1

Fisiologa Integrada Enfermera 2013

Clase 7: Mecanismos de Excitabilidad Celular

Ya sabemos que los canales inicos van a ser la va por la cual va a poder fluir corriente o cargas de un lado al otro. Entonces, vamos a tratar de mirar con algo de detalle como caracterizamos estas protenas integrales de membrana, genricamente llamados canales inicos. Podramos imaginarnos una capacidad y una resistencia y que los iones iban a pasar por la resistencia porque por la capacidad a lo ms quedan acumulados en la bicapa. Como sabemos estas son protenas integrales de membrana, que normalmente estn constituidas por varias subunidades, no es solo una cadena poli peptdica sino que una agregacin de cadenas que estn situadas en la bicapa y obviamente constituidas por aminocidos que tienen mayor o menor interaccin con los fosfolpidos dependiendo en que parte de la molcula estn situadas. Normalmente vamos a encontrarnos con protenas con alfa hlice (aunque no por eso dejan de haber secciones de cadenas beta) y vamos a encontrar que en particular para los canales inicos podemos asignar en las distintas partes de esta molcula, roles distintos. Vamos a encontrar que algunas de las secciones de esta molcula tienen que ver con permitir o excluir el paso de diversos iones. Lo que bsicamente estamos mirando entonces es que estas molculas empiezan a ser selectivas para los distintos iones. Vamos a encontrarnos con canales inicos que son selectivos; como por ejemplo para los aniones. Van a dejar pasar el cloruro, en vez del sodio y el potasio. Y otros van a ser excluyentes con el cloruro y van a dejar pasar sodio y/o potasio y/o calcio. Tenemos una gran divisin entre aniones y cationes selectivos en un canal. Hay muchas maneras de imaginarse los canales, dada la biologa molecular. Cada vez son ms precisas las imgenes que tenemos de estas estructuras. Por ejemplo, ac tienen una definicin casi a nivel de aminocido en donde cuatro son las que constituyen un segmento de protena que forman un canal inico. En particular este paso o no paso del i on va a depender de dos barreras. Una que acta como el portero que dice: no Ud. no es el ion adecuado as que vyase para otro lado. La selectividad va a estar determinando qu ion tiene mayor afinidad con los sitios que estn formando la entrada del canal. De alguna manera siempre vamos a poder imaginarnos que la apertura y cierre del canal va a definir que pase o no pase un ion. Ahora, cuanto de ellos pasen tambin va a ser parte de su estructura y cules de ellos pasan tambin va a ser parte de su selectividad. Entonces mirando un poco ms de detalles cuando les deca que esta selectividad va a hacer discriminaciones ms o menos gruesas, ms gruesas van a ser si es catin o anin y ms finas, qu catin y hay una amplia gama.

Fisiologa Integrada Enfermera 2013 De nuevo tenemos esta imagen y el sitio de selectividad, entonces nos imaginamos que el sitio aminoaciditos que se ubican en torno a ella van a actuar de mayor o menos manera con los iones, en forma individual, uno a uno y esto va a depender del tamao del ion y de la forma que presenta la molcula.

Ac voy a estar mirando un canal desde arriba y tenemos cuatro subunidades, esta es la zona del cuerpo y esto sera un poco lo que ve el ion tambin lo que yo estoy viendo al estmulo del canal y no pierdan de vista el tiempo que est transcurriendo durante este proceso. Computacionalmente esto es de una intensidad gigantesca, o sea no es algo trivial poder lograr obtener una imagen como esta, toma mucho trabajo primero la programacin y segundo hacer la animacin. Ac se necesitas caso 60 microsegundos para ver que paso con la molcula. La molcula esta siempre ah vibrando y esto va a dar origen a que tengamos fluctuacin. En este caso tenemos una imagen mucho ms detallada de cmo sera el paso de cada ion. Esto les est pasando a ustedes todo el tiempo. Entonces podemos imaginarnos de una forma espectacular como los avances nos estn permitiendo ver una imagen molecular. En u n registro si no pasa nada, va a aparecer un trazado que corresponde a la corriente basal antes que se abra un canal. Cada vez que se abre un canal aumenta la corriente que fluye a travs de la membrana, y eso es lo que uno mide, como ustedes pueden ver ese canal no se abre siempre con la misma frecuencia, pero si se abre a la misma magnitud, si se fijan siempre abre al mismo nivel; la magnitud de esa corriente es de aproximadamente 7 picoampres (pA), 7 x 10-12 Ampres, y en la barra de tiempo pasan como 20 milisegundos, es un canal que se mantiene por mucho tiempo abierto. Entonces esto nos da tambin otro parmetro para entender cmo operan los canales, sabemos que van a ser selectivos, van a dejar pasar con mayor o menor probabilidad algn tipo de ion y tambin ahora tenemos la nocin de que su apertura es aleatoria, pero no es una aleatoriedad absolutamente indiscriminada, sino que hay ciertos lmites; entonces por ejemplo estas fluctuaciones entre cerrado y abierto pueden estar moduladas por variables como el potencial de membrana, algn ligando que se pegue a nuestra molcula y eso lleve a que la probabilidad de fluctuar cambie; otras variables como la concentracin de hidrgeno

