Brenda Fina

ESTRS OXIDATIVO El estrs oxidativo es causado por un desequilibrio entre la produccin de especies reactivas del oxgeno (ROS o ERO) y la capacidad de un sistema biolgico de detoxificar rpidamente los reactivos intermedios o reparar el dao resultante. En trminos qumicos, el estrs oxidativo es un gran aumento en la reduccin del potencial celular o una gran disminucin en la capacidad reductora de los pares redox celulares como el glutatin. El estrs oxidativo severo puede causar la muerte celular y an una oxidacin moderada puede desencadenar la apoptosis, mientras que si es muy intensa puede provocar la necrosis. Todas las formas de vida mantienen un entorno reductor dentro de sus clulas. Este entorno reductor es preservado por las enzimas que mantienen el estado reducido a travs de un constante aporte de energa metablica. Desbalances en este estado normal redox pueden causar efectos txicos a travs de la produccin de perxidos y radicales libres que daan a todos los componentes de la clula, incluyendo las protenas, los lpidos y el ADN. Los radicales libres tienen una configuracin electrnica de capas abiertas por lo que llevan al menos un electrn desapareado que es muy susceptible de crear un enlace con otro tomo o molcula. Un aspecto particularmente destructivo del estrs oxidativo es la produccin de especies reactivas del oxgeno, que incluyen los radicales libres y los perxidos. La mayora de estas especies derivadas del oxgeno se producen en un nivel bajo en condiciones normales de metabolismo aerbico y el dao que causan a las clulas es reparado constantemente. Sin embargo, bajo los graves niveles de estrs oxidativo que causa la necrosis, el dao produce agotamiento de ATP impidiendo la muerte celular por apoptosis controlada, provocando que la clula simplemente se desmorone. La fuente ms importante de oxgeno reactivo en condiciones normales en organismos aerbicos es probablemente la prdida de oxgeno activado de las mitocondrias durante el funcionamiento normal de la respiracin oxidativa. Algunas de las menos reactivas de estas especies (como el superxido) pueden ser convertidas por una reaccin redox con metales de transicin en quinonas, especie radical ms agresiva que puede causar extenso dao celular. Las quinonas pueden hacer un ciclo redox con sus conjugados semiquinonas e hidroquinonas, en algunos casos, catalizando la produccin de superxido desde perxido de hidrgeno. El estrs oxidativo generado por el agente reductor cido rico puede estar implicado en el sndrome de LeschNyhan, accidentes cerebrovasculares y el sndrome metablico. Del mismo modo la produccin de especies reactivas del oxgeno en presencia de homocistena en homocisteinuria, as como arteriosclerosis, accidentes cerebrovasculares, y Alzheimer. Metales tales como hierro, cobre, cromo, vanadio y cobalto son capaces de hacer ciclos redox en los que un solo electrn puede ser aceptado o donado por el metal. Esta accin cataliza reacciones que producen radicales y puede producir ROS. Las reacciones ms importantes son probablemente la reaccin de Fenton y la reaccin de Haber-Weiss, en el que se producen radicales hidroxilo de la reduccin del hierro y perxido de hidrgeno. Otros enzimas capaces de producir superxido son la xantina oxidasa, NADPH oxidasa y citocromo P450. El perxido de hidrgeno es producido por una amplia variedad de enzimas incluidas monooxigenasas y oxidasas. Oxidante Anin superxido
O2

Descripcin Estado de reduccin de un electrn de O2, formado en muchas reacciones de autooxidacin y por la cadena de transporte de electrones. Es poco reactivo, pero puede 2+ liberar Fe de protenas ferrosulfuradas y de la ferritina. Sufre dismutacin para formar H2O2 espontneamente o por catlisis enzimtica y es un precursor para la formacin de OH catalizado por metales. Estado de reduccin de dos electrones, formado por la dismutacin de O2 o por reduccin directa de O2. Soluble en lpidos y por ende capaz de difundir por membranas.
-

H2O2 Perxido de hidrgeno

Laboratorio de Biologa sea y Metabolismo Mineral Facultad Cs. Mdicas - UNR - Rosario - Argentina laboratorio@biologiaosea.com.ar www.biologiaosea.com.ar 2006 - 2009 Todos los derechos reservados

Brenda Fina

OH Radical hidroxilo ROOH Hidroperxido orgnico

Estado de reduccin de tres electrones, formado por la reaccin de Fenton y la descomposicin de peroxinitrito. Extremadamente reactivo, ataca la mayora de los componentes celulares. Formado por reacciones de radicales con componentes celulares como lpidos y nucleobases.

RO, alcoxiROO, peroxiHOCl cido hipocloroso OONO peroxinitrito

-

Radicales orgnicos centrados en oxgeno. Formas lipdicas participan en reacciones de peroxidacin de lpidos. Producido en presencia de oxgeno por adicin de radicales a dobles enlaces o eliminacin de hidrgeno. Formado a partir de H2O2 por la mieloperoxidasa. Soluble en lpidos y altamente reactivo. Rpidamente oxida constituyentes de protenas, incluyendo grupos tiol, grupos amino y metionina. Formado en una rpida reaccin entre O2 y NO. Liposoluble y similar en reactividad al cido hipocloroso. Su protonacin forma cido peroxinitroso, que puede someterse a escisin homoltica para formar radicales de hidroxilo y de dixido de nitrgeno.
-

