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ORGANISMO DE ACREDITACIN ECUATORIANO - OAE

CRITERIOS ESPECFICO
PARA LA ACREDITACIN DE LABORATORIOS QUE
REALIZAN ENSAYOS MICROBIOLGICOS

OAE CR EA01 R00

ORGANISMO DE ACREDITACIN ECUATORIANO - OAE
CRITERIOS ESPECFICOS
PARA LA ACREDITACIN DE LABORATORIOS QUE REALIZAN ENSAYOS
MICROBIOLGICOS

OAE CR EA01 R00

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Actualizacin

Revisin Fecha Modificaciones

El presente documento se distribuye como copia no controlada. Debe consultar su revisin en
la pgina web del OAE (www.oae.gov.ec)

Organismo de Acreditacin Ecuatoriano - OAE
OAE CR EA01 R00 Criterios Especficos para la acreditacin de laboratorios que realizan ensayos
microbiolgicos
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PRESENTACIN

Esta gua es la traduccin literal del documento EA-4/10 Accreditation for microbiological
Laboratories conjuntamente por EURACHEM y EA y aprobado en ambas organizaciones.

Los laboratorios de anlisis microbiolgicos que deseen ser acreditados, debern cumplir los
requisitos generales establecidos en la norma NTE INEN ISO/IEC 17025 y los criterios
establecidos en el documento CGA-OAE-LEC Criterios generales para la acreditacin de
laboratorios de ensayo y calibracin segn la norma NTE INEN ISO/IEC 17025. As mismo,
el laboratorio deber tener en cuenta las directrices contenidas en el presente documento.

NDICE

1 Introduccin y contenido del documento 4
2 Personal 4
3 Condiciones ambientales 5
3.1 Locales 5
3.2 Condiciones ambientales 7
3.3 Higiene 7
4 Validacin de mtodos de ensayo 8
5 Incertidumbre de medida 9
6 Equipos, mantenimiento calibracin y verificacin de su funcionamiento 10
6.1Mantenimiento 10
6.2 Calibracin y verificacin de equipos 11
7 Reactivos y medios de cultivo 13
7.1 Reactivos 13
7.2 Medios preparados internamente 13
7.3 Medios listos para su uso 14
7.4 Etiquetado 14
8 Materiales de referencia y cepas de referencia 15
8.1 Materiales de referencia 15
8.2 Cepas de referencia 15
9 Muestreo 16
10 Manipulacin e identificacin de muestras 16
11 Eliminacin de residuos contaminados 17
12 Aseguramiento de la calidad de los resultados/control de calidad 17
12.1 Control de calidad interno 17
12.2 Control de calidad externo (ensayos de aptitud) 18
13 Informes de los ensayos 18
Anexo I Glosario de trminos 20
Anexo II Referencias bibliogrficas 28
Anexo III Utilizacin de cepas de referencia 23
Anexo IV Directrices para la calibracin y los controles de calibracin 24
Anexo V Directrices para la validacin y verificacin de equipos 25
Anexo VI Directrices para el mantenimiento de equipos 27

microbiolgicos
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1. INTRODUCCIN Y CONTENIDO DEL DOCUMENTO

Los requisitos generales para la acreditacin aparecen definidos en la Norma Internacional
Requisitos generales para la competencia de laboratorios de ensayo y calibracin
(ISO/IEC 17025 1 ed., 1999), en lo sucesivo la norma NTE INEN ISO/IEC 17025. Todos esos
requisitos deben ser cumplidos por los laboratorios que deseen ser acreditados.

El presente documento complementa los requisitos establecidos en la norma NTE INEN
ISO/IEC 17025 con directrices especficas tanto para los evaluadores como para los
laboratorios que realizan anlisis microbiolgicos. Proporciona directrices detalladas para la
interpretacin de la norma NTE INEN ISO/IEC 17025 por todos aquellos que realizan anlisis
de materiales, productos y substancias. Estas directrices son aplicables a todo tipo de
mediciones objetivas, ya sean o no rutinarias, o como parte de actividades de investigacin y
desarrollo. Aunque se han escrito pensado especialmente en anlisis microbiolgicos de
alimentos y medio ambiente, los principios generales pueden aplicarse tambin a otras reas.
La norma NTE INEN ISO/IEC 17025 sigue siendo el documento que prevalece y, en caso de
conflicto constituir la base para su resolucin por parte de OAE. Las directrices contenidas
en el presente documento pueden utilizarse tambin por aquellos laboratorios que trabajan
con otras normas de calidad, como BPL, BPF o BPC.

El presente documento puede considerarse como un Documento de aplicacin para los
anlisis microbiolgicos segn se establece en el Anexo B de la norma NTE INEN ISO/IEC
17025. Este documento ha sido elaborado por OAE como una forma de promover la
acreditacin de laboratorios de anlisis microbiolgicos.

Se considera que los anlisis microbiolgicos incluyen pruebas de esterilidad, deteccin,
aislamiento, recuento e identificacin de microorganismos (virus, bacterias, hongos y
protozoos) y sus metabolitos en diferentes materiales y productos, o cualquier tipo de ensayo
en el que se utilicen microorganismos como parte de un sistema de deteccin, as como la
utilizacin de microorganismos para ensayos ecolgicos. De ah se deduce que algunas de
las directrices contenidas en el presente documento, como las referentes a la bioseguridad de
los laboratorios, tendrn que ser interpretadas en consecuencia. Este documento puede servir
tambin de orientacin para los laboratorios que utilizan tcnicas en reas relacionadas con la
microbiologa, como bioqumica, biologa molecular y cultivos celulares, aunque esos
laboratorios pueden tener que cumplir otros requisitos adicionales.

El presente documento trata sobre la calidad de los resultados de los ensayos, sin abordar
especficamente aspectos relacionados con la salud y la seguridad. No obstante, los
laboratorios deben cumplir las prcticas de la legislacin nacional vigente en materia de salud
y seguridad. Es importante recordar que, las cuestiones relacionadas con la salud y la
seguridad pueden influir en la calidad de los ensayos y el laboratorio tiene que tener este
hecho en cuenta.

En el Anexo I puede encontrarse un glosario con las definiciones de los trminos utilizados en
este documento.

2. PERSONAL
NTE INEN ISO/IEC 17025, clusula 5.2

Los anlisis microbiolgicos deben ser realizados o supervisados por una persona con
experiencia y con titulacin superior en microbiologa o equivalente. Se admitirn otras
microbiolgicos
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titulaciones siempre que el personal tenga una amplia experiencia relacionada con el alcance
de acreditacin del laboratorio. El personal debe tener la necesaria experiencia profesional
prctica para que se le permita realizar sin supervisin trabajos cubiertos por el alcance de la
acreditacin o se considere que tiene experiencia suficiente como para supervisar el trabajo
acreditado. Algunas disposiciones especficas de la legislacin nacional pueden sobrepasar
las directrices contenidas en este documento.

Si el laboratorio incluye opiniones e interpretaciones de los resultados de los ensayos en sus
informes, stas deben ser realizadas por personal autorizado con experiencia suficiente y con
conocimientos relacionados con la aplicacin especfica, incluyendo, por ejemplo, requisitos
legislativos y tecnolgicos y criterios de aceptabilidad.

