CENTRO UNIVERSITRIO SO CAMILO Curso de Biomedicina

Relatrio de Aula Prtica

So Paulo 2013

Relatrio de Aula prtica de Microbiologia clnica II apresentado ao curso de Biomedicina do Centro Universitrio So Camilo, Campus Ipiranga I, orientado pela docente prof, com o objetivo de descrever os mtodos utilizados em aula prtica.

So Paulo 2013

Mtodos IIdentificao de bacilos Gram - fermentadores de glicose

Rugai Modificado/ IAL- Este meio utilizado para identificar as principais espcies de Enterobactrias, Vbrios e Aeromonas, permitindo em um s tubo a leitura, das seguintes reaes: motilidade da bactria indicado pela turvao da lisina na base, lisina descarboxilase, fermentao da glicose em profundidade e da sacarose na superfcie do meio, produo de gs sulfdrico (H2S), gs em glicose, utilizao do aminocido L-triptofano (desaminao), hidrlise da uria e no tampo do tubo, um desenvolvimento de colorao avermelhada que indica a formao de indol. O meio IAL constitudo por duas

fases, superior e inferior, separadas por uma camada intermediria, chamada vascar, de cerca de 2 mm. EPM - O meio EPM contm os testes de fermentao e produo de gs a partir de glicose, produo de H 2S, hidrlise da uria e desaminao de triptofano. MILI - O Meio MILI contm os testes de motilidade, indol e descarboxilao de lisina. CITRATO - Este teste visa determinar se um microrganismo capaz de utilizar citrato como uma nica fonte de carbono para o seu metabolismo, resultando em uma alcalinidade no meio. As bactrias citrato positivas crescem usando sais de amnia como fonte de nitrognio, liberando amnia e consequentemente deixando o meio alcalino.

II-

Identificao de bacilos Gram no fermentadores de glicose

MEIO OF - Meio utilizado para a diferenciao de bacilos Gram-negativos quanto capacidade do microrganismo em utilizar os carboidratos pela via oxidativa ou fermentativa. O meio de OF contm uma alta concentrao de carboidratos (1%) e uma pequena concentrao de peptona (0,2%), que facilita a utilizao dos carboidratos de forma oxidativa pelos bacilos Gram negativos no fermentadores da glicose. So necessrios dois tubos para a prova de OF de glicose: um tubo aberto (sem leo) e um fechado (com leo). LISINA - Este teste visa determinar a capacidade de descarboxilar a lisina, por ao da enzima lisina descarboxilase. . GELATINA - O objetivo desta prova determinar a capacidade do microrganismo excretar uma enzima hidroltica extracelular capaz de degradar a gelatina (gelatinase). OXIDASE - Esta prova permite distinguir grupos de microorganismos tendo como base a atividade da enzima citocromo oxidase.A citocromo oxidase catalisa a oxidao de um citocromo reduzido pelo oxignio molecular, resultando na formao de H2O e de um citocromo oxidado.

LACTOSE- a finalidade deste teste determinar a capacidade de um microorganismo de hidrolisar a lactose incorporada em um meio de cultura com a produo de cido CALDO BASE DE MOELLER (PROVA DA UTILIZAO DOS AMINOCIDOS) - A prova consiste em trst u b o s c o n t e n d o c o m o b a s e o c a l d o d e s c a r b o x i l a s e d e M o e l l e r e f e c h a d o c o m l e o mineral. Em cada um dos tubos adicionado um aminocido diferente (lisina, arginina e ornitina), para deteco de enzimas especficas para estes su b s t r a t o s . A e n z i m a s descarboxilases hidrolisam o grupo carboxil (COOH) de aminocidos, formando aminasalcalinas e dixido de carbono. A reao especfica, cada aminocido descarboxiladopor uma enzima particular. MALTOSE tem por finalidade verificar a capacidade do microorganismo em fermentar a glicose.

RESULTADOS I- Identificao de bacilos Gram - fermentadores de glicose (Amostra A)

Rugai modificado / IAL

Indol- negativo Sacarose - positivo Urase negativo H2S negativo Fenilalanina- negativo Ferm. glicose positiva Lisina- negativo

EPM Glicose positivo Gas negativo H2S negativo Triptofanase negativo Urease negativo

MILI Indol negativo Lisina negativo Motilidade- mvel

CITRATO negativo

II-

Identificao de bacilos Gram no fermentadores de glicose (Amostra C)

Glicose aberta positivo Glicose fechada inalterada Lactose negativa Maltose negativa Lisina negativa Arginina positiva Controle positiva Gelatina - positiva

DISCUSSO

I- Identificao de bacilos Gram - fermentadores de glicose (Amostra A)

De acordo com o sistema numrico para identificao o nossa leitura resultou em: 3.4.3

A MacConkey =2 Oxidase = 1

B Glicose = 4 Maltose = 0 Lactose = 0 3 4

C Lisina = 0 Arginina = 2 Gelatina = 1 3

O resultado indica Pseudomonas fluorescens com confiana de 56,57% ou Pseudomonas aeruginosa com confiana de 43,36%. Sendo necessrio o teste de crescimento a 42 C para diferenciao, j que a P.fluorescens no cresce a 42C.

II-Identificao de bacilos Gram no fermentadores de glicose (Amostra C)

De acordo com os nossos resultados, chegamos a dois possveis resultados assinalados na tabela acima.

Sendo necessrios novos testes confirmatrios, como ortinina, ou repetir os testes de citrato e motilidade.