la
participacin de todas las instituciones del pas interesadas en la biotecnologa y la
bioingeniera. Gracias al apoyo proporcionado por la Secretara de Educacin Pblica, y la
asociacin de empresas Agrobio Mxico, fue posible becar la asistencia de 100
estudiantes al evento. As mismo con apoyo especial del Conacyt permiti financiar los
principales gastos del VII Simposio Internacional de Alcoholes y Levaduras.
El programa cientfico incluy 834 contribuciones que se distribuyeron en forma de 10
conferencias plenarias, 11 simposios con 4 conferencias temticas cada uno, 160
presentaciones orales y 620 en cartel.


103
Las presentaciones reflejaron los avances que se realizan en investigacin bsica y
aplicada en todas las reas de la biotecnologa actual. Por ejemplo, en BIOTECNOLOGA
MDICA se discutieron desarrollos nacionales muy importantes como el mtodo
recombinante para producir una nueva vacuna contra la cisticercosis, la caracterizacin
gentica de la bacteria causante de la tuberculosis y proyectos relacionados con la
produccin de biofarmacuticos basados en plantas. Asimismo, cientficos extranjeros
analizaron las perspectivas de los beneficios teraputicos con el uso de clulas madre y
algunos mtodos novedosos para la produccin de vacunas contra el virus AH1N1. En el
caso de la BIOTECNOLOGA AGRCOLA se presentaron trabajos revelantes realizados
por cientficos mexicanos con el uso de biofertilizantes en sustitucin a fertilizantes
qumicos, estudios genmicos de variedades de maz mexicano que explican su
domesticacin, as como investigaciones recientes que ilustran como es posible evitar la
aparicin de resistencia de insectos plaga a las toxinas insecticidas producidas por las
bacterias.
En BIOTECNOLOGA ALIMENTARIA se analizaron estudios sobre bacterias lcticas
que son explotadas por su actividad benfica para conservar alimentos en vista de que
producen compuestos antimicrobianos, as como la utilizacin de consorcios de
microorganismos que se adicionan a algunos tipos de quesos para evitar el crecimiento
de bacterias patgenas. En el simposio de BIOCATLISIS se discutieron las aplicaciones
de los biocatalizadores en la sntesis orgnica, la importancia de nuevos biocatalizadores
con aplicaciones mdicas como analgsicos o antiinflamatorios, as como la preparacin
de biocatalizadores con estructuras nanomtricas.
En el caso de la BIOTECNOLOGA MARINA se presentaron algunos resultados que
indican que las bacterias que habitan en los mares pueden ser fuentes de nuevos
metabolitos bioactivos y se hizo evidente que el desarrollo de este campo presenta un
rezago en comparacin con otras reas, a pesar de concentrar un recurso natural extenso
e importante para el pas. De acuerdo con la imperiosa necesidad de mantener un
ambiente limpio, en BIOTECNOLOGA AMBIENTAL, la cual representa el rea que ms
se trabaja en Mxico, se revisaron nuevas tecnologas para el tratamiento de aire
contaminado en base a biofiltros que provocan la degradacin de contaminantes en
compuestos no txicos, el tratamiento de efluentes con el uso de consorcios bacterianos y
el uso de sistemas enzimticos de hongos para degradar compuestos xenobiticos
contaminantes como plaguicidas, hidrocarburos o explosivos. En el rea de
BIOINGENIERA se habl sobre avances en el diseo de microrreactores y reactores para
cultivar clulas de mamfero; as como del diseo y aplicacin de tcnicas avanzadas que
permiten visualizar los eventos que ocurren en tercera dimensin en el interior de estos
tanques.
En los temas de BIOCOMBUSTIBLES Y BIOENERGA se abord la obtencin de
etanol carburante a partir de residuos agroindustriales, con nfasis en los avances
realizados en Cuba, Colombia y Mxico. Tambin se presentaron estudios relacionados
con la produccin de otros biocombustibles como el butanol que es compatible con la
gasolina y motores actuales, el biodiesel obtenido a partir de plantas oleaginosas

