MEDIO INTERNO Y SANGUINEO

I.- OBJETIVOS:

a.- Determinar los efectos celulares por cambios en la composicin del medio interno. b.- Determinar los componentes sanguneos y sus funciones en la homeostasis corporal.

II.- MATERIALES:

1. Jeringa de 5 cm3 con aguja (N 21 22).

2.

1 Liga para extraccin de sangre.

3.

Gasa.

4.

Algodn.

5.

Alcohol yodado.

6.

6 lminas porta objetos.

7.

6 lminas cubre objetos.

8.

6 tubos de ensayo.

9.

1 pipeta de 1 ml.

10.

1 ampolla de suero fisiolgico (NaCl 0.9%).

11.

1 ampolla de agua destilada.

12.

1 ampolla de Hipersodio (NaCl 2,0%).

13.

un par de guantes por cada alumno.

14.

Un frasco de heparina.

15.

Un cobayo.

16.

Una jeringa de tuberculina con aguja hipodrmica.

17.

Un microscopio ptico.

III.-FUNDAMENTO TEORICO:

1.- Medio Interno: Las clulas que forman los diferentes tejidos es necesario que se pongan en contacto con la sangre para que puedan llevar a cabo su fisiologa. El medio interno se forma a partir de los capilares. En la sangre las clulas sanguneas van suspendidas en el plasma sanguneo, que supone aproximadamente una cifra de unos 3 litros. El medio interno supondr el lugar donde se lleven a cabo reacciones qumicas al mismo tiempo que ser el lugar por donde se produzca el paso de sustancias al interior de la clula. Los intercambios entre las clulas y el medio interno dependern de las diferentes presiones intracelulares y extracelulares que favorecern el paso de nutrientes en un sentido y en otro.

2.- Membrana celular: a) Concepto: La membrana plasmtica o celular es una estructura laminar que engloba a las clulas, define sus lmites y contribuye a mantener el equilibrio entre el interior (medio intracelular) y el exterior (medio extracelular) de stas. Adems, se asemeja a las membranas que delimitan los orgnulos de clulas eucariotas.

Est compuesta por una lmina que sirve de "contenedor" para el citosol y los distintos compartimentos internos de la clula, as como tambin otorga proteccin mecnica. Est

formada principalmente por fosfolpidos (fosfatidiletanolamina y fosfatidilcolina), colesterol, glcidos y protenas (integrales y perifricas). La principal caracterstica de esta barrera es su permeabilidad selectiva, lo que le permite seleccionar las molculas que deben entrar y salir de la clula. De esta forma se mantiene estable el medio intracelular, regulando el paso de agua, iones y metabolitos, a la vez que mantiene el potencial electroqumico (haciendo que el medio interno est cargado negativamente). Cuando una molcula de gran tamao atraviesa o es expulsada de la clula y se invagina parte de la membrana plasmtica para recubrirlas cuando estn en el interior ocurren respectivamente los procesos de endocitosis y exocitosis. Tiene un grosor aproximado de 7,5 nm y no es visible al microscopio ptico pero s al microscopio electrnico, donde se pueden observar dos capas oscuras laterales y una central ms clara. En las clulas procariotas y en las eucariotas osmtrofas como plantas y hongos, se sita bajo otra capa, denominada pared celular.

b) Composicin qumica:

Lpidos: El 98% de los lpidos presentes en las membranas celulares son anfipticos, es decir que presentan un extremo hidrfilo (que tiene afinidad e interacciona con el agua) y un extremo hidrofbico (que repele el agua). Los ms abundantes son los fosfoglicridos (fosfolpidos) y los esfingolpidos, que se encuentran en todas las clulas; le siguen los glucolpidos, as como esteroides (sobre todo colesterol). Estos ltimos no existen o son escasos en las membranas plasmticas de las clulas procariotas. Existen tambin grasas neutras, que son lpidos no anfipticos, pero slo representan un 2% del total de lpidos de membrana.

Protenas: El porcentaje de protenas oscila entre un 20% en la vaina de mielina de las neuronas y un 70% en la membrana interna mitocondrial;1 el 80% son intrnsecas, mientras que el 20% restantes son extrnsecas.

Las protenas son responsables de las funciones dinmicas de la membrana, por lo que cada membrana tiene una dotacin muy especfica de protenas; las membranas intracelulares tienen una elevada proporcin de protenas debido al elevado nmero de actividades enzimticas que albergan. En la membrana las protenas desempea diversas funciones: transportadoras, conectoras (conectan la membrana con la matriz extracelular o con el interior), receptoras (encargadas del reconocimiento celular y adhesin) y enzimas.