La direccin del laboratorio debe asegurar que todo el personal haya recibido formacin
adecuada para que sean competentes en la realizacin de los ensayos y en el manejo de los
equipos. Dicha formacin incluir entrenamiento en tcnicas bsicas, como preparacin de
placas, recuento de colonias, tcnicas aspticas, etc., y la aceptabilidad se determinar
aplicando criterios objetivos. El personal slo podr realizar anlisis de muestras cuando se
haya reconocido su competencia para hacerlo, o cuando lo haga bajo la supervisin
adecuada. Se comprobar con criterios objetivos que el personal sigue siendo competente y
se proporcionar de nuevo formacin siempre que sea necesario.

Cuando un mtodo o tcnica no se utilice de manera regular, puede que sea necesario
verificar la competencia del personal antes de realizar el ensayo. Se establecer y
documentar el intervalo crtico entre la realizacin de sucesivos ensayos. La interpretacin
de los resultados de los ensayos para la identificacin y verificacin de microorganismos
depende en gran medida de la experiencia del analista que realiza el ensayo y debe vigilarse
peridicamente con cada analista.

En algunos casos, puede que sea ms apropiado relacionar la competencia con una tcnica o
instrumento en particular, ms que con mtodos.

3. CONDICIONES AMBIENTALES

3.1 Locales

Un laboratorio suele tener reas de ensayo (dnde se realizan anlisis
microbiolgicos especficos y actividades relacionadas) y reas auxiliares (recepcin,
pasillos, oficinas de administracin, guardarropas y aseos, almacenes, archivos, etc.).
En general, existen requisitos ambientales especficos para las reas de ensayo.

Dependiendo del tipo de ensayos que se realicen, el acceso al laboratorio microbiolgico
debe restringirse al personal autorizado. Cuando existan este tipo de restricciones, el
personal debe conocer:

a. el uso restringido de una determinada rea;
b. las restricciones impuestas al trabajo que puede realizarse en dichas reas;
c. las razones para imponer esas restricciones;
d. los niveles de contaminacin apropiados.

El laboratorio debe tomar las medidas necesarias para reducir al mnimo el riesgo de
contaminacin cruzada, siempre que dicho riesgo sea importante por el tipo de
microbiolgicos
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ensayos realizados. Este objetivo puede conseguirse, por ejemplo, mediante la
adopcin de las siguientes medidas:
a. construir el laboratorio conforme a un diseo 'sin camino de regreso;
b. realizar los procedimientos de una manera secuencial utilizando medidas
apropiadas para asegurar la integridad de los ensayos y las muestras (por ejemplo,
utilizando recipientes hermticos);
c. separar las actividades en el tiempo o en el espacio.

En general, es conveniente que existan reas separadas o claramente designadas
para las siguientes actividades:

recepcin y almacenamiento de muestras;
preparacin de muestras (por ejemplo, debe utilizarse un rea separada para la
preparacin de productos en polvo que pueden estar muy contaminados);
examen de muestras, incluyendo su incubacin;
mantenimiento de microorganismos de referencia;
preparacin de medios y equipos, incluyendo su esterilizacin;
verificacin de la esterilidad;
descontaminacin.

El rea de lavado (despus de la descontaminacin) puede compartirse con otras partes del
laboratorio siempre que se adopten las debidas precauciones para evitar la transferencia de
trazas de substancias que podran afectar negativamente al crecimiento microbiano. La
necesidad de una separacin fsica debe juzgarse considerando las actividades especficas
del laboratorio (por ejemplo, nmero de ensayos realizados, tipo de ensayos, etc.).

Los equipos del laboratorio no deben moverse habitualmente entre las distintas reas, para
evitar una contaminacin cruzada accidental. En el laboratorio de biologa molecular debe
disponerse de pipetas, puntas, centrifugadoras, tubos, etc. de uso exclusivo para cada rea
de trabajo (reas de trabajo con una carga baja-media-alta de ADN).

Las reas de trabajo deben ser suficientemente espaciosas como para poder
mantenerse limpias y ordenadas. El espacio requerido depender del volumen de
anlisis realizados y de la organizacin interna del laboratorio. Dicho espacio tendr
que cumplir los requisitos de la legislacin nacional, siempre que sta exista.

Las reas de trabajo deben estar debidamente ventiladas y mantenidas a una
temperatura adecuada. Esto puede conseguirse con ventilacin natural o forzada, o
mediante el uso de aire acondicionado. Cuando se utilice aire acondicionado, se
emplearn unos filtros adecuados, que tendrn que inspeccionarse, mantenerse y
reponerse segn el tipo de trabajo realizado.

La contaminacin puede reducirse adoptando las siguientes medidas:

superficies lisas en paredes, techos, suelos y mesas de trabajo (se considera que
una superficie es lisa cuando puede limpiarse fcilmente). No se recomienda el
empleo de madera como material de revestimiento;
uniones cncavas entre suelos, paredes y techos;
apertura mnima de ventanas y puertas mientras se estn realizando los ensayos;
instalacin de persianas externas;
microbiolgicos
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fcil acceso para la limpieza de las persianas internas cuando sea imposible
instalarlas en el exterior;
las tuberas que transportan lquidos no deben pasar por encima de las superficies
de trabajo salvo que estn provistas de un revestimiento hermticamente sellado;
filtros para el polvo en las entradas de aire del sistema de ventilacin;
instalaciones de lavamanos de accionamiento no manual;
armarios hasta el techo;
evitar las maderas rugosas y sin revestir;
superficies de madera de instalaciones y accesorios debidamente selladas;
materiales y equipos colocados de forma que se facilite su limpieza;
ausencia de mobiliario, documentos u objetos que no sean los estrictamente
necesarios para la realizacin de los ensayos.

Esta lista no es exhaustiva, y no todos los ejemplos podrn aplicarse en todas las
situaciones.

Lo ideal es que los techos sean lisos y con iluminacin empotrada. Cuando esto no
sea posible (como ocurre con techos suspendidos e iluminacin colgante), el
laboratorio debe disponer de evidencias documentadas demostrando que controla
cualquier riesgo para la higiene y que dispone de medios eficaces para superar esos
riesgos, por ejemplo en el programa de limpieza e inspeccin.

Cuando los laboratorios estn situados en fbricas, el personal debe ser consciente
del peligro de contaminacin de las reas de produccin y demostrar que se han
adoptado las medidas apropiadas para evitar que eso ocurra.

3.2 Condiciones ambientales

El laboratorio debe establecer un programa adecuado de vigilancia de las condiciones
ambientales que incluya, por ejemplo, el uso de placas de sedimentacin y frotis de
superficies. Se asignarn unos recuentos mximos de microorganismos que se
consideran aceptables y existir un procedimiento documentado en el que se
describirn las medidas a tomar para corregir las situaciones en que se sobrepasen
dichos lmites. El anlisis de los datos debe detectar tendencias en los niveles de
biocontaminacin.

3.3 Higiene

El laboratorio debe establecer un programa documentado de limpieza para las
instalaciones, los equipos y las superficies, teniendo en cuenta los resultados de la
vigilancia de las condiciones ambientales y la posibilidad de contaminacin cruzada.
Asimismo, debe disponer de un procedimiento para el tratamiento de vertidos
accidentales.