104
mexicanas, y el biopetrleo que constituye una nueva ventana de investigacin en donde
modificando vas bioqumicas de las bacterias, es posible producir compuestos similares a
los que se obtienen del petrleo. Se habl sobre la bioelectricidad, que plantea la
generacin de este recurso a partir de basura, teniendo aplicaciones prcticas en
ambientes extremos como el fondo del mar, pantanos y otros lugares inhspitos. En el
simposio de LEVADURAS se presentaron avances en la utilizacin de este fascinante
microorganismo para la produccin de cerveza, el aislamiento y caracterizacin de cepas
especiales para la fabricacin de ron y cerveza, el uso de metodologas moleculares para
caracterizar productos de fermentacin en bebidas como la cachaza brasilea, y la
aplicacin eficiente de levaduras para convertir los desechos de quesera en etanol. Un
simposio particularmente atractivo fue el de BEBIDAS ALCOHLICAS MEXICANAS, en
el que se presentaron no solo los conocimientos ya establecidos sino la aplicacin de
metodologas modernas de microbiologa, bioprocesos y genmica a la produccin de
bebidas como el pulque, sotol, mezcal y el tradicional tequila.
Se incluy una mesa redonda sobre redes temticas de COOPERACIN EN
BIOTECNOLOGA, donde miembros de la sociedad y representantes del Consejo
Nacional de Ciencia y Tecnologa hicieron planteamientos y discutieron las ventajas que
pueden brindar dichas redes para propiciar un mejor aprovechamiento de los recursos
destinados a generar investigaciones de calidad, hacer frente a la falta de apoyos en
ciertas reas de la biotecnologa, crear sinergias entre los especialistas y evitar la
duplicidad de esfuerzos.
La relevancia y aplicacin de las muchas investigaciones presentadas en el congreso,
enfatizan la importancia para que en Mxico se contine invirtiendo en biotecnologa y
bioingeniera, con el fin de resolver problemas urgentes que apremian a la ciencia y a
nuestra sociedad.


105
RESEA CIENTIFICA XIII CONGRESO NACIONAL Y VII SIPAL
XIII CONGRESO NACIONAL DE BIOTECNOLOGA Y BIOINGENIERA /
VII SIMPOSIO INTERNACIONAL DE PRODUCCIN DE ALCOHOLES Y LEVADURAS
Dra. Maricarmen Quirasco Baruch
Presidente del Comit Cientfico

El programa cientfico es el alma de nuestro congreso, en la primera parte del da se incluyeron
conferencias plenarias y simposios, donde expertos de cada rea, nacionales y extranjeros,
presentaron los aspectos ms recientes y relevantes de la biotecnologa y la bioingeniera. A partir
del congreso realizado en 2007 en Morelia, la Mesa Directiva detect la necesidad de realizar
simposios simultneos para ofrecer un mayor abanico temtico. Lo anterior result de especial
relevancia en esta ocasin, pues el VII Simposio Internacional de Produccin de Alcoholes y
Levaduras (SIPAL) se realiz como parte integral del congreso de la SMBB, lo que llev a la
inclusin de temticas propias del SIPAL en el programa cientfico.
La otra parte fundamental y caracterstica de nuestro congreso es la exposicin de trabajos
libres, que se realiz por las tardes en las modalidades de Cartel y Presentacin Oral. Debido a
que se obtuvo una excelente respuesta por parte de la comunidad biotecnolgica en la sumisin de
trabajos libres y a que se decidi presentar conferencias plenarias y simposios que cubrieran un
amplio espectro temtico, tuvimos el gran desafo de distribuir numerosos eventos en tiempo y
espacio restringidos.
CONFERENCIAS PLENARIAS. Nuestro congreso cont con 11 conferencias plenarias impartidas
por cientficos de la ms alta calidad, cinco de los cuales provinieron de instituciones de
investigacin del extranjero. Se trataron tpicos de inters actual, como el cultivo de clulas madre,
la influenza A/H1N1 y su vacuna, biorreactores innovadores, bacterias marinas como fuente de
compuestos bioactivos, metabolmica en plantas, propiedad industrial y aplicacin del
conocimiento biotecnolgico bsico, y el tequila, entre otros temas. Tuvimos el honor de escuchar
una conferencia magistral sobre fitorremediacin, por parte del Dr. Fernando Esparza, quien fue
galardonado como Miembro Honorario de nuestra Sociedad, reconocimiento que se otorg por
primera vez. As como la correspondiente al ganador del Premio Carlos Casas Campillo 2008, Dr.
Cristbal Aguilar, quien comparti con nosotros lo ms relevante de su trabajo de investigacin
relacionada con la obtencin de compuestos de inters industrial a partir del cultivo de plantas del
desierto mexicano.
SIMPOSIOS. Se llevaron a cabo 12 simposios donde se present el panorama ms actual de la
biotecnologa en diversas reas: Bio-energa, Levaduras y Bebidas, Redes de Colaboracin en
Biotecnologa, Biocatlisis, Bebidas Alcohlicas Mexicanas, Microrreactores, Biotecnologa de
Alimentos y Microbiana, Farmacutica, Ambiental, Agrcola y Marina. Como se puede observar, el
contenido de los simposios se vio enriquecido por las temticas propias del SIPAL. Contamos con