Glcidos: Estn en la membrana unida covalentemente a las protenas o a los lpidos. Pueden ser polisacridos u oligosacridos. Se encuentran en el exterior de la membrana formando el glicocalix. Representan el 8% del peso seco de la membrana plasmtica. Sus funciones principales son dar soporte a la membrana y el reconocimiento celular (colaboran en la identificacin de las seales qumicas de la clula).

c) Estructura: Bicapa lipdica: El orden de las cabezas hidroflicas y las colas hidrofbicas de la bicapa lipdica impide que solutos polares, como aminocidos, cidos nucleicos, carbohidratos, protenas e iones, difundan a travs de la membrana, pero generalmente permite la difusin pasiva de las molculas hidrofbicas. Esto permite a la clula controlar el movimiento de estas sustancias va complejos de protena transmembranal tales como poros y caminos, que permiten el paso de glucosa e iones especficos como el sodio y el potasio.

Protenas: Protenas integrales. Embebidas en la bicapa lipdica, atraviesan la membrana una o varias veces, asomando por una o las dos caras (protenas transmembrana); o bien mediante enlaces covalentes con un lpido o un glcido de la membrana. Su aislamiento requiere la ruptura de la bicapa.

Protenas perifricas. A un lado u otro de la bicapa lipdica, pueden estar unidas dbilmente por enlaces no covalentes. Fcilmente separables de la bicapa, sin provocar su ruptura.

d) Funciones: La funcin bsica de la membrana plasmtica es mantener el medio intracelular diferenciado del entorno. Esto es posible gracias a la naturaleza aislante en medio acuoso de la bicapa lipdica y a las funciones de transporte que desempean las protenas. La combinacin de transporte activo y transporte pasivo hacen de la membrana plasmtica una barrera selectiva que permite a la clula diferenciarse del medio. Los esteroides, como el colesterol, tienen un importante papel en la regulacin de las propiedades fsico-qumicas de la membrana regulando su resistencia y fluidez.

e) Permeabilidad: La permeabilidad de las membranas es la facilidad de las molculas para atravesarla. Esto depende principalmente de la carga elctrica y, en menor medida, de la masa molar de la molcula. Pequeas molculas y molculas con carga elctrica neutra pasan la membrana ms fcilmente que elementos cargados elctricamente y molculas grandes. Adems, la membrana es selectiva, lo que significa que permite la entrada de unas molculas y restringe la de otras.

La permeabilidad depende de los siguientes factores:

Solubilidad en los lpidos: Las sustancias que se disuelven en los lpidos (molculas hidrfobas, no polares) penetran con facilidad en la membrana dado que est compuesta en su mayor parte por fosfolpidos.

Tamao: la mayor parte de las molculas de gran tamao no pasan a travs de la membrana. Slo un pequeo nmero de molculas no polares de pequeo tamao pueden atravesar la capa de fosfolpidos.

Carga: Las molculas cargadas y los iones no pueden pasar, en condiciones normales, a travs de la membrana. Sin embargo, algunas sustancias cargadas pueden pasar por los canales proteicos o con la ayuda de una protena transportadora.

3.- Mecanismos de transporte de membranas:

a) Concepto: En biologa celular se denomina transporte de membrana al conjunto de mecanismos que regulan el paso de solutos, como iones y pequeas molculas, a travs de membranas plasmticas, esto es, bicapas lipdicas que poseen protenas embebidas en ellas. Dicha propiedad se debe a la selectividad de membrana, una caracterstica de las membranas celulares que las faculta como agentes de separacin especfica de sustancias de distinta ndole qumica; es decir, la posibilidad de permitir la permeabilidad de ciertas sustancias pero no de otras

b) Tipos: Difusin simple: Como se mencion anteriormente, la difusin pasiva es un fenmeno espontneo puesto que suceden incrementando la entropa del sistema, y disminuyendo la energa libre.5 No requiere de la intervencin de protenas de membrana, pero s de las caractersticas de la sustancia a transportar y de la naturaleza de la bicapa.

Para el caso de una membrana fosfolipdica pura, la velocidad de difusin de una sustancia depende de su: Gradiente de concentracin. Hidrofobicidad. Tamao. Carga, si la molcula posee carga neta.