El laboratorio debe adoptar medidas para evitar la acumulacin de polvo, disponiendo
de espacio suficiente para fines de almacenamiento, reduciendo al mnimo el trabajo
con papeles en el laboratorio y no permitiendo la presencia de plantas y objetos
personales innecesarios en el rea de trabajo del laboratorio.

En el laboratorio microbiolgico se utilizar una indumentaria apropiada para el tipo de
microbiolgicos
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ensayos que se realicen (en caso necesario, con protectores del pelo, barba, manos,
pies, etc.). El personal se despojar de dicha indumentaria antes de abandonar el
rea. Esto es especialmente importante en el laboratorio de biologa molecular,
donde, por ejemplo, el paso de un rea con una elevada carga de ADN a otra con una
baja carga de ADN puede producir sin querer contaminacin cruzada. En muchos
casos ser suficiente con utilizar una bata de laboratorio.

Existirn instalaciones adecuadas para lavarse las manos.

4. VALIDACIN DE LOS MTODOS DE ENSAYO
NTE INEN ISO/IEC 17025, clusula 5.4.5

La validacin de los mtodos de ensayo debe reflejar las condiciones reales de
ensayo. Esto puede conseguirse utilizando productos contaminados naturalmente o
productos inoculados con un nivel conocido de microorganismos contaminantes. El
analista debe ser consciente que la inoculacin de una matriz con microorganismos
contaminantes imita tan slo de una manera superficial la presencia de contaminantes
naturales. No obstante, a menudo es la mejor y la nica solucin disponible. La
extensin de la validacin necesaria depender del mtodo y su aplicacin.

El laboratorio debe validar los mtodos normalizados aplicados a matrices que no se
especifiquen en el procedimiento normalizado.

Los mtodos de ensayo microbiolgicos cualitativos, tales como los que el resultado
se expresa en trminos de detectado/no detectado, y los procedimientos de
confirmacin e identificacin, deben ser validados estimando, cuando sea apropiado,
su especificidad, exactitud relativa, desviacin positiva, desviacin negativa, lmite de
deteccin, efecto matricial, repetibilidad y reproducibilidad (vase en el Anexo I las
definiciones).

En el caso de ensayos microbiolgicos cuantitativos, debe considerarse la
especificidad, sensibilidad, exactitud relativa, desviacin positiva, desviacin negativa,
repetibilidad, reproducibilidad y el lmite de cuantificacin dentro de una variabilidad
establecida y, en caso necesario, determinar cuantitativamente estos parmetros. Las
diferencias debidas a las matrices deben tenerse en cuenta al analizar diferentes tipos
de muestras. Los resultados deben evaluarse utilizando mtodos estadsticos
apropiados.

Los laboratorios deben mantener los datos sobre validacin de los sistemas de
ensayo comerciales (kits) que utilicen. Estos datos pueden obtenerse de ejercicios de
intercomparacin o de datos sobre validacin remitidos por los fabricantes y sujetos a
la evaluacin de una tercera parte (p. ej., AOAC). Si no se dispone de datos sobre
validacin o si stos no son plenamente aplicables, el laboratorio ser responsable de
completar la validacin del mtodo.

Para demostrar que una versin modificada de un mtodo cumple las mismas
especificaciones que el mtodo original, deben realizarse comparaciones utilizando
replicados. El diseo experimental y el anlisis de los resultados tienen que ser
estadsticamente vlidos.
Incluso cuando se haya realizado la validacin, el laboratorio tendr que verificar
microbiolgicos
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peridicamente que se cumplen los parmetros documentados, utilizando, por
ejemplo, muestras inoculadas o materiales de referencia incorporados a las matrices
ms representativas.

5. INCERTIDUMBRE DE MEDIDA

La definicin internacional de la incertidumbre de medida puede encontrarse en ISO
Vocabulario internacional de trminos bsicos y generales en metrologa: 1993 (vase
el Anexo II). La forma general de evaluar y expresar la incertidumbre en los ensayos
que esperan los organismos europeos de acreditacin se basa en las
recomendaciones publicadas por la Comisin Internacional de Pesos y Medidas
(CIPM), segn se describe en la Gua para la expresin de la incertidumbre de
medida, 1995, ISO Ginebra.

Los anlisis microbiolgicos se encuadran en la categora de los ensayos que no
permiten realizar un clculo riguroso, metrolgica y estadsticamente vlido de la
incertidumbre de medida. En general, puede ser apropiado basar la estimacin de la
incertidumbre en datos sobre la repetibilidad y la reproducibilidad exclusivamente,
aunque lo ideal es incluir los sesgos (p. ej., los sesgos detectados como resultado de
la participacin en ensayos de aptitud). Los distintos componentes individuales de la
incertidumbre deben identificarse y demostrar que estn bajo control y evaluar su
contribucin a la variabilidad de los resultados. Algunos componentes (como los
efectos del pipeteado, el pesado y las diluciones) pueden medirse directamente y
evaluarse fcilmente para demostrar que realizan una contribucin insignificante a la
incertidumbre global. Otros componentes (como la estabilidad y preparacin de las
muestras) no pueden medirse directamente y su contribucin tampoco puede
evaluarse por mtodos estadsticos, pero su importancia en la variabilidad de los
resultados debe ser tambin considerada.

Se espera que los laboratorios acreditados que realizan anlisis microbiolgicos
conozcan la distribucin de microorganismos en las matrices que utilizan para sus
ensayos y tener eso en cuenta a la hora de obtener submuestras. Ahora bien, no se
recomienda que esta componente de la incertidumbre se incluya en las estimaciones
salvo que las necesidades del cliente dicten lo contrario. El principal motivo de esto es
que la incertidumbre asociada a la distribucin de microorganismos en la matriz del
producto no depende de la actuacin del laboratorio pudiendo depender
exclusivamente de las propias muestras analizadas. Adems, los mtodos de ensayo
deben especificar el tamao de la muestra que debe utilizarse teniendo en cuenta la
escasa homogeneidad de la misma.

El concepto de incertidumbre no puede aplicarse directamente a los resultados de los
ensayos cualitativos como los obtenidos en los anlisis de deteccin o en los de
determinacin de atributos para fines de identificacin. No obstante, deben
identificarse las distintas fuentes de variabilidad, como la homogeneidad de los
reactivos y la interpretacin de los analistas, y demostrar que se controlan dichas
fuentes. Adems, en los ensayos donde el lmite de deteccin es un importante
indicador de la validez del mtodo, la incertidumbre asociada al inculo empleado
para determinar el lmite debe ser estimada y su importancia evaluada. Los
laboratorios deben conocer tambin la incidencia de resultados falsos positivos y
microbiolgicos
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falsos negativos asociada a los ensayos cualitativos que realizan.

6. EQUIPOSMANTENIMIENTO, CALIBRACIN Y VERIFICACIN DE SU
FUNCIONAMIENTO

Como parte de su sistema de calidad, el laboratorio debe documentar e implantar un
programa de mantenimiento, calibracin y verificacin del funcionamiento de sus
equipos.

6.1 Mantenimiento

(En la norma ISO 7218 se facilitan directrices sobre el mantenimiento de los equipos).

El mantenimiento de los equipos esenciales debe realizarse a los intervalos
especificados dependiendo de factores tales como la frecuencia de uso. Se
mantendr un registro detallado de todas las operaciones realizadas. En el Anexo VI
pueden encontrarse ejemplos del mantenimiento de los equipos y de la frecuencia del
mismo.