106
RESEA CIENTIFICA XII CONGRESO NACIONAL Y VII SIPAL
la participacin de 46 expertos en cada rea, de los cuales 12 fueron invitados extranjeros. Se
realizaron tres simposios simultneos para poder cubrir las reas temticas. Los simposios fueron
de muy buena calidad cientfica y hubo quien dese tener el don de la ubicuidad para poder asistir
a los tres al mismo tiempo. El Comit Organizador agradece enormemente a los Coordinadores de
Simposio, quienes, al ser autoridades en cada rea, planearon cuidadosamente el contenido, lo
que se reflej en la seleccin de los investigadores invitados. Cabe mencionar que para esta
actividad, se cont con el apoyo de la Ctedra Jaques Senez (SMBB-UAMI-IRD-Embajada de
Francia en Mxico) para traer a un conferencista de origen francs.
TRABAJOS LIBRES. La cantidad de trabajos libres que ha recibido nuestro congreso
histricamente impuls al Comit Organizador a la implementacin de un sistema automatizado de
recepcin de resmenes, que fuera ms sencillo para los autores, prctico para los evaluadores y
que facilitara la elaboracin de las memorias. Gracias a la excelente colaboracin de Nayeli Quinto,
la SMBB cuenta ahora con un sistema en lnea que prob ser eficiente, an durante la ltima hora
de recepcin de trabajos libres, en la que se recibieron aproximadamente 5 resmenes por minuto.
En esta ocasin se presentaron 620 trabajos libres en modalidad de cartel y 160 oralmente. En
la Figura 1 se muestra la proporcin de stos de acuerdo al rea temtica y en la Tabla 1 la
informacin se presenta desglosada de acuerdo a la modalidad de presentacin. Se abrieron
nuevos espacios en el contenido temtico, abordndose tpicos de sumo inters actual como la
generacin de energa a travs de la biotecnologa. Un aspecto interesante, es que resmenes de
Genricasy
emergentes,2%
Bebidasalcohlicas,4%

Figura 1.
Bioenerga,4%
B.Farmacetica,6%
B.Marina,2%
B.Microbianay
Molecular,15%
Bioingenieray
Fermentaciones,13%
B.Ambiental,19%
B.Alimentaria,12%
B.Agrcolay
Vegetal,14%
Biocatlisis, 9%

107
RESEA CIENTIFICA XII CONGRESO NACIONAL Y VII SIPAL
investigadores asistentes al SIPAL (extranjeros, en su mayora) se sometieron a las reas
temticas clsicas de nuestro congreso, sobre todo al rea de Bioingeniera, y viceversa. Lo cual
favoreci que el evento se enriqueciera acadmicamente.
Agradezco a los Coordinadores de rea y a los Dictaminadores, ya que su participacin en la
evaluacin de trabajos libres fue esencial para mantener nuestro evento en la ms alta calidad
acadmica. Esta importante tarea fue realizada por investigadores de instituciones de Educacin
Superior de nuestro pas, 20 pblicas y una privada, as como de dos investigadores provenientes
de sendas compaas del sector privado.
Tabla 1. reas temticas y trabajos aceptados en sus diferentes modalidades
REA TEMTICA TRABAJOS LIBRES
ORALES
TRABAJOS LIBRES
EN CARTEL
I. Biocatlisis 16 53
II. Biotecnologa Agrcola y Vegetal 24 85
III. Biotecnologa Alimentaria 24 67
IV. Biotecnologa Ambiental 28 122
V. Bioingeniera y Fermentaciones 16 88
VI. Biologa Molecular y
Biotecnologa Microbiana
16 100
VII. Biotecnologa Marina 4 15
VIII. Biotecnologa Mdica
Farmacutica y Veterinaria
12 32
IX. Bio-Energa 8 26
X. Produccin de Bebidas Alcohlicas 8 24
XI. reas Genricas y Emergentes 4 8
TOTALES 160 620