Difusin facilitada: Bajo el mismo principio termodinmico que en el caso de la difusin simple, es decir, que el soluto a transportar lo hace a favor de gradiente, la difusin facilitada opera de modo similar, pero est facilitada por la existencia de protenas canal, que son las que facilitan el transporte de, en este caso, agua o algunos iones y molculas hidrfilas. Estas protenas integrales de membrana conforman estructuras en forma de poro inmersas en la bicapa, que dejan un canal interno hidroflico que permite el paso de molculas altamente lipfobas como las mencionadas anteriormente. La apertura de este canal interno puede ser constitutiva, es decir, continua y desregulada, en los canales no regulados, o bien puede requerir una seal que medie su apertura o cierre: es el caso de los canales regulados.

Transporte activo: En l se efecta un transporte en contra del gradiente de concentracin o electroqumico y, para ello, las protenas transportadoras implicadas consumen energa metablica (comnmente adenosn trifosfato).

La hidrlisis del compuesto que acta como moneda energtica puede ser muy evidente, como en el caso de los transportadores que son ATPasas, o puede tener un origen indirecto: por ejemplo, los cotransportadores emplean gradientes de determinados solutos para impulsar el transporte de un determinado compuesto en contra de su gradiente, a costa de la disipacin del primer gradiente mencionado. Pudiera parecer que en este caso no interviene un gasto energtico, pero no es as puesto que el establecimiento del gradiente de la sustancia transportada colateralmente al compuesto objetivo ha requerido de la hidrlisis de ATP en su generacin mediante unos determinados tipos de protenas denominados bombas.

Por ello, se define transporte activo primario como aqul que hidroliza ATP de forma directa para transportar el compuesto en cuestin, y transporte activo secundario como aqul que utiliza la energa almacenada en un gradiente electroqumico.

Bombas: Una bomba es una protena que hidroliza ATP para transportar a travs de una membrana un determinado soluto a fin de generar un gradiente electroqumico que confiera unas caractersticas de potencial a sta. Dicho gradiente posee un inters por s mismo para la definicin del estado de la clula, como es el potencial de Nernst, pero interviene activamente en el transporte de sustancias a travs de la membrana, que es el tema aqu tratado, puesto que aporta un aumento de entropa al sistema en caso de cotransporte de sustancias que se encuentran en trasiego en contra de su gradiente. Una de las bombas de mayor relevancia en clulas animales es la bomba sodio-potasio, que opera mediante el mecanismo siguiente:

1.

Unin de tres Na+ a sus sitios activos.

2. Fosforilacin de la cara citoplasmtica de la bomba que induce a un cambio de conformacin en la protena. Esta fosforilacin se produce por la transferencia del grupo terminal del ATP a un residuo de cido asprtico de la protena. 3. El cambio de conformacin hace que el Na+ sea liberado al exterior. 4. Una vez liberado el Na+, se unen dos molculas de K+ a sus respectivos sitios de unin de la cara extracelular de la protena. 5. La protena se desfosforila producindose un cambio conformacional de esta, lo que produce una transferencia de los iones de K + al citosol.

4.- PROCEDIMIENTO: a. - Se combina suero Fisiolgico (NaCl AL 0,9%) o Hipersodio (NaCl 2,0%) con agua destilada para obtener 6 soluciones:

1. 2,5 cm3 de NaCl al 0,3%:

2. 2,5 cm3 de NaCl al 0,6%:

3. 2,5 cm3 de NaCl al 0,9%:

4. 2,5 cm3 de NaCl al 1,2%:

5. 2,5 cm3 de NaCl al 1,5%:

6. 2,5 cm3 de NaCl al 2,0%:

Cada solucin se colocara en un tubo de ensayo.

b. Se selecciona un alumno, solo el manipula la sangre.

c. Se extrae 3,0 cm3 de sangre del cobayo con una jeringa hepanirizada.

d. Se procede a combinar 0,5 cm3 de sangre con cada solucin de NaCl preparada, contenida en los tubos de ensayo (Solucin Final).

e. Se procede a extender una gota, de la solucin final, sobre un portaobjeto, es cubierto y se observa al microscopio a 400X.

f. Se observa por 30 minutos y se describen los cambios producidos en los glbulos rojos, blancos y plaquetas al 1, 15 y 30 minutos.

g. Se prepara una nueva lmina cada 15 minutos.

BASE DE DATOS: ASPECTO GLOBULAR

Soluciones De NaCl

Tiempo que Ocurre el cambio

Caractersticas cada 15 minutos

Medio interno (osmolaridad de la solucin final)

1.

El glbulo rojo es de forma esferica.

2. Hay un aumento en Agua destilada 15 minutos cuanto a su volumen. 3. Hay una lisis celular debido al medio < 150 miliosmoles/kg

hipotonico. 1. La celula se hincha en un 60% de su forma 0,3% 15 minutos original. 2. En cuanto a su volumen aumenta en un 60 %. 100 miliosmoles

1. La celula tiene forma

de disco biconcavo de 0,9% 15 minutos perfil. 300 miliosmoles

2. No hay ningun cambio

respecto a la clula. 1. El glbulo rojo se presenta totalmente arrugado. 2. Su volumen est reducido considerablemente. 3. La clula experimentar una crenacin.

2,0%

15 minutos

666,6 miliosmoles

INFORME DE LA PRCTICA

1.- Defina los siguientes conceptos: a) Estructura de la membrana celular: La membrana plasmtica o citoplasmtica es una estructura laminar que engloba a las clulas, define sus lmites y contribuye a mantener el equilibrio entre el interior y el exterior de stas. Adems se asemeja a las membranas que delimitan los orgnulos de clulas eucariotas. La composicin de la membrana plasmtica vara entre clulas dependiendo de la funcin o del tejido en la que se encuentren, pero se puede estudiar de forma general. La membrana plasmtica est compuesta por una doble capa de fosfolpidos, por protenas unidas no covalentemente a esa bicapa, e hidratos de carbono unidos covalentemente a lpidos o protenas. Las molculas ms numerosas son las de lpidos, ya que se cree que por cada 50 lpidos hay una protena. Sin embargo, las protenas, debido a su mayor tamao, representan aproximadamente el 50% de la masa de la membrana. b) Funciones de la membrana celular: La membrana celular funciona como una barrera semipermeable, permitiendo el paso de pocas molculas y manteniendo la mayor parte de los productos producidos dentro de ella. Proteccin Ayudar a la compartimentalizacin subcelular Regular el transporte desde y hacia la clula y de los dominios subcelulares Servir de receptores que reconocen seales de determinadas molculas y transducir la seal al citoplasma. Permitir el reconocimiento celular. Proveer sitios de anclaje para los filamentos del citoesqueleto o los componentes de la matriz extracelular lo que permite, entre otras, el mantenimiento de la forma celular Servir de sitio estable para la catlisis enzimtica. Proveer de "puertas" que permitan el pasaje travs de las membranas de diferentes clulas (gap junctions) Regular la fusin de la membrana con otra membrana por medio de uniones ( junctions) especializadas Permitir direccionar la motilidad celular

c) Mecanismo de transporte activo celular: El transporte activo requiere un gasto de energa para transportar la molcula de un lado al otro de la membrana, pero el transporte activo es el nico que puede transportar molculas contra un gradiente de concentracin, al igual que la difusin facilitada el transporte activo esta limitado por el numero de protenas transportadoras presentes. Son de inters dos grandes categoras de transporte activo, primario y secundario. El transporte activo primario usa energa (generalmente obtenida de la hidrlisis de ATP), a nivel de la misma protena de membrana produciendo un cambio conformacional que resulta en el transporte de una molcula a travs de la protena. El ejemplo mas conocido es la bomba de Na+/K+. La bomba de Na+/K+ realiza un contratransporte("antyport") transporta K+ al interior de la clula y Na+ al exterior de la misma, al mismo tiempo, gastando en el proceso ATP. El transporte activo secundario utiliza la energa para establecer un gradiente a travs de la membrana celular, y luego utiliza ese gradiente para transportar una molcula de inters contra su gradiente de concentracin. Un ejemplo de ese mecanismo es el siguiente: Escherichia coli establece un gradiente de protones (H+) entre ambos lados de la membrana utilizando energa para bombear protones hacia afuera de la clula. Luego estos protones se acoplan a la lactosa (un azcar que sirve de nutriente al microorganismo) a nivel de la lactosa-permeasa (otra protena de transmembrana), la lactosa permeasa usa la energa del protn movindose a favor de su gradiente de concentracin para transportar la lactosa dentro de la clula. Este transporte acoplado en la misma direccin a travs de la membrana celular se denomina cotransporte ("symport"). Escherichia coli utiliza este tipo de mecanismo para transportar otros azucares tales como ribosa y arabinosa, como as tambin numerosos aminocidos. d) Medio Interno y funciones:
El medio interno se forma a partir de los capilares. En la sangre las clulas sanguineas van suspendidas en el plasma sanguineo, que supone aproximadamente una cifra de unos 3 litros. El medio interno supondr el lugar donde se lleven a cabo reacciones qumicas al mismo tiempo tiempo que ser el lugar por donde se produzca el paso de sustancias al interior de la clula. Los intercambios entre las clulas

y el medio interno depender de las diferentes presiones intracelulares y extracelulares que favorecern el paso de nutrientes en un sentido y en otro.

Elementos ms importantes del M.I: - Plasma sanguneo y la linfa: La sangre tiene 2 elementos, en general, los elementos figurados y el plasma sanguneo. En el plasma viajan los elementos figurados, los elementos figurados de este plasma sanguneo poseen un aislamiento llamado membrana plasmtica, que asla el citoplasma (medio intracelular) de la clula del, medio interno, por lo tanto, el medio interno esta por fuera de la clula. Entonces el plasma protege a los elementos figurados de los cambios que se producen en el medio exterior. Este compartimiento tiene la particularidad de ser vascular, es decir, va por vasos sanguneos que recorren todo el cuerpo a travs del intersticio y prcticamente llegan a todas las clulas del cuerpo. La linfa, muy parecida al plasma, es otro compartimiento vascular que forma parte del medio interno - Compartimiento intersticial: es aquel que se encuentra entre las clulas de todos nuestros tejidos - Compartimentos transcelulares: Son: Las cpsulas articulares, El H. acuoso y el H. vtreo que se encuentran encerrados en cpsulas, La endolinfa y la perilinfa en el odo interno e) Osmolaridad del medio interno, intracelular y electrolitos ms importantes: Varia entre 280 290 mOsm./Kg..

La osmorregulacin sangunea es llevada cabo por el

cerebro, el corazn y el rin. La finalidad es mantener una osmolaridad de 300 mOsm/L (300 particulas de soluto por cada litro de agua de la sangre), nivel ptimo para que las funciones vitales se realicen normalmente. La osmorregulacin celular es llevada a cabo por la bomba de sodio-potasio de las membranas celulares, y el sistema de sntesis de osmolitos.
En fisiologa, los iones primarios de electrlitos son sodio (Na+), potasio (K+), calcio (CA2+), magnesio (Magnesio2+), cloruro (Cl), fosfato (PO43), y carbonato del hidrgeno (HCO3). Los smbolos de la carga elctrica del ms (+) y del menos () indican que la sustancia en la

pregunta es inica en naturaleza y tiene imbalanced la distribucin de electrones. ste es el resultado de la disociacin qumica. El tejido fino y las neuronas del msculo se consideran los tejidos finos elctricos del cuerpo. Los msculos y las neuronas son activados por actividad del electrlito entre lquido extracelular o lquido intersticial, y lquido intracelular. Los electrlitos pueden entrar en o dejar la membrana de la clula a travs de las estructuras especializadas de la protena encajadas en membrana del plasma llamado canales del ion. Por ejemplo, contraccin del msculo es dependiente sobre la presencia del calcio (CA 2+), sodio (Na+), y potasio (K+). Sin los suficientes niveles de estos electrlitos dominantes, la debilidad del msculo o las contracciones severas del msculo puede ocurrir. f) Edema: El edema (o hidropesa) es la acumulacin de lquido en el espacio tisular intercelular o intersticial, adems de en las cavidades del organismo. El edema se considera un signo clnico. Se revisa de forma interdiaria (da por medio) y, cuando es factible, se mide el contorno de la zona afectada con una cinta mtrica (en milmetros). Este efecto es fcilmente apreciable cuando se produce una quemadura solar, ya que se produce edema y enrojecimiento. Despus de apretar con el dedo sobre la quemadura, esa zona se queda blanca durante un tiempo hasta que vuelve a su estado anterior. Sus causas principales son:

Aumento de la presin hidrosttica de la sangre en la microcirculacin. Aumento de la permeabilidad capilar, por dao vascular (por ejemplo, en quemaduras o traumatismos) o debido a la presencia de inflamacin Disminucin del nivel de protenas plasmticas, sobre todo albmina

Bloqueo del drenaje linftico (linfedema).

g) Crenacin: La crenacin es la contraccin de las clulas de los animales, particularmente los globulos rojos en una solucin hipertnica, debido a la prdida de agua a travs de smosis. Este encogimiento provoca el detenimiento de las funciones propias de la clula. Esto puede llevar a que la clula no tenga un buen funcionamiento e incluso muera. h) Agua corporal total:
El agua corporal total (ACT) es un componente fundamental de la composicin corporal esta representado por el 60% a 70% del peso corporal, que est influida por muchos estados fisiolgicos y pato fisiolgicos. El conocimiento de ACT de un paciente pueden contribuir al diagnstico y manejo. Una evaluacin rpida de lquidos corporales situacin se puede hacer mediante anlisis de bioimpedancia (BIA), pero la conversin de la reactancia y la resistencia del tejido en medidas absolutas de lquidos corporales, sobre todo en estados de enfermedad, pueden ser poco fiables.