Universidad de Ciencias y Artes de Chiapas Facultad de Ciencias Biolgicas Licenciatura en Biologa

Reporte de prctica: #2: Medicin de Clulas

Biologa Celular

Dra. Alma Gabriela Verdugo Valdz

3 A

Equipo #3

Argello Figueroa Aureliano Silvn Hernndez Christian Michel Ruiz Cruz Luis Armando Jos Guadalupe Ojeda Estrada

Tuxtla Gutirrez, Chiapas a 05 de Septiembre del 2013.

INTRODUCCIN

El microscopio permite realizar un anlisis cualitativo de las estructuras pero tambin es muy til para realizar estudios cuantitativos de las mismas. Es muy usual en el campo de la microbiologa, la qumica, entre otras, utilizar el microscopio para realizar mediciones sobre las estructuras de microorganismos, o clulas. (Martorelli, 2010).

La calibracin, respecto a la ptica de un microscopio, de los instrumentos utilizados para la micro medicin y anlisis cuantitativo de los microorganismos es esencial para una buena ejecucin de estas actividades (bidem).

La calibracin se realiza slo una vez para un microscopio en particular. Esta calibracin debe realizarse para cada ocular y para cada objetivo que se utilice con dicho microscopio (bidem).

El equipo que se utiliza para esta tarea es la reglilla micromtrica (micrmetro objetivo), la cual se instala en la platina del microscopio, y la reglilla ocular (micrmetro ocular) que va ubicada en un ocular del microscopio (bidem).

La reglilla ocular consiste en un disco de vidrio transparente en el cual se encuentra graduada una reglilla de 10 [mm] de longitud, dividida en 100 partes. Este disco graduado va inserto en el ocular del microscopio. Se utiliza para medir el tamao de los microorganismos susceptibles de ser vistos por el microscopio ptico (bidem).

La reglilla micromtrica (micrmetro objetivo) consiste en una lmina de vidrio que contiene en su centro un segmento de recta de 1 [mm] de longitud, dividido en 100 partes iguales de 10 micrones () cada una. Se coloca en la platina del

microscopio, y se utiliza para calibrar la reglilla ocular y el ocular de Whipple respecto al ocular y al objetivo que se est utilizando en el microscopio (bidem).

El instrumento utilizado para la micro medicin es esencialmente la reglilla ocular, pero tambin se puede usar el retculo de Whipple (tambin conocido como ocular de Whipple) cuya primera utilidad se relaciona con el anlisis cuantitativo de los microorganismos. Estos dos instrumentos son los que deben ser calibrados con el micrmetro objetivo (bidem).

OBJETIVO

Qu el estudiante entienda la importancia de la Citometra.

MTODO

Se emplearon diversos tipos de tejidos, tales como: clulas de cebolla, de nopal, y de ptalos de flores.

Para el uso del objetivo y ocular micromtricos:

1.- Se coloc el objetivo o reglilla micromtrica en la platina y se enfoc la escala. 2.- Se coloc el ocular micromtrico en lugar de uno de los oculares del microscopio. 3.- Posteriormente se hizo coincidir perfectamente ambas escalas en el cero. 4.- Se observ cuidadosamente que el otro par de marcas coincidieran a la perfeccin y se tom en cuenta nicamente el par que estaba ms alejado del cero para hacer el clculo. 5.-Se encontr el factor de conversin correspondiente a cada objetivo dividiendo el valor correspondiente a la reglilla micromtrica del objetivo (X) entre el valor correspondiente a la reglilla del ocular (Y). 6.- Una vez encontrado el factor de conversin para objetivo, se quit el objetivo micromtrico y se coloc en su lugar el portaobjetos con la preparacin a medir. 7.- Se realizaron mediciones con la reglilla del ocular micromtrico y se multiplic el resultado por el factor correspondiente cada objetivo. 8.- Se medi la misma clula con los diferentes objetivos. 9.- Se hizo mediciones de los tres diferentes tipos de clulas (nopal, cebolla, y ptalos de flores). 10.- Se observ y anot los resultados.

DISCUSIN

Cualquier medicin que se realice en un crculo (campo visual), al no pasar por el dimetro del mismo, la medida obtenida ser siempre menor que este (Martorelli, 2010).