Fisiologa Integrada Enfermera 2013 (pH), cunta protonacin o desprotonacin del canal est para que se abra con mayor o menor frecuencia, o la temperatura que va a hacer contracciones con canales que se abren ms cuando estn ms helados y otros que se abren menos cuando estn ms helados. Otro fenmeno que tambin puede hacer cambiar la probabilidad del canal, es cunta tensin recibe de la bicapa donde est situado y hay una serie de variables que van a influir en cmo hago fluctuar el canal entre cerrado-abierto. Podemos imaginar que tenemos una va conductora a travs de la membrana, y que va a corresponder a una corriente muy especfica para un in. Entonces siguiendo con la Ley de Ohm, esa corriente capaz de medir, con un osciloscopio en el laboratorio, corresponde a la razn del voltaje que est aplicado en la membrana y a la resistencia del canal. Otra manera de hablar de la resistencia, es hablar de su conductancia que es el inverso de la resistencia. O sea, que yo puedo definir la corriente que acabo de ver como el producto entre la conductancia del canal y la diferencia de potencial, eso es lo que va a hacer mover iones en el gradiente elctrico. Entre lo que tengo como potencial de membrana en ese momento, es lo que corresponde al potencial de equilibrio para ese ion. Si yo pudiera situar el potencial de membrana exactamente en el potencial de equilibrio para el ion, por mucho que el canal est abierto cunta corriente podra haber? cero, esa es la posicin que habamos visto cuando se generaba el equilibrio en que la carga de ambos lados son iguales. Ahora si obviamente el potencial de membrana es distinto al potencial del ion, yo voy a ver corriente, siempre y cuando el canal est abierto. Si el canal est cerrado no puede haber corriente por mucho que est lejos del potencial de equilibrio de ese in. De qu estamos hablando aqu en el paso de corriente? Aqu hay un ejercicio en cuanto a evaluar y yo les mencionaba que la corriente que estbamos viendo en el trazado verde eran 7pC tengo este ejercicio. Si tenemos 7pA durante un segundo, a cunta carga corresponde esta cantidad de iones? Si yo tengo 1 mol, tengo 96500 coulomb, luego cuntos iones corresponden a 5 picoCoulomb, si tengo 7 pA en un segundo?.Si 6,02 x 10e23 iones son 96500 C. Luego: X iones son 5 pC. Entonces, por simple regla de tres puedo determinar la cantidad de iones que van atravesar la membrana en 1 segundo (31,2 x 10e6 iones en 1 segundo). Y en un milisegundo van a pasar 31000 iones. Si esto fuera una enzima ese (31 millones de iones por segundo) sera el nmero de reacciones por segundo que podra tener. Entonces volviendo a nuestro circuito de la membrana. Ahora nos podem os imaginar que cada canal individual va a tener una pila que es el potencial de equilibrio para cada in presente. La gracia va a ser que estas variaciones, esta conductancia ahora que van a permitir el valor del voltaje de la membrana, eso es lo que nos va a permitir tener ahora la membrana excitable, Cmo hacemos a la membrana excitable? mediante el cambio en estos canales inicos. Aqu est un esquema de cmo est constituido un canal de calcio (selectivo a calcio); como ustedes pueden ver se puede identificar cuatro subregiones que se repiten, subunidades 1,2,3 y 4; y cada subunidad, a