El laboratorio debe adoptar medidas para evitar la contaminacin cruzada causada
por los equipos, como las siguientes:

el material desechable debe estar limpio o estril, en funcin de su uso;

el material de vidrio reutilizable debe estar debidamente limpio o estril, en funcin
de su uso;

lo ideal es que los laboratorios dispongan de un autoclave especfico para
descontaminacin. No obstante, se podr utilizar un nico autoclave siempre que se
tomen las debidas precauciones para separar las cargas de descontaminacin y
esterilizacin, y siempre que exista un programa documentado de limpieza para
controlar las condiciones ambientales tanto internas como externas del autoclave.

En general, el mantenimiento de los siguientes equipos consistir en limpieza y
revisin, inspeccin de daos, verificacin general y, si procede, esterilizacin:

equipos de uso general aparatos de filtracin, recipientes de vidrio o plstico
(matraces, tubos de ensayo), placas Petri de cristal o plstico, instrumentos de
muestreo, asas de siembra de platino, nquel/cromo o material de plstico
desechable;

baos termostticos, estufas, cabinas de seguridad microbiolgica, autoclaves,
homogeneizadores, refrigeradores, congeladores;
material volumtrico, como pipetas, dispensadores automticos, sembradores en
espiral;
instrumentos de medida, como termmetros, cronmetros, balanzas, pH-metros,
contadores de colonias.

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6.2 Calibracin y verificacin de equipos

El laboratorio debe establecer un programa de calibracin y verificacin de los
equipos que puedan influir directamente en los resultados de los ensayos. La
frecuencia de esas calibraciones y verificaciones se establecer en funcin de la
experiencia documentada y depender del uso, el tipo y el funcionamiento previo de
los equipos. Los intervalos entre sucesivas calibraciones y verificaciones sern ms
cortos que el perodo de tiempo durante el cual se han observado desviaciones de los
equipos fuera de los lmites aceptables. En los Anexos D y E pueden encontrarse
ejemplos de los intervalos de calibracin y las verificaciones tpicas de las
caractersticas tcnicas para diferentes instrumentos de laboratorio.

Equipos para medir la temperatura

a. Cuando la temperatura tenga un efecto directo en el resultado de un anlisis o
sea crtica para el correcto funcionamiento de un equipo, los equipos utilizados
para medir la temperatura, como termmetros de columna lquida, termopares y
termmetros de resistencia de platino (TRP) utilizados en estufas y autoclaves,
tendrn que ser de una calidad apropiada para conseguir la precisin requerida.

b. La calibracin de estos equipos debe ser trazable a patrones nacionales o
internacionales de temperatura. Cuando la precisin lo permita, podrn utilizarse
instrumentos que puedan demostrar el cumplimiento de especificaciones de
fabricacin apropiadas y aceptadas en el mbito nacional o internacional (por
ejemplo la norma ISO 1770 para los termmetros de columna lquida). Estos
instrumentos pueden utilizarse, por ejemplo, para controlar la temperatura de
frigorficos y congeladores, y tambin de estufas y baos termostticos cuando lo
permita la tolerancia admitida en torno a la temperatura definida. El laboratorio
debe verificar el correcto funcionamiento de estos instrumentos.

Incubadores, baos termostticos, estufas

El laboratorio debe establecer inicialmente y documentar la estabilidad de la
temperatura, la uniformidad de su distribucin y el tiempo necesario para conseguir
las condiciones de equilibrio en incubadores, baos termostticos, estufas y salas con
temperatura controlada, en particular con respecto a los usos tpicos (por ejemplo,
posicin, espacio entre y altura de las pilas de placas Petri). La constancia de las
caractersticas registradas en la validacin inicial de los equipos debe verificarse y
registrarse despus de cualquier reparacin o modificacin importante. Los
laboratorios deben controlar la temperatura de funcionamiento de este tipo de equipos
y conservar registros.

Autoclaves, incluidos los preparadores de medios

A continuacin se resume el procedimiento ms habitual para la calibracin,
verificacin inicial y control del funcionamiento de estos equipos. No obstante, se
reconoce que los anlisis cuantitativos de materiales y especimenes procesados en el
autoclave capaces de demostrar una variacin aceptable dentro de un lote y entre
diferentes lotes pueden proporcionar una garanta de calidad equivalente.

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a. Los autoclaves deben cumplir las tolerancias de tiempo y temperatura
especificadas. No es aceptable la utilizacin de autoclaves provistos slo de un
manmetro. Los sensores utilizados para controlar o vigilar los ciclos tienen que ser
calibrados, adems de verificar el correcto funcionamiento de los cronmetros.

b. La validacin inicial debe incluir estudios de funcionamiento (estudios de la
distribucin espacial de la temperatura) para los distintos ciclos y las distintas
configuraciones de la carga que se utilicen en la prctica. Este proceso tiene que
repetirse despus de cada reparacin o modificacin importantes (como sustitucin
del termostato o programador, disposicin de la carga, ciclo de operacin) o
cuando as lo indiquen los resultados de los controles de calidad realizados a los
medios. Debe colocarse un nmero suficiente de sensores de temperatura dentro
de la carga (p. ej., en recipientes llenos de lquido o medio) para poder demostrar
diferencias segn la colocacin. En el caso de preparadores de medios, cuando no
se pueda demostrar un calentamiento uniforme de otra manera, en general es
necesario utilizar dos sensores, uno colocado al lado del sensor de temperatura y
el otro lejos de l. Tanto en la validacin inicial como en las validaciones
posteriores debe considerarse la idoneidad de los tiempos de subida y bajada de la
temperatura, as como el tiempo que se mantiene la temperatura de esterilizacin.

c. El laboratorio debe establecer instrucciones claras de funcionamiento basndose
en los perfiles de calentamiento determinados para los usos tpicos durante la
validacin inicial y las posteriores. Debe establecer criterios de aceptacin/rechazo
y mantener un registro de las operaciones del autoclave, incluida la temperatura y
el tiempo, para cada ciclo.

d. El control puede realizarse mediante una de las siguientes formas:

(i) utilizando un termopar y un aparato registrador para obtener un grfico impreso;
(ii) por observacin directa y registro de la temperatura mxima alcanzada y el
tiempo que se mantiene esa temperatura.

Adems de controlar directamente la temperatura del autoclave, puede comprobarse
la eficacia de su funcionamiento durante cada ciclo mediante la utilizacin de
indicadores qumicos o biolgicos para fines de esterilizacin y descontaminacin. La
cinta de autoclave o las tiras indicadoras deben utilizarse slo para distinguir que una
carga ha sido procesada, pero no para demostrar que ha finalizado un ciclo aceptable.

Pesas y balanzas

Las pesas y balanzas deben calibrarse a intervalos regulares, demostrando su
trazabilidad (de acuerdo al uso previsto).