108

109
El Congreso propici un ambiente relajado para el intercambio y discusin de ideas entre
investigadores de nuestro pas y con grupos de otros pases, principalmente de Latinoamrica.
Acapulco result ser un sitio de reunin adecuado, tuvimos una muy buena respuesta de parte de
la comunidad de biotecnlogos del pas, pues la cantidad de trabajos libres presentados aument
en un 16%, a comparacin de nuestro Congreso de Morelia (en el cual se haba roto el rcord
anterior), no obstante que la situacin econmica en el 2009 fue ms difcil que la de dos aos
atrs.
Ochenta investigadores moderaron las sesiones de trabajos libres orales. Fue interesante
constatar que las fortalezas de la investigacin en las diversas reas de la Biotecnologa estn
distribuidas a lo largo y ancho del pas, pues los moderadores provinieron de 23 instituciones de
Educacin Superior de 16 estados de la Repblica Mexicana. El Comit Cientfico les agradece
enormemente su colaboracin, pues su experiencia en el rea correspondiente enriqueci la
discusin de los trabajos expuestos.
El Comit Organizador del Congreso realiz su mejor esfuerzo por ofrecer un amplio abanico
de temticas y espera haber cubierto las expectativas de los expertos y de los que se estn
adentrando en el campo de la biotecnologa y la bioingeniera (quienes son nuestros congresistas
ms numerosos). Personalmente, como Presidenta del Comit Cientfico, me quedo con una gran
satisfaccin por todo lo aprendido al coordinar un evento de esta complejidad y tamao, y no me
queda ms que agradecer a los dems miembros de la Mesa Directiva Nacional, quienes pusieron
todos sus talentos para lograr un evento de excelencia, a pesar de la crisis econmica, la influenza
y la tormenta tropical que nos ameniz los primeros das en Acapulco.
BALANCE CONGRESO XIII CONGRESO NACIONAL Y VII SIPAL
Informe Financiero del XIII Congreso Nacional de Biotecnologa y
Bioingeniera y del VII Simposio Internacional de Produccin de
Alcoholes y Levaduras
Dra. Mara Soledad Crdova Aguilar
Tesorera Nacional de la SMBB 2008 2010
cordova@ibt.unam.mx

Seleccin de sede
La seleccin de la sede para el XIII Congreso Nacional de Biotecnologa y Bioingeniera y VII
Simposio Internacional de Produccin de Alcoholes y Levaduras (SIPAL), se bas en varias
consideraciones, entre ellas, las encuestas realizadas, durante el pasado congreso de la SMBB,
as como en la opinin del SIPAL, respecto al lugar y fecha de realizacin de los eventos. Se hizo,
asimismo, un anlisis de costos de inscripcin y alojamiento normalizados en UDIS de seis
congresos anteriores (Fig. 1) celebrados en diferentes lugares por la SMBB, adems de evaluar las
dos mejores propuestas de sede obtenidas para este evento.
0
100
200
300
400
500
600
700
800
900
1995 1997 1999 2001 2003 2005 2007 2009
U
D
I
s
Ao/Congreso

Fig. 1. Comparacin de costos normalizados en UDIs de inscripcin () y alojamiento () en UDIS de los
congresos nacionales realizados de 1997 a 2009.
Considerando las dimensiones alcanzadas en las versiones ms recientes y la calidad
requerida para la subsiguiente realizacin, se seleccion como sede el Puerto de Acapulco, en el
estado Guerrero, Mxico, y el Hotel Fairmont Acapulco Princess, por las condiciones favorables
que ofreci en cuanto a precio de la estancia y uso de las facilidades existentes para este tipo de
eventos.
Cuotas de inscripcin, alojamiento y transporte
Como puede apreciarse en la Fig. 1, los costos por alojamiento en el hotel sede alcanzados en
esta ocasin fueron los ms bajos, slo comparables, en parte, con los del 2001. De igual forma,
es necesario hacer notar que, en vista de la situacin econmica vigente y con el fin de impulsar la
participacin del mayor nmero de asistentes posible, el comit organizador estableci que las

