Revista - Cientifica ULBRA 2008

REVISTA DE INICIAO CIENTFICA DA ULBRA 2008
Reitor Marcos Fernando Ziemer Vice-Reitor Valter Kuchenbecker Pr-Reitor de Administrao Ricardo Mller Pr-Reitor de Graduao Ricardo Prates Macedo Pr-Reitor Adjunto de Graduao Pedro Antonio Gonzalez Hernandez Pr-Reitor de Pesquisa e Ps-Graduao Erwin Francisco Tochtrop Jnior Pr-Reitor de Extenso e Assuntos Comunitrios Ricardo Willy Rieth Capelo geral Gerhard Grasel DIRETORIA DE PESQUISA Ndia T. Schrder (Dir.) Ana Maria Pujol Vieira dos Santos Juliana da Silva Lemos Danielle Feij de Sousa COMISSO EDITORIAL Ana Maria Pujol Vieira dos Santos Marilena Frana Sarmento Barata Ndia T. Schrder INDEXADOR LATINDEX EDITORA DA ULBRA Diretor Astomiro Romais Capa Juliano DallAgnol Projeto Grfico Isabel Kubaski Editorao Humberto Gustavo Schwert Coordenao de Impresso Grfica Edison Wolf Av. Farroupilha, 8001 - Prdio 29 - Sala 202 - Bairro So Jos CEP: 92425-900 - Canoas/RS Fone: (51) 3477.9118 - Fax: (51) 3477.9115 www.editoradaulbra.com.br E-mail: editora@ulbra.br
Imagem da capa: Calcosferitos - 20m Autoria: Centro de Microscopia Eletrnica e Microanlise da ULBRA
REVISTA DE INICIAO CIENTFICA DA ULBRA 2008
ndice
APRESENTAO .......................................................................................................................................7 CINCIAS AGRRIAS Avaliao hematolgica e bioqumica de filhotes de arara-azul (Anodorhynchus hyacinthinus) no Pantanal-MS ..........................................................................................................................................11
Tatiane Chao Furtado, Neiva Maria Robaldo Guedes, Daniel Thompsen Passos, Tania de Azevedo Weimer, Fabiana Silveira, Mariangela da Costa Allgayer
Cultivo de Arcobacter spp a partir de diferentes graus de leses de lcera gstrica em sunos .........................21
Felipe Incio Vogt, Roberto T esi Bernardi, Vanessa Daniele Mottin, Daniel Thompsen Passos, Vagner Ricardo Lunge, Srgio J. de Oliveira
Deteco de fatores de virulncia de Escherichia coli atravs da PCR em tempo real .....................................27
Fabrcio Alves Cerveira, Joana Bittencourt Mathias, Yara Silva Casanova, Beatriz Machado Terra Lopes, Fernanda Kieling Moreira Josiane Faganello, Ana Paula Wobeto, Priscilla Karina Vitor Koerich, Edmundo Kanan Marques, Andre Salvador Kazantzi Fonseca, Vagner Ricardo Lunge, Nilo Ikuta
CINCIAS BIOLGICAS A influncia da origem geogrfica de amostras de acerola (Malpighia glabra L.) em relao ao seu potencial genotxico e antigenotxico ..........................................................................................................................37
Vivian Franclia Silva Kahl, Merielen da Silva Sarmento, Roberta da Silva Nunes, Marc Franois Richter, Alexandre de Barros Falco Ferraz, Juliana da Silva
Caracterizao de redes de interao protica associadas ao desenvolvimento do melanoma ...........................47

Miriam Santos Borba, Kelly Cristina Leite da Gama, Jos Luiz Rybarczyk Filho, Mauro Antnio Alves Castro
Estudo de associao do polimorfismo 308G>A no Gene do fator de necrose tumoral-alfa (TNF-alfa) com a presena de retinopatia diabtica ..................................................................................................................53
Mariane Hanke Gonalves, Jssica Boaventura dos Santos, Lus Fernando Castagnino Sesti, Daisy Crispim, Ktia Gonalves dos Santos
Estudo do polimorfismo -31C/T do gene da interleucina 1-beta em pacientes disppticos funcionais................61

Tssia Flores Rech, Marlia Correa Osrio, Luciano Basso da Silva, Guilherme Becker Sander, Carlos Fernando Francesconi, Luiz Edmundo Mazzoleni, Daniel Simon
Identificao de remanescentes de roedores de um abrigo sob rocha do Nordeste do RS: implicaes paleoambientais .........................................................................................................................71
Paulo Ricardo de Oliveira Roth, Diego Marques Henriques Jung, Alexandre Uarth Christoff
CINCIAS DA SADE Evidncia de que os cidos -hidroxibutirato e acetoacetato no causam estresse oxidativo em crtex cerebral de ratos jovens in vitro ......................................................................................................................................85
Carolina Gonalves Fernandes, Estela Natacha Brandt Busanello, Alana Pimentel Moura, Ana Paula Beskow, Lucila de Bortoli da Silva, Moacir Wajner
Ligadura de ducto biliar como modelo de cirrose biliar secundria: Efeito da S-Nitroso-N-Acetilcistena (SNAC) ................................................................................................97
Bruna Borba Valiatti, Rafael Vercelino, Juliana Tieppo, Graziella Rodrigues, Cntia de David, Gabriela Freitas de Souza, Marcelo Ganzarolli de Oliveira, Norma Possa Marroni, Cludio Augusto Marroni
Papel da melatoninano estresse oxidativo do fgado e sangue de ratos cirrticos ............................................109

Darlan Pase da Rosa, Silvia Bona, Norma Anair Possa Marroni
Protocolo experimental de induo de proliferao neointimal vascular em modelo de artrias coronrias sunas.......................................................................................................................123
Juliana G. Ferst, Diovana Dallarosa, Themis Theisen, Fernanda Bakkar, Jos L. Guimares, Cristina Dreyer, Alexandre C. Zago, Alcides J. Zago, Paulo R. Centeno Rodrigues, Beatriz G. Kosachenco,Jos Casco Raudales
Relao entre a aptido fsica e o equilbrio com a capacidade funcional em um grupo de idosas ...................135
Diego Colvara, Raquel Dalagna, Ftima de Almeida Lobo, Cntia De La Rocha Freitas, Paulo Tadeu Campos Lopes, Andra Krger Gonalves, Adriane Ribeiro Teixeira, Ana Maria Pujol Vieira dos Santos
CINCIAS EXATAS E DA TERRA Anlise e reconhecimento de padres usando processamento de imagens e inteligncia artificial ....................145
lisson Bohnert Krug, Adriane Parraga, Fabiana Lorenzi, Mariano Nicolao, Analucia Schiaffino Morales
CINCIAS HUMANAS A Casa t cheia!: alguns significados da Praa Dona Mocinha.................................................................157

Luiz Alberto dos Santos Ferreira, Alexandre Kunsler, Jos Geraldo Soares Damico
A tecnologia da guerra nos relevos Neo-Assrios..........................................................................................169

Ricardo Silva Serres, Sandro Teixeira de Oliveira, Simone Silva da Silva, Jssica Santos de Lima, Katia Maria Paim Pozzer
Anlises comparativas dos acervos de dois stios arqueolgicos histricos e urbanos (Guaba e Porto Alegre/RS)........................................................................................................................181
Simone Ribeiro Boulhosa, Gislene Monticelli, ngela Maria Cappelletti, Priscila Pedroso Dias, Lisiane da Motta, Isabel Cristina Gomes, Jocyane Ricelly Baretta
Educao de Jovens e Adultos: investigao sobre os processos de fatorao numrica e algbrica .................189
Luiz Eduardo Cornelio, Ocsana Snia Danyluk, Carmen Hessel Peixoto Gomes, Magda Ins Moreira
Personalidade criminal: do ato de matar ao requinte de crueldade ................................................................197

Paula Canani, urea Adiles Machado dos Santos, Andrea Bernardes Lopes, Sheila Coitinho de Andrade, Carmem Aristimunha de Oliveira
CINCIAS SOCIAIS Capital social e desempenho institucional na Amrica Latina: Brasil, Uruguai e Chile ................................211
Cntia Viviane Ventura da Silva, Everton Santos
ENGENHARIAS Estudo da viabilidade da utilizao de carepa de ao na produo de concreto..............................................221

Gisele Lopes Pereira, Rafael Jesus Cossa, Fernanda Macedo Pereira
Sistema de monitoramento de sinais vitais para testes fsicos com transmisso de dados sem fios ..................231
Cristian Teixeira Daniel, Joo D. Klein, Valner J. Brusamarello
ndice de Autores ......................................................................................................................................241
Apresentao
A Revista de Iniciao Cientfica da ULBRA que apresentamos, revela o crescimento qualitativo dos trabalhos de iniciao cientfica selecionados no XIV Salo de Iniciao Cientfica da ULBRA de 2008 que se constitui num espao de convergncia e irradiao do saber. A iniciao cientfica um instrumento bsico de formao de recursos humanos qualificados que possibilita introduzir os alunos de graduao em contato direto com a atividade cientfica e tecnolgica e engaj-los na pesquisa. Nesta perspectiva, esta atividade caracteriza-se como instrumento de apoio terico e metodolgico execuo de uma pesquisa. Tambm garante, aos estudantes, uma maior viso do mundo permitindo com que imprevistos possam ser solucionados. Nesta atividade de pesquisa h estmulo para o desenvolvimento do esprito crtico e da criatividade. O Programa de Iniciao Cientfica e Tecnolgica (PROICT/ULBRA) foi aprovado com o objetivo de efetivar este processo consistente de capacitao de recursos humanos visando estabelecer mecanismos adequados de auxlio para a formao de uma nova mentalidade no aluno, desenvolvendo nele a atitude cientfica, tornando-o um indivduo preparado para ser o profissional diferenciado no mercado de trabalho. Alm do programa institucional prprio contamos com o auxlio do CNPq por meio do PIBIC que tem por finalidade o despertar da vocao cientfica e incentivar talentos potenciais entre estudantes de graduao universitria, mediante participao em projeto de pesquisa, orientados por pesquisador qualificado. O Salo de Iniciao Cientfica da ULBRA, mais do que a difuso de conhecimentos a ampliao das relaes da Universidade com a comunidade em que est inserida e aberta a outras Instituies de Ensino Superior, constituindo-se numa oportunidade nica para que o estudante possa perceber o sentido do fazer cientfico dentro da Universidade. Alm disso, uma oportunidade para estudantes participarem de eventos onde h trocas de experincias, de informaes entre os participantes e avano do conhecimento com a exposio dos resultados das pesquisas desenvolvidas por estes alunos.
Dr. Erwin Francisco Tochtrop Jnior

Pr-Reitor de Pesquisa e Ps-Graduao
Dra. Ndia Schrder

Diretora de Pesquisa
Cincias Agrrias
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Revista de Iniciao Cientfica da ULBRA - 2008
Avaliao hematolgica e bioqumica de filhotes de arara-azul (Anodorhynchus hyacinthinus) no Pantanal-MS
TATIANE CHAO FURTADO1 NEIVA MARIA ROBALDO GUEDES2 DANIEL THOMPSEN PASSOS3 TANIA DE AZEVEDO WEIMER3 FABIANA SILVEIRA4 MARIANGELA DA COSTA ALLGAYER5
RESUMO
Dados sobre a sanidade de espcies ameaadas pode ser uma importante contribuio para os programas de conservao. Este estudo avaliou a sanidade e estabeleceu os parmetros hematolgicos e bioqumicos sricos de filhotes de vida livre da arara-azul (Anodorhynchus hyacinthinus) do Pantanal MS, durante quatro anos consecutivos (2003 a 2006). O exame clnico evidenciou que os filhotes se apresentavam clinicamente normais. Foram observadas diferenas significativas no diferencial leucocitrio, glicose, protena total, triglicerdeos e fsforo nas fmeas. Aumentos no colesterol e hematcrito foram observados nas fmeas mais velhas, e a contagem de leuccitos totais e heterfilos foram mais elevadas nos filhotes mais jovens. Nos machos, os valores de cido rico foram mais elevados nos indivduos mais velhos. O conhecimento dos nveis sanguneos em filhotes clinicamente normais essencial para verificar as condies fisiolgicas e patolgicas das araras de vida livre, auxiliando na
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Acadmica do Curso de Medicina Veterinria ULBRA - Bolsista PROICT/ULBRA Professor do Curso de Biologia/UNIDERP; Presidente do Instituto Arara Azul Professor(a) do Curso de Medicina Veterinria/ULBRA
Acadmica do Curso de Biomedicina/ULBRA Professora-Orientadora do Curso de Medicina Veterinria/ ULBRA (angelallgayer@uol.com.br)
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avaliao dos efeitos das mudanas ambientais em sua sade e contribuindo para as estratgias de conservao em espcies ameaadas. Palavras-chave: arara-azul, Anodorhynchus hyacinthinus, filhotes, parmetros hematolgicos e bioqumicos, estratgias de conservao, sanidade.
ABSTRACT
Knowledge of the health status of endangered species can make an important contribution to preservation programs. This study evaluated the health status and established hematological and serum biochemical parameters for free-living nestlings of the Hyacinth macaw (Anodorhynchus hyacinthinus) from the Brazilian Pantanal, for four consecutive years (2003 - 2006). Physical examinations indicated that all the birds were in good health. Significantly higher levels of total and differential white blood cells, glucose, total protein, triglycerides, and phosphorus were observed in females. In females, higher cholesterol levels and packed-cell volumes were observed in older birds, and total white blood cell and heterophil counts were higher in young animals. In males, uric-acid levels were higher in older individuals. Therefore, knowledge of blood levels in normal individuals is essential in order to assess the physiological and pathological condition of wild macaws, to assess the effects of environmental changes on their health, and to contribute to conservation strategies of this endangered species. Key words: Anodorhynchus hyacinthinus, nestlings, biochemical and hematological parameters, conservation strategies, health status. e manejo das espcies selvagens do Pantanal (SEIXAS e MOURO, 2002). Desde 1990, o Projeto Arara Azul tem contribudo para o conhecimento sobre manejo e conservao desta espcie descrevendo os aspectos bsicos da biologia como: nutrio, reproduo, habitat, comportamento, condies dos filhotes e ameaas que esto reduzindo a populao da arara-azul no Pantanal (GUEDES et al., 2006; PIZO et al., 2008). Contudo, ainda so poucos os conhecimentos sobre o estado sanitrio da arara-azul no seu ambiente natural. Parmetros hematolgicos e bioqumicos so ferramentas complementares para o diagnstico de doenas e monitoramento das condies sanitrias dos animais (KARESH et al., 1997; LANZAROT et al., 2001). Tabelas com referncias destes parmetros
INTRODUO
A arara-azul (Anodorhynchus hyacinthinus) a maior espcie de psitacdeo, e atualmente est na lista das aves ameaadas de extino, devido ao rpido declnio de sua populao como resultado do trfico de animais silvestres e deteriorao ou perda de seu habitat (GALLETI et al., 2002). A maior populao de vida livre da arara-azul se encontra no Pantanal do Mato Grosso do Sul (GUEDES, 2004), regio que tem sofrido intensos processos de modificao ou destruio devido presso da populao humana, criao de gado e desmatamentos (GUEDES e HARPER, 1995). Esta degradao ambiental tem contribudo para a implantao de programas que visam conservao
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para aves de vida livre so raros devido dificuldade de obteno de amostras (MASELLO e QUILLFELDT, 2004). Na literatura encontram-se valores hematolgicos e bioqumicos para psitacdeos mantidos em cativeiro (ROSENTHAL et al., 2005; VALLE et al., 2008), sendo escassos em psitacdeos de vida livre (MASELLO e QUILLFELDT, 2004; DEEM et al., 2005), e nenhuma informao para a arara-azul de vida livre foi realizada. O presente trabalho estabelece valores hematolgicos e bioqumicos sricos em filhotes de arara-azul em ambiente natural.
identificao eletrnica foi implantada no msculo peitoral. Os filhotes foram devolvidos cuidadosamente ao ninho, e monitorados semanalmente at abandonarem o ninho. O processamento das amostras de sangue foi inicialmente realizado no laboratrio da sede do Instituto Arara Azul. As anlises hematolgicas foram processadas at 6 horas aps a colheita. O volume globular (VG) foi determinado por centrifugao em microcentrfuga (5 minutos; 10.000 G). Os leuccitos totais foram contados em cmara de Neubauer (NATT e HERRICK, 1952). Esfregaos de sangue foram fixados em metanol 99% e corados com Giemsa, sendo posteriormente enviados para o laboratrio de Patologia Clnica do Hospital Veterinrio da ULBRA. Os esfregaos foram examinados em microscpio ptico (aumento 1000 x) para a realizao do diferencial leucocitrio (FUDGE, 2000a). Alquotas de soro foram armazenadas por 30 dias em temperatura de -20C antes da anlise. Aps descongelamento do soro, foram realizados os seguintes parmetros bioqumicos: creatina kinase (CK), aspartato aminotransferase (AST), gamma glutamyltransferase (GGT), amilase, lipase, fosfatase alcalina (FA), lactato desidrogenase (LDH), colesterol, triglicerdeos, protena total (PT), glicose, cido rico, uria, magnsio e fsforo. Todos os bioqumicos realizados esto de acordo com os recomendados por Clubb et al. (1991) para avaliao da sanidade das aves. Para anlise estatstica foi utilizado o programa SPSS 10.0.5 (SPSS Inc., Chicago, Illinois, USA). Comparao entre machos e fmeas e entre idade dos grupos (25 a 80 e 81 a 107 dias de idade) foram realizadas usando teste t de Student. Os intervalos de idade foram baseados na informao de que os pesos mximos dos filhotes so obtidos em torno de
MATERIAL E MTODOS
Este estudo foi realizado no Pantanal sub-regio de Miranda (1951-1958S; 5617-5624W), no Mato grosso do Sul. Foi aprovado pelo Comit de tica da Universidade Luterana do Brasil. Noventa e um filhotes de arara-azul de vida livre foram examinados no ms de dezembro, durante quatro estaes reprodutivas (2003 a 2006). Os ninhos nas rvores foram acessados utilizando equipamento para rapel, e as aves foram retiradas do ninho. Cada ave foi clinicamente examinada conforme descrito por Samour (2000). Aps, os filhotes foram pesados e a amostra de sangue (5 mL) foi colhida da veia da asa. Os procedimentos foram realizados pelo mesmo veterinrio (M. C. Allgayer), para garantir o controle da qualidade das amostras (BOWERMAN et al., 2000). Logo aps a colheita, 2 mL de sangue foram transferidos para um tubo com anticoagulante (BD Vacutainer K3. EDTA 7,5% Solution, 0,068 mL, 5,1 mg), e 3 mL foram colocados em tubos sem anticoagulante. Dois esfregaos de sangue de cada filhote foram confeccionados e secos ao ar. Depois da colheita todos os filhotes foram identificados com anilha de ao inox aberta e uma
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80 dias de idade. Depois disto, os filhotes perdem 20% do seu peso antes de voarem, este um evento fisiolgico crtico que pode influenciar os parmetros hematolgicos e bioqumicos (LANZAROT et al., 2005). O peso dos filhotes nas diferentes idades foi comparado estatisticamente pelo teste ANOVA com tabelas disponveis na literatura. As amostras foram checadas para distribuio normal. Diferenas foram consideradas significativas quando P<0.05.
nos esfregaos sanguneos em ambos os sexos. Discretas anisocitose e policromasia foram observadas na morfologia dos eritrcitos. Os valores dos parmetros bioqumicos esto descritos na Tabela 2. Os valores de glicose (P=0.04), triglicerdeos (P=0.02), protena total (P=0.02), e fsforo (P=0.01) foram significativamente mais elevados em fmeas. Os valores da enzima amilase (P=0.02) foram mais elevados nas fmeas jovens e nveis mais elevados de colesterol (P=0.02) foram observados em filhotes mais velhos. Nos machos os nveis de cido rico (P=0.03) foram significativamente mais altos nos filhotes mais velhos.
RESULTADOS
O exame fsico evidenciou que todas as aves estavam em boas condies de sade. Anormalidades no foram detectadas durante o perodo de observao (ecloso vo) em torno de 110 dias (GUEDES e HARPER, 1995). Aps este perodo todos os filhotes voaram com sucesso. A sexagem por DNA identificou 37 machos e 54 fmeas. A idade dos filhotes estudados variou de 25 a 107 dias, sendo estimadas de acordo com o perodo do abandono do ninho. O peso obtido dos filhotes variou de 734 a 1561g, com uma mdia de 1275,6g. No foram observadas diferenas entre machos e fmeas, e este resultado esto de acordo com os dados de crescimento publicados por Abramson (1995). Os parmetros hematolgicos (mdia DP) dos filhotes esto listados na Tabela 1. Nveis significativamente mais elevados de leuccitos totais (P=0.01) e heterfilos (P=0.01) foram observados em fmeas. Os leuccitos totais (P=0.04) e heterfilos (P=0.02) foram tambm significativamente superiores em fmeas jovens, e valores de VG (P=0.04) mais elevados foram observados em fmeas mais velhas. No foram observadas diferenas nos parmetros hematolgicos em machos de diferentes idades. Basfilos no foram identificados
DISCUSSO
O conhecimento do estado sanitrio de espcies ameaadas importante no estabelecimento de estratgias nos programas de conservao. Informaes sobre os parmetros hematolgicos da A. hyacinthinus em ambiente natural no esto disponveis na literatura, sendo este o primeiro estudo sobre patologia clnica em filhotes de araraazul de vida livre. Os valores de referncias devem ser baseados em animais clinicamente saudveis, entretanto, Weber et al. (2002) relatam dificuldade de determinar as condies de sade em animais de vida livre, todas as aves aqui coletadas voaram com sucesso no perodo esperado, entre 105-110 dias de idade, (GUEDES e HARPER, 1995) sugerindo seu estado saudvel. Este perodo foi estimado pelo Projeto Arara- Azul, atravs da observao anual de filhotes, desde ovo at o abandono do ninho, nos ltimos 19 anos. Segundo Bounous et al. (2000), determinaes hematolgicas em espcies de vida livre podem
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ser influenciadas pelo estresse fisiolgico durante a captura e conteno. Neste estudo, os filhotes foram manejados cuidadosamente para reduzir o tempo de conteno, entretanto embora com todos os cuidados, no podemos excluir a possibilidade da influncia do estresse nos presentes resultados. O valor mdio do VG obtido foi similar aos valores relatados para araras jovens do gnero Ara sp. mantidas em cativeiro (CLUBB et al., 1991) e de vida livre (KARESH et al., 1997). Segundo Lanzarot et al. (2005), valores de VG so baixos em aves jovens, este achado pode ser devido a adaptao para o vo, onde a necessidade de oxignio intensamente aumentada. Neste estudo, o valor de VG foi menor nas fmeas jovens, mas diferenas no foram observadas nos machos em relao idade. Variabilidade no tamanho e cor normal nos eritrcitos perifricos em aves. Discreta alterao foi observada na morfologia eritrocitria dos filhotes de arara-azul neste estudo. Fudge (2000a) relata que discretas policromasia e anisocitose so achados normais em aves. A contagem dos leuccitos totais foi maior nas fmeas do que nos machos, e mais elevada nas fmeas mais jovens. Achados similares no foram relatados em outras aves, podendo ser uma caracterstica desta espcie. Segundo Padilla et al. (2003), a contagem total e diferencial de leuccitos varia muito entre as espcies de aves selvagens, provavelmente refletindo uma variabilidade entre espcies e diferenas nos mtodos de captura, conteno e de colheita de sangue. Um nmero elevado de leuccitos totais pode ser devido: aos altos nveis de estresse, interaes sociais, captura, taxa de crescimento nos animais jovens (MARCO et al., 1997). Heterfilos foram os leuccitos em maior percentual nestas araras, isto j foi previamente descrito em
Amazona aestiva de vida livre (DEEM et al., 2005), e em Amazona guildingii (DEEM et al., 2008) e Ara sp. (HARR et al., 2005) em cativeiro. Os valores de heterfilos e eosinfilos foram similares aos j relatados em araras jovens e adultas (CLUBB et al., 1991; HARR et al., 2005). O nmero de linfcitos, observado neste estudo, no diferiram dos publicados para Ara sp. (HARR et al., 2005), mas foram inferiores aos previamente descritos para Ara macao (KARESH et al., 1997). Estas diferenas podem ser atribudas a idade, estresse, estimulao imunolgica ou particularidades da espcie (FUDGE, 2000b). Montali (1988) relata que a exata funo dos basfilos em aves ainda desconhecida, mas eles participam na fase inicial da resposta inflamatria aguda. Neste estudo, nenhum basfilo foi identificado, sugerindo a ausncia de doenas inflamatrias agudas, confirmando a higidez dos filhotes. Os moncitos encontrados no diferiram dos valores j descritos para psitacdeos (HARR et al., 2005; FOLDENAUER et al., 2007), mas foram inferiores a os publicados por Karesh et al. (1997) para araras jovens. A bioqumica srica tem sido utilizada em aves para investigar mudanas no estado nutricional (ALONSO-ALVAREZ e FERRER, 2001), perodo reprodutivo (MERINO e BARBOSA, 1997), condies: corporal (MASELLO e QUILLFELDT, 2004), fsica (VILLEGAS et al., 2002) e sanitria em filhotes (KARESH et al., 1997). A PT em aves possui equivale aproximadamente a metade das concentraes descritas em mamferos. Neste estudo os valores de PT foram inferiores aos descritos para psitacdeos mais velhos (FUDGE, 2000b). Karesch et al. (1997) analisando soro de Ara macao tambm observou que os valores de PT foram inferiores em aves jovens quando comparados com sub-adultos. Esta diferena pode ocorrer devido ao rpido crescimento e aumento da massa muscular
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do filhote, ou devido deficincia protica da dieta durante esta fase. Joyner et al. (1992) observaram um aumento nos nveis sricos de PT relacionados com a idade em psitacdeos de vida livre, Lanzarot et al. (2005) relatam que o aumento est relacionado com as concentraes de anticorpos. Os valores de glicose observados em filhotes de arara-azul foram menores do que os obtidos em psitacdeos (KARESH et al., 1997; FUDGE, 2000b). Esta diferena pode ser atribuda como sendo caracterstica desta espcie ou devido diferenas na metodologia utilizada para mensurao deste bioqumico. Os nveis sricos de colesterol foram similares aos descritos para espcies de psitacdeos (FUDGE, 2000b). Concentraes de triglicerdeos foram superiores em fmeas, como j relatado em filhotes de Ciconia nigra de vida livre (LANZAROT et al., 2005). Harr (2002) relata que as concentraes de triglicerdeos variam com o clima, influencia hormonal, idade e dieta. As concentraes de cido rico nos filhotes de araraazul foram semelhantes s descritas em outras espcies de psitacdeos, mas a concentrao de uria foi mais elevada do que os valores descritos para vrias espcies de psitacdeos (ALTMAN et al., 1997; VALLE et al., 2008). Em nosso estudo, o cido rico foi mais elevado nos machos mais velhos. Estes resultados podem ser associados com a protena da dieta, quantidade de alimento e gua consumidos, requerimento de aminocidos para sntese protica e excreo renal (COSTA et al., 1993). A uria normalmente tem baixos nveis sricos em aves, aumentando nos animais desidratados. A avaliao conjunta de uria e cido rico utilizada para diferenciar entre desidratao e doena renal (HARR, 2002). O nvel do fsforo srico ficou dentro dos intervalos relatados em filhotes de Ara macao, mas as concentraes de magnsio foram inferiores aos observados nesta espcie (KARESH et al., 1997).
Estas diferenas podem ser atribudas conservao das amostras e/ou variaes nas metodologias laboratoriais utilizadas (BOUNOUS et al., 2000). A atividade de CK e LDH nos filhotes de araraazul ficou entre os intervalos publicados por Polo et al. (1998) e Fudge (2000b). Entretanto, os nveis de AST e GGT foram inferiores e superiores concomitantemente, do que os descritos por Clubb et al. (1991) em araras jovens. A GGT provavelmente uma enzima especfica do epitlio renal e biliar das aves, mas sua utilizao no diagnstico clnico ainda no foi adequadamente avaliada (HARR, 2002). A atividade da AST considerada muito sensvel, mas no especfica para indicar doena hepatocelular, sendo freqentemente solicitada pareada com a enzima CK, msculo especfica, para diferenciar entre leso heptica e muscular. Como todas as aves analisadas apresentaram-se clinicamente saudveis, os baixos nveis de atividade srica da AST so provavelmente devido s diferenas na metodologia ou normais para esta espcie. Os nveis FA neste estudo foram mais elevados do que os descritos em aves adultas de outras espcies (VALLE et al., 2008). A FA est presente em vrios tecidos, em particular no fgado e ossos, e est associado com processos osteoblsticos (LUMEIJ, 1997). O aumento srico da FA observado nos filhotes de arara-azul est associado com o aumento da atividade osteoblstica nas aves jovens. Os valores para as enzimas amilase e lipase so similares aos descritos para psitacdeos (ALTMAN et al., 1997; FUDGE, 2000b). A razo para altos nveis de amilase observadas em fmeas jovens desconhecida, sendo que nenhuma indicao de patologia foi observada. Nos mamferos, aumento nos valores sricos de amilase est associado com doena pancretica, entretanto, estudos sobre esta enzima so limitados nas aves (DEEM et al., 2005).
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CONSIDERAES FINAIS
A avaliao dos parmetros hematolgicos e bioqumicos nos filhotes de arara-azul em seu ambiente natural gerou informaes que podero ser usadas
para a interpretao de resultados laboratoriais em futuros estudos para a conservao desta espcie ameaada, para avaliar a ocorrncia de alteraes na sade desta populao em ambientes contaminados com diferentes agentes xenobiticos.
Tabela 1 - Parmetros hematolgicos (mdia DP) em filhotes de arara-azul de vida livre de acordo com sexo e idade.
MACHOS PARMETROS VG (%) LEUCCITOS TOTAIS (X109/L) HETERFILOS (X109/L) HETERFILOS (%) LINFCITOS (X109/L) LINFCITOS (%) MONCITOS (X109/L) MONCITOS (%) EOSINFILOS (X10 /L) EOSINFILOS (%)
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FMEAS TOTAL 35,6 5,2 (9) 9,5 4,6 (23)A 6,8 3,7 (23)A 70,1 8,7 (29) 2,7 1,3 (23) 29,1 8,5 (29) 0,1 0,03 (23) 1,6 0,8 (29) 0,2 0,2 (23) 1,3 0,6 (29) 25- 80
DIAS DE IDADE
25- 80
DIAS DE IDADE
81- 107
DIAS DE IDADE
81- 107
DIAS DE IDADE
TOTAL
D
35,2 3,9 (5) 10,8 4,5 (11) 7,8 3,4 (11) 70,8 8,1 (15) 2,8 1,4 (11) 28,0 7,5 (15) 0,1 0,02 (11) 1,4 0,5 (15) 0,1 0,03 (11) 1,0 0,0 (15)
36,2 7,2 (4) 8,6 4,7 (12) 6,1 4,1 (12) 69,6 9,9 (14) 2,7 1,4 (12) 29,9 10,0 (14) 2,0 1,4 (12) 2,0 1,4 (14) 0,4 0,1 (12) 1,3 0,5 (14)
26,7 5,8 (4)C 20,0 8,8 (10)C 15,6 6,5 (10)C 74,7 9,0 (19) 4,2 2,4 (10) 24,6 9,4 (19) 0,5 0,02 (10) 1,4 0,5 (19) 0,2 0,0 (10) 1,0 0,0 (19)
36,6 2,8 (5) 10,3 2,9 (10)D 7,4 2,7 (10)D 65,4 13,7 (12) 3,1 0,8 (10) 34,3 13,9 (12) 0,2 0,04 (10) 1,3 0,5 (12) 0,1 0,0 (10) 1,0 0,0 (12)
33,2 6,6 (9) 15,2 8,1 (20)B 11,7 6,5 (20)B 71,5 11,7 (31) 3,7 1,9 (20) 28,0 11,9 (31) 0,3 0,2 (20) 1,3 0,5 (31) 0,16 0,09 (20) 1,0 0,0 (31)
Nmero entre parnteses corresponde ao tamanho da amostra; A e B: diferenas signicativas entre sexos; C e D: diferenas signicativas entre idades.
Tabela 2 - Parmetros bioqumicos sricos (mdia DP) em filhotes de arara-azul de vida livre de acordo com sexo e idade.
MACHOS PARMETROS CK (U/L) AST (U/L) FA (U/L) GGT (U/L) COLESTEROL (MMOL/L) MAGNSIO (MMOL/L) CIDO RICO (MMOL/L) URIA (MMOL/L) GLICOSE (MMOL/L) AMILASE (U/L) PROTENA TOTAL (G/L) TRIGLICERDEOS (MOL/L) LIPASE (U/L) LDH (U/L) FSFORO (MMOL/L) 25- 80
DIAS DE IDADE
FMEAS 25- 80
DIAS DE IDADE
81- 107
DIAS DE IDADE
81- 107
DIAS DE IDADE
TOTAL 175,9170,2 (32) 32,817,7 (31) 451,3199,1 (36) 7,24,6 (23) 3,10,9 (32) 1,00,3 (12) 0,20,1 (36) 4,21,2 (45) 10,92,3 (26)B 389,9121,6 (31) 23,66,0 (25)B 1,20,4 (32)B 31,618,8 (18) 166,387,4 (13) 2,71,4 (18)B
C
217,5201,7 (11) 34,520,5 (11) 554,1164,5 (12) 8,2 3,3 (07) 3,10,9 (15) 1,0 0,3 (06) 0,10,1 (12)C 3,91,2 (17) 9,91,6 (12) 364,970,3 (13) 21,42,5 (08) 1,10,2 (13) 35,331,6 (05) 209,779,6 (05) 1,40,5 (07)
214,8173,2 (14) 39,724,2 (13) 525,8157,5 (13) 5,63,4 (10) 3,01,2 (09) 1,3 0,5 (06) 0,31,1 (12)D 3,70,9 (14) 9,41,3 (10) 368,187,3 (11) 18,65,0 (12) 0,90,3 (08) 46,745,4 (02) 183,557,5 (06) 1,80,9 (09)
221,9183,6 (25) 37,422,7 (24) 525,3144,8 (25) 6,73,6 (17) 3,01,0 (24) 1,10,4 (12) 0,20,1 (24) 3,91,0 (31) 9,71,2 (22)A 363,778,2 (24) 19,84,4 (20)
A
147,6172,0 (21) 32,015,3 (19) 416,7127,9 (21) 7,84,8 (15) 2,80,5 (19)C 1,00,1 (03) 0,20,1 (21) 4,31,3 (28) 11,42,6 (15) 429,7139,4 (18)C 22,55,3 (13) 1,30,3 (19) 27,812,9 (10) 139,956,1 (09) 2,91,2 (08)
229,9160,6 (11) 34,121,6 (12) 499,7267,2 (15) 6,44,4 (08) 3,61,0 (13)D 1,0 0,3 (09) 0,20,1 (15) 4,01,2 (17) 10,31,6 (11) 334,861,6 (13)D 24,96,6 (12) 1,10,4 (13) 36,424,5 (08) 225,7123,9 (04) 2,61,5 (10)
1,00,3 (21)A 35,631,0 (07) 195,466,1 (11) 1,70,8 (16)A

A B
Nmero entre parnteses corresponde ao tamanho da amostra; signicativas entre idades.
e : diferenas signicativas entre sexos;
e D: diferenas
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Cultivo de Arcobacter spp a partir de Diferentes Graus de Leses de lcera Gstrica em Sunos
FELIPE INCIO VOGT 1 ROBERTO TESI BERNARDI 2 VANESSA DANIELE MOTTIN 3 DANIEL THOMPSEN PASSOS 4 VAGNER RICARDO LUNGE 4 SRGIO J. DE OLIVEIRA 5
RESUMO
Foram examinados 20.792 estmagos de sunos abatidos em frigorfico no Rio Grande do Sul. Leses na regio esofgica foram classificadas, desde as mais leves, de grau 1 at as mais graves, lceras gstricas de grau 4, obtendo-se 18.657 (89,7 %) estmagos com algum grau de leso, sendo 12.148 (58,4%) de grau 1, 5.145 (24,7%) de grau 2, 1.004 (4,8%) de grau 3 e 368 (1,8%) de grau 4, comprovando a freqncia com que ocorrem lceras gstricas em sunos. Foram realizados exames bacteriolgicos para cultivo de Arcobacter spp em amostras aleatrias de 148 estmagos, sendo 31 de cada grau de leso e 24 amostras de estmagos sem leso. Obteve-se isolamento de 124 amostras de Arcobacter spp, classificadas por PCR como Arcobacter cryaerophilus , 98 (79,03%) e Arcobacter butzleri, 26 (20, 97%). Estes foram os primeiros cultivos de Arcobacter spp de estmagos de sunos no Brasil. Palavras-chave: Arcobacter spp, estmagos de sunos, lceras gstricas
1
Aluno do Curso de Medicina Veterinria/ULBRA. Bosista PROICT/ ULBRA Canoas, RS Aluno do Curso de Medicina Veterinria/ULBRA, graduado 2008/1 Medica Veterinria MSc, Residente do Laboratrio de Bac-
teriologia do Hospital Veterinrio/ULBRA