Material volumtrico

a. Los laboratorios de microbiologa pueden utilizar material volumtrico como
dispensadores automticos, dispensadores/diluidores, pipetas manuales o
automticas y pipetas desechables. Los laboratorios deben realizar una verificacin
inicial del material volumtrico y, a partir de ah, controles peridicos para
garantizar que los equipos cumplen en todo momento las especificaciones
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requeridas. Dicha verificacin no ser necesaria con el material de vidrio que haya
sido certificado para una tolerancia especfica. En los equipos se verificar la
exactitud del volumen dispensado frente al volumen prefijado (para varios
volmenes cuando se trate de instrumentos de volumen variable) y se determinar
la precisin de los volmenes dispensados repetidas veces.

b. Es conveniente que el material volumtrico desechable de un solo uso sea
suministrado por empresas con un sistema de calidad reconocido y relevante.
Despus de la validacin inicial de la idoneidad del material, se recomienda realizar
controles aleatorios de su exactitud. Si la empresa proveedora no tiene un sistema
de calidad reconocido, el laboratorio debe verificar cada lote de material.

Otros equipos

Los conductivmetros, los medidores de oxgeno, los pH-metros y otros instrumentos
similares deben verificarse peridicamente o antes de cada uso. Los tampones
utilizados en estas verificaciones deben conservarse en condiciones apropiadas y
marcarse con la fecha de caducidad.

Si la humedad influye en el resultado del ensayo, los higrmetros debern calibrarse,
siendo la calibracin trazable a patrones nacionales o internacionales.

Los cronmetros, incluido los de los autoclaves, deben verificarse utilizando un
cronmetro calibrado o la seal horaria nacional.

Cuando se utilizan centrifugadoras en los procedimientos de ensayo, debe evaluarse
si la fuerza centrfuga se puede considerar crtica. En el caso de que sea crtica, la
centrifugadora tendr que ser calibrada.

7. REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO
NTE INEN ISO/IEC 17025, clusulas 4.6 y 5.5

7.1 Reactivos

El laboratorio debe asegurarse de que la calidad de los reactivos utilizados sea
apropiada para los ensayos realizados. Debe verificar la idoneidad de cada uno de los
lotes de reactivos crticos para el ensayo, al inicio y durante su perodo de validez,
utilizando microorganismos de control positivo y negativo que sean trazables a
colecciones de cultivos nacionales o internacionales reconocidas.

7.2 Medios preparados internamente

Siempre que sea necesario, se verificar que los medios de cultivo, diluyentes y otras
suspensiones preparadas internamente tengan las caractersticas adecuadas con
respecto a:

recuperacin o supervivencia de los microorganismos de inters,
inhibicin o supresin de los microorganismos no deseados,
propiedades bioqumicas (diferenciales y diagnsticas),
propiedades fsicas (por ejemplo, pH, volumen y esterilidad).
microbiolgicos
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Para la evaluacin de la recuperacin o la supervivencia son preferibles los
procedimientos cuantitativos (vase tambin ISO 11133 Partes 1 y 2).

Los materiales de partida (tanto formulaciones comerciales deshidratadas como los
componentes individuales) deben conservarse en las condiciones apropiadas; por
ejemplo, en un lugar fresco, seco y oscuro. Todos los recipientes, especialmente los
que contengan medios deshidratados, deben estar hermticamente cerrados. No
deben utilizarse medios deshidratados que presenten apelmazamiento o un cambio
de color. Para la preparacin de medios debe utilizarse agua destilada, desionizada o
de smosis inversa, libre de substancias bactericidas, inhibidoras o interferentes,
salvo que el mtodo del ensayo especifique otra cosa.

Debe determinarse y verificarse el perodo de validez de los medios preparados en las
condiciones de conservacin especificadas.

7.3 Medios listos para su uso

Todos los medios (y diluyentes y otras suspensiones) que se suministren en una
forma directamente utilizable o parcialmente completa deben ser validados antes de
su utilizacin. La evaluacin de su efecto en la recuperacin o supervivencia de los
microorganismos de inters y la inhibicin o supresin de los microorganismos no
deseados tiene que ser plenamente cuantitativa; los atributos (por ejemplo,
propiedades fsicas y bioqumicas) deben evaluarse utilizando criterios objetivos.

Como parte de la validacin, el laboratorio tiene que estar debidamente informado de
las especificaciones de calidad del fabricante, que como mnimo incluirn lo siguiente:

Nombre de los medios y lista de componentes, incluido cualquier suplemento
Perodo de validez y criterios de aceptabilidad aplicados
Condiciones de conservacin
Plan y frecuencia de muestreo
Control de esterilidad
Control del crecimiento de los microorganismos de inters y de los
microorganismos no deseados (con referencias a sus colecciones de cultivos) y
criterios de aceptabilidad
Controles fsicos y criterios de aceptabilidad aplicados
Fecha de emisin de las especificaciones

Los lotes de medios deben estar debidamente identificados. Cada lote recibido debe ir
acompaado de evidencias del cumplimiento de las especificaciones de calidad. El
laboratorio debe asegurarse de que el fabricante notifique cualquier cambio en las
especificaciones de calidad.

Cuando el fabricante del medio suministrado en (una forma directamente utilizable) o
parcialmente completa disponga de un sistema de calidad reconocido (por ejemplo,
certificacin segn ISO 9000), el laboratorio podr verificar en la validacin inicial que
el material suministrado cumple las especificaciones establecidas, partiendo del
supuesto de que dicho material es homogneo. En otras circunstancias, ser
necesario realizar controles adecuados de cada lote recibido.

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7.4 Etiquetado

El laboratorio debe asegurarse de que todos los reactivos (incluidas las soluciones de
reserva), medios, diluyentes y otras suspensiones estn debidamente etiquetados,
indicando, segn sea apropiado, identidad, concentracin, condiciones de
conservacin, fecha de preparacin, fecha de caducidad validada y/o perodos
recomendados de almacenamiento. Asimismo, los registros deben permitir la
identificacin de la persona responsable de la preparacin.

8 MATERIALES DE REFERENCIA Y CEPAS DE REFERENCIA

8.1 Materiales de referencia

Los materiales de referencia y los materiales de referencia certificados (vase la
definicin en el Anexo I) proporcionan la trazabilidad esencial en las mediciones y son
utilizados, por ejemplo, para

demostrar la exactitud de los resultados,
calibrar equipos,
controlar la calidad del laboratorio,
validar mtodos, y
permitir la comparacin de mtodos.

Siempre que sea posible, los materiales de referencia deben utilizarse con matrices
apropiadas.

8.2 Cepas de referencia

Las cepas de referencia son necesarias para demostrar que los medios (incluidos los
kits de anlisis) poseen unas caractersticas aceptables, para validar mtodos y para
controlar que se mantienen sus caractersticas. La trazabilidad es necesaria, por
ejemplo, al establecer las caractersticas de los medios utilizados en kits de anlisis y
validaciones de mtodos. Para demostrar la trazabilidad, el laboratorio debe utilizar
cepas de referencia de microorganismos obtenidos directamente de una coleccin
nacional o internacional reconocida, cuando exista alguna. Alternativamente tambin
podran utilizarse cepas comerciales siempre que el laboratorio pueda demostrar en el
momento de su uso que todas las propiedades relevantes son equivalentes.

Segn establecen las directrices contenidas en la norma ISO 11133-1, las cepas de
referencia podrn ser subcultivadas una vez para obtener cepas de reserva,
realizando en paralelo los controles de pureza y ensayos bioqumicos que sean
necesarios. Se recomienda conservar las cepas de reserva en alcuotas
ultracongeladas o liofilizadas (vase en el Anexo III la preparacin de cepas de
trabajo). Si las cepas de reserva se han descongelado, no deben volver a congelarse
y reutilizarse.