En comparacin con lo que dice Martorelli, se puede decir que al observar nuestras muestras nos dimos cuenta que con los objetivos de 10X y 40X se podan ver en el campo visual completamente las clulas, pero con el objetivo de 100X nos fue ms complicado observarlas completamente, esto debido a su tamao. Por ejemplo, las medidas de las clulas del ptalo de la flor fueron por debajo de una micra: de 0.35 a 0.064 ; en comparacin con las clulas de cebolla y nopal, stas sobrepasaban la micra de tamao y haca ms difcil su observacin por completo, aunque por lo mismo se poda ver ms detalladamente su composicin.

Cada especie tiene una forma caracterstica, y entre las clulas individuales existe una considerable variacin en el tamao y la forma que puede ser redondeada, elipsoide o casi cilndricas; estas caractersticas morfolgicas se ven afectadas por la edad y el entorno (Montoya, 2008).

Coincidimos con lo que dice Montoya, existen una infinidad de clulas, de diferentes tamaos y funciones, todo esto dependiendo de la especie en cuestin. Para el caso de las clulas de nopal y ptalo de flor, se encontr similitud en su morfologa, ya que presentaban forma ovoide o redondeada en la mayora de sus clulas. Para el caso de la cebolla, sus clulas presentaban forma elipsoide o casi cilndrica, a manera de ladrillos de pared.

Esto nos lleva a pensar que para cada individuo diferente habr infinidad de clulas, que variarn en su morfologa y funcin, todo esto depender de la edad de las clulas, as como del lugar y las caractersticas de ste, y la parte donde se encuentren dentro del individuo en cuestin.

CONCLUSIONES

sta fue la segunda prctica de laboratorio de la materia de Biologa Celular, la cual se llam: MEDICIN DE CLULAS. El objetivo de sta era: entender la importancia de la Citometra. Despus de haberla realizado hemos llegado a ciertas conclusiones:

Con ayuda del objetivo y ocular micromtricos nos fue posible obtener las medidas aproximadas de las clulas que observamos. Aqu es donde la Citometra toma un papel importante porque gracias a su aplicacin nos es posible medir el tamao de las clulas.

En las muestras se poda observar una gran similitud entre las clulas del nopal con las del ptalo, pero algo que las diferenciaba era su tamao, ambas poseen tamaos diferentes, y esto se pudo observar gracias a la ayuda de la Citometra, he ah donde radica su importancia.

Tambin es importante resaltar que para obtener datos de medidas lo ms exactas posibles es necesario hacer coincidir muy bien las reglillas del ocular y objetivo micromtricos, ya que de lo contrario se corre el riesgo de tener un margen de error grande.

Consideramos muy importante el uso de la Citometra, ya que gracias a ella se puede tener datos ms exactos o aproximados del tamao de los diferentes tipos de clulas.

Como conclusin final, se puede decir que se logr el objetivo de la prctica. En base a la experimentacin, logramos entender la forma de aplicar la Citometra, de conocer cmo funcionan el objetivo y ocular micromtricos. Ya con esas bases, nos ser de gran ayuda en prcticas posteriores, porque ya tendremos la nocin de cmo obtener las medidas del tamao de las clulas.

CUESTIONARIO

1. Cul es la aplicabilidad de la medicin de las clulas?

La ventaja analtica de la Citometra tiene como base la habilidad de hacer mediciones cuantitativas y multiparamtricas en un nmero estadsticamente adecuado de clulas para definir las propiedades de una poblacin celular o de las subpoblaciones que la componen. El anlisis multiparamtrico hace posible evaluar poblaciones celulares particulares dentro de una mezcla compleja, ya que aprovecha propiedades intrnsecas de la clula (De Robertis, 2004).

2. Mencione diferentes tcnicas de medicin de clulas.

Citogramas confeccionados en funcin de la dispersin: Es una coordenada se representa la FSC (tamao) y en otra la SSC (complejidad). Permiten diferenciar poblaciones celulares basndose en estas propiedades.

Citogramas basados en la fluorescencia con un nico AcMo: Se utilizan cuando se pretende contar cuntas clulas de la mezcla poseen un determinado marcador de superficie. Se representa con un histograma que en una coordenada mide el nmero de clulas y en la otra la intensidad de la fluorescencia o, lo que es lo mismo, la cantidad de marcador que tienen las clulas.

Citogramas basados en la fluorescencia con varios AcMo: Se utilizan para contar cuntas clulas de una mezcla poseen un determinado marcador y cuntas poseen otro.

Citogramas mixtos: Se basan en medidas de dispersin y de fluorescencia. Se utilizan para detectar poblaciones que poseen un mismo marcador, pero distintas propiedades fsicas o viceversa (De Robertis, 2004).

3. A qu se refiere la Citometra?

La Citometra es el anlisis de las caractersticas de clulas ya sea mediante inspeccin al microscopio, o midiendo de manera automatizada propiedades particulares de las clulas (Garca, 2005).

4. A qu se refiere el trmino de poder de resolucin en un microscopio?

La limitacin bsica del microscopio de campo claro no es de magnificacin, sino de poder de resolucin, el cual se define como la capacidad de una lente para poder distinguir dos puntos muy cercanos entre s como unidades independientes y separadas (Garca, 2005).

El poder de resolucin de un microscopio depende de la longitud de onda de luz utilizada, y de una propiedad ptica del lente objetivo, llamada abertura numrica (AN). El poder de resolucin del microscopio est limitado por la abertura numrica de los lentes objetivos y por la longitud de onda de la luz visible. El lmite de resolucin, o sea, el objeto ms pequeo que puede verse ntidamente, se logra cuando usamos la longitud de onda ms pequea de la luz visible y un objetivo que tenga la mxima abertura numrica. En la prctica, el lmite de resolucin es cercano a los 0,2 m (bidem).

5. Cul es la relacin entre magnificacin y el dimetro del campo de vista?

La magnificacin es el grado de aumento con que se observa un objeto. El tamao del rea que puede ser vista mientras se observa a travs de unos binoculares se conoce como campo de visin. El campo lineal de visin se refiere al rea que se puede observar a 1,000 yardas (914 metros), y se expresa en pies. Un campo mayor

se reduce en un rea ms grande que se puede ver a travs del binocular (Garca, 2005). El campo de vista est en relacin a la magnificacin, con mayor magnificacin se ver un campo de menor amplitud, en general. Un campo amplio de visin es especialmente esencial en situaciones cuando el objeto que se observa est en movimiento, o cuando el observador es el que se mueve (bidem).

6. Cul es el dimetro en micrmetros del campo del ocular de bajo aumento del microscopio que usaron?

El dimetro del campo del ocular para el objetivo de 10X marcaba 23 en la reglilla micromtrica aproximadamente. Tomando en cuenta que el factor de conversin para 10X es 1, entonces se multiplica las 23 unidades por 1 y nos da como resultado 23 aproximadamente de dimetro.

7. Investiga la frmula de cmo se calcula el dimetro en micrmetros de tu campo de vista de alto aumento?

Para el clculo de dimetro de campo visual terico de cada objetivo se realiza mediante la siguiente frmula:

(Garca, 2005).

REFERENCIAS DOCUMENTALES

Lodish, H. et al. Biologa Celular y Molecular. Quinta Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Buenos Aires, Argentina. 2006.

Alberts, B. et al. Biologa Molecular de la Clula. Quinta Edicin. Ediciones Omega. Barcelona, Espaa. 2010

De Robertis, E. et al. Fundamentos de Biologa Celular y Molecular de De Robertis. Cuarta Edicin. Editorial El Atenco. Buenos Aires, Argentina. 2004.

Garca, V. Introduccin a la Microbiologa. Segunda Edicin. Editorial Euned. Mxico, D.F. 2005. Montoya, H. Microbiologa Bsica Para el Arte de la Salud y Afines. Segunda Edicin. Editorial Universidad de Antioqua. Colombia. 2008.

Martorelli, L. Evaluacin de la Incertidumbre en la Determinacin del Campo Visual de un Microscopio ptico Compuesto. Primera Edicin. Facultad de Ciencias Astronmicas y Geofsicas. Argentina. 2010.