4 5
Professor do Curso de Medicina Veterinria/ULBRA Professor- Orientador do Curso de Medicina Veterinria/ ULBRA (serjo@terra.com.br)
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ABSTRACT
Stomachs of slaughtered pigs (20,792) were examined at an abattoir in Rio Grande do Sul State, Brazil. Lesions in the pars oesophagea were selected and scored from 1 to 4, respectively from cases of paracheratosis to gastric ulcers, resulting 18,657 (89.7%) of stomachs presenting some degree of lesions, being 12,148 (58.4%) score 1, 5,145 (24.7%) score 2, 1.004 (4.8%) score 3 and 368 (1.8%) score 4, showing the great importance of gastric ulcers in pigs. Bacteriological examination for isolation of Arcobacter spp were performed on 148 random samples, 31 from each score of lesions and more 24 stomach samples without lesions. Arcobacter spp were isolated from 124 samples and typed by genotypic tests as Arcobacter cryaerophilus , 98 (79.03%) and Arcobacter butzleri, 26 (20.97%). This is the first report of the detection of Arcobacter spp in stomachs of pigs in Brazil. Key words: Arcobacter spp, stomachs of pigs, gastric ulcers
INTRODUO
As lceras gstricas em sunos afetam principalmente a regio denominada pars oesophagia (quadriltero esofgico) a qual no possui glndulas secretrias e apresenta maior sensibilidade do que a regio glandular. As leses no estmago so classificadas em vrios graus (SOBESTIANSKY, MATOS e SOUZA, 2001): grau 1, quando ocorre paraqueratose, grau 2 paraqueratose e ulcerao leve, grau 3 paraqueratose e ulcerao at 66% e grau 4 quando h ulcerao acima de 66% da regio (Figuras 1-4). Os graus 3 e 4 so capazes de provocar morte sbita em sunos nas granjas, enquanto leses mais leves (1 e 2) provocam perdas no ganho de peso e refugagem. A lcera gstrica (UG) mais freqente em sunos criados intensivamente em confinamento e uma das principais causas de morte sbita e expordica de reprodutores (SOBESTIANSKY e BARCELLOS, 2007). As causas das leses estomacais so mltiplas, ligadas a fatores ambientais, de manejo, nutricionais e estressantes, entre outras, conforme reviso de Almeida et al., (2006). Sunos que consomem rao com granulometria fina (abaixo de 500 m) esto mais propensos a apresentar leses na pars oesophagea. Por outro lado, a interrupo da alimentao (o jejum) tem sido causa de leses
ulcerativas (FRIENDSHIP , 1999). Fatores genticos tambm predispem para ulcerao na regio esofgica do estmago em sunos (SOBESTIANSKY et al., 1999). Em seres humanos, foi comprovado que infeco por Helicobacter pylori est relacionada com a ocorrncia de lcera gstrica (QUEIROZ, ROCHA e MENDES 1996), no entanto H. pylori at o momento no foi apontado como agente etiolgico de lceras gstricas em sunos, o mesmo ocorrendo com outras bactrias. Ainda no est definido se o circovirus sunos (PCV2) tem ao direta na formao de lceras gstricas, embora muitos animais com sinais de definhamento apresentam tambm lcera gastro-esofgica (SOBESTIANSKY e BARCELLOS, 2007) Atravs desta pesquisa procurou-se verificar os graus de leses observadas em sunos abatidos em frigorfico e detectar a presena de bactrias do gnero Arcobacter. Estas bactrias foram isoladas de fetos sunos abortados no Rio Grande do Sul (OLIVEIRA et al. 1997)), de carne de frangos e de sunos (OLIVEIRA et al.2001; 2003), e provocam enterite em seres humanos (LAUWERS, BREYNAERT, VAN ETTERIJK, 1996; FERNANDEZ, KRAUSE e VILLANUEVA, 2004; VANDENBERG et al., 2004). Arcobacter
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spp foram detectadas por PCR apenas em uma pesquisa nos Estados Unidos, em estmagos de sunos (SUAREZ, WESLEY e LARSON 1997).
Figura 1 - Leses de grau 1 em estmago de Suno (paraqueratose).
Figura 4 - lcera gstrica com hemorragia (grau 4).
MATERIAL E MTODOS
Foi examinada a pars esophagea de estmagos de sunos abatidos em um frigorfico no Rio Grande do Sul, classificando leses nos diferentes graus, desde zero (sem leso) a 4 (paraqueratose e ulcerao acima de 66%). Em torno de 600 estmagos eram examinados diriamente, anotando-se graus para as leses. Era colhido aleatriamente um fragmento de leso respectivamente de grau 1, grau 2, grau 3 e grau 4, no total de 4 amostras de estmagos por dia, durante 40 dias, para processamento visando cultivo e realizao de testes moleculares. Alm de estmagos com leses, foram colhidas tambm amostras da regio esofgica de estmagos sem leso. Teve-se o cuidado de trocar de luvas e lminas de bisturis para a colheita de cada amostra. As amostras foram inoculadas em meio de cultura lquido de EMJH em tubos, conforme Oliveira et al. (2003), ainda no Frigorfico, e os tubos foram transportados no perodo de uma hora, ao laboratrio. No laboratrio os tubos eram
Figura 2 - Leses de grau 2 (paraqueratose e Sulcos na regio esofagiana).
Figura 3 - Leses de grau 3 (diminui a rea amarelada e aumentam os sulcos).
23
incubados a 25oC at 5 dias e as culturas eram examinadas em microscpio em campo escuro para que fossem observados microorganismos com a forma e motilidade de Arcobacter spp. Os cultivos em meio lquido foram ento filtrados atravs de membrana de celulose acetato de 0,45 m sobre a superfcie de meio slido de Agar Sangue pelo mtodo de Steele e MCDermott, (1984), sendo ento incubados 25 - 30oC em aerobiose por 48 horas, para obteno de cultivo puro. Colnias foram repicadas para tubos com meio de cultura lquido de BHI (Difco) e tambm incubadas como para as placas. Aps a confirmao da presena de bactrias com morfologia tpica de Arcobacter em cultivo puro atravs do exame microscpico em campo escuro, foram colhidas alquotas em tubos Eppendorf e congeladas, aguardando a realizao de testes moleculares. Para a realizao de testes moleculares o DNA foi extrado de acordo com o protocolo de Boom, Sol e Salimans (1990), como segue: 100 L de cultura foram lisados em 900 L de buffer (soluo tampo) GuSCN, o cido nuclico foi aderido a partculas de slica e lavado duas vezes com o buffer uma vez com soluo de etanol a 70% e uma com acetona. O cido nuclico foi ento liberado das partculas de slica em 50 L de gua, sendo mantido a 20oC. Foi amplificado um fragmento de 470 pares de bases (pb) do gene 16S do RNA ribossomal do genoma de bactrias do gnero Arco-
bacter, utilizando-se a tcnica de PCR com primers ARC3F e ARC4R, aps a extrao do DNA pela tcnica de slica descrita por Boom, Sol e Salimans (1990). A diferenciao entre as espcies Arcobacter cryaerophilus e Arcobacter butzleri foi realizada pela clivagem do fragmento amplificado, utilizando-se a enzima de restrio Ssp1, procurando-se obter a formao dos fragmentos 420 e 50 pb para A. butzleri e a presena do fragmento intacto de 470 pb para A. cryaerophilus. Os produtos da amplificao foram visualizados por eletroforese em gel de poliacrilamida e corados com nitrato de prata (SANGUINETTI, DIAS-NETO e SIMPSON, 1994).
RESULTADOS E DISCUSSO
Foram examinados macroscopicamente 20.792 estmagos de sunos, de 80 lotes, classificandose as leses de lcera gstrica como 12.148 grau 1 (58,4%), 5.145 grau 2 (24,7%), 1.004 grau 3 (4,8%) e 368 grau 4 (1,8%), sendo 2.135 sem leses (10,3%). Portanto, 18.657 (89,7%) apresentaram algum grau de leso. Entre 148 amostras de estmagos, foram obtidos isolamentos de Arcobacter de 124 materiais, perfazendo 83,72%. No houve diferena entre isolamento de Arcobacter spp de amostras com leses em relao s amostras sem leso. Os resultados encontram-se na Tabela 1.
Tabela 1 - Resultados dos exames bacteriolgicos e moleculares realizados em amostras de estmagos de sunos
GRAUS DE LESES 0* 1 2 3 4 TOTAIS * Estmagos sem leso MATERIAIS EXAMINADOS 24 31 31 31 31 148 CULTIVO DE Arcobacter 21 (87,5%) 26 (83,87%) 27 (87,10%) 26 (83,87%) 24 (77,42%) 124 (83,72%) PCR Arcobacter 21 26 27 26 24 124 PCR A.cryaerophilus 18 (85,70%) 21 (80,76%) 19 (70,37%) 21 (80,76%) 19 (79,16%) 98 (79.03%) PCR A. butzleri 3 (14,30%) 5 (19,24%) 8 (29,63%) 5 (19,24%) 5 (20,84%) 26 (20,97%)
24
No presente trabalho, encontrou-se 89,7% de amostras de estmagos com diferentes graus de leso na regio esofgica e apenas 10,3% sem leso. A quantidade de estmagos examinados foi acima do que consta em relatos de outros autores (MELNICHOUK, 2002; ALMEIDA et al., 2006), tanto nacionais quanto estrangeiros, havendo predominncia de leses menos graves do tipo 1 e 2, respectivamente 12.148 (58,4%) e 5.145 (24,7%) como seria esperado, pois os animais chegaram aparentemente sadios ao abate. Sunos com leses de grau 4 apresentariam sintomas de lcera gstrica nas granjas e no teriam sido enviados ao matadouro. Atravs desta pesquisa foi detectado Arcobacter spp nos diversos graus de leso e tambm em estmagos sem leso. Estas constataes no so suficientes para deduzir sobre a importncia das bactrias em casos de lcera gstrica, mas constituemse no primeiro relato em nosso pas sobre a presena de Arcobacter spp em estmagos de sunos. At o momento, apenas Suarez, Wesley e Larson (1997) nos Estados Unidos haviam investigado sobre a presena das bactrias em estmagos de sunos. Estes autores detectaram por PCR o predomnio de A. butzleri em 77% dos materiais. No presente trabalho verificou-se maior porcentagem de A. cryaerophilus (79,03%) em sunos abatidos no Brasil. Em sunos, ao contrrio do que ocorre em seres humanos, as lceras esofagogstricas no tm sido atribudas a causas infecciosas (MELNICHOUK, 2002). A presena de Arcobacter spp na mucosa do estmago de sunos sugestiva de que devem ser investigados os possveis efeitos no mecanismo das lceras gstricas, talvez pela realizao de exames histopatolgicos e determinao do local em que estejam alojados os microorganismos.
CONCLUSES
Foi observada elevada porcentagem de estmagos com leses, incluindo os quatro graus com formao de lcera gstrica, em sunos de diferentes lotes com idade de abate, demonstrando a importncia desta patologia. Atravs do presente trabalho conclui-se que Arcobacter spp estavam presentes em elevada porcentagem de estmagos de sunos abatidos em um frigorfico, com e sem leses de lcera gstrica. Houve maior porcentagem de Arcobacter cryaerophillus atravs de cultivo e identificao por PCR. Estas so as primeiras observaes sobre a presena de Arcobacter spp em estmagos de sunos no Brasil.
AGRADECIMENTOS
Os autores agradecem a Jane Mendez Brasil e Diego Hepp, respectivamente do Laboratrio de Bacteriologia do Hospital Veterinrio e do Laboratrio de Biotecnologia, da ULBRA, pelos servios laboratoriais.
REFERNCIAS
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Deteco de fatores de virulncia de Escherichia coli atravs da PCR em tempo real
FABRCIO ALVES CERVEIRA1 JOANA BITTENCOURT MATHIAS2 YARA SILVA CASANOVA3 BEATRIZ MACHADO TERRA LOPES4 FERNANDA KIELING MOREIRA5 JOSIANE FAGANELLO4 ANA PAULA WOBETO4 PRISCILLA KARINA VITOR KOERICH6 EDMUNDO KANAN MARQUES7 ANDRE SALVADOR KAZANTZI FONSECA4 VAGNER RICARDO LUNGE8 NILO IKUTA9
RESUMO
A Escherichia coli enterotoxignica (ETEC) um patgeno diretamente relacionado ao desenvolvimento da colibacilose dos sunos. A diferenciao de cepas patognicas de comensais confirmada pela deteco de fatores de virulncia (FVs) como fmbrias (F4, F5, F6, F18, F41) e toxinas (STb, STaP , STx2e, LT). Este trabalho descreve
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Aluna do Curso de Biologia/ULBRA - Bolsista PROICT/ULBRA Aluna do Curso de Biologia/ULBRA - Aluna voluntria PROICT/ULBRA Aluna do Curso de Biomedicina/ULBRA - Bolsista PROICT/ ULBRA SIMBIOS Biotecnologia Biloga - Laboratrio sequenciamento da ULBRA
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Perdigo Agroindustrial S/A - Videiro SC Professor do PPG Diagnstico Gentico e Molecular/ULBRA Professor do Curso de Medicina Veterinria/ULBRA e PPG Diagnstico Gentico e Molecular/ULBRA Professor-Orientador do Curso de Biologia e do PPG Diagnstico Gentico e Molecular/ULBRA (ikuta@ulbra.br)
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sobre a caracterizao de 63 isolados de E. coli provenientes de granjas da regio Sul do Brasil, pela tcnica de PCR em tempo real (qPCR). Somente 25 isolados (39,7%) apresentaram os genes de fmbrias e/ou toxinas pesquisados. No Paran (PR) e Santa Catarina (SC) foram detectadas as fmbrias F18 e F4, e no Rio Grande do Sul (RS) F5, F6 e F41. Nos Estados do PR e SC as 4 toxinas investigadas foram detectadas, e no RS as toxinas STb, STx2e e StaP . Entre os isolados com FVs, o perfil (Stb, F-) foi o mais frequente e comum aos 3 Estados (24%), seguido por 12% de (STx2e, F-) presente no PR e RS, e 12% de (STaP , F-) em amostras de SC e PR. A PCR em tempo real demonstrou ser um mtodo rpido e fcil para detectar os fatores de virulncia em Escherichia coli e recomendado como teste confimatrio ao isolamento bacteriano para identificao de ETECs. Palavras-chave: Escherichia coli, ETEC, PCR tempo real, colibacilose, fatores de virulncia.
ABSTRACT
Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) is related with swine colibacillosis and differentiation from commensal strains could be confirmed by virulence factors detection as fimbriae (F4, F5, F6, F18, F41) and toxins (STb, STaP , STx2e, LT). This study describes about characterization of 63 E. coli isolates from Southern Brazil farms by real time PCR assay (qPCR). The investigated fimbriae and/or toxin genes were detected only in 25 isolates (39,7%). F18 and F4 fimbriae were detected in Paran (PR) and Santa Catarina (SC) states and F5, F6 e F41 in Rio Grande do Sul. The 4 investigated toxins were detected in PR and SC states, and STb, STx2e e StaP toxins in RS. Among the isolates with FVs, the (Stb, F-) profile was the most prevalent (24%) and found in all studied states, followed by (STx2e, F-) (12%) in PR and RS and (STaP , F-) in SC and PR (12%). The real time PCR showed to be a fast and and easy method for E. coli virulence factors detection and recommended as confirmatory test for ETECs identification. Key words: Escherichia coli, ETEC, real time PCR, colibacillosis, virulence factors
INTRODUO
A suinocultura industrial brasileira destaca-se como grande produtor internacional (KATAYAMA, 2007). A regio Sul, forte polo das agroindstrias, responsvel por 61% da produo do pas e considerada a mais tecnificada da Amrica do Sul. (ABIPECS, 2008). Fatores ligados ao manejo, ambiente e nutrio so as grandes preocupaes na produo, e entre as patologias mais importantes se destacam as doenas entricas como a colibacilose (SMITH e LINGOOD, 1971; MOON, 1978;
ALEXANDER, 1994; BERBEROV et al., 2004; Zhang et al., 2006). A Escherichia coli (E. coli) uma bactria anaerbia facultativa predominante na microbiota normal de animais homeotrmicos. Algumas cepas denominadas ETEC (Enterotoxigenic E. coli) possuem fatores de virulncia (fmbrias e toxinas) capazes de causar doenas entricas como a colibacilose (NATARO e KAPER, 1998). As fmbrias F4, F5, F6, F18 e F41 permitem que as bactrias se liguem s vilosidades intestinais (WILSON
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e FRANCIS, 1986; NAGY e FEKETE, 1999), e as toxinas termolbeis (LT) e termoestveis (STa, STb) estimulam o entercito a bombear lquido no lmen, aumentando a motilidade intestinal (MOON et al., 1986; NAGY e FEKETE, 1999; CHOI et al., 2001), induzindo a diarreia (SALDARRIAGA et al., 2000). Durante a produo de sunos, frequente a separao dos animais nas fases pr-desmame (maternidade) e ps-desmame (creche, crescimentoterminao) o que auxilia a minimizar os riscos de infeces respiratrias, sistmicas e entricas (SMITH e LINGOOD, 1971; MOON, 1978; ALEXANDER, 1994; BERBEROV et al., 2004; ZHANG et al., 2006). Sabe-se que as porcas podem ser portadoras assintomticas de cepas patognicas de E. coli em seu intestino, o que propicia leites na etapa pr-desmame se contaminarem atravs do contato com suas fezes e do meio ambiente. O diagnstico da colibacilose baseado em sinais clnicos, no isolamento bacteriano a partir de amostras de fezes com diarreia e na atividade hemoltica da bactria em gar sangue (BARCELLOS et al., 1980; BRITO et al., 1999; KUHNERT et al., 2000; MACDO et al., 2007). Nestes casos, o isolamento da E. coli em altas concentraes utilizado como um forte indicativo de que estes estejam relacionados com ETEC (LUDWIG e GOEBEL, 1997; BRITO et al., 1999; KUHNERT et al., 2000). Mtodos de diagnstico fenotpicos e moleculares tm sido utilizados como testes definitivos para diferenciar cepas de E.coli patognicas das comensais, sendo que a deteco dos fatores de virulncia fundamental para que seja estabelecido o tratamento adequado da colibacilose. J so amplamente descritos na literatura artigos com a utilizao da reao em cadeia da polimerase (PCR) para deteco de ETEC
(FRANKLIN et al., 1996; BOSWORTH e CASEY, 1997; KWON et al., 1999; OSEK, 2002; VIDAL et al., 2004; OLASZ et al., 2005; WEST et al., 2007; MACDO et al., 2007, OJENIYI et al., 1994; STACY-PHIPPS et al., 1995; BLANCO et al., 1997; OSEK et al. 1999). A PCR em tempo real (qPCR) tem sido amplamente utilizada no diagnstico molecular de doenas infecciosas, que permite a reduo do tempo para obter os resultados, possibilita um diagnstico mais sensvel, especfico e reduo significativa do risco de contaminao, pois no se faz necessria a manipulao do produto ps-PCR (MACKAY, 2004). Recentemente foi descrita a utilizao da qPCR na deteco de ETEC (WEST et al., 2007), e o presente trabalho teve como objetivo atravs desta tcnica caracterizar isolados de E. coli, provenientes dos Estados do Rio Grande do Sul, Santa Catarina e Paran.
MATERIAL E MTODOS
Cepas de Referncia As cepas enterotoxignicas de referncia E.coli 2568 (F18, STb, STaP e STx2e), 2569 (F4, STb e LT), 2570 (F6 e STaP) e 2571(F5, F41 e STaP) foram gentilmente cedidas pela empresa Perdigo, e utilizadas neste trabalho como controles de amplificao das fmbrias e toxinas.
Isolados de Campo Neste trabalho foram utilizados 63 isolados de E. coli obtidos de amostras clnicas de sunos coletadas em granjas comerciais localizadas nos Estados do Paran, Rio Grande do Sul e Santa Catarina - regio Sul do Brasil.
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Extrao de DNA O DNA foi extrado a partir de uma suspenso bacteriana, atravs da utilizao do kit NewGene Prep e posteriormente transferido para uma suspenso de slica. O sedimento passou por diversas lavagens utilizando-se o kit NewGene PreAmp (tiocianato de guanidina + Tris-HCl, etanol 80% e etanol 96%).
de qPCR multiplex, sendo constitudos por trs pares de iniciadores distintos e trs sondas marcadas com 3 agentes fluorescentes distintos (FAM, VIC e ROX).
Este trabalho descreve a aplicao do PCR multiplex em tempo real para caracterizao de fatores de virulncia (FV), presentes em isolados de Escherichia coli. Numa primeira etapa, foram realizadas as otimizaes de 3 reaes multiplex PCR: qPCR1 (F4, STx2e e STb), qPCR2 (F5, F18, LT) e qPCR3 (F6, F41 e STaP). A tcnica se demonstrou eficiente, confirmando a presena das toxinas e fmbrias nas 4 cepas de referncia. A Figura 1 apresenta um exemplo dos resultados obtidos com a amplificao do qPCR2, detectando respectivamente, os alvos das cepas de referncia 2569 (alvo LT), 2571 (alvo F5) e 2568 (alvo F18).
Amplificao de FV atravs de PCR Multiplex em Tempo Real A deteco dos fatores de virulncia F4, F5, F6, F18, LT, e STaP foi realizada atravs da PCR em tempo real com iniciadores e sondas descritos por West, et al. (2007) e Frydenthal et al. (2001). Iniciadores e sondas especficos para os genes F41, STx2e e STb foram desenhados neste trabalho utilizando-se o software Primer Express (ABI). O DNA das cepas de referncia foi analisado simultaneamente com as amostras clnicas em cada set
LT F5 Threshold cycle F18
Figura 1 - Multiplex qPCR2 - grfico de amplificao dos alvos LT, F5 e F18 detectados, respectivamente, nas cepas de referncia 2569, 2571 e 2568.
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Posteriormente, foram analisadas 63 E. coli isoladas de animais com diarreia provenientes dos 3 Estados da regio Sul do Brasil. No nosso trabalho 39,7% (25/63) dos isolados apresentaram as fmbrias e/ou toxinas pesquisadas, o que corrobora os resultados prvios encontrados por nosso grupo (Moreira et al. 2007), com amostras clnicas da mesmas regies do pas. Macdo et al. (2007) analisando amostras do Estado de Minas Gerais, encontraram uma frequncia mais reduzida (29%), o que demonstra que a incidncia pode variar dependendo da regio analisada. Estes dados indicam que o diagnstico da colibacilose baseado unicamente no isolamento de E. coli em animais com diarreia apresenta grande ndice de resultados falsos positivos, j que a incidncia de isolados sem FV elevada. Frequentemente este tipo de diagnstico utilizada em nosso pas (Baccaro et al., 1999; Baccaro et al., 2000; Calderaro et al., 2001) o que acarreta na utilizao de antibiticos em situaes desnecessrias. Na anlise dos 25 isolados com FV, foram detectadas todas as 5 fmbrias e 4 toxinas pesquisadas (Tabela 1), sendo que 40% das amostras positivas foram encontradas no PR, 32% no RS e 28% em SC. Foram caracterizados isolados com uma (36%) ou duas (16%) fmbrias, e bactrias com uma (48,3%), duas (16%) e trs (4%) toxinas (Tabela 2).
Tabela 1 - Distribuio de fmbrias e toxinas detectadas pela qPCR em cepas de E. coli provenientes do Paran, Rio Grande do Sul e Santa Catarina.
FMBRIAS ESTADO PR RS SC TOTAL F4 2 0 1 3 F5 0 2 0 2 F6 0 4 0 4 F18 3 0 3 6 F41 0 2 0 2 LT 1 0 1 2 TOXINAS STB 5 1 2 8 STX2E STAP 2 1 3 6 3 6 5 14
A frequncia das cepas patognicas investigadas nos trs Estados da Regio Sul apresentou uma distribuio heterognea em relao s fmbrias. No Paran (PR) e Santa Catarina (SC) foram detectadas apenas F18 e F4, e no Rio Grande do Sul (RS) foram encontrados as fmbrias F5, F6 e F41. Nos Estados de SC e PR foram encontradas as 4 toxinas investigadas e no RS foram detectadas as toxinas STb, STx2e e STaP (Tabela 1).
Tabela 2 - Perfis dos fatores de virulncia encontrados em E. coli isoladas de fezes com diarreia de sunos da regio Sul do Brasil. (*ausncia de fmbria/toxina)
TOXINAS FMBRIAS F4 F6 F18 F4, F18 F5, F41 *F STb STx2e STaP STb, LT 1 4 1 6 3 2 3 3 1 1 STx2e, STaP STb, LT, STaP *TESTADO SC RS PR e SC PR RS PR, SC e RS
Os perfis dos fatores de virulncia apresentaramse de forma diversificada (Tabela 2), e chamou-nos a ateno a grande incidncia de isolados com toxinas e ausncia das fimbrias pesquisadas (48%). Nos trs Estados foram detectados bactrias com perfil (Stb, F-) representando 24% dos isolados com FV . No PR e RS 12% dos isolados com FV apresentaram o perfil (STx2e, F-), e no PR e SC 12% com o perfil (STaP , F-). Uma hiptese para a ausncia de fmbrias seria a atuao de outras no investigadas neste estudo, como F17 descrita por West el. al. (2007). Pode-se levantar como outra hiptese, a ocorrncia de mutaes nas regies de anelamento nas fmbrias investigadas que impossibilitem a deteco pela multiplex PCR. Entretanto no devemos atribuir uma menor patogenicidade a estes isolados, pois a ocorrncia de infeces concomitantes por outros agentes causadores de diarreia podem acentuar
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a patogenicidade de isolados de ETEC (NAKAMINE et al., 1998). Outros perfis foram encontrados neste trabalho (Tabela 2), podendo-se destacar 16% dos isolados foram encontrados no RS com o perfil (STaP , F6) e 12% (STx2e, STaP , F18) em SC. Estes achados demonstraram que atravs de uma anlise retrospectiva de isolados de fezes de sunos com diarreia e sintomas de colibacilose, obtidos de granjas do Sul do Brasil, apenas uma parte dos isolados (39,7%) apresentaram os genes que codificam os fatores de virulncia de ETEC investigados. A utilizao da PCR em tempo real apresentou-se de forma eficiente como teste complementar para deteco de fmbrias e toxinas, sendo o diagnstico da colibacilose baseado apenas no isolamento bacteriano pouco fidedigno e com alto ndice de resultados falso-positivos para os principais fatores de virulncia de ETEC descritos na literatura. Espera-se que com a utilizao de mtodos moleculares seja possvel contribuir para o melhor manejo da colibacilose em nosso pas.
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Cincias Biolgicas
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A influncia da origem geogrfica de amostras de acerola (Malpighia glabra L.) em relao ao seu potencial genotxico e antigenotxico
VIVIAN FRANCLIA SILVA KAHL1,6 MERIELEN DA SILVA SARMENTO2,6 ROBERTA DA SILVA NUNES3,6 MARC FRANOIS RICHTER4,6 ALEXANDRE DE BARROS FALCO FERRAZ4,6 JULIANA DA SILVA5,6
RESUMO
A acerola (Malpighia glabra L.) uma planta usada popularmente para vrios fins, e com alto teor de vitamina C. Para avaliar a atividade genotxica e antigenotxica da acerola, foi realizado o Ensaio Cometa in vitro em amostras de sangue de Mus musculus. As amostras de acerola eram provenientes do Rio Grande do Sul (RS) e So Paulo (SP), sendo utilizadas em trs concentraes: C1 (2mg/ml), C2 (1mg/ml) e C3 (0,5mg/ml). A C1/RS apresentou efeito genotxico. As demais concentraes da amostra do RS, e todas as concentraes de SP , no apresentaram induo a genotoxicidade. Quanto antigenotoxicidade em relao ao H2O2, a amostra do RS no apresentou efeito protetor, ao contrrio da amostra de SP , que apresentou em
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Acadmica do Curso de Biologia/ULBRA, Bolsista PIBIC/CNPq Acadmica do curso de Biologia/ULBRA, Bolsista PROICT/ ULBRA Doutoranda do PPG em Gentica e Toxicologia Aplicada/ ULBRA
Professor do Curso de Farmcia e do PPG em Gentica e Toxicologia Aplicada/ULBRA Professora-Orientadora do Curso de Biologia e do PPG em Gentica e Toxicologia Aplicada/ULBRA (juliana.silva@ulbra.br) Laboratrio de Gentica Toxicolgica
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todas as concentraes. Anlises quanto constituio de cada amostra esto sendo realizadas para elucidar estes resultados. Palavras-chave: Malpighia glabra L., acerola, genotoxicidade, antigenotoxicidade, vitamina C.
ABSTRACT
Acerola (Malpighia glabra L.) is a popularly used plant for various purposes, which has a high content of vitamin C. The aim of this study was to evaluate the genotoxicity and antigenotoxicity of acerola, through of comet assay in vitro on blood samples of Mus musculus. The samples of acerola were from Rio Grande do Sul (RS) and So Paulo (SP), and were studied on three concentrations: C1 (2mg/ml), C2 (1mg/ml) e C3 (0.5mg/ml). The concentration C1/RS showed genotoxic effect. The others concentrations of RS samples and all concentrations of SP , did not showed induction to genotoxicity. As to antigenotoxicity, the RS sample hasnt showed protector effect, unlike SP sample, which showed it in all concentrations. Analysis as to constitution from every sample is being taken to elucidate these results. Key words: Malpighia glabra L., acerola, genotoxicity, antigenotoxicity, vitamin C.
INTRODUO
A utilizao de plantas com fins medicinais, para tratamento, cura e preveno de doenas, uma das mais antigas formas de prtica medicinal da humanidade. No incio da dcada de 1990, a Organizao Mundial de Sade (OMS) divulgou que 65-80% da populao dos pases em desenvolvimento dependiam das plantas medicinais como nica forma de acesso aos cuidados bsicos de sade (VEIGA JR. et al., 2005). Apesar do uso indiscriminado das mesmas, at hoje so escassos os estudos sobre as suas constituies qumicas e atividades biolgicas. A literatura descreve inmeras atividades biolgicas relacionadas com os compostos encontrados, principalmente os fenlicos (MONTOURO et al., 2005). O estudo da constituio qumica das plantas tem contribudo para que alguns frmacos potentes tenham sido descobertos (SANNOMIYA et al., 2004). Extra-
tos vegetais e seus constituintes isolados podem ser usados na fabricao de produtos teraputicos industrializados (MARQUES, 2002). Relatos revelam que cerca de 80% da populao mundial utiliza plantas com finalidade teraputica (FETROW e AVILA, 2000). Em grande parte, os efeitos gerados pelos constituintes de uma planta no organismo vivo so verificados baseando-se nos conhecimentos populares de uso repetitivo e tradicional. Sabe-se que os vegetais e frutas possuem classes de agentes fitoqumicos com diversas aes teraputicas, como efeitos antioxidante, antimutagnico e at anticarcinognico (KUSAMRAN et al., 1998; NAKAMURA et al., 1998; NOGUEIRA et al., 2005). Enfim, os extratos de muitas plantas podem ser usados no tratamento de vrias doenas humanas (YEN et al., 2001). Apesar de muitas aes benficas das plantas, importante considerar que alguns de seus
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constituintes podem ser txicos ao organismo, e o metabolismo vegetal pode gerar metablitos com esta mesma atividade. Segundo Ames (1983) e Franke et al. (2003), elementos da dieta humana presentes em vegetais, podem ter uso tanto medicinal como podem apresentar substncias nocivas para o organismo. Malpighia glabra L., popularmente chamada de acerola ou cereja-das-antilhas, uma espcie nativa encontrada na Amrica Tropical. muito utilizada popularmente pela sua ao adstringente, vitamnica, antianmica, nutritiva e antifngica. A acerola, pelo seu inegvel potencial como fonte natural de vitamina C, flavonides, carotenides e antocianinas e sua grande capacidade de aproveitamento industrial, tem atrado o interesse dos fruticultores e passou a ter importncia econmica em vrias regies do Brasil (NOGUEIRA et al.,2005). A composio qumica, inclusive a distribuio de componentes do aroma da fruta, dependente das espcies, condies ambientais e, tambm, do estgio de maturao da fruta (VENDRAMINI e TRUGO, 2000). Segundo Arajo (1994), a acerola sofre alteraes na cor, aroma, sabor e textura logo aps a colheita. Este fato pode ser explicado por condies de armazenamento, temperatura, entre outros, podendo levar a uma possvel degradao dos compostos ativos. A composio nutricional de acerolas in natura e do suco de acerola no processado conforme USDA (2004) demonstra ser estes excelentes fontes de vitamina C, carotenides precursores da vitamina A, licopeno, alm de conter quantidades considerveis de tiamina, riboflavina, niacina, cido pantotnico, clcio, ferro e magnsio. Uma poro de 100 gramas da fruta in natura fornece 2796% da Ingesto Diria Recomendada (IDR) de vitamina C e 28,76% da IDR de vitamina A
necessria para um adulto. O alto teor de cido ascrbico e a presena de antocianinas destacam este fruto no campo dos funcionais pela habilidade desses compostos em capturar radicais livres no organismo humano. A vitamina C, o -caroteno e outros carotenides agem como antioxidantes no organismo humano (SIZER e WHITNEY, 2003; MESQUITA e VIGOA, 2000). O teor de vitamina C e outras caractersticas atribudas qualidade da acerola, tais como colorao, peso e tamanho dos frutos, teor de slidos solveis e pH do suco, alm de serem afetadas pela desuniformidade gentica dos pomares, sofrem influncia de vrios outros fatores, como precipitaes pluviais, temperatura, altitude, adubao, irrigao e a ocorrncia de pragas e doenas (NOGUEIRA et al., 2005). O alto teor de vitamina C e a fragilidade apresentada por este fruto tm motivado diversos pesquisadores, em diferentes partes do mundo, a trabalhar com sua caracterizao qumica e seus possveis efeitos benficos ao organismo humano. Os antioxidantes vegetais so de natureza muito variada, mas, indubitavelmente, os flavonides constituem o grupo mais representativo (RICEEVANS et al., 1995). Secundando os flavonides, a variedade de quase mil tipos diferentes de carotenides descritos em plantas tambm chama a ateno (HARBORNE, 1988). O termo flavonide engloba um grupo de compostos polifenlicos complexos que apresenta uma estrutura comum caracterizada por dois anis aromticos e um heterociclo oxigenado. A famlia dos flavonides inclui os subgrupos flavanis (catequina, epicatequina, etc.), flavanonas (naringina, taxifolina), antocianidinas (malvidina, cianidina), flavonas e flavonis (quercitina, luteolina, rutina, etc.) (HARBORNE, 1988), estando presente em uma grande variedade de alimentos de origem vegetal como frutas, vegetais, sementes, flores e folhas, e fazem parte integral
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da dieta humana (HERMMAN, 1976; Hertog et al., 1992, HERTOG et al 1993a). Nos ltimos anos, muitos estudos tm sido realizados sobre o papel das espcies reativas de oxignio na etiologia de vrias doenas (HALLIWELL, 1987). As propriedades antioxidantes dos flavonides tm, assim, atrado a ateno para a nutrio preventiva, pois constituintes alimentares protegem contra o dano oxidativo, podendo tambm contribuir para a preveno de importantes patologias, como doenas cardiovasculares, envelhecimento e cncer. Considerando a importncia do uso popular e a cultura pronunciada de acerola no Brasil, este trabalho se props a avaliar as atividades genotxica e antigenotxica do extrato liofilizado de acerola proveniente de duas diferentes regies do Brasil: So Paulo e Rio Grande do Sul. Para isso, foi utilizado o Ensaio Cometa (EC) na sua verso in vitro em sangue de camundongos.
A C2 foi exposta tambm por quatro horas, a fim de se avaliar se a diferena de tempo de exposio poderia apresentar influncia. Uma das amostras de sangue de cada animal foi utilizado como controle negativo (CN) no sendo exposto a nenhuma concentrao. O Ensaio Cometa (EC) in vitro foi realizado conforme descrito por SZETO (2002), com algumas modificaes. As lminas (quatro por dose e indivduo) foram preparadas com 7,5l de sangue de cada amostra diludos em 95l de agarose e posteriormente submersas em soluo de lise durante 48 horas, a 4C. Para avaliao de antigenotoxicidade, lminas em duplicata foram mergulhadas em soluo de perxido de hidrognio (H2O2) durante cinco minutos antes de serem expostas soluo de lise. Foi realizado o EC de verso alcalina para deteco de quebras de fita nica e dupla, danos lcali-lbeis e crosslinks, atravs da incubao das lminas em tampo pH>13 por vinte minutos. Em seguida realizou-se uma eletroforese a 300mA e 25V durante quinze minutos. Esta corrente, havendo danos no DNA, faz com que os fragmentos do mesmo migrem, fazendo com que se tenha uma imagem de clula cometa (clula com cauda). As lminas foram ento neutralizadas, fixadas e coradas com nitrato de prata. A anlise das lminas foi feita com microscpio ptico 100x e foram analisadas 100 clulas/ indivduo/tratamento (50/lmina). Os ncleos contendo o DNA intacto so redondos (sem danos classe 0), enquanto as clulas lesadas so classificadas de acordo com a cauda (de pouco dano-1 at danos mximos classe 4 ) (Figura 1). Os resultados foram expressos em ndices de danos (ID), conforme a classificao visual das classes de danos. Ou seja, para cada grupo, o ID pode ir do
MATERIAL E MTODOS
Para obteno das concentraes de acerola utilizadas, o extrato da polpa do fruto maduro da acerola foi liofilizado em gua. A partir do liofilizado, foram obtidas trs concentraes: C1 (2mg/ml), C2 (1mg/ml) e C3 (0,5mg/ml). Quatro camundongos Mus musculus - CF-1 machos foram sacrificados por guilhotinamento e o sangue foi coletado em microtubos com 30l de heparina. Foram preparadas quatro alquotas de 100l de sangue de cada animal, sendo cada uma exposta a uma das trs concentraes por duas horas, a 37C, em estufa, protegidas da luz.
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zero (100X0; 100 clulas observadas sem danos) a 400 (100X4; 100 clulas observadas com dano mximo). Ainda expressaram-se os resultados em freqncia de dano (FD; %), cujo clculo a porcentagem de clulas com danos, e que pode variar de zero a 100. Os resultados foram submetidos anlise de varincia ANOVA de uma via e, em seguida, ao teste de Tukey.
Figura 1 - Classes de danos no Ensaio Cometa.
Na avaliao da atividade genotxica, a C1, concentrao mais alta, da amostra de acerola proveniente do RS apresentou efeito genotxico (P<0,05). As demais concentraes dessa mesma amostra no apresentaram efeito genotxico, no induzindo danos, quando comparadas ao CN (Figura 2), tanto para ID quanto para FD. O controle negativo, amostra de sangue no exposta a acerola, quando em exposio ao perxido de hidrognio (controle positivo) demonstra aumento significativo de leses.
Figura 2 - ndice (A) e freqncia (B) de danos da avaliao da atividade genotxica em camundongos tratados com acerola proveniente do estado do Rio Grande do Sul. CN= controle negativo; C+= controle positivo; C1= 2mg/ml; C2= 1mg/ml; C3= 0,5mg/ ml; C2-4h= amostra exposta por 4h (demais 2h). *** P<0,001 em relao ao CN.
Na mesma avaliao, tanto no ID quanto na FD, a amostra de SP no apresentou efeito genotxico em nenhuma das concentraes utilizadas, em relao ao CN (P>0,05) (Figura 3).
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Figura 3 - ndice (A) e freqncia (B) de danos da avaliao da atividade genotxica de camundongos tratados com acerola proveniente do estado de So Paulo. CN= controle negativo; C+= controle positivo; C1= 2mg/ml; C2= 1mg/ml; C3= 0,5mg/ml; C2-4h= amostra exposta por 4h (demais 2h). *** P<0,001 em relao ao CN.
Figura 4 - ndice (A) e freqncia (B) de danos da atividade antigenotxica da acerola proveniente do Estado do Rio Grande do Sul. CN= controle negativo; C+= controle positivo; C1= 2mg/ ml; C2= 1mg/ml; C3= 0,5mg/ml; C2-4h= amostra exposta por 4h (demais 2h). *** P<0,001 em relao ao CN.
Na avaliao da atividade antigenotxica, a amostra de acerola proveniente do RS no apresentou efeito antigenotxico em nenhuma das concentraes tratadas com H2O2 (P>0,05), quando comparadas com o grupo de controle positivo, que recebeu apenas H2O2 (Figura 4).
A amostra de SP apresentou reduo significativa de danos (P<0,001) para ID e FD quando avaliou-se a atividade antigenotxica da mesma. Ou seja, todos os tratamentos aliados ao perxido de hidrognio diminuram o ID quando comparados com o controle positivo (Figura 5).
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Os resultados analisados mostram que a amostra de SP no causou dano genotxico ao sangue dos camundongos tratados in vitro com extrato de acerola. Ao contrrio, em todas as concentraes, essa amostra protegeu o DNA dos danos causados pelo H2O2. A amostra proveniente do RS demonstrou um resultado oposto: tanto no protegeu o DNA dos danos causados pelo H2O2, quanto induziu genotoxicidade de forma significativa na concentrao mais alta, a C1 (2mg/kg). Dessa forma algumas possibilidades so inferidas. Dentro da mesma espcie, podem existir diferentes variedades da planta, sendo que cada variedade pode apresentar constituio diferente da outra. Assim, a quantidade de vitamina C presente em cada variedade tambm pode ser diferente, alterando, portanto, seu efeito no organismo: como pr-oxidante, sendo prejudicial; ou como antioxidante, sendo benfico.
Figura 5 - ndice (A) e freqncia (B) de danos da atividade antigenotxica da acerola proveniente do Estado de So Paulo. CN= controle negativo; C+= controle positivo; C1= 2mg/ ml; C2= 1mg/ml; C3= 0,5mg/ml; C2-4h= amostra exposta por 4h (demais 2h). *** P<0,001 em relao ao CN; #P<0,05 e ##P<0,01 em relao ao C+.
CONSIDERAES FINAIS
Ambas as amostras so da mesma espcie de acerola (Malpighia glabra L.) do mesmo perodo de maturao, ou seja, tanto a amostra de So Paulo quanto a do Rio Grande do Sul so de frutos maduros. Mesmo assim, apresentaram diferenas significativas quanto ao seu potencial genotxico e antigenotxico, as quais devem estar vinculadas s diferenas de constituio dessas amostras.
Alm disso, a diferena geogrfica da origem das amostras pode influenciar na composio da planta em funo das diferenas de solo, clima, altura e radiao solar. Em relao radiao solar, alguns constituintes, como carotenides e flavonides, tendem a sofrer modificaes dependendo da radiao solar recebida. Carotenides e flavonides so pigmentos de fotoproteo que os vegetais produzem quando expostos a radiao. Em ambientes diferentes, a produo deles pode variar, aumentando ou diminuindo, o que demonstra que a diferena geogrfica pode, portanto, variar a produo de pigmentao. Esses constituintes apresentam forte relao com a sade humana, a partir do momento em que, dependendo da quantidade qual o organismo est exposto, eles podem agir de forma benfica ou prejudicial.
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Para a elucidao desses resultados, anlises quanto constituio dessas amostras esto sendo realizadas.
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AGRADECIMENTOS
Este trabalho teve o apoio financeiro da Universidade Luterana do Brasil ULBRA, do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico CNPq, Brasil.
REFERNCIAS
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Caracterizao de redes de interao protica associadas ao desenvolvimento do melanoma
MIRIAM SANTOS BORBA1 KELLY CRISTINA LEITE DA GAMA2 JOS LUIZ RYBARCZYK FILHO3 MAURO ANTNIO ALVES CASTRO4
RESUMO
O melanoma uma grave neoplasia maligna de pele, apresenta alta capacidade metasttica e predomnio em populaes caucasianas, tendo como principal fator de risco a exposio solar. Assim como a maioria das neoplasias slidas, o melanoma altamente heterogneo, possivelmente um reflexo da alta diversidade celular e molecular. Embora no exista nenhum marcador molecular validado para o estadiamento do melanoma, quatro genes so descritos como causalmente associados ao seu desenvolvimento: NRAS, BRAF , ATF1 e CDKN2A. Neste trabalho, utilizando ferramentas de bioinformtica, apresentamos um modelo rede de interao protica capaz de descrever a extenso funcional destes quatro genes, o que pode servir de plataforma de estudo para a identificao de novos genes envolvimento nesta neoplasia. Palavras-chave: Melanoma, cncer de pele, bioinformtica, interao protica.
ABSTRACT
Melanoma is a severe skin malignancy, presents high metastatic potential and very poor prognosis. It is more prevalent in Caucasian populations and the main risk factor is associated to sunlight exposure due to ultraviolet
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Acadmica do Curso de Biologia/ULBRA Bolsista PROICT/ ULBRA Acadmica do Curso de Biologia/ULBRA Voluntria PROICT/ULBRA
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Aluno de Ps-graduao do Instituto de Fsica/UFRGS Professor-Orientador do Curso de Biologia/ULBRA (mauro@ufrgs.br)
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radiation related damages. Like most solid tumors, the melanoma is highly heterogeneous, possibly reflecting its cellular and molecular diversity. Although there is no validated molecular marker for staging melanoma, four genes are described as causally related to its development: NRAS, BRAF , ATF1 and CDKN2A. In this work, using bioinformatics tools, we present a network-based model of protein-protein interactions in order to describe the functional extent of these four genes. We anticipate that this network model will serve as searching platform for identifying new genes involved in this cancer. Key words: Melanoma, skin cancer, bioinformatics, protein interaction.
INTRODUO
O melanoma tem origem nos melancitos, predomnio em pessoas caucasianas de olhos claros, principalmente em indivduos acima de 40 anos. Comparado a outros tumores de pele (basocelulares e de clulas escamosas), o melanoma menos freqente, representando 4% das neoplasias neste stio (RIES et al., 2009). No entanto, sua letalidade mais elevada devido alta probabilidade de metstases (GRAY-SCHOPFER et al., 2007). Segundo estimativas da Organizao Mundial de Sade (OMS), ocorrem anualmente mais de 130 mil novos casos de melanoma no mundo. Amplas evidncias apontam para a radiao ultravioleta (UV) como um dos principais fatores indutores do cncer de pele (BESARATINIA e PFEIFER, 2008). O risco depende do tipo de raio UV, da intensidade de exposio e da quantidade de melanina na pele (COTRAN et al., 2000). A radiao UV exerce diversos efeitos sobre as clulas, incluindo inibio da diviso celular, inativao de enzimas, induo de mutaes somticas e, em doses suficientes, morte celular (MARROT e MEUNIER, 2008). Como o cncer um distrbio essencialmente celular, sua causa mais provvel est associada ocorrncia de mutaes somticas em genes alvo. Quatro genes so descritos como causalmente as-
sociados formao do melanoma: NRAS, BRAF , ATF1 CDKN2A (FUTREAL et al., 2004). Destes, o oncogene BRAF aparece mais comumente alterado, entre 50% e 70% dos casos, seguido do gene supressor tumoral CDKN2A (30-70%), do oncogene NRAS (15-30%) e do fator de transcrio ATF1 (alterado em raros casos de melanoma de partes moles) (GRAY-SCHOPFER et al., 2007; ALBERT et al., 2006). Neste trabalho estudamos as propriedades sistmicas destes quatro genes. Utilizando ferramentas de bioinformtica, desenvolvemos um modelo rede de interao protica com o objetivo de mapear as interaes moleculares e quantificar a extenso funcional dos genes causalmente associados ao melanoma em relao aos demais genes do genoma humano.
MATERIAL E MTODOS
Para identificao dos genes de melanoma utilizamos o banco de dados do projeto genoma do cncer do Instituto Sanger (FUTREAL, 2009). Este banco de dados compila mutaes causalmente associadas ao desenvolvimento de neoplasias malignas e disponibiliza essa informao na forma de um censo de genes de cncer. A nomenclatura gentica foi curada usando ferramentas de bioinformtica
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disponveis no Laboratrio Europeu de Biologia Molecular (EMBL) (www.embl.org) e no banco de dados HGNC (http://www.genenames.org/), excluindo assim possveis inconsistncias. Para a reconstituio da rede de interao protica usamos o software Medusa (HOOPER e BORK, 2005), o qual constri - atravs das interaes funcionais entre os genes (ou produtos gnicos) - o grafo de rede apresentado na Figura 1. Para a anlise estatstica da rede de interao protica desenvolvemos o software GNATT (Gene Network Analysis Tools for Tracing Interactome ordering) em linguagem de programao FORTRAN. Esta ferreamente de bioinformtica possibilita o clculo da conectividade k (que estima o nmero de vizinhos) e do coeficiente de clusterizao C (que estima grau de agrupamento dos vizinhos). Alm disso, este software permite uma abordagem inferencial buscando camadas de vizinhos funcionalmente associados.
teragem funcionalmente com a semente. Isso foi conduzido utilizando informaes depositadas no banco de dados STRING (http://string.embl.de/), o qual fornece um sistema de busca de interaes proticas descritas experimentalmente. A otimizao desta estratgia foi feita com uso do software GNATT para reconstituir as camadas de interao. O resultado est apresentado na Figura 1. Como podemos observar na Figura 1, vrios genes foram identificados a partir desta busca. Em uma nova comparao com o censo de genes de cncer, observamos tambm que um grande nmero de componentes dessa rede apresenta relao causal com o desenvolvimento de outras neoplasias. Os resultados demonstram que 25% dos genes mapeados no modelo de rede de genes de melanoma esto envolvidos com a formao de pelo menos um tipo de cncer. Comparado a trabalhos prvios (CASTRO et al., 2007), isso corresponde a uma alta densidade de genes considerados alvos para mutaes com potencial neoplsico.
O ponto de partida do trabalho foi a identificamos dos principais genes causalmente associados ao melanoma, genes estes validados pelo Censo de Genes de Cncer (FUTREAL, 2009). Neste sentido, somente quatro genes entraram nos critrios de incluso do censo: NRAS, BRAF , ATF1 CDKN2A. Utilizamos esses genes como sementes para buscar novos genes possivelmente associados ao desenvolvimento do melanoma. Nesta estratgia usamos meios inferenciais para varrer todo o genoma em busca de genes que in-
CONCLUSES
O modelo de rede resultante pode servir de plataforma de estudo para a caracterizao de transcriptomas de melanoma. As perspectivas deste trabalho envolvem o estudo mais aprofundado no mbito funcional de cada gene, bem como as interaes funcionais entre seus produtos. Alm disso, estas ferramentas estatsticas sero disponibilizadas via internet, o que deve aprimorar o software GNATT e permitir a troca de informao entre potenciais usurios.
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Figura 1 - Redes de interao protica de genes causalmente associados ao desenvolvimento de melanoma. Os genes de cncer (CAN genes) correspondem aos genes causalmente associados ao desenvolvimento do melanoma segundo o Censo de Genes de Cncer do Instituto Sanger (FUTREAL, 2009). As interaes protena-protena foram mapeadas com informaes depositadas no banco de dados STRING (http://string.embl.de/) e os demais genes foram identificados com uso do software GNATT (ferreamente de bioinformtica desenvolvida no compilador Intel FORTRAN).
AGRADECIMENTOS
Auxlio: PROICT/ULBRA, CNPq e CAPES
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REFERNCIAS
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Estudo de associao do polimorfismo 308G>A no Gene do fator de necrose tumoral-alfa (TNF-alfa) com a presena de retinopatia diabtica
MARIANE HANKE GONALVES1 JSSICA BOAVENTURA DOS SANTOS2 LUS FERNANDO CASTAGNINO SESTI3 DAISY CRISPIM4 KTIA GONALVES DOS SANTOS5
RESUMO
A retinopatia diabtica (RD) uma grave complicao do diabetes mellitus tipo 2 (DM2) que pode levar cegueira. O polimorfismo funcional 308G>A no gene do fator de necrose tumoral-alfa (TNF-) tem sido relacionado com as complicaes crnicas do DM2 em alguns estudos, mas no em outros. Neste estudo, analisamos a relao do polimorfismo 308G>A no gene do TNF- com a presena de RD em 232 pacientes com DM2. O polimorfismo foi identificado pela tcnica de PCR-RFLP . As freqncias genotpicas e allicas obtidas nos pacientes com RD no diferiram significativamente daquelas observadas nos pacientes sem esta complicao (p > 0,05 para ambas as comparaes). Assim, os dados indicam que o polimorfismo 308G>A no est associado com a presena da RD em pacientes com DM2. Palavras-chave: Diabetes mellitus tipo 2, retinopatia diabtica, TNF-, polimorfismo.
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Acadmica do Curso de Biologia/ULBRA Bolsista PROICT/ ULBRA Acadmica do Curso de Biologia/ULBRA Bolsista FAPERGS Aluno de Ps-Graduao do PPG Diagnstico Gentico e Molecular/ULBRA
Biloga do Servio de Endocrinologia do Hospital de Clnicas de Porto Alegre (HCPA) e Professora colaboradora do Programa de Ps-Graduao em Endocrinologia/UFRGS Professora Orientadora do Curso de Biologia/ULBRA e do PPG Diagnstico Gentico e Molecular/ULBRA (kgsantos2001@hotmail.com)
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ABSTRACT
Diabetic retinopathy (DR) is a severe chronic complication of type 2 diabetes mellitus (DM2) that can lead to blindness. The functional 308G>A polymorphism in the tumor necrosis factor-alpha (TNF-) gene has been related to chronic complications of DM2 in some studies, but not in others. In this study, we analyzed the relationship of the 308G>A polymorphism in the TNF- gene with the presence of DR in 232 patients with DM2. The polymorphism was identified by the technique of PCR-RFLP . The genotype and allele frequencies obtained in patients with DR did not differ significantly from those observed in patients without this complication (p > 0.05 for both comparisons). Thus, the data indicate that the 308G>A polymorphism is not associated with the presence of DR in patients with DM2. Key words: Type 2 diabetes mellitus, diabetic retinopathy, TNF-, polymorphism.
INTRODUO
A retinopatia diabtica (RD) uma complicao vascular crnica do diabetes, que ocorre em mais de 50% dos pacientes com diabetes mellitus tipo 2 (DM2), e se constitui na principal causa notraumtica de novos casos de cegueira em adultos. A RD se caracteriza por alteraes gradualmente progressivas na microvasculatura da retina que, ao atingirem sua forma mais grave, podem resultar na perda irreversvel da viso (FONG et al., 2004; ESTEVES et al., 2008). Embora a hiperglicemia sustentada e o longo tempo de DM sejam os principais determinantes da RD, estudos populacionais e familiares tm sugerido que o desenvolvimento e/ ou o agravamento desta complicao dependem da interao de vrios fatores genticos e ambientais (ESTEVES et al., 2008; PATEL et al., 2008). Alm de contribuir para o desenvolvimento do DM2, a expresso de citocinas pr-inflamatrias e outras molculas que atuam no processo inflamatrio parece desempenhar um papel crtico no desenvolvimento das complicaes crnicas do DM (ADAMIS e BERMAN, 2008; KING, 2008). Vrios estudos tm observado que os pacientes com RD apresentam nveis sricos (DOGANAY et al.,
2002) e vtreos (DEMIRCAN et al., 2006) de fator de necrose tumoral-alfa (TNF-) elevados. O TNF- uma citocina pr-inflamatria que atua na regulao da proliferao celular, diferenciao e apoptose (ZHANG et al., 2009). Entre os vrios polimorfismos descritos no gene do TNF-, a variante 308G>A localizada na regio promotora (WILSON et al., 1992) se destaca por afetar a expresso deste gene. A presena do alelo A no nucleotdeo 308 aumenta a transcrio do gene do TNF- em aproxidamente duas vezes, elevando a produo desta citocina (ABRAHAM e KROEGER, 1999). Porm, os poucos estudos que investigaram a relao do polimorfismo 308G>A com a RD no encontraram qualquer evidncia de associao entre estes dois fatores em japoneses (YOSHIOKA et al., 2006), suos (KRAYENBUEHL et al., 2007) e escandinavos (LINDHOLM et al., 2008) com DM2. Considerando a importncia do TNF- na patognese do DM2 e suas complicaes e a ausncia de estudos sobre a relao de polimorfismos do gene do TNF- com as complicaes do DM no Brasil, o objetivo deste estudo analisar a associao do polimorfismo 308G>A no gene do TNF- com a presena de RD, em pacientes com DM2.
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MATERIAL E MTODOS
Populao de Estudo Para este estudo de caso-controle foram selecionados 232 pacientes com DM2, participantes de um estudo multicntrico que teve incio em 2002 e tem por objetivo investigar os fatores de risco genticos associados com a predisposio ao DM e suas complicaes crnicas (SANTOS et al., 2006; ERRERA et al., 2007). Todos os pacientes so caucasides descendentes de europeus (principalmente de portugueses, espanhis, italianos e alemes) e so atendidos regularmente nos ambulatrios dos Servios de Endocrinologia do Hospital de Clnicas de Porto Alegre (HCPA) e do Grupo Hospitalar Conceio (Porto Alegre/RS). Os pacientes foram classificados como casos (n = 170) ou controles (n = 62), de acordo com a presena ou ausncia de RD, respectivamente. Alm disso, os controles deveriam ter, no mnimo, 10 anos de DM para serem includos no estudo.
Avaliao Clnica dos Pacientes O DM2 foi diagnosticado de acordo com os critrios preconizados pela Associao Americana de Diabetes (1997) e todos os pacientes avaliados neste estudo responderam a um questionrio padronizado (incluindo questes sobre o tempo de durao do DM, histria de tabagismo, uso de medicamentos e estilo de vida) e realizaram uma avaliao clnica e laboratorial, aps a assinatura do termo de consentimento informado, cujo protocolo foi aprovado pelos comits de tica das instituies participantes. A presso arterial foi medida duas vezes com intervalo de 10 min. na posio sentada, com esfigmomanmetro de coluna de mercrio. A presena de hipertenso foi considerada positiva
quando a presso arterial fosse 140/90 mmHg e/ou se o paciente estava em uso de drogas antihipertensivas. A presena de RD foi avaliada por meio da fundoscopia direta aps dilatao pupilar e foi classificada como: (1) ausente; (2) RD noproliferativa (microaneurismas, hemorragia, exsudatos duros); ou (3) RD proliferativa (presena de neovasos e/ou tecido fibroso na cavidade vtrea). O diagnstico de nefropatia diabtica (ND) foi definido pelo aumento na excreo urinria de albumina (EUA) na ausncia de infeco urinria ou outras anormalidades renais. A ND foi classificada em nefropatia incipiente (EUA 20-199 g/ min ou 17-174 mg/L) ou ND clnica. A ND clnica foi definida pela presena de macroalbuminria (EUA 200 g/min ou > 174 mg/L) ou pela presena de insuficincia renal crnica tratada com dilise quando outras causas de proteinria ou doena renal foram afastadas. O diagnstico de cardiopatia isqumica foi baseado na presena de angina ou possvel infarto segundo o questionrio cardiovascular da Organizao Mundial da Sade, e/ou presena de alteraes eletrocardiogrficas e/ou presena de anormalidades perfusionais no exame de cintilografia miocrdica.
Avaliao Laboratorial A EUA foi quantificada por meio da tcnica de imunoturbidimetria em amostras de urina de 24h com tempo marcado (trs amostras por paciente com 15 dias de intervalo). A presena de micro- ou macroalbuminria foi confirmada por pelo menos duas medidas com intervalo de trs a seis meses. Os nveis de glicose foram determinados pelo mtodo da glicose oxidase, a creatinina pela reao de Jaff, a glicohemoglobina pela tcnica de HPLC troca inica (valores de referncia: 4,7 6,0%), os triglicerdeos e os nveis de colesterol por mtodos enzimticos.
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Anlises Moleculares As amostras de DNA foram encaminhadas ao Laboratrio de Gentica Molecular Humana do Centro de Pesquisas em Cincias Mdicas da Universidade Luterana do Brasil (ULBRA), para a realizao das anlises moleculares. Para a genotipagem do polimorfismo 308G>A no gene do TNF-, as amostras de DNA foram amplificadas por PCR, utilizando-se primers e condies de amplificao especficos, como descrito na literatura (WILSON et al., 1992). Aps a confirmao da amplificao, os produtos de PCR foram submetidos digesto com a enzima de restrio NcoI, segundo as instrues do fabricante (New England Biolabs Inc., Beverly, EUA). Os produtos da digesto foram separados por eletroforese em gel de poliacrilamida 8%, corados com nitrato de prata e diretamente visualizados. Na presena do alelo G o fragmento amplificado de 107 pb permanece intacto, ao passo que na presena do alelo A o produto amplificado clivado em dois fragmentos menores (87 pb e 20 pb).
A Tabela 1 apresenta um resumo das caractersticas clnicas e laboratoriais dos pacientes com DM2, de acordo com a presena ou ausncia de RD. Os pacientes com RD no diferiram dos indivduos sem esta complicao em relao idade, ao sexo e ao tempo de durao do DM. Porm, os pacientes com RD tinham uma prevalncia maior de uso de insulina, nefropatia diabtica e cardiopatia isqumica, assim como apresentaram nveis mais elevados de creatinina e nveis mais reduzidos de colesterol HDL do que os pacientes sem RD.
Tabela 1 - Caracterizao clnica dos pacientes com DM2 de acordo com a presena de RD.
Controles (n = 62) Idade (anos) Homens (%) Durao do DM2 (anos) Hipertenso (%) Histria de tabagismo (%) Glico-hemoglobina (%) 61,5 8,3 41,9 16,2 5,5 67,7 52,5 6,2 1,6 25,8 0,8 (0,5-3,0) 210 38 45 12 145 (59-462) 32,3 36,2 Casos (n = 170) 60,0 9,2 54,7 14,9 8,6 76,0 45,2 6,6 1,8 51,2 0,9 (0,6-8,5) 216 47 41 11 158 (43-747) 61,0 53,7 p 0,267 0,116 0,069 0,271 0,413 0,090 0,001* 0,005* 0,388 0,028* 0,480 < 0,001* 0,042*
Anlise Estatstica As comparaes entre os casos e controles foram realizadas utilizando-se o teste t de Student, para as variveis normalmente distribudas, ou teste de Mann-Whitney U, para as variveis sem distribuio normal, usando o pacote estatstico SPSS (SPSS para Windows, verso 10.0). As freqncias allicas foram determinadas pela contagem direta dos alelos e o equilbrio de Hardy-Weinberg foi verificado por meio do teste de qui-quadrado. As distribuies gnicas e genotpicas entre os casos e controles foram avaliadas por meio do teste de qui-quadrado e do teste exato de Fisher. O teste de qui-quadrado tambm foi utilizado para a comparao das variveis qualitativas entre os grupos de indivduos. Um valor de p < 0,05 foi considerado como estatisticamente significativo.
Uso de insulina (%) Creatinina srica (mg/dL) Colesterol total (mg/dL) Colesterol HDL (mg/dL) Triglicerdeos (mg/dL) Nefropatia diabtica (%) Cardiopatia isqumica (%)
Os dados esto demonstrados como mdia D.P ., mediana (amplitude), ou percentual. Os valores de p foram calculados utilizando-se os testes t de Student, Mann-Whitney U ou . n = nmero de indivduos. A histria de tabagismo foi considerada positiva para fumantes atuais e ex-fumantes. * p < 0,05 para a comparao entre casos e controles.
As freqncias genotpicas obtidas para o polimorfismo 308G>A nos pacientes com RD no diferiram significativamente daquelas observadas nos pacientes sem esta complicao (Tabela 2), e
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estavam de acordo com as esperadas pelo Equilbrio de Hardy-Weinberg em ambos os grupos de pacientes. Da mesma forma, a freqncia do alelo 308A foi similar entre os pacientes com ou sem RD (Tabela 2) e no diferiu da freqncia encontrada em outras populaes de origem caucaside (LEE et al., 2005; KRAYENBUEHL et al., 2007; VISENTAINER et al., 2008). A ausncia de associao do polimorfismo 308G>A no gene do TNF- com a presena de RD observada no presente trabalho est de acordo com os resultados obtidos em japoneses (YOSHIOKA et al., 2006), suos (KRAYENBUEHL et al., 2007) e escandinavos (LINDHOLM et al., 2008) com DM2.
Tabela 2 - Freqncias genotpicas e allicas obtidas para o polimorfismo 308G>A nos pacientes com DM2, de acordo com a presena de RD.
Gentipos, n (%) GG GA AA G A Controles (n = 62) 50 (80,7) 11 (17,7) 1 (1,6) 0,90 0,10 Casos (n = 170) 129 (75,9) 35 (20,6) 6 (3,5) 0,86 0,14 p 0,647 0,428
et al., 2007; PRASAD et al., 2007; LINDHOLM et al., 2008). Por outro lado, os poucos estudos que analisaram o papel deste polimorfismo na RD obtiveram resultados consensuais, apontando a ausncia de associao entre o polimorfismo 308G>A e a presena desta complicao em pacientes com DM2 (YOSHIOKA et al., 2006; KRAYENBUEHL et al., 2007; LINDHOLM et al., 2008). Uma possvel explicao que, talvez, o TNF- no apresente um grande efeito na cascata de eventos que levam disfuno endotelial que ocorre na RD, como outros mediadores inflamatrios, como a protena C reativa e a interleucina-6 (KING, 2008). Alm disso, com exceo do estudo de Lindholm et al. (2008) em escandinavos, os dois outros estudos prvios realizados com o intuito de investigar a associao entre o polimorfismo 308G>A e a RD foi constitudo por apenas 76 (KRAYENBUEHL et al., 2007) e 251 (YOSHIOKA et al., 2006) pacientes com DM2. Considerando que este polimorfismo possa ter um efeito pequeno (mas significativo) no desenvolvimento da RD e que o alelo 308A apresenta uma baixa freqncia na populao, plausvel supor que os estudos realizados at o momento, incluindo o presente trabalho, caream de poder estatstico suficiente para demonstrar tal relao. Por exemplo, o presente estudo apresentou um poder de aproximadamente 76% de detectar uma associao entre o alelo 308A e a RD com uma razo de chances (RC) de 2,5, mas apenas 49% de observar uma associao com RC = 2,0.
Alelos
As comparaes entre os casos e os controles foram feitas utilizando-se os testes de ou exato de Fisher. n = nmero de indivduos.
Desde que os estudos funcionais demonstraram que o polimorfismo 308G>A modula a expresso do gene do TNF- (ABRAHAM e KROEGER, 1999), e que o aumento na expresso desta citocina contribui para o desenvolvimento da resistncia insulina (KING, 2008) e da disfuno endotelial caracterstica das complicaes crnicas do DM2 (KERN, 2007; ADAMIS e BERMAN, 2008; KING, 2008), vrios autores passaram a investigar a possvel relao entre o polimorfismo 308G>A e o desenvolvimento de nefropatia diabtica, com resultados bastante contraditrios (BURACZYNSKA et al., 2004; LEE et al., 2005; WANG et al., 2005; BABEL et al., 2006; KRAYENBUEHL
CONCLUSO
Os dados obtidos no corroboram a hiptese de que o polimorfismo 308G>A no gene do TNF- esteja relacionado com a presena da RD em pacientes com DM2. Porm, considerando o
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tamanho amostral estudado at o momento, ainda no possvel avaliar adequadamente o papel deste polimorfismo na patognese da RD.
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AGRADECIMENTOS
Os autores agradecem a todas as pessoas que participaram direta ou indiretamente deste estudo e ao CNPq, pelo auxlio financeiro.
REFERNCIAS
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Estudo do polimorfismo -31C/T do gene da interleucina 1-beta em pacientes disppticos funcionais
TSSIA FLORES RECH1 MARLIA CORREA OSRIO2 LUCIANO BASSO DA SILVA3 GUILHERME BECKER SANDER4 CARLOS FERNANDO FRANCESCONI4 LUIZ EDMUNDO MAZZOLENI4 DANIEL SIMON5
RESUMO
O papel de fatores genticos na suscetibilidade dispepsia funcional (DF) ainda no est esclarecido. A interleucina 1-beta (IL-1) uma citocina que induz e amplifica a resposta inflamatria, sendo que a inflamao na mucosa gstrica pode estar envolvida com os sintomas disppticos. O objetivo do presente estudo foi analisar a associao entre o polimorfismo -31C/T do gene da IL-1 e a DF . Foram analisados 73 pacientes disppticos, positivos para a infeco pelo Helicobacter pylori. Os resultados preliminares indicam que o polimorfismo pode estar associado ao sucesso da terapia de erradicao do H. pylori. Palavras-chave: Dispepsia funcional, interleucina 1-beta, polimorfismo gentico, sintomas disppticos, Helicobacter pylori.
1 2 3
Acadmica do Curso de Biologia/ULBRA Mestranda do PPG Diagnstico Gentico e Molecular/ULBRA Professor do Centro Universitrio FEEVALE
4 5
Mdico Gastroenterologista do Hospital de Clnicas de Porto Alegre Professor-Orientador do Curso de Biologia/ULBRA e do PPG Diagnstico Gentico e Molecular/ULBRA (daniel.simon@ ulbra.br)
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ABSTRACT
The role of genetic factors in susceptibility to functional dyspepsia (FD) remains unknown. The interleukin-1 beta (IL-1) is a cytokine which induces and amplifies the inflammatory response. Inflammation of the gastric mucosa may be related to dyspeptic symptoms. The aim of the present study was to ascertain if the polymorphism -31C/T in the promoter of the IL-1B gene is associated with FD. Seventy three dyspeptic patients, positive for Helicobacter pylori infection, were analyzed. Preliminary results indicate that the polymorphism may be associated with the success of the therapy for eradication of H. pylori. Key words: Functional dyspepsia, interleukin 1-beta, genetic polymorphism, dyspeptic symptoms, Helicobacter pylori.
INTRODUO
A dispepsia funcional definida como a presena de sintomas que tm origem na regio gastroduodenal, na ausncia de qualquer doena orgnica, sistmica ou metablica, que os justifique. Os pacientes disppticos apresentam pelo menos um desses sintomas: plenitude ps-prandial, saciedade precoce, queimao ou dor epigstrica. Os sintomas devem estar presentes nos ltimos trs meses e com o aparecimento dos sintomas seis meses antes do diagnstico (TACK et al., 2006). Estudos confirmam a heretogeneidade da dispepsia funcional, atravs da observao da associao entre distrbios fisiopatolgicos especficos e sintomas disppticos (TACK e LEE, 2005). A fisiopatologia da dispepsia funcional no totalmente conhecida, envolvendo um grande nmero de mecanismos, que podem incluir o esvaziamento gstrico atrasado, hipersensibilidade visceral, capacidade gstrica diminuda, anormalidade motora, infeco pelo Helicobacter pylori e disfunes do sistema nervoso central (BAKER, FRASER e YOUNG, 2006). A infeco pelo H. pylori e a sua relao com a dispepsia funcional ainda contraditria (TACK e
LEE, 2005). Existem algumas evidncias de que a estimulao da secreo de cido pela bactria pode causar sintomas disppticos. Pacientes positivos para a infeco pelo H. pylori tm a estimulao da secreo de cido aumentada em duas vezes e meia quando comparados com indivduos controle que no tm infeco pela bactria (OMORAIN, 2006). A prevalncia da dispepsia funcional varia consideravelmente entre as diferentes populaes. O uso de diferentes definies de dispepsia funcional tambm pode contribuir para essa discrepncia. Estudos populacionais utilizando o Consenso Roma II observam uma prevalncia de dispepsia funcional variando entre 11% e 29% (MAHADEVA e GOH, 2006). H poucos dados relativos epidemiologia da dispepsia funcional no Brasil. Estudo transversal realizado por Oliveira et al. (2006) com 3.934 indivduos moradores da cidade de Pelotas-RS, entre os anos de 1999 e 2000, demonstrou que a prevalncia da dispepsia funcional foi de 44% e de dispepsia freqente 27%. Um estudo de base populacional de abrangncia nacional avaliou a prevalncia de dispepsia no investigada no Brasil (SANDER, FRANCESCONI e MAZZOLENI, 2007). Nessa pesquisa foram entrevistados, por telefone, 1.510
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indivduos em todo o Brasil, atravs de aplicao de questionrio de sintomas disppticos. Atravs de amostras foram avaliados indivduos de 223 cidades brasileiras, que representaram 83,5 milhes de habitantes, ou aproximadamente 51% da populao de todo o pas. A idade mdia da populao avaliada foi de 37,6 anos e a prevalncia de sintomas disppticos foi de 40,9%. A prevalncia em homens foi de 33,2% e nas mulheres de 45,6%. Indivduos mais jovens, do sexo feminino e com menor escolaridade apresentaram maiores prevalncias de dispepsia. Existem molculas responsveis pela induo e amplificao da resposta imune e inflamatria, chamadas de citocinas, que so produzidas pelas clulas do sistema imune adquirido (linfcitos) e tambm pelas clulas do sistema imune inato (macrfagos, mastcistos, moncitos) (GORCZYNSKI e STANLEY, 2001). Duas citocinas de vertebrados so especialmente importantes na induo de respostas inflamatrias o fator de necrose tumoral- (TNF-) e a interleucina-1 (IL-1) (ALBERTS et al., 2004). O agrupamento gnico da IL-1 est localizado no cromossomo 2q e contm trs genes: IL-1 alfa (IL-1A), IL-1 beta (IL-1B) e IL-RN, que codificam, respectivamente, as citocinas pr-inflamatrias IL1, IL-1 e o seu receptor antagonista endgeno, IL-1ra (EL-OMAR et al., 2000). A IL-1 uma das mais importantes citocinas pr-inflamatrias e tem como principal funo mediar a resposta imune e inflamatria do hospedeiro na imunidade inata, sendo produzida principalmente pelos macrfagos (ABBAS, LICHTMANN e POBER, 2000). Estudos associaram os polimorfismos -511T/C e -31C/T, localizados na regio promotora do gene da IL-1, com o aumento de risco de desenvolver gastrite, lcera pptica, cncer gstrico, outros cnceres na regio no crdia e infeco pelo H.
pylori (EL-OMAR et al., 2000; MACHADO et al., 2001; HWANG et al., 2002; FURUTA et al., 2004; KAMANGAR et al., 2006). No existem estudos que associam esses polimorfismos com os sintomas disppticos. A IL-1 possui um papel muito importante na induo e amplificao da resposta inflamatria. A inflamao na mucosa gstrica pode estar envolvida na gerao dos sintomas disppticos. O alelo C do polimorfismo -31 C/T do gene IL-1B foi associado com o aumento da expresso da IL-1, podendo ter como conseqncia o aumento da resposta inflamatria (EL-OMAR et al., 2000). O objetivo do presente estudo foi analisar se existe associao entre o polimorfismo -31 C/T do gene IL-1B e os sintomas disppticos, bem como correlacionar os gentipos do polimorfismo com o sucesso da terapia de erradicao do H. pylori em pacientes com dispepsia funcional.
MATERIAL E MTODOS
Pacientes Foram analisados pacientes com dispepsia funcional participantes do estudo clnico Evoluo dos sintomas da dispepsia funcional aps a erradicao do Helicobacter pylori em pacientes com diferentes achados endoscpicos: ensaio clnico randomizado, duplo-cego, controlado com placebo, com 12 meses de seguimento HEROES Trial (Helicobacter Erradication Relief Of Dyspetic Symptoms) do Hospital de Clnicas de Porto Alegre (HCPA). Este estudo clnico possui como autores os mdicos Luis Edmundo Mazzoleni, Carlos Fernando Francesconi e Guilherme Becker Sander. Os pacientes do estudo foram avaliados no momento de incluso (basal), 4, 8 e 12 meses aps trmino dos medicamentos
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da pesquisa. A avaliao basal j foi realizada em todos os pacientes, sendo que as reconsultas esto em andamento.
GRUPO B2 (Grupo Controle): omeprazol 30mg e placebos dos antibiticos.
Anlise gentica Delineamento do estudo e randomizao Foram estudados dois extratos de pacientes, que foram divididos pelos achados endoscpicos e uso de medicaes: Extrato A pacientes disppticos funcionais H. pylori positivos que apresentavam exames endoscpicos normais ou com apenas gastrites ou duodenites enantematosas, e que no eram usurios de AINES/AAS Extrato B pacientes disppticos funcionais H. pylori positivos que apresentavam exames endoscpicos com gastrites/duodenites erosivas e/ou que eram considerados usurios de AINES/AAS. Os pacientes dos dois extratos (A e B) que preenchiam os critrios de seleo foram randomizados em blocos de dez em proporo de 1:1 para cada um dos extratos de pacientes, de acordo com lista de computador, para receberem um dos seguintes esquemas: EXTRATO A dividido em: GRUPO A1 (Grupo Antibitico): omeprazol 30mg, amoxicilina 1000mg, claritromicina 500mg (Omepramix) GRUPO A2 (Grupo Controle): omeprazol 30mg e placebos dos antibiticos. EXTRATO B dividido em: GRUPO B1- (Grupo Antibitico): omeprazol 30mg, amoxicilina 1000mg, claritromicina 500mg (Omepramix) Amostras de sangue total foram coletadas dos pacientes com dispepsia funcional e utilizadas para extrao de DNA conforme descrito por Lahiri e Nurnberger (1991). A genotipagem do polimorfismo -31 C/T da IL-1 foi realizada atravs da reao em cadeia de polimerase (PCR, do ingls, Polymerase Chain Reaction), utilizando os primers 5-AGAAGCTTCCACCAATACTC-3 e 5-AGCACCTAGTTGTAAGGAAG-3, conforme descrito por Yang et al. (2004). As condies de amplificao da PCR consistiram na desnaturao inicial da dupla fita de DNA a 94C por 3 minutos, seguido de 35 ciclos de 94C por 10 segundos, 55C por 30 segundos e 72C por 30 segundos e uma extenso final 72C por 5 minutos. As concentraes utilizadas nas reaes foram MgCl 2 1,5mM, primers 0,5 uM, dNTPs 0,17 mM e Taq DNA polimerase 1U. Aps a PCR, as amostras foram clivadas com a enzima AluI. O tamanho dos fragmentos gerados aps a clivagem foram de 234 e 5 pares de bases (pb) para o gentipo CC, 137, 97 e 5 pb para o gentipo TT e 234, 137, 97 e 5 pb para gentipo CT. Os fragmentos foram separados em gel de poliacrilamida 10%, corado com nitrato de prata.
Aspectos ticos Este projeto foi submetido avaliao ticolegal e de mrito dos Comits de tica e Pesquisa do Hospital de Clnicas de Porto Alegre (HCPA) e
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da Universidade Luterana do Brasil (ULBRA). O estudo clnico foi aprovado pelo Grupo de Pesquisa e Ps-Graduao do HCPA (protocolo nmero 05-422). Os estudos moleculares foram aprovados pelo Grupo de Pesquisa e Ps-Graduao do HCPA (protocolo nmero 07-590) e pelo Comit de tica em Pesquisa da ULBRA (protocolo nmero 2007376H).
Tabela 1 - Caractersticas clnicas e demogrficas da populao estudada.