Las cepas de trabajo no deben ser subcultivadas salvo que as se requiera y se defina
en un mtodo normalizado o que el laboratorio pueda aportar evidencias
documentadas de que no se ha producido ningn cambio en ninguna propiedad
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importante.

Las cepas de trabajo no deben ser subcultivadas para sustituir las cepas de reserva.
Los derivados comerciales de las cepas de referencia pueden utilizarse slo como
cepas de trabajo.

9 MUESTREO

En muchos casos, los laboratorios de ensayo no son responsables del muestreo
inicial para obtener los especimenes del ensayo. En el caso de que lo sean, es muy
recomendable que el muestreo est cubierto por un sistema de aseguramiento de la
calidad, e idealmente, por una acreditacin.

El transporte y conservacin de las muestras deben hacerse en unas condiciones
apropiadas para mantener su integridad (por ejemplo, refrigeradas o congeladas,
segn sea necesario). Dichas condiciones deben ser controladas, manteniendo un
registro de las mismas. Cuando sea apropiado, se documentar claramente quin es
el responsable del transporte, la conservacin de las muestras entre el muestreo y su
entrega al laboratorio de ensayo. Una vez obtenidas, las muestras se analizarn lo
antes posible.

El muestreo debe ser realizado nicamente por personal debidamente cualificado. El
muestreo se efectuar en condiciones aspticas utilizando material estril. Cuando
sea aplicable, las condiciones ambientales, como la contaminacin atmosfrica y la
temperatura, se vigilarn y registrarn en el lugar del muestreo. Asimismo, se
registrar la hora en que se realiza el muestreo.

10 MANIPULACIN E IDENTIFICACIN DE MUESTRAS
NTE INEN ISO/IEC 17025, apartados 5.7 y 5.8

Hay que tener en cuenta que la flora microbiana puede ser sensible a factores tales
como temperatura o duracin del almacenamiento y transporte, por lo que es
importante verificar y registrar el estado de la muestra cuando se recibe en el
laboratorio.

El laboratorio debe disponer de procedimientos para la entrega e identificacin de
muestras. Si la muestra es insuficiente o se encuentra en mal estado por deterioro
fsico, temperatura inapropiada, envase roto o etiquetado defectuoso, el laboratorio
debe consultar con el cliente antes de decidir si analiza o rechaza la muestra. En
cualquier caso, debe indicar su estado en el informe del ensayo.

El laboratorio debe registrar toda la informacin relevante y, en particular, lo siguiente:

a. fecha y, cuando sea oportuno, hora de la llegada de la muestra;
b. estado de la muestra en el momento de su entrega y, cuando sea necesario,
temperatura;
c. caractersticas de la operacin de muestreo (fecha de muestreo, condiciones de
muestreo, etc.)

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Las muestras que se encuentren a la espera de ser analizadas deben almacenarse en
condiciones adecuadas para reducir al mnimo cualquier modificacin en la poblacin
microbiana presente. El laboratorio debe definir y registrar dichas condiciones de
conservacin.

El envase y etiquetado de las muestras puede estar altamente contaminado y las
muestras deben manipularse y almacenarse con precaucin para evitar que se
propague la contaminacin.

El submuestreo realizado por el laboratorio inmediatamente antes del ensayo se
considera parte del mtodo de ensayo y debe efectuarse conforme a normas
nacionales o internacionales, si es que existen, o a mtodos internos validados. Los
procedimientos de submuestreo deben disearse teniendo en cuenta la distribucin
heterognea de los microorganismos (en ISO 6887 y ISO 7218 pueden encontrarse
directrices generales).

Debe existir de un procedimiento documentado para la conservacin y eliminacin de
muestras. Las muestras deben conservarse hasta que se hayan obtenido los
resultados del ensayo, o ms tiempo segn sea necesario. Cuando se sepa que
algunas porciones de muestras de ensayo del laboratorio estn altamente
contaminadas, deben descontaminarse antes de su eliminacin (vase 11.1)

11 ELIMINACIN DE RESIDUOS CONTAMINADOS

La correcta eliminacin de materiales contaminados puede no afectar directamente a
la calidad de los anlisis de las muestras, aunque los procedimientos deben disearse
para reducir al mnimo la posibilidad de contaminacin del lugar donde se realiza el
ensayo o los materiales utilizados en el mismo. No obstante, es un aspecto de la
correcta gestin de un laboratorio y debe respetarse la legislacin nacional e
internacionales sobre medio ambiente, salud y seguridad (vase tambin ISO 7218).

12 ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LOS RESULTADOS/CONTROL DE
CALIDAD
NTE INEN ISO/IEC 17025, apartado 5.9

12.1 Control de calidad interno

El control de calidad interno consiste en todos los procedimientos realizados por un
laboratorio para la evaluacin continua de su trabajo. El principal objetivo es asegurar
la coherencia de los resultados obtenidos diariamente y el cumplimiento de los
criterios establecidos.

Un programa de controles peridicos es necesario para demostrar que controla la
variabilidad (por ejemplo, entre analistas y entre equipos o materiales, etc.). Dicho
programa debe abarcar todos los ensayos incluidos en el alcance de acreditacin del
laboratorio. El programa puede incluir:

el uso de muestras inoculadas
el uso de materiales de referencia (incluidos los materiales utilizados en ensayos
de aptitud)
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uso de replicados
recuentos cruzados entre analistas

El intervalo entre estos controles depender del diseo del programa y del nmero de
ensayos realizados. Es recomendable que, en la medida de lo posible, los ensayos
incluyan controles para evaluar sus resultados.

En circunstancias especiales, un laboratorio puede estar acreditado para realizar un
ensayo que rara vez se demanda. Se reconoce que, en tales casos, un programa
continuo de control interno de la calidad no siempre ser apropiado, siendo preferible
un sistema que se realice en paralelo al ensayo y que demuestre que los resultados
son satisfactorios.

12.2 Control de calidad externo (ensayos de aptitud)

Los laboratorios deben participar regularmente en ensayos de aptitud relacionados
con el alcance de su acreditacin, dando preferencia a los programas de ensayos de
aptitud que utilicen matrices apropiadas. En algunos casos concretos, esta
participacin puede ser obligatoria.

Los laboratorios deben utilizar el control externo de la calidad no slo para detectar
desviaciones en los resultados obtenidos, sino tambin para verificar la validez de
todo el sistema de calidad.

13. INFORMES DE LOS ENSAYOS
NTE INEN ISO/IEC 17025, apartado 5.10

Si el resultado del recuento es negativo, debe expresarse como no detectado para
una unidad definida o por debajo del lmite de deteccin para una unidad definida.
El resultado no debe expresarse como cero para una unidad definida salvo que sea
un requisito reglamentario. Los resultados de los anlisis cualitativos deben
expresarse como detectado/no detectado en una cantidad o volumen definidos.
Tambin pueden expresarse como por debajo de un nmero especificado de
microorganismos para una unidad definida, cuando el nmero especificado de
microorganismos sobrepase el lmite de deteccin del mtodo y as se haya acordado
con el cliente.