110
cuotas de inscripcin al congreso fueran 16 y 25% menores, en relacin a los dos congresos
previos de la SMBB (clculo en pesos corrientes), para Socio numerario/profesional y para
Profesional no socio, respectivamente. En la Fig. 1, se puede observar que los costos de
inscripcin para socios profesionistas y numerarios en esta ocasin fueron los ms bajos desde
1997.
Con respecto a las cuotas para estudiantes, como siempre y por poltica de la SMBB, fueron
preferenciales y bastante atractivas. Adems, con la misma cuota, se tuvo acceso al VII SIPAL.
As mismo, se consiguieron precios preferenciales para los congresistas hospedados en el Hotel
sede (Fairmont Acapulco Princess), los cuales fueron 50% menores que las tarifas normales,
incluyendo hospedaje, desayuno tipo buffet, impuestos y propinas de camaristas. Ambas
decisiones permitieron que tanto la asistencia al congreso y al simposio como el hospedaje en el
hotel sede superaran las expectativas.
Entre otros incentivos, hubo tambin oferta de hospedaje alterno en el Hotel CASA INN
Acapulco con precios muy convenientes con transporte al hotel sede. De igual forma, las tarifas de
transportacin area que se consiguieron con Mexicana de Aviacin tambin fueron especiales
para los asistentes al congreso, con un descuento del 25% sobre las tarifas normales, incluyendo
invitados, cnyuges e hijos de 12 a 20 aos.
Financiamiento
El Congreso Nacional de Biotecnologa es un evento financiado fundamentalmente por los
ingresos directos a la SMBB, donativos de diversas instituciones y aportaciones de proveedores
(Fig. 2). El mayor porcentaje (60%) de los ingresos totales fue por ingresos directos (Fig. 3), donde
el 74% correspondi a las cuotas de inscripcin. Esto significa que la asistencia al congreso per se
suministra recursos que le permiten la operacin del evento. No obstante que se requiere de otros
apoyos diversos para iniciar los trabajos de organizacin adems de mantener la calidad y
profesionalismo con la que se han desarrollado los ltimos congresos nacionales. Otros rubros
considerados dentro de los ingresos directos son las cuotas de membresa a la SMBB adems de
las ventas de stand SMBB y las cortesas obtenidas por contrato por la ocupacin en el Hotel sede,
resultado de las negociaciones directas entre la SMBB y el hotel sede.

60%
34%
6%
Ingresosdirectos
Institucionespblicas
Proveedores

Fig. 2. Distribucin de los Ingresos totales del XIII Congreso Nacional de Biotecnologa y Bioingeniera y del
VII Simposio Internacional de Produccin de Alcoholes y Levaduras (porcentajes sobre ingresos totales)

111
Para esta ocasin, se contact a los proveedores que han apoyado a la SMBB en ocasiones
anteriores y, a pesar de la difcil situacin por la que se ha atravesado durante los ltimos tiempos,
se consiguieron los apoyos econmicos de cinco compaas (Fig. 4) y las aportaciones de diversas
instituciones pblicas, como IBT-UNAM, IPICYT, UAM Iztapalapa y Cuajimalpa e Instituto de
Ingeniera-UNAM (Fig. 5). Como en ocasiones anteriores, se cont con el patrocinio de Yakult para
el Premio Alfredo Snchez Marroqun a las mejores tesis de licenciatura y de posgrado. Tres de las
contribuciones correspondieron a proveedores que montaron stands, mientras que las restantes
fueron donativos directos.

14%
74%
4%
3%
2%
3%
Ingresos varios
Membresas2009 2010(Enero mayo 2009)
Inscripciones(al29demayo 2009)
CursoPrecongreso
BloqueoHotel
VentasStand SMBB
Cortesasporcontrato Hotel

Fig. 3. Ingresos varios, incluyendo inscripciones al XIII Congreso y cuotas de membresa.

26%
25%
15%
15%
15%
4%
Proveedores
Yakult
DusherTechnology
MILLIPORE
APPLIKON
APPLIEDBIOSYSTEMS
3M

Fig. 4. Distribucin de los ingresos obtenidos por proveedores.

Como se observa en la Fig. 5, se obtuvieron financiamientos de forma relevante, de otras
fuentes como CONACyT, AgroBio y la Subsecretara de Educacin Superior de la SEP. Estos
donativos permitieron cubrir todos los compromisos adquiridos para los eventos y por otra parte y

112

2%
2%
6% 2% 1%
2%
6%
49%
30%
IBTUNAM
IPICyT
UAMIztapalapa
UAMCuajimalpa
UAEM
Instituto deIngeniera UNAM
AgroBio
SEP/SubsecretariadeEducacin
Superior
CONACyT