IDADE, MDIA DESVIO PADRO SEXO, N (%) ESCOLARIDADE, N (%) PACIENTES DISPPTICOS FUNCIONAIS 49 13 ANOS MASCULINO 17 (23,3) FEMININO 56 (76,7) FUNDAMENTAL 26 (36,1) MDIO 24 (33,3) SUPERIOR COMPLETO 22 (30,6) NUNCA FUMOU 43 (59,7) FUMA ATUALMENTE 9 (12,5) EX-FUMANTE 20 (27,8) NUNCA BEBEU 66 (91,7) BEBE ATUALMENTE 0 (0) BEBIA 6 (8,3) 10,7 8,2 SNDROME DO DESCONFORTO PS-PRANDIAL 30 (41,7) SNDROME DE DOR EPIGSTRICA 36 (50) OUTROS 6 (8,3) DOR 36 (50) NUSEAS 4 (5,5) VMITO 1 (1,4) DISTENSO 29 (40,3) SACIEDADE PRECOCE 1 (1,4) OUTROS 1 (1,4)
TABAGISMO, N (%)
Anlises estatsticas Variveis contnuas foram expressas como mdias e desvios padro. Variveis qualitativas foram expressas como percentagens e comparaes realizadas usando o teste exato de Fisher ou o teste de qui-quadrado, conforme indicao. Todos os testes foram bi-caudais. P<0,05 foi considerado estatisticamente significativo.
BEBIDAS ALCOLICAS, N (%)
PADYQ, MDIA DESVIO PADRO TIPO DE DISPEPSIA, N (%)
PRINCIPAL SINTOMA, N (%)
Esse trabalho apresenta resultados parciais das anlises moleculares dos 407 pacientes participantes do ensaio clnico HEROES. At o momento 73 pacientes foram genotipados para o polimorfismo -31C/T do gene IL-1B. O ensaio clnico encontrase em andamento e ser finalizado no ms de maio de 2009, com a revelao do tratamento prescrito a cada paciente. As anlises moleculares sero realizadas para todos os pacientes e a partir do seu encerramento sero realizadas correlaes com os dados clnicos. Na Tabela 1 so apresentados os dados clnicos e demogrficos dos 73 pacientes analisados at o momento.
Os sintomas disppticos foram analisados atravs do questionrio PADYQ (do ingls, Porto Alegre Dyspeptic Symptoms Questionnaire) que avalia os sintomas de dor no abdmen superior, inchao no abdmen superior e nusea quanto intensidade, durao e freqncia (SANDER et al., 2004). Sintomas como vmito e saciedade precoce foram avaliados quanto freqncia. O ndice do PADYQ foi comparado entre os pacientes com gentipos CC + CT versus pacientes com gentipo TT. A mdia e desvio padro obtida entre os gentipos CC + CT foi de 11,2 9,0, no diferindo significativamente dos pacientes com o gentipo TT (10,0 11,0; p>0,05). Com relao aos achados endoscpicos observouse que nos pacientes analisados 27 (37%) apresen-
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tavam gastrite enantematosa, 17 (23,3%) gastrite erosiva plana, 13 (17,8%) gastrite erosiva elevada, 2 (2,7%) duodenite enantematosa, 4 (5,5%) duodenite erosiva, 1 (1,4%) lcera gstrica e 22 (30,1%) apresentavam outras alteraes. Nenhum dos pacientes apresentou alteraes como gastrite hemorrgica, gastrite atrfica, pregas hiperplsicas e lcera duodenal. Na Tabela 2 so apresentados os dados clnicos de 47 pacientes avaliados quanto o grau de inflamao, atividade inflamatria, atrofia, infeco pelo H. pylori e metaplasia intestinal. Foram analisadas 3 bipsias do antro, 2 da incisura angular e 3 do corpo gstrico. O nmero amostral de 47 pacientes avaliados quanto inflamao est relacionado ao fato de que os dados aqui apresentados so aqueles relativos avaliao realizada 4 meses aps o incio do tratamento (segunda consulta), e alguns pacientes ainda no tiveram todos os dados clnicos desta consulta analisados.
Tabela 2 - Caractersticas clnicas observadas nas endoscopias digestivas dos pacientes disppticos funcionais estudados (n=47).
INFLAMAO ATIVIDADE
INFLAMATRIA
so semelhantes s freqncias encontradas em estudos em populaes caucasides (KAMANGAR et al., 2006).

