Ciencias Biológicas Completo

Coletnea em Saneamento Ambiental Srie Temtica: Recursos Hdricos e Saneamento ANO I 2010 Volume 2
ROQUE, O.C.C ; NASCIMENTO, V.B.
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CINCIAS BIOLGICAS APLICADAS AO SANEAMENTO
Odir Clcio da Cruz Roque Valria Borba do Nascimento
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SUMRIO
1 2 2.1 2.1.1 2.1.2 3 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.5.1 3.5.1.1 3.5.1.2 3.5.2 4 4.1 4.2 4.3 4.4 4.4.1 5 5.1 5.1.1 6 6.1 6.2 7 8
A Interface da Engenharia Sanitria e Ambiental e as Cincias Biolgicas A variedade dos seres vivos Os mtodos de classificao Regras internacionais de nomenclatura Organismos de difcil classificao Clulas Estrutura Dimenses Formatos Metabolismo Nutrio Nutrio autotrfica Fotossntese Quimiossntese Nutrio heterotrfica Demanda Bioqumica de Oxignio (DBO) Origens Efeitos Poluidores Definio Noes de prtica laboratorial Mtodos de determinao (exclusivamente da DBO). Modelo matemtico da Curva de DBO Consideraes Exemplo de utilizao Crescimento bacteriano no meio gua Fatores limitantes O crescimento bacteriano Curva do crescimento de uma cultura em batelada Cintica do processo biolgico
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8.1 8.1.1 8.1.2 8.1.3 9 9.1 9.2 9.2.1 9.2.2 9.2.3 9.2.4 9.3 9.3.1 9.3.1.1 9.3.1.2 Modelo de Eckenfelder Determinao da taxa de remoo de substrato Determinao da produo de lodo Necessidades de oxignio gua para consumo humano Aspectos legais Destaques Disposies preliminares Definies Padro de potabilidade microbiolgico Amostragem Noes da prtica Coleta de amostras Cuidados na obteno de amostras Coleta de amostras de gua em poo raso e mananciais superficiais 9.4 9.4.1 9.4.1.1 9.4.1.2 9.4.2 9.4.2.1 9.4.3 9.5 9.5.1 9.5.2 Tipos de exames Exame de tubos mltiplos Meios de cultura Prtica Exame de membrana filtrante Meios de cultura, incubao, resultados Exame pelo meio substrato definido ou cromognico Descontaminao de um sistema Desinfeco de poo Descontaminao de caixa dgua Referncias bibliogrficas Anexo
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1. Interface da Engenharia Sanitria e Ambiental e as Cincias Biolgicas
As atividades do Engenheiro da rea Sanitria e Ambiental em muito necessita das informaes da fsica, matemtica e qumica base da engenharia, bem como de diversas outras cincias onde possui papel fundamental as Cincias Biolgicas. Sem estas informaes no possvel compreender alguns parmetros adotados para projetos em gua, esgotos e resduos que apesar da tentativa de serem completamente exatos esbarram nas propriedades inerentes aos seres vivos. Assim, classificando-se as atividades do saneamento em suas aes bsicas de gua, esgotos e resduos slidos somente para exemplificar, se podem identificar as influncias do conhecimento da biologia para projetar, manter e operar um sistema na rea de engenharia sanitria e ambiental, sem o qual nada possvel realizar quando no bem interpretado. As atividades e projetos de gua, por exemplo, influencia e influenciado no somente pelo clculo, pela construo, pela concepo de projetos, mas tambm pela presena de algas na captao, pela concentrao de microrganismos, pela qualidade biolgica em si do meio gua que deve ser tratada e distribuda a uma populao. A falta de conhecimento de detalhes como a presena de cianobactrias ao nvel de captao de gua a ser tratada pode ser fundamental de qualidade dessa gua e dependendo da concentrao pode ser fatal para o homem que a consuma. Dentro do prprio processo de tratamento, os parmetros devem estar de acordo com concentraes de microrganismos que no afetem a sade, como, por exemplo, no caso de desinfetantes que atuam dentro da prpria clula do patgeno presente meio gua, nas concentraes limitantes de clulas de microalgas nos processos de desinfeco, pela utilizao adequada de desinfetantes de acordo com a presena de patgenos, e o prprio monitoramento da qualidade bacteriolgica da gua a ser distribuda e os seus diversos indicadores de contaminao. Na prpria rede de distribuio e na reservao dessas guas h a necessidade do conhecimento da biologia para se entender as possveis recontaminaes do sistema, a presena de seres resistentes no meio e as novas espcies de microrganismos indicadores de contaminao da gua potvel e as suas limitaes.
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Em esgotos este conhecimento fundamental, as reaes bioqumicas j ocorrem na prpria rede coletora podendo interferir no escoamento, na resistncia do material empregado e na qualidade do esgoto a ser posteriormente tratado. O tratamento por sua vez afetado por esta qualidade biolgica que estabelece as eficincias de tratamento, seleciona a priori o nvel de processo, se primrio, secundrio ou tercirio e estabelece a opo de projeto para a soluo do problema, no esquecendo que praticamente todo o processo de tratamento de esgotos sanitrio no Brasil biolgico. Por outro lado, o lixo (resduos slidos) tem a sua implicao biolgica desde a sua fase de produo dentro das prprias residncias, uma relao com vetores e roedores sendo que a fase biolgica est presente desde o armazenamento, coleta e destino final. Todos os processos que ocorrem na degradao do lixo so primordialmente biolgicos. No h como esquecer que esta relao est intimamente ligada Sade Pblica, pois a maioria das doenas relacionadas ausncia de saneamento esto envolvidas s atividades ligadas a gua, esgotos, lixo, drenagem, vetores e roedores, conforme pode ser visto nas tabelas 1, 2 e 3.
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Tabela 1. Doenas relacionadas gua.
Grupo de doenas Transmitidas pela via feco-oral (alimentos ou gua contaminados por fezes ou urina)) Formas de transmisso O organismo patognico (agente causador da doena) ingerido Controladas pela limpeza com a gua (associadas ao abastecimento insuficiente de gua) Associadas gua (o agente infeccioso est presente na gua multiplicado pela presena de algum animal aqutico como por exemplo o caramujo) A falta de gua e a higiene pessoal insuficiente criam condies favorveis para a sua disseminao. o microorganismo penetra pela pele ou ingerido Principais doenas diarrias e disenterias disenteria amebiana balantidase enterite campylobacteriana clera diarria por Escherichia coli giardase diarria por rotavrus salmonelose disenteria bacilar febre tifide febre paratifide Formas de preveno proteger e tratar as guas de abastecimento e evitar o uso de fontes contaminadas fornecer gua em quantidade adequada e promover a higiene pessoal, domstica e dos alimentos
febres entricas
poliomielite hepatite A leptospirose ascaridase tricurase infeces na pele e nos olhos como o tracoma tifo transmitidos por pulgas piolhos esquistossomose fornecer gua em quantidade adequada e promover a higiene pessoal e domstica
evitar o contato de pessoas com guas infectadas proteger mananciais adotar medidas adequadas para a disposio de esgotos combater o hospedeiro intermedirio combater os insetos transmissores eliminar condies que possam favorecer criadouros evitar o contato com criadouros utilizar meios de proteo individual
Transmitidas por vetores que relacionam com a gua
As doenas so propagadas por insetos que nascem na gua ou picam prximo dela
prximo gua doena do sono procriam na gua filariose malria Arboviroses febre amarela dengue leishmaniose
(Fonte: BARROS et al, 1996 e ROQUE, 1997)
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Tabela 2. Doenas relacionadas a fezes e esgotos

Grupo de doenas Feco-orais (no bacterianas) Formas de Transmisso Contato de pessoa para pessoa, quando no se tem higiene pessoal e domstica adequada Feco-orais (bacterianas) Contato de pessoa para pessoa, ingesto e contato com alimentos contaminados e contato com fontes de gua contaminadas por fezes ou esgotos Ingesto de alimentos contaminados e contato da pele com o solo Principais doenas poliomielite hepatite tipo A giardase disenteria amebiana diarria por vrus febre tifide febre paratifide diarrias e disenterias bacterianas, como a clera ascaridase (lombriga) tricurase ancilostomase (amarelo) tenase cisticercose Helmintos associados gua Contato da pele com gua contaminada esquistossomos e Insetos vetores relacionados com as fezes Procriao de insetos vetores em locais contaminados por fezes filariose (elefantase) Formas de preveno implantar sistema de abastecimento de gua melhorar as moradias e as instalaes sanitrias promover a educao sanitria
implantar sistema de abastecimento de gua melhorar moradias e as instalaes sanitrias promover a educao sanitria implantar sistema de coleta de esgotos construir e manter limpas as instalaes sanitrias tratar os esgotos antes da disposio no solo evitar o contato direto da pele com o solo construir instalaes sanitrias adequadas tratar os esgotos antes da disposio no solo vigilncia sanitria de alimentos e cuidados na sua preparao construir instalaes sanitrias adequadas tratar os esgotos antes do lanamento em curso dgua controlar os caramujos evitar contato com gua contaminada (banho etc.) combater os insetos transmissores eliminar condies que possam favorecer criadouros evitar o contato com criadouros e utilizar meios de proteo individual
Helmintos transmitidos pelo solo
Tnias (solitrias) na carne de gado ou porco
Ingesto de carne mal cozida de animais infectados
(Fonte: Barros et al, 1996 e Roque, 1997)
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Tabela 3. Doenas relacionadas com lixo e transmitidas por vetores.

Vetores Ratos Formas de transmisso atravs da mordida, urina e fezes Moscas por via mecnica (atravs das asas, patas e corpo) atravs das fezes e saliva Mosquitos atravs da picada da fmea Baratas por via mecnica (atravs das asas, patas e corpo) e pelas fezes Sunos pela ingesto de carne contaminada Aves atravs das fezes (Fonte: HELLER, 1997) Principais doenas peste bubnica tifo murino leptospirose febre tifide salmonelose clera amebase disenteria giardase malria leishmaniose febre amarela dengue filariose febre tifide clera giardase cisticercose toxoplasmose triquinelose tenase toxoplasmose
Portanto de fundamental importncia, conhecer esta interface, uma vez que dela dependemos de estabelecer os limites de tolerncia de projeto, os seus fatores de escala biolgicos, de como projetar, operar um sistema de saneamento adequadamente.
2. A variedade dos seres vivos
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H na terra milhares e milhares de organismos que vivem no ar, no solo e na gua. Apresentam tambm grande variedade de tipos, desde seres microscpicos at animais e vegetais de grande porte. Essa diversidade imensa fornece muito dos problemas com que os bilogos se deparam e muitas informaes ainda necessitam ser desvendadas. Seria impossvel estudar separadamente cada um dos diferentes tipos de organismos e antes de poder enfrentar os numerosos problemas relacionados com os seres vivos, o homem teve de criar alguns sistemas para classific-los, ou seja, separ-los em grupos. Nenhum dos sistemas de classificao existentes completamente satisfatrio, uma vez que h seres que no se enquadram perfeitamente em nenhuma categoria dessas classificaes.
2.1.
Os mtodos de classificao
Portanto, para se estudar a grande variedade de seres vivos foi necessria criar
separaes, grupos e um meio de classificao:
2.1.1. Regras internacionais de nomenclatura

Para a classificao dos seres vivos foi necessrio definir o que seria espcie, a unidade de classificao. A definio de espcie dada por John Ray foi a primeira tentativa de se estabelecer um critrio seguro de classificao. Segundo Ray, Espcie definido como um grupo de indivduos semelhantes que tm ancestrais comuns. A unidade de classificao usada pelos bilogos chamada, portanto, de espcie. A palavra espcie usada para animais e vegetais to semelhantes que, no s tem as mesmas caractersticas estruturais, como tambm possam ser cruzados e produzirem descendentes frteis. O nome da espcie escrito com inicial minscula e o gnero com inicial maiscula e ambos escritos com letras grifadas, negrito, sublinhadas ou itlicas,
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ou seja, de forma a ser destacada no texto. As espcies recebem uma denominao latina binomial, fornecendo um rtulo internacional caracterstico (sistema binomial de nomenclatura, segundo Pelczar, Reid, Chan, 1980), como por exemplo:
Bacillus albus
Onde o primeiro termo o gnero em letra maiscula.

A denominao do gnero uma palavra latina ou grega, um novo termo composto de razes latinas ou gregas ou o nome latinizado de uma pessoa. De qualquer modo, o nome do gnero sempre usado como palavra latina, que pode ser dos gneros masculino, feminino ou neutro. Isto exige, que a denominao final da espcie concorde com o gnero latino da primeira palavra (PELCZAR, REID, CHAN, 1980).
Pode-se exemplificar alguns gneros bacterianos derivados de palavras latinas ou de razes latinas de acordo com PELCZAR, REID e CHAN, 1980: Bacillus (masculino) = pequeno basto; Lactobacillus (masculino) = pequeno basto de leite; Sarcina (feminino) = um pacote ou grumo. Gneros bacterianos de origem grega latinizados: Micrococcus (masculino) = pequeno gro; Clostridium (neutro) = pequeno fuso. Gneros bacterianos denominados em homenagem a pessoas (latinizados): Pasteurella (feminino) = homenagem a Louis Pasteur; Erwinia (feminino) = homenagem a Erwin F. Smith, pioneiro americano da fitopatologia.
Pelczar e colaboradores ainda indicam que a segunda palavra do nome de uma bactria escrita (com raras excees) em letras minsculas e, usualmente, descritiva. Assim por exemplo:
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adjetivo que modifica o nome: Bacillus albus (Bacillus branco); adjetivo sob a forma de particpio presente de um verbo: Clostridium dissolvens (Clostridium que dissolve); substantivo no caso possessivo que modifica o nome genrico: Salmonella pullorum (Salmonella dos pintos); nome em aposio, de carter explicativo: Bacillus radiccola (Bacillus habitante da raiz). Algumas classificaes homenageiam pessoas como, por exemplo, Escherichia coli (Escherich). s vezes necessrio subdividir uma espcie em variedades. Isto ocorre quando existem diferenas numa mesma espcie, insuficientes para que seja uma nova espcie. Assim, o Streptococcus lactis que produz aroma de malte designada como Streptococcus lactis maltigenes (PELCZAR, et al., 1980) Outra conveno na impossibilidade de se distinguir a espcie a que pertence um indivduo de um determinado gnero. Neste caso, anota-se em geral o nome do gnero seguido da abreviao sp, como no exemplo: Klebsielle SP
2.1.2. Organismos de difcil classificao