Fig. 5. Distribucin de los donativos obtenidos de las diversas instituciones pblicas que apoyaron
este congreso
por primera vez se becaron los 100 mejores trabajos sometidos de estudiantes de licenciatura y
posgrado, cuya seleccin fue con base a la evaluacin acadmica del resumen sometido por parte
del Comit Cientfico del Congreso. En este sentido, debe enfatizarse que ms del 65% de los
asistentes al evento fueron estudiantes provenientes de 85 universidades, institutos tecnolgicos y
centros de investigacin de todo el pas. Con los apoyos proporcionados por la SEP y AgroBio fue
posible becar con el alojamiento y desayuno, en el Hotel sede, a 100 estudiantes de toda la
Repblica Mexicana. Tambin es importante mencionar que la inclusin del VII Simposio del SIPAL
en el evento fue definitivamente favorable para lograr el apoyo de CONACyT.
Otras contribuciones fueron en especie, las cuales sirvieron de apoyo para algunas otras
actividades dentro del Congreso, tales como transporte de asistentes del hotel sede a la Costera,
descuentos en algunos locales para congresistas, apoyo del Municipio de Acapulco para algunos
eventos culturales y sociales y fundamentalmente, manifestamos nuestro ms sincero
agradecimiento a cada uno de los invitados al VII Simposio Internacional de Produccin de
Alcoholes y Levaduras, ya que todos ellos cubrieron su transportacin al evento. Gracias a su
generosidad y solidaridad, no hubo erogaciones de la SMBB por este concepto. Tambin
agradecemos a la Universidad Autnoma del Estado de Morelos y al CINVESTAV-IPN por su
valiosa colaboracin y apoyo. "Cabe mencionar que tambin se cont con el apoyo de la Ctedra
Jaques Senez (SMBB-UAMI-IRD Embajada de Francia en Mxico) para traer a un conferencista de
origen francs."
Operadora y otras acciones
Para la organizacin y ejecucin de los eventos, se cont con los servicios de International
Meeting Service (IMS), como operadora profesional, la cual se encarg de toda la operacin de
registro in situ, audio y video y logstica en general, as como la relacin con el hotel sede para
recepcin de invitados y realizacin de eventos culturales. Esta decisin fue tomada por el comit

113
organizador que pudo as dedicar mayor cantidad de tiempo a la supervisin de los aspectos
acadmicos del congreso.
En otro orden de acciones, se puso en operacin un sistema electrnico para automatizar la
inscripcin de los asistentes, lo cual permiti planear por anticipado los gastos inherentes y por lo
tanto, como se observa en la Fig. 6a, la inscripcin al congreso fue del 78 % antes del evento
mientras que el registro in situ slo tuvo un porcentaje del 22% (Fig. 6b). Dentro de las acciones
realizadas en beneficio de la asistencia de estudiantes al evento, se aceptaron inscripciones
anticipadas al congreso con descuento de algunos grupos de estudiantes organizados tales como
los de la ENCB y UPIBI del IPN, de la Universidad de Nuevo Len, entre otras, lo que correspondi
al 7% de las inscripciones previas al evento.
SOCIOESTUDIANTE
(GRUPO
7%
SOCIOESTUDIANTE
9%
ESTUDIANTE NOSOCIO
19%
SOCIOPROFESIONAL
26%
PROFESIONALNO
SOCIO
39%
6a. Inscripciones previas al congreso
SOCIOESTUDIANTE
9%
ESTUDIANTE
NOSOCIO
21%
SOCIOPROFESIONAL
28%
PROFESIONALNO
SOCIO
42%
6b. Inscripcin in situ

Fig. 6. (a) Inscripcin en lnea previa al Congreso (78% del total de inscritos al evento); (b) Inscripcin in situ
(22% del total de inscritos al evento).

Adems, se llev a cabo una promocin turstica basada en dar a conocer los diferentes
lugares de inters y atractivos del puerto con informacin detallada, la cual tambin estuvo
disponible en el portal de la SMBB. Los resultados de esta labor conjunta fueron altamente
positivos.
Balance final
En la Fig. 7, se presenta un resumen de los egresos del Congreso y del Simposio. Como se
observa en esta figura, la mayora de los gastos, como memorias, programas y portafolios, entre
otros, fueron erogaciones directas de los ingresos de la SMBB, ya que la situacin econmica que
nos afecta, ocasion que varios de los patrocinadores no nos apoyaran esta vez.
El XIII Congreso obtuvo un balance positivo, sin embargo, no con la holgura de otros aos. No
obstante, en la parte financiera no se registr ningn dficit, obtenindose un saldo a favor de
$133,240. Estos recursos han servido para cubrir los gastos normales de operacin de la SMBB
en meses subsecuentes. Del balance general puede apreciarse que la participacin y apoyo de los
socios y patrocinadores y en general de todos los asistentes, fue fundamental en el aspecto
econmico. Es deseable que en el futuro la calidad alcanzada en este evento pueda mantenerse o
mejorarse, tomando en consideracin el crecimiento que se espera en este campo de actividades
cientficas.