Tabela 3 - Freqncias allicas e genotpicas do polimorfismo -31C/T do gene IL-1B nos 73 pacientes disppticos funcionais estudados.
FREQNCIAS ALLICAS C T FREQNCIAS GENOTPICAS CC CT TT
N
43 59
N
% 36 64 % 19 40 41
14 29
ANTRO AUSENTE LEVE MODERADA
12 17 16 2 13 24 10 0
25 11 10 1 29 13 4 1
ATROFIA DENSIDADE DE H. PYLORI 30 28 16 10 1 5 4 43 4 26 16 4 1
METAPLASIA AUSENTE 5 PRESENTE 42 AUSENTE 47 PRESENTE -
SEVERA CORPO AUSENTE LEVE MODERADA
SEVERA INCISURA
ANGULAR
AUSENTE LEVE MODERADA SEVERA
9 19 17 2
25 12 10 0
36 11 -
28 12 6 1
AUSENTE 42 PRESENTE 5
As freqncias allicas e genotpicas do polimorfismo -31C/T do gene IL-1B analisadas na amostra esto representadas na Tabela 3. A populao encontra-se em equilbrio de Hardy-Weinberg e as freqncias allicas e genotpicas encontradas
A proporo de pacientes que eliminou o H. pylori e apresentou os gentipos CC e CT foi de 65,1% enquanto 40,0% dos pacientes que apresentaram o gentipo TT tambm eliminaram a bactria. Esta diferena foi tangencial ao limite de significncia (P=0,055; OR=2,8; 95% CI 0,978,21), indicando que o polimorfismo parece estar associado ao sucesso da terapia de erradicao da bactria. Estudo realizado por Wang et al. (1999) demonstrou que antes do terapia para a erradicao do H. pylori foi observada uma relao significativa positiva entre a quantidade de RNA mensageiro da IL-1 na mucosa gstrica dos pacientes que tinham a infeco pela bactria. Aps o tratamento, redues significativas na quantidade de RNAm da IL-1 foram observados nos pacientes que erradicaram o H. pylori, enquanto no foram observadas mudanas significativas nos pacientes sem erradicao. Outro estudo sobre a erradicao do H. pylori demonstrou que o polimorfismo -511T/C no gene da IL-1B est associado com o sucesso da terapia (FURUTA et al., 2004). Estudos prvios mostram que os polimorfismos -511T/C e -31C/T esto em completo desequilbrio de ligao de uma forma reversa, ou seja, o alelo -511T sempre encontrado associado ao alelo -31C e o alelo -511C sempre observado na presena do alelo -31T (EL-OMAR
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et al., 2000; HAMAJIMA et al., 2001; HWANG et al., 2002). Desta forma, a anlise de apenas um polimorfismo suficiente para determinar os gentipos de ambos os polimorfismos. Estudos reportam a existncia de predisposio gentica na gerao dos sintomas disppticos. O principal gene estudado o gene GNB3, que codifica a subunidade 3 da protena-G heterotrimrica (composta de trs subunidades - , , e ). Este gene apresenta o polimorfismo C825T, localizado no xon 10, no qual o alelo T foi associado com o splicing alternativo e aumento da transduo de sinal intracelular, o que intensifica a ativao da protena-G e aumenta a resposta celular e fisiolgica (BAUMGART et al., 1999). Os indivduos homozigotos 825C so caracterizados pela diminuio da resposta de transduo de sinal celular, o que pode levar a anormalidades como alteraes na funo sensorial e motora, observadas em pacientes com dispepsia no investigada ou sndrome do intestino irritvel (HOLTMANN et al., 2000). Outros genes estudados foram os genes da cicloxigenase (COX-1), do receptor CD14, da colecistoquinina (CCK) e da subunidade A do receptor 5-HT3 de serotonina (NIESLER et al., 2001; CAMILLERI et al., 2006; ARISAWA et al., 2008; LELYVELD et al., 2008; TAHARA et al., 2008). O pequeno nmero de estudos realizados indica a necessidade de maiores esforos visando a determinao das bases genticas da dispepsia funcional.
cional. O estudo encontra-se em andamento e ser finalizado com a revelao do tratamento feito por cada paciente includo no ensaio clnico. Correlaes dos gentipos do polimorfismo com sintomas disppticos e outras variveis clnicas sero realizadas aps o encerramento do ensaio clnico.
REFERNCIAS
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CONSIDERAES FINAIS
Os resultados do presente estudo indicam que o polimorfismo -31C/T do gene IL-1B pode estar associado ao sucesso da terapia de erradicao do Helicobacter pylori em pacientes com dispepsia fun-
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Identificao de remanescentes de roedores de um abrigo sob rocha do Nordeste do RS: implicaes paleoambientais
PAULO RICARDO DE OLIVEIRA ROTH1 DIEGO MARQUES HENRIQUES JUNG2 ALEXANDRE UARTH CHRISTOFF3
RESUMO
Quase a totalidade dos vestgios de fauna do nosso Estado so encontrados por intermdio de pesquisas arqueolgicas. Nestas amostras tm sido representativa a quantidade de ossos e dentes de pequenos animais, principalmente de micro mamferos tais como: roedores, marsupiais e morcegos. Daremos destaque aos primeiros por sua freqncia de ocorrncia. O estudo deste tipo de fauna tem se mostrado importante no s para o levantamento da riqueza pretrita de roedores, mas tambm para reconstrues paleoambientais. Apresentamos aqui os resultados prvios obtidos atravs da anlise de uma amostra osteolgica crnio-dentria resgatada do abrigo sob rocha, stio arqueolgico RS-S-395: Deobaldino Marques em Santo Antnio da Patrulha, Brasil. Palavras-chave: Zooarqueologia, Holoceno, Echimyidae, Dicolpomys, Umb.
ABSTRACT
Almost all the traces of wildlife in our state are found through archaeological research. In these samples the amount of bones and teeth of small animals has been representative, mainly of little mammals such as: rodents,
1
Acadmico do Curso de Cincias Biolgicas/ULBRA Bolsista PROICT/ULBRA Professor do Curso de Cincias Biolgicas/ ULBRA
Professor - Orientador do Curso de Cincias Biolgicas/ ULBRA (auchrist@ulbra.br)
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marsupials and bats. We will give importance to the first ones for its frequency of occurrence. The study of this type of fauna has shown importance not only for the knowledge of the diversity of rodents species on the past but to make inferences about paleoenvironmental reconstruction. We provide our previous results here from a skull-dental osteologic sample from shelter under rock, at archaeological site RS-S-395: Deobaldino Marques in Santo Antonio da Patrulha, Brazil. Key words: zooarcheology, Holoceno, Echimyidae, Dicolpomys, Umbu. de pesquisa, tais como palinologia, antracologia e sedimentologia, contribuem para compor o cenrio paleoambiental de um perodo, assim como um modelo de mudana climtica recente. O conhecimento dos habitats dos animais se faz importante para o reconhecimento da vegetao, e sendo esta o espelho do clima (RAMBO, 1956), possibilita inferncias a cerca das mudanas do clima at presente. Os frgeis vestgios orgnicos de pequenos vertebrados pr-histricos so raros, uma vez que uma srie de fatores que privilegiem a conservao tem de ocorrer, enquanto fatores negativos a sua conservao precisam inexistir ou ser minimizados. O interior de cavernas, grutas e abrigos sob rocha so, talvez, o principal ambiente que contribui na formao deste tipo de registro, pois oferece proteo contra agentes tafonmicos destrutivos, tais como, umidade ou calor excessivo, transporte e pisoteio por outros animais (ANDREWS, 1997). As regies de encosta do planalto riograndense apresentam inmeros locais que representariam stios de conservao em potencial. Dentro de uma rea de 216 Km nesta formao geolgica, Dias (2003) contabilizou 50 abrigos sob rocha na regio do Alto Rio dos Sinos. Dentre os trabalhos com enfoque paleoecolgico realizados atravs da anlise vestgios de pequenos mamferos destacamos o de Vigne (1996) que conseguiu caracterizar a comunidade e demonstrar alteraes na fauna ocorrida durante boa parte dos
INTRODUO
A ordem Rodentia agrupa 42% das espcies de mamferos, correspondendo a 2277 espcies dentre os 5416 mamferos conhecidos (WILSON e REEDER, 2005). Os roedores esto presentes em quase todos os tipos de habitat do globo. Esta diversidade taxonmica reflete-se em sua adaptao a nichos ecolgicos bem definidos, e atravs disto pode-se obter informaes paleoecolgicas (MORENOGARCIA et al., 2003). Andrews (1990) entende que a anlise de remanescentes sseos configurase num mtodo importante para interpretar a ecologia ou habitats existentes no tempo em que aqueles foram incorporados ao sedimento. Desta forma, partindo de exemplos bem documentados que mostram a relao entre as espcies atuais e seus habitats ou zonas climticas, torna-se possvel inferir a paisagem ou estrutura do habitat onde um txon existiu. Exigncias ecolgicas de cada animal se refletem na presena de caracteres adaptativos, relacionados ao seu habitat. O estudo do conjunto dos caracteres crnio-dentrios a principal metodologia para a identificao taxonmica de mamferos, incluindo roedores, quando no se dispe partes moles preservadas. A abordagem multidisciplinar, incluindo diferentes tipos de evidncias a melhor forma de estudo do paleoambiente (QUATTROCCHIO et al. 2008). Portanto, estudos da paleofauna de pequenos mamferos quando aliados aos resultados de outros campos
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aproximadamente 2500 anos na parte norte da Crsega, fazendo a associao destas mudanas com a introduo de espcies exticas, desflorestamento e atividades agrcolas dos colonizadores. Na Amrica do Sul, Voglino e Pardias (2005) apresentam evidncias de mudanas climticas paulatinas e detalhes das mudanas ambientais da Provncia de Buenos Aires atravs da presena de espcies de roedores com associao ambientes diferentes dos atuais. Vucetich et al. (2005) especulam que a migrao sulina de txons de roedores brasileiros talvez tenha sido possibilitada por pulsos quentes ocorridos onde hoje se encontra o Pampa. Estes pulsos quentes voltam a ser tema para Quattrocchio et al. (2008) que identificam a ocorrncia deste fenmeno climtico para o sul da Amrica do Sul durante o Pleistoceno final, o que explica a ocorrncia de fragmentos de um roedor octodontdeo e um tayassudeo no sudoeste argentino. Reunindo as informaes obtidas no estudo dos restos faunstico com dados de palinologia e sedimentologia, Quattrocchio et al. (2008) obtiveram elementos para descrever o sudoeste argentino como uma rea de ectone, bastante sensvel a oscilaes climticas. Esta teria passado por perodos de aridez durante o Pleistoceno tardio, aumento da umidade e aquecimento durante a transio Pleistoceno-Holoceno e instabilidade climtica no Holoceno mdio, mostrando curtos perodos semiridos e episdios quentes e midos. No Brasil, estudos desta natureza parecem estar apenas iniciando. Contudo, Hadler et al. (2008) e Rodrigues (2008) interpretam a fauna de mamferos do Rio Grande do Sul como uma mescla da fauna pampeana com txons de caractersticos de outros biomas brasileiros, havendo momentos em que txons de um dos grupos prevalecem sobre outros. Colocam ainda que as mudanas climticas Holocnicas no nordeste do Estado foram graduais, onde os pulsos climticos relatados para
a Argentina talvez no tivessem ocorrido ou foram de curta durao, possibilitando um perodo longo de coexistnia entre a floresta ombrfila, reas de campo e matas de galeria, formando um cenrio florstico em mosaico. Neste estudo apresentamos resultados parciais do material analisado procedente do abrigo sob rocha em Santo Antnio da Patrulha/RS stio arqueolgico RS-S-395: Deobaldino Marques. Os elementos crnio-dentrios de pequenos roedores encontrados nessa amostra foram identificados a categoria taxonmica mais especfica possvel, o que permitiu registrar a ocorrncia de quatro txons: Phyllomys sp., Euryzygomatomys sp., Dicolpomys aff fossor e Holochilus sp.
MATERIAL E MTODOS
O stio arqueolgico Deobaldino Marques localiza-se em Santo Antnio da Patrulha (UTM: 22J 549/750 - 6707/650), RS, na localidade de Bom Retiro (Figura 1A), com caracterstica de abrigo por se tratar de abertura ocasionada por processos erosivos em uma meia encosta rochosa de arenito da formao Botucatu. Situa-se a aproximadamente 50 metros acima do nvel do mar em uma elevao de 150 metros, cercado por extensa plancie aluvial dos tributrios do Rio dos Sinos. Dentre eles se destacam os arroios Grande e Pinheiros que confluem a aproximadamente 1,5 Km da elevao em questo (DIAS, 2003). O abrigo sob rocha apresenta uma abertura de 46 metros com orientao de 310 Norte, portanto, na vertente noroeste do morro. Possui em mdia 8,5 m de altura e profundidade mxima de 17 m (DIAS, 2003). A rea de estudo est includa no domnio da Floresta Ombrfila Densa da encosta Atlntica e
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atualmente composta por um mosaico de resqucios de Mata Atlntica, campos, matas primrias e reas modificadas por culturas de arroz nas reas mais baixas. O clima caracterizado como subtropical
com temperatura mdia anual de 20C. cortado por duas bacias hidrogrficas: A primeira a do rio dos Sinos e a segunda situa-se na rea plana do norte do municpio e alimentada pelo rio Gravata.
Figura 1 - A) localizao de Santo Antnio da Patrulha/ RS. B) reproduo parcial da carta da rea da bacia do Alto Rio dos Sinos. Stios arqueolgicos: 1 RS-S-327: Sango; 2 RS-S-337: Monjolo; 3 RS-S-395: Deobaldino Marques. (Modificado de Dias, 2003).
Para inferir uma idade relativa do stio Deobaldino Marques foi feita uma aproximao com informaes de dois stios prximos, com dataes disponveis: os abrigos sob rocha RS-S-337 Monjolo e RS-S-327 Sango (Figura 1B). Ambos apresentam contexto habitacional e tipos de artefatos lticos semelhantes, caractersticos da tradio indgena mais antiga conhecida no Estado e a mesma identificada como freqentadora do stio em estudo: a tradio Umb. O abrigo sob rocha RS-S-337: Monjolo, dista a aproximadamente 4 Km do stio Deobaldino Marques. Sua datao, a partir de amostra de carvo retirada de 90 cm de profundidade,
apresentou 7330 AP como data mais antiga, com calibrao de 2 sigmas, gerando 8160 AP e 7960 AP . Distante a cerca de 8 Km do stio Deobaldino Marques, o abrigo sob rocha Sango apresentou datao entre 8800 AP e 3730 AP (DIAS, 2003). Os umbs provavelmente viviam em pequenos grupos familiares, migravam ciclicamente entre um grande nmero de abrigos, e andavam pela regio do Alto Vale do Rio dos Sinos na busca de recursos alimentares e matrias-primas (DIAS, 2003). A contemporaneidade da habitao humana com a deposio do material faunstico estudado fica
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evidente visto que as escavaes mostraram ao longo de toda a estratigrafia a associao entre os materiais arqueolgicos e os remanescentes animais. Alm disso, dentre estes remanescentes, descobriram-se alguns ossos de pequenos roedores com marcas de queima, indicando contemporaneidade entre a presena humana no local e a formao do depsito no interior do abrigo. A coleta do material ocorreu no perodo de 18/02/2000 21/02/2000, ficando este armazenado no Museu de Arqueologia do Rio Grande do Sul MARSUL, em Taquara/ RS, desde as escavaes at o inicio deste trabalho. A amostra utilizada neste estudo compreende restos de roedores (766 hemimandbulas e 375 fragmentos de sincrnio) no fossilizados inseridos dentro do pacote amostral de 6058 remanescentes sseos que rene elementos anatmicos de micro mamferos no voadores, encontrados em distintos estgios de conservao. O pacote amostral provm de dois poos-testes
(quadrculas) escavados no interior do abrigo em nveis artificiais de controle de 10 cm (Figura 2): - C3: Posicionada junto a parede leste do abrigo. Apresenta dimenses de 1 x 1 metro com profundidade mxima de 70 cm. Sedimentao arenosa homognea com colorao marrom. Apresentou fragmentos de lascamento de basalto (DIAS, 2003). Resgatou-se 270 remanescentes de roedores e marsupiais. - C7/D7: Distam 2 metros da parede leste. Apresenta dimenses de 1 x 2 metros com profundidade mxima entre 80 cm e 1 metro . Apresentou sedimentao semelhante a C3, com grande teor de umidade. O material arqueolgico ocorreu em baixa densidade por toda a estratigrafia. Resgataram-se duas pontas de projtil que caracterizam a tradio Umb (DIAS, 2003). Foram recuperados 5788 remanescentes de roedores e marsupiais.
Figura 2 - Croqui do stio arqueolgico RS-S-395, mostrando o posicionamento dos dois poos-testes escavados: C3 e C7/D7. (Modificado de Dias, 2003).
Cada camada de solo de 10 cm foi retirada e peneirada e, ainda em campo, os ossos encontra-
dos foram previamente separados e etiquetados de acordo com a estrutura anatmica, quadrcula e
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nvel. Estas informaes foram obtidas a partir da ficha de registro do stio arqueolgico (DIAS, 2003; Andr Jacobus com. pess.). As estruturas anatmicas pertencentes micro mamferos foram destacadas do total recolhido do stio, que apresentava remanescentes de outros grupos de vertebrados. Estas foram organizadas em grupos de acordo com a estrutura anatmica e o nvel da quadrcula a que pertencem. O material foi limpo com pincel, sendo retiradas todas as concrees, com finalidade de identificar possveis marcas de corte (antrpicas) ou de predadores (BERWICK, 1975; REITZ e WING, 1999). Os elementos osteolgicos foram registrados em fichas (BERWICK, 1975), onde foram anotadas informaes como nvel e quadrcula de procedncia, morfogrupo a que foi incorporada, lateralidade, presena de molariformes e incisivos, marcas tafonmicas e elementos ausentes devido a quebra. O processo de identificao dos remanescentes tem se dado pela comparao de caractersticas sseas e dentrias com descries anatmicas das espcies de roedores e exemplares depositados na coleo de mamferos do Museu de Cincias Naturais da ULBRA MCNU em Canoas/ RS. Desta forma tem sido possvel selecionar os taxa com representao na amostra analisada. Aps a identificao do grupo taxonmico representado, buscou-se informaes sobre habitat atual dos animais em pesquisa bibliogrfica. A descrio da face de ocluso dos dentes de roedores Hystricomorpha (Echimyidae), seguiu Leite (2003) e Vucetich e Verzi (1991) e de roedores Myomorpha (Cricetidae: Sigmodontinae) seguiu Percequillo (2006).
Designa-se molar superior como M e inferior, m e numerados de 1 3. Enquanto, designa-se o quarto pr-molar superior PM4 e inferiores pm4.
Relatamos a seguir os grupos taxmicos identificados, apontando as caractersticas diagnsticas. Assim como, informaes a respeito de seus hbitos, importncia ecolgica e do tipo de habitat que ocupam no presente. Sub-ordem HYSTRICOMORPHA Brandt, 1855 Famlia ECHIMYIDAE Gray, 1825 Phyllomys Lund, 1839 Phyllomys sp. Foram encontrados nos respectivos nveis da quadrcula C7/D7: 00 a 10 cm 3 fragmentos de hemimandbula esquerda com pelo menos pm4 e m1 no havendo m2 em uma das peas apenas; 1 fragmento de hemimandbula esquerda com pm4, m1 e m2; 3 fragmentos edntulos de hemimandbula direita. Nenhuma possua incisivos. 10 a 20 cm 1 fragmento da maxila direita com processo zigomtico e PM4, M1 e M2; 1 pea com maxilas direita e esquerda unidas atravs dos processos palatinos apresentando PM4 e M1 em ambos os lados e parte do M2 esquerdo; 3 fragmentos de hemimandbula direita com pelo menos pm4 e m1 no havendo m2 na pea que apresentou parte do incisivo; 3 fragmentos de hemimandbulas sem molariformes, 2 direitas edntulas e 1 direita com incisivo.
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20 a 30 cm 2 fragmentos, um esquerdo e outro direito da maxila com processos zigomticos, PM4 e M1; 2 fragmentos de hemimandbula direita apresentando pm4, uma delas com incisivo e m1; 1 fragmento de hemimandbula esquerda com incisivo, pm4 e m1; 2 fragmentos de hemimandbula esquerda com apenas incisivos. 30 a 40 cm 2 fragmentos de hemimandbula direita com apenas m1; 3 fragmentos de hemimandbula esquerda, uma com parte do incisivo, pm4, m1 e m2, outra com apenas o m1 e outra com apenas pm4. 1 fragmento de hemimandbula direita edntula. 40 a 50 cm 3 fragmentos de hemimandbula esquerda (uma com pm4 e m1, outra com incisivo, m1 e m2 e outra com m1 e m2); 1 fragmento de hemimandbula direita com pm4; 2 molares dissociados; 4 fragmentos de hemimandbulas direitas edntulas (3 edntulas e 1 com parte do incisivo); 1 fragmento de hemimandbula esquerda com incisivo. 50 a 60 cm 1 fragmento da maxila esquerda com seu processo zigomtico e com PM4 e M1; 3 fragmentos de hemimandbula direita (2 com pm4, m1 e m2 e uma com apenas m1); 1 molar dissociado; 1 fragmento de hemimandbula esquerda edntula. 90 a 100 cm 1 fragmento da maxila direita com processo zigomtico, PM4 e M1; Diagnose: Molares superiores retangulares, compostos por quatro lminas transversais separadas por trs flexos labiais (para-, meso- e metaflexo). Em indivduos jovens e adultos, o esmalte de uma lmina se conecta com as outras, mas em animais
velhos, duas ou mais lminas coalescem no lado labial e/ou no lado lingual, formando um lofo transversal em forma de U. O padro de coalescncia apresenta variao individual, mas normalmente os dois lofos posteriores unem-se labialmente com o desgaste, enquanto que os lofos anteriores unem-se lingualmente. Na dentio inferior, o hipoflexido profundo e voltado para frente, conectando-se ao mesoflexido no m1, entretanto um murdeo inconspcuo pode se formar entre os dois flexdeos com a idade. Um fino murdeo normalmente presente no m2 e m3, separando hipoflexido e mesoflexido, dando-lhe a forma de 3. Este murdeo normalmente mais desenvolvido no m2 e, especialmente, m3. O pm4 pentalofodonte e os dois primeiros lofdeos coalescem cedo formando um tringulo com uma ilha circular de esmalte no seu interior. O metaflexido corta o dente apenas em indivduos jovens, mas o mesoflexido liga-se ao hipoflexido at mesmo em adultos. Em Phyllomys, os dentes superiores so constitudos por quatro lminas transversais independentes, como em Diplomys. Nos molares superiores de Echimys e Makalata, no entanto, o anterolofo e protolofo esto conectados, bem como o mesolofo e o metalofo, cada par formando uma transversal em forma de U. Os lofdeos podem ser ligados na dentio inferior de Phyllomys formando a forma do numeral 3 e semelhante Echimys e Makalata, mas o hipoflexido sempre mais profundo e fortemente angular em Phyllomys. Em Diplomys, os lofdeos formam 3 lminas independentes prximas e paralelas (LEITE, 2003 e LEITE et al., 2008) (Figura 3).
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Sub-ordem HYSTRICOMORPHA Brandt, 1855 Famlia ECHIMYIDAE Gray, 1825 Euryzygomatomys Goeldi, 1901 Euryzygomatomys sp. Foi encontrado na quadrcula C7/D7, no nvel de 20 a 30 cm, 1 fragmento de hemimandbula direita com incisivo, pm4 e m1.
Figura 3 - Diagramas comparando morfologia dentria de echimyine: A - M1 superiores: paraexo no atravessa o dente em Echimys e Makalata ( esquerda), paraexo corta dente em ambos, Phyllomys (meio) e Diplomys (direita). B - M1 inferior: mesoexido no liga hipoexido e metaexido no corta dente em Echimys e Makalata ( esquerda), mesoexido conecta hipoexido em Phyllomys (meio), mesoexido liga hipoexido e metaexido corta dente em Diplomys (direita) (LEITE, 2003).
Em algumas hemimandbulas edntulas contudo, a morfologia ssea foi bastante semelhante aos caracteres do gnero, sendo estas peas consideradas como cf. Phyllomys. Comentrios: Phyllomys so equimdeos (ratos de espinho) arborcolas encontrados no leste do Brasil. So noturnos, arborcolas, folvoros, com pelagem macia e com alguns plos modificados em espinhos. Possuem ps pequenos, grandes olhos, nariz quadrado, orelhas redondas e pequenas e, longas vibrissas. As espcies de Phyllomys so de interesse especial para conservao, pois so pouco conhecidas, possuem distribuio geogrfica restrita e so endmicas Mata Atlntica (LEITE et al., 2008).
Diagnose: No h uma descrio detalhada dos caracteres morfolgicos para este gnero. Utilizamos a descrio original Goeldi (1901) e Hadler et al (2008). Estes ltimos comparam uma espcie extinta, E.mordax com a existente em nosso Estado, E.spinosus. Relatam comparaes acerca da profundidade da fossa massetrica, da protuberncia formada pelo fundo do incisivo inferior, da proximidade do forame mandibular ao cndilo, etc. Contudo, a semelhana do padro dentrio foi mais evidente quando comparado a nossa amostra com as depositas no MCNU e com as imagens usadas por Hadler et al (2008). Os molariformes inferiores tem formato quadrangular em vista oclusal, exceto o dp4 que mais retangular. O hipoflexido profundo e orientado posteriormente. Os hipoflexidos linguais so profundos e reentrantes e, com desgaste, formam fossetdeos alongados. O mesofossetdeo orientado anteriormente, enquanto o metafossetdeo transversal. Comentrios: Pouco sabe-se a respeito da ecologia das espcies deste gnero, cabendo portanto, uma reviso mais detalhada deste txon. Supe-se apenas que tem hbitos fossoriais e sociveis. So herbvoros, noturnos e habitam a vegetao ripria e interior de florestas densas. Popularmente conhecidos por sauis, atualmente tambm tm causado danos a silvicultura de Pinus taeda em Cambar do Sul/ RS (GONALVES, 2007)
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Subfamily OCTODONTOIDEA Waterhouse, 1839 Dicolpomys Winge, 1887 Dicolpomys aff fossor Foram encontrados nos respectivos nveis da quadrcula C7/D7: 10 a 20 cm 2 fragmentos de hemimandbula direita com incisivos e m1 sendo que uma delas possui tambm o pm4; 3 fragmentos de hemimandbula esquerda (todas possuem pm4, m1 e m2, duas possuem tambm o m3 e uma apresenta alm destes, o incisivo). 20 a 30 cm 1 fragmento de hemimandbula direita com incisivo, pm4, m1, m2 e m3; 1 fragmento de hemimandbula esquerda com incisivo e m1. 30 a 40 cm 3 fragmentos de hemimandbula esquerda, sendo uma m2 eclodindo, uma com m1 e outra com incisivo e pm4. 40 a 50 cm 1 fragmento de hemimandbula esquerda com todos os dentes. 50 a 60 cm 4 fragmentos de hemimandbula esquerda sendo uma com pm4, uma com incisivo, pm4 e m1, uma com pm4 e m1 e a ltima com pm4, m1, m2 e m3; 2 fragmentos de hemimandbula direita com incisivo, pm4 e m1. 60 a 70 cm 1 fragmento de hemimandbula direita com incisivo, pm4 e m1. 70 a 80 cm 1 fragmento de hemimandbula esquerda com m1. Diagnose: A mandbula de Dicolpomys semelhante ao de Clyomys, mas mais delicada. A fossa massetrica profunda. A crista massetrica est pouco desenvolvida quando comparado com Clyomys e Euryzygomatomys. A protuberncia formada pelos alvolos da raiz do incisivo inferior est
bem evidente. O formen mandibular est situado prximo ao cndilo. Os dentes tm um padro de 8 em vista oclusal, com flexo (-deo) lingual e labial simples e persistentes definindo dois lobos. Ambos os lobos do PM4-M3 e do m1-3 so geralmente iguais. O hipoflexo se interioriza um pouco mais do que em Clyomys riograndensis, mas menos do que em Euryzygomatomys mordax. O dp4 de juvenis tem dois flexdeos linguais e trs lofdeos, mas com o aumento do desgaste o flexdeo anterior se fecha formando um fossetdeo anterior. Nos espcimes mais velhos, todos flexdeos pode tornar-se fossetdeos. O m1 apresenta um vestgio da mesofossetdeo em alguns juvenis. A forma dos lobos do m1-2 varivel, podem ser de igual tamanho, ou o lobo anterior pode ser menor e mais fino (geralmente em m1), ou at mesmo o lobo posterior pode ser menor e mais largo (geralmente em m2). O m3 claramente menor do que m1-2, e especialmente o seu lobo posterior muito reduzido. Em alguns indivduos o m3 no tem lobos distintos (HADLER et al., 2008). Comentrios: Trata-se de um grupo extinto, portanto, apenas podemos inferir quanto aos seus hbitos e habitat atravs das suas caractersticas sseas e dentrias. Hadler et al. (2008) menciona que provavelmente estes animais tinham hbitos fossoriais devido a morfologia e a implantao dos incisivos. Sub-ordem MYOMORPHA Brandt, 1855 Famlia CRICETIDAE Fischer, 1817 Holochilus Brandt, 1835 Holochilus sp. Foram encontrados nos respectivos nveis da quadrcula C7/D7: 10 a 20 cm: 1 fragmento de hemimandbula direita com m1, m2 e m3; 1 fragmento de hemimandbula esquerda com incisivo e m1 e m2.
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40 a 50 cm: 1 fragmento de hemimandbula direita com incisivo e m1. Diagnose: Incisivos superiores bem desenvolvidos, opistodontes ou quase ortodontes, sem ranhuras. Molares com coroas moderadamente altas, com superfcie de ocluso plana ou terraceada. Cspides ovais ou sub-triangulares. Mesolofo mais ou menos desenvolvido presente no M3 de juvenis ou subadultos. Dobras principal e primria do M3 opostas e em contato nos adultos e quase confluentes em juvenis. Segunda dobra secundria (posterior ao cngulo) dos molares superiores presentes em juvenis e desgastados em adultos; Dobras menores presentes em todos os molares inferiores. Primeira dobra secundria presente pelo menos em molares inferiores de juvenis; Dobra interna anterior presente pelo menos em m1 de juvenis; segunda dobra primria do m2 tem dois teros ou mais do comprimento da primeira dobra primria (HERSHKOVITZ, 1955). Comentrios: Habitam margens de ambientes aquticos como banhados e riachos cercados por pastagens em altitudes de at 2000 m. Vive entre gramneas e juncos que crescem a margem destes ambientes, de onde saem a noite para se alimentarem. Constroem ninhos ovais em setembro, podendo ter at 40 cm de dimetro ficando presos entre os juncais a uma altura de 30 a 40 cm da superfcie da gua. O ninho uma cmara seca com uma porta lateral construdo com palhetas sendo o cho mais duro do que a metade superior devido compactao das palhetas. Alimenta-se de plantas e moluscos (HERSHKOVITZ, 1955).
estudada no parece estar relacionada alimentao ou demais atividades humanas e sim a predao por ave de rapina, possivelmente Strigidae e Tytonidae (WORTHY, 2001 e ANDREWS, 1990). Observamos: a) a anlise tafonmica realizada mostrou que apenas 0,92% da amostra ssea apresentou evidncias de queima, valor considerado baixo para fundamentar uma hiptese de preparo para consumo e que pode ser explicada pela elaborao das fogueiras prximas ou sobre os ossos j presentes no cho do abrigo; b) O abrigo apresenta patamares e tocas ocasionados por eroso, proporcionando habitat de repouso propcio a aves predadoras (corujas); c) Comparando o volume de sedimentos retirado, obtivemos da quadrcula C7/D7 (1800000 cm) uma quantidade aproximadamente oito vezes maior de material sseo do que aquele retirado da quadricula C3 (700000 cm). Possivelmente a maior quantidade de material sseo deva-se a localizao da quadricula C7/D7 localizar-se logo abaixo de abrigo junto a um grande patamar de arenito. Local que poderia abrigar aves que eliminariam suas egagrpilas. Esta condio no se verifica em C3. Mesmo com esta descrio preliminar quatro txons identificados pode-se sugerir a presena de pelo menos 3 ambientes distintos dentro da rea de atividade do predador responsvel pelo depsito: a) Mata Atlntica: Ambiente representado pela presena de Phyllomys sp. e Euryzygomatomys sp.; b) Campo aberto: Ambiente representado por Dicolpomys aff fossor, relacionado a um clima mais frio e seco remanescente do ltimo Mximo Glacial (UMG) ocorrido no Pleistoceno final (RODRIGUES, 2008). Apesar de extinto desde aproximadamente 3700 anos no RS, vestgios destes animais foram encontrados associados a ambientes secos com predomnio de gramneas desde Lagoa Santa (MG) entre o final do Pleistoceno e o incio Holoceno at o centro argentino durante o Pleistoceno (HADLER et al, 2008); C)
CONCLUSO
Apesar de estar inserida num contexto arqueolgico, a deposio da fauna de pequenos mamferos
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Banhado em campo aberto: Formao representada por Holochilus sp. que habita suas margens em meio a juncais. Espcie que ocorre atualmente em latitudes temperadas, nas terras baixas do pampa uruguaio e brasileiro (HERSHKOVITZ, 1955; VOSS & CARLETON, 1993). O ambiente em mosaico, com a presena de florestas e campos, referido por Rodrigues (2008) e Hadler et al (2008) parece ser a melhor explicao para as informaes geradas em nossos estudo. Podemos agregar a esta informao a presena de banhados e cursos dgua devido a ocorrncia de Holochilus. A ocorrncia de quatro txons: Phyllomys sp., Euryzygomatomys sp., Dicolpomys aff fossor e Holochilus sp. com exigncias ecolgicas distintas atesta em favor de uma paisagem heterognea tal qual a prevista por Rodrigues (2008). Uma questo encontra-se em aberto: Qual fenmeno levou a extino de Dicolpomys aff fossor? Possivelmente, alterao climtica? Nosso registro, prximo ao de Rodrigues (2008), amplia a distribuio deste gnero. Se considerarmos que as amostras de Dicolpomys do Rio Grande do Sul e de Minas Gerais pertencem a mesma espcies como afirma Hadler et al. (2008) presume-se a extino de inmeras populaes ao longo de uma extensa rea. Nossos resultados contribuem na ampliao de uma rea de estudo incipiente no Brasil. Muitas questes surgiram no contexto de explicar a diversidade de roedores no passado recente nesta rea geogrfica, visto que ainda temos uma grande amostra a ser estudada, e a existncia de fragmentos que sugerem a ocorrncia de novos txons.
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Cincias da Sade
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Evidncia de que os cidos -hidroxibutirato e acetoacetato no causam estresse oxidativo em crtex cerebral de ratos jovens in vitro
CAROLINA GONALVES FERNANDES 1 ESTELA NATACHA BRANDT BUSANELLO 2 ALANA PIMENTEL MOURA 3 ANA PAULA BESKOW 4 LUCILA DE BORTOLI DA SILVA 4 MOACIR WAJNER 5
RESUMO
O acmulo dos corpos cetnicos (CC) acetoacetato (AcAc) e -hidroxibutirato (BHB) ocorre durante o jejum e durante episdios de descompensao metablica em desordens neurometablicas hereditrias. O presente estudo investigou o efeito in vitro do AcAc e do BHB sobre vrios parmetros de estresse oxidativo em crtex cerebral de ratos jovens. Nossos resultados demonstraram que o AcAc e o BHB no foram capazes de alterar os parmetros testados. Concluindo, estes dados sugerem que o AcAc e o BHB no possuem propriedades antioxidantes ou pr-oxidantes em crtex cerebral de ratos jovens. Palavras-chave: Corpos cetnicos, acetoacetato, -hidroxibutirato, ratos, in vitro.
Acadmico do Curso de Biomedicina/ULBRA Bolsista CNPq-PIBIC/ULBRA Acadmico do Curso de Biomedicina/ULBRA Acadmico do Curso de Biomedicina/ULBRA Bolsista PROICT/ULBRA
Acadmico do PPG Gentica e Toxicologia Aplicada/ ULBRA Professor Orientador do PPG Gentica e Toxicologia Aplicada/ULBRA (mwajner@ufrgs.br)
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ABSTRACT
The ketone bodies (CC) acetoacetate (AcAc) and -hydroxybutyrate (BHB) accumulation occurs during fasting and during metabolic decompensation in inherited neurometabolic disorders. The present study investigated the in vitro effect of AcAc and BHB on several oxidative stress parameters in cerebral cortex of young rats. Our results show that AcAc and BHB did not alter the parameters analysed. Concludingly, the data sugest that CC do not act as pro-oxidant nor antioxidant effects in cerebral cortex of young rats. Key words: Ketone bodies, acetoacetate, -hidroxibutirate, rats, in vitro.
INTRODUO
Os corpos cetnicos (CC) so conhecidos como uma grande fonte de energia utilizada no jejum (OWEN et al. 1967). Os CC, -hidroxibutirato (BHB), acetoacetato (AcAc) e acetona, so produzidos pela degradao de cidos graxos no fgado e liberados na circulao para serem incorporados por vrios tecidos extra-hepticos incluindo o crebro para fornecer energia (MITCHELL et al. 1995). Concentraes plasmticas elevadas de CC so devido a um aumento de produo, a uma diminuio do consumo ou a uma alterao de algum processo especfico regulatrio em seu metabolismo. Os CC tambm esto caracteristicamente elevados em condies patolgicas como diabetes durante descompensao metablica (aumento na produo) e defeitos cetolticos (diminuio no uso) como nas deficincias da acetoacetil-CoA tiolase (T2) e da succinil CoA: 3-oxoacido CoA transferase (SCOT), nas quais as concentraes sanguneas dessas substncias (cetose) podem atingir nveis to elevados quanto 25 mM (ADROGUE et al. 1982; LAFFEL 1999; NIEZEN-KONING et al. 1997; MITCHELL e FUKAO 2001; FUKAO et al. 2004). Pacientes afetados pelas deficincias de T2 e SCOT normalmente apresentam sintomas neurolgicos (MITCHELL e FUKAO 2001). Apesar de apresentarem efeitos benficos como excelentes substratos para formao de energia,
aes deletrias vem sendo demonstradas para os CC, como por exemplo gerar espcies reativas de oxignio (ROS), induzir lipoperoxidao e nveis diminudos de glutationa reduzida (GSH) em eritrcitos, clulas endoteliais e moncitos de pacientes diabticos, e em culturas de clulas hepticas in vitro (JAIN et al. 1998, 1999; JAIN e MCVIE 1999; LEE et al. 2002; SQUIRES et al. 2003; ABDELMEGGED et al. 2004; BROOKES et al. 2004; Jain et al. 2006). Tambm vem sendo demonstrado que ocorre estresse oxidativo em diabticos hipercetonmicos, mas no em normocetonmicos em comparao com indivduos normais (JAIN et al. 2006). A maioria destes estudos associam hipercetonemia, especialmente com altos nveis de AcAc, com induo de peroxidao lipdica e normocetonemia com reduo do dano oxidativo a lipdeos (JAIN et al. 1998, 1999; JAIN e MCVIE 1999). No entanto, a ativao de rotas de sinalizao celular envolvida com o estresse oxidativo por corpos cetnicos ainda no foi estabelecida e o papel dos CC induzir estresse oxidativo at agora foi baseado em resultados obtidos com somente alguns parmetros e em tecidos perifricos. Por outro lado, trabalhos prvios tem demonstrado que uma dieta cetognica neuroprotetora contra vrias doenas agudas e crnicas (GILBERT et al. 2000; KASHIWAYA et al. 2000). Alm disso, foi verificado que o BHB e o AcAc protegem neu-
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rnios hipocampais expostos a MPP+, um inibidor da NADH desidrogenase e reduzem o dano cerebral de roedores submetidos inibio da gliclise ou isquemia generalizada in vivo e in vitro (SUZUKI et al. 2001, 2002; MASSIEU et al. 2003). No presente estudo tivemos como objetivo avaliar os efeitos de BHB e AcAc, nas concentraes encontradas em pacientes diabticos durante crises de cetoacidose e em indivduos afetados pelas deficincias da SCOT e da T2 sobre um amplo espectro de parmetros de estresse oxidativo, tais como quimiluminescncia e substncias reativas ao cido tiobarbitrico (TBA-RS) (peroxidao lipdica), formao de carbonilas e oxidao de grupamentos sulfidrila (dano oxidativo a protenas), reatividade antioxidante total (TAR) e nveis de GSH (defesas antioxidantes no-enzimticas) em crebro de ratos jovens.
Preparao das amostras para anlise dos parmetros bioqumicos de estresse oxidativo Os animais foram sacrificados por decapitao com guilhotina e sem anestesia, a caixa craniana foi aberta e o seu contedo retirado e, a partir de ento, mantido sobre uma placa de vidro a aproximadamente 0 C. O crebro foi limpo, sendo retirado o excesso de sangue dos vasos externos. Posteriormente, o bulbo olfatrio, o tronco cerebral e o cerebelo foram desartados, e o crtex cerebral dissecado, pesado e homogeneizado em tampo fosfato de sdio 20 mM, pH 7,4, contendo KCl 140 mM, na proporo de 1:10 (peso/volume). Finalmente, foram retiradas alquotas para a realizao de uma pr-incubao de 60 min a 37 C na ausncia dos metablitos a serem testados (grupo controle) ou na presena dos mesmos (grupos teste).
MATERIAL E MTODOS
Animais de experimentao: Foram utilizados ratos Wistar de 30 dias de idade, de ambos os sexos, fornecidos pelo Biotrio do Departamento de Bioqumica, ICBS, UFRGS. Os ratos foram mantidos em ciclos de claro-escuro de 12 horas a uma temperatura de 241C. Os animais tinham livre acesso gua e ao alimento (rao Supra ou Purina, So Leopoldo, RS). A utilizao dos animais seguiu um protocolo experimental aprovado pelo Comit de tica do Hospital de Clnicas de Porto Alegre e os Princpios de Cuidados de Animais de Laboratrio (Principles of Laboratory Animal Care, Instituto Nacional de Sade dos Estados Unidos da Amrica, NIH, publicao nmero 80-23, revisada em 1996). Reagentes: foram utilizados reagentes qumicos das marcas Sigma e Merck.
Parmetros de Estresse oxidativo (oxidaes biolgicas) Medida dos nveis das substncias reativas ao cido tiobarbitrico (TBA-RS): foi realizada baseando-se na reao do malondialdedo formado na amostra durante a incubao com o cido tiobarbitrico (ESTERBAUER e CHEESEMAN, 1990). Medida da quimiluminescncia espontnea: foi realizada atravs da medida da quimiluminescncia emitida pelos radicais livres formados no processo de lipoperoxidao em homogeneizado de crtex cerebral (GONZALEZ-FLECHA et al., 1991). Medida do contedo de sulfidrilas totais: foi realizada atravs da reduo do cido ditionitrobenzico (DTNB) pelos grupamentos tiis no-oxidados das protenas contidas na amostra (AKSENOV e MARKESBERY, 2001).
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Medida do contedo de grupos carbonila: foi realizada de acordo com o mtodo de Reznick e Packer (1994), em que os grupos carbonila presentes em protenas oxidadas contidas na amostra reagem com dinitrofenil-hidrazina (DNPH). Determinao das concentraes de glutationa reduzida (GSH): foram determinadas atravs do mtodo descrito por Browne e Armstrong (1998), em que GSH reage com o fluorforo o-ftaldialdedo. Reatividade Antioxidante Total (TAR): foi determinada pelo mtodo descrito por Lissi et al. (1995), atravs da medida da intensidade de quimiluminescncia do luminol induzida pelo 2, 2-azo-bis-(2-amidinopropano) (ABAP) temperatura ambiente.
RESULTADOS
A peroxidao lipdica foi inicialmente investigada atravs dos nveis de TBA-RS e quimiluminescncia em crebro de ratos. As Figuras 1 e 2, respectivamente, mostram que sob condies basais AcAc [F(3,12)=2,440; P=0,115] e BHB [F(3,12)= 1,043; P=0,409] no alteraram os valores de TBA-RS em doses to altas quanto 25mM. Similarmente, AcAc [F(3,16)=0,183; P=0,906] (Figura 3) e BHB [F (3,16)=0,360; P =0,782] (Figura 4) no alteraram os valores de quimiluminescncia em sobrenadante cortical de ratos. Isso tambm pode ser visto nas Figuras 5 e 6 onde tanto o AcAc [F(3,16)=29,854; P<0,001] como o BHB [F(3,16)=42,048; P<0,001], respectivamente, tambm no alteraram o aumento dos nveis de TBA-RS causado pelo sistema gerador de radicais hidroxila. Sendo assim, podemos concluir que o BHB e o AcAc no provocam peroxidao lpidica em crtex cerebral de ratos. O dano oxidativo protico foi avaliado pela medida dos contedos de sulfidrilas e carbonilas. O AcAc [F(3,12)=0,622; P=0,614] (Figura 7) e o BHB [F(3,12)=0,777; P=0,529] (Figura 8) no alteraram a oxidao das sulfidrilas e tampouco o contedo de carbonilas [Figura 9 AcAc: F(3,20)=1,757; P=0,188], [Figura 10 BHB: F(3,15)=0,847; P=0,489], nas concentraes de 1 a 25 mM, indicando que estes metablitos no causam dano oxidativo protico em crtex cerebral. As defesas antioxidantes no-enzimticas foram tambm investigadas atravs da medida do TAR e dos nveis de GSH. Nossos resultados demonstram que o AcAc [F(3,8)=0,304; P=0,822] (Figura 11) bem como o BHB [F(3,8)=0,422; P=0,743] (Figura 12) no modificaram o valor
Anlise Estatstica
Os resultados foram analisados usando o programa SPSS (Statistical Package for the Social Sciences) verso 16.0 em um computador PC compatvel. Para os experimentos, utilizou-se anlise de varincia de uma via (ANOVA) seguida do teste de Duncan, quando o valor de F foi significativo. Utilizou-se tambm o teste t de Student para amostras pareadas. Um valor de P <0,05 foi considerado significante.
Medida de Protenas
O contedo protico em todas as tcnicas empregadas foi determinado pelo mtodo de Lowry et al. (1951), usando albumina bovina srica como padro.
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do TAR. Da mesma maneira, ambos os metablitos no alteraram os nveis de GSH [AcAc: F(3,12)=0,744; P=0,530] (Figura 13), [BHB: F(3,12)=2,069; P=0,158] (Figura 14). Alm disso, AcAc e BHB, na concentrao de 25mM, tambm no foram capazes de oxidar uma soluo comercial de GSH na concentrao de 200 M, enquanto 150 M de N-etilmaleimida (controle positivo) promoveu a oxidao de 75% de uma soluo de 200 M de GSH [F(3,4)=16,123; P<0,001] (resultados no demonstrados).
120
120
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TBA-RS (% do controle)
80
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20
Controle
10 BHB (mM)
25
Figura 2 100
80
60
40
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Efeito in vitro do cido -hidroxibutrico (BHB) sobre as substncias reativas ao cido tiobarbitrico (TBA-RS) em homogeneizados de crtex de crebro de ratos jovens. Os valores representam mdia desvio padro (n=5) e foram expressos em percentual dos controles (4,15 0,15 mmol/ mg de proteina). A diferena entre as mdias foi calculada por anlise de varincia de uma via (ANOVA). No foi detectada nenhuma diferena significativa em relao ao controle.
Controle
10 AcAc (mM)
25
135 120
Quimiluminescncia (% do controle)
105 90 75 60 45 30 15 0
Figura 1 -
Efeito in vitro do cido acetoactico (AcAc) sobre as substncias reativas ao cido tiobarbitrico (TBA-RS) em homogeneizados de crtex de crebro de ratos jovens. Os valores representam mdia desvio padro (n=4) e foram expressos em percentual dos controles (4,15 0,15 mmol/ mg de proteina). A diferena entre as mdias foi calculada por anlise de varincia de uma via (ANOVA). No foi detectada nenhuma diferena significativa em relao ao controle.
Controle
10 AcAc (mM)
25
Figura 3 -
Efeito in vitro do cido acetoactico (AcAc) sobre a quimiluminescncia em homogeneizado de crtex de crebro de ratos jovens. Os valores representam mdia desvio padro (n=5) e foram expressos em percentual do controle (3632 706 cpm/min). A diferena entre as mdias foi calculada por anlise de varincia de uma via (ANOVA). No foi detectada nenhuma diferena significativa em relao ao con-
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trole.
200
135 120
180 160
***
***
Quimiluminescncia (% do controle)
105 90 75 60 45 30
140 120 100 80 60 40 20
15
0
Controle
BHB
Sistema
BHB + Sistema
Controle
10 BHB (mM)
25
Figura 6 Figura 4 Efeito in vitro do cido -hidroxibutrico (BHB) sobre a quimiluminescncia em homogeneizado de crtex de crebro de ratos jovens. Os valores representam mdia desvio padro (n=5) e foram expressos em percentual do controle (3632 706 cpm/min). A diferena entre as mdias foi calculada por anlise de varincia de uma via (ANOVA). No foi detectada nenhuma diferena significativa em relao ao controle.
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200 180 160 140
Efeito in vitro do cido -hidroxibutrico (BHB) sobre os nveis de TBA-RS na presena de um sistema gerador de radicais hidroxila em homogeneizados de crtex de crebro de ratos jovens. Os valores representam mdia desvio padro (n=5) e foram expressos em percentual dos controles (3,74 0,40 mmol/mg de proteina). A diferena entre as mdias foi calculada por anlise de varincia de uma via (ANOVA), seguindo-se do teste de Duncan (*P<0,05, *** P <0,001, comparado ao controle).
***
Contedo de Sulfidrilas (% do controle)
120 105 90 75 60 45 30 15 0
***
120 100 80 60 40 20 0
Controle
AcAc
Sistema
AcAc + Sistema
Controle
10 AcAc (mM)
25
Figura 5 -
Efeito in vitro do cido acetoactico (AcAc) sobre os nveis de TBA-RS na presena de um sistema gerador de radicais hidroxila em homogeneizados de crtex de crebro de ratos jovens. Os valores representam mdia desvio padro (n=5) e foram expressos em percentual dos controles (3,74 0,40 mmol/mg de proteina). A diferena entre as mdias foi calculada por anlise de varincia de uma via (ANOVA), seguindo-se do teste de Duncan (*P<0,05, *** P <0,001, comparado ao controle).
Figura 7 -
Efeito in vitro do cido acetoactico (AcAc) sobre a medida de grupos sulfidrila em homogeneizado de crtex de crebro de ratos jovens. Os valores representam mdia desvio padro (n=5) e foram expressos em percentual do controle (15,0261 9,47 nmol de sulfidrila/mg de protena). A diferena entre as mdias foi calculada por anlise de varincia de uma via (ANOVA). No foi detectada nenhuma diferena significativa em relao ao controle.
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135 120 105 90 75 60 45 30 15 0
140 120 100 80 60 40 20 0 ctrl Controle
Controle
10 BHB (mM)
25
Formao de carbonilas (% do controle)
Contedo de Sulfidrilas (% do controle)
1 BHB (mM)
10
25 25
Figura 8 -
Efeito in vitro do cido -hidroxibutrico (BHB) sobre a medida de grupos sulfidrila em homogeneizado de crtex de crebro de ratos jovens. Os valores representam mdia desvio padro (n=4) e foram expressos em percentual do controle (15,0261 9,47 nmol de sulfidrila/mg de protena). A diferena entre as mdias foi calculada por anlise de varincia de uma via (ANOVA). No foi detectada nenhuma diferena significativa em relao ao controle.
Figura 10 - Efeito in vitro do cido -hidroxibutrico (BHB) sobre a formao de carbonilas em homogeneizado de crtex de crebro de ratos jovens. Os valores representam mdia desvio padro (n=7) e foram expressos em percentual do controle (0,86 0,17nmol de carbonila/mg de protena). A diferena entre as mdias foi calculada por anlise de varincia de uma via (ANOVA). No foi detectada nenhuma diferena significativa em relao ao controle.
135 120
120
Formao de Carbonilas (% do controle)
100
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TAR (% do controle)
90 75 60 45 30 15 0 ctrl Controle
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10 10 AcAc (mM)
25 25
Controle
10 AcAc (mM)
25
Figura 9 -
Efeito in vitro do cido acetoactico (AcAc) sobre a formao de carbonilas em homogeneizado de crtex de crebro de ratos jovens. Os valores representam mdia desvio padro (n=6) e os resultados expressos em percentual do controle (0,74 0,11 nmol de carbonila/mg de protena). A diferena entre as mdias foi calculada por anlise de varincia de uma via (ANOVA). No foi detectada nenhuma diferena significativa em relao ao controle.
Figura 11 - Efeito in vitro do cido acetoactico (AcAc) sobre a reatividade antioxidante total (TAR) em homogeneizado de crtex de crebros de ratos jovens. Os valores representam mdia desvio padro (n=3) e esto expressos em percentual do controle (66,736,30 nmol de Trolox / mg de protena). A diferena entre as mdias foi calculada por anlise de varincia de uma via (ANOVA). No foi detectada nenhuma diferena significativa em relao ao controle.
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120
135 120
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GSH (% do controle)
TAR (% do controle)
105 90 75 60 45
90 75 60 45 30
30
15
15 0
Controle
10 BHB (mM)
25
Controle
10 BHB (mM)
25
Figura 12 - Efeito in vitro do cido -hidroxibutrico (BHB) sobre a reatividade antioxidante total (TAR) em homogeneizado de crtex de crebros de ratos jovens. Os valores representam mdia desvio padro (n=3) e esto expressos em percentual do controle (66,736,30 nmol de Trolox / mg de protena). A diferena entre as mdias foi calculada por anlise de varincia de uma via (ANOVA). No foi detectada nenhuma diferena significativa em relao ao controle.
Figura 14 - Efeito in vitro do cido -hidroxibutrico (BHB) sobre as concentraes de glutationa reduzida (GSH) em homogeneizado de crtex de crebro de ratos jovens. Os valores representam mdia desvio padro (n=4) e foram expressos em percentual do controle (8,78 0,94 mmol/mg de protena). A diferena entre as mdias foi calculada por anlise de varincia de uma via (ANOVA). No foi detectada nenhuma diferena significativa em relao ao controle.
120
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DISCUSSO
Existem relatos controversos na literatura sobre atividades pr-oxidantes e antioxidantes dos CC que esto normalmente aumentados em pacientes durante descompensao metablica (produo elevada) e em indivduos afetados pelas deficincias de SCOT e T2 (diminuio da degradao). Estudos prvios revelaram que AcAc, mas no o BHB, parece induzir gerao de espcies reativas em clulas perifricas (JAIN et al. 1998, 1999; JAIN e MCVIE 1999; ABDELMEGGED et al. 2004; JAIN et al. 2006). Alm disso, algumas evidncias tem revelado que o BHB possui atividades neuroprotetoras in vivo e in vitro provavelmente atravs de suas propriedades antioxidantes (GILBERT et al. 2000; KASHIWAYA et al. 2000; SUZUKI et al. 2001, 2002; MASSIEU et al. 2003). Outros
GSH (% do controle)
80
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Controle
10 AcAc (mM)
25
Figura 13 - Efeito in vitro do cido acetoactico (AcAc) sobre as concentraes de glutationa reduzida (GSH) em homogeneizado de crtex de crebro de ratos jovens. Os valores representam mdia desvio padro (n=4) e foram expressos em percentual do controle (8,78 0,94 mmol/mg de protena). A diferena entre as mdias foi calculada por anlise de varincia de uma via (ANOVA). No foi detectada nenhuma diferena significativa em relao ao controle.
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estudos demonstram que esses CC, com nfase particular ao BHB, reduzem o dano oxidativo no tecido cardaco (Veech et al. 2001). Entretanto, em geral estes trabalhos utilizam poucos parmetros de estresse oxidativo, particularmente a peroxidao lipdica e os nveis teciduais de GSH. No presente estudo investigamos os efeitos in vitro do BHB e AcAc, nas concentraes normalmente encontradas no sangue de pacientes diabticos com severa descompensao metablica e de pacientes afetados pelas deficincias de SCOT e T2, sobre um largo espectro de parmetros de estresse oxidativo em crtex cerebral de ratos jovens. Observamos que a peroxidao lipdica (quimiluminescncia e nveis de TBA-RS), o dano oxidativo protico (oxidao de sulfidrilas e formao de carbonilas) e as defesas antioxidantes no enzimticas (TAR e GSH) no foram alteradas por doses de BHB e AcAc to elevadas quanto 25 mM no tecido cerebral. Tambm observamos que os CC no afetaram o aumento de produo de ERO induzida por um sistema gerador de radical hidroxila. Portanto, sob condies basais com uma alta produo de radicais livres, o AcAc e o BHB no foram capazes de reduzir ou aumentar os parmetros de estresse oxidativo no crebro. Alm disso, BHB e AcAc no oxidaram os grupamentos sulfidrila de uma soluo comercial de GSH. Nossos resultados, em conjunto, no sustentam a hiptese de queo BHB e o AcAc atuam in vitro como potentes agentes pr ou antioxidantes diretos ou indiretos no sistema nervoso central. Esta concluso est de acordo com o fato de que diabticos com freqentes e severos episdios cetticos no sofrem danos neurolgicos e psicomotores aparentes. Alm disso, o desenvolvimento fsico e mental normal nos pacientes afetados pelas deficincias de SCOT e T2 com cetose e cetonria persistentes, refletindo
um desenvolvimento normal do SNC, bem como das funes cerebrais (NIEZEN-KONING et al. 1997), como poderia ser esperado no caso em que AcAc e BHB provocassem estresse oxidativo j que o crebro especialmente vulnervel ao ataque de radicais livres (JAIN et al. 1998, 1999; JAIN e MCVIE 1999; ABDELMEGGED et al. 2004; JAIN et al. 2006). Por outro lado, no podemos excluir a possibilidade de que os corpos cetnicos, especialmente o AcAc, pudessem atuar como pr-oxidantes em tecidos perifricos bem como vem sendo demonstrado em moncitos, eritrcitos e clulas endoteliais principalmente em pacientes diabticos com alto nvel de cetonas no sangue (JAIN et al. 1998, 1999; JAIN e MCVIE 1999; LEE et al. 2002; SQUIRES et al. 2003; ABDELMEGGED et al. 2004; JAIN et al. 2006). Neste particular, atividades pr-oxidantes, pelos quais os mecanismos ainda no esto bem estabelecidos, tem sido particularmente atribudas ao AcAc em clulas perifricas (JAIN e MCVIE 1999) e em um sistema livre de clulas (JAIN et al. 2006). Alm disso, no podemos at o presente momento estabelecer o papel dos CC no estresse oxidativo caractersticos em diabticos j que a hiperglicemia tambm capaz de induzir estresse oxidativo, bem como em moncitos e na disfuno endotelial (JAIN 1989; RAJESWARI et al. 1991; TESFAMARIAM e COHEN 1992; NISCHIKAWA et al. 2000; NATARAJAN et al. 2002). Outros resultados revelaram propriedades neuroprotetoras para estas substncias in vitro e in vivo e especialmente para o BHB em isquemia, epilepsia, inibio da gliclise, doenas de Parkinson e Alzheimer (GILBERT et al. 2000; KASHIWAYA et al. 2000; SUSUKI et al. 2001, 2002; MASSIEU et al. 2003; Malouf et al. 2007). Pode-se presumir que a induo neuroprotetora do BHB pode ocorrer via mecanismo indireto como, por exemplo, pela
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reposio energtica tecidual devido ao aumento da respirao celular e produo de ATP nestas situaes caracterizadas por dficit de energia, ao invs das atividades antioxidantes diretas (SUZUKI et al. 2001; VEECH et al. 2001). Neste contexto, est bem estabelecido que os corpos cetnicos so excelentes substratos para gerao de energia no crebro (MORRIS 2005). Alternativamente, dietas cetognicas podem ser neuroprotetoras pelo aumento do nvel de protenas desaclopadas no hipocampo, conduzindo indiretamente a diminuio da produo de espcies reativas e excitabilidade neuronal (SULLIVAN et al. 2004). Concluindo, o presente estudo demonstrou que o AcAc e o BHB per se no promovem ou previnem o estresse oxidativo in vitro no crebro de ratos em desenvolvimento. Vrios parmetros de estresse oxidativo foram testados, distintamente de outros estudos descritos na literatura que basicamente testaram os efeitos dos CC sobre a peroxidao lipdica e os nveis de GSH. Presumimos que os efeitos neuroprotetores observados pelo AcAc e particularmente BHB em vrias situaes patolgicas in vivo e em culturas de clulas hipocampais so, ao menos em parte, indiretos e provavelmente devidos a restaurao dos substratos energticos necessrios para a sobrevivncia e atividade neuronal. No podemos tambm excluir que os estudos contraditrios de estudos prvios e do presente trabalho em relao aos efeitos pr ou antioxidantes dos CC provavelmente refletem diferenas de metodologia ou teciduais especficas. Neste contexto, demonstramos no presente estudo que estes compostos no alteram os parmetros de estresse oxidativo no crebro, enquanto que quase todos os estudos descritos anteriormente demonstram os efeitos desses corpos cetnicos em tecidos perifricos.
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Ligadura de ducto biliar como modelo de cirrose biliar secundria: Efeito da S-Nitroso-N-Acetilcistena (SNAC)
BRUNA BORBA VALIATTI1 RAFAEL VERCELINO2 JULIANA TIEPPO2 GRAZIELLA RODRIGUES3 CNTIA DE DAVID4 GABRIELA FREITAS DE SOUZA5 MARCELO GANZAROLLI DE OLIVEIRA6 NORMA POSSA MARRONI7 CLUDIO AUGUSTO MARRONI8
RESUMO
A Sndrome Hepatopulmonar uma complicao da cirrose heptica que gera prejuzo na difuso de gases. Avaliamos o efeito da SNAC na difuso de gases e na lipoperoxidao (LPO) pulmonar e heptica em ratos com ligadura de ducto biliar comum (LDBC). Utilizamos 20 ratos Wistar, divididos em: 1-Sham Operated (SO); 2-LDBC; 3-SO+SNAC; 4-LDBC+SNAC. A SNAC foi administrada 14 dias aps a LDBC, por 14 dias. Na histologia, o grupo 2 apresentou infiltrado inflamatrio e aumento no dimetro dos vasos. Houve diminuio
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Acadmica do Curso Medicina/UFCSPA Bolsista FAPERGS Fisioterapeuta, Mestre em Fisiologia/UFRGS Biloga/ULBRA, Mestranda do PPG Medicina: Cincias Mdicas do HCPA/UFRGS Farmacutica, Doutoranda do PPG Cincias biolgicas: Fisiologia/UFRGS Qumica, Doutoranda do Programa de Qumica da UNICAMP
Professor Associado do Departamento de Fsico-Qumica da UNICAMP Professora do Curso de Biologia e do PPG Gentica e Toxicologia Aplicada/ULBRA, Coordenadora do Laboratrio de Estresse Oxidativo e Antioxidantes Professor - Orientador do Curso de Medicina/UFCSPA
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significativa da PO2 e SatO2/Hb no grupo 2. Houve aumento significativo das provas de funo heptica e da LPO do tecido pulmonar e heptico no grupo 2. Conclumos que a SNAC reduziu o dano heptico, a hipoxemia e a LPO pulmonar em ratos com LDBC, possivelmente por seus efeitos antioxidantes. Palavras-chave: Ligadura de ducto biliar comum, estresse oxidativo, SNAC.
ABSTRACT
The Hepatopulmonary Syndrome is a complication of cirrhosis that affects gas diffusion. We evaluated SNACs effect on gas diffusion and lipoperoxidation (LPO) in lung and liver of rats with common bile duct ligation (LDBC). We used 20 Wistar rats, divided into: 1 Sham-operated (SO) 2-LDBC, 3-SO + SNAC, 4-LDBC + SNAC. SNAC was administered 14 days after LDBC, for 14 days. In histological analysis, group 2 showed inflammatory infiltrate and increase in vessels diameter. There was a significant decrease of PO2 and SatO2/Hb in group 2. There was significant increase in liver integrity markers and of LPO at lung and liver in group 2. We conclude that SNAC reduced the liver damage, the hypoxemia and pulmonary LPO in rats with LDBC, possibly by its antioxidant effects. Key words: Common bile duct ligation, oxidative stress, SNAC
INTRODUO
Alteraes na funo respiratria so eventos comuns em pacientes que apresentam doena heptica crnica. As estimativas so to altas que 50-70% dos pacientes se queixam de dispnia (ROBERTS, ARGUEDAS e FALLON, 2007). Nos ltimos anos, as anormalidades vasculares pulmonares foram reconhecidas cada vez mais como as entidades clnicas importantes que influenciam a sobrevivncia do candidato ao transplante heptico. A anormalidade vascular mais comum a sndrome hepatopulmonar (SHP), que ocorre quando h dilatao vascular intrapulmonar que prejudica a oxigenao arterial (FALLON e ABRAMS, 2000). A SHP classicamente definida como um desequilbrio no gradiente alvolo-arterial (AaPO2) em ar ambiente (>15 mmHg) com ou sem
o hipoxemia, resultante da vasodilatao intrapulmonar na presena do disfuno heptica e/ou hipertenso portal (RODRIGUEZ-ROISIN et al., 2004). Recentemente a SHP pode ser observada em pacientes com hipertenso portal na ausncia de cirrose (trombose da veia porta, hiperplasia regenerativa nodular, fibrose heptica congnita) e tambm tem sido relatada em pacientes que apresentam hepatite crnica na ausncia de hipertenso portal (GUPTA et al., 2001; REGEV et al., 2001). Estudos prvios demonstraram que a induo de cirrose biliar secundria, atravs da ligadura de ducto biliar comum (LDBC) (TIEPPO et al., 2005; VERCELINO et al., 2008) simula a doena humana pelas alteraes provenientes da reao inflamatria causada pelo refluxo biliar e a conseqente desorganizao da arquitetura natural do parnquima, com reas inflamatrias e de deposio
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de colgeno e formao de fibrose (KOUNTOURAS, BILLING e SCHEUER, 1984). Experimentalmente, o modelo de ligadura de ducto biliar o nico modelo que identifica as caractersticas da sndrome hepatopulmonar. Fallon e colaboradores demonstraram que a ligadura de ducto biliar um modelo para o estudo da SHP , com os animais cirrticos a partir de 4 semanas, quando j apresentam hipoxemia e vasodilatao intrapulmonar. O gradiente alvolo-capilar apresenta diferena superior a 100% e acompanhado de hipoxemia, com valores inferiores 85 mmHg, quando comparados ao grupo controle. Esses achados foram associados vasodilatao intrapulmonar (FALLON et al., 1997; TIEPPO et al., 2005). A S-Nitroso-N-Acetilcistena (SNAC) um S-nitrosotiol (RSNOs) e atua como doador de xido ntrico e tem potentes aplicaes biomdicas. Os RSNOs so molculas carregadoras de NO que, alm de permitirem a liberao de NO, tm aes diretas e ainda realizam S-transnitrosao e S-tiolao, o que as torna diferentes de outros doadores de NO. A S-nitroso-N-acetilcistena (SNAC) constitui um exemplo de RSNO que pose ser empregado como fonte exgena de NO. Os RSNOs so considerados agentes teraputicos em uma variedade de doenas no qual o NO pode estar envolvido. O principal papel intracelular dos RSNOs pode estar relacionado reduo do estresse oxidativo (HOGG, 2002). O presente trabalho tem como objetivo avaliar os efeitos da SNAC na difuso de gases e na lipoperoxidao (LPO) pulmonar e heptica em ratos com LDBC, como modelo de SHP .
MATERIAL E MTODOS
Procedimento Experimental Foram utilizados 10 ratos machos Wistar para cada grupo experimental (n=10 baseado em clculo amostral), com peso mdio de 250 gramas, provenientes da FEPPS. Os animais foram mantidos durante o experimento na Unidade de Experimentao Animal do Centro de Pesquisas do Hospital de Clnicas de Porto Alegre, em caixas plsticas individuais, de 47x34x18cm, forradas com maravalha, em ciclo de doze horas claro/escuro (luz das 7 s 19 horas) e temperatura de 22 2C. A gua e a rao foram administradas livremente e os animais foram tratados diariamente com gua e rao Nutripal (Moinhos Purina, Porto Alegre, RS/Brasil). Os procedimentos com os animais sero de acordo com o preconizado pela Comisso de Pesquisa e tica em Sade do Grupo de Pesquisa e Ps-Graduao de Clnicas de Porto Alegre.
Grupos Experimentais O modelo utilizado foi de cirrose biliar secundria atravs de ligadura de ducto biliar comum (LDBC), e os animais foram divididos em 4 grupos:
1. Sham Operated (SO) - Grupo submetido simulao da cirurgia, sem a LDBC e administrao de Veculo (NaCl); 2. LDBC (LDBC) - Grupo submetido cirurgia de LDBC; 3. Sham Operated + SNAC (SO + SNAC) - Grupo submetido simulao da cirurgia de LDBC e tratamento com SNAC; 4. LDBC + SNAC (LDBC + SNAC) - Grupo submetido cirurgia de LDBC e tratamento com SNAC.
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Desenvolvimento do Modelo de Sndrome Hepatopulmonar pela Induo de Cirrose Biliar Secundria O processo iniciou com a anestesia do animal mediante a administrao de frmacos anestsicos e posicionamento do mesmo para cirurgia. Foi utilizada uma mistura de Cloridrato de Xilazina 2% 50mg/Kg de peso corporal, e Cloridrato de Cetamina, 100mg/Kg de peso corporal intraperitonialmente. A interveno cirrgica iniciou com a realizao de tricotomia e desinfeco da regio abdominal, seguida de laparotomia ventral mdia, e de dissecao do ducto biliar comum na altura da desembocadura dos ductos pancreticos, ligados por meio de dois ns para posterior seco entre eles. A cavidade abdominal foi fechada com pontos individuais em U no plano cutneo, e o peritnio e a camada muscular abdominal foram fechados com pontos contnuos. Os animais se recuperaram da anestesia em caixas individuais forradas com maravalha em incubadora para recm-nascidos (FANEM - SP), antes de serem devolvidos a condio padro da Unidade de Experimentao. Os animais dos grupos SO no foram submetidos a LDBC, sendo realizada somente a manipulao do ducto simulando o estresse cirrgico. Aps 28 dias, da LDBC, os animais foram sacrificados.
Morte dos Animais e Obteno das Amostras de Tecido e Sangue Transcorridos os 28 dias do desenvolvimento do modelo e 14 dias de administrao da SNAC ou NaCl, conforme o grupo, os animais foram novamente pesados e anestesiados com uma mistura de cloridrato de cetamina (100 mg/kg) e cloridrato de xilasina (10 mg/kg), intraperitonealmente. Primeiramente, foi coletado sangue pela tcnica da puno de plexo venoso retro-orbital com tubo capilar de vidro, utilizado para avaliar integridade heptica por meio das anlises das aminotransferases aspartatoaminotransferase (AST) e alanina-aminotransferase (ALT), e da fosfatase alcalina (FA). Posteriormente, realizou-se tricotomia e desinfeco da regio abdominal, seguida da interveno cirrgica, que iniciou com laparotomia ventral mdia, exposio das alas intestinais para visualizao da aorta abdominal, da qual foi coletado sangue para realizao de gasometria arterial, feita atravs do analisador ABL 700 (RADIOMETER COPENHAGEN), pelo mtodo de eletroiontoforese. As dosagens sanguneas (Enzimas Hepticas e Gasometria Arterial) foram realizadas no Laboratrio do Hospital de Clnicas de Porto Alegre. Dando continuidade, foram retirados o fgado e os pulmes, separados em 2 pores: 1) A poro anterior do lobo inferior do pulmo direito foi emergida em formol 10% para posterior anlise histolgica; 2) O fgado e o restante do pulmo foram pesados e congelados a 80C para posteriores anlises.
Administrao do Veculo e da SNAC O tratamento com SNAC iniciou-se a partir do 14 dia do procedimento cirrgico, diariamente, por via intraperitoneal, na dose 1,15 mg/Kg. Os animais SO receberam soluo fisiolgica (NaCl 0,9%) no volume de 1mL/ Kg de peso corporal, pela mesma via.
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Avaliaes Bioqumicas Preparao do Homogeneizado Para homogeneizar o fgado e o pulmo, foram colocados 9 mL de tampo fosfato (KCL 140 mM, fosfato 20 mM; pH 7,4) por grama de tecido. A homogeneizao foi realizada em um aparelho Ultra-Turrax (IKA-WERK) durante 40 segundos, temperatura de 0 a 4 C. Posteriormente, o homogeneizado foi centrifugado em uma centrfuga refrigerada (SORVALL RC-5B Refrigerated Superspeed Centrifuge) por 10 min a 3000 rpm (1110 x g). O precipitado foi desprezado, e o sobrenadante retirado e congelado em freezer temperatura de 80 C para posteriores dosagens.
da lipoperoxidao formando uma base de Schiff, e o TCA teve funo de desnaturar as protenas presentes, alm de acidificar o meio de reao. A seguir, agitou-se cada tubo, os quais foram aquecidos temperatura de 100 C durante 15 minutos. Aps, os tubos foram resfriados, e acrescentou-se 1,5 mL de lcool n-butlico, para extrair o pigmento formado. Os tubos foram colocados em agitador (Biomatic) por 45 segundos e centrifugados por 10 minutos a 3000 rpm (1110 x g). Por ltimo, o produto corado foi retirado e realizada a leitura em espectrofotmetro (CARY 3E UV Visible Spectrophotometer Varian) com comprimento de onda de 535nm. A concentrao de TBA-RS foi expressa em nmoles/ mg de protena (BUEGE e AUST 1978).
Determinao da Lipoperoxidao Determinao das Substncias que Reagem ao cido Tiobarbitrico (TBARS) Foi determinada a lipoperoxidao atravs do mtodo de substncias reativas ao cido tiobarbitrico (TBA-RS). A tcnica de TBA-RS consiste no aquecimento do material homogeneizado na presena de cido tiobarbitrico e conseqente formao de um produto de colorao rsea, medido em espectrofotmetro a 535nm. O aparecimento de colorao ocorre devido presena do malondialdedo e outras substncias provenientes da peroxidao lipdica no material biolgico. Foram colocados em tubo de ensaio, nesta ordem de adio, 0,5 mL de cido tiobarbitrico (TBA) 0,67%, 0,25mL de gua destilada, 0,75mL de cido tricloroactico (TCA) 10% e 0,25mL do homogeneizado. O TBA reagiu com produtos
Quimiluminescncia O mtodo consiste em adicionar um hidroperxido orgnico de origem sinttica (hidroperxido de tert-butila) ao homogeneizado de tecido em estudo. Avalia-se a capacidade de resposta mediante a determinao de quimiluminescncia (QL) produzida pela amostra. A QL foi medida em um contador com o circuito de coincidncia desconectado e utilizando o canal de trtio (Liquid Scintilation Corenter, 1209 RACKBETA, LKB Wallar) operando como um luminmetro. Adicionase 3,5 mL de tampo fosfato em viais de vidro de 25 mm de dimetro por 50 mm de altura. Para evitar a fosforescncia dos viais ativada pela luz fluorescente, eles foram protegidos da luz at o momento do uso e as determinaes feitas em sala escura. Primeiramente se realiza apenas a leitura dos viais com tampo (QL Basal). Aps, adicionar 0,5 mL de homogeneizado de tecido e faz-se a leitura, que corresponde a QL espontnea. Em seguida, foi adicionado o hidroperxido de tert-butila que aumenta a QL (QL Mxima). A reao
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total consiste de uma soluo reguladora de tampo fosfato e de t-BOOH 3 mM. Para clculo de QL, iniciada por t-BOOH, foi considerada a emisso mxima (QL Mxima), descontada a emisso da QL espontnea (a QL do vial contendo o tampo e a amostra). Os resultados foram expressos em contagem por segundo (cps) por mg de protena (GONZALEZ-FLECHA et al., 1991).
Anlise Estatstica A partir dos dados coletados, as mdias e os erros padres das mdias de cada grupo foram calculadas, utilizando para anlise estatstica o software SPSS, verso 13.0, para Windows XP2000. Foi realizada anlise de varincia (ANOVA) seguida de teste de Student-Newman-Keuls, sendo o nvel de significncia adotado de 5% (P<0,05).
Avaliao Anatomopatolgica dos Tecidos O teste anatomopatolgico foi realizado no Laboratrio de Patologia do Hospital de Clnicas de Porto Alegre. Aps obteno dos tecidos, as peas foram fixadas em blocos de parafina, a partir do qual foram realizados cortes com 3 micra em Micrtomo (Leitz1512). Na fase de colorao, as lminas foram mergulhadas nos corantes hematoxilina-eosina durante 5 minutos cada uma, intermediadas por um banho de gua corrente. Na fase de desidratao, as estruturas passaram por trs recipientes com lcool absoluto e por dois de xilol. Colocou-se a lamnula sobre a lmina, finalizando o processo de preparao. As lminas foram analisadas em microscpio binocular Nikon Labophot.
RESULTADOS
A anlise histolgica do tecido pulmonar dos animais dos grupos controle (SO e SO+SNAC) demonstrou tecido pulmonar no padro da normalidade e vasos com dimetro usual (Figura 1A). Os animais do grupo LDBC apresentaram importante infiltrado inflamatrio e aumento significativo no dimetro dos vasos pulmonares (Figura 1B). O tratamento com a SNAC no reduziu o infiltrado inflamatrio pulmonar nos animais do grupo LDBC+SNAC (Figura 1C), no entanto, os vasos apresentaram dimetro usual, demonstrando que o tratamento com SNAC reduziu o dimetro dos vasos nos animais tratados de forma a deix-los de tamanho similar aos animais controles.
Figura 1 - Corte Histolgico de tecido Pulmonar (HE). Aumento de 200x. (a) Animal controle: parnquima pulmonar normal. (b) Animal com ligadura de ducto biliar comum: vasos de dimetro aumentado e parnquima pulmonar com infiltrado inflamatrio. (c) Animal com ligadura de ducto biliar parnquima pulmonar, os vasos apresentam dimetro semelhante ao do comum tratado com SNAC: apesar de mantido o infiltrado inflamatrio no animal controle.
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Os animais do grupo com ligadura de ducto biliar comum e sem tratamento apresentaram aumento significativo das provas de integridade heptica AST, ALT e FA (Tabela 1), em comparao com os demais grupos, demonstrando a efetividade do modelo em gerar dano heptico. O tratamento com SNAC em animais com LDBC reduziu significativamente os valores das provas de integridade heptica, entretanto ALT e FA se mantiveram elevados quando comparados aos grupos controle.
Tabela 1 - Provas de Integridade Heptica.
AST SHAM OPERATED SHAM OPERATED+SNAC LDBC LDBC+SNAC 111,86(59,7) 107,88(9,7) 386,3 (8,49)* 280,78(58,55) ALT 42,7(5,83) 43,6 (6,15) 159,2(75,31)* 83,6(34,81)** FA 110,43(6,16) 125,13 (27,66) 352,4(132,89)* 264,67(82,5)**
Tabela 2 - Avaliao da Gasometria Arterial.