Cuando en el informe de un ensayo se exprese una estimacin de la incertidumbre,
tendr que indicarse claramente al cliente cualquier limitacin existente
(especialmente si la estimacin no incluye la contribucin de la distribucin de
microorganismos dentro de la muestra).
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ANEXO I. GLOSARIO DE TRMINOS

Calibracin

Conjunto de operaciones que permiten establecer, en condiciones especficas, la
relacin existente entre los valores indicados por un instrumento de medida o un
sistema de medida, o los valores representados por una medida material o un
material de referencia, y los valores correspondientes obtenidos mediante un
patrn de referencia.
NOTAS
1 El resultado de una calibracin permite asignar valores de mesurandos a las
marcas de escalas arbitrarias o estimar los errores de indicacin de los
instrumentos de medida.
2 Una calibracin permite tambin determinar otras propiedades metrolgicas,
como el efecto de las magnitudes de influencia.
3 El resultado de una calibracin puede registrarse en un documento, en
ocasiones denominado certificado de calibracin o informe de calibracin.
[VIM: 1993 ISO Vocabulario internacional de trminos bsicos y generales
en metrologa]

Material de
referencia
certificado

Material de referencia, acompaado de un certificado, en el cual uno o ms
valores de sus propiedades han sido certificados mediante un procedimiento que
establece su trazabilidad a una realizacin exacta de la unidad en la que se
expresan los valores de dichas propiedades. Cada valor certificado se acompaa
de una incertidumbre y el nivel de confianza correspondiente.
[Gua ISO 30:1992]
Lmite de
cuantificaci
n
Aplicado a anlisis microbiolgicos cuantitativos Nmero mnimo de
microorganismos dentro de una variabilidad definida que puede determinarse en
las condiciones experimentales del mtodo evaluado.
Lmite de
deteccin
Aplicado a anlisis microbiolgicos cualitativos Nmero mnimo de
microorganismos que pueden ser detectados, pero en cantidades que no pueden
estimarse con precisin.

Desviacin
negativa
Ocurre cuando el mtodo alternativo da un resultado negativo sin confirmacin y el
mtodo de referencia da un resultado positivo. Esta desviacin se convierte en un
resultado negativo falso cuando puede demostrarse que el resultado verdadero es
positivo.
Desviacin
positiva
Ocurre cuando el mtodo alternativo da un resultado positivo sin confirmacin y el
mtodo de referencia da un resultado negativo. Esta desviacin se convierte en un
resultado positivo falso cuando puede demostrarse que el resultado verdadero es
negativo.
Cultivos de
referencia
Trmino colectivo que se refiere a cepas de referencia, cepas de reserva y cultivos
de trabajo.
Cepas de
referencia

Microorganismos definidos por lo menos al nivel de gnero y especie, catalogados
y descritos segn sus caractersticas y preferiblemente de origen conocido.
[ISO 11133-1:2000] Normalmente obtenidos de una coleccin nacional o
internacional reconocida.
Material de
referencia
Material o substancia uno o ms de cuyas propiedades tienen valores
suficientemente homogneos y claramente establecidos como para poder ser
utilizados en la calibracin de un aparato, la evaluacin de un mtodo de medida o
la asignacin de valores a materiales.
[Gua ISO 30:1992]
Mtodo de
referencia
Mtodo investigado a fondo, que describe con claridad y exactitud las condiciones
y los procedimientos necesarios para medir los valores de una o ms propiedades
y que ha demostrado tener una exactitud y una precisin apropiadas para el uso
que pretende hacerse del mismo, de manera que puede utilizarse para evaluar la
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exactitud de otros mtodos empleados para realizar la misma medicin y, en
particular, para caracterizar un material de referencia. En general se trata de un
mtodo normalizado nacional o internacional.
Cepas de
reserva
Cepas idnticas obtenidas mediante un nico subcultivo de una cepa de
referencia. [ISO 11133-1:2000]
Exactitud
relativa
Grado de concordancia entre los resultados del mtodo evaluado y los obtenidos
utilizando un mtodo de referencia reconocido.
Repetibilidad Grado de concordancia entre los resultados de sucesivas mediciones del mismo
mesurando realizadas en las mismas condiciones de medicin.
[VIM: 1993 ISO Vocabulario internacional de trminos bsicos y generales de
metrologa]
Reproducibili
dad
Grado de concordancia entre los resultados de mediciones del mismo mesurando
realizadas en diferentes condiciones de medicin.
[VIM: 1993 ISO Vocabulario internacional de trminos bsicos y generales de
metrologa]
Sensibilidad Fraccin del nmero total de cultivos o colonias positivos que son asignados
correctamente con el mtodo utilizado. [ISO 13843:2000]
Especificidad Fraccin del nmero total de cultivos o colonias negativos que son asignados
correctamente con el mtodo utilizado. [ISO 13843:2000]
Cultivo de
trabajo
Subcultivo primario obtenido de una cepa de reserva. [ISO 11133-1:2000]

Validacin Confirmacin, mediante la aportacin de pruebas objetivas, de que se han
cumplidos los requisitos para el uso pretendido o una aplicacin especfica. [ISO
9000: 2000]
Verificacin Confirmacin, mediante la aportacin de pruebas objetivas, de que se han
cumplido los requisitos establecidos. [ISO 9000:2000]

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ANEXO II. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

1. NTE INEN ISO/IEC 17025:2006, Requisitos generales para la competencia de los
laboratorios de ensayo y de calibracin.
2. G-ENAC - 04, Gua para la acreditacin de laboratorios de Anlisis
Microbiolgicos.
3. ISO 7218:2007, Microbiology of food and animal feeding stuffs -- General
requirements and guidance for microbiological examinations.
4. ISO 6887-1:1999, Microbiology of food and animal feeding stuffs -- Preparation of
test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological
examination -- Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension
and decimal dilutions
5. GPE INEN ISO-30:1998, Definiciones usadas con relacin a materiales de
referencia.
6. NTE INEN ISO 9000: 2006, Sistemas de gestin de la calidad. Conceptos y
vocabulario.
7. GPE INEN ISO-30: 1998, Definiciones usadas con relacin a materiales de
referencia.
8. NTE INEN 2056: 1996, Metrologa. Vocabulario internacional de trminos
fundamentales y generales.
9. ISO/IEC Guide 98: 1995, Guide to the expression of uncertainty in measurement
(GUM).
10. ISO 16140:2003, Microbiology of food and animal feeding stuffs -- Protocol for the
validation of alternative methods.
11. ISO/TR 13843: 2000, Water quality -- Guidance on validation of microbiological
methods.
12. ISO/TS 11133-1: 2000, Microbiology of food and animal feeding stuffs -- Guidelines
on preparation and production of culture media -- Part 1: General guidelines on
quality assurance for the preparation of culture media in the laboratory.
13. ISO/TS 11133-2: 2003, Microbiology of food and animal feeding stuffs -- Guidelines
on preparation and production of culture media -- Part 2: Practical guidelines on
performance testing of culture media.
14. UNE-EN 12741:2000, Biotecnologa. Laboratorios de investigacin, desarrollo y
anlisis. Gua para las operaciones en los laboratorios biotecnolgicos.

ANEXO III. UTILIZACIN GENERAL DE CEPAS DE REFERENCIA
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* Deben realizarse los controles paralelos de pureza y los ensayos bioqumicos que
sean necesarios.