114
Convocatoria

115
0.9%
Programas
2.1%
Memorias
1.1%
Morrales
3.0%
ImpresionesCongreso
2.3%
Registroin
situ/stands/mamparas/escenog
rafa/audio/video
19.9%
Pasajes/vaticos
conferencistas
7.9%
Hotel/comidas/recesosdecaf
38.0%
LogsticaIMS
14.7%
SoporteSMBB/papelera/stand
3.9%
Curso procongreso
0.5%
Otrosgastos (culturales,
sociales,mudanza)
3.8%
Premio
ASM/Mejores
Tesis
1.7%

Fig. 7. Egresos registrados para el XIII Congreso Nacional y VII Simposio SIPAL

En vista de lo anterior debe hacerse hincapi en que es esencial solicitar a todos los socios
cubrir a tiempo sus membresas y por otra parte, la MDN deber buscar y plantear nuevas
estrategias que permitan recaudar fondos suficientes, con los cuales se pueda continuar con las
actividades ordinarias de la sociedad.


116

RESEA DEL PREMIO
ALFREDO SANCHEZ MARROQUIN 2009
Dra. Ana Carmela Ramos Valdivia
Subsecretaria MDN 2008 - 2010

Durante el ltimo da del XIII Congreso de la Sociedad Mexicana de Biotecnologa y
Bioingeniera y VII Simposio Internacional de Produccin de Alcoholes y Levaduras en la
ciudad de Acapulco, se realiz la ceremonia de premiacin a los galardonados con el
Premio Alfredo Snchez Marroqun, otorgados a las mejores tesis de Licenciatura,
Maestra y Doctorado. En esta ocasin, se cont con la presencia del Lic. Juan Pablo
Fueyo Gutirrez, en representacin del Sr. Toru Ogawa de la empresa Yakult, generoso
patrocinador del premio y que apoya a la SMBB en el reconocimiento a las tesis de mayor
calidad en Biotecnologa y Bioingeniera.
La Sociedad Mexicana de Biotecnologa y Bioingeniera (SMBB) ha instituido a partir
de 1999 el Premio Alfredo Snchez Marroqun a las mejores tesis en biotecnologa para
reconocer y estimular el esfuerzo de estudiantes formados en instituciones mexicanas en
carreras o posgrados afines a stas reas. A su vez, se ha decidido honrar a uno de los
pioneros de la biotecnologa en Mxico, acordando que este premio lleve el nombre del
Dr. Snchez Marroqun, quien fue un destacado profesor e investigador cientfico por ms
de seis dcadas.
Despus de haber evaluado 11 tesis de Licenciatura, 26 tesis de Maestra y 9 de
Doctorado, la Comisin de Premios conformada por la Dra. Amanda Glvez Mariscal, Dra.
Gabriela Seplveda, Dr. Carlos Regalado Gonzlez, Dr. Rafael Vzquez Duhalt y Dra.
Ana Carmela Ramos Valdivia, designaron como ganadora por la mejor tesis de
Licenciatura a la Q.F.B. Roco Zapata Bustos de la Universidad Autnoma de San Luis
Potos, Facultad de Ciencias Qumicas, por su trabajo Proliferacin y diferenciacin
celular de preadipocitos en Medio L15, bajo la direccin del Dr. Luis A. Salazar Olivo,
investigador de la Divisin de Biologa Molecular del Instituto Potosino de Investigacin
Cientfica y Tecnolgica, A.C (IPCIYT). Como mejor tesis de Maestra fue seleccionada la
realizada por la M. en C. Mabel Rodrguez Gonzlez de la Maestra en ciencias
PASM2009