Fisiologa Integrada Enfermera 2013 su vez, posee 6 segmentos que atraviesan las membranas de un lado a otro, son segmentos transmembranas, en total tenemos 24 segmentos transmembranas; ahora deben imaginar que esto esta compactado de tal manera que forma un canal inico, dejan una apertura en que esta zona de cada u no de los segmentos forman la pared del tubo por donde pasan los iones. Otra cosa que surge del anlisis de la secuencia aminoacdica de estos canales es que por ejemplo para este canal el segmento que llamamos cuarto segmento de cada una de las subunidades presenta una sobrepoblacin de aminocidos cargados, ustedes dirn que quedaron ah porque no pudieron arrancar, acurdense que a travs de la membrana tenemos un voltaje, ms que nada esto es para decirles que no es ubicuo del canal de calcio, sino que en canales de sodio y potasio tambin el segmento de C4 est con un espectro de aminocidos cargados y esto lo van a encontrar en muchos canales con iones. Pero, qu va a pasar con estos aminocidos cargados si cambia el potencial de la membrana?, ellos estn en el campo elctrico, por ende si cambia la polaridad de este campo elctrico estos aminocidos necesariamente se van a intentar reacomodar, no les gusta estar ms cerca de una polaridad que la otra, se van a empezar a mover, esto es fundamentalmente la misin del sensor de potencial que tenemos en los canales inicos; los canales inicos sensibles al potencial, lo hacen mediante este mecanismo; aminocidos cargados de tal maner a que cuando cambia el potencial del campo dado por la membrana ellos van a empujar a la molcula a que cambie su configuracin conformacional, esto va a tener como consecuencia que el canal se abra o se cierre, normalmente es ms fcil encontrar el canal abierto a uno que est cerrado, y eso es un poco lo que quiero ver ahora.

Fisiologa Integrada Enfermera 2013 Aqu tenemos un registro, parecido al que vimos anteriormente para el canal de potasio, a distintos valores de vo ltaje. Como ustedes ven el canal se abre menos ac que ac (muestra imagen) y que adems aparece un segundo canal, o sea que es muy frecuente que el canal se abra cuando el voltaje est en 40.000 volts afuera de la membrana, y que es poco probable cuando el voltaje es menor que 40.000. Entonces yo puedo evaluar esta probabilidad en funcin del voltaje y hacer un grfico, lo ms comn que uno hace, pero justamente esto va a quedar en una escala en funcin de lo que hay averiado. Este valor en este caso, es el valor del potencial de membrana, y Que va a ocurrir entonces? Que voy a encontrar que estos canales tienen una probabilidad de apertura, cuan frecuentemente lo voy a encontrar abierto, que es funcin del valor de potencial de membrana. Y esto no es privativo del Canal de potasio, si yo lo hago en un canal de sodio, el mismo experimento: ver en cuanto tiempo estar abierto a distintos voltajes, voy a encontrar en una probabilidad que sigue una funcin, esta es una funcin que yo puedo evaluar tericamente sin la distribucin de volt, pero para el caso no importa, si ustedes ven que podemos tener el canal probablemente ms abierto que el potencial definitivo antes que este mismo canal en el potencial de membrana, en la membrana. El canal momentneamente excitado es ms probable que est abierto, ms probable que est cerrado dependiendo del potencial de membrana. Esto es un resumen ms que nada, presenta una caricatura un poco de lo que est ocurriendo, al haber un cambio de potencial la carga intrnseca del canal se mueve, por lo tanto ahora el canal se abre, se mantiene abierto, en busca de voltaje, una vez que cambio el voltaje, la carga vuelve a la normalidad, y eso es lo que yo quera mostrarles. Bsicamente esa es una de las cosas que est intrnseco en estos dos grficos, y es que mirar el comportamiento de un canal un milln de veces, corresponde a mirar un milln de canales al mismo tiempo. Mirando el comportamiento de una molcula puedo entender un comportamiento macroscpico.

Fisiologa Integrada Enfermera 2013