PAO2 SHAM OPERATED SHAM OPERATED+SNAC LDBC LDBC+SNAC 94,4(1,7) 98,4(10,7) 72,1(14,1)* 90,9(11,1) SATO2/HB (%) 96,2(1,8) 97,4(1,4) 83,9(3,6)* 95,2(2,9)
PaO2 presso parcial de oxignio (mmHg) e saturao de oxignio da hemoglobina (%) . Dados apresentados em mdia desvio padro. (*) Diferena significativa em comparao com os demais grupos.
A lipoperoxidao demonstrou-se aumentada de forma significativa nos animais com ligadura de ducto biliar comum por ambas as tcnicas utilizadas TBARS e QL no tecido pulmonar (Tabela 3) e no tecido heptico (Tabela 4). No houve diferena na lipoperoxidao entre os demais grupos, evidenciando a capacidade do tratamento com a SNAC de gerar reduo do dano causado por radicais livres.
Tabela 3 - Lipoperoxidao Tecido Pulmonar.
TBARS SHAM OPERATED SHAM OPERATED+SNAC LDBC LDBC+SNAC 0,475(0,12) 0,468(0,10) 0,947(0,17)* 0,550(0,22) QL 907,65(142,43) 903,94(170,32) 1289,34(220,18)* 923,45(208,86)
Dados apresentados em mdia desvio padro. (*) Diferena significativa em comparao com os demais grupos. (**) Diferena significativa em relao aos grupos Sham operated e Sham operated+SNAC.
Na avaliao da gasometria arterial, a presso parcial de oxignio (PaO2), que demonstra a eficcia das trocas de oxignio entre os alvolos e os capilares pulmonares, se mostrou significativamente reduzida nos animais com ligadura de ducto biliar comum no tratados (Tabela 2), enquanto o tratamento com a SNAC manteve os nveis de PaO2 do grupo LDBC+SNAC sem diferena significativa quando comparado aos grupos controle. Da mesma forma, a saturao de oxignio da hemoglobina (SatO2/Hb) que se apresentou significativamente diminuida nos animais do grupo LDBC (Tabela 2), teve nveis comparveis aos controles nos animais do grupo SO+SNAC, demonstrando a efetividade dessa droga em melhorar a difuso de gases.
TBARS (mmol.mg de protena) e Quimiluminescncia (cps.mg de protena). Dados apresentados em mdia desvio padro. (*) Diferena significativa em comparao com os demais grupos.
Tabela 4 - Lipoperoxidao Tecido Heptico.

TBARS SHAM OPERATED SHAM OPERATED+SNAC LDBC LDBC+SNAC 0,346(0,02) 0,328(0,04) 0,624(0,17)* 0,452(0,10) QL 502,97(58,87) 480,34(79,27) 818,2(86,89)* 554,40(277,34)
TBARS (mmol.mg de protena) e Quimiluminescncia (cps.mg de protena). Dados apresentados em mdia desvio padro. (*) Diferena significativa em comparao com os demais grupos.
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DISCUSSO
A LDBC comum um modelo estabelecido de dano heptico, assemelhando-se atresia biliar, que se caracteriza por apoptose de hepatcitos, necrose, infiltrado linfoctico e, posteriormente por fibrose heptica (LEE et al., 2008). A obstruo do ducto biliar produz dano hepatocelular e resposta inflamatria. O acmulo de sais biliares txicos no fgado gera apoptose e necrose de hepatcitos. O processo de regenerao celular determina a formao de tecido cicatricial, fibrose e cirrose (SCHMUCKER et al., 1990). A cirrose, que o estgio mais avanado da fibrose heptica, leva a uma distoro do parnquima heptico associada com formao de septos e ndulos, alterao do fluxo sangneo e risco de insuficincia heptica (FRIEDMAN, 2008). O modelo de LDBC, que determina cirrose biliar secundria o nico modelo de cirrose heptica que gera a sndrome hepatopumonar, caracterizada por dilataes vasculares intrapulmonares que alteram a difuso arterial de gases (FALLON, et al., 1997; TIEPPO, et al., 2003; RODRGUEZ-ROISIN, et al,. 2004; LEE et al., 2004). Nesse estudo, o modelo de ligadura de ducto biliar comum foi utilizado para a avaliao dos efeitos da administrao da S-nitroso-N-acetilcisteina (SNAC) sobre o dano heptico e sobre a difuso de gases nesses animais. A anlise histolgica demonstrou aumento do dimetro dos vasos pulmonares nos animais com LDBC. Tal achado confirma a efetividade do modelo em gerar a sndrome hepatopulmonar, com hipoxemia e vasodilatao intrapulmonar (FALLON, et al., 1997; TIEPPO, et al., 2003; RODRGUEZ-ROISIN, et al,. 2004; LEE et al., 2004) que so geradas, nesse modelo, pelo aumento da produo de substncias vasodilatadoras, principalmente o xido ntrico (NO) (FALLON et al., 1997; ZHANG et al., 2003). O tratamento
com a SNAC foi capaz de reduzir o dimetro dos vasos pulmonares, assim como melhorar a difuso de gases nos animais tratados. Na avaliao das provas de integridade heptica pela quantificao das enzimas sricas, houve aumento significativo das transaminases AST (aspastato aminotransferase) e ALT (alanino aminotransferase) nos animais ligados, evidenciando a leso e necrose celular no tecido rico nessas enzimas (BRANDO e MARRONI, 2001). A FA (fosfatase alcalina) tambm se apresentou significativamente elevada nos animais ligados, o aumento desproporcional da FA sugestivo de colestase, indicando comprometimento hepatobiliar nos animais (BRANDO e MARRONI, 2001). Tais dados so compatveis com outros trabalhos que utilizam o modelo de LDBC, indicando a afetividade do modelo em gerar comprometimento heptico (FALLON et al., 1997; MONTERO et al.,2005; VERCELINO et al., 2008, ZHANG et al., 2003). Os animais cirrticos que receberam tratamento com SNAC apresentaram diminuio das provas de integridade heptica, mostrando o efeito hepatoprotetor dessa droga. No h publicaes utilizando a SNAC no modelo de LDBC. Entretanto, a SNAC foi utilizada na preveno da esteato-hepatite no alcolica (NASH), em animais com dieta pobre em colina e, apesar da eficcia na preveno de NASH, no houve alterao nas provas de integridade heptica em nenhum dos grupos (OLIVEIRA et al., 2006; OLIVEIRA et al., 2007; OLIVEIRA et al., 2008). Outra droga com poder antioxidante, a N-acetilcistena tambm foi efetiva na reduo das provas de integridade heptica em animais com LDBC (VERCELINO et al., 2008).. Na avaliao da gasometria arterial, houve reduo significativa da presso parcial de oxignio (PaO2) e da saturao da hemoglobina (SatO2/O2)
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nos animais cirrticos no tratados,demonstrando a reduo da efetividade das trocas gasosas e da afinidade de hemoglobina pelo oxignio nesses animais. Tal fato ratifica os achados de diversos autores que utilizam o modelo de LDBC para avaliar as alteraes pulmonares da cirrose heptica (FALLON et al., 1997; TIEPPO et al., 2003; RODRGUEZ-ROISIN et al. 2004; LEE et al., 2004). O tratamento com a SNAC foi capaz de melhorar a difuso de gases nos animais tratados. A lipoperoxidao, avaliada pelas tcnicas das substncias reativas ao cido tiobarbitrico (TBARS) e por Quimiluminescncia (QL), mostrou-se aumentada no tecido heptico dos animais cirrticos. O aumento da lipoperoxidao pode estar associado ao aumento do estresse oxidativo, podendo ser explicado pela endotoxemia (gerada pelo aumento da translocao bacteriana no intestino do animal cirrtico) e pelo aumento dos cidos biliares, que desequilibram a atividade da cadeia de transporte de eltrons na mitocndria heptica, favorecendo a produo de espcies ativas de oxignio (PASTOR et al.,1997). Os animais tratados com SNAC apresentaram nveis de lipoperoxidao no tecido heptico semelhantes aos dos grupos controle, evidenciando o potencial antioxidante da droga. Em modelo de cirrose biliar secundria outras drogas com poder antioxidante tambm foram efetivas na reduo da lipoperoxidao, como a quercetina e a melatonina (PASTOR et al., 1997; ESREFLOGLU et al., 2005). A SNAC mostrou-se igualmente efetiva na reduo da lipoperoxidaao pulmonar em modelo de NASH (OLIVEIRA et al., 2006; OLIVEIRA et al., 2007; OLIVEIRA et al., 2008). Na avaliao da lipoperoxidao pulmonar houve aumento significativo no grupo cirrtico em relao aos demais, o que pode ser justificado pela endotoxemia, caracterstica da cirrose, que estimula
o acmulo de macrfagos na microcirculao pulmonar, estimulando a produo de xido ntrico (FALLON et al., 1997; ZHANG et al., 2003). O tratamento com SNAC protegeu o tecido pulmonar dos animais contra o aumento da lipoperoxidao, provavelmente por atenuar o dano heptico e assim reduzir a formao de mediadores que determinam a complicao pulmonar.
CONSIDERAES FINAIS
A Sndrome Hepatopulmonar uma complicao pulmonar, mas no apresenta nenhuma modificao no parnquima desse rgo, sendo a alterao puramente vascular e gerada por mediadores produzidos pelo fgado cirrtico. Ou seja, qualquer tratamento para a SHP direcionado para o pulmo seria somente sintomtico e o prejuzo na difuso de gases no seria totalmente corrigido. A administrao da SNAC por via intragstrica permite que ela seja absorvida diretamente para a circulao porta, gerando efeito primariamente sobre o fgado doente. Ao atenuar a doena heptica, a produo de mediadores que induzam a complicao pulmonar ser progressivamente reduzida, melhorando a difuso de gases e conseqentemente a oxigenao sangunea. A SNAC parece ser uma droga promissora para o tratamento da Sndrome Hepatopulmonar.
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Papel da melatoninano estresse oxidativo do fgado e sangue de ratos cirrticos
DARLAN PASE DA ROSA1 SILVIA BONA NORMA ANAIR POSSA MARRONI
RESUMO
A cirrose uma hepatopatia crnica e progressiva que constitui um estgio irreversvel de disfuno heptica. Este trabalho teve como objetivo avaliar o estresse oxidativo no fgado e sangue de ratos cirrticos e tratados com antioxidante Melatonina (MEL). A cirrose foi induzida atravs da inalao de tetracloreto de carbono (CCl4) em ratos machos Wistar. Observou-se reduo nas provas de integridade heptica nos animais tratados com MEL, aumento da lipoperoxidao nos ratos cirrticos, e reduo das mesmas medidas nos animais tratados com MEL, em fgado e eritrcitos, diminuio da atividade das enzimas SOD e GPx nos cirrticos e aumento da SOD nos animais tratados com MEL, aumento dos metablitos do xido ntrico e da deposio de colgeno nos fgados dos cirrticos e uma diminuio do colgeno nos ratos que receberam MEL. Podemos concluir que a Melatonina pode ser considerada hepatoprotetora e sugerimos que a anlise do estresse oxidativo sistmico pode ser um indicador de dano oxidativo. Palavras-chaves : Estresse oxidativo, cirrose heptica, eritrcitos, tetracloreto de carbono e melatonina.
Acadmico do Curso de Biomedicina/ULBRA - Bolsista FAPERGS Aluna Ps-Graduao em Cincias Mdicas/UFRGS
Orientadora - Professora do Curso de Biologia/ULBRA e PPG Diagnstico Gentico e Molecular/ULBRA e Gentica e Toxicologia/ULBRA (nmarroni@terra.com.br)
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ABSTRACT
Cirrhosis is a progressive chronic hapatopathy which constitutes an irreversible stage of liver dysfunction. This work was designed to evaluate the oxidative stress in the blood of cirrhotic rats treated with the antioxidant melatonin (MEL). Cirrhosis was induced through inhalation of carbon tetrachloride (CCl4.). A significant impairment in the Liver Integrity of MEL-treated animals as compared to cirrhotic animals was observed. In rat erythrocytes and liver, lipoperoxidation was significantly increased in the cirrhotic rats as compared to controls and significantly decreased in MEL-treated animals as compared to cirrhotic ones. In blood, a decrease in SOD and GPx enzymes was detected in the cirrhotic group as compared to the control group, with increased SOD activity when MEL was administered. As for hepatic collagen, we found a significant increase in the CCl4 group as compared to the controls and a regression of these values in the treated group. In histology, the rats in the CCl4 group showed fibrosis and formation of fibrotic nodules, characterizing liver cirrhosis; there was reduction of nodules and fibrosis in the MEL treated group. The data allow us to suggest that the observed oxidative stress is related to the damages caused by CCl4 and that the use of MEL can minimize these damages. Key words: Oxidative stress, liver cirrhosis, erythrocytes, carbon tetrachloride, melatonin.
INTRODUO
O fgado tem uma funo importante no metabolismo, incluindo a sntese e o armazenamento do glicognio, gliconeognese e o metabolismo de lipdios e protenas. O fgado tambm responsvel pela produo de bile, da sntese de protenas do plasma, e de detoxicao de drogas. Certamente o fgado tem interaes importantes com cada sistema do organismo (HUFFMYER E NEMERGUT, 2007). A cirrose heptica uma doena crnica que, em sua histria natural, determina inmeras complicaes com elevada morbidade e mortalidade, sendo portanto, um problema de sade mundial. Como doena crnica progressiva, apresenta um estagio inicial de disfuno heptica, lenta e irreversvel, e caracteriza-se pela formao de ndulos hepticos em conseqncia da fibrose. Tais alteraes estruturais constituem-se nas principais respostas do tecido heptico s inmeras agresses de natureza inflamatria, viral, txica, metablica ou congestiva (BERTELLI e CONCI, 1997).
Os trs maiores mecanismos envolvidos na gerao de cirrose so: morte celular, grande deposio de matriz extracelular no fgado (fibrose), e reorganizao celular. O acmulo de matriz extracelular observada na fibrose e cirrose devido ativao de fibroblastos, adquirindo a forma de miofibroblastos. Essas clulas esto ausentes em fgado normal. Elas so produzidas pela ativao de precursores celulares, como as clulas estreladas hepticas (LOTERSZTAJN et al., 2005; GUYOT et al., 2006). O Tetracloreto de Carbono (CCl4) um conhecido hepatotoxina muito usado na induo de leso heptica txica em animais de laboratrio (BUTLER, 1961; LEE et al., 2007; PAVANATO et al., 2007; PEREIRA-FILHO et al., 2008). Sua hepatotoxicidade acredita-se ser oriundo de duas fases. A fase inicial que envolve o metabolismo do CCl4 pelo Citocromo P-450 radical triclorometil (-CCl3), parte do radical triclorometil gera o radical triclorometil-peroxil (OOCCl3), que conduz a peroxidao lipdica (BUTLER, 1961; POYER et
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al., 1980; EDWARDS et al., 1993; PAVANATO et al., 2007). A segunda fase envolve a ativao das clulas de Kupfer, que acompanhada pela produo de mediadores pr-inflamatrios (NAKAHIRA et al., 2003). O modelo experimental de induo de cirrose por CCl4 inalatrio o modelo clssico que mimetiza as alteraes encontradas em pacientes cirrticos (JIMENEZ e CLARI, 1992; CREMONESE et al., 2001; PEREIRA-FILHO et al., 2008). Na cirrose, tm sido descrita alteraes nos mecanismos oxidantes/antioxidantes, que se encontram em desequilbrio e contribuem em grande parte para a necrose heptica (CREMONESE et al., 2001; PEREIRA-FILHO et al., 2008; VIERA, 2008). Recentemente, o estresse oxidativo tem sido sugerido como uma das principais causas de leso tecidual em diversas doenas (CESARATTO et al., 2004; PADHY et al., 2007). A produo de espcies reativas de oxignio (ERO) considerado o principal mecanismo patognico no dano heptico alcolico (HAGYMASI et al., 2001). Diversos ERO so formadas no hepatcito, atravs da ativao das clulas de Kupffer e clulas inflamatrias (MCCLAIN et al., 1999). A cirrose associada a alteraes na circulao sistmica. As hemcias so expostas ao estresse oxidativo durante suas funes aerbicas normais. Em pessoas saudveis, esse estresse equilibrado por um poderoso sistema antioxidante enzimtico e no enzimtico, o que no acontece com pacientes cirrticos, em cujas hemcias h um aumento do estresse oxidativo (GEETHA et al., 2007). Nveis de antioxidantes no plasma ou eritrcitos so parmetros atrativos e de fcil acesso para obteno de informao sobre reparo de dano heptico oxidativo (ROCCHI et al., 1991; LEO
et al., 1993; LECOMTE et al., 1994; HAGYMASI et al., 2001). O uso de antioxidante pode auxiliar a minimizar o estresse oxidativo, contribuindo com a interveno teraputica de fgados cirrticos (MURIEL et al., 1994; PERES et al., 2000; PAVANATO et al., 2003; PAVANATO et al., 2007; TIEPPO et al., 2007; VIERA, 2008). Entre os vrios antioxidantes, a MEL (N-acetil-metoxitriptamina), uma indolamina derivada do triptofano citada por diversos autores como varredor de radicais livres de oxignio (REITER et al., 1997; MUNOZCASTANEDA et al., 2008). A MEL produzida pela glndula pineal, como um hormnio, mas atualmente foi detectada em outros tecidos. Sabe-se que esse hormnio, alm da sua ao contra os radicais livres, tambm regula o ritmo circadiano, a atividade do sistema imune e do sono (KUCUKAKIN et al., 2008). Aps a sua administrao, ela passa livremente atravs das membranas e distribui-se pelos compartimentos de todo o corpo. A MEL em muitos estudos tem se mostrado mais eficaz do que alguns antioxidantes clssicos (exemplo: vitamina E e C) na proteo contra estresse oxidativo/nitrosativo (PIERI et al., 1994; TAN et al., 1998; GITTO et al., 2001; BAYDAS et al., 2002; MARTINEZ-CRUZ et al., 2002). Com isso, realizamos a induo de cirrose heptica atravs do modelo experimental induzida pelo CCl4 inalatrio para avaliar o fgado atravs das enzimas sricas, colgeno e histologia e os eritrcitos, para procurar relacionar esses danos do tecido heptico com a expresso de danos oxidativos sricos. Este trabalho tem como objetivo geral avaliar o efeito do tratamento com antioxidante Melato-
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nina em ratos cirrticos atravs de marcadores de estresse oxidativo no fgado e no sangue.
MATERIAL E MTODOS
Animais Os procedimentos experimentais observaram as normas estabelecidas pela Pesquisa em Sade e Direito dos Animais, de acordo com a Comisso de Pesquisa e tica em Sade do Grupo de Pesquisa e Ps-Graduao do Hospital de Clnicas de Porto Alegre (GOLDIN, 1997). Foram utilizados quinze ratos Wistar machos, pesando em mdia de 250g, provenientes do biotrio do Instituto de Cincias Bsicas da Sade da UFRGS (CREAL). Os animais foram mantidos na Unidade de Experimentao Animal do Centro de Pesquisas do Hospital de Clnicas de Porto Alegre durante o experimento, em caixas plsticas de 47x34x18cm forradas com maravalha, em ciclo de 12 horas claro/escuro (luz das 7 s 19 horas) e temperatura de 22 4C. Os ratos recebiam 16g por animal/dia de rao (Purina-Nutripal, Porto Alegre, RS, Brasil) e a gua era administrada ad libidum.
diluda em 1mL de soluo fisiolgica (NaCl 0,9%) e etanol a 8%. Ela foi administrada diariamente a partir da 10 semana de inalao de CCl4, momento em que histologicamente temos fibrose e dano heptico nesses animais, no sendo interrompido a inalao, at a 16 semana.
Induo da cirrose Para diminuir o tempo de desenvolvimento de cirrose, foi administrado Fenobarbital na gua de beber, para todos os ratos, como um indutor enzimtico, para aumentar a metabolizao do CCl4 seus metabolitos ativos como o triclorometil. Iniciou-se a administrao uma semana antes da primeira inalao e perpetuou-se at o fim do experimento, na concentrao de 0,3g/L. O grupo cirrtico foi exposto ao CCl4 duas vezes por semana (segundasfeiras e sextas-feiras) em uma cmara de inalao padro de 65x26x21cm. O CCl4 era colocado em um recipiente de vidro (umidificador), ligado a um compressor de ar com vazo de 1L/min, durante todo o experimento, de acordo com Jimenez e Clari (1992). Nas trs primeiras sesses, o tempo de exposio ao gs foi de meio minuto, permanecendo os ratos no interior da cmara por mais meio minuto, com o compressor desligado. Nas prximas trs sesses, o tempo de gaseamento aumentava para um minuto, seguido de outro um minuto com compressor desligado. Posteriormente, a exposio ao gs e o subseqente perodo de permanncia na cmara aumentavam de meio minuto a cada trs sesses, alcanando-se o tempo mximo de cinco minutos de gaseamento com CCl4 e cinco minutos com o compressor desligado. Este procedimento de induzir cirrose tem um tempo total de dezesseis semanas (JIMENEZ e CLARI, 1992; CREMONESE et al., 2001; PEREIRA-FILHO et al., 2008)..
Grupos e tratamentos Os animais foram divididos em trs grupos experimentais: I-Controle; II-Cirrtico; III-Cirrtico + MEL. O grupo Controle + MEL no foi realizado porque em trabalhos anteriores, constatamos no haver diferena significativa com os ratos controles. A MEL (Sigma) foi injetada intraperitonealmente na dose de 20mg/Kg de peso do animal,
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Anlises Bioqumicas Na dcima sexta semana foi feita a morte dos animais, primeiro anestesiava-se com cloridato de cetamina (100mg/kg) e cloridrato de xilasina (50mg/ kg) ip. Com o auxilio de um capilar heparinizado o sangue era coletado atravs do plexo retro-obrital (HALPERN e PACAUD, 1951), a qual era dividida em trs fraes: para a realizao das provas de integridade heptica (PIH), para a anlise da medidas que reagem ao cido tiobarbitrico (TBARS) e para as anlises das enzimas antioxidantes. A seguir realizava-se a tricotomia seguida de uma laparatomia mdia, e retirava-se o fgado desses animais. Esse fgado foi dividido em duas partes: para a realizao dos blocos de parafina e posteriormente a montagem das laminas histolgicas e outra parte foi congelada -80C para as posteriores anlises.
espectrofotometricamente a 625nm, sendo expressos valores em mg/mL , utilizado para calcular TBARS no fgado e valores das enzimas antioxidantes.
Lipoperoxidao no fgado A quantidade de produtos de aldedos gerados pela peroxidao lipdica quantificada pela reao do cido tiobarbitrico usando 3mg de protenas por amostra. Resultado referente a TBARS. As amostras foram incubadas a 90C por trinta minutos, aps foi adicionado 500L de cido tiobarbitrico 0,37% no cido tricloroactico 15% e centrifugado a 4C por 2000 x g por quinze minutos. Sendo determinada a absorvancia, espectrofotometricamente a 535nm (BUEGE e AUST, 1978).
Lipoperoxidao nos eritrcitos Homogeneizado Os fgados foram cortados com tesoura e pesados, adicionou-se 9mL de tampo fosfato (KCL 140mM, fosfato 20mM e pH 7,4) por grama de tecido e homogeneizou-se em Ultra Turrax (IKAWERK) por quarenta segundos a temperatura de 4C. A seguir foi centrifugado em centrifuga refrigerada por dez minutos a quatro mil rpm (SORVALL RC-5B Refrigerated Superspeed Centrifuged). O sobrenadante foi pipetado em eppendorfs e o precipitado foi desprezado. As amostras foram acondicionadas novamente temperatura de -80C para posteriores anlises. O sangue foi coletado com heparina e centrifugado a trs mil rpm por cinco minutos a 4C. Foi descartado o plasma e, os eritrcitos foram lavados trs vezes com igual volume de soluo salina (NaCl 0,9%), sendo descartado o sobrenadante a cada lavagem e reservado os glbulos. Pipetou-se 10L dos glbulos lavados para a dosagem da hemoglobina atravs da tcnica de Drabkin e Austin (1932). Pipetou-se outros 100 L dos glbulos lavados para a determinao de produtos gerados pela peroxidao lipdica atravs da tcnica de TBARS, que foi medida espectrofotometricamente a 535nm, de acordo com Yagi (1984).
Protena Foi utilizado o mtodo de soluo de albumina bovina (SIGMA) na concentrao de 1mg/mL, de acordo com Lowry et al.(1951). As amostras eram medidas
Anlises das enzimas antioxidantes Para armazenagem da amostra para as anlise das enzimas antioxidantes, 150 L dos glbulos
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lavados foram diludos em 1,5mL de cido actico 1mM e MgSO4 4mM e posteriormente congelados em freezer -80C. Para a avaliao da atividade das enzimas antioxidantes, essas misturas foram descongeladas e centrifugadas a 1200 rpm durante trinta segundos, e foi utilizado o sobrenadante. A anlise das atividades das superxido dismutase (SOD) em eritrcitos baseada na inibio da reao do radical superxido com a adrenalina, sendo de acordo com Misra e Fridovich (1972). A anlise da atividade da enzima Catalase (CAT) em eritrcitos baseada em medir a diminuio de perxido de hidrognio, de acordo com Aebi (1984). E a atividade da enzima Glutationa peroxidase (GPx) baseada no consumo de NADPH na reao de reduo da Glutationa oxidada e reduzida, de acordo com Floh e Guntzler (1984). A medida do xido ntrico, no fgado, foi realizada atravs das medidas de nitritos e nitratos, consistindo na transformao de nitratos e nitritos por meio da nitrato redutase e lido posteriormente a 550nm (GRANGER, 1999). A concentrao de colgeno foi determinada atravs da medida da hidroxiprolina contida na digesto cida do fgado, que foi lida espectrofotometricamente em 560nm e os resultados expressos em g/mg de protena (ROJKIND, 1974). Para avaliar o material histolgico, uma parte do fgado foi deixado em formol 10% durante vinte e quatro horas e aps foi feito bloco de parafina com esse material, que aps, com auxilio de micrometro, foi cortado em fatias de 6m. A tcnica de picrossirius consiste de uma colorao que destaca a presena de colgeno na amostra. Os resultados so expressos em valor da mdia erro padro. Foi utilizado ANOVA para anlise
de varincia e o teste de Studen-Newmann-Keuls para comparao entre grupos, sendo adotado o percentual de significncia de 5% (p<0,05).
RESULTADOS
Anlises Bioqumicas As anlises das enzimas hepticas transferases (AST e ALT), marcadores de dano heptico, mostraram que o grupo cirrtico apresentaram nveis significativamente aumentados (p<0,05), j nos do grupo cirrtico mais tratamento com Melatonina houve uma diminuio significativa desse mesmo parmetro em comparao com os cirrticos (p<0,05) (Tabela 1).
Tabela 1 - Valores das enzimas de integridade heptica AST e ALT.
CO AST (U/L) ALT (U/L) 132,415,44 37,42,8 CCL4 530,464,1A 304,233,7A CCL4 + MEL 381,866,6B 173,027,4C
a p<0,001 vs CO; b p<0,01 vs CCl4; c p<0,001 vs CCl4 CO grupo controle; CCl4 grupo cirrtico; CCl4+MEL grupo cirrtico tratado com Melatonina AST aspartato aminotransferase; ALT Alanina aminotrasnferase.
Lipoperoxidao Os resultados obtidos atravs do mtodo de TBARS, no sangue e fgado, mostram que ocorreu aumento da lipoperoxidao no grupo cirrtico, quando comparado com o controle (>180%), j no grupo tratado com MEL esses valores retornam para prximo dos valores do controle, tanto no tecido heptico como nos eritrcitos (Figura 1 e 2).
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Enzimas antioxidantes A atividade das enzimas antioxidantes Superxido Dismutase (SOD) e Glutationa Peroxidase (GPx), nos eritrcitos, do grupo cirrtico esto diminudos em comparao aos do grupo controle. No grupo que recebeu MEL, a atividade da GPx no houve diferena com o grupo CCl4, j na atividade da SOD houve aumento significativo nos ratos que receberam MEL em comparao aos cirrticos. Na avaliao da atividade da Catalase (CAT), no mostrou diferena significativa em nenhum dos grupos (Tabela 2).
Tabela 2 - Avaliao da atividade das enzimas SOD, GPx e CAT.
CO SOD (USOD/MG PROT) GPX (MMOLES/MIN/MG PROT) CAT (PMOLES/MG DE PROT)
TBARS
Figura 1 - Efeito do tetracloreto de carbono inalatrio e da administrao de Melatonina na lipoperoxida o, analisada pelo mtodo de TBARS nos fgados.
Mdia erro padro (n=5). a - p<0,01 vs CO; b - p<0,05 vs CCl4. CO grupo controle; CCl4 grupo cirrtico; CCl4+MEL grupo cirrtico tratado com Melatonina.
CCL4 12,652,33A 0,720,03B 0,0080,001
CCL4 + MEL 22,111,58B,C 0,670,03B 0,0070,001
31,152,88 1,460,34 0,0110,002
6,00
TBARS - eritrcit os nmol/mg Hb
5,00 4,00 3,00 2,00 1,00 0,00 CO
a b,c
a p<0,01 vs CCl4; b p<0,05 vs CO; c p<0,05 vs CCl4; Mdia erro padro (n=5). CO grupo controle; CCl4 grupo cirrtico; CCl4+MEL grupo cirrtico tratado com Melatonina
xido ntrico Na medida do xido ntrico (NO) no fgado, observamos uma diminuio significativa dos metablitos no NO nos ratos cirrticos em comparao aos controles , e a MEL no foi capaz de reverter essa situao (Tabela 3).
Tabela 3 - Avaliao do NO no tecido atravs da medida dos metablitos Nitritos e Nitratos totais.
CO NITRITOS (UMOL/L) NITRATOS TOTAIS (UMOL/L) 6,140,94 0,2740,012 CCL4 2,600,23
A
CCl4
CCl4+MEL
Figura 2 - Efeito do tetracloreto de carbono inalatrio e da administrao de Melatonina na lipoperoxidao, analisada pelo mtodo de TBARS nos eritrcitos.
Mdia erro padro (n=5). a - p<0,001 vs CO; b - p<0,001 vs CCl4; c - p<0,01 vs CO; CO grupo controle; CCl4 grupo cirrtico; CCl4+MEL grupo cirrtico tratado com Melatonina
CCL4 + MEL 3,290,52A 0,1000,009B
0,1300,010B
a - p<0,01 vs CO; b - p<0,001 vs CO; Mdia erro padro (n=5). CO grupo controle; CCl4 grupo cirrtico; CCl4+MEL grupo cirrtico tratado com Melatonina
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Colgeno Na medida da concentrao de colgeno, observamos um aumento significativo nos animais do grupo cirrtico em comparao aos do grupo controle, j nos do grupo tratado com MEL, observamos uma diminuio desses valores quando comparado aos cirrticos (Figura 3).
Figura 4 - Fotomicrografia de fgado de ratos. A. fgado de rato controle; B. fgado de rato cirrtico na dcima semana de inalao; C. fgado de rato cirrtico na dcima sexta semana de inalao; D. fgado de rato cirrtico tratado com MEL. Colorao de picrossrius (40x).
Figura 3 - Efeito do CCl4 inalatrio e da administrao de Melatonina na concentrao de colgeno no fgado.