117
Bioqumicas del Instituto de Biotecnologa de la Universidad Nacional Autnoma de
Mxico, con el ttulo Expresin de -latrotoxina recombinante activa de Latrodectus
mactans utilizando el sistema de clulas de insecto-baculovirus, bajo la direccin del Dr.
Roberto P. Stock Silberman. Como mejor tesis de doctorado, el jurado eligi a la de la
Dra. Mara del Pilar Escalante Minakata del Instituto Potosino de Investigacin Cientfica y
Tecnolgica, A.C , por el trabajo intitulado Aspectos qumicos y moleculares del proceso
de produccin de mezcal, realizado bajo la direccin de los doctores Antonio de Len
Rodrguez, Ana Paulina Barba de la Rosa y Martha Leticia Santos Martnez.
Para obtener el grado de Qumico
Farmacobilogo por la Universidad
Autnoma de San Luis Potos, en
su trabajo de tesis de Licenciatura,
Roco Zapata Bustos se propuso
determinar la utilidad del medio L15
para el cultivo in vitro de
preadipocitos de ratn y humanos,
comparando sus tasas de
proliferacin y de diferenciacin
adiposa con las mostradas por
otros medios utilizados
rutinariamente. De esta manera,
bajo la direccin del Dr. Luis A.
Salazar Olivo, la QFB Zapata
logr simplificar y disminuir los costos de las tcnicas para el cultivo celular, debido a que
el medio L15 no necesita de un amortiguador externo del pH ni de atmsferas especiales.
Este procedimiento para cultivar y preservar las clulas adiposas permite su rpida
expansin y la preservacin de su capacidad clonognica, con lo cual puede ser til este
medio como modelo para el desarrollo de mejores tcnicas de cultivo y la optimizacin de
clulas adiposas humanas como fuente de clulas troncales para su uso en medicina
regenerativa y otras posibles aplicaciones clnicas.
PASM2009

118
En el caso de la M. en C. Mabel Rodrguez Gonzlez, del IBT-UNAM se enfoc a la
clonacin y secuenciacin del gen de la o-latrotoxina de la araa Latrodectus mactans,
una de las 40 especies de viuda negra o araa capulina, distribuida en todo Mxico. El
veneno de esta araa consta de varios componentes, dentro de los que se encuentra una
protena de 130 kDa denominada
o-latrotoxina (oLTX), responsable
del envenenamiento en los
vertebrados mordidos por esta
araa. Para ello utiliz el sistema
de clulas de insecto-baculovirus,
subclonando el cADN de la oLTX
en el vector de transferencia
baculoviral pMelBacA y
cotransfectando esta construccin
a las clulas de insecto Sf9 junto
con ADN de baculovirus (Bac and
Blue System, Invitrogen),
obtenindose baculovirus
recombinantes que tienen insertado en su genoma la secuencia del cADN de la oLTX
mediante un proceso de recombinancin gentica. Al infectar clulas de insecto Hi5 con
los virus recombinantes, lograron expresar la oLTX, la cual se purific parcialmente
mediante cromatografa de intercambio aninico en un sistema de FPLC. Al inmunizar
conejos con la oLTX recombinante, se desarroll una respuesta de anticuerpos capaces
de reconocer al veneno nativo de L. mactans. Esto es relevante ya que la oLTX de L.
mactans recombinante fue utilizada como inmungeno sustituto del veneno en la
produccin del antiveneno Aracmyn. De esta forma, se elimin el muy riesgoso y poco
eficiente proceso de obtencin del veneno, con el cual se inmunizaban los fragmentos
F(ab)
2
de inmunoglobulinas policlonales de caballos del antiveneno Aracmyn lanzado al
mercado desde 1999 por el Instituto Biocln en colaboracin con el Instituto de
Biotecnologa de la UNAM.
PASM2009

119
Por su parte, la Dra. Mara del Pilar
Escalante Minakata, del Instituto Potosino
de Investigacin Cientfica y Tecnolgica,
A.C., realiz un estudio integral del
proceso de produccin del mezcal, que es
una bebida tradicional mexicana obtenida
a partir de la fermentacin de las azcares
del Agave. La Dra. Escalante se enfoc
tanto a una caracterizacin exhaustiva de
los componentes de la bebida, como a la
optimizacin del proceso de produccin.
Algunos componentes de la bebida
presentan propiedades biolgicas muy
interesantes como antioxidantes y
feromonas, entre otros. Adems, se
identificaron por primera vez los
componentes de la comunidad microbiana responsable de la fermentacin mediante el
uso de tcnicas de biologa molecular y se encontr que la poblacin de las bacterias
Zymomonas mobilis, Weissella sp. y Lactobacillus sp. es ms abundante que la de las
levaduras, lo que marca una diferencia respecto a otras bebidas como el tequila. As
mismo, se demostr que las condiciones de operacin durante la fermentacin afectan de
manera determinante la calidad y la composicin del mezcal, lo cual depende en gran
parte del conocimiento y control de la microbiota presente. La forma multi- e
interdisciplinaria con la que se abord este tema, ha sido la pauta para el estudio y
anlisis de otras bebidas alcohlicas tradicionales mexicanas.

PASM2009


Revista 2009 3

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Revista 2009 3

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BioTecnologa, Ao 2009, Vol. 13 No.

A. Estanque tipo circuito. B. Fotobioreactor Tubular.

RESEA XIII CONGRESO NACIONAL Y VII SIPAL

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