A classificao tradicional dos seres vivos apresenta dois grandes reinos, o Vegetal e o Animal. Porm h seres microscpicos que no podem ser classificados nos dois grandes reinos por apresentarem ao mesmo tempo caractersticas e respostas ao meio ambiente tanto de comportamento vegetal como animal dependendo dos estmulos e do meio em que vivem. Portanto, foram classificados em novo reino, agora, denominados Protistas. A diferena bsica entre os Protistas e os demais estava no nvel de diferenciao celular encontrado entre os indivduos Protistas e os dos reinos Animal e Vegetal. Ou seja, num Protista, as clulas de um mesmo indivduo so morfolgica e funcionalmente similares, o que reduz
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sobremaneira a sua capacidade de adaptao e desenvolvimento. Nos organismos superiores, as clulas tm diferenciao por onde ocorre uma diviso de trabalho (von SPERLING, 1996). A classificao dos seres vivos na atualidade engloba os seguintes reinos: (a) monera (seres mais simples, sem ncleo diferenciado, como bactrias e cianofceas), (b) protistas (seres simples, mas com ncleo diferenciado, como algas, fungos e protozorios), (c) vegetal, (d) animal. H autores que acrescentam mais um reino, o dos fungos (SILVA Jr. e SASSON, 1993). Nesta classificao no esto includos os vrus, uma vez que possuem caractersticas tanto de seres vivos como de seres no vivos, sendo que geralmente recebem cdigos de nomes como HIV ou esto relacionados diretamente com a doena que causam como vrus Hepatite A, por exemplo. As espcies esto agrupadas de acordo com a teoria da evoluo que introduziu a idia de que as espcies se modificam e que, durante longos perodos de tempo, novas formas resultam de outras mais antigas. As espcies muito semelhantes so colocadas num grupo maior, denominado gnero. Por sua vez, gnero semelhantes so agrupados em famlias, famlias com caractersticas semelhantes constituem uma ordem. Um conjunto de ordem caractersticas semelhantes constituem uma classe, e um conjunto de classe constitui um filo. Com a finalidade de se uniformizar o uso de nomes para os organismos de maneira que os bilogos pudessem entender foram criadas as Regras Internacionais de Nomenclatura , de modo que a cada ser atribudo um nome cientfico vlido internacionalmente. Por outro lado as bactrias podem ser colocadas em grandes grupos quando atendem a certas caractersticas comuns ou atendem a uma definio dada para uma funo. Assim como exemplo, pode-se definir um Grupo Coliforme, um Grupo de Coliformes Fecais, um Grupo de Streptococos fecais, que so indicadores de contaminao da gua potvel e que podem agregar diversas espcies que atendem a uma mesma definio para o grupo.
3. Clulas
_______________________________________________________________________________ _ 3.1. Estrutura

As clulas apesar de serem muito pequenas so extremamente complexas. Precisam dispor de mecanismos para obter e usar energia, para se reproduzir, para transportar alimento para o seu interior e para expelir o material intil. Todas essas funes devem ser executadas coordenadamente, fazendo da clula uma unidade. Pode-se ilustrar a clula conforme a figura 1, porm no exatamente como se encontra na natureza. Para a Engenharia Sanitria e Ambiental dentre as diversas estruturas existentes tomaram-se como importante as seguintes partes constitutivas:
Cpsula Citoplasma Membrana Celular ou Citoplasmtica Parede Celular
Figura 1. Ilustrao esquemtica da clula.
Membrana celular ou citoplasmtica semi-permevel, envolve a clula propriamente dita e exerce o papel de selecionar as substncias que so necessrias s clulas;
Parede celular estrutura que mantm a clula em seu formato. A rigidez por ela exercida, porm permite a troca com o meio exterior e mantm a presso osmtica que interessa clula de acordo com o meio ambiente a qual est inserida. A parede constituda de diversos componentes tais como, aminocidos, polissacardeos e carboidratos;
Cpsula - em algumas clulas a parede pode estar envolvida por uma camada gelatinosa denominada cpsula, formada por material eliminado pela prpria clula que tem o poder de aderncia de forma a obter o material necessrio para a sua subsistncia (nutrientes, carbono e etc.) ou proteo contra agresses ao ambiente em que est inserida;
As clulas que se locomovem o fazem atravs de clios ou flagelos, que so estruturas prprias para o movimento;
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Dentro do Citoplasma encontram-se cidos nuclicos (RNA), importante para a sntese de protenas, presentes em estruturas denominadas Ribossomos. Ainda de interesse apresentam-se os grnulos de reserva alimentar, importantes no crescimento bacteriano em processos de tratamento de esgotos e a estrutura do ncleo que pode ser pontual ou difuso no Citoplasma. A clula cujo ncleo encontra-se confinado por uma membrana celular (protistas: algas, protozorios e fungos) so chamados de eucariotas, e aquelas cujo ncleo est difuso dentro do citoplasma (monera: cianofceas, bactrias), so chamados de procariotas. O ncleo rico em cidos desoxirribonuclicos (DNA), que contm a informao gentica para a reproduo dos seres.
3.2.
Dimenses
As dimenses dos vrus encontram-se na faixa de 10 -3 a 10-1 m, slidos
considerados coloidais, as bactrias na faixa de 10 -1 a 101 m, considerados slidos em suspenso e as algas e protozorios na faixa de 100 a 102 m.
3.3.
Formatos
Existem diversas formas de bactrias, as principais citadas de interesse da
Engenharia so as formas cocos (esfricas), como por exemplo, os estreptococos; cocobacilo (esfricas achatadas), bastonete ou bacilo (basto), por exemplo, coliformes; vbrio (vrgula), por exemplo, vibrio cholerae; espiralados (espiras), como por exemplo, o Leptospira; espiroquetes.
3.4.
Metabolismo
Os processos qumicos que ocorrem simultaneamente na clula,
conjuntamente denominados metabolismo, podem ser divididos em duas categorias (La Rivire, 1980): Desassimilao ou catabolismo: reaes de produo de energia, nas quais ocorre a degradao do substrato;
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Assimilao ou anabolismo: reaes que conduzem formao de material celular (crescimento) com o auxlio da energia liberada na desassimilao. De uma maneira simplificada, os organismos crescem e se reproduzem s custas da utilizao da energia liberada por meio da desassimilao. Na desassimilao, a energia armazenada em forma qumica nos compostos orgnicos (substrato) liberada, sendo convertida na assimilao em material celular. O crescimento lquido resultante do balano entre o anabolismo (positivo) e o catabolismo (negativo). Em ambas as categorias, as transformaes qumicas ocorrem numa seqncia de diversas e intrincadas reaes intermedirias, cada qual catalizada por um tipo especfico de enzima. A maioria das enzimas est localizada dentro da clula: tais so denominadas enzimas intracelulares ou endozimas. No entanto, algumas enzimas so lanadas no meio externo, sendo designadas por enzimas extracelulares ou exoenzimas. A sua importncia est ligada ao fato de que elas desempenham reaes de hidrlise fora da clula, convertendo grandes molculas de substrato em molculas menores, as quais podem ento passar pela membrana celular, tornando-se disponveis para consumo pela clula (transcrio de von SPERLING, 1996).
3.5.
Nutrio
O organismo ao nutrir-se exerce sua atividade sobre o meio, de maneira a
extrair dele substncias que transformar nos constituintes de sua prpria estrutura. Os principais objetivos desse processo so, pois, obter material para a autoconstruo do organismo e alm disso, conseguir substncias de alto valor energtico potencial para a realizao de suas atividades motoras e demais reaes exotrmicas, ou seja, os processos catablicos e anablicos. Para a realizao do processo de nutrio, existem entre os seres vivos, dois tipos de comportamento com relao ao meio que caracterizam duas maneiras de enfrentar o problema da obteno de alimentos, ou seja, de fontes de energia, o comportamento autotrfico, caracterstico dos vegetais e das algas e o
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comportamento heterotrfico, que caracteriza o animal tpico e muitas das bactrias que a Engenharia Sanitria e Ambiental se utiliza. O processo autotrfico de obter molculas de elevada estrutura consiste em sintetizar essas substncias a partir de molculas de baixo poder energtico como o CO2 e H2O. O processo de nutrio heterotrfico se utiliza de substncias de alto poder de liberao de energia como, por exemplo, matria orgnica dissolvida no meio, denominada de substrato e que pode ser representada pela frmula geral CxHyOz.
3.5.1. Nutrio Autotrfica
3.5.1.1.
Fotossntese
No citoplasma podem existir algumas estruturas bem diferenciadas que so os plastos ou plastdeos que so corpsculos de nmero ou formas variveis, geralmente contendo pigmentos (caso em que se denominam tambm, cromatforos), que contm clorofila na maior parte dos vegetais, os quais so denominados de cloroplastos. Nas bactrias cianofceas (anteriormente denominadas de algas azuis), entretanto, o pigmento se encontra difundido na massa citoplasmtica, no constituindo corpsculo. Algumas bactrias que contm clorofila, tambm a possuem dessa forma. Nas algas, como exemplo, frequentemente na clula o pigmento verde no se encontra s, mas ao lado de outros pigmentos de cores diferentes tais como: azul (ficocianina), vermelho (ficoeretrina), alaranjado (caroteno), amarelo (xantofila). Quando em grande quantidade podem mascarar a presena de clorofila. Alguns desses pigmentos como a ficoeretrina e certos carotenides so capazes por sua vez, de absorver raios luminosos de determinados comprimentos de onda e desempenhar tambm, algum papel na fotossntese suplementando, mas no substituindo a clorofila em certas espcies de algas. O papel da clorofila como tambm de outros pigmentos auxiliares de fotossntese, consiste principalmente em absorver a luz que ser aproveitada no processo e transform-la em outra forma de energia que possa ser utilizada na sntese. A reao de sntese que se passa nas clulas possuidoras de clorofila uma reao denominada fotoqumica na qual o CO2 combinado a H2O consumindo energia
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proveniente da luz, na proporo de 673 kcal/mol para formar um carboidrato e como sub-produto o O2. Os principais fatores externos que podem provocar mudanas na velocidade ou intensidade dessa reao so: a quantidade e a qualidade de luz existente; teor de CO2 disponvel; temperatura.
A quantidade de luz tem sua importncia devido ao tempo em que sol fica sobre o horizonte, tempo este que permite a mxima produo de O 2 de acordo com a presena da luz solar, sendo este aspecto fundamental em processos de tratamento de esgotos por lagoas de estabilizao facultativas. O CO2 disponvel fundamental ao processo nutritivo, e em meio gua diretamente obtido da alcalinidade que quando fora de equilbrio pode provocar a elevao do pH do meio, pelas reaes de formao de hidrxidos ou precipitao de carbonatos. A temperatura tambm influencia o processo, pois valores elevados (aproximadamente 35C) tende a diminuir a velocidade de fotossntese no meio gua e a diminuio do oxignio dissolvido do meio pela entropia causada pelo efeito de aumento de temperatura. O processo fotossinttico pode ser ilustrado pela equao 1 que apenas representativa de todo o complexo de reaes da fotossntese:
n CO 2 +n H2 O
A lg as
Luz
C xHy O z +n H2 O + [ n O2 ]
(1)
As algas so autotrficas usando o dixido de carbono ou bicarbonatos como fonte de carbono e nutrientes inorgnicos como os fosfatos e nitrognio este na forma de amnia ou nitratos. Em adio, traos de certos nutrientes so necessrios como Mg, B, Co, Ca e outros.
_______________________________________________________________________________ _ 3.5.1.2. Quimiossntese

As bactrias autotrficas oxidam a matria inorgnica em busca de energia e usam dixido de carbono como uma fonte de carbono. As bactrias a nitrificao, do enxofre e do ferro so as de maior significado para a Engenharia Sanitria e Ambiental.
3.5.1.2.1. Nitrobactrias
A fim de obter energia as bactrias da nitrificao oxidam o nitrognio amoniacal em nitratos em duas etapas (equao 2):
NH3 OH+ + O2 NO2 + E(energia) Nitrobacter
Nitrossomonas
(2)
Em gua a presena de nitrognio amoniacal e nitritos indicam a presena possvel de material orgnico e, portanto, possvel contaminao por esgotos ou fezes. A presena de nitratos por si, no indica possvel contaminao embora seja estabelecido valores mximos permissveis de concentrao pelo Padro de
Potabilidade Norma 518/2004 do Ministrio da Sade. Existem processos de tratamento de esgotos que levam ao efluente final concentraes de nitratos elevados que no podem ser lanados nos corpos receptores por permitirem ou acelerarem processos de eutrofizao do meio gua. A Norma CONAMA 357/2005, estabelece valores limites nos padres de lanamento, o que torna necessrio processo de desnitrificao que quando biolgicos so chamados de Processos Anxicos, heterotrficos. Processos de nitrificao e desnitrificao em tratamento de efluentes podem ser verificados, assim como processos aerbios e anaerbios, em termos de potencial redox (mV) produzido. Potenciais positivos indicam reaes de oxidao da matria orgnica em meio aerbio, potenciais negativos indicam reaes em meio anaerbio e potenciais em torno de zero apresentam processos anxicos, na presena de nitratos.
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As nitrobactrias so encontradas nos solos, nos esgotos e gua que recebem contaminao orgnica de qualquer procedncia.
3.5.1.2.2. Sulfobactrias
As bactrias do enxofre promovem a reao abaixo (equao 3 e 4) que causa corroso da parte superior interna dos coletores de esgotos. Os esgotos conduzidos pela rede frequentemente se tornam spticos e liberam gs sulfdrico:
C x H y O z + SO2 4 CO 2 + H2 S + E(meio anaerbio)
(3)
H2S + O2 H2SO 4 + E
(4)
Isto ocorre normalmente nos coletores construdos com baixa declividade e em climas quentes. O gs sulfdrico absolvido na umidade da condensao nas paredes da tubulao. Ali as bactrias do enxofre, capazes de tolerar nveis de pH menores que 1 oxidam o cido fraco H 2S para cido forte H2SO4 usando oxignio do ar interior do coletor. O cido sulfdrico formado reage com o concreto, reduzindo a sua resistncia estrutural, podendo causar o colapso do coletor. O uso de tubulaes construdas com materiais resistentes corroso, como o barro vitrificado ou plstico PVC a melhor proteo contra essa ao nos coletores. Nos coletores de grandes dimenses, onde o tamanho e o custo exigem o uso do concreto, sua corroso pode ser reduzida atravs da ventilao, visando a expulso do gs sulfdrico e reduzindo a umidade da condensao.
Exemplo: Gneros Desulfobacter, Desulfococcus, Desulfosarcina, Desulfobacterium e Desulfonema (von Sperling, 1996).
3.5.1.2.3.
Ferrobactrias
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As ferrobactrias se utilizam da forma solvel de ferro e transformam geralmente carbonatos em hidrxidros insolveis que se precipitam na prpria superfcie da membrana celular bacteriana formando secrees de colorao amarelada ou avermelhada (equao 5).
4 FeCO3
+ O2 + 6 H2 O4 Fe(OH) 3 + 4 CO2 + E
(5)
As bactrias do ferro podem proliferar nas tubulaes de gua, onde o ferro dissolvido disponvel como fonte de energia e bicarbonato como fonte de carbono. Exemplo: Gneros Galionella, Crenothrix, Leptohtrix. So geralmente bactrias filamentosas que com o avano da idade morrem sendo decompostas liberando gosto e odores desagradveis. O mtodo para eliminar a presena deste tipo de microrganismo tratar a gua por aerao e desinfetar com cloro. A esse grupo pertence tambm, o Gnero Sphaerotilus, que entretanto, no uma ferrobactria obrigatria, uma vez que pode oxidar tambm o mangans e nem auttrofa obrigatria pois, vive heterotroficamente em ambientes ricos em matria orgnica, como por exemplo, os esgotos.
3.5.2. Nutrio Heterotrfica

As bactrias heterotrficas, algumas vezes referidas como saprfitas que utilizam a matria orgnica em decomposio, usam a matria orgnica como fonte de energia e como uma fonte de carbono para sntese. A gerao de energia nas clulas microbianas depende do microorganismo, do meio em que est inserido, se h presena de oxignio, concentrao de nitrato e baixa concentrao de oxignio. Neste caso a gerao de energia dada por meio da respirao ou da fermentao. Quando realizada na presena de oxignio denominada de aerbia e faz parte dos processos de catabolismo oxidativo e na ausncia de oxignio de anaerbia ou de processo de catabolismo fermentativo. Os processos que so
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realizados em concentraes baixssimas de oxignio dissolvido, porm na presena de nitratos so denominados de anxicos, e so realizadas por bactrias facultativas. Ao nutrir-se a bactria consome eltrons que ficam armazenados em coenzimas que devem desfazer-se ao longo do processo, passando esses eltrons a um receptor de eltrons. Como todo o processo de oxidao, pode ser realizado por simples retirada de tomos de hidrognio, sendo este o principal fenmeno que ocorre. O hidrognio retirado da molcula orgnica, deve ser transferido a um outro composto o qual recebe a denominao genrica de aceptor de eltrons. Quando o aceptor de hidrognio o oxignio livre denominada de aerbia e quando o aceptor outra substncia que no o oxignio, anaerbia ou anxica. Conforme von Sperling, 1996, pode-se estabelecer a tabela 4 de aceptores de eltrons:
Tabela 4. Aceptores de eltrons listados em ordem decrescente de liberao de energia.