Todas la fases del proceso han de estar perfectamente documentadas y debe
mantenerse un registro detallado de todas las operaciones realizadas.

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ANEXO IV. DIRECTRICES PARA LA CALIBRACIN Y LOS CONTROLES DE
CALIBRACIN
La informacin que se facilita es meramente orientativa. La frecuencia depender del
uso, tipo y resultados previos de cada equipo.

Tipo de aparato Requisitos
Frecuencia
sugerida
Termmetros de
referencia (columna
lquida)
Recalibrado plenamente trazable Punto
nico (p. ej., punto de congelacin)
Cada 5 aos
Anualmente
Termopares de
referencia
Recalibracin plenamente trazable
Verificar frente a termmetro de
referencia
Cada 3 aos
Anualmente

Termmetros de
trabajo
Termopares de trabajo
Verificar frente a termmetro de
referencia en punto de congelacin y/o
rango de temperaturas de trabajo
Anualmente

Balanzas Calibracin plenamente trazable Anualmente
Pesas de calibracin Calibracin plenamente trazable Cada 5 aos
Pesa(s) de control Verificar frente a pesa calibrada o
verificar en la balanza inmediatamente
despus de la calibracin trazable
Anualmente
Material volumtrico de
cristal
Calibracin gravimtrica a la tolerancia
requerida
Anualmente

Microscopios Calibracin trazable del micrmetro del
portaobjetos (cuando sea necesario)
Inicialmente
Higrmetros Calibracin trazable Anualmente
Centrifugas Calibracin trazable o verificar frente a
tacmetro independiente, segn sea
apropiado
Anualmente

microbiolgicos
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ANEXO V. DIRECTRICES PARA LA VALIDACIN Y VERIFICACIN DE EQUIPOS

La informacin que se facilita es meramente orientativa. La frecuencia depender del
uso, tipo y resultados previos de cada equipo.

Tipo de aparato Requisito Frecuencia sugerida
Aparatos con
temperatura
controlada
(incubadores,
baos,
refrigeradores,
congeladores)
(a) Verificar la estabilidad y
uniformidad de la temperatura

(b) Verificar la temperatura
(a) Inicialmente, cada 2 aos y
despus de una reparacin/
modificacin
(b) Diariamente/con cada uso
Estufas de
esterilizacin
(a) Verificar la estabilidad/uniformidad de
la temperatura

(b) Verificar la temperatura
modificacin
Autoclaves (a) Verificar las caractersticas para
cargas/ciclos

(b) Verificar la temperatura/tiempo
modificacin
(b) Con cada uso
Cabinas de
seguridad
(a) Verificar las caractersticas tcnicas

(b) Control microbiolgico
(c) Verificar la velocidad del aire
(a) Inicialmente, todos los aos
y despus de una
reparacin/modificacin
(b) Semanalmente
(c) Con cada uso
Cabinas de flujo
laminar
(a) Verificar las caractersticas tcnicas

(b) Verificar la esterilidad
(a) Inicialmente, y despus de
una reparacin /modificacin
(b) Semanalmente
Cronmetros Verificar frente a seal horaria nacional Anualmente
Microscopios Verificar alineacin Diariamente/con cada uso
pH metros Ajustar utilizando como mnimo dos
tampones de la calidad adecuada
Diariamente/con cada uso
Balanzas Ajustar el cero y verificar con la pesa
de control
Diariamente/con cada uso
Desionizadores y
unidades de
smosis inversa
(a) Verificar la conductividad
(b) Verificar la contaminacin
microbiana
(a) Semanalmente
(b) Mensualmente
Diluidores
gravimtricos
(a) Verificar el peso del volumen
distribuido
(b) Verificar el coeficiente de dilucin
(a) Diariamente

(b) Diariamente
Distribuidores de
medios
Verificar el volumen distribuido Con cada ajuste o reposicin
Pipetas
automticas
Verificar la exactitud y precisin del
volumen distribuido
Peridicamente (depender de
la frecuencia y naturaleza del
uso)
Sembradores en
espiral
(a) Verificar frente a mtodo convencional
(b) Verificar el estado del punzn y puntos
de inicio y fin
(c) Verificar el volumen distribuido
(a) Inicialmente y anualmente
(c) Mensualmente
Contadores
automticos de
colonias
Verificar frente al recuento manual Anualmente
microbiolgicos
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Centrifugas Verificar velocidad frente a tacmetro
calibrado e independiente
Anualmente
J arras de
anaerobiosis/incub
adores
Verificar frente a indicador de
anaerobiosis
Con cada uso
Condiciones
ambientales del
laboratorio
Vigilar la contaminacin microbiana del
aire y las superficies utilizando, p. ej.,
muestreadores del aire, placas de
sedimentacin, placas de contacto o frotis
Semanalmente
microbiolgicos
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ANEXO VI. DIRECTRICES PARA EL MANTENIMIENTO DE LOS EQUIPOS
La informacin que se facilita es meramente orientativa. La frecuencia depender de
la necesidad, el tipo y las caractersticas previas de cada aparato.

Tipo de aparato Requisito Frecuencia sugerida
(a) Incubadores
(b) Refrigeradores
(c) Congeladores,
estufas
Limpiar y desinfectar las
superficies internas
(a) Mensualmente
(b) Segn sea necesario (p.
ej,
cada 3 meses)
(c) Segn sea necesario (p.
Ej., anualmente)
Baos mara Vaciar, limpiar, desinfectar y
rellenar
Mensualmente, o cada 6
meses si se utiliza un biocida
Centrifugas (a) Revisar
(b) Limpiar y desinfectar
(a) Anualmente
(b) Con cada uso
Autoclaves (a) Verificar visualmente la junta,
limpiar y drenar la cmara
(b) Revisin completa
(c) Control de seguridad del vaso
de presin
(a) Peridicamente, segn
las recomendaciones del
fabricante
(b) Anualmente o segn las
recomendaciones del
fabricante
(c) Anualmente
Cabinas de seguridad
Cabinas de flujo laminar
Revisin completa y
comprobacin mecnica
Anualmente o segn las
recomendaciones del
fabricante
Microscopios Revisin completa de
mantenimiento
Anualmente
pH - metros Limpiar electrodos Con cada uso
Balanzas, diluidores
gravimtricos
(a) Limpiar
(b) Revisar
(a) Con cada uso
(b) Anualmente
Destiladores Limpiar y desincrustar Segn sea necesario (p. ej.,
cada 3 meses)
Desionizadores,
unidades de smosis
inversa
Limpiar y desinfectar Segn las recomendaciones
del fabricante
J arras de anaerobiosis Sustituir cartucho y membrana Despus de cada uso
Distribuidores de medios,
material volumtrico,
pipetas, material de uso
general
Descontaminar, limpiar y
esterilizar cuando sea apropiado
Con cada uso
Sembradores en espiral (a) Revisar
(b) Descontaminar, limpiar y
esterilizar
(a) Anualmente
(b) Con cada uso
Laboratorio (a) Limpiar y desinfectar las
superficies de trabajo
(b) Limpiar suelos, desinfectar
desages y pilas
(c) Limpiar y desinfectar otras
superficies
(a) Diariamente, y durante el
uso
(b) Semanalmente

(c) Cada 3 meses

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