Ante el peligro que representa el dao oxidativo, las clulas se encuentran habilitadas con mecanismos de proteccin: preventivos, secuestradores y reparadores de este deterioro. Los antioxidantes celulares mejor estudiados son las enzimas superxido dismutasa (SOD), catalasa y glutatin peroxidasa. Antioxidantes enzimticos menos estudiados (pero probablemente muy importantes) son la peroxirredoxina y la sulfirredoxina. Otros enzimas que tienen propiedades antioxidantes (aunque esta no es su funcin primordial) incluyen la paraoxonasa, la glutatin S-transferasa, y la aldehdo deshidrogenasa. En el ser humano, el estrs oxidativo est involucrado en muchas enfermedades, como la aterosclerosis, la enfermedad de Parkinson, encefalopata milgica, sensibilidad qumica mltiple, y la enfermedad de Alzheimer y tambin puede ser importante en el envejecimiento. Los radicales hidroxilo pueden dar lugar a modificaciones de los aminocidos (e.g. la formacin de meta-tirosina y orto-tirosina a partir de fenilalanina), hidratos de carbono, iniciar la peroxidacin de lpidos, y oxidar nucleobases. Sin embargo, las especies reactivas de oxgeno pueden resultar beneficiosas ya que son utilizadas por el sistema inmunitario como un medio para atacar y matar a los patgenos, a travs de la fagocitosis. Tambin son utilizadas en la sealizacin celular, denominada sealizacin redox. Este desequilibrio y predominio de los radicales libres se debe a mltiples causas: las endgenas (producidas por el propio organismo en su funcionamiento) tales como la respiracin mitocondrial; la activacin de polimorfonucleares; el metabolismo de cido araquiodnico; las acciones enzimticas, entre otros. Otras causas, las exgenas, se deben a factores externos: contaminacin ambiental; obesidad, sedentarismo, hbitos txicos; estrs prolongado; desconocimiento nutricional; exposicin indebida al sol o a diversas enfermedades como la diabetes, artritis, enfermedad de Crohns, SIDA o daos sobre el sistema nervioso central, cncer, hepatitis A, B y C; insuficiencia renal crnica, asma, enfermedades cardiovasculares y dao por isquemia-reperfusin. Se ha demostrado cientficamente que la presencia de este tipo de estrs oxidativo es causa o consecuencia de ms de 250 enfermedades.

Laboratorio de Biologa sea y Metabolismo Mineral Facultad Cs. Mdicas - UNR - Rosario - Argentina laboratorio@biologiaosea.com.ar www.biologiaosea.com.ar 2006 - 2009 Todos los derechos reservados

Brenda Fina

Figura 1. Esquema que muestra el efecto que producen las ROS sobre la peroxidacin lipdica. Medicin de estrs oxidativo Concentracin de glutatin peroxidasa (GSH-Px): se realizar basndose en el consumo de NADPH a 340nm, coenzima involucrada en la reaccin catalizada por la glutatin reductasa (GSSGR) (Lawrence and Burke, 1976).

2 GSH + H2O

GSH - Px

H2O + GSSG

GSSG-R

2 GSH

NADPH

NADP

Laboratorio de Biologa sea y Metabolismo Mineral Facultad Cs. Mdicas - UNR - Rosario - Argentina laboratorio@biologiaosea.com.ar www.biologiaosea.com.ar 2006 - 2009 Todos los derechos reservados

Brenda Fina

Concentracin de glutatin (GSH): El glutatin es un tripptido que contiene un enlace pptidico inusual entre el grupo amino de la cistena y el grupo carboxilo de la cadena lateral del glutamato. El glutatin es un antioxidante que ayuda a proteger las clulas de especies reactivas de oxgeno. El glutatin es nucleoflico en azufre y ataca los aceptores conjugados electroflicos. Los grupos tiol (SH-) se mantienen en un estado reducido a una concentracin de aproximadamente ~ 5 mM en clulas animales. En efecto, el glutatin reduce cualquier enlace disulfuro (-S-S-) formado dentro de protenas citoplasmticas de cistenas, al actuar como un donante de electrones. En el proceso, el glutatin se convierte en su forma oxidada disulfuro de glutatin (GSSG). El glutatin se encuentra casi exclusivamente en su forma reducida, ya que la enzima que vuelve de su forma oxidada, la glutatin reductasa, es constitutivamente activa e inducible por estrs oxidativo. De hecho, la proporcin de glutatin reducido a glutatin oxidado dentro de las clulas a menudo se utiliza cientficamente como una medida de la toxicidad celular. H2O2 + 2GSH GSSG + 2 H2O. La determinacin de GSH se realizar en homogenados preparados en cido tricloroactico al 5% en HCl 0.01 M (mtodo de Ellman). Este mtodo consiste en la reaccin del cido 5, 5-ditiobis-2nitrobenzoico con tioles alifticos a pH 8, para producir un mol del anin 5-tio-2- nitrobenzoico por cada mol de reaccionante. Dicho anin es un producto coloreado con absorbancia a 412 nm. Lipoperoxidacin en tejidos animales: Los radicales libres atacan a los cidos grasos poliinsaturados de las membranas celulares y lipoprotenas transformndolos en cidos grasos peroxidados, los cuales sufren un acortamiento de su cadena lateral liberando Malondialdehdo (MDA), de tal manera que la concentracin srica de MDA, es proporcional a los cidos grasos poliinsaturados oxidados y por lo tanto un buen indicador de peroxidacin lipdica. La determinacin se basa en la reaccin colorimtrica de perxidos lipdicos con TBA (acido tiobarbitrico) para dar malondialdehdo (MDA) a 532 nm.

Laboratorio de Biologa sea y Metabolismo Mineral Facultad Cs. Mdicas - UNR - Rosario - Argentina laboratorio@biologiaosea.com.ar www.biologiaosea.com.ar 2006 - 2009 Todos los derechos reservados