Mdia erro padro (n=5). a - p<0,001 vs CO; b - p<0,001 vs CCl4; c - p<0,05 vs CO; CO grupo controle; CCl4 grupo cirrtico; CCl4+MEL grupo cirrtico tratado com Melatonina
DISCUSSO
A induo de cirrose heptica atravs da inalao de tetracloreto de carbono um efetivo modelo experimental para se avaliar as leses oxidativas causadas pela formao de radicais livres (CREMONESE, 2001; PEREIRA-FILHO, 2008). Tem-se reconhecido que os radicais livres triclorometil (CCl3) e triclorometilperoxil (OOCCl3), formados aps a metabolizao do CCl4 pelo citocromo p-450, desestruturam os hepatcito (BOVERIS, 1983), provocam alteraes morfolgicas envolvendo o retculo endoplasmtico, complexo de golgi, a membrana plasmtica e a mitocndria destas clulas (CAMERON, 1936). Estas alteraes lesam a clula, provocando sua morte/regenerao e conseqentemente fibrose tecidual, que organizada em ndulos, caracterizar a cirrose heptica (RECKNAGEL, 1989).
Histologia A histologia dos animais CCl4 na dcima semana apresentou presena de fibrose nodular (Figura 4B), quando comparado com controle ( Figura 4A). Na dcima sexta semana, os ratos desse mesmo grupo apresentavam cirrose severa, com grande concentrao de fibrose nodular e colgeno (Figura 4C), j nos animais tratado com Melatonina mostraram uma regresso nesse quadro, com moderada fibrose (Figura 4D).
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As provas de integridade heptica (PIH) mostraram leso tecidual nos ratos do grupo cirrtico, com o aumento de pelo menos 400 vezes, e apresentaram nveis diminudos de leso nos animais do grupo tratado com o antioxidante Melatonina, assim como foi observado em outros trabalhos com a administrao de diferentes antioxidantes, como a N-acetilcisteina (PEREIRA-FILHO, 2008), e a quercetina (PAVANATO, 2007; VIERA, 2008), evidenciando a proteo ao dano heptico nesses animais. A lipoperoxidao um marcador de dano na membrana celular, e a medida de malondialdeido, que um produto desse dano, realizada atravs da tcnica de TBARS. Nesse trabalho avaliamos a lipoperoxidao no tecido heptico e, tambm, nos eritrcitos. Obtivemos como resultado, um aumento importante e significativo desse marcador em ambas as amostras dos animais do grupo cirrtico em comparao aos controles e um decrscimo nos animais que receberam a MEL comparando-os com os CCl4. Esses dados mostram que h o dano oxidativo sobre os lipdios das membranas dessas clulas, e que a Melatonina diminui esse dano (GEETHA, 2007; PEREIRA-FILHO, 2008; PAVANATO, 2007; WU, 2007; VIERA, 2008). As enzimas antioxidantes endgenas so os principais responsveis pela defesa do organismo frente a esses agentes oxidativos, sendo constitudos principalmente pelas enzimas Catalase (CAT), Superxido dismutase (SOD) e Glutationa peroxidase (GPx). No presente trabalho, no foi encontrado diferena significativa de CAT, nos eritrcitos, entre os grupos, podendo ser justificada pela diminuio da SOD e consequentemente da GPx no grupo cirrtico, no alterando a atividade da CAT. Visto que o radical livre primeiramente reduzido pela SOD, que formar o H2O2 que por sua vez ser reduzido pela GPx ou pela CAT. Na avaliao
da GPx, houve uma reduo significativa da sua atividade em animais cirrtico em comparao aos cirrticos. Na avaliao da atividade da SOD, podemos observar que houve uma diminuio de 40 % em comparao ao controle, j nos animais tratados com MEL, houve uma melhora nesses resultados, aumentando 57% em comparao aos cirrticos, podendo ser decorrente da ao indireta da MEL, a qual estimula a sntese de SOD. As redues das enzimas antioxidantes endgenas nos animais cirrticos, juntamente com os resultados de lipoperoxidao, classifica esses animais em um quadro de estresse oxidativo (OSMAN, 2007), j nos animais tratados com o antioxidante Melatonina reduziram a lipoperoxidao e aumentaram a atividade da enzima SOD, demonstrando uma melhora significativa do estresse oxidativo nesses animais e posteriormente tratados com MEL, possivelmente por sua ao varredora de radicais livres. O xido ntrico um importante vasodilatador no sistema vascular. Na avaliao do xido ntrico, atravs da medida dos metablitos nitritos e nitratos totais, podemos observar que os ratos cirrticos apresentaram uma diminuio significativa em comparao aos do controle, mostrando um desequilbrio no sistema vasodilatador/vasoconstritor intra-heptico (VIERA, 2008). Porm a Melatonina na dose que foi utilizada no foi capaz de restaurar esses nveis. O colgeno sintetizado atravs da ativao das clulas estreladas hepticas, em uma medida fisiolgica de regenerao tecidual. Na quantificao de colgeno nos fgados dos animais cirrticos, constatamos um aumento de 381 vezes em comparao ao controle, e uma reduo, de 198 vezes, dos tratados comparando-os com animais cirrticos, assim como Pereira-Filho et al. observa-
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ram com o tratamento com outro antioxidante, a N-acetilcistena (2008). A anlise histolgica mostrou atravs da tcnica de colorao de picrossrius a presena de colgeno e formao de micro e macro ndulos fibrticos, caracterizando cirrose heptica e diminuio desses danos nos fgados dos animais tratados com a MEL, como observado em trabalhos com uso da NAC e quercetina em animais cirrticos (PEREIRAFILHO, 2008; PAVANATO, 2007; TIEPPO, 2007; VIERA, 2008). Esses dados nos fazem sugerir que a Melatonina diminui o estresse oxidativo, por sua ao de scavenger de radicais livres e proteo antioxidante de biomolculas. A Melatonina reduz significativamente os nveis de lipoperoxidao no fgado e eritrcitos, diminui significativamente o colgeno no fgado e aumenta a atividade da enzima antioxidante SOD nos eritrcitos. Os resultados encontrados no presente trabalho em sangue e tecido heptico so semelhantes aos encontrados por nosso grupo em outras avaliaes no tecido heptico, utilizando outros modelos de cirrose e avaliando outros antioxidantes, como a N-acetilcisteina (NAC), e a quercetina (PEREIRAFILHO, 2008; PAVANATO, 2007; VIERA, 2008), sugerindo desta forma a eficcia nas dosagens realizadas atravs de eritrcitos de ratos, para avaliao de estresse oxidativo sistmico.
A dosagem do estresse oxidativo em sangue perifrico parece ser eficaz para a anlise de cirrose heptica, reproduzindo os danos oxidativos vistos no tecido heptico.
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CONCLUSO
A administrao de Melatonina reduziu o dano heptico, a lipoperoxidao e elevou a atividade da enzima antioxidante SOD, demonstrando-se proteo heptica frente a esse agente agressor.
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Protocolo experimental de induo de proliferao neointimal vascular em modelo de arterias coronrias sunas
JULIANA G. FERST1 DIOVANA DALLAROSA1 THEMIS THEISEN2 FERNANDA BAKKAR2 JOS L. GUIMARES2 CRISTINA DREYER3 ALEXANDRE C. ZAGO4 ALCIDES J. ZAGO4 PAULO R. CENTENO RODRIGUES5 BEATRIZ G. KOSACHENCO5 JOS CASCO RAUDALES4,6
RESUMO
O objetivo foi desenvolver e implementar modelo experimental de induo de hiperproliferao neointimal em sunos (leses vasculares simuladoras de reestenose). De Ago/2006 a Set/2008, 55 sunos da raa Large White foram submetidos a cateterismo cardaco seguido de leso vascular e, observados durante 28, 56 ou 84 dias. Aps estes perodos, foram realizados cateterismo cardaco e IVUS e ACTP com droga experimental ou IVUS e
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Acadmico do Curso de Medicina Veterinria/ULBRA - Bolsista PROICT/ULBRA Acadmico do Curso de Medicina/ULBRA - Bolsista PROICT/ ULBRA Residente do Curso de Medicina Veterinria/ULBRA, mdico veterinrio
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Professor do Curso de Medicina/ULBRA Professor do Curso de Medicina Veterinria/ULBRA Professor -Orientador e coordenador do Centro de Pesquisa Cardiovascular (CPC) da ULBRA (jose.raudales@ulbra.br)
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anlise histolgica da artria coronria. Foram realizados 86 implantes de stents, 82 IVUS, 51 ACTP e 43 testes de drogas, totalizando 262 procedimentos (mdia de 4,8 procedimentos/animal). A taxa de reestenose binria foi de 89,0% (65/73 implantes), o que significa que o modelo foi implantado de forma satisfatria. Palavras-chaves: Angioplastia coronria, modelo experimental suno, neontima, reestenose, stent.
ABSTRACT
The study aim was to develop and apply an experimental protocol of vascular neointimal proliferation induction in swine (vascular injury producing restenosis-like lesions). From Aug/06 to Sept/08, 55 Large White swine were used; after completed both cardiac catheterization and vascular injury protocol, animals received postoperative care for 28, 56, and 84-day periods. After that, new catheterization and IVUS evaluation were done; the swine underwent PTCA and experimental drugs or IVUS evaluation followed by histological assessment of the coronary artery. PCIs procedures included 86 stent deployment, 82 IVUS evaluation, 51 PTCA and 43 drug tests performed, totalizing 262 procedures (average 4.8 per animal). The binary restenosis index achieved was 89.0% which means that swine model was successfully applied. Key words: Coronary angioplasty, swine bio-experimental model, neointima, restenosis, stent
INTRODUO
Dos mltiplos modelos experimentais em animais, canino, murino, ovino, leporino e suno, o modelo suno apresenta caractersticas antomo-morfo-funcionais mais correlatas com as caractersticas humanas. Assim, inmeros estudos bioexperimentais tm demonstrado que a resposta hiperproliferativa caracterizada pela formao de neontima decorrente de leso do endotlio vascular em sunos histologicamente similar quela observada na reestenose intravascular humana (SCHWARTZ et al., 1990; BONAN, PAIEMENT e LEUNG, 1996; GALLO et al., 1998; BIENVENU et al.,2001; SCHWARTZ, KANTOR e HOLMES, 2001; LOWE et al., 2003). O modelo suno foi descrito originalmente por Schwartz et al. (1990) utilizando bales de angioplastia para produzir leso na ntima vascular nas artrias
coronrias sadias de porcos jovens; posteriormente foram utilizados stents metlicos sobre-dimensionados com o mesmo objetivo (SCHWARTZ et al., 1992; ECKHARD et al., 2000; SCHWARTZ, KANTOR e HOLMES, 2001). Do ponto de vista anatmico, as artrias coronrias sunas so bastantes semelhantes s coronrias humanas, no entanto apresentam menos circulao colateral (LOWE et al., 2003). O tronco da coronria esquerda bifurca, originando as artrias descendente anterior esquerda e circunflexa, esses vasos tm dimetro similar s coronrias humanas (2 4 mm). A artria circunflexa d origem a at 3 ramos marginais enquanto que a descendente anterior irriga o septo atravs de 4 a 6 ramos septais. A artria coronria direita to calibrosa quanto a humana, porm menos dominante (LOWE et al., 2003). A justificativa deste modelo est baseada no fato que os testes de novos dispositivos cardiovasculares
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intervencionistas, tais como os stents, precisam de um modelo animal adequado para avaliar a segurana, em termos de biocompatibilidade assim como as incidncias de insucesso do procedimento e de eventos cardacos adversos, e a eficcia quanto incidncia de reestenose binria angiogrfica a curto prazo dos prottipos. De fato, a Food and Drug Administration (FDA) nos Estados Unidos tem proposto diretrizes que exigem a avaliao dos dispositivos de angioplastia coronria em modelo animal prvio aprovao para pesquisa clnica (USA FDA, 1994). O objetivo principal do trabalho foi desenvolver e implementar protocolo de modelo experimental de induo de hiperproliferao neointimal em sunos visando a criao de tcnicas de leso vascular simuladores de reestenose. Os objetivos secundrios foram 1) Desenvolver mtodos e/ ou tcnicas para tratar, prevenir ou at mesmo impedir essa complicao; 2) Avaliar o impacto das endoprteses intra-coronrias na interfase endotlio/superfcie biocompatvel, e 3) Avaliar o efeito de novas drogas inibidoras da reestenose ou ento daquelas de uso comum, porm aplicadas com diferente metodologia.
antibiticos. Devido ao fato de implantar prteses dentro do leito vascular, se faz necessrio o uso de drogas antiplaquetrias e antitrombticas: acido acetilsalislico (AAS, 100 mg/dia indefinidamente) e clopidogrel na dosagem inicial de 37,5 mg/dia (LOWE et al., 2003), o qual foi aumentado para 75 mg/dia conforme o ganho ponderal aproximava-se dos 70 kg, e mantido durante pelo menos 3 meses). Em todos os procedimentos foram respeitadas as normas gerais de assepsia e anti-sepsia e guiados pelos protocolos de pesquisa animal conforme estabelecido pela Comisso de Ensino do Colgio Brasileiro de Experimentao Animal (COBEA, s/d) e pelo Conselho Federal de Medicina Veterinria (CFMV, 2002). O projeto foi aprovado pelo Comit de tica em Pesquisa Humana e Animal da instituio. Local: O projeto foi realizado no Laboratrio de Hemodinmica Experimental, localizado dentro do bloco cirrgico do Hospital Veterinrio da ULBRA e conta com a mesma estrutura de uma unidade similar para uso humano. A equipe de pesquisa multidisciplinar contando com a participao de mdicos, veterinrios, enfermeiras, farmacuticos, engenheiros, alunos do programa de iniciao cientfica e tcnicos de vrias reas. Anestesia: A medicao pr-anestsica foi realizada com atropina 0,044 mg/kg IM, acepromazina 0,1 mg/kg IM, midazolan 0,5 mg/kg IM e azaperone 2 mg/kg IM. Em estado semi-inconsciente o suno era completamente higienizado com gua morna e sabonete lquido. Na sala de pr-anestesia foi realizada venclise na veia marginal da orelha e instituda fluidoterapia com soluo de Ringer com lactato de sdio na dosagem de 5 a 10 ml/kg/hora. A induo anestsica foi realizada com uma associao comercial de tiletamina + zolazepam 4 mg/kg IV , seguida de intubao endotraqueal e ventilao espontnea
MATERIAL E MTODOS
Amostra: Foram utilizados sunos jovens da raa Large White, com peso inicial aproximado de 45 a 50 kg. Aps aplicar o protocolo de leso vascular, os animais foram observados durante 04 semanas (28 dias), tempo suficiente para o desenvolvimento da neontima no local da injuria vascular. No perodo de recuperao, os animais foram mantidos em local apropriado e alimentados normalmente. Diariamente foram revisados os locais de acesso seguida da aplicao profiltica de
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com O2 a 100% na dose de 20 ml/kg/minuto. A manuteno da anestesia foi realizada com isoflurano ao efeito, utilizando um vaporizador universal. A partir deste momento, o paciente foi monitorado atravs da contagem da freqncia cardaca e respiratria, ECG de superfcie, oximetria de pulso e controle de temperatura corporal. Aps o posicionamento definitivo do paciente na mesa cirrgica, era administrado tetraciclina 5 mg/kg IM como profilaxia antibitica. No ps-operatrio imediato foi utilizado cetoprofeno 3 mg/kg IV , tilosina 10 mg/kg IM e oxitetraciclina em veculo longa ao 20 mg/kg IM. Abordagem vascular e trans-operatrio: A abordagem vascular foi realizada atravs inciso cirrgica por planos na regio inguinal (eventualmente na regio cervical ventral), seguida de disseco vascular das artrias femorais (entre as duas pores do msculo sartrio) ou cartidas externas, direita ou esquerda. Uma vez exposta a artria, aps adaptao de dois reparos com fita cardaca, esta foi puncionada pela tcnica de Seldinger modificada, seguida da colocao de uma bainha arterial 7F (Figura 1). Conseguido o acesso vascular, procedeuse administrao sistmica de heparina, na dosagem de 100 UI/kg IV (GALLO et al., 1999), com doses de reforo a cada 30 minutos se necessrio (dependendo da durao da ICP). Foi adotado o uso profiltico do antiarrtmico amiodarona 3 - 6 mg/kg IV ou 150 mg IV em dose nica, e do vasodilatador coronrio mononitrato de isossorbida 10 mg intracoronrio. Terminado o procedimento, a artria foi suturada em padro continuo simples com fio de polipropileno 6-0; os planos anatmicos foram fechados com fio de poliglactina 2-0 e a dermorrafia foi realizada com sutura intra-drmica. A medicao utilizada no ps-operatrio foi cetoprofeno 3 mg/kg VO Sid por 3 dias, oxitetraciclina 25 mg/kg VO Sid por 8 dias e tiamulin 8,8 mg/kg VO Sid por 8 dias; isto porque as baias dos sunos, apesar dos esforos
de higienizao freqente, so consideradas contaminadas e potencialmente infectantes.
Figura 1 - Laboratrio de Hemodinmica Experimental localizado dentro do bloco cirrgico do Hospital Veterinrio da ULBRA. Observa-se o momento em que um stent metlico est sendo preparado para ser implantado dentro da artria coronria suna.
Em geral, quando a abordagem planejada foi pela artria femoral, foram utilizados cateteres com curvas especiais como AR1, HS, MP e SR, sendo este ltimo o cateter de escolha na maioria dos procedimentos, em funo das caractersticas anatmicas particulares do arco artico dos sunos (GHOSHAL, 1986). Para realizar as angiografias coronrias, os implantes de stents e as angioplastia, bem como a colocao dos cateteres de ultra-som, foi utilizado um aparelho de cineangiografia modelo Angio Diagnost 5 (Figura 2) e, as imagens foram digitalizadas utilizando o sistema Digital Cardiac Imaging (DCI) sendo posteriormente gravadas e armazenadas em discos compactos (CDM 3300 recorder; todos os aparelhos da marca Philips). Os procedimentos diagnsticos e intervencionistas (angiografias coronrias, ACTP , implante de stents, IVUS, testes de drogas, etc.) foram realizados utili-
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zando as mesmas tcnicas de cardiologia intervencionista em seres humanos (ROUBIN et al., 1994; RAUDALES e ZAGO, 2000). No cateterismo de controle, os sunos foram estudados por IVUS 28 dias aps do implante da prtese intra-coronria, utilizando para tais fins o aparelho Oracle In-Vision Imaging System V 3.3.1 (EndoSonics Co., USA) (Figura 2) e os cateteres Avanar F/X (Volcano Therapeutics Inc., USA). Nesta nova interveno tambm foi realizada angioplastia convencional (para tratamento da reestenose) e aplicada droga experimental. Aps outros 28 dias foi realizado novo cateterismo seguido de IVUS e anlise histolgica da artria coronria em estudo. Protocolo de leso vascular: Para induzir a hiperproliferao neointimal foi utilizada a tcnica de implante de um stent com dimenso superestimada (superdimensionado) para lesar a parede arterial (SCHWARTZ et al., 1990; BONAN, PAIEMENT e LEUNG, 1996; ECKHARD et al., 2000; SCHWARTZ, KANTOR e HOLMES, 2001), ou seja, foi implantado um stent com dimetro final 1,4 ou 1,5 maior (SCHWARTZ et al, 2001; HUCKLE et al., 2001) em relao ao dimetro de referncia do vaso e com comprimento total de 16 a 18 mm. Foram realizadas duas insuflaes de 35 segundos de durao cada uma, a uma presso de 16 at 25 atm com intervalos de 30 segundos entre as insuflaes. Eutansia, microscopia eletrnica e histopatologia: Caso a eutansia fosse indicada ou necessria para os fins da bioexperimentao, esta foi realizada com o suno ainda sob os efeitos da anestesia geral, atravs da colocao do cateter guia dentro do ventrculo esquerdo, seguida da injeo intracavitria de 03 ampolas de cloreto de potssio (KCl) 10% ocasionando fibrilao ventricular seguida de parada
cardiorrespiratria (Resoluo N 714 do CFMV , 2002). Uma vez completados os tempos e prazos do protocolo, alguns dos animais foram sacrificados e realizados estudos de microscopia eletrnica e histopatologia; aqui foram analisados os efeitos das prteses sobre o endotlio e tecidos subjacentes, a fim de determinar o grau de biocompatibilidade dos dispositivos (avaliado indiretamente pelo grau de hiperplasia neointimal desencadeado pelo stent). Foram realizados algumas avaliaes In vitro dos stents, por microscopia eletrnica de varredura, para o clculo de suas dimenses e para anlise da sua superfcie.
Figura 2 - Console e monitor do aparelho de ultrasom intravascular (IVUS); mesa, tubo e intensificador de imagem do aparelho de hemodinmica.
RESULTADOS
Desde a implementao do Laboratrio de Hemodinmica Experimental em Agosto de 2006 at Setembro de 2008, 55 sunos foram submetidos a ICPs nos quais foram implantados 86 stents (sobre-
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dimensionados e prottipos), realizados 82 ultra-sons intra-coronrios (IVUS), 51 angioplastias (ACTP s/ stents) e 43 testes de drogas totalizando 262 procedimentos (mdia de 4,8 procedimentos por animal, Tabela 1). A taxa de sucesso dos implantes foi de 97,7%, havendo dois casos de migrao prximal do stent. Das endoprteses implantadas, 73 eram stents sobre-dimensionados cuja finalidade era causar leso vascular e gerar uma resposta hiperproliferativa significativa (objetivo da pesquisa). No entanto, no decorrer do projeto, alguns prottipos de stents ou de novas ligas metlicas (13 unidades, 15,1%) foram implantados para avaliar a sua segurana em termos de biocompatibilidade (outro objetivo da pesquisa). Como esses stents foram implantados mantendo uma relao 1:1 entre os dimetros do vaso e da prtese, eles foram utilizados como grupo controle.
Tabela 1 - Resultados do modelo com implante de stent sobre-dimensionado.
Evento Sunos Large White Anestesia geral PROCEDIMENTOS (ICP) STENTS IMPLANTADOS: - SOBRE-DIMENSIONADOS - PROTTIPOS - SUCESSO IVUS* REALIZADOS ACTP** S/STENT TESTE DE DROGAS TOTAL DE PROCEDIMENTOS MDIA DE PROCEDIMENTOS REESTENOSE BINRIA ( DL > 50%) 86 73 13 97,7% 82 51 43 262 4,8 89,0% 65 em 73 stents, calculada pelo QCA* e pelo IVUS* Total de stents implantados Para induzir reestenose Testes de biocompatibilidade 02 casos de migrao do stent Sucesso 100% Sucesso 100% Sucesso 79,1% N 55 108 Observaes Peso mdio 45 50 kg (na 1. interveno)
foram: quatro casos de septicemia, 01 caso de parada cardiorrespiratria e um caso de hipertermia maligna (Tabela 2). As mortes por septicemia aconteceram no ps-operatrio imediato e os casos de parada cardaca e hipertermia ocorreram uma no trans-operatrio e outra na induo da anestesia. A incidncia de mortalidade tardia (28 a 56 dias aps 1 interveno) foi de 5,9% (dois casos), os bitos aconteceram durante os testes farmacolgicos e foram associados ocluso aguda da coronria estudada seguida de fibrilao ventricular e parada cardaca sem resposta s manobras usuais de ressuscitao cardiopulmonar.
Tabela 2 - Mortalidade e suas causas.
Evento Sunos Large White N (%) 55 (100%) Observaes Peso mdio 45 50 kg (na 1. interveno) 0 72 h Animais previamente doentes Durante a induo anestsica Durante a induo anestsica 28 56 dias Disseco e ocluso da coronria seguida de brilao ventricular CELULITE NA FERIDA OPERATRIA BRIGA NO CURRAL
MORTALIDADE INICIAL (CAUSA) - SEPTICEMIA - HIPERTERMIA MALIGNA MORTALIDADE TARDIA (CAUSA) - PARADA CARDACA - INFECO NO LOCAL - POLITRAUMATISMO
6 (10,9%) 4 (7,3%) 1 (1,8%) 4 (7,3%) 2 (3,6%) 1 (1,8%) 1 (1,8%)
- PARADA CARDIORRESPIRATRIA 1 (1,8%)
*QCA e IVUS denotam angiografia coronria quantitativa e ultra-som intravascular respectivamente **ACTP denota angioplastia coronria transluminal percutnea DL denota dimetro luminal no local do implante
A mortalidade dos animais foi dividida em dois tipos: inicial e tardia. A incidncia de mortalidade inicial (24 72 h) foi de 17,6% (seis animais), a qual aconteceu no comeo do projeto. As principais causas de bito
A reestenose, isto , a obstruo significativa > 50% do dimetro luminal no local previamente tratado com implante de stent (e calculada tanto pelo QCA quanto pelo IVUS), foi observada em 65 dos 73 implantes de stent sobre-dimensionados, por tanto a incidncia de reestenose binria foi de 89,0% (Tabela 3). Os stents utilizados como grupo controle, apresentaram reestenose binria de apenas 23,1% (P < 0,0001) (Tabela 3). Os resultados das ACTP e dos testes com as drogas antiproliferativas utilizadas para o tratamento da reestenose observada ainda esto na fase de anlises (microscopia eletrnica e histologia) e sero motivo de outras publicaes.
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Tabela 3 - Taxa de reestenose binria ( DL > 50%) .