Condies Aerbias Anxicas Anaerbias Aceptor de eltrons Oxignio (O2) Nitrato (NO3-) Sulfato (SO42-) CO2 Aceptor aps reao H2O N2 H2S CH4 Processo Metabolismo aerbio Desnitrificao Dessulfatao Metanognese
Quando vrios aceptores de eltrons se encontram disponveis no meio, o sistema utiliza aquele que produz a mais alta quantidade de energia. Por essa razo, o oxignio dissolvido utilizado primeiramente e, aps a sua exausto, o sistema deixa de ser aerbio. Caso haja nitratos disponveis no meio lquido, os organismos aparelhados a utilizar o nitrato na respirao passam a faz-lo, convertendo o nitrato a nitrognio gasoso. Estas condies......sendo designadas de anxicas. Quando ....tem-se condies anaerbias estritas so utilizados sulfatos, os quais so reduzidos a sulfetos, e o dixido de carbono que convertido a metano. Enquanto houver substncias de maior liberao de energia, as inferiores no sero utilizadas (Arceivala, 1981, apud von Sperling, 1996) .
As principais equaes que podem representar a gerao de energia so: Condies aerbias (equao 6):
C x Hy O z +n O2 n CO2 +n H2 O
(6)
_______________________________________________________________________________ _
Condies anxicas (equao 7):
A desnitrificao a liberao de CO 2 e N2 sob a forma gasosa, quando o nvel de oxignio torna-se baixo (OD < 0,5 mg/L ) e h fonte de carbono disponvel para receber o oxignio e o pH 7. A representao da equao biolgica pode ser:
NO3 +4 H + +5 C org 2 N2 +2 H2O+5 CO2
(7)
No caso desta ltima equao, a desnitrificao ocorre pela participao de bactrias hetertrofas facultativas, no sendo, portanto, processos auttrofos. Condies anaerbias (equao 8): o o Reduo de sulfatos (j descrita) Reduo de CO2 (metanognese hidrogenotrfica)
H2 + CO2 CH4 + 2 H2 O
o
(8)
Metanognese acetotrfica (equao 9)
CH3COOH CH4 + CO2
(9)
4. Demanda Bioqumica de Oxignio (DBO)
4.1.
Origens
Efluentes sanitrios, industriais orgnicos.
4.2.
Efeitos Poluidores
No ecossistema h um balanceamento entre o oxignio produzido na
fotossntese e o oxignio consumido das bactrias aerbias. O excesso de carga
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orgnica quebra o equilbrio havendo um consumo de oxignio para oxidar a matria orgnica. Este consumo pode ser excessivo ocasionando um dficit de oxignio do meio ocasionando efeitos nocivos ao meio podendo eliminar a vida dos plnctons, necton e dos bentos.
4.3.
Definio
A DBO definida como a quantidade de oxignio necessria para degradar a
matria orgnica presente no meio gua, medida em 5 dias e a temperatura de 20C. , portanto, por definio, uma medida laboratorial entre duas determinaes de O.Dinicial e O.Dfinal, em um espao de 5 dias, a temperatura de referncia de 20C, de uma mesma amostra.
4.4.
Noes da Prtica Laboratorial

A quantidade de matria orgnica presente, cerca de 70% dos slidos no
esgoto mdio de origem orgnica, geralmente estes compostos orgnicos so de uma combinao de carbono, hidrognio, oxignio e nitrognio. H presena tambm de enxofre e outros elementos necessrios vida dos microorganismos. Os grupos de substncias orgnicas nos esgotos so constitudos
principalmente por: Compostos de protenas (40 a 60%), N, P, Fe, C, H, S; Carboidratos (25 a 50%); Gorduras e leos (10%); Uria, detergentes, pesticidas, fenis (em menor quantidade).
4.4.1. Mtodos de determinao (exclusivamente da DBO)
_______________________________________________________________________________ _
A determinao prtica da DBO depende da concentrao de matria orgnica na amostra. Quando em concentraes elevadas necessrio realizar diluies para determinar os valores. Quando no h a presena de microorganismos necessrio acrescent-los no processo.
4.4.1.1.
Mtodo direto
Realizado diretamente na amostra utilizado para guas lmpidas de superfcie e que realizem valores menores do que 5 mg/L. O procedimento laboratorial se utilizar trs frascos de DBO e realizar a medio direta de ODinicial no primeiro dia e ODfinal dos ltimos dois frascos no prazo de 5 dias e incubao a 20C.
Ai
Af1
Af2
onde: Ai = OD da amostra no primeiro dia (mg/L) Af1= OD da amostra aps 5 dias (mg/L) Af2= OD da amostra aps 5 dias (mg/L) O resultado dado pela seguinte equao 10:
DBO (mg / L ) = Ai [ (Af1 + Af2 ) / 2]
(10)
4.4.1.2.
Mtodo da diluio sem semeadura
Preparo da gua de diluio: para a gua de diluio utilize gua destilada e desmineralizada. Reagentes
_______________________________________________________________________________ _
A Soluo tampo de fosfatos: dissolver 8,5 g de KH2PO4; 21,75 g de K2HPO4; 33,4 g de Na2HPO4.7H2O e 1,7 g de NH4Cl em 500 ml de gua destilada e dilua a 1L. O pH da soluo deve ser 7,2 sem ajustes posteriores. Alternativamente, dissolva 42,5 g de KH 2PO4 ou 54,3g de K2HPO4 em 700 ml de gua destilada. Ajuste o pH para 7,2 com NaOH 30% e dilua a 1L. B Soluo de sulfato magnsio : dissolver 22,5 g de Mg SO4.7 H2O em gua destilada e dilua a 1L. C Soluo de cloreto de clcio : dissolver 27,5 g de CaCl 2 em gua destilada e dilua a 1L. D Soluo de cloreto frrico : dissolver 0,25 g de FeCl3.6H2O em gua destilada e dilua a 1L. E Solues cidas e alcalinas: 1 N para neutralizao de amostras: cida: lentamente e enquanto agita, adicione 28 mL de cido sulfrico concentrado em gua destilada e dilua a 1L. alcalina: dissolva 40 g de soluo de hidrxido de sdio em gua e dilua a 1L. Preparo Em um volume de 2L de gua destilada e desmineralizada, saturada de OD durante 24 horas no mnimo, adicione com pipeta volumtrica 2 mL de cada soluo ( 1 mL para cada litro de gua de diluio) (solues A, B, C e D). Misture com basto de vidro sem formao de bolhas. Recomendaes Devem ser feitas pelo menos 3 diluies Para amostras com DBO maior que 5 mg/L deve-se fazer uma diluio de modo que se obtenha uma concentrao que permita queda no OD em 5 dias menor que 5 mg/L.
_______________________________________________________________________________ _
Neste caso a norma recomenda que sejam preparados 5 frascos de DBO com a seguinte arrumao:
Bi
Ai
Af1
Af2
Bf
onde: Bi = OD da gua de diluio inicial (branco, mg/L) Bf = OD da gua de diluio aps 5 dias (OD do branco, mg/L) Seqncia A. neutralizar as amostras cidas ou alcalinas com solues diludas de NaOH ou H2SO4 para pH aproximado de 7. B. pipetar nos 3 frascos para amostra um volume determinado da mesma e completar o volume dos frascos com gua de diluio at transbordar. Fechar os frascos com as respectivas rolhas, evitando a formao de bolhas de ar no interior dos frascos. C. completar o volume dos frascos usados como branco com a mesma gua de diluio usada para a amostra. D. determinar o OD nos frascos Bi e Ai, no mximo dentro de 15 minutos, aps completar o volume desses frascos com gua de diluio. E. determinar o oxignio dissolvido das amostras e branco finais, aps 5 dias de incubao. Nos frascos de amostras as deplees na faixa de 40-70% do OD inicial daro resultados mais verdadeiros, sendo que se o OD final de uma diluio for menor que 1 mg/L ou maior que 5 mg/L o resultado est comprometido. Resultado (equao 11)
_______________________________________________________________________________ _
DBO (mg / L ) = { Ai [ (Af1 + Af2 ) / 2] 300mL de Amostra}
(11)
4.4.1.3.
Procedimento
Mtodo da diluio com semeadura
O mesmo do mtodo anterior com relao gua de diluio e diluies A. separar 5 frascos DBO para cada amostra a ser analisada e pipetar em todos, uma certa quantidade igual de semente (A semente deve ser inoculada numa diluio de 1%. A diluio da amostra depender da concentrao de material orgnico da amostra, como na tabela 5). Procurar usar frascos com volumes os mais prximos possveis para uma mesma amostra. B. os 5 frascos devero ser assim identificados:
. Bi Ai Af1 Af2 Bf
C. neutralizar as amostras cidas ou alcalinas com solues diludas de NaOH ou H2SO4, para pH 7,0, utilizando potencimetro. D. pipetar nos 3 frascos para amostra um volume determinado da mesma, e completar o volume de frascos com gua de diluio at transbordar. Fechar os frascos com as respectivas rolhas evitando a formao de bolhas de ar no interior dos frascos. E. completar o volume dos frascos usados como branco com a mesma gua de diluio usada para a amostra.
_______________________________________________________________________________ _
F. incubar 20 C por 5 dias, os frascos Bf , Af1, Af2. G. Determinar o oxignio dissolvido nos frascos Bi e Ai, no mximo dentro de 15 minutos, aps completar o volume desses frascos com gua de diluio. H. Determinar o OD das amostras e branco finais (Bf , Af1, Af2). I Exemplo: Volume da semente: 0,2 mL Volume de amostra: 0,1 mL
Frascos Bi Bf Ai Af1 Af2 Vm
N do Frasco 290 320 400 326 72 -
Volume do Frasco 304,4 310 322 322.6 323 316,4
Volume do Titulante 8,82 8,05 8,92 6,37 6,27 -
Volume Corrigido 9,17 8,22 8,76 6,25 6,14 -
Volume mdio = mdia aritmtica dos volumes dos frascos Volume Corrigido = {Vm x Volume do titulante}/Volume do frasco Resultado (equao 12) mg/L DBO = {[(Ai Afx) (Bi Bf)} Vm}/Volume da amostra (12) Ai = volume gasto para titular a amostra imediatamente aps a preparao Afx = volume gasto para titular a amostra aps 5 dias de incubao (mdia de 2 frascos) Bi = volume gasto para titular o branco Bf = volume gasto para titular o branco aps 5 dias de incubao
_______________________________________________________________________________ _
Vm = volume mdio do volume dos frascos utilizados. Resultado do Exemplo: mg/L DBO = {{8,76 [(6,25 + 6,14) /2] (9,17 8,22)}/0,1} 316,4 = 5.125,6
Tabela 5. Nveis de diluio da amostra de acordo com intervalo de DBO. Intervalo de DBO (mg/L)* 20.000-70.000 10.000-35.000 4.000-14.000 2.000-7.000 1.000-3.500 400-1.400 200-700 100-350 40-140 20-70 10-35 4-14 0-7
(Fonte: Metcalf & Eddy, 1991)
% de diluio da amostra 0,01 0,02 0,05 0,1 0,2 0,5 1,0 2,0 5,0 10,0 20,0 50,0 100
*para se estimar a DBO:

Esgoto sanitrio: DBO/DQO = 0,4 0,8 DBO/COT = 0,8 1,0 OBSERVAES GERAIS: As garrafas devem ser lavadas com detergente, sulfocrmica e rinsadas com gua destilada e deionizada. As amostras devem estar com pH na faixa de 6,5 7,5. Na incubao as garrafas devem ficar imersas em gua para evitar entrada e/ou sada de ar. O OD residual de todas as garrafas deve ser 1,0 mg/L.
5. Modelo matemtico da curva de DBO
_______________________________________________________________________________ _ 5.1. Consideraes

Se determinar a DBO a cada dia e se colocar os valores em grfico dessa determinao encontrar-se- a seguinte figura 2:
DBO (mg/L)
150
2 ESTGIO (NITROGNIO) DBO FINAL 1 ESTGIO (CARBONO)
tempo (dias)
Figura 2. Curva da DBO segundo Theriault.
Este grfico traduz a reduo da Demanda Bioqumica de Oxignio de esgoto fresco, segundo THERIAULT. Nesta curva relativa ao oxignio utilizado, permite distinguir dois estgios. O primeiro estgio caracteriza-se pela diminuio crescente da quantidade de oxignio utilizada em cada intervalo de tempo. Assim, nos primeiros cinco dias so consumidos aproximadamente 100 mg/L de oxignio, ao passo que nos cinco dias seguintes so necessrios cerca de 30 mg/L de oxignio na curva de 20C. Esse primeiro estgio corresponde oxidao de compostos de carbono e substncias de mais fcil decomposio. Depois de decorridos dez ou vinte dias, verifica-se que a demanda de oxignio acelera-se rapidamente. Esse aumento de demanda corresponde ao incio do ataque aos compostos de nitrognio, a nitrificao. Ao fim de 20 a 30 dias, a demanda passa a ser pequena e relativamente uniforme. Pode-se ento verificar que o aspecto da curva devida ao material carbonaceo permite relativar com as reaes qumicas de cintica de primeira ordem que so expressas matematicamente pela equao 13:
_______________________________________________________________________________ _
dLt/dt = - K Lt modelo matemtico da cintica de primeira ordem (13)
onde:
Lt = quantidade de DBO remanescente do primeiro estgio na gua, no tempo t.
O sinal negativo na equao indica que: dLt/dt < 0, onde Lt > 0
dLt/dt = taxa de consumo de matria orgnica por oxidao biolgica aerbia.
K = constante de proporcionalidade (T-1).
A equao pode ser reescrita (equao 14):
dLt/Lt = - K dt
(14)
Integrando a equao, desde o tempo zero correspondente a concentrao inicial de matria orgnica, L, ao tempo t, correspondente a concentrao Lt, tm-se (equao 15 e 16):
ln Lt ln L = - K. t
(15)
ln Lt/L = - K. t
(16)
_______________________________________________________________________________ _
Passando para logaritmo decimal (equao 17):
Log Lt/L = - K. t/2,303
(17)
Fazendo K/2,302 = k (coeficiente da velocidade de consumo de substrato, T -1) (equao 18 e 19)
Log Lt/L = - k.t
(18)
Lt/L = 10
k.t
(19)
Onde: L = DBOL = DBO remanescente no tempo t = 0 (a DBO final ou total do primeiro estgio, ou seja, a DBO inicialmente presente). A quantidade de oxignio remanescente no tempo t igual a (equao 20):
Lt = L. 10
kt
(20)
E y, a quantidade de DBO que foi produzida no tempo t, igual a (equao 21 e 22):
y = L Lt
(21), portanto
Lt = L y
(22)
Substituindo a equao 22 na equao 20 obtm-se as equaes 23, 24 e 25, expresso final do modelo matemtico da curva de DBO:
L y = L . 10
kt
, ou
(23)
_______________________________________________________________________________ _
L = L L . 10
kt
, ou
(24)
L = L (1 10 de DBO.
kt
(25) expresso final do modelo matemtico da curva
Para guas poludas e despejos de esgotos, um valor tpico de k (base 10, 20C) de 0,1dia-1. Os valores de k variam significativamente, entretanto, com o tipo de esgoto e deve ser determinado laboratorialmente se for um despejo desconhecido e no encontrado na literatura. A faixa de variao est compreendida entre 0,05 e 0,30 dia-1 ou mais. Para a DBO final a quantidade de oxignio varia com o tempo e com diferentes valores de k. A temperatura na qual a DBO de uma amostra de esgotos referenciada a 20C. Para se determinar a constante k em outras temperaturas usa-se a frmula de VantHoff-Arrhenius (equao 26):
kt = k20C t 20
(26)
Onde: kt = coeficiente de velocidade de remoo de substrato, na temperatura desejada, em dia-1 t = temperatura do esgoto, em C. = coeficiente de respirao que varia com o tipo de processo. Variaes do valor de = 1,056 (20 30C) = 1,135 (4 20C)
5.1.1. Exemplo de utilizao
_______________________________________________________________________________ _
Deseja-se conhecer a DBO final de primeiro estgio para um esgoto tpico, cuja DBO5 a 20C 200 mg/L, a seguir calcule a DBO de 1 dia. Dados: y5 = 200 mg/L; t = 5 dias; k20C = 0,10 dia-1 Pede-se: L=? y1 = ? Clculo da DBO final de primeiro estgio y5 = L (1 10-kt); substituindo: 200 = L (1 10 -0,1. 5), ento: L = 200/1 10-0,1. 5 L = 293 mg/L Clculo da DBO de 1 dia y1 = 293 (1 10-0,1. 1) y1 = 60 mg/L
Pode-se tambm a DBO final de primeiro estgio partir de tabelas desenvolvidas para o esgoto domstico (no inclusa no texto). A relao DBOtotal/DBO5, a 20C de 1,46. Neste caso, o exemplo ficar:
L = 1,46 y5 L = 1,46 . 200 L = 292 mg/L
6. Crescimento bacteriano no meio gua
_______________________________________________________________________________ _ 6.1. Fatores Limitantes

O crescimento bacteriano pode ser limitado por diversos fatores. Os mais importantes podem ser citados: Temperatura cada espcie se reproduz numa determinada temperatura. Isto significa que a temperatura pode agir como fator de seleo de espcies. De um modo geral as bactrias podem se classificar quanto faixa de temperatura em que se reproduzem, em: o Crioflicas ou psicroflicas sobrevivem na faixa de -20 a 20C, sendo a faixa tima entre 12 a 18C. o Mesoflicas sobrevivem na faixa de 20 a 45C, sendo a faixa tima entre 28 a 38C. o Termoflicas sobrevivem na faixa de 45 a 75C, sendo a faixa tima entre 55 a 68C. Alm desse efeito seletivo, a temperatura influi fortemente na prpria taxa de crescimento bacteriano. O efeito da temperatura sobre a taxa de crescimento exponencial duplicando essa taxa a cada incremento de 10C. pH a maioria das espcies bacterianas favorecida por pH prximo da neutralidade, a faixa tima se situando entre 6,5 a 7,5. Fora desta faixa, a taxa de crescimento se reduz drasticamente. A maioria das bactrias tem seu crescimento completamente inibido em meios de pH inferior a 4 ou superior a 9,5. Tenso de oxignio o o o anaerbias 0 mg/L aerbias acima de 1 mg/L anxicas abaixo de 0,5 mg/L
Umidade a gua essencial para o crescimento. As bactrias apenas se reproduzem em meio lquido. A maioria das espcies sensvel a salinidade do meio.
_______________________________________________________________________________ _
Nutrientes/Alimento o N, C, H, P, S, K, Ca, Fe, Mg.
6.2.
O crescimento bacteriano
As bactrias multiplicam-se pela diviso em duas clulas filhas (diviso binria
assexuada), no laboratrio algumas bactrias podem se dividir em menos de 10 minutos. Nos ambientes naturais o processo mais lento e se uma bactria leva T minutos para se dividir, aps nT minutos haver 2 n clulas. Esse tipo de crescimento logartmico e descrito pela equao 27:
Nt = No e
(27)
Onde: Nt = nmero de clulas no tempo t. No = nmero de clulas originalmente presentes (tempo zero). = taxa especfica de crescimento bacteriano (T-1). t = tempo. O valor de definida mais claramente pela forma diferencial da equao 27 conforme a equao 28:
dN/dt = N
(28)
Isto , a variao do nmero de clulas proporcional, sendo o fator de proporo, ao nmero de clulas presentes no momento.
_______________________________________________________________________________ _
o Relao entre a taxa especfica de crescimento e tempo de duplicao (T) da populao inicial: Sendo Nt = 2 No para t = T Nt = No e
t
(27)
t
2No = No e t; 2 = e ln2 = t = ln2/T = 0,69/T
7. Curva de crescimento de uma cultura em batelada
Considerando um reator fechado onde foi colocado uma certa concentrao de substrato orgnico. Se inocularmos o reator com bactrias estas vo apresentar 5 fases distintas de crescimento conforme a figura 3:
Log do n de clu las
4 1 2 3 5
te mp o
Fase 1 Latncia fase inicial na qual o nmero de organismos inoculado no sofre alterao (taxa de crescimento nula). Os microorganismos se adaptam as novas condies ambientais;
Figura 3. Curva do crescimento bacteriano.
_______________________________________________________________________________ _
Fase 2 Lag-fase ou Fase de acelerao o nmero de organismos aumenta paulatinamente de forma crescente (a taxa de crescimento aumenta com o tempo). Os organismos vo se aclimatando as novas condies ambientais e iniciam seu processo de reproduo. medida que se d a aclimatao aumenta a velocidade de reproduo.
Fase 3 Log-fase ou Fase de crescimento exponencial nesta fase os organismos dividem-se a velocidade determinada pelo tempo de gerao (duplicao) e pela sua habilidade em processar o alimento. Nesta fase as bactrias armazenam alimento que devero ser utilizadas no caso de escassez. A equao Nt = No e seu valor mximo.
-t
, aplica-se a fase exponencial, atingindo o
Fase 4 Estacionria a populao permanece estacionria pela escassez de alimentos e nutrientes (a taxa de crescimento nula). A quantidade disponvel de substrato atinge a nveis extremamente baixos. Os
organismos dispondo de pouco material para sntese de novas clulas, diminuem de produo e passam a utilizar do substrato principalmente para a produo de energia, para a manuteno.
Fase
Decaimento
nesta
fase
taxa
de
decaimento
dos
microorganismos superior a taxa de crescimento de novas clulas. Durante as fases estacionrias e de decaimento h uma proporo substancial de clulas que nem morrem e nem subdividem. Elas existem pela utilizao das reservas intracelulares de alimentos estocados durante o crescimento exponencial, esse processo conhecido como respirao
_______________________________________________________________________________ _
endgena. Quando a reserva de uma clula acaba, ela comea a se autooxidar, processo ento denominado autlise.
8. Cintica do processo biolgico
Adaptado de JORDO & PESSOA (1995).
8.1.
Modelo de Eckenfelder
A degradao da matria orgnica dentro do reator pode ser representada por
um mecanismo terico conforme representado na figura 4, onde se pode abstrair que o substrato ou a matria orgnica pode ser decomposta ou degradada levando as seguintes partes constitutivas: A matria orgnica a ser degradada pelos microrganismos passa se constituir em parte do prprio microrganismo ou em novas clulas de microrganismos. Existe assim uma frao a que sintetizada em novas clulas, e uma frao b constitui as clulas dos organismos que sero destrudas na fase de respirao endgena ou de auto-oxidao. Esta frao a tambm conhecida como coeficiente de produo, Y, tal que no reator a variao de massa dos organismos proporcional variao de concentrao do substrato (equao 29):
(dXav)s/dt = Y. dS/dt
(29)
onde: (dXav)s = aumento da concentrao de microrganismos ativos devido a sntese de novas clulas.
_______________________________________________________________________________ _
(dXav)s/dt = taxa de crescimento absoluto de microrganismos (massa/volume.tempo) Y = taxa de converso de substrato utilizado em microrganismos (massa de microrganismos/massa de substrato utilizado), ou coeficiente de produo celular, ou coeficiente de sntese celular. dS/dt = taxa de utilizao de substrato pelos organismos
(massa/volume.tempo)
CO2 , H2O, N2 , P Energia (a`) Produtos Finais Sntese (a)Novas
Substr ato
Respirao endgena (b, b`) CO2 , H2O, N2 , P
Clulas
Produtos no Biodegrad veis Figura 4. Mecanismo do consumo de substrato no reator biolgico. Sntese (a)
A frao b tambm conhecida como taxa de respirao endgena ou coeficiente de auto-destruio dos organismos, kd. Demonstra-se experimentalmente que a massa de clulas ativas consumidas em um determinado perodo pelo fenmeno da respirao endgena proporcional massa total disponvel de organismos presentes, independentemente da concentrao de substrato (equao 30):
k d = { dXav )e / dt} / Xav

onde:
(30)
(dXav)e = decrscimo da concentrao de microrganismos ativos devido destruio de material celular pela respirao endgena. Xav = concentrao de microrganismos vivos
_______________________________________________________________________________ _
kd = taxa especfica de respirao endgena. Uma outra frao a da matria orgnica a ser degradada, oxidada para produo de energia necessria na fase de sntese, sendo ainda caracterizado como b a quantidade de oxignio que supre a energia para a fase endgena, conforme demonstrado na figura 4. Estes parmetros para esgotos sanitrios tm-se encontrado respectivamente no entorno de 0,52/dia e 0,12. Por sua vez o coeficiente de produo celular (Y ou a) e a taxa especfica de respirao endgena (kd ou b), tm variaes no esgoto domstico dependendo do autor e que pode ser confirmado na tabela 6. De qualquer forma, estes parmetros podem ser determinados experimentalmente em laboratrios, principalmente quando se tratar de despejos industriais misturados com esgotos domsticos. Outra alternativa, selecionar os valores atravs de artigos em revistas especializadas ou trabalhos publicados em Congressos especializados.
Tabela 6. Constantes cinticas no processo de lodos ativados.
Y (base DBO) 0,50 0,50 0,38 0,53 0,60 0,73 0,30-0,70 Y (base DQO) 0.33 0,33 0,33 0,67 0,31 0,336 0,35 0,055 0,069 0,001 0,05 0,075 0,03-0,07 0,001 0,04 0,07 0,016 0,016 0,05 Heukelekian Middlebrooks Middlebrooks Jenkins e Menar Haas e Pearson Eckenfelder Quasin McWorter e Heukelekian Jenkins e Menar Jenkins e Garrison Benedek Parkhurst e Pearson Parkhust e Pearson Haas e Pearson Fonte: Jordo & Pessoa, 1995. kd (dia-1) Autor
_______________________________________________________________________________ _ 8.1.1. Determinao da taxa de remoo de substrato (DBO)

Em esgotos domsticos, na prtica, a taxa especfica de remoo de substrato, funo da concentrao de substrato S no sistema, e diminui medida que S decresce, obedecendo a uma cintica de primeira ordem, conforme o modelo matemtico (equao 31) :
dS / dt = K.S
(31)
onde: S = concentrao de substrato (DBO), mg/L K = coeficiente da proporcionalidade do decrscimo de S, tempo -1 t = tempo de reao Observando o modelo, o autor da proposta Eckenfelder, observou que a reao no depende da concentrao de microrganismos presentes no volume do reator. Portanto, fez o valor de K = k.X av, levando neste caso o modelo a admitir que valores de microrganismos no reator biolgico de lodos ativados sejam constante (equao 31), o que na realidade no acontece. Ento,
dS / dt = k.Xav.S
(31)
onde: Xav = concentrao de microrganismos, mg/L. k = coeficiente da velocidade de consumo de substrato, tempo-1
_______________________________________________________________________________ _
Para a figura 5, considerando-se que o reator seja de mistura completa pode-se considerar:
Q, So
V Se
Tanque de Aerao
Q, Se
Figura 5. Reator de mistura completa.
No tempo t igual ao tempo de deteno td, S ser igual a Se (equao 32)
dS/dt = - k.Xav.Se
(32)
No balano de matria no reator da figura 5, pode-se considerar:
Massa de substrato entrando
Q.So
Massa de substrato Saindo
Q.Se
Consumo de substrato, no volume V do reator
- k.Xav.V.Se
Onde: V = volume do reator, L ou m3 Q = vazo, L/s ou m3/s ou m3/d So = substrato inicial ou afluente, mg/L
_______________________________________________________________________________ _
Se = substrato efluente, mg/L Portanto, podemos tomar a equao 33, como:
QSo QSe k.Xav.Se.V = 0
(33)
Re-escrevendo (equao 34):
Q.(So Se)/Xav.V = k Se
(34)
Porm, V/Q = td, ento o valor da equao pode ser (equao 35):
So Se/Xav.td = k Se (35)
Que representa uma equao de uma reta que passa pela origem, considerando que todo o substrato consumido seja representado pelo valor de S e. Porm, os substratos, no conseguem ser totalmente biodegradados, restando uma parcela Sn, que no degrada (equao 36), e assim:
So Se/Xav.td = k (Se Sn)
(36)
importante observar que o tempo t d, considerado no modelo o tempo relativo apenas passagem do esgoto afluente, no se levando em conta a parcela relativa recirculao do lodo. Com efeito, se fizermos um balano de matria levando em considerao a recirculao teremos (equao 37, 38 e 39):
(Q.So + Qr.Se) [(Q + Qr) Se] k.Xav.Se.V = 0
(37)
Q.So + Qr.Se Qr Se Q Se - k.Xav.Se.V = 0
(38)
_______________________________________________________________________________ _
Q.So Q Se - k.Xav.Se.V = 0 (39)
Que a mesma expresso anterior. Portanto, se obtm o valor de S e partir da equao 40:
Se = So/1 + k.td
(40)
Para valores de k os autores costumam citar variaes entre 0,017 a 0,03. No entanto, o coeficiente da velocidade de consumo de substrato, pode ser obtido a partir de experincias laboratoriais com o esgoto real a ser tratado, principalmente nos casos em que os mesmos sejam totalmente desconhecidos.
8.1.2. Determinao da produo de lodo

A produo final do lodo ativo Xav , corresponde a um ganho Xav1 , devido fase de sntese de microrganismos (equao 41), menos a uma perda Xav2, devido fase de respirao endgena (equao 42).
Xav1 = a (So Se). Q = Y (So Se).Q
(41)
Xav2 = b Xav. V = kd. Xav. V
(42)
a ou Y frao da matria que sintetizada em novas clulas, sendo adimensional; b ou kd a frao de organismos (SSVTA) que oxidada por unidade de tempo, na fase de respirao endgena (d-1). Portanto, o valor lquido de produo de lodo ser (equao 43):
Xav = Xav1 - Xav2
(43)
_______________________________________________________________________________ _
Esta produo constitui um lodo em excesso, ou uma quantidade de slidos que deve ser descartada do sistema, a fim de que se possa manter uma concentrao constante de lodo no tanque de aerao.
8.1.2.1. Frmulas laboratrio
para
valores
de
determinados
em
Sabendo-se dos valores de a, b, ou Y, kd, partir de dados da literatura ou j publicados, pode-se calcular a produo de lodo. No caso de retirar valores de laboratrio, h a necessidade de elaborar a frmula final de forma a ser prtica. Desta maneira, tomamos a formula (equao 44) desenvolvida por Eckenfelder e definimos matematicamente: Xav = a (So Se) Q b Xav V (44)
Multiplicando-se todos os termos por 1/Xav .V, teremos (equao 45) : Xav/Xav.V = [a (So Se) Q]/ Xav.V [b Xav V]/ Xav.V O valor final da equao seria (equao 46): Xav/Xav.V = a [So Se]/ Xav.td b (46) (45)
Pode-se ento, plotar Xav/Xav.V e [So Se]/ Xav.td em um par de eixos cartesianos, obtendo-se uma reta, cuja inclinao a medida de a cuja interseo na ordenada fornece b.
8.1.3. Necessidades de Oxignio

As necessidades de oxignio correspondem em parte ao oxignio consumido para suprir energia para a fase de sntese e para a respirao endgena. A quantidade de oxignio necessria para um processo de reao biolgica em reator de lodos ativados expressa pela equao 47:
_______________________________________________________________________________ _
kg O2/d = a (So Se) Q + b Xav. V (47)
(a) - a frao da matria removida que usada para energia, sendo adimensional; (b) a quantidade de oxignio utilizado por dia (em kg), por kg de lodo no tanque de aerao (SSVTA), para a fase de respirao endgena, e possui unidade d-1. Embora a e b sejam tabelados para esgotos domsticos (a= 0,52 e b= 0,12), seus valores podem ser determinados em laboratrios, quando necessrios para um esgoto desconhecido. A partir da determinao da quantidade de oxignio necessrio, possvel ento especificar o equipamento de aerao necessrio ao projeto. prtica se operar estaes do modelo proposto com concentraes de O.D. entre 1,5 a 2 mg/L no tanque de aerao.
8.1.3.1. Frmulas
para
valores
de
determinados
em
laboratrio
Da mesma forma, que no item da produo de lodo, sabendo-se dos valores de a e b, a partir de dados da literatura ou j publicados, pode-se calcular a necessidade de oxignio. No caso de retirar valores de laboratrio, h a necessidade de elaborar a frmula final de forma a ser prtica. Desta maneira, tomamos a frmula desenvolvida por Eckenfelder e definimos matematicamente (equao 48): kg O2/d = Rr.V = a (So Se) Q + b Xav V (48)
Defini-se Rr, como sendo a quantidade de oxignio utilizado por dia e por unidade de volume. determinado experimentalmente em reatores laboratoriais, os mesmos que servem de base para determinaes prticas de a, b, a, b e k. O procedimento para determinao estabelecido da seguinte forma: Utiliza-se um oxmetro (equipamento de medio de Oxignio Dissolvido) Enche-se o recipiente de teste do analisador com o esgoto aerado da cmara de aerao do reator experimental de laboratrio;
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O eletrodo do analisador colocado no recipiente sobre um agitador magntico; A leitura da concentrao de O.D. ento lida no aparelho a intervalos de 30 a 60 segundos; Desenha-se um grfico com as concentraes de O.D., contra os tempos respectivos, devendo-se obter uma reta; A inclinao desta reta mede a taxa Rr.
Utilizando-se do mesmo artifcio anterior e, portanto, multiplicando-se todos os termos da equao por 1/Xav .V, tem-se (equao 49): Rr.V/Xav.V = [a (So Se) Q]/ Xav.V + [b Xav V]/ Xav.V O valor final da equao seria (equao 50): Rr/Xav = a [So Se]/ Xav.td + b (50) (49)
Pode-se ento, plotar Rr/Xav e [So Se]/ Xav.td em um par de eixos cartesianos, obtendo-se uma reta, cuja inclinao a medida de a cuja interseo na ordenada fornece b.
9 gua para Consumo Humano

9.1 Aspectos Legais A gua para consumo humano tem sua legislao pelo Ministrio da Sade, atualmente atravs da Portaria n 518/GM de 25 de maro de 2004 que estabelece os procedimentos e responsabilidades relativas ao controle e vigilncia da qualidade da gua para consumo humano e seu padro de potabilidade e d outras providncias. No geral obriga as instituies ou rgos aos quais a norma se aplica o seu cumprimento, no que se refere ao tratamento convencional ou no de gua para consumo humano e da obrigao tambm do monitoramento de cianobactrias e
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cianotoxinas. Estabelece responsabilidades nos nvel federal, estadual e municipal incluindo o Distrito Federal e atribui Secretaria de Vigilncia em Sade a tarefa de editar normas regulamentadoras da Portaria.
9.2 Destaques 9.2.1 - Disposies Preliminares Art. 1 Esta Norma dispe sobre procedimentos e responsabilidades inerentes ao controle e vigilncia da qualidade da gua para consumo humano, estabelece seu padro de potabilidade e d outras providncias. Art. 2 Toda a gua destinada ao consumo humano deve obedecer ao padro de potabilidade e est sujeita vigilncia da qualidade da gua. Art. 3 Esta Norma no se aplica s guas envasadas e a outras, cujos usos e padres de qualidade so estabelecidos em legislao especfica. Comentando o Art. 3 e a fim de estabelecer responsabilidades, a qualidade fsico-qumica e microbiolgica de guas minerais naturais e guas naturais envasadas, inclusive de suas fontes obedecem a Resoluo RDC n 54 de 15 de junho de 2000 da ANVISA-Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, assim como guas para hemodilise so estabelecidas pela Portaria n 82 de 3 de janeiro de 2000 pelo Ministrio da Sade. guas brutas e sua tratabilidade ou adequao para abastecimento para consumo humano so regulamentadas pela norma NBR 12.216 da ABNT-Associao Brasileira de Normas Tcnicas (Projeto de Estao de Tratamento de gua para Abastecimento Pblico) e na Resoluo CONAMA-Conselho Nacional de Meio Ambiente n 357/2005 que estabelece a classificao das guas doces, salobras e salinas em todo territrio nacional.
9.2.2 - Definies Art. 4 Para os fins a que se destina a Norma, so adotadas as seguintes definies: I gua potvel gua para consumo humano cujos parmetros microbiolgicos, fsicos, qumicos e radioativos atendam ao padro de potabilidade e que no oferea riscos sade;
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II - sistema de abastecimento de gua para consumo humano instalao composta por conjunto de obras civis, materiais e equipamentos, destinada produo e distribuio canalizada de gua potvel para populaes, sob a responsabilidade do poder pblico, mesmo que administrada em regime de concesso ou permisso; III - soluo alternativa de abastecimento de gua para consumo humano toda modalidade de abastecimento coletivo de gua distinta do sistema de abastecimento de gua, incluindo, entre outras, fonte, poo comunitrio, distribuio por veculo transportador, instalaes condominiais horizontal e vertical; IV - controle da qualidade da gua para consumo humano conjunto de atividades exercidas de forma contnua pelos responsveis pela operao de sistema ou soluo alternativa de abastecimento de gua, destinadas a verificar se a gua fornecida populao potvel, assegurando a manuteno desta condio; Fazendo um breve comentrio entende-se como alternativa individual toda e qualquer soluo alternativa de abastecimento de gua que atenda um grupo ou um nico domiclio. No importa, neste caso, se a distribuio for por rede ou no, o que na maioria das vezes esta realizada atravs de fontes, poos ou chafarizes comunitrios e distribuio por veculos transportadores (caminhes-pipa). Por outro lado, existem muitos casos de sistemas privados, como condomnios horizontais, hotis, clubes, etc. que possuem fontes, tratamento e redes prprias, sendo que a norma trata estes casos como solues alternativas, independente do porte. Neste caso toda a responsabilidade recai sobre o particular e no ser do poder pblico. Na tabela 7, exemplos possveis de classificao de formas de abastecimento de gua.
Tabela 7 Exemplos de classificao de formas de abastecimento de gua

Forma de abastecimento Clubes com abastecimento prprio Soluo alternativa Controle e vigilncia Classificao Responsabilidades Responsvel pelo controle Definido pela autoridade de sade pblica (conforme art. 7-XII). Ex. presidente do clube Camping/resorts com abastecimento prprio Soluo alternativa Controle e vigilncia Definido pela autoridade de sade pblica (conforme art. 7-XII). Ex. proprietrio
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Creches com abastecimento prprio Soluo alternativa Controle e vigilncia Definido pela autoridade de sade pblica (conforme art. 7-XII). Ex. responsvel pela entidade mantenedora
Condomnios horizontais com abastecimento prprio, idependentemente do porte Soluo alternativa Controle e vigilncia Definido pela autoridade de sade pblica (conforme art. 7-XII). Ex. sndico Condomnios verticais com abastecimento prprio Soluo alternativa Controle e vigilncia Definido pela autoridade de sade pblica (conforme art. 7-XII). Ex. proprietrio Todos os exemplos acima que faam uso de gua de sistema pblico (conforme definio do art. 4) Fonte comunitria Sistema de abastecimento Soluo alternativa Controle e vigilncia Controle e vigilncia Poder pblico municipal ou concessionrio (conforme art.8) Definido pela autoridade de sade pblica (conforme artigo 7-XII). Ex. poder pblico municipal, concessionrio ou proprietrio. Fonte individual Soluo alternativa individual Sistemas sob administrao de servios municipais/estaduais na sede do municpio Pequenos sistemas sob administrao de servios municipais/estaduais Sistema de abastecimento Controle e vigilncia Poder pblico municipal ou concessionria Sistema de abastecimento Controle e vigilncia Poder pblico municipal ou concessionria Vigilncia No se aplica
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em distritos Sistemas terceirizados iniciativa privada Veculo transportador (ex. caminho-pipa) Soluo alternativa Controle e vigilncia Definido pela autoridade de sade pblica (conforme art. 7-XII). Ex. proprietrio da empresa de responsvel pelo transporte ou proprietrio do veculo) Fonte: Ministrio da Sade-Secretaria de Vigilncia em Sade, 2005 . Sistema de abastecimento Controle e vigilncia Concessionria privada
V - vigilncia da qualidade da gua para consumo humano conjunto de aes adotadas continuamente pela autoridade de sade pblica, para verificar se a gua consumida pela populao atende esta Norma e para avaliar os riscos que os sistemas e as solues alternativas de abastecimento de gua representam para a sade humana; VI - coliformes totais (bactrias do grupo coliforme) - bacilos gram-negativos, aerbios ou anaerbios facultativos, no formadores de esporos, oxidase-negativos, capazes de desenvolver na presena de sais biliares ou agentes tensoativos que fermentam a lactose com produo de cido, gs e aldedo a 35,0 0,5 oC em 24-48 horas, e que podem apresentar atividade da enzima -galactosidase. A maioria das bactrias do grupo coliforme pertence aos gneros Escherichia, Citrobacter, Klebsiella e Enterobacter, embora vrios outros gneros e espcies pertenam ao grupo; VII - coliformes termotolerantes - subgrupo das bactrias do grupo coliforme que fermentam a lactose a 44,5 0,2 oC em 24 horas; tendo como principal representante a Escherichia coli, de origem exclusivamente fecal; VIII - Escherichia Coli - bactria do grupo coliforme que fermenta a lactose e manitol, com produo de cido e gs a 44,5 0,2 oC em 24 horas, produz indol a partir do triptofano, oxidase negativa, no hidroliza a uria e apresenta atividade das enzimas galactosidase e glucoronidase, sendo considerada o mais especfico indicador de contaminao fecal recente e de eventual presena de organismos patognicos;
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Conforme j descrito no captulo 2, item 2.1.2, os microrganismos podem ser definidos por grupos. Neste caso utiliza-se como indicador o grupo de coliformes totais (CT) que inclui espcies de origem fecal e no fecais, podendo ocorrer na gua, no solo e em plantas. Pesquisadores (MS/SVS, 2005) afirmam que os CT tm valor limitado para avaliao da qualidade de guas naturais, sendo aceito como indicador de contaminao da qualidade da gua tratada e distribuda, quando no h como determinar outro indicador mais especfico. Por outro lado, o grupo de coliformes fecais (CF) apesar da classificao inclui espcies consideradas no originalmente de origem fecais e por este motivo, pesquisadores tem aceitado uma mudana de termo para coliformes termotolerantes (CTe) (MS/SVS, 2005). guas so contaminadas por esgotos sanitrios que possuem cerca de 106-108 coliformes fecais/100mL, sendo na sua maioria Escherichia coli, bactria exclusivamente de origem fecal, sendo ainda, pouco provvel que CTe se desenvolvam em guas de distribuio devido a combinao de fatores como a presena de grande quantidade de nutrientes, temperatura da gua acima de 13C, ausncia de cloro residual. Neste caso considerado melhor indicador o Escherichia coli (OMS, 1995; BASTOS, 2000; CERQUEIRA, 1999; CERQUEIRA & HORTA, 1999). O meio gua agressivo para as bactrias entricas, principalmente as potenciais causadoras de doenas. Podem estar neste meio sob condies de estresse metablico, ou seja, sem condies de nutrio. Com objetivos de no apresentarem resultados falso-negativos, os exames laboratoriais devem ter condies favorveis de crescimento. Para tanto, existem meios de cultura pouco seletivos, onde bactrias utilizam o substrato oferecido em temperatura e nutrientes para multiplicao de clulas, normalmente chamados de ensaios presuntivos e repicagem em meios de cultura seletivos denominados de ensaios confirmados. As tcnicas normalmente utilizam meios de culturas prprios a base de lactose para ensaios presuntivos na temperatura de incubao de 35,50,5C para CT e meios de cultura a base de lactose com 2% de bile de boi como inibidor na mesma temperatura para ensaios confirmativos. Para determinao de CTe, os meios de cultura so mais seletivos e utiliza-se a temperatura de 44,50,2C para tempo de incubao. O prazo para uma determinao de contagem de indicadores pode levar de 48 a 72 horas, dependendo do exame. Tambm considerado padro os mtodos cromognicos (conhecidos como mtodos do substrato definido), baseados na hidrlise de substratos definidos por enzimas especficas das espcies. Possuem a grande vantagem de dispensarem temperaturas elevadas e fornecem resultados de CTe e Escherichia coli em 24 horas.
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Em casos especficos so aceitos resultados qualitativos como Presena/Ausncia P/A para monitoramento de qualidade. Os resultados quantitativos so apresentados em densidade de microrganismos/100mL, sendo os mtodos dos Tubos Mltiplos (TM) ou Mtodo da Diluio, Mtodos Cromognicos e a tcnica da Membrana Filtrante (MF) as mais utilizadas. IX - contagem de bactrias heterotrficas - determinao da densidade de bactrias que so capazes de produzir unidades formadoras de colnias (UFC), na presena de compostos orgnicos contidos em meio de cultura apropriada, sob condies pr-estabelecidas de incubao: 35,0, 0,5oC por 48 horas; Bactrias Heterotrficas fornecem informaes gerais da qualidade
microbiolgica da gua (so microrganismos que consomem carbono orgnico como fonte de nutrientes). O teste acusa a presena, inespecfica, de bactrias ou esporos de bactrias, de qualquer origem que esteja presente na gua. na realidade um indicador auxiliar que fornece informaes sobre problemas de desinfeco, colonizao, formao de biofilmes no sistema de distribuio. Considera-se apropriada para apontar problemas de qualidade da gua em reservatrios ou no integralidade no sistema de distribuio. Apontam-se como fatores para formao de biofilmes a temperatura elevada; a estagnao da gua; disponibilidade de nutrientes e baixa concentrao residual de desinfetante (MS/SVS, 2005).
X - cianobactrias - microorganismos procariticos autotrficos, tambm denominados como cianofceas (algas azuis), capazes de ocorrer em qualquer manancial superficial especialmente naqueles com elevados nveis de nutrientes (nitrognio e fsforo), podendo produzir toxinas com efeitos adversos sade; e XI - cianotoxinas - toxinas produzidas por cianobactrias que apresentam efeitos adversos sade por ingesto oral, incluindo: a) microcistinas hepatotoxinas heptapeptdicas cclicas produzidas por cianobactrias, com efeito potente de inibio de protenas fosfatases dos tipos 1 e 2A e promotoras de tumores; b) cilindrospermopsina inibidor de alcalide guanidnico cclico produzido por cianobactrias, sntese protica, predominantemente hepatotxico,
apresentando tambm efeitos citotxicos nos rins, bao, corao e outros rgos; e
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c) saxitoxinas - grupo de alcalides carbamatos neurotxicos produzido por cianobactrias, no sulfatados (saxitoxinas) ou sulfatados (goniautoxinas e C-toxinas) e derivados decarbamil, apresentando efeitos de inibio da conduo nervosa por bloqueio dos canais de sdio. As cianobactrias so importantes para a sade pblica, uma vez que, a lise de suas clulas nos processos de tratamento liberam toxinas de origem orgnica hepatotxicas, neurotxicas ou que causam irritao da pele. A sua determinao se torna importante devido a presena comum nos mananciais brasileiros da cianobactria Microcystis comprovadamente nociva sade humana.
9.2.3 Padro de Potabilidade Microbiolgico

O Padro de potabilidade 518/2005 leva em considerao diversos aspectos dentre eles valores de microbiologia, fsico-qumico, qumico e radioativo. Aqui so apresentados apenas os aspectos microbiolgicos.
Art.11. A gua potvel deve estar em conformidade com o padro microbiolgico conforme Tabela 8, a seguir:
Tabela 8 - Padro microbiolgico de potabilidade da gua para consumo humano

PARMETRO VMP(1) (2) gua para consumo humano Escherichia coli ou Ausncia em 100ml coliformes termotolerantes(3) gua na sada do tratamento Coliformes totais Ausncia em 100ml gua tratada no sistema de distribuio (reservatrios e rede) Escherichia coli ou Ausncia em 100ml coliformes termotolerantes(3) Coliformes totais Sistemas que analisam 40 ou mais amostras por ms: Ausncia em 100ml em 95% das amostras examinadas no ms; Sistemas que analisam menos de 40 amostras por ms: Apenas uma amostra poder apresentar mensalmente resultado positivo em 100ml
NOTAS: (1) Valor Mximo Permitido.
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(2) gua para consumo humano em toda e qualquer situao, incluindo fontes individuais como poos, minas, nascentes, dentre outras. (3) a deteco de Escherichia coli deve ser preferencialmente adotada. 1 No controle da qualidade da gua, quando forem detectadas amostras com resultado positivo para coliformes totais, mesmo em ensaios presuntivos, novas amostras devem ser coletadas em dias imediatamente sucessivos at que as novas amostras revelem resultado satisfatrio. 2 Nos sistemas de distribuio, a recoleta deve incluir, no mnimo, trs amostras simultneas, sendo uma no mesmo ponto e duas outras localizadas a montante e a jusante. 3 Amostras com resultados positivos para coliformes totais devem ser analisadas para Escherichia coli e, ou, coliformes termotolerantes, devendo, neste caso, ser efetuada a verificao e confirmao dos resultados positivos. 4 O percentual de amostras com resultado positivo de coliformes totais em relao ao total de amostras coletadas nos sistemas de distribuio deve ser calculado mensalmente, excluindo as amostras extras (recoleta). 5 O resultado negativo para coliformes totais das amostras extras (recoletas) no anula o resultado originalmente positivo no clculo dos percentuais de amostras com resultado positivo. 6 Na proporo de amostras com resultado positivo admitidas mensalmente para coliformes totais no sistema de distribuio, expressa na Tabela 8, no so tolerados resultados positivos que ocorram em recoleta, nos termos do 1 deste artigo. 7 Em 20% das amostras mensais para anlise de coliformes totais nos sistemas de distribuio, deve ser efetuada a contagem de bactrias heterotrficas e, uma vez excedidas 500 unidades formadoras de colnia (UFC) por ml, devem ser providenciadas imediata recoleta, inspeo local e, se constatada irregularidade, outras providncias cabveis. Valores de bactrias heterotrficas acima de 500 UFC/mL provocam interferncia na determinao de coliformes, por inibio de crescimento. O resultado portanto, uma um controle de qualidade da determinao de coliformes. Por outro lado, aponta problemas na qualidade da gua caso haja variaes bruscas.
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8 Em complementao, recomenda-se a incluso de pesquisa de organismos patognicos, com o objetivo de atingir, como meta, um padro de ausncia, dentre outros, de enterovrus, cistos de Giardia spp e oocistos de Cryptosporidium sp.
O conhecimento acumulado torna foroso reconhecer que os coliformes no so indicadores adequados da eficincia do tratamento em termos de remoo de vrus e protozorios. Em linhas gerais, bactrias e vrus so inativados pelo processo de desinfeco, enquanto os protozorios, preponderantemente, so removidos por filtrao (USEPA, 1998). Quanto resistncia aos agentes desinfetantes, tambm em linhas gerais, por ordem crescente, apresentam-se as bactrias, os vrus, os cistos de Giardia e os oocistos de Cryptosporidium (USEPA, 1989, 1998, 1999, 2001). Decorre da a recomendao do &7, que, na medida do possvel, do ponto de vista tcnico e financeiro, procure-se implementar o monitoramento para a pesquisa de vrus e protozorios (MS/SVS, 2005).
9 Em amostras individuais procedentes de poos, fontes, nascentes e outras formas de abastecimento sem distribuio canalizada, tolera-se a presena de coliformes totais, na ausncia de Escherichia coli e, ou, coliformes termotolerantes, nesta situao devendo ser investigada a origem da ocorrncia, tomadas providncias imediatas de carter corretivo e preventivo e realizada nova anlise de coliformes. Art. 12. Para a garantia da qualidade microbiolgica da gua, em complementao s exigncias relativas aos indicadores microbiolgicos, deve ser observado o padro de turbidez expresso na Tabela 9, abaixo:
Tabela 9 - Padro de turbidez para gua ps-filtrao ou pr-desinfeco TRATAMENTO DA GUA Desinfeco (gua subterrnea) Filtrao rpida (tratamento completo ou filtrao direta) Filtrao lenta VMP(1) 1,0 UT em 95% das amostras 1,0 UT(2)
(2)
2,0 UT(2) em 95% das amostras
NOTAS: (1) Valor mximo permitido.
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(2) Unidade de turbidez.
1 Entre os 5% dos valores permitidos de turbidez superiores aos VMP estabelecidos na Tabela 9, o limite mximo para qualquer amostra pontual deve ser de 5,0 UT, assegurado, simultaneamente, o atendimento ao VMP de 5,0 UT em qualquer ponto da rede no sistema de distribuio. 2 Com vistas a assegurar a adequada eficincia de remoo de enterovrus, cistos de Giardia spp e oocistos de Cryptosporidium sp., recomenda-se, enfaticamente, que, para a filtrao rpida, se estabelea como meta a obteno de efluente filtrado com valores de turbidez inferiores a 0,5 UT em 95% dos dados mensais e nunca superiores a 5,0 UT. 3 O atendimento ao percentual de aceitao do limite de turbidez,
expresso na Tabela 9, deve ser verificado, mensalmente, com base em amostras no mnimo dirias para desinfeco ou filtrao lenta e a cada quatro horas para filtrao rpida, preferivelmente, em qualquer caso, no efluente individual de cada unidade de filtrao. Art. 13. Aps a desinfeco, a gua deve conter um teor mnimo de cloro residual livre de 0,5 mg/L, sendo obrigatria a manuteno de, no mnimo, 0,2 mg/L em qualquer ponto da rede de distribuio, recomendando-se que a clorao seja realizada em pH inferior a 8,0 e tempo de contato mnimo de 30 minutos. Pargrafo nico. Admite-se a utilizao de outro agente desinfetante ou outra condio de operao do processo de desinfeco, desde que fique demonstrado pelo responsvel pelo sistema de tratamento uma eficincia de inativao microbiolgica equivalente obtida com a condio definida neste artigo. Os teores de cloro residual devem obedecer as seguintes recomendaes da tabela 10:
Tabela 10 Teores de cloro residual (mg/L) Local Mnimo obrigatrio Obrigatrio Sada do tanque de contato Sistema de distribuio 0,5 0,2 5,0(2) Mximo Recomendado 2,0(3) Indicador da eficincia da desinfeco (1) residual preventivo recontaminao na rede (2) VMP baseado em critrios de riscos sade (3) recomendao Funo
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baseada em critrios organolpticos
Art. 14. A gua potvel deve estar em conformidade com o padro de substncias qumicas que representam risco para a sade expresso na Tabela 11 (somente devida a bactrias cianofceas e substncias desinfetantes)
Tabela 11 - Padro de potabilidade para substncias qumicas que representam risco sade PARMETRO Unidade VMP(1)
CIANOTOXINAS Microcistinas
(3)
g/L
1,0
DESINFETANTES E PRODUTOS SECUNDRIOS DA DESINFECO
Bromato Clorito Cloro livre

(4)
mg/L mg/L mg/L mg/L mg/L mg/L
0,025 0,2 5 3 0,2 0,1
Monocloramina 2,4,6 Triclorofenol Trihalometanos Total
NOTAS: (1) Valor Mximo Permitido. (2) Os valores recomendados para a concentrao de on fluoreto devem observar legislao especfica vigente relativa fluoretao da gua, em qualquer caso devendo ser respeitado o VMP da Tabela de substncias qumicas. (3) aceitvel a concentrao de at 10 g/L de microcistinas em at 3 (trs) amostras, consecutivas ou no, nas anlises realizadas nos ltimos 12 (doze) meses. (4) Anlise exigida de acordo com o desinfetante utilizado. Na nota (4) da tabela 11 com relao aos desinfetantes pode-se apresentar a seguinte relao do produto desinfetante aplicado e as substncias secundrias geradas, conforme tabela 12 :
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Tabela 12 Desinfetantes e substncias secundrias geradas Desinfetante (1) Oznio (2) Dixido de Cloro (3) Cloro Substncia produzida (1) Bromato (2) Clorito (3) Monocloroamina (3) 2,4,6 Triclorofenol (3) Trihalometano total
Fonte: MS/SVS, 2005
Recomenda-se de
que
as
anlises e
para
cianotoxinas (STX),
incluam
determinao
cilindrospermopsina
saxitoxinas
observando,
respectivamente, os valores limites de 15,0 g/L e 3,0 g/L de equivalentes STX/L. 2 Para avaliar a presena dos inseticidas organofosforados e carbamatos na gua, recomenda-se a determinao da atividade da enzima acetilcolinesterase, observando os limites mximos de 15% ou 20% de inibio enzimtica, quando a enzima utilizada for proveniente de insetos ou mamferos, respectivamente.
Art. 16. 1 Recomenda-se que, no sistema de distribuio, o pH da gua seja mantido na faixa de 6,0 a 9,5. 2 Recomenda-se que o teor mximo de cloro residual livre, em qualquer ponto do sistema de abastecimento, seja de 2,0 mg/L. 3 Recomenda-se a realizao de testes para deteco de odor e gosto em amostras de gua coletadas na sada do tratamento e na rede de distribuio de acordo com o plano mnimo de amostragem estabelecido para cor e turbidez nas Tabelas 13 e 14. Art. 17. As metodologias analticas para determinao dos parmetros fsicos, qumicos, microbiolgicos e de radioatividade devem atender s especificaes das
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normas nacionais que disciplinem a matria, da edio mais recente da publicao Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, de autoria das instituies American Public Health Association (APHA), American Water Works Association (AWWA) e Water Environment Federation (WEF), ou das normas publicadas pela ISO (International Standartization Organization). 1 toxicidade Para anlise de cianobactrias e cianotoxinas e comprovao de por bioensaios em camundongos, at o estabelecimento de
especificaes em normas nacionais ou internacionais que disciplinem a matria, devem ser adotadas as metodologias propostas pela Organizao Mundial da Sade (OMS) em sua publicao Toxic cyanobacteria in water: a guide to their public health consequences, monitoring and management. 2 Metodologias no contempladas nas referncias citadas no 1 e caput deste artigo, aplicveis aos parmetros estabelecidos nesta Norma, devem, para ter validade, receber aprovao e registro pelo Ministrio da Sade. 3 As anlises laboratoriais para o controle e a vigilncia da qualidade da gua podem ser realizadas em laboratrio prprio ou no que, em qualquer caso, deve manter programa de controle de qualidade interna ou externa ou ainda ser acreditado ou certificado por rgos competentes para esse fim. 9.2.4 Amostragem A tabela 13 mostra o nmero mnimo de amostras para anlise, conforme o padro de potabilidade de gua para consumo humano.
Tabela 13 - Nmero mnimo de amostras mensais para o controle da qualidade da gua de sistema de abastecimento, para fins de anlises microbiolgicas, em funo da populao abastecida.
PARMETRO
SISTEMA DE DISTRIBUIO (RESERVATRIOS E REDE) Populao abastecida < 5.000 hab. 5.000 a 20.000 hab. 1 para cada 500 hab. 20.000 a 250.000 hab. 30 + (1 para cada 2.000 hab.) > 250.000 hab.
Coliformes totais
10
105 + (1 para cada 5.000 hab.) Mximo de 1.000
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NOTA: na sada de cada unidade de tratamento devem ser coletadas, no mnimo, 2 (duas) amostra semanais, recomendando-se a coleta de, pelo menos, 4 (quatro) amostras semanais. A tabela 14 apresenta o nmero mnimo de amostras e freqncia mnima de amostragem para o controle da qualidade da gua de soluo alternativa, para fins de anlises fsicas, qumicas e microbiolgicas, em funo do tipo de manancial e do ponto de amostragem.
Tabela 14 Nmero mnimo de amostras e freqncia mnima de amostragem
SADA DO NMERO DE AMOSTRAS TRATAMENTO RETIRADAS NO PONTO DE TIPO DE FREQNCIA DE CONSUMO(1) PARMETRO MANANCIAL AMOSTRAGEM (para gua canalizada) (para cada 500 hab.) Cor, turbidez, Superficial pH e coliformes Subterrneo totais(2) CRL(2) (3) Superficial ou Subterrneo 1 1 1 1 Semanal Mensal
Dirio
NOTAS: (1) Devem ser retiradas amostras em, no mnimo, 3 pontos de consumo de gua. (2) Para veculos transportadores de gua para consumo humano, deve ser realizada 1 (uma) anlise de CRL em cada carga e 1 (uma) anlise, na fonte de fornecimento, de cor, turbidez, pH e coliformes totais com freqncia mensal, ou outra amostragem determinada pela autoridade de sade pblica. (3) Cloro residual livre. 1 A amostragem deve obedecer aos seguintes requisitos: I - distribuio uniforme das coletas ao longo do perodo; e
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II - representatividade dos pontos de coleta no sistema de distribuio (reservatrios e rede), combinando critrios de abrangncia espacial e pontos estratgicos, entendidos como aqueles prximos a grande circulao de pessoas (terminais rodovirios, terminais ferrovirios, etc.) ou edifcios que alberguem grupos populacionais de risco (hospitais, creches, asilos, etc.), aqueles localizados em trechos vulnerveis do sistema de distribuio (pontas de rede, pontos de queda de presso, locais afetados por manobras, sujeitos intermitncia de abastecimento, reservatrios, etc.) e locais com sistemticas notificaes de agravos sade tendo como possveis causas agentes de veiculao hdrica. 2 No nmero mnimo de amostras coletadas na rede de distribuio, previsto na Tabela 13, no se incluem as amostras extras (recoletas). 3 Em todas as amostras coletadas para anlises microbiolgicas deve ser efetuada, no momento da coleta, medio de cloro residual livre ou de outro composto residual ativo, caso o agente desinfetante utilizado no seja o cloro. 4 Para uma melhor avaliao da qualidade da gua distribuda, recomendase que, em todas as amostras referidas no 3 deste artigo, seja efetuada a determinao de turbidez. 5 Sempre que o nmero de cianobactrias na gua do manancial, no ponto de captao, exceder 20.000 clulas/ml (2mm3/L de biovolume), durante o monitoramento que trata o 1 do artigo 19, ser exigida a anlise semanal de cianotoxinas na gua na sada do tratamento e nas entradas (hidrmetros) das clnicas de hemodilise e indstrias de injetveis, sendo que esta anlise pode ser dispensada quando no houver comprovao de toxicidade na gua bruta por meio da realizao semanal de bioensaios em camundongos. Art. 19. Os responsveis pelo controle da qualidade da gua de sistemas e de solues alternativas de abastecimento supridos por manancial superficial devem coletar amostras semestrais da gua bruta, junto do ponto de captao, para anlise de acordo com os parmetros exigidos na legislao vigente de classificao e enquadramento de guas superficiais, avaliando a compatibilidade entre as caractersticas da gua bruta e o tipo de tratamento existente. 1 O monitoramento de cianobactrias na gua do manancial, no ponto de captao, deve obedecer freqncia mensal, quando o nmero de cianobactrias no
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exceder 10.000 clulas/ml (ou 1mm3/L de biovolume), e semanal, quando o nmero de cianobactrias exceder este valor. 2 vedado o uso de algicidas para o controle do crescimento de
cianobactrias ou qualquer interveno no manancial que provoque a lise das clulas desses microrganismos, quando a densidade das cianobactrias exceder 20.000 clulas/ml (ou 2mm3/L de biovolume), sob pena de comprometimento da avaliao de riscos sade associados s cianotoxinas. Art. 20. A autoridade de sade pblica, no exerccio das atividades de vigilncia da qualidade da gua, deve implementar um plano prprio de amostragem, consoante diretrizes especficas elaboradas no mbito do Sistema nico de Sade - SUS.
9.3 Noes da Prtica 9.3.1 Coleta de Amostras Frascos de coleta
De vidro de boca larga e esmerilhada, preparado com proteo de papel alumnio ou manilha, esterilizado a seco. Deve conter soluo quelante de EDTA quando suspeita-se de presena de metal e soluo de tiossulfato de sdio quando a gua contiver cloro residual. Preparo de solues
Tiossulfato de sdio a 1,8% Tissulfato de sdio (Na2S2O3) 18 g gua destilada 1000 mL
Adicionar antes da esterilizao, volume de 0,1 mL da soluo para cada 100 mL de amostra EDTA a 15% cido etilenodiaminotetractico 150 g gua destilada 1000 mL
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Para guas que contenham concentraes de metais superiores que 0,01 mg/L, adicionar antes da esterilizao volume de 0,3 mL para cada 100 mL de amostra a ser coletada. Se a gua a ser coletada contiver valores de cobre, deve ser adicionado 0,1 mL de soluo a 10% de tiossulfato de sdio para cada 100 mL de amostra antes da esterilizao do frasco, a fim de prevenir a ao bactericida do metal.
Sacos ou sachets de coleta
Encontra-se comercialmente sacos ou sachets de plstico, prprios para coleta, previamente esterilizados e tambm tiossulfato de sdio na concentrao indicada sob a forma de comprimidos. O comprimido deve ser adicionado ao sachet antes da realizao da coleta. 9.3.1.1 Cuidados na obteno de amostras Em caso de verificao da qualidade de amostras deve-se verificar o local mais representativo do consumo de gua potvel. Por exemplo, bebedouros, filtros e torneiras so pontos preferenciais. No caso de verificao de todo o ramal predial os pontos mais representativos so: A Registro logo aps o cavalete de entrada de gua da empresa fornecedora; B Cisterna se houver; C Caixa dgua; D Bebedouros, filtros ou torneira que represente um ponto notvel, por exemplo, final da rede predial. Para a coleta nos frascos deve-se seguir um ritual que est representado na figura 6, segundo a Opas-Organizao Pan Americana da Sade.
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Figura 6 Coleta de amostra de gua para exame
A Limpar a torneira; B Deixar escorrer por dois a trs minutos; C Flambar ou desinfectar a torneira, se necessrio; D Deixar escorrer por dois a trs minutos; E O frasco preparado com proteo de papel alumnio, no deve ser tocado em suas bordas e o coletor treinado, deve prender a respirao e coletar cerca de 2/3 do volume do frasco; F Colocar a tampa, homogeneizar e identificar; G Nenhuma pessoa deve estar prxima, tossindo, fumando;
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Para coleta de amostras em sachets devem-se ter os mesmos cuidados seguindo as seguintes recomendaes, conforme as figuras, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 e 15.
Identificar no saco de coleta o nmero da amostra correspondente ao ponto de coleta.
Figura 7 Sachet de coleta
Abrir a torneira e deixar correr a gua durante 3 minutos ou o tempo suficiente para eliminar impurezas e gua acumulada na canalizao. Fechar a torneira.
Figura 8 - Torneiras
Abrir a torneira meia seo para que o fluxo seja pequeno e no haja respingos.
Figura 9 Meia seo
Remover o lacre do saco de coleta. Evitar contato dos dedos com a boca do mesmo.
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Figura 10 Lacre
Abri-lo puxando pelas fitas laterais.
duas
Figura 11 Abertura do lacre
Coletar a amostra enchendo o saco de coleta at a segunda marca.
Figura 12 - Coleta
Fechar o saco de coleta e dobrar a borda trs vezes para frente.
Figura 13 Fechamento
Dobrar as extremidades do arame para trs.

Figura 14 Segurana
Homogeneizar a amostra at dissolver o comprimido de tiossulfato de sdio contido dentro do saco de coleta.
Figura 15 Homogeneizao
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9.3.1.2 Coleta de amostra de gua em poo raso e mananciais superficiais Deve-se seguir as recomendao da OPAS conforme as figuras 16, 17 e 18.
Descer lentamente o cordo sem permitir que o frasco toque nos lados do poo.
Figura 16 Coleta em poo raso
Submergir o frasco, permitindo que se obtenha amostra mais profunda.
Figura 17 Coleta em poo raso
Observar o sentido da correnteza e a profundidade mnima.
Figura 18 Coleta em mananciais superficiais.
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A anlise microbiolgica deve ser realizada o mais rapidamente possvel. A temperatura de conservao de 4 a 10C e o tempo mximo recomendado entre a coleta e a anlise deve ser de 6 a 8 horas para guas naturais e de 24 horas para gua clorada.
9.4 Tipos de Exames O padro de potabilidade recomenda 3 (trs) exames considerados padres: o exame de tubos mltiplos, membrana filtrante e substrato definido ou cromognico.
9.4.1 Exame de tubos mltiplos Considerado padro e obrigatrio para qualquer laboratrio credenciado possui a desvantagem de apresentar resultados em tempo de 48 72 horas dependendo da qualidade microbiolgica da gua. dividido em ensaios presuntivo, confirmado e testes de diferenciao para determinao de coliformes termotolerantes e Escherichia coli atravs de uma cultura pura. Um tubo de cultura pura, tambm apresenta a desvantagem do risco potencial de contaminao ambiental, uma vez que, se tem concentrado clulas de bactrias potencialmente capazes de causar doena.
9.4.1.1 Meios de cultura gua de diluio
Soluo Estoque A Fosfato monobsico de potssio (KH2PO4) 34 g gua destilada 1000 mL
Soluo Estoque B Cloreto de magnsio gua destilada 81,1 g 1000 mL
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Preparo da gua de diluio 1,25 mL 5,00 mL 1000 mL 7,2
Soluo estoque A Soluo estoque B gua destilada pH aps preparo
Caldo Lactosado (CL) (ensaio presuntivo)
Extrato de carne Peptona Lactose gua destilada
Caldo Verde Brilhante (VB) (ensaio confirmado)
Peptona Lactose Bile de boi desidratada Soluo a 0,1% de verde brilhante gua destilada
Caldo de EC (coliformes termotolerantes)
Triptose Lactose Mistura de sais biliares
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Fosfato dibsico de potssio Cloreto de sdio gua destilada
Agar eosina azul de metileno (agar seletivo para determinao de Escherichia coli)
Peptona Fosfato dibsico de potssio Agar Eosina amarela a 2% Metileno a 0,05% 9.4.1.2 Prtica O exame de tubos mltiplos pode ser realizado com uma srie de 5 (cinco) tubos de caldo lactosado (CL) em concentrao dupla, com 10 mL de amostra por tubo e confirmado em meio de verde brilhante. Os ensaios de maior preciso so realizados com 3 (trs) sries de 5 (cinco) tubos, sendo a primeira srie de CL de concentrao dupla, com 10 mL de amostra por tubo, a segunda e terceira srie com CL de concentrao simples, com 1 mL de amostra e 0,1 mL da amostra respectivamente. A figura 19 demonstra a semeadura da amostra para o ensaio presuntivo:
Incubao: Tempo: 24/48 horas
Temperatura: 35, 5 0,5C
Estufa
Figura 19 Ensaio presuntivo (caldo CL ou caldo Lauril Triptose)
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A figura 20 mostra a repicagem do ensaio confirmado, ou seja, de cada tubo positivo de CL, com a ajuda de uma ala de platina ou Ni-Cr, repicar para um tubo de VB, uma gota do meio lactosado positivo. O tubo considerado positivo quando apresenta bolha de gs em tubo invertido dentro do tubo de ensaio. O tubo invertido denominado tubo de Durhan.
Repicar, com ala de Platina, os tubos com gs do ensaio presuntivo fazendo corresponder a cada tubo com gs do CL, um tubo de VB.
Figura 20 Ensaio confirmado (caldo VB)
CL positivos, por exemplo, 10 mL da amostra
Incubao: Tempo: 24/48 horas
Temperatura: 35, 5 0,5C VB Estufa
A figura 21 mostra o ensaio de diferenciao para determinao de coliformes termotolerantes. Dos tubos positivos do ensaio confirmado com a ajuda de uma ala de platina ou Ni-Cr, repicar para um tubo de EC, uma gota do meio VB positivo. O tubo considerado positivo quando apresenta bolha de gs no tubo de Durhan.
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Repicar, com ala de Platina, os tubos positivos de VB (presena de gs) em meio de EC. Cada VB+ ter um tubo correspondente em EC. Incubao: EC Temperatura: 44,5 0,2C Banho Maria Circulante
VB
Figura 21 Ensaio para coliformes termotolerantes
A interpretao dos resultados mostrada na figura 22.
O resultado dado pela presena de bolha de gs no tubo de Durhan. O resultado uma contagem do NMP (nmero mais provvel de coliformes totais ou coliformes termotolerantes por 100 mL de gua conforme o ensaio. O meio CT CTe
Figura 22 Interpretao dos resultados
A contagem de coliformes totais por 100 mL de gua dada pela tabela do NMP em anexo ao trabalho. Um exemplo apresentado pela figura 23.
Neste exemplo se apresentaram 4 tubos de VB positivos na primeira srie de 5 tubos com 10 mL da amostra, 3 tubos positivos na segunda srie com 1 mL da amostra e 1 tubo positivo na terceira srie. O resultado , portanto, a combinao de tubos positivos 4-3-1, cuja tabela
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Figura 23 Exemplo de contagem de NMP/100 mL de coliformes totais.
Da mesma forma a figura 24 mostra um exemplo de resultado para coliformes termotolerantes.
O ensaio apresenta 3 tubos positivos para a primeira srie de 10 mL de amostra, 2 tubos positivos na segunda srie de 1 mL e 1 positivo para terceira srie de 0,1 ml. Para o meio de EC, a combinao de 3-2-1 tubos positivos representa a presena de 17 coliformes
Figura 24 Resultado para coliforme termotolerante.
9.4.2 Exame de Membrana Filtrante A tcnica da Membrana Filtrante baseia-se na filtrao de um volume conhecido da amostra sobre uma membrana porosa (algumas de Acetato de Celulose). Esta tcnica comeou a ser utilizada partir de 1954 nos Estados Unidos e Inglaterra. Tambm se apresenta como mtodo padro e recomendado pela 518/2004. A prtica realizada atravs de equipamento laboratorial que consta de funil de ao inox ou plstico, base para fixao do filtro, Kitasato e bomba de vcuo. Aps um volume de
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amostra filtrado, a membrana colocada em uma placa de petri apropriada com meio cultura especfico e levada para a incubao nas condies exigidas pela espcie microbiana em anlise. A tcnica das membranas baseada nas caractersticas das colnias formadas, utilizando-se da diferenciao das colnias das espcies atravs de cores.
9.4.2.1 Meios de cultura, Incubao, Resultados Meio Endo - utilizado para determinao de coliformes totais que se desenvolvem neste tipo de meio formando colnias nucleadas, escuras, com brilho metlico. Meio Tergitol (TTC) - Identifica coliformes totais atravs de formao de colnias amarelas alaranjadas em zona amarelada. A incubao feita em estufa a 35,5 0,5 C durante 24/48 horas. O ensaio pode ser qualitativo (Presena/Ausncia) ou quantitativo, neste caso anota-se o volume filtrado da amostra e o nmero de colnias formadas para aplicar-se na frmula: UFC = n/V(mL), onde UFC a unidade formadora de colnias, n o nmero de colnias formadas e V (mL) o volume de amostra filtrada em mL. O resultado da anlise da gua dado em CT e, portanto, para se ter o resultado em NMP deve-se multiplicar o resultado de UFC por 100 e assim teremos NMP/100 mL = 100 UFC.
A figura 25 mostra um resultado de CT em meio Endo e Tergitol
Resultado em meio Endo com colnias escuras e meio Tergitol com colnias amarelas alaranjadas.
Figura 25 Colnias de coliformes totais em dois meios diferentes
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Meio MFC Apropriada para identificar coliformes termotolerantes pelo mtodo da Membrana Filtrante atravs da formao de colnias azuis com dimetro de 1 - 2 mm.
A figura 26 mostra resultado de coliformes termotolerantes pela formao de colnias azuis.
Resultado para coliformes termotolerantes em meio MFC
Figura 26 Resultado de coliformes termotolerantes.
Meio
Chromocult
Este
meio
combina
substratos
especficos
(cromognicos) para coliformes totais, coliformes termotolerantes, salmonellas e enterobactrias. Este meio diferencia as espcies por diferenciao de cores: Coliformes totais - colnias salmo/vermelhas Coliformes termotolerantes - colnias azul escuro/violetas Salmonellas - colnias verdes Enterobactrias - colnias incolores A figura 27 mostra os resultados para CT e CTe em placa de petri e meio Chromocult
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CT colnias salmo CTe colnias azul escuro
Figura 27 Resultados para CT e CTe para Chromocult
A figura 28 mostra os resultados para Enterobactrias e Salmonellas para o meio Chromocult.
Enterobactrias
Salmonellas
Figura 28 Enterobactrias e Salmonellas em meio Chromocult.
9.4.3 Exame pelo meio substrato definido ou cromognico A determinao pelo mtodo do substrato definido realizada atravs de um kit cuja marca registrada pertence a Colilert. O exame foi proposto em 1992 nos Estados Unidos sendo um variante dos Tubos Mltiplos, ou seja, utiliza os mesmos princpios de contagem e distribuio de amostras como se fossem tubos de ensaio, porm utiliza cartelas prprias para clculo da intensidade de contaminao. A sua grande vantagem se encontra no tempo de determinao laboratorial de 18-24 horas, utilizando-se de meios que identificam as enzimas especficas dos microrganismos coliformes totais e Escherichia coli que desenvolvem cor amarela para o primeiro e azul fluorescente para o segundo na presena da luz ultra-violeta. Os coliformes totais apresentam a enzima -galactosidase que quando em presena do substrato especfico ONPG (Orto-nitrofenil--d-galactopiranosdio) desprende o radical nitrofenil que se oxida a Orto Nitrofenol (amarelo)
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O Escherichia coli apresenta a enzima -glucoronidase que quando em presena do substrato MUG (4 metil-Umberliferil--d-glucorondeo) desprende o 4-metil-umberliferona que azul fluorescente.
Os poucos microrganismos no coliformes que apresentam a enzima glucoronidase so inibidos por uma matriz antibitica adicionada ao meio. Este antibitico inibe a Klebsiella pneumoniae que positiva os ensaios de Eschechia coli. O mtodo consiste na adio do meio de cultura Colilert que possui os substratos, a 100 mL da amostra e incubado a 35,5 0 0,5 C por 24 horas de preferncia ou 18 horas caso seja necessrio respostas mais rpidas. A cor amarela significa presena de coliformes totais e quando submetida a luz ultravioleta os tubos que apresentarem cor azul fluorescentes sero de Escherichia coli.
A figura 29 demonstra o processo de formao de cor pelo substrato desenvolvido pela Colilert.
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Figura 29 O mtodo Colilert
9.5 Descontaminao de um Sistema 9.5.1 Desinfeco de poo O poo deve ser descontaminado quando for construdo ou quando se descubra alguma contaminao da gua. Os produtos mais utilizados so a cal clorada com aproximadamente 30% de cloro ativo, o hipoclorito de sdio com cerca de 10% de cloro ativo e hipoclorito de clcio com aproximadamente 70% de cloro ativo. As dosagens recomendadas pelo Ministrio da Sade (FUNASA, 2006), so: Dosagem de 50 mg/L de cloro ativo com tempo de contato de 12 horas; Dosagem de 100 mg/L de cloro ativo com tempo de contato de 4 horas; Dosagem de 200 mg/L de cloro ativo com tempo de contato de 2 horas.
A tcnica de desinfeco pode ser como se segue: cubar o reservatrio ou poo a ser desinfectado; calcular o desinfetante a ser usado; preparar a soluo desinfetante a 5%, pesando o produto e despejando-o em gua limpa. Agitar bem e depois deixar em repouso; desprezar a borra e derramar a soluo no poo; O clculo do desinfetante feito de acordo com o produto, o tempo de contato e a cubagem do poo:
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calcular a quantidade de cloro necessrio por meio de regra de trs. Agitar o mais possvel e deixar a soluo permanecer em contato com o poo o tempo necessrio, de acordo com a dosagem, 2 4 12 horas. Findo o prazo, esgotar o poo at que nenhum cheiro ou gosto de cloro seja percebido na gua. Se possvel, confirmar o resultado da desinfeco pela anlise bacteriolgica antes de utilizar a gua para bebida.
Observao: - A desinfeco com soluo forte de 100mg/l de Cloro ativo deve ser precedida de limpeza, com escovas, de todas as superfcies do poo, paredes, face interna da tampa, tubo de suco; - As amostras para anlise bacteriolgica devem ser colhidas depois que as guas no apresentem mais nenhum odor ou sabor de cloro; - A desinfeco de um poo elimina a contaminao presente no momento, mas no tem ao sobre o lenol de gua propriamente dito, cuja contaminao pode ocorrer antes, durante e depois da desinfeco do poo. 9.5.2 Descontaminao de caixa dgua A limpeza e descontaminao de uma caixa dgua pode ser realizada de maneira simplificada, com utilizao de gua sanitria seguindo os seguintes passos:
1 - FECHAR A ENTRADA DE GUA NA BIA OU NO REGISTRO DO CAVALETE 2 - ABRIR AS TORNEIRAS PARA ESVAZIAR A CAIXA, SEM AGITAR A SUJEIRA DO FUNDO. DEIXAR APROXIMADAMENTE 15 CM EM VOLUME DE GUA NO FUNDO DA CAIXA 3 - FECHAR AS TORNEIRAS. COM UM PEDAO DE PANO OU ESPONJA, TAMPAR A TUBULAO DE SADA DA GUA, EVITANDO ASSIM A ENTRADA DE QUALQUER SUJEIRA NA TUBULAO
4 - ESFREGAR AS PAREDES COM UMA ESCOVA, PARA REMOO DA SUJEIRA E RETIRAR A GUA SUJA COM AUXLIO DE BALDES, PANO OU ESPONJA. NO UTILIZAR ESCOVA DE AO.
6 - COLOCAR 2 COLHERES DE SOPA DE GUA SANITRIA EM UM BALDE COM 10 L DE GUA. ENXAGUAR AS PAREDES COM A SOLUO E ENXUGAR O EXCESSO.
5 - ENXAGUAR A CAIXA D GUA COM GUA DA REDE, POIS ELA J CONTM CLORO. ENXUGAR TODA A GUA EXISTENTE.
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7 - RETIRAR O TAMPO DA TUBULAO DE SADA. A CAIXA DGUA EST LIMPA E DESINFETADA 8 - DEIXAR ENTRAR GUA NOVA NA CAIXA E EM SEGUIDA ABRIR AS TORNEIRAS POR UNS 5 MIN PARA ELIMINAR A GUA VELHA DA TUBULAO. LIMPAR A TAMPA.
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_______________________________________________________________________________ _
ANEXO Tabela com limite de confiana de 95% para vrias combinaes de resultados positivos quando 5 tubos so usados para cada diluio (10 mL, 1,0 mL e 0,1 mL)
Combinao de positivos NMP/100 mL Inferior 0-0-0 0-0-1 0-1-0 0-2-0 1-0-0 1-0-1 1-1-0 1-1-1 1-2-0 2-0-0 2-0-1 2-1-0 2-1-1 2-2-0 2-3-0 3-0-0 <2 2 2 4 2 4 4 6 6 4 7 7 9 9 12 8 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 2.0 2.0 1.0 2.0 2.0 3.0 3.0 5.0 3.0 Limites Superior 10 10 13 11 15 15 18 18 17 20 21 24 25 29 24
_______________________________________________________________________________ _
3-0-1 3-1-0 3-1-1 3-2-0 3-2-1 4-0-0 4-0-1 4-1-0 4-1-1 4-1-2 4-2-0 4-2-1 4-3-0 4-3-1 4-4-0 5-0-0 5-0-1 5-0-2 5-1-0 5-1-1 5-1-2 5-2-0 5-2-1 5-2-2 5-3-0 5-3-1 5-3-2 5-3-3 5-4-0 5-4-1 11 11 14 14 17 13 17 17 21 22 26 26 27 33 34 23 30 40 30 50 60 50 70 90 80 110 140 170 130 170 4.0 4.0 6.0 6.0 7.0 5.0 7.0 7.0 9.0 12 9.0 12 12 15 16 9 10 20 10 20 30 20 30 40 30 40 60 80 50 70 29 29 35 35 40 38 45 46 55 63 56 65 67 77 80 86 110 140 120 150 180 170 210 250 250 300 360 410 390 480
_______________________________________________________________________________ _
5-4-2 5-4-3 5-4-4 5-5-0 5-5-1 5-5-2 5-5-3 5-5-4 5-5-5 Fonte: FUNASA, 2009 220 280 350 240 300 500 900 1600 1600 100 120 160 100 100 200 300 600 560 690 820 940 1300 2000 2900 5300 -
Tabela do NMP com limite de confiana de 95% para os resultados positivos quando 5 pores de 10 mL so examinadas.
Combinao de positivos NMP/100 mL Inferior 0 1 2 3 4 5 Fonte: FUNASA, 2009 < 2,2 2,2 5,1 9,2 16,0 >16,0 0 0,1 0,5 1,6 3,3 8,0 Limites Superior 6,0 12,6 19,2 29,4 52,9 Infinito

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Coletnea em Saneamento Ambiental Srie Temtica: Recursos Hdricos e Saneamento ANO I 2010 Volume 2

ROQUE, O.C.C ; NASCIMENTO, V.B.

CINCIAS BIOLGICAS APLICADAS AO SANEAMENTO

Odir Clcio da Cruz Roque Valria Borba do Nascimento

1. Interface da Engenharia Sanitria e Ambiental e as Cincias Biolgicas

Transmitidas por vetores que relacionam com a gua

(Fonte: BARROS et al, 1996 e ROQUE, 1997)

Tabela 2. Doenas relacionadas a fezes e esgotos

Helmintos transmitidos pelo solo

Tnias (solitrias) na carne de gado ou porco

Ingesto de carne mal cozida de animais infectados

(Fonte: Barros et al, 1996 e Roque, 1997)

Tabela 3. Doenas relacionadas com lixo e transmitidas por vetores.

2. A variedade dos seres vivos

separaes, grupos e um meio de classificao:

2.1.1. Regras internacionais de nomenclatura

Onde o primeiro termo o gnero em letra maiscula.

2.1.2. Organismos de difcil classificao

_______________________________________________________________________________ _ 3.1. Estrutura

Cpsula Citoplasma Membrana Celular ou Citoplasmtica Parede Celular

Figura 1. Ilustrao esquemtica da clula.

3.5.1. Nutrio Autotrfica

_______________________________________________________________________________ _ 3.5.1.2. Quimiossntese

NH3 OH+ + O2 NO2 + E(energia) Nitrobacter

3.5.2. Nutrio Heterotrfica

Tabela 4. Aceptores de eltrons listados em ordem decrescente de liberao de energia.

Metanognese acetotrfica (equao 9)

CH3COOH CH4 + CO2

4. Demanda Bioqumica de Oxignio (DBO)

fotossntese e o oxignio consumido das bactrias aerbias. O excesso de carga

Noes da Prtica Laboratorial

4.4.1. Mtodos de determinao (exclusivamente da DBO)

DBO (mg / L ) = Ai [ (Af1 + Af2 ) / 2]

Mtodo da diluio sem semeadura

DBO (mg / L ) = { Ai [ (Af1 + Af2 ) / 2] 300mL de Amostra}

Mtodo da diluio com semeadura

Frascos Bi Bf Ai Af1 Af2 Vm

N do Frasco 290 320 400 326 72 -

Volume do Frasco 304,4 310 322 322.6 323 316,4

Volume do Titulante 8,82 8,05 8,92 6,37 6,27 -

Volume Corrigido 9,17 8,22 8,76 6,25 6,14 -

*para se estimar a DBO:

5. Modelo matemtico da curva de DBO

_______________________________________________________________________________ _ 5.1. Consideraes

2 ESTGIO (NITROGNIO) DBO FINAL 1 ESTGIO (CARBONO)

Lt = quantidade de DBO remanescente do primeiro estgio na gua, no tempo t.

O sinal negativo na equao indica que: dLt/dt < 0, onde Lt > 0

dLt/dt = taxa de consumo de matria orgnica por oxidao biolgica aerbia.

K = constante de proporcionalidade (T-1).

A equao pode ser reescrita (equao 14):

Log Lt/L = - K. t/2,303

Fazendo K/2,302 = k (coeficiente da velocidade de consumo de substrato, T -1) (equao 18 e 19)

Log Lt/L = - k.t

E y, a quantidade de DBO que foi produzida no tempo t, igual a (equao 21 e 22):

(25) expresso final do modelo matemtico da curva

5.1.1. Exemplo de utilizao

L = 1,46 y5 L = 1,46 . 200 L = 292 mg/L

6. Crescimento bacteriano no meio gua

_______________________________________________________________________________ _ 6.1. Fatores Limitantes

2No = No e t; 2 = e ln2 = t = ln2/T = 0,69/T

7. Curva de crescimento de uma cultura em batelada

Log do n de clu las

, aplica-se a fase exponencial, atingindo o