Stent Dimenso superestimada DIMENSO 1:1 (CONTROLE) N absoluto 65/73 3/13 % 89,0 23,1 P < 0,0001
Dados calculados pelo QCA e USIC DL significa dimetro luminal no local do implante
1998 ; RAUDALES e ZAGO, 2000; BIENVENU et al.,2001). A fase proliferativa, formada basicamente por SMCs, moncitos e macrfagos e, 4) Reduo do dimetro luminal intra-stent (focal ou difusa) quando comparado com o dimetro de referncia do vaso (Figura 3A). Quando a reduo no dimetro luminal (no local previamente tratado com ACTP ou implante de stent) superior a 50%, quando comparado com o dimetro de referncia do vaso (usualmente o segmento proximal da artria), temos o fenmeno chamado de reestenose (ROUBIN et al., 1994; RAUDALES e ZAGO, 2000). A reestenose na sua forma mais simples no mais que a resposta cicatrizao que se segue aps a injuria vascular ocasionada pela ICP (SCHWARTZ, KANTOR e HOLMES, 2001), e suas caractersticas histolgicas principais so a retrao elstica, o remodelamento geomtrico negativo e a formao de neontima (ou hiperproliferao neointimal) (RAUDALES e ZAGO, 2000); no caso dos stents, os dois primeiros eventos no existem em funo do suporte luminal gerado pela grande fora radial que o stent exerce sobre a parede vascular, havendo fundamentalmente hiperplasia neointimal como mecanismo principal de reestenose (FRIMERMAN et al., 1999; RAUDALES e ZAGO, 2000; SUZUKI et al., 2001) (Figura 3B). A severidade e extenso da reestenose neste trabalho foram avaliadas tanto pelo QCA quanto pelo IVUS, como na maioria dos casos em seres humanos e classificadas de acordo ao padro angiogrfico observado (focal ou difusa) conforme descrito por Mehran et al. (1999). Esta classificao fornece importantes informaes tanto de prognstico quanto de orientao teraputica. Do ponto de vista histopatolgico, as leses obstrutivas de origem aterosclertica (ou ateromas) da DAC so bastante diferentes das leses obstrutivas decorrentes da reestenose. Os ateromas so espessamentos assimtricos focais da camada
DISCUSSO
Para gerar quantidades significativas de placa (hiperplasia neointimal) nos tecidos sunos sadios, se faz necessria a sobre-distenso vascular em torno de 30% a 50% (ECKHARD et al., 2000). Por esse motivo, o protocolo de leso vascular exigiu o uso de um stent maior que o dimetro de referencia do vaso, isto significa uma relao 1,4:1 ou 1,5:1 entre o dispositivo e o vaso. Em termos gerais, a resposta celular leso vascular no-aterosclertica iatrognica (balo ou stent) caracterizada por ser tempo-dependente, ocorrendo: 1) Retrao elstica e remodelamento geomtrico vascular negativo do vaso, fenmenos comumente observados com o uso de balo de angioplastia de forma isolada (vide abaixo), porem inexistentes com o implante de stents; 2) Trombose mural focal induzida pelo stent, j evidente nas primeiras 24 h; 3) Presena de um infiltrado celular inflamatrio (com pico aos 7 dias, mas ainda evidente aos 28 dias): liberao de endotelinas pelas clulas endoteliais; gerao de trombina; ativao e migrao de plaquetas, que alm de produzir vasoconstrio tambm so responsveis pela formao do trombo organizado de fibrina e da liberao de fatores de crescimento (growth factors), que por sua vez favorecem a migrao e proliferao de clulas musculares lisas (SMCs), neutrfilos e macrfagos, e a produo de matriz extracelular, contribuindo para a formao de neontima que j evidente nesta fase (GALLO et al.,1998; GERTZ et al.,1998 ; MCKENNA et al.,
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mais interna do vaso, a ntima; estas placas esto constitudas por clulas sangneas, por elementos do tecido conjuntivo, acumulo de LDL-C oxidado, detritos, endotlio e por clulas musculares lisas (RAUDALES et al., 2006). No centro do ateroma, clulas espumosas e gotculas de lipdios extracelulares formam a regio central, a qual circunscrita por uma capa de clulas musculares lisas e uma matriz rica em colgeno. Linfcitos T, macrfagos e mastcitos infiltram a leso e so particularmente abundantes nas bordas do ateroma. A estabilidade das placas aterosclerticas proporcionada por uma matriz extracelular e por uma capa fibrosa espessa composta predominantemente de colgeno (tipos I e III) e elastina (RAUDALES et al., 2006). As leses reestenticas, por outro lado, so constitudas fundamentalmente de uma matriz originada a partir de SMCs com apenas 11% de elementos celulares (Fig. 3B). Outra caracterstica distintiva entre ambas formas de obstruo que a reestentica acontece em perodos consideravelmente mais curtos do que a aterosclertica (seis meses versus 40 anos em mdia, respectivamente).
Como estabelecido inicialmente, um dos objetivos deste trabalho foi desenvolver e implementar protocolo de modelo experimental de induo de hiperproliferao neointimal em sunos. Assim, aps aplicado o protocolo, obstruo significativa (> 50%) foi observada em 65 casos, por tanto a incidncia de reestenose binria foi de 89,0% calculada em base s 73 endoprteses implantadas Tabela 1. No modelo clssico de reestenose de Schwartz et al. (1990) obtida atravs de ACTP com balo modificado e sobredimensionado, a incidncia de reestenose binria foi de 90,9% (10/11 coronrias). Modelos posteriores de reestenose utilizando stents sobredimensionados mostraram resultados semelhantes (SCHWARTZ et al., 2001; MCKENNA et al., 1998; CHRISTEN et al., 2001). Evidncias a partir de estudos em artrias femorais de coelhos mostram que os stents sobredimensionados constituem um poderoso e prolongado estimulo que favorece os processos de mitose na ntima vascular. evidente tambm, que o stent metlico no produz uma reao de corpo estranho, j que muitos trabalhos tem demonstrado a ausncia ou apenas uma mnima resposta celular inflamatria crnica (i.e. ausncia de clulas gigantes) no local da injuria (SCHWARTZ, KANTOR e HOLMES, 2001). Uma causa para essa grande hiperproliferao neointimal produzida pelo stent sobre-dimensionado que cinco ou mais locais de injuria resultam numa regio localizada ao redor da circunferncia do vaso, cada um com a capacidade de gerar neontima. Este tipo de padro de injuria bastante diferente daquele observado com o uso do modelo de balo sobre-dimensionado, aonde apenas um nico ponto de disseco a resposta tpica (SCHWARTZ, KANTOR e HOLMES, 2001). Dois pontos que favorecem a utilizao do stent
Figura 3. A. Segmento isolado de artria coronria mostrando as hastes metlicas do stent (setas pretas) e a importante proliferao neointimal invadindo a luz do vaso ocasionando obstruo significativa. B. Microfotografia mostrando: 1. As camadas ntima e muscular da artria; 2.Haste do stent, e 3. Proliferao neointimal significativa ocasionando obstruo luminal.
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sobre-dimensionado como modelo para a criao de leso vascular so: 1) o dano vascular pode ser classificado de acordo a um escore (SCHWARTZ et al., 1992) e, 2) tanto o tamanho quanto a extenso exata da injuria podem ser mensurados e comparados diretamente com a resposta hiperproliferativa, utilizando mtodos de regresso como sugerido por Bonan et al. (1996). Os sunos utilizados em nosso modelo experimental no receberam nenhum tipo de dieta rica em gorduras (aterognica). A produo de achados histolgicos parecidos com os da morfologia reestentica proliferativa, na ausncia de hiperlipemia concomitante, apiam o conceito que a reestenose um processo independente da aterosclerose (SCHWARTZ et al., 1990). De fato, talvez uma dieta aterognica, com 20% de gordura e 2 4% de colesterol como a sugerida por Carter (2001), poderia intensificar a resposta hiperproliferativa; uma possibilidade que ser estudada futuramente para avaliar os efeitos dos stents eluidores de drogas (ou DES) (LOWE et al., 2003) ou para testar os efeitos biolgicos das novas drogas com propriedades antiproliferativas (GALLO et al., 1999; LOWE et al., 2003).
para elucidar e entender melhor os mecanismos da reestenose, principalmente a reestenose intrastent. Futuramente, o modelo poderia ser utilizado tambm para o treinamento das novas geraes de intervencionistas e para realizar testes com terapias genticas ou com clulas-tronco.
REFERNCIAS
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CONCLUSES
Tanto o laboratrio de hemodinmica como o modelo experimental de induo de proliferao neointimal vascular em sunos foram implantados de forma satisfatria, adequando-os aos objetivos almejados. Este modelo de vital importncia para avaliar no s a segurana e eficcia dos novos dispositivos, seno que tambm permite testar a infuso local de novos frmacos com propriedades antiproliferativas e avaliar a biocompatibilidade na interfase endotlio-superfcie dos stents metlicos e os stents eluidores de drogas. O modelo til
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Lista de abreviaturas
ACTP COBEA DAC DES FDA ICP IVUS LDL-C PCI PTCA QCA RIS ANGIOPLASTIA CORONRIA TRANSLUMINAL PERCUTNEA COLGIO BRASILEIRO DE EXPERIMENTAO ANIMAL DOENA ARTERIAL CORONRIA DRUG ELUTING STENTS (STENTS ELUIDORES DE DROGAS) FOOD AND DRUG ADMINISTRATION (RGO REGULATRIO AMERICANO) INTERVENO CORONRIA PERCUTNEA INTRAVASCULAR ULTRASOUND (ULTRA-SOM INTRAVASCULAR) LOW DENSITY LYPOPROTEIN CHOLESTEROL (MAU COLESTEROL) PERCUTANEOUS CORONARY INTERVENTION PERCUTANEOUS TRANSLUMINAL CORONARY ANGIOPLASTY QUANTITATIVE CORONARY ANGIOGRAPHY (ANGIOGRAFIA CORONRIA QUANTITATIVA) REESTENOSE INTRA-STENT
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Relao entre a aptido fsica e o equilbrio com a capacidade funcional em um grupo de idosas
DIEGO COLVARA1 RAQUEL DALAGNA1 FTIMA DE ALMEIDA LOBO1 CNTIA DE LA ROCHA FREITAS2 PAULO TADEU CAMPOS LOPES2 ANDRA KRGER GONALVES2 ADRIANE RIBEIRO TEIXEIRA3 ANA MARIA PUJOL VIEIRA DOS SANTOS4
RESUMO
Este estudo teve como objetivo avaliar a fora muscular e o equilbrio de um grupo de idosas e verificar se estas variveis esto relacionadas com a capacidade funcional (habilidade para realizao de atividades de vida diria-AVDs. Fizeram parte da amostra 17 mulheres, na faixa etria acima de 60 anos, iniciantes do programa de hidroginstica do Centro de Atividade Fsica e Envelhecimento da Universidade Luterana do Brasil (CEAFE/ ULBRA), na cidade de Canoas-RS. Para avaliar a fora de membros superiores foi utilizado o teste de flexo de cotovelos e para a fora de membros inferiores foi usado o teste de levantar e sentar, ambos de Rikli e Jones (2001). Para avaliao do equilbrio funcional foi utilizado o teste do alcance funcional de Duncan et al. (1990). Testes de Matsudo (2003) avaliaram a capacidade funcional, incluindo flexibilidade de membros superiores (alcanar atrs das costas), flexibilidade de membros inferiores (sentar e alcanar), habilidades manuais, calar meias, marchar e subir escadas. Os resultados dos testes de fora e equilbrio funcional foram classificados de acordo com as tabelas normativas. Foram testadas a correlao entre a fora e o equilbrio com as capacidades funcionais,
1
Acadmico (a) do Curso de Educao Fsica/ULBRA Bolsista PROICT/ULBRA Professor (a) do Curso de Educao Fsica/ULBRA
3 4
Fonoaudiloga Professora-Orientadora do Curso de Educao Fsica/ULBRA (anapujol@ulbra.br)
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atravs do coeficiente de Pearson. Os resultados mostraram que metade da amostra apresentou valores de fora, tanto de membros superiores quanto de membros inferiores, acima dos valores normativos e, a outra metade, abaixo dos valores normativos. Os resultados do teste de equilbrio apontaram que apenas uma idosa apresentou risco elevado de queda, cinco idosas mostraram moderado risco de queda e onze idosas mostraram baixo risco de queda. Foi encontrada uma correlao regular positiva entre o equilbrio funcional das idosas e a habilidade da marcha (r=0,345 e p=0,05) e uma correlao regular negativa entre o equilbrio funcional e a habilidade de subir escadas (r=-0,452 e p=0,008). Esses dados sugerem que no grupo de idosas avaliadas, quanto melhor o equilbrio funcional, melhor a habilidade da marcha e menor o tempo para subir as escadas, e que estas idosas apresentam maior independncia nas suas atividades de vida diria relacionadas com a locomoo. Palavras-chave: Aptido fsica, capacidade funcional, atividades de vida diria, idosos.
ABSTRACT
This study aims to evaluate muscle strength and balance in an elderly group and to verify if these variables are related with functional capacity (ability of developing daily life activities). The sample was composed by 17 women above 60 years old, beginners of a hydro gymnastics program of Physical Activity and Aging Center of Lutheran University of Brazil (CEAFE/ULBRA), in Canoas-RS. Elbow flexion test was used to evaluate upper limb strength and get up and sit test was used to evaluate lower limb strength, both tests from Rikli and Jones (2001). Functional reach test (Duncan et al., 1990) was used to evaluate functional balance. Functional capacity was measured through the following Matsudos (2003) tests: upper limb flexibility (to reach on the back), lower limb flexibility (seat and reach), manual abilities, wearing socks, gaiting and climbing stairs. Force and balance results were classified according normative values. Correlation among strength and balance and functional capacities were tested by Pearsons coefficient. The results showed that half of the sample had strength values (upper and lower limbs) above the normative values, and the other half of the sample showed values below the normative ones. Balance test results showed that only one subject presented high risk of falls, five presented middle risk and eleven, low risk. There was a positive correlation between functional balance and gait ability (r= 0,345 e p=0,05) and a regular negative correlation between functional balance and ability of climbing the stairs (r= -0,452 e p=0,008). These data indicate that in these evaluated elderly, as better the functional balance better is the gait ability and lower is the time for climbing the stairs. These results suggest that these elderly may present more independence in their daily life activities related to locomotion. Key words: Physical fitness, functional capacity, daily life activities, elderly.
INTRODUO
O envelhecimento um processo cujas alteraes determinam mudanas estruturais e funcionais
no corpo humano, tais como a perda gradativa da massa muscular, da fora, da flexibilidade, do equilbrio, entre outras. Em funo dessas alteraes, os idosos tendem a apresentar uma reduo
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na capacidade de realizao das atividades de vida diria (AVDs) de forma independente. A aptido fsica tem sido associada ao bem-estar, sade e qualidade de vida das pessoas em todas as faixas etrias, principalmente na meia-idade e na velhice, quando os riscos potenciais da inatividade se materializam (TERRA e DORNELLES, 2002). Segundo Andreotti e Okuma (1999), um dos elementos que determinam a expectativa de vida ativa ou saudvel a independncia para realizao de AVDs. Na velhice, a capacidade de realizar as AVDs pode sofrer alteraes (ANIANSSON, RUNDGREN e SPERLING, 1980; GALLAHUE, 1995; MENDES DE LEON et al., 1996; SEEMAN, BRUCE e MCAVAY, 1996). notvel uma forte tendncia diminuio da atuao do indivduo no meio em que vive. Tanto nas aes motoras mais especficas, como nas mais genricas, pode-se observar um especial comprometimento no comportamento de parte da populao idosa. No que se refere fora muscular e, especificamente fora de preenso das mos, Fleck e Kraemer (1999) descreveram uma regresso de 3% ao ano em homens e 5% ao ano em mulheres, aps um estudo longitudinal com durao de quatro anos. Em relao flexibilidade, a elasticidade dos tendes, ligamentos e cpsulas articulares diminuem com a idade devido deficincia de colgeno, determinando que durante a vida ativa, adultos percam algo como 810 cm de flexibilidade na regio lombar e no quadril, quando medido por meio do teste sit and reach (SHEPHARD, 1998). A restrio na amplitude de movimento das grandes articulaes torna-se maior no perodo da aposentadoria e, eventualmente, a independncia ameaada porque o indivduo no consegue utilizar um carro ou um banheiro sem adaptaes, subir uma pequena escada ou mesmo combinar os movimentos de vestir-se e pentear os cabelos.
Entre as perdas apresentadas pelo idoso, destaca-se tambm a reduo do equilbrio, que ocorre devido s alteraes do sistema sensorial e motor, levando a uma maior tendncia a quedas (GUIMARES et al., 2006). O objetivo do presente estudo foi analisar a fora muscular e o equilbrio de um grupo de idosas e verificar se estas variveis esto relacionadas com sua capacidade funcional (habilidade para realizao de AVDs).
MATERIAL E MTODOS
AMOSTRA A amostra foi composta por 17 mulheres, na faixa etria acima de 60 anos, iniciantes do programa de hidroginstica do Centro de Atividade Fsica e Envelhecimento da Universidade Luterana do Brasil (CEAFE/ ULBRA), na cidade de Canoas-RS. As avaliaes foram feitas antes da aula de hidroginstica no ms de abril de 2008. O estudo foi aprovado pelo Comit de tica da ULBRA (CEP-ULBRA 2008-073).
INSTRUMENTOS Para avaliar a aptido fsica foram utilizados os seguintes testes seguindo o protocolo proposto por Rikli e Jones (2001): - fora de membros superiores: flexo do cotovelo - fora de membros inferiores: levantar e sentar O equilbrio funcional foi avaliado atravs do teste do alcance funcional (DUNCAN et al., 1990).
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Para avaliar a capacidade funcional foram selecionados os seguintes testes de Matsudo (2003): - flexibilidade de membros superiores: alcanar atrs das costas - flexibilidade de membros inferiores: sentar e alcanar - habilidades manuais - calar meias - marcha - subir escadas Os resultados do teste de fora de membros superiores e inferiores e o teste de equilbrio funcional foram classificados de acordo as tabelas normativas (RIKLI e JONES, 2001 e DUNCAN et al., 1990). Para anlise de correlao foi utilizado o coeficiente de Pearson para verificar o quanto as variveis relativas aptido fsica (fora e equilbrio) esto relacionadas s capacidades funcionais (flexibilidade de membros superiores e inferiores, habilidades manuais, calar meias, marcha e subir escadas).
tados abaixo dos valores normativos (RIKLI e JONES, 2001) e oito apresentaram valores superiores (Figura 1). J para membros superiores, observou-se que oito idosas apresentaram resultados abaixo dos valores normativos e nove apresentaram valores superiores (Figura 2).
Figura 1 - Resultados do teste de fora de membros inferiores - levantar e sentar, segundo protocolo de Rikli e Jones (2001).
FORA MS 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 Abaixo Valores normativos Acima
Este estudo teve como objetivo analisar a fora muscular (membros inferiores e superiores) e o equilbrio de um grupo de idosos, e verificar se estas variveis esto relacionadas com sua capacidade funcional (habilidade para realizao de AVDs). O resultado do teste de fora de membros inferiores indicou que nove idosas apresentaram resul-
Figura 2 - Resultados do teste de fora de membros superiores - flexo do cotovelo, segundo protocolo de Rikli e Jones (2001).
Este grupo de idosas apresentou resultados semelhantes quanto aos dois testes de fora utilizados (membros inferiores e membros superiores). Aproximadamente metade da amostra obteve resultados
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Nmero de sujeitos (n)
inferiores aos valores normativos e a outra metade, resultados superiores. De acordo com a pontuao obtida no teste de equilbrio funcional (DUNCAN et al., 1990), os sujeitos podem ser classificados conforme seu risco de quedas. Os resultados do teste de equilbrio apontaram que apenas uma idosa apresentou risco elevado de queda, cinco idosas mostraram moderado risco de queda e onze idosas mostraram baixo risco de queda (Figura 3). Em relao ao equilbrio, a maior parte das mulheres avaliadas apresentou de baixo a moderado risco de quedas.
EQUILBRIO FUNCIONAL 12 10 8 6 4 2 0 Elevado risco Moderado risco Quedas Baixo risco
para subir as escadas, sugerindo que estas idosas apresentam maior independncia nas suas AVDs relacionadas com a locomoo. Alguns estudos apresentam relao direta da incidncia de quedas e a realizao das AVDs. A histria de queda relatada por idosos residentes em Ribeiro Preto-SP , que haviam sido atendidos em duas unidades de um hospital pblico, foi investigada por Fabrcio et al. (2004). Foram consultados pronturios e realizadas visitas domiciliares para aplicao de um questionrio estruturado. Os dados obtidos mostraram que a maioria das quedas ocorreu em idosos do sexo feminino (66%), com mdia de 76 anos, no prprio lar do idoso. As causas foram principalmente relacionadas ao ambiente fsico (54%), acarretando srias conseqncias aos idosos, sendo as fraturas as mais freqentes (64%). A queda teve grande impacto na vida do idoso no que se refere s AVDs e provocou maior dependncia para atividades como deitar/ levantar-se, caminhar em superfcie plana, cortar unhas dos ps, tomar banho, caminhar fora de casa, cuidar das finanas, fazer compras, usar transporte coletivo e subir escadas. A propenso a quedas foi avaliada atravs de um teste de equilbrio funcional (timed up and go test) em um grupo de 20 idosos praticantes de atividade fsica regular e um grupo de 20 idosos sedentrios da cidade de Lavras-MG. Os resultados apontaram que os idosos praticantes de atividade fsica levaram menor tempo para a realizao do teste quando comparados aos idosos sedentrios, apresentando assim menores chances de sofrerem quedas (GUIMARES et al. ,2004). Os resultados do presente estudo indicam que mesmo que essas idosas da amostra estejam recm iniciando a prtica da hidroginstica, elas j apresentam, na mdia, um nvel razovel de fora
Figura 3- Resultados do teste de equilbrio funcional avaliado atravs do teste do alcance funcional (DUNCAN et al., 1990).
Foi testada a relao entre os resultados dos testes de fora e dos testes de equilbrio com os testes de capacidade funcional, atravs do coeficiente de Pearson. Os resultados apontaram uma correlao regular positiva e significativa entre o equilbrio funcional das idosas e a habilidade da marcha (r=0,345 e p=0,05). Foi tambm observada uma correlao regular negativa e significativa entre o equilbrio funcional e a habilidade de subir escadas (r=-0,452 e p=0,008). Esses dados indicam que no grupo de idosas avaliadas, quanto melhor o equilbrio funcional, melhor a habilidade da marcha e menor o tempo
Nmero de sujeitos (n)
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muscular de membros inferiores e superiores, alm de um baixo risco de quedas. Acredita-se que estes dados obtidos sejam resultado destas mulheres serem pessoas ativas, que caminham e/ou realizam as tarefas domsticas diariamente. Diferente do que se esperava, a fora muscular, tanto de membros inferiores, quanto de membros superiores, no apresentou relao com nenhuma das capacidades funcionais testadas. Entretanto, o equilbrio funcional apresentou relao com a habilidade de marcha e com a habilidade de subir escadas. Estes dados confirmam os achados da literatura (MACIEL e GUERRA, 2005), tendo em vista que a manuteno do equilbrio influencia diretamente a realizao das AVDs, e este fato pode estar diretamente relacionado com a independncia dos idosos. De acordo com Matsudo (2006), indivduos idosos que mantm um ritmo de vida ativa regular podem diminuir a velocidade de declnio de mobilidade independente da presena de doena crnica. O American College of Sports Medicine (1998) afirma que, atualmente, est comprovado que quanto mais ativa uma pessoa, menos limitaes fsicas ela tem. Desta forma, estimula-se e recomenda-se que os idosos sejam inseridos em programas de atividade fsica regular e orientada.
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Cincias Exatas e da Terra
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Anlise e reconhecimento de padres usando processamento de imagens e inteligncia artificial
LISSON BOHNERT KRUG1 ADRIANE PARRAGA2 FABIANA LORENZI3 MARIANO NICOLAO3 ANALUCIA SCHIAFFINO MORALES4
RESUMO
O presente trabalho apresenta o desenvolvimento de um sistema para reconhecimento de padres, onde os processos de identificao e de classificao sero obtidos atravs de tcnicas de processamento de imagens e do uso de redes neurais artificiais. Esses padres sero obtidos atravs da irisdiagnose com base na classificao dos sinais na ris. Este mtodo permite identificar anomalias atravs de sinais presentes na ris dos indivduos. Palavras-chaves: ris, iridologia, reconhecimento de padro, processamento de imagens, redes neurais artificiais.
Acadmico do Curso de Cincia da Computao Bolsista PROICT/ULBRA Professora/co-orientadora do Curso de Cincia da Computao/ULBRA
3 4
Professor(a) do Curso de Cincia da Computao/ULBRA Professora-Orientadora do Curso de Cincia da Computao/ ULBRA (dirinformatica@ulbra.br)
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ABSTRACT
This work presents the proposal of the development to the pattern recognition system to identification and classification are through the image process and artificial neural networks techniques. These standards are given by to the iris diagnose with base in classification of the signal in iris. Key words: Iris, iris diagnose, pattern recognition, image processing, artificial neural networks.
INTRODUO
Com a globalizao novos mtodos de medicina alternativa esto sendo conhecidos, e a iridologia um mtodo, que atravs de suas referncias existe h pelo menos dois mil anos tanto na China quanto no Tibet, mas que h pouco tempo conhecido no Brasil (HATADA, 2004). Em 1947, teve sua primeira publicao sobre o assunto, pela obra A Mquina Humana e o Naturalismo por Voislav Todorovic, e aps esta, muitos outros trabalhos foram publicados para difundir em mbito nacional. A iridologia a cincia que busca conhecer as causas dos desequilbrios do corpo ou potenciais desequilbrios atravs da anlise da ris. Estes desequilbrios podem ser indicativos de possveis doenas. A iridologia usa os sinais refletidos na ris do ser humano como meio de anlise, sendo possvel observar as mudanas das estruturas das fibras e da pigmentao (SALLES e SILVA, 2008). Isso possvel por ser formada pelo mesmo tecido do crebro, e o crebro estar ligado ao tlamo que responsvel por enviar e receber informaes do hipotlamo que por fim coordena todo o sistema nervoso autnomo, simptico e parassimptico (KHALSA, 2006). Existem diversos tipos de sinais que podem estar refletidos na ris, porm este trabalho limita-se a encontrar as psoras, ou manchas psricas, que so classificadas em quatro nveis: agudo, subagudo,
crnico, e degenerativo. Inicialmente, as psoras aparecem como mudanas de colorao do epitlio anterior, mas com o agravamento ser visvel uma ruptura e atingir outras camadas mais profundas da ris, seguindo a ordem: epitlio anterior, estroma (cor dos olhos), camada limitante muscular, epitlio posterior (KRIEGE, 1997; KHALSA, 2006). Logo, medida que as psoras forem regredindo, ser possvel observar a regenerao dos tecidos celulares e o fortalecimento das estruturas orgnicas envolvidas. O presente trabalho tem como objetivo desenvolver um sistema para identificar e classificar os sinais presentes na ris atravs de tcnicas de processamento de imagens e redes neurais artificiais (RNAs). Em um primeiro momento, foram empregadas algumas tcnicas de processamento de imagens para delimitar a rea de interesse e extrair as caractersticas presentes na imagem. As tcnicas de processamento de imagens testadas no presente trabalho foram: deteco de borda, filtros direcionais, filtros passa-baixa, limiarizao por histograma, operaes de morfologia matemtica como fechamento e abertura (CORREA e THOMAZ, 2007). Aps a extrao das caractersticas, o sistema alimentar a entrada de uma RNAs que sero treinadas para realizar a classificao dos padres nos possveis desequilbrios do corpo humano. As RNAs que sero utilizadas possuem caractersticas dinmicas e que possam auxiliar no reconhecimento de padres.
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O trabalho apresenta os materiais e mtodos empregados na pesquisa para o reconhecimento de padres, tanto para a rea de processamento de imagens digitais quanto para a de inteligncia artificial. So ainda descritos os resultados preliminares obtidos at o momento. Finalizando com a devida concluso e as referncias bibliogrficas.
atravs da Figura 1. A primeira etapa a extrao das caractersticas, ou seleo, que tem como principal objetivo selecionar um grupo pequeno de padres que representa os dados de entrada essenciais para a soluo do problema. No caso, em questo, esta etapa estar sendo realizada atravs do uso de tcnicas de processamento digitais da imagem.
Reconhecimento de Padres
MATERIAL E MTODOS
Reconhecimento de Padres O ser humano possui a capacidade nica de reconhecer padres, quando enxerga algo faz a coleta de informaes para identificar, isolar, associar e reconhecer formas sons ou conceitos (CERA, 2005). A importncia do reconhecimento de padres est ligada a busca por mtodos informatizados e automatizados para tarefas humanas repetitivas, exaustivas e muito sujeitas a falhas (SPNOLA, 2004). Neste trabalho, o reconhecimento de padres empregado na separao de padres de entrada em grupos ou classes. Para desenvolver o sistema necessrio extrair as caractersticas dos objetos, selecionar as caractersticas discriminatrias e depois realizar a classificao em padres distintos. As aplicaes mais comuns de reconhecimento de padres esto nas reas de reconhecimento de fala, da escrita, de faces e classificao de documentos. Existem diversos trabalhos na rea de reconhecimento de padres para medicina, como exames de raios-X, tomografia, ultra-sonografia, entre outros descritos na literatura (FELIPE e TRAINA, 2002). Existem, basicamente, duas importantes etapas no desenvolvimento de sistemas de reconhecimento de padres, que podem ser observadas
Extrao de Informaes Identificao das Caractersticas Classificao dos Padres
Processamento de Imagens
Redes Neurais
Figura 1 - Etapas do Reconhecimento de padres
A segunda a classificao dos padres, onde as caractersticas selecionadas sero atribudas s classes individualmente. As quatro abordagens mais conhecidas para reconhecimento de padro so casamento de modelo, classificao estatstica, casamento sinttico ou estrutural e RNAs. Estes modelos no so necessariamente independentes e s vezes o mesmo mtodo de reconhecimento de padro existe com diferentes interpretaes (MARIN, 2003). Neste trabalho, a etapa para a classificao ser realizada atravs do uso de RNAs. No entanto, ainda no foi definida a topologia que ser empregada em definitivo, pois necessrio realizar a extrao das informaes para posteriormente aplicar a modelagem da rede neural que ser empregada. Atravs de alguns estudos e pesquisas preliminares j pode ser percebido que o modelo de rede a ser utilizado ser de Mapas Auto-Organizveis (aqui cabe uma bibliografia para identificar mapas auto-organizveis).
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Processamento de Imagens Digitais O processamento de imagens ser usado para reduzir a rea de interesse, neste caso de busca das psoras. Devido complexidade das imagens de olho, extrair e isolar regies de interesse no uma tarefa trivial. A estratgia escolhida para iniciar o processamento a localizao da pupila, que auxiliar na localizao da borda externa da ris, para ento isolar a regio de interesse na imagem original. Posteriormente, sero utilizados filtros digitais e morfologia matemtica para a deteco de bordas. As imagens digitais coloridas possuem trs canais chamados de RGB, que vem da sigla do ingls das cores vermelho, verde e azul (Red, Green e Blue). Atravs da unio dos trs canais possvel obter todas as cores visveis pelo olho humano, conforme a variao da intensidade de cada canal, formando assim uma cor. A Figura 2 apresenta uma imagem original de uma ris e cada um dos canais RGB separadamente.
de olho. O princpio da limiarizao mais simples consiste em separar as regies de uma imagem em duas classes (o fundo e o objeto), ou seja, as outras regies so classificadas como no relevantes para este trabalho. Para que a limiarizao seja efetiva, necessrio que haja contraste suficiente entre o objeto e o fundo, e que se conheam os nveis de intensidade tanto dos objetos quando do fundo (SPNOLA, 2004). A limiarizao consiste em converter imagens em tons de cinza para imagens binrias a partir de um limiar, ou seja, os pixels com valor menor que um limiar T recebem o valor zero (que corresponde ao preto) e os pixels com valor maior ou igual um limiar T recebem o valor um (que corresponde ao branco), conforme apresentado na Figura 3.
Figura 2 - Imagem da ris e sua decomposio nos canais RGB
Para encontrar a pupila, a imagem passar por um processo de segmentao que procura isolar a pupila das outras partes do olho. A operao de segmentao que ser usada a limiarizao por histograma (thresholding) ou binarizao. Este mtodo ser utilizado como um pr-processamento para auxiliar na localizao exata da ris e foi escolhido devido ao contraste presente nas imagens
Onde: T = valor do limiar f (x,y) = imagem de entrada g (x,y) = imagem limiarizada

Figura 3 - Histograma bimodal e um limiar T particionando o histograma (a esquerda) e a equao de limiarizao (a direita).
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possvel ver o efeito da limiarizao, em que se aplicou uma limiarizao em cada imagem exibida na Figura 2. Como resultado as imagens originais foram binarizadas conforme Figura 4.
Figura 4 foi executado o processo de abertura e o resultado demonstrado na Figura 5.
Figura 5 - Imagem da ris binarizada e seus canais RGB aps o processo de abertura. Figura 4 - Imagem da ris em canais RGB aps a binarizao.
Aps a limiarizao, o prximo passo para encontrar a pupila reduzir os rudos que a imagem possui, aplicando-se neste contexto tcnicas da morfologia matemtica digital. A morfologia matemtica a simplificao de uma imagem atravs da transformao da estrutura geomtrica desconhecida num elemento estruturante conhecido (DA SILVA e STATELLA, 2007). A idia da morfologia que uma imagem consiste de um conjunto de pixels que so reunidos em grupos tendo uma estrutura bidimensional. Algumas operaes matemticas em conjuntos de pixels podem ser usadas para ressaltar aspectos especficos das formas permitindo que sejam contadas ou reconhecidas. As tcnicas de abertura e fechamento consistem em outras duas tcnicas de morfologia matemtica, que so a dilatao e a eroso. Tanto a dilatao quanto a eroso representam o que o prprio nome diz, ou seja, a dilatao aumenta os objetos de uma imagem enquanto que a eroso diminui (LEONARDI et al., 2006). A abertura consiste em aplicar uma eroso seguida de uma dilatao, utilizando o mesmo elemento estruturante, e tem como objetivo separar objetos prximos ou criar espaos entre objetos e eliminar rudos (LEONARDI et al., 2006). Nas imagens da
J o fechamento consiste em aplicar o inverso da abertura, ou seja, uma dilatao seguida de uma eroso, com o mesmo elemento estruturante, e tem como objetivo eliminar espao entre objetos, eliminar falhas dentro dos objetos, e suavizar as bordas (LEONARDI et al., 2006). Na figura 6 representado o processo de fechamento que foi aplicado na Figura 4.
Figura 6 - Imagem da ris em canais RGB aps o processo de fechamento.
A maior parte da imagem composta por componentes de baixa freqncia. As componentes de alta freqncia em uma imagem so os detalhes como bordas, linhas, curvas, manchas e outras transies abruptas dos nveis de cinza (SPNOLA, 2004). Baseando-se nisso, os filtros passa-baixa tm um efeito visual de suavizao e reduo de nveis de cinza, pois ocorre uma perda de detalhes que so os componentes de alta freqncia. Assim, o resultado de uma imagem filtrada por um filtro passa-baixa ter um nvel de rudo inferior ao apresentado pela imagem original. Como exemplo de filtros passa-baixa tem-se os filtros de
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Mdia, Gaussiano, Mediana, Ordem e de Moda, e Mdia dos k vizinhos selecionados. J os filtros de passa-alta, tambm chamados de realce de borda, so o inverso dos filtros de passa-baixa, ou seja, os componentes de alta frequncia no so alterados e os de baixa frequncia so removidos, realando assim as diferenas bruscas entre os alvos. Como exemplo de modelo de filtros passa-alta tem-se os filtros Gradiente ou derivada de imagens, Sobel, Roberts, Prewitt, Laplaciano, LoG ou Laplaciano do Gaussiano, e Canny. A borda pode ser definida como uma mudana repentina de intensidade de pixel. Assim, a deteco de borda o processo de localizao e realce dos pixels de borda, que permite a separao dos objetos em uma imagem. Porm, a deteco pode ser prejudicada por rudos presente na imagem que sejam identificados como borda. Para fazer a deteco da borda aconselhvel que antes seja utilizado algum filtro para reduo dos rudos. No pargrafo anterior foi apresentado exemplos de filtros de passa-baixa que sero usados para a reduo de rudos e aps os filtros de passa-alta para a deteco da borda.
complexos, tais como datilgrafo fontico (BRAGA, DE CARVALHO e LUDERMIR, 2007), reconhecimento de imagens, de voz, de caracteres (SOUSA, 2002), de faces (CASTELANO, 2006), alm de outras aplicaes. As RNAs tm inspirao nos neurnios biolgicos, que so formados por um corpo celular chamado Soma, possuem ramificaes conhecidas como Dendritos que transmitem os sinais das extremidades at o corpo celular (terminais de entrada), e os Axnios que transmitem sinais do corpo celular at as extremidades (terminais de sada). A comunicao entre os neurnios dada atravs das sinapses que a regio de contato entre os neurnios, assim transmitindo impulsos nervosos entre eles quando atingido um limiar de ao (BARRETO, 2002). No neurnio artificial, que baseado no neurnio biolgico, troca-se os Dendritos por Entradas, cuja ligao com o corpo celular artificial dada por elementos chamados de Peso que simulam as sinapses. Os sinais captados pelas entradas so processados pela funo Soma, e o limiar de ao do neurnio foi substitudo pela transferncia. A figura 7 representa a estrutura de um neurnio artificial, que pode ser encontrado em algumas das topologias de RNAs (BARRETO, 2002).
Redes Neurais Artificiais As RNAs so tcnicas de inteligncia artificial inspiradas na estrutura do crebro humano, e que adquirem conhecimento atravs do treinamento, chamado de aprendizado. Normalmente, uma RNA composta por vrias unidades de processamento (neurnios), que so conectadas por canais de comunicao e associadas a um peso. Essas unidades de processamento trabalham apenas com as informaes recebidas por suas conexes (BENZECRY et al., 2005). As RNAs so aplicadas no desenvolvimento de solues de sistemas
Figura 7 - Neurnio artificial Fonte: Barreto, 2002).
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Como j mencionado, o aprendizado das RNAs realizado atravs de treinamento. O aprendizado pode ser supervisionado ou no supervisionado. O primeiro quando existe um mentor, pessoa ou professor, capaz de fornecer RNA uma resposta desejada (Figura 8a). Enquanto o aprendizado no supervisionado, quando no h presena de um supervisor no processo de aprendizagem, neste caso fornecido condies para realizar uma medida independente da tarefa da qualidade da representao cuja rede deve aprender (Figura 8b).
Figura 9 - Mapa dos rgos conforme olho analisado, onde R refere-se ao olho direito e L ao olho esquerdo. Fonte: Khalsa, 2006.
O estudo inicial aponta que o treinamento da rede para a classificao dos padres dever ser supervisionado, no entanto podero ser investigados se os outros tipos de treinamentos tambm podero ser adequados. Existem diversos atributos que podem ser utilizados a partir do resultado do processamento de imagens, podendo usar os nveis de cinza ou as cores para classificar, ou usando a transformada Wavelet que descreve ocorrncias nas imagens como ranhuras ou bordas, ou outra opo ainda poderia ser a forma, ou parmetros como mdia e desvio do tamanho da regio de interesse. Aps ser analisado os vrios tipos de entradas possveis para a RNA, sero escolhidas duas topologias de RNAs, que so Mapas Auto-Organizveis (SelfOrganizing Maps - SOM) e Quantificao Vetorial Adaptativa (Learning Vector Quantization, LVQ). A rede LVQ uma extenso do SOM, porm com aprendizagem supervisionada, ou seja, o SOM de aprendizagem no supervisionada (HAYKIN, 2001). A topologia SOM possui uma diferena das demais topologias, pois sua estrutura divide-se em entrada e processamento, onde se forma o mapa. A matriz formada pelos neurnios, que ficam conectados apenas em seus vizinhos imediatos, fica na camada de processamento. Outra caracterstica
Figura 8 - (a) Modelo de treinamento supervisionado da RNA (b) Modelo de treinamento no supervisionado da RNA
A Figura 9 apresenta a localizao dos sinais dentro da ris, destaca-se que este trabalho limita-se a um nico tipo de sinal que a psora. A classificao ser feita conforme a localizao da psora que se refere ao rgo descrito. Observa-se que existe diferena no olho direito e no olho esquerdo.
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a forma da aprendizagem, onde somente um neurnio de sada d uma resposta ativa ao sinal de entrada, ou seja, a aprendizagem competitiva. O nvel de ativao indica a similaridade entre o vetor de dados de entrada e o vetor de pesos do neurnio (GONALVES, JNIOR e NETTO, 1996). A modificao dos pesos sinpticos dada quando h um neurnio vencedor, assim seu peso ajustado, porm no somente o vencedor tem o peso ajustado, mas os seus vizinhos tambm sofrem ajustes. Aps a aprendizagem, cada neurnio ou grupo de neurnios vizinhos ser um padro dos padres dados como entrada a rede (GONALVES, JNIOR e NETTO, 1996). J a topologia LVQ tem por objetivo principal dividir o espao amostral de entrada em diversas classes separadas, sendo que cada um dos vetores de entrada deve pertencer somente a uma dessas classes associadas ao problema considerado. Isso feito atravs de um processo competitivo, onde a modificao dos pesos sinpticos dada conforme a proximidade da posio em relao ao vetor de entrada, onde o valor vencedor recompensado com uma posio mais prxima do vetor de entrada, e o perdedor punido com uma posio mais afastada do vetor de entrada (BRASIL, DE AZEVEDO e DE OLIVEIRA, 2000). Aps o treinamento da rede, ela pode ser utilizada para classificar outros padres de entrada entre as vrias classes do sistema. Todos os mtodos LVQ so os mesmos, o que os difere o processo de classificao. Sendo a diferena entre o LVQ-1 e LVQ-2 de o LVQ-2 atualizar duas clulas simultaneamente em cada iterao do processo de treino, e no LVQ-1 somente uma clula atualizada. J o LVQ-3 a unio dos seus dois antecessores, da combinao da melhor fronteira de LVQ-2 com a estabilidade de LVQ-1 (POLLI, 2005).
RESULTADOS
At o presente momento, foram investigadas e testadas as tcnicas de processamento de imagens, necessrias para aquisio das caractersticas para o reconhecimento de padres. Os testes foram realizados com o auxlio da ferramenta Matlab (bibliografia), visto que esta possibilita uma implementao rpida e simples facilitando a etapa de testes. possvel ver a evoluo do trabalho na Figura 11, que apresenta as mesmas imagens da Figura 2, porm com a pupila j localizada e extrada.
Figura 11 - Imagem da ris em canais RGB aps a extrao da pupila.
Neste momento, esto sendo investigadas as formas de armazenamento das informaes e como sero selecionadas as bordas para a identificao das psoras. Assim que estas etapas forem concludas, ser realizada a modelagem da RNA, o devido treinamento e os testes sobre o funcionamento do prottipo.
CONSIDERAES FINAIS
O trabalho aqui proposto tem por objetivo aplicar mtodos de processamento de imagens e redes neurais para fazer o reconhecimento e classificao de padres. A escolha de redes neurais para a classificao dos sinais se deve ao fato das imagens coloridas usadas na irisdiagnose serem complexas e a apresentarem certo grau de aleatoriedade.
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O sistema dever reconhecer os sinais apresentados na ris classificando-os, de forma a obter como resultado uma lista dos desequilbrios apresentados pela pessoa. Este sistema tem como objetivo auxiliar o diagnstico dos desequilbrios do corpo ou potenciais desequilbrios atravs da anlise da ris , e no tem como foco suprir o conhecimento de um iridlogo ou naturopata, alm disso possuir algumas restries no desenvolvimento por no ser necessrio o desenvolvimento completo para comprovar a eficcia do mtodo. As limitaes do trabalho esto relacionadas ao tipo de sinal analisado, que diz respeito apenas as psoras, pelo lado da ris (direita ou esquerda), e a rea de interesse que ser reduzida. importante salientar que o presente trabalho busca o reconhecimento automtico destes sinais na ris. Em trabalhos futuros, pretende-se agregar ao sistema caractersticas que tangem um sistema de recomendao. Onde, identificado os potenciais desequilbrios o sistema poder sugerir possveis tratamentos para estas patologias.
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Cincias Humanas
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A Casa t cheia!: alguns significados da Praa Dona Mocinha
LUIZ ALBERTO DOS SANTOS FERREIRA1 ALEXANDRE KUNSLER2 JOS GERALDO SOARES DAMICO3
RESUMO
A praa pblica tem destaque em bairros populares, onde a comunidade carece de alternativas de lazer, compreendendo a praa como um lugar potencial para o desenvolvimento das atividades esportivas, das festas do bairro e da formao de redes de sociabilidade. O presente trabalho tem por objetivo analisar como se estabelece algumas formas de utilizao da Praa Dona Mocinha, bairro Niteri em Canoas/RS e quais significaes deste lugar so atribudas pelos/as freqentadores/as. Na pesquisa de campo utilizamos o mtodo etnogrfico. Percebemos que a praa reflete a dinmica da cidade como territrio de conflitos e de sociabilidades. Palavras-chave: Etnografia, espao pblico, sociabilidade, reciprocidade, honra.
ABSTRACT
The public square has prominence in popular quarters, where the community lacks of leisure alternatives, understanding the square as a potential place for the development of the sports activities, of the parties of the quarter and the formation of sociability nets. The present work has for objective to analyze as if it establishes some
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Acadmico do Curso de Educao Fsica/ULBRA Bolsista Rede Cedes Acadmico do Curso de Educao Fsica/ULBRA Bolsista Rede Cedes
Professor Orientador do Curso de Educao Fsica/ULBRA (zdamico@yahoo.com.br)
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forms of use of the Square Dona Mocinha, Niteri quarter in Canoas/RS and which significances users of this place are attributed. In the field research we use the method. We perceive that the square reflects the dynamics of the city as territory of conflicts and sociabilitys. Key words: Ethnographical research, public space, sociability, reciprocity, honor.
INTRODUO
A discusso em torno da importncia dos espaos pblicos de lazer em grandes cidades e principalmente em zonas de periferia urbana tem levado uma srie de estudos a investigar esta temtica. Este tipo de espao, a praa pblica, tem seu destaque potencializado em bairros populares, onde a comunidade carece de alternativas de lazer, vendo ento a praa como um lugar em potencial para o desenvolvimento das atividades esportivas, das festas do bairro e, alm disso, como terreno frtil para construo de redes de sociabilidade. No entanto, alguns discursos da mdia destacam o carter marginal da praa pblica, caracterizando-a como espao livre para o consumo e venda de drogas, para prtica de assaltos e como ponto freqente de prostituio, projetando um olhar estigmatizado e contribuindo desta forma para a adoo de polticas de cercamento dos espaos, acreditando reduzir assim a depredao e a criminalidade. Entendemos que estes discursos correntes no colaboram para uma compreenso das relaes complexas que se estabelecem nestes locais. neste sentido, que o olhar deste estudo se dirige para captar a viso dos usurios cotidianos da praa e a partir da, buscar entender qual o significado dela para a comunidade. Conforme Almeida e Tracy (2003), o debate a respeito da espacialidade tornou-se estratgico para a compreenso das questes centrais das Cincias Sociais contemporneas.
Segundo as autoras: Surgiu, assim, na ltima dcada, uma nova geografia cultural, estruturada em torno de diferentes parmetros tericos, sendo que, as noes de lugar e espao no envolvem sries de relaes fora da sociedade, mas esto implicadas na prpria produo das relaes sociais e so, em si mesmas, socialmente produzidas. (ALMEIDA e TRACY, 2003, p.25). Do ponto de vista conceitual, De Certeau (1994), estabelece a diferenciao entre lugar e espao, para este autor, lugar a ordem segundo a qual, diferentes elementos, que compem materialmente a realidade organizam-se uns em relao aos outros, segundo eixos precisos (ordenadas e coordenadas), abarcando uma configurao instantnea de posies e implicando uma indicao de estabilidade. Por outro lado, o espao no possui unicidade e estabilidade apontadas anteriormente, ao contrario, existe espao sempre que se tomam em conta vetores de direo, quantidades de velocidade e a varivel no tempo. O espao construdo pelo cruzamento de mveis, sejam eles corpos ou fragmentos e animado pelo conjunto dos movimentos que ai se desdobram (DE CERTEAU,1994). Considerando o processo de apropriao encontrado em nosso campo de estudo, a Praa Dona Mocinha, localizada no bairro Niteri em Canoas/RS, a nfase do trabalho no est na praa como lugar, mas como um espao vivido. (DE CERTEAU, 1994).
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Neste sentido, o objetivo deste artigo se apresenta como um desafio, descrever o cotidiano da Praa Dona Mocinha, numa perspectiva de insero no ambiente de estudo, compreendendo-o por dentro e a partir disto, entender qual significado os usurios atribuem ao espao e quais as relaes que estabelecem nele, isto dentro dos grupos sociais regulares e tambm nas negociaes com outros grupos e usurios.
O autor define a etnografia como um tipo de esforo intelectual com o objetivo de elaborar uma descrio densa. O antroplogo afirma que: O que o etngrafo enfrenta, (...) uma multiplicidade de estruturas conceptuais complexas, muitas delas sobrepostas ou amarradas umas s outras, que so simultaneamente estranhas, irregulares e inexplcitas, e que ele tem que, de alguma forma, primeiro apreender e depois apresentar. (GEERTZ,1978, p.20). Este mtodo qualitativo de pesquisa cientfica utiliza-se de duas ferramentas fundamentais para captao do material emprico, o dirio de campo e a observao participante. Segundo Fonseca (1999, p.63), no intuito de descobrir a relao sistmica entre diferentes elementos da vida social que os etngrafos abraam a observao participante para tentar dar conta da totalidade do sistema. Desta forma, o pesquisador se insere na cultura do nativo, porm, optamos na construo textual, por substituir o termo objeto de pesquisa por sujeito, na medida em que nossos informantes no so materiais manipulveis (ou pelo menos no deveriam ser) so pessoas de carne e osso, inseridas num determinado contexto, onde as influencias sociais vem de todos os lados. A abordagem etnogrfica exige uma ateno especial a outras linguagens que algumas tcnicas tm mais dificuldade em alcanar. Ao cruzar discursos de sujeitos sobre a mesma realidade, constri-se a tessitura da vida social em que todo o valor, emoo ou atitude que est inscrita. (FONSECA, 1999). fundamental neste sentido, estabelecer um olhar sutil sobre os acontecimentos do cotidiano da praa, a primeira vista insignificantes como os jogos das crianas,
METODOLOGIA
A pesquisa no surge do acaso, ela um recorte de um projeto mais amplo intitulado Espaos Esportivos de Lazer e Sociabilidade Cotidiana: Um Estudo Etnogrfico, desenvolvido em parceria pela UNISINOS, ULBRA e UFSM, que tem como objetivo principal verificar de que maneira estes espaos pblicos esto sendo apropriados e utilizados pela populao nas cidades de So Leopoldo, Canoas e Santa Maria. A escolha metodolgica recai na Etnografia Interpretativa, que na tradio das Cincias Sociais, especialmente na Antropologia, possui o intuito de romper com o paradigma Positivista, principalmente na busca de uma viso objetiva da realidade. Nesta perspectiva, Geertz (1978) aponta para Max Weber: Acreditando que o homem um animal amarrado a teias de significado que ele mesmo teceu, assumindo a cultura como sendo essas teias e a sua analise; portanto no como uma cincia experimental em busca de leis, mas como cincia interpretativa, procura de significado. (GEERTZ, 1978, p.15)
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as lutinhas dos jovens e as brincadeiras ditas de mau gosto, tornando-se extremamente importantes e passiveis de interpretao, podendo revelar algo sobre os valores do grupo. (FONSECA, 1999). Quanto ao dirio de campo, Geertz (1978) diz que o etngrafo inscreve o discurso social: ele o anota. Ao faz-lo ele o transforma de acontecimento passado, que existe em seu prprio momento de ocorrncia, em um relato, que existe em sua inscrio e que pode ser consultado novamente. Mesmo depois da discusso metodolgica uma pergunta permanece, porque a escolha do campo de estudo nos levou at a Praa Dona Mocinha? Neste momento a inteno do grupo era de escolher espaos que tivessem caractersticas diferentes em bairros diferentes dentro da cidade de Canoas/RS, demonstrando as diversas apropriaes e manifestaes que se desenvolvem nestes espaos vividos. Eis que a Praa Dona Mocinha surge preenchendo estes requisitos, caracterizando-se como um dos epicentros do bairro Niteri, o espao a nica praa pblica do bairro e uma das poucas opes para o lazer gratuito num dos bairros mais antigos e populosos da cidade de Canoas. As primeiras visitas ao campo foram no ms de maro de 2008, onde houve uma primeira aproximao para o reconhecimento do espao e se estenderam at dezembro de 2008, somando um total de 20 visitas ao espao, sendo que uma foi filmada. A insero no campo tinha um objetivo inicial, olhar o cotidiano da praa e buscar regularidades quanto aos tipos de apropriaes que os grupos de usurios constroem no espao. Um dos aspectos que mais chamou a ateno neste perodo inicial de pesquisa foi perceber o intenso trnsito de pessoas que circulavam pelo ambiente, algumas delas apenas passando em direo a estao do trem que fica bem prxima, outras se reuniam em grupos e sentavam nos bancos espalhados pelo local, identi-
fico uma grande quantidade de jovens organizados em pequenos crculos e um outro grupo de senhoras que se localiza prximo ao banheiro da praa, alm de constantes encontros de vizinhos, amigos e parentes, estes primeiros contatos se caracterizam por uma intensa negociao quanto a minha presena em relao aos nativos da regio. No movimento de aprofundar o olhar nos arredores do espao percebo a presena de alguns poderes devidamente representados, relato da seguinte forma no dirio de campo Reforo idia da importncia do local onde a praa foi construda, de um lado temos a Escola Augusto Severo, do lado oposto a Delegacia da Polcia Civil e uma srie de comrcios e nas duas laterais, de um lado a Igreja Catlica de So Paulo e do outro uma sede da Igreja Universal do Reino de Deus, isto sem esquecer a casa de um dos candidatos a prefeito da cidade (que veio a ser eleito) e em meio a isto tudo a Praa Dona Mocinha (Dirio de Campo 09/05/08). Sendo assim, a praa encontra-se numa posio estratgica, no centro do bairro, proporcionando uma srie de encontros, fazendo com que a praa permanea ocupada por quase todo o dia. As palavras de Jacobs destacam a importncia de se pensar no lugar onde os parques e praas so construdos, (...) um parque de bairro genrico, que esteja preso a qualquer inrcia funcional em seu entorno, fica inexoravelmente vazio por boa parte do dia (...) a agonia enfadonha, repele a vida (JACOBS, 1995, p.108). A experincia no campo, no permite entender a Praa Dona Mocinha nesta lgica, podemos estabelecer uma outra perspectiva sobre o espao: Quanto mais cidade conseguir mesclar a diversidade de usos e usurios do dia-a-dia nas ruas, mais a populao conseguir animar e sustentar com sucesso e naturalidade os
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parques bem localizados, que assim podero dar em troca vizinhana prazer e alegria, em vez de sensao de vazio (JACOBS, 1995, p.121). Desta forma, aps diversas visitas, pude identificar dois grupos de sociabilidade regular, As Senhoras do Banheiro e o Bonde dos Arroganths, estes dois ncleos de interao tornam-se a partir de ento o foco do olhar sobre as sociabilidades da praa. Segundo Simmel (1983) a prpria sociedade em geral se refere interao entre indivduos: (...) historicamente as pessoas se relacionam com interesses, de comrcio, conflitos, por impulsos religiosos, porm quando retiramos o contedo destas relaes elas, as formas, tornam-se autnomas, ganham vida prpria, com a finalidade e com a matria de sua prpria existncia. O impulso de sociabilidade extrai das realidades da vida social o puro processo da sociao como um valor apreciado, e atravs disso constitui a sociabilidade no sentido estrito da palavra (SIMMEL, 1983, p. 165). Estes encontros desenvolvem um sentimento entre os membros e como tal um valor, sem atritos com a realidade, de riqueza simblica e ldica, pelo sucesso do momento.
mais uma vez quando cheguei praa uma concentrao de mulheres se localizava ao redor do banheiro onde trabalha a zeladora, esta conversa se estende a ponto de as mulheres entrarem na salinha da zeladora (Dirio de Campo, 30/04/08). Ao perceber em especial aquela apropriao do territrio em frente ao banheiro da praa, caracterizado pelo movimento regular de senhoras que se reuniam conversavam durante longos perodos das tardes, que comeou a chamar a minha ateno. Acabei por batizar o grupo com o nome de Senhoras do Banheiro, pode parecer estranho, porm foi o que fez mais sentido naquele momento. Com o passar dos dias, pude visualizar com mais nitidez e reconhecer algumas das senhoras que compunham aquele grupo, o que me motivou a tentar finalmente minha insero nele. Dias depois, tomo a iniciativa e me apresento para uma das figuras mais representativas da praa, realmente uma protagonista daquela realidade, Segundo Dona Iolanda, funcionria pblica h 34 anos, iniciou seu trabalho na Praa Dona Mocinha em 1977, ou seja, seu vnculo com o espao tem 31 anos, neste momento fiquei to surpreendido, que me faltaram palavras para tecer um comentrio, simplesmente fiquei pasmo e mudo (Dirio de Campo, 09/05/08). A partir deste dia, tive a feliz oportunidade de partilhar algumas tardes ensolaradas na presena de Dona Iolanda e das outras senhoras que compem o grupo, fato este, que me exigiu por diversas vezes jogo de cintura e uma intensa capacidade de negociao, principalmente naqueles momentos em que a conversa no flua. Como no dia em que percebo que a tarefa no ser fcil, visto que por vezes o dilogo com ela se estabelece de forma confusa. Ao me aproximar de Dona Iolanda, minha primeira atitude cumprimentla, Ol Dona Iolanda! Tudo Bem?, ela tricotando de cabea baixa apenas me d um sorriso sem graa, parece que nem me reconheceu, confesso que fiquei com uma sensao estranha, sentindo um quase desprezo, porm
Relaes de Reciprocidade Os encontros dos grupos da praa de alguma forma ilustram esta dinmica, como segue neste trecho de um dirio de campo Foi interessante observar que
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percebo que para entrar no conceito de algum de esta mais de 30 anos num determinado espao estas poucas aproximaes ainda so insuficientes (Dirio de Campo, 03/07/08). E a situao naquele dia ainda ficou mais crtica, Vou falar com meu chefe que tu ta fazendo uma pesquisa aqui, derrepente eu falo alguma besteira... (Dirio de Campo, 03/07/08). Passados alguns encontros, o dia 09/07/08 teve o significado de servir para mim como senha de entrada no universo daquelas senhoras, que ainda se constituam em um dilema para o aprendiz a pesquisador, e por outro lado me apresentou um pouco do significado daquele espao nas vidas das senhoras da Praa Dona Mocinha. Descubro ento que a fiel companheira de Dona Iolanda chamase Isabel, ela destaca a importncia da praa, pois Todo mundo vai pra l, ainda completou dizendo que o melhor lugar do bairro, ela em uma outra oportunidade j havia me contado que sua relao com a praa de longa data, a praa como uma casa para mim..., na medida em que sempre trouxe as crianas da famlia para brincar naquele local, antes o filho, depois a sobrinha e agora a filha pequena (Dirio de Campo, 03/07/08). Conheo tambm desta vez uma senhora negra com um casal de filhos, neste dia, Dona Iolanda refora uma frase j dita por ela em outra oportunidade, gosto de trabalhar perto de casa, no tenho inimigos e pelo jeito no tem mesmo (Dirio de Campo, 09/07/08). O assunto estava interessantssimo naquela tarde, em alguns momentos eu mesmo conduzi a conversa puxando os papos e elas entravam na minha onda. Para minha surpresa as visitas continuavam a chegar, eram elas, a cunhada de Isabel, que falava bastante era bem espontnea, e mais uma senhora que vendo o amontoado de pessoas tambm chegou para conversar. Ao me dar conta da situao, vejo-me rodeado de cinco senhoras e
trs crianas na porta de um banheiro conversando diferentes assuntos, achei o mximo e acreditei que as coisas andavam muito bem naquele momento. Foi durante esta discusso que me aproximei de um dos sentidos da praa, Foi engraada uma situao que se sucedeu por algumas vezes na entrada do banheiro feminino, as freqentadoras da praa que queriam utiliz-lo formavam uma fila atrs das senhoras que conversavam acreditando que aquela era a fila de espera para poder utilizar os sanitrios. Depois de alguns segundos, perguntavam Esta a fila para entrar no banheiro e ento algum dizia, No...pode passa direto!. Ilustrando esta situao, no alto de seus 31 anos de praa, Dona Iolanda lana uma frase que para mim emblemtica, ela diz Vamos ter que aumentar a sala!, A casa t cheia! (Dirio de Campo, 09/07/08). Acredito que estas palavras, juntamente com as de Isabel num momento anterior, carregam um simbologismo de tornar aquele momento e espao dotados de um significado todo especial, afinal consideraram um banheiro e uma salinha como uma extenso da casa. No relato de Dona Iolanda e de Dona Isabel possvel fazer uma aproximao com o Antroplogo Da Matta em seu estudo A Casa e a Rua, no sentido de que cada espao possui vises de mundo e significaes particulares, que constituem a prpria realidade moralizando o comportamento (DA MATTA, 1984, p.53). Nesta perspectiva, a Casa, se configura como o espao conservador, familiar, pessoal, ou seja, exatamente o contrrio da rua, espao da individualizao, da luta, da malandragem, do cada um por si. Da Matta (1984) segue, quando sugere Weber (1958) chamando a ateno para as ticas Dplices , sendo assim, esses espaos contm vises de mundo particulares. Nesses sistemas, pode-se dizer
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que o espao no existe como uma dimenso social independente e individualizada, estando sempre misturado, interligado ou embebido em outros valores que servem para a orientao em geral (DA MATTA, 1984). Chama a ateno para o movimento percebido, a partir do discurso das senhoras, quando a Rua, ou melhor, a Praa, se transforma em Casa, dependendo do tipo de apropriao e significado que se estabelece no local. Um outro acontecimento que apresentou um pouco das relaes que se constroem dentro do grupo e que passam pela praa, construindo a histria do lugar e das pessoas, foi o caso da rifa e a construo dos laos de reciprocidade, nosso ponto de encontro serviu naquela tarde para uma prestao de contas referente a uma rifa promovida pelo grupo de amigas. Quando chegou praa a cunhada de Isabel trazia a mo um saco plstico contendo os nmeros vendidos e o dinheiro arrecadado, ela fez questo de contabilizar o dinheiro na frente de Isabel e de identificar quais vizinhos tinham comprado pelo menos um nmero os de f... e os que no servem nem para ajudar neste momento, dizia ela Aquela senhora da casa de frente comprou duas, j aquela da cada de trs no comprou nenhuma, acredita?!, ao observar a auditoria realizada na praa pergunto se posso ajudar comprando um nmero, mas a resposta que recebo de Isabel de que o sorteio tinha ocorrido no dia anterior, impossibilitando minha compra, pergunto ento qual o prmio?, elas respondem que um aparelho de DVD e que promoveram esta Ao entre Amigos para arrecadar fundos e ajudar Isabel, pois sua casa sofreu um incndio, ela acabou perdendo tudo o que tinha e esta passando por muitas necessidades (Dirio de Campo, 09/07/08). Devo confessar que achei este acontecimento de uma riqueza incrvel, pelo fato das amigas se unirem em solidariedade a situao que Isabel enfrentava e tambm pelo motivo do encontro e da prestao de contas no ser realizada na casa de nenhuma delas e sim na praa.
A partir obra clssica de Mauss (1924), Ensaio Sobre a Ddiva, podemos refletir um pouco sobre o fenmeno da rifa, este livro vai fundar na viso da teoria antropolgica, a chamada teoria da troca ou a idia fundamental da reciprocidade. Desta forma, foi visto nas tribos do noroeste americano, na Melansia, na Polinsia, que os sistemas de trocas e contratos fazem-se sob a forma de presentes, em teoria voluntrios, na realidade obrigatoriamente dados e retribudos (MAUSS, 1924). Sendo assim, ningum tem a obrigao de adquirir a rifa, voluntria, porm quem no compra, deixando de ajudar uma vizinha fica numa posio desconfortvel, marcada e provavelmente no poder contar com a ajuda da vizinhana. Nas palavras de Mauss (1924), o mais importante nesses mecanismos, evidentemente aquele que obriga a retribuir o presente oferecido, neste caso quem foi favorecido pela rifa fica na obrigao de retribuir a ddiva concebida, ou seja, adquirir uma rifa que favorea quem o ajudou antes ou podendo certamente manifestar esta reciprocidade de outra forma. O autor destaca ainda (...) que a prestao total no implica somente a obrigao de retribuir os presentes recebidos; supem outros dois igualmente importantes: obrigao de os dar, por uma lado, obrigao de os receber, por outro (MAUSS, 1924, p.68 ). Podemos resumir a situao da seguinte forma, a cunhada de Isabel organizou a ao e entregou a ela a Ddiva, agora Isabel tem a obrigao de aceitar, e aps a obrigao de retribuir a Ddiva, no fazendo isto pode colocar em jogo sua reputao perante o grupo e ter que assumir a dvida, deixando de formar alianas e comprometendo o equilbrio da ordem social.
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Jorge Villela (2000) nos diz que: (...) embora no seja calculista, a economia da ddiva, na recusa ao capital econmico, visa acumulao de um capital que pode ser traduzido em riquezas de aliados, servios, credores, enfim, do reconhecimento. Nesse sentido o capital simblico um crdito (VILLELA , 2000, p.198).
encorajou a ir falar com o pai foi o fato de estar com a camisa do Grmio, pensei que poderia me aproximar comentando um pouco sobre nosso time, com o objetivo de quebrar o gelo, e foi justamente o que fiz (Dirio de Campo, 08/05/08). Aparentemente, Binho no faz parte do Bonde, porm, sempre est com a galera na praa, Em vrios momentos, falava que era vagabundo, mas no aquele tipo de vagabundo, (neste momento difcil saber a definio utilizada), pois ele esta sempre na correria e sabe que a vida difcil, a partir da comecei a compreender o sentido por ele utilizado, no se referindo ao vagabundo que no faz nada e nem o vagabundo ladro, fala daquele sujeito que est na luta sempre fazendo uma correria e se virando para viver, pelo menos foi esta a sensao que tive (Dirio de Campo, 08/05/08). Ao elaborar suas pesquisas com grupos populares de Porto Alegre, Fonseca (2004) demonstra como o emprego assalariado costuma ser desprezado por homens e mulheres moradoras de vilas e comunidades carentes, neste sentido: O desprezo pode ser interpretado como autodefesa, j que muitos, talvez a maioria dos moradores da vila, tenham sido, em algum momento, rechaados com brutalidade por parte de um patro em potencial. Para os bons empregos, trs quartos das pessoas no tm a boa aparncia, se chegam a ter roupas decentes, ficam-lhes as marcas indelveis da cor da pele ou da maneira de falar (FONSECA, 2004, p.14). Nosso informante um jovem negro com cerca de 25 anos, ostenta um estilo tpico de Rapper, possui um filho pequeno e atualmente no reside com a me da criana, revela sua malandragem falando que no perdeu tempo e j est com outra mulher,
No estamos aqui querendo reproduzir na forma exata a teoria de Mauss, mas mostrar como alguns elementos servem para concretizar as relaes dessas senhoras, construindo laos ou redes de reciprocidade para alm da praa. ...chega a! O segundo ncleo de sociabilidade, no menos importante, e assim como o outro repleto de significados um grupo de jovens conhecidos como Bonde dos Arroganths, o meu conhecimento destes jovens se deu na primeira visita praa, ouvindo o grito de um garoto, ... chega ai! Eles disseram que vo bater nos arrogantes, quem? perguntou um jovem, aqueles pia, fazendo aluso aos jovens que estavam com ele, que iriam brigar com algum grupo do colgio. Todos eles aparentemente com menos de 15 anos (Dirio de Campo, 14/04/08). Neste dia nada ficou claro, mas percebi que com o passar do tempo os acontecimentos se tornavam mais visveis. Foi conhecendo Binho, um outro personagem da praa que me aproximei do Bonde, Aps uma breve observao das brincadeiras entre pai e filho percebo que o pai estava fumando um baseado, sem a preocupao de esconder do filho pequeno, o menino realmente no devia saber o que era aquilo, entretanto foi uma cena que me chamou a ateno. Um aspecto que me
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ficando direto na casa dela, Contou sobre um rapaz que foi at a casa da mina dele vender uma TV de 20 polegadas, pedindo 100 reais pelo aparelho, pois estava na fissura (acredito que ele tenha se referido ao crack), aps a negociao Binho conseguiu tirar por 50 conto e concluiu que a partir de ento e principalmente no inverno tem passado mais tempo em casa (Dirio de Campo, 08/05/08). E desta maneira ele vai se virando, na medida em que no possui emprego com carteira, tem que se desdobrar realizando negcios e pequenos bicos para ganhar o dia, o que lhe exige passar diversas vezes voando pela praa: Viver dez horas por dia na evocao constante de sua inferioridade em nada contribui para enaltecer a prpria imagem, e o salrio, realmente irrisrio, no compensa a falta de satisfao pessoal. A resposta coletiva a essa situao de denegrir os empregos denegridores e valorizar qualquer ganha-po, desde que no apie a hierarquia social convencional subordinado s classes dominantes (FONSECA, 2004, p.14). Senti facilidade de conversar com Binho, pois foi muito receptivo, alm de dizer que eu deveria me entrosar com a gurizada para conhecer bem o local. Perguntei algumas coisas sobre a praa e ele destacou que a galera da zona sempre chega ali para fumar um baseado e tomar uma bira, geralmente na noite e que sempre tem umas minas e p! (realmente ele no perdia a oportunidade de mexer com as minas que passavam por ali). Disse tambm que a gurizada se junta para fazer um esporte, futebol ou basquete, durante as madrugadas. (Dirio de Campo, 08/05/08). Nesse encontro, Binho tinha prometido me apresentar para a galera da praa, semanas depois o encontro aconteceu os guris estavam sentados em um banco, Binho me apresentou, sentei e comecei a ouvir as conversas, at que perguntei, Para que serve
a praa?, eles responderam, para fumar e para ver as minas e em seguida, para as crianas, para fazer esporte tambm... (Dirio de Campo, 15/07/08). Em outro momento, um dos jovens apelidado de Dudu, comentou sobre a briga que tinha acontecido na praa contra os jovens do bairro Rio Branco, situado do outro lado da linha do trem, segundo ele, os caras entraram na praa de madrugada, eu (Dudu) estava com outro cara... eles vieram correndo nos pegar e deram uma tijolada que acertou o telhado do banheiro, eu no pude brigar porque estava com a perna machucada, tive que fugir mancando... (Dirio de Campo, 15/07/08). Esta histria foi suficiente para o resto do grupo comear a ironizar a sua atitude, dizendo que ele fugiu da briga, ou melhor, arregou o jovem se viu obrigado ento a recuperar a honra, lembrando que em outro dia, fizeram um guri do bairro Rio Branco correr at pular a linha do trem. Desvendando um pouco este acontecimento, podemos perceber nos discursos, o sentido de pertencimento e de valorizao do espao, pois a praa aparece como o terreno onde por vezes esses encontros acontecem. Um outro jovem continua destacando os conflitos, os Rio Branco no colam muito aqui, por causa do bonde, se eles vem para c pode dar tumulto, mas com qualquer galera de longe, porque aqui todo mundo anda junto. Eles podem vir, mas acaba dando atrito... (Dirio de Campo, 20/08/08). Enquanto isto, um rapaz portador de uma tatuagem, aparece mostrando o desenho em seu brao, enquanto que os outros fazem alguns comentrios sobre o significado, OBL quente, quem sabe, sabe... uma famlia, no faco... s pra quem , no pra quem quer ser... segredo que nem Deus sabe, mas no briga, a gente pega as minas dos outros j era, paz e amor...hahaha (Dirio de Campo, 20/08/08). Desta forma vo se construindo diferentes grupos,
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com diferentes siglas, onde os significados e as condutas so reconhecidos apenas pelos jovens que fazem parte do bonde. Nesta discusso, Fonseca (2004) nos mostra, que a ttica dos jovens para projetar uma imagem pblica de prestgio apoiasse na bravura, na virilidade. Bravura significa a coragem necessria para matar um adversrio sua altura, para ajudar os camaradas em perigo, para resistir s torturas da polcia. A virilidade manifesta-se pela conquista sexual das mulheres (FONSECA, 2004, p.19). A violncia entre os bondes, se constitui como arma mais ou menos aceita (ou pelo menos esperada) para a resoluo dos conflitos e, nesse sentido, podemos dizer que a fora fsica um elemento importante na organizao de alguns jovens. Existe ali um cdigo de honra que em alguns pontos nos aproxima dos aguantes, torcedores de futebol argentinos, que em estudos realizados por Alabarces , Garriga Zucal e Moreira (2008): (...) constituye un complejo sistema de honor y prestigio que valora positivamente la valenta, el coraje, la bravura y el arrojo en un enfrentamiento fsico(...) las acciones violentas, lejos de ser rechazadas y penalizadas, son acciones legtimas, deseadas y buscadas que funcionan como signos de reconocimiento y distincin. (ALABARCES, GARRIGA ZUCAL e MOREIRA, 2008, p.113). Desta forma, no sistema de valores do grupo, a honra se caracteriza como um elemento fundamental no enfrentamento com outros bondes, quem apanha em um confronto, ou pior ainda, quem foge de uma briga fica taxado de covarde, sendo posicionado na base de uma escala de hierarquias. Nesta lgica, as faanhas e a coragem desempenham um papel fundamental, Aqui nossa rea, na ltima festa, at roubaram o bon do Jean Paul!, hahaha (Dirio de Campo, 20/08/08).
No que diz respeito honra, Pitt-Rivers menciona (1980): Em cada sociedade, em cada momento dado, a honra toma aspectos distintos em relao s formas de vida e o sistema intelectual de cada cultura, que permite expressar a aprovao e a desaprovao de condutas e formas de pensar (PITTRIVERS,1980, p. 101). Longe de enquadrar estes grupos juvenis na perspectiva da delinqncia, possvel perceber um cdigo moral que organiza as condutas dos jovens com a valorizao das aventuras e dos confrontos conta outros bondes. Assim, as posies e os papis so negociados cotidianamente nos encontros realizados na praa, principalmente aps os dias de correria, quando acontecem os conflitos. No se trata de aprovar a violncia, trata-se de reconhec-la e saber lidar com ela. Alm do confronto fsico, existe tambm uma rede de significados que destaca uma espcie de violncia simblica caracterizada pela pichao, ela aparece marcando as zonas de atuao de cada bonde. Estamos diante de limites territoriais simblicos: (...) nas rixas entre grupos (bondes), ocorre uma demarcao territorial que impacta de forma importante a mobilidade dos jovens na regio. Essa demarcao como se fosse uma maneira de fortalecer o poder local, e ao mesmo tempo essas relaes de poder acabam limitando o acesso a espaos de lazer de modo que proibido invadir o espao do outro (ROSA, 2007, p 21). Neste contexto, um desafio se constri, invadir o espao dos outros e deixar uma marca, ou seja, uma pichao na praa. Podemos constatar isto nas paredes do banheiro da Praa Dona Mocinha,
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repleta de smbolos de outras galeras que invadem o Niteri pela noite para deixar seu marca. Segue o trecho do discurso de um jovem, Arroganths uma famlia unida, picha ai ARGTS... vocs vo me ver ai mais alm... ARGTS de Canoas, Niteri (Dirio de Campo, 20/08/08). Analisando o discurso dos jovens na compreenso do significado da praa, avanamos neste sentido em Magnani (1984), destacando o pedao como aquele espao intermedirio entre o privado (a casa) e o pblico, onde se desenvolve uma sociabilidade bsica, mais ampla do que a fundada nos laos familiares, porm mais densa, significativa e estvel do que as relaes formais e individualizadas impostas pela sociedade. O Pedao remete a um territrio que funciona como ponto de referncia e, no caso da vida no bairro, evoca a permanncia de laos de famlia, vizinhana, origem e outros (MAGNANI, 1984). Entendemos que a violncia na praa, a presena do Bonde e os limites simblicos, so fenmenos oriundos de um processo scio-histrico e cultural. Estas manifestaes se mostravam no bairro e na praa na dcada de 50, j nesta poca Niteri comeou a perder a confiana caracterstica dos pequenos lugares, e seu perfil de bairro operrio estigmatizavase pela fama de local violento (PENNA, 1995). Como tambm destaca uma antiga moradora hoje nem temos mais espaos para acolher esses jovens. Isso precisaria existir. Parece que no existindo esse tipo de grupo surgem outros que esto sendo batizados com o nome de gangues da praa (PENNA, 1995). A praa segue ento a dinmica da cidade e as contradies da nossa sociedade, um espao de disputas e significados, de enfrentamentos e lutas, mas tambm de solues e solidariedade. Destacamos a importncia da Praa Dona Mocinha para a
comunidade do bairro Niteri, entendemos que ela faz parte da histria da cidade e principalmente das pessoas, dotada dos mais diversos significados.
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A tecnologia da guerra nos relevos Neo-Assrios
RICARDO SILVA SERRES1 SANDRO TEIXEIRA DE OLIVEIRA2 SIMONE SILVA DA SILVA3 JSSICA SANTOS DE LIMA4 KATIA MARIA PAIM POZZER5
RESUMO
O presente artigo se prope analisar a representao da guerra nos relevos parietais assrios. Neste estudo o foco est nos aspectos tecnolgicos de guerra, tais como, armas e carros de batalhas, alm de tticas e estratgias, que foram imortalizadas na arte de esculpir relevos na Assria do I milnio a.C. Tais obras transmitem mensagens veiculadas por intermdio das cenas blicas, onde o simbolismo, presente nos relevos, servia como uma linha reguladora e normativa da ideologia assria, frisando o aspecto guerreiro que caracterizou um dos maiores imprios do Antigo Oriente Prximo. Palavras-chave: Guerra, assria, representao, tecnologia, mesopotmia.
Ps-Graduando do Curso de Patrimnio Cultural e Identidades/ULBRA, Bolsista AT/CNPq Acadmico do Curso de Histria Bolsista Voluntrio PROICT/ ULBRA Acadmica do Curso de Histria/ULBRA Bolsista IC/ FAPERGS
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Acadmica do Curso de Histria Bolsista PROICT/ULBRA Professora - Orientadora do Curso de Histria/ULBRA. Coordenadora do Laboratrio de Pesquisa do Mundo Antigo (lapema@yahoogrupos.com.br)
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ABSTRACT
This article aims to analyze the representation of war in the parietal Assyrian reliefs. In this study the focus is on technological aspects of war such as guns and cars of battles, besides the tactics and strategies, which were glorified in the art of sculpting Assyrian reliefs in the I millennium BC These works represent messages through scenes of war where the present symbolism in reliefs served as a regulatory and normative line of Assyrian ideology, emphasizing the warrior aspect that characterized one of the greatest empires of the Ancient Near East. Key words: War, assyria, representation, technology, Mesopotamia.
INTRODUO
A guerra tem sido ao longo das geraes um tema muito pertinente dentro da historiografia. Evento que perpassa todos os perodos da histria, ela se caracteriza conforme a conjuntura ideolgica e a herana cultural de cada sociedade numa determinada poca. O exrcito neo-assrio ficou conhecido no I milnio a.C. como um referencial de poder e indestrutvel fora militar. Eventos belicosos, batalhas violentas, cercos e tticas de guerra se fazem presentes em vrios documentos histricos deste imprio, peculiaridade que o destacou por constituir um exrcito de exmios guerreiros no Antigo Oriente Prximo. No caso desta pesquisa o foco volta-se para os documentos de teor iconogrficos do I milnio a.C. (Figura 1). A organizao de uma poderosa fora militar tem suas caractersticas presentes na formao ttica dos chefes guerreiros, mas, tambm, na inteno de vrios soberanos em constituir uma instituio belicosa, capaz de dar uma resposta armada ao inimigo em qualquer ocasio. A formao de um exrcito poderoso no ocorreu em um perodo determinado no imprio neoassrio, mas sim, ao longo de um processo de vrios perodos e reinados da histria, como no de Sargo (721-705 a.C.) e seus sucessores: Senaqueribe (704-681 a.C.), Assarddon (680-669 a.C.). Porm, foi no reinado de Assurbanipal (669-630 a.C.), que tal formao tomou maiores propores (VILLARD, 1991, p.42). relevante entender como o imprio se utilizou de determinadas tticas para, de certa forma, viabilizar economicamente este desenvolvimento blico. Uma destas tticas foi o da pilhagem, ou seja, o saque praticado por tropas militares quando ocupavam uma cidade inimiga (VILLARD, 1991, p.44). Neste contexto, pode-se dizer que a organizao militar assria, para ter xito, necessitava adquirir meios econmicos para custear as campanhas armadas e, tambm, o recurso de recrutamento
Figura 1 - Mapa da Mesopotmia.
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existente no imprio, o que responde, em parte, o potencial militar deste povo. O quadro funcional dos batalhes de guerra disposio do exrcito estava relacionado ao grande nmero de pessoas da populao sujeita a figura imponente do soberano da Assria. Alm de uma guarnio de soldados preparados para o exerccio da vida militar, o exrcito poderia contar, tambm, com uma parcela da sociedade que inclua o servio militar obrigatrio. Tais indivduos recebiam a denominao de zab arri1, e poderiam desempenhar as funes militares como forma de pagamento do ilku2. Os homens que desempenhavam este papel poderiam realizar servios em troca de concesses, geralmente de terras. Eles ficavam ordenados, aos milhares, em aldeias espalhadas sob a responsabilidade dos oficiais, o que facilitava a proteo das fronteiras do imprio e, ao mesmo tempo, uma manobra militar de ataque. Muitos destes homens poderiam ser mantidos constantemente sob a mira de armas (VILLARD, 1991, p.46). A cultura assria de esculpir relevos parietais, monumentais documentos histricos, dispostos nas salas dos palcios, servia muito mais do que a mera atividade artstica para decorao. Eles funcionavam como um instrumento propagandstico da ideologia assria, vinculada a figura do rei. As cenas de guerra, de soldados empunhando armas, cercando uma cidade inimiga, mutilando, prendendo, deportando, empalando ou cortando as cabeas dos inimigos, serviam como uma recomendao queles que circulavam pelo palcio, fossem nativos ou estrangeiros, da potncia de guerra assria e do que poderia ocorrer a todo aquele que desafiasse a ordem estabelecida. Eles poderiam, tambm, retratar a proteo divina, por
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meio da imagem de divindades que eram levadas para os campos de guerra e que insinuavam a legitimidade das campanhas militares, uma vez que, teriam a permisso dos deuses. Portanto, os relevos tinham uma funo poltica que estava vinculada a trs perspectivas distintas: a utilizao de recursos violentos, protagonizados nas batalhas sangrentas; o uso de uma construo ideolgica repleta de simbolismos, que podem ser encontradas tanto na produo textual quanto na visual, dada a grande quantidade de relevos parietais descobertas ao longo dos anos e, por fim, a associao da idia de poder extremo vinculada imagem do soberano (BACHELOT, 1991, p. 109).
MATERIAL E MTODOS
Pela anlise da iconografia identificaremos cada smbolo existente nas imagens dos relevos. Esta anlise prev a identificao das caractersticas tipolgicas dos personagens e dos elementos significativos das vestimentas, penteados, paisagem, armas e objetos associados. Realiza-se a descrio destas caractersticas segundo categorias distintas: as figuras humanas, a paisagem, os objetos e armamentos e os smbolos religiosos a fim de obter uma tipologizao destes elementos, respeitando a ordem de leitura que se impe nos relevos mesopotmicos da poca assria, cuja sobreposio de planos buscava reproduzir a perspectiva. As convenes, as estilizaes e os smbolos caracterizam o conjunto da obra pictrica e a tornam reconhecvel como representao mesopotmica. Por meio de uma verso visual, comunica-se uma realidade social que real, reconhecvel e que a ideologia dos imprios torna-a efetivamente verdadeira. Ao mesmo tempo, o uso de certas imagens padronizadas tem uma longa histria de representao na arte do Antigo Oriente Prximo, pois, serve
zab arri significa, literalmente, pessoas do rei. ilku era um imposto que deveria ser pago em prestao de servios ao Estado.
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para eternizar e naturalizar a legitimidade do rei e do Estado, pela via da sugesto de unidade com o passado (MARCUS, 2000, p.2487). Foram selecionados e utilizados documentos iconogrficos do imprio neo-assrio, por meio de uma seleo de imagens de livros e stios de importantes instituies museolgicas tais como o Museu do Louvre, Museu Britnico, Museu do Prgamo, em Berlim, o Instituto Oriental de Chicago e o Museu Nacional do Iraque. Para este trabalho foram selecionadas trs sries de documentos iconogrficos, para anlise em conjunto, segundo a metodologia baseada na obra de Erwin Panofsky, historiador da arte e crtico alemo, cujo postulado divide o processo de anlise visual em iconografia e iconologia se direcionando para trs perspectivas distintas, nesta ordem: descrio pr-iconogrfica; anlise iconogrfica e interpretao iconolgica. Panofsky, em seus estudos, definiu iconografia como o estudo do tema ou assunto e iconologia o estudo do significado do objeto. A iconografia o tema e o significado das obras de arte em contraposio a sua forma e iconologia o estudo de cones ou de simbolismo na representao visual (PANOFSKY, 2007, p. 52). As imagens para anlise esto identificadas por Figura 2: Cerco Lakish (BRITISH MUSEUM, 2008); Figura 3: Ataque a uma Cidade Inimiga (CURTIS e READE, 1995) e Figura 4: Cena de Batalha do Palcio de Assurnasirpal II (MESOPOTAMIA, 2009).
Figura 2 - O relevo acima foi encontrado no Palcio de Senaqueribe, em Nnive, Nordeste do Iraque, datado de aproxidamente 700 a 681 a.C. A imagem uma representao do cerco a cidade de Lakish, confeccionada em alabastro, com dimenses de 1,67 m de comprimento por 1,90 m de altura. Encontrase, atualmente, no Museu Britnico, tendo como referncia: WA 124905-7.
Figura 3 - Este relevo foi encontrado no palcio central de Tiglath Pileser III, em Nimrud, datado entre 730 a 727 a. C., aproximadamente. Trata-se de uma representao de um ataque a uma cidade inimiga, provavelmente Upa, na Turquia, confeccionada em alabastro. Encontra-se no Museu Britnico, tendo como referencia: WA 115634 + 118903.
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RESULTADOS PARCIAIS
Os dados apresentados neste artigo referem-se aos resultados preliminares do projeto de pesquisa em curso A Representao da Guerra na Iconografia Neo-assria, com apoio do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq Brasil), da Fundao de Amparo Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul (FAPERGS) e da Universidade Luterana do Brasil (ULBRA).
Figura 4A - Relevo de Assurnasirpal II.
Descrio Iconogrfica Os relevos parietais selecionados para o presente artigo esto acima discriminados por Figura 2: Cerco Lakish; Figura 3: Ataque a uma Cidade Inimiga, provavelmente a cidade de Upa; Figura 4: Cena de Batalha do Palcio de Assurnasirpal II. Estes foram analisados na ordem seqencial das figuras. Na descrio pr-iconogrfica possvel identificar diferentes vestimentas usadas pelos guerreiros assrios. As vestes dos soldados so caracterizadas por elmos pontiagudos, com ou sem penachos, visveis nos relevos 2, 3 e 4. Alguns soldados foram retratados vestindo longas tnicas, enquanto que outros vestiam curtos saiotes na altura dos joelhos. O riscado, muito peculiar na parte superior do corpo de alguns soldados, ou seja, na altura do trax at a cintura, visvel em boa parte das trs imagens. So pequenos quadrados seguidos de listras transpassadas na horizontal e na vertical salientado, em forma de colete, na parte superior do corpo. Esta imagem est muito clara no arqueiro do relevo 3.
Figura 4B - Relevo de Assurnasirpal II.
Figura 4C -Relevo de Assurnasirpal II. Figura 4 - O relevo acima, dividido em trs partes para melhor visualizao, foi encontrado no palcio de Assurnasirpal II, em Nimrud, datado de 865 a. C., aproximadamente. Trata-se de uma representao do ataque a uma cidade inimiga com o rei Assurnasirpal II empunhando um arco de flecha, confeccionado em alabastro, com dimenses de 92 cm. Encontra-se, atualmente, no Museu Britnico, tendo com referncia: WA 124554.
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Dos artefatos de guerra e postos de batalhas foi possvel verificar arqueiros (portando arcos e flechas) e escudeiros (com longas lanas), protegidos por escudos de vrios formatos, retangulares, pequenos, longos e circulares. Um tipo retangular retratado com algumas listras na vertical. Outros so mostrados com figuras triangulares em suas extremidades, dando uma noo de serem pontiagudos. Estes vrios formatos podem ser vistos no relevo 4, inclusive um dos arqueiros portando um escudo adornado com uma pequena escultura de cabea de um leo3 na frente. possvel verificar ainda, escudos longos e grandes, que alcanam uma altura que cobre acima das cabeas dos soldados e se estende at o cho, notado no relevo 4B. possvel perceber a presena de carros de guerra nos relevos 2, 3 e 4 pois, alguns foram retratados com rodas, a exemplo dos relevos 2 e 3. No relevo 4B possvel ver tambm aros sustentando as rodas. Geralmente os carros aparecem com um formato quadrado, como se fossem grandes caixotes com uma parte mais alta na extremidade dianteira de onde saem duas pontas dando a noo de aretes4 e tubos expelindo gua do seu interior. Um item muito peculiar, detectado nas lajes analisadas, a presena de estruturas ngremes em forma de rampas prximas as muralhas, sobretudo nas imagens de relevos 2 e 3. Os arqueiros so retratados em duplas nos trs relevos, sempre resguardados, ou seja, na retaguarda dos carros de combate que so representados como se estando a frente do batalho. possvel ver aljavas5 carregadas de flechas com alguns arqueiros.
Leo Animal smbolo de fora e resistncia, muito retratado em relevos, sobretudo em exibies de caadas reais. 4 Arete Antiga mquina de guerra, formada de uma trave que terminava por uma pea de bronze feio de cabea de carneiro e que servia para derrubar as portas e muralhas. 5 Aljavas Coldre ou estojo onde se colocavam as setas de
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possvel ver alguns soldados cavando tneis e posicionados em trincheiras, nos relevos 2, 3 e 4. O uso de escadas tambm aparece nas trs lajes, bem como o uso de tochas de fogo, na laje 2. O fogo representado na laje 4 aparece prximo ao carro de batalha. Nas lajes 2 e 3 foram constatadas trs figuras humanas esculpidas em um ngulo acima do solo, presas a objetos pontiagudos no formato de estacas, dando a noo de empalamento, prtica comum dos guerreiros assrios. Nos trs relevos se observam imagens ao fundo com linhas mais longas, tanto na horizontal quanto na vertical, com algumas partes mais altas que formam as paredes de fortalezas e as torres. Nestas trs imagens so retratadas muralhas, com soldados inimigos no topo, enquanto os soldados assrios so mostrados do lado de fora. Tambm possvel distinguir amplas aberturas, formadas por linhas retas, circulares e pequenos quadrados que compem a fachada destas muralhas, intercaladas por longas torres. Algumas janelas aparecem com o formato superior arredondado, conforme o relevo 4. No alto dos muros que circundam a cidade sitiada aparecem formas que forjam, no topo destas muralhas, estruturas salientes, triangulares ou quadradas que se caracterizam como ameias6 pontiagudas. A impresso de se tratar de altas muralhas em locais tambm muito altos, pois h, sobretudo nas imagens 2 e 3, a representao destas cidades em locais mais altos do que o solo. Os derrotados eram aprisionados e levados, bem como os seus objetos pessoais, em um procedimento de pilhagem7. Os animais, como os cavalos e o gado
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flechas e que se trazia pendente no ombro. Ameias Cada um dos pequenos parapeitos dentados que guarneciam o alto das fortificaes ou dos castelos, e que protegiam os atiradores. Pilhagem Era o saque praticado pelos exrcitos que tomavam uma cidade aps venc-la em batalha.
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em geral, eram somados aos esplios de guerra e serviriam, posteriormente, para o transporte de carga e, tambm, de alimento para os soldados. Nos trs relevos aparecem alguns corpos caindo das muralhas. A representao fsica um detalhe evidenciado nas diferenas tipolgicas dos corpos: olhos, barba, cabelos longos, boca, braos e pernas. No relevo 4 h a presena de trs mulheres com os braos levantados, a primeira, da esquerda para a direita, com os dois braos e as mos postas na cabea, a segunda, com a mo direita sobre a cabea e a mo esquerda sobre a cabea de uma criana. A terceira figura feminina est com a mo direita sobre a cabea, mas, com o brao direito em direo ao cho. As trs aparecem sendo escoltadas por um soldado assrio.
sombra nos dias de sol e proteo nos dias de chuva (MESOPOTAMIA, 2009). Os trs relevos mostram tticas de guerra e de stio a uma cidade inimiga, cercada por altas muralhas com janelas e ameias em seu topo por onde os inimigos dos assrios se protegiam das flechas e lanas arremessadas. Os carros de combates foram, certamente, um prenuncio do que seriam os modernos tanques de guerra. Feitos em madeira e recobertos com uma grossa camada de couro. No seu interior havia uma espcie de depsito com pipas de gua que jorravam para fora do carro, em tubos para combater possveis focos de incndio, pois, uma prtica muito comum era o arremesso de tochas e flechas incendirias, conforme a imagem do relevo 2. As mquinas eram, presumivelmente, movidas pelos homens, pois um animal poderia entrar em pnico no momento da batalha. Nos relevos 2 e 4, os carros de guerra so representados jorrando gua de seu interior (CURTIS e READE, 1995, p. 60). Rampas ngremes, visveis nos relevos 2 e 3, eram construdas pelos soldados para aproxim-los dos muros da cidade inimiga e possibilitar o acesso dos carros de guerra. Tambm formavam trincheiras para que os soldados se protegessem dos ataques de flechas e de pedras que tambm poderiam ser arremessadas. Os arqueiros formavam uma categoria a parte. Eles eram oficiais e foram esculpidos sempre atrs dos carros de combate. Esta se caracterizava por uma estratgia de guerra: primeiramente os carros, seguidos de duplas de soldados na retaguarda. Percebe-se que estas duplas eram compostas de um escudeiro que fazia a proteo do oficial arqueiro. Havia vrias formas de escudos, dentre eles, arredondados, curtos, retangulares, confeccionados
Anlise Iconogrfica A arte neo-assria de esculpir relevos parietais tinha um compromisso em materializar todas as aes deste imprio, desde momentos de lazer, caadas, cerimnias religiosas, mas, sobretudo a guerra, caracterstica deste povo e foco deste estudo. Um exemplo desta ao so as vrias lajes que ilustraram os palcios e retrataram os soldados em batalhas. Em uma das trs lajes, no relevo 4A, possvel ver at a presena do rei Assurnasirpal II (884-859 a.C.) e do ento prncipe Salmanasser, (que reinaria como Salmanesser III 859-824 a.C.), em campanha. O rei, apontando o seu arco retratado em uma comitiva, com um escudeiro e dois funcionrios mais atrs, um est portando uma aljava carregada de flechas enquanto o outro segura um parasol. As aljavas eram feitas de couro de animais e o parasol tinha uma estrutura de madeira recoberta por pele de animais para resguardar o rei, possibilitando
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em metal, bronze, ferro, e alguns, ainda poderiam receber uma cobertura de vime em seu exterior. Havia tambm, escudos repletos de pontas que tinham uma dupla funo, ou seja, de proteger o soldado assrio e de ferir o inimigo. Os escudos pontiagudos poderiam ser tambm, ornamentados com uma cabea de leo na sua face dianteira como, por exemplo, no relevo 4 (MESOPOTAMIA, 2009). Os arcos de flechas eram confeccionados a partir da combinao de diferentes materiais, sobretudo de uma madeira malevel, fcil de obter curvatura e de manuse-la. As armaduras protegiam o trax e compunham o vesturio de um soldado assrio. O terno de armadura era confeccionado com pequenas placas de bronze e costurado com tiras de couro ou tendo. Este artefato servia de blindagem para alguns soldados contra as flechas, arco e pedras atiradas pelos inimigos. As espadas que poderiam ser de ferro tinham longas bainhas decoradas. As adagas eram feitas de bronze ou ferro. Algumas poderiam ser decoradas apresentando motivos com embutidos (entalhados) de madeira, osso ou marfim. As lanas tambm tinham um papel importante no armamento do exrcito assrio. Confeccionadas em madeira possuam, em uma das duas extremidades, uma folha de bronze ou ferro em forma de triangulo. Elas poderiam, tambm, serem ornamentadas com borlas8 anexadas na outra extremidade (MESOPOTAMIA, 2009). Na imagem 4 possvel ver o uso de alavancas confeccionadas de bronze ou ferro com formato de ps que serviam para escavar tneis por baixo das muralhas e assim, possibilitar um acesso subterr8
neo a cidade sitiada. Tambm era possvel, com esta prtica, retirarem os tijolos dos muros e torn-los frgeis a ponto de ruir a estrutura ou parte dela. Outra ttica utilizada nos cercos as cidades era o uso das escadas que tinham como matria prima o choupo9, uma espcie de rvore alta e reta. Todavia, no se descarta a utilizao de outro tipo de madeira. Uma vez que as hordas de guerreiros tivessem alcanado os muros da cidade as escadas serviriam para introduz-los no interior da fortaleza. Os trs relevos mostram ainda, a disposio dos soldados fora dos muros da cidade sitiada. Eles foram representados por todos os ngulos do relevo. Isto demonstra a ttica de cercar e impedir a sada dos inimigos para fora das muralhas. As batalhas poderiam durar meses, visto que, se construam rampas para ultrapassar as muralhas. Tal prtica necessitava de um grande projeto de arquitetura que poderia durar vrias semanas para tomar forma. A mobilizao de soldados, funcionrios e obreiros nos arredores das cidades, para preparar o ataque e a invaso cidade inimiga, tambm, servia para reforar o estado de stio dos adversrios, uma vez que, por no poderem sair ou comercializar, com o passar do tempo, levaria a escasses de alimentos, algo previsvel e que levaria morte de centenas de pessoas vitimadas pela fome ou desnutrio.
Interpretao Iconolgica Os gestos, motivos e expresses deixadas ao longo da criao artstica dos artesos reais no eram meras esculturas. Eles esto carregados de significados, de pensamentos e de ideais. H um reconhecimento da supremacia militar assria. Tal supremacia era endossada pela idia da proteo divina nos combates. Exemplo disto a presena
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Borlas Bola decorativa com franjas ou tufo redondo composto por fios no topo dos mastros.
Choupo rvore da famlia das Salicceas.
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de alguns smbolos religiosos como o detectado no relevo 4. Trata-se de uma pequena figura do deus Aur10, acoplada ao carro de batalha. Tais imagens eram feitas de metal e levadas para as batalhas. Este ato significava que os deuses estavam do lado dos guerreiros assrios. Outro item importante a representao de hierarquia presente nas vestes dos soldados. Alguns soldados usam curtos saiotes na altura dos joelhos, enquanto que as tnicas longas eram peculiares dos oficiais ou dos altos funcionrios assrios. J o rei assrio Assurnasirpal, retratado no relevo 4, aparece vestindo uma longa tnica decorada com ntidos bordados. Estas eram, provavelmente, confeccionadas em l ou linho colorido, amarradas na cintura com um largo cinto e representavam em sua beleza e riqueza de detalhes e cores, a magnificncia da figura do rei, que representado sempre em formato maior, destacando-se do restante dos personagens de uma determinada cena. Esta representao de dimenses maiores perceptvel e corresponde ao significado de Lugal11 dado ao soberano. Esta grandeza est relacionada importncia do rei, e por isso, reconhecido, inclusive na arte assria como um homem maior que todos os outros seres, ou seja, mais forte, corajoso e poderoso. A imagem dos derrotados tambm muito marcante. Eles geralmente so retratados em fileiras, segurando sacos nas costas que indicam o carregamento de pertences, como no relevo 2, por exemplo. Em algumas imagens eles foram retratados com as mos na altura da cabea, como no relevo 4, indicando a tpica mos ao alto dos submetidos fora das armas. Estas imagens indicam, ainda, o
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sofrimento e a tristeza dos cativos pelas conseqncias da derrota, fosse pela perda de seus objetos ou da liberdade, quanto pelos castigos que poderiam receber (MESOPOTAMIA, 2009). Os abutres que aparecem no relevo 4 significam a carnificina que, de uma forma ou de outra, sempre ocorreu nos confrontos militares. vidos por carnia estes animais devoravam os soldados mortos ou os agonizantes estirados pelo territrio da batalha e certamente lavados em sangue. Muitas figuras humanas foram esculpidas sem os membros, sobretudo as cabeas. Esta era uma forma peculiar e cruel dos assrios de contabilizar o nmero de inimigos mortos. A relevncia de cenas como estas, de teor sanguinrio, serem retratadas nos relevos, est relacionada s estratgias polticas e ideolgicas de transmitir, aos possveis adversrios, a mensagem de que o exrcito assrio capaz de abater seus inimigos. Tal procedimento funcionava como uma espcie de propaganda da mquina de guerra assria. O ato de empalar tambm significava uma forma de intimidao aos prisioneiros sobreviventes. No relevo 2, a noo de altitude da fortaleza representada pelo plano inclinado da imagem. J na imagem 3, a possvel elevao das muralhas est caracterizada por uma linha ondulada na qual o carro de guerra retratado em direo aos altos muros. Tambm houve uma preocupao com a profundidade na imagem das muralhas e que foram esculpidas num nvel mais elevado do painel. Esta profundidade d a idia de perspectiva de altitude. As expresses fsicas das imagens falam por si s. Os soldados assrios aparecem fortes e robustos. A musculatura dos soldados minuciosamente esculpida no dorso das pernas e braos, como no exemplo
Aur Denominao de uma divindade suprema do panteo assrio, relacionada com a vegetao. O prefixo Aur foi utilizado no nome de muitos reis da Assria. 11 Lugal Na lngua sumria LUGAL significa, literalmente, o homem grande, isto , o rei.
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ntido dos relevos 3 e 4. Os rostos so representados com semblantes srios e compenetrados no momento da batalha ou enquanto conduzem os cativos deportados, como nos relevos 3 e 4. Os prisioneiros tambm eram retratados com feies de seriedade ou tristeza pela incerteza de seus destinos. No relevo 4 esta perspectiva muito forte na imagem de mulheres cativas com as mos na cabea e levando uma criana consigo, tendo sua cabea afagada por uma das mulheres. Crianas eram retratadas apenas na presena de mulheres. Por sua vez, mulheres apareciam muito pouco em relevos assrios. Nas deportadas h traos mais delicados enquanto no soldado que as escoltam percebe-se o uso da barba, item muito comum na maioria dos homens e, tambm, muito evidente nos soldados, como nos relevos 3 e 4, com exceo dos eunucos. A arte de esculpir relevos no imprio neoassrio, ao mostrar os eventos relacionados com a guerra, retrata, entre outras coisas, a capacidade deste povo em mobilizar recursos econmicos e humanos, como o ilku, por exemplo, para as campanhas militares. A mobilizao de tais recursos explicaria, parcialmente, como este imprio tornouse um dos mais poderosos e belicosos da antiguidade (VILLARD, 1991, p. 42).
de poder hegemnico, era absorvida pelo imaginrio daqueles que conviviam com o soberano e tinham a inteno de transmitir, para alm das fronteiras geogrficas do reino, o poderio blico, com desenvolvimento tcnico e ttico de guerra, capaz de aprisionar, mutilar, sitiar e destruir todo aquele que subestimasse o exrcito imperialista assrio. Neste contexto pertinente salientar a funo poltica e ideolgica dos relevos parietais como um instrumento propagandstico da fora e, consequentemente, da destacada autoridade, autenticidade e respeito com a qual o outro deveria ver o imprio neo-assrio. A representao do outro poderia estar ligada tanto ao inimigo, estrangeiro ou autctone, como aos funcionrios de altos escales dotados de grande poder e influncia. A capacidade de mobilizar recursos blicos para a formao de uma potncia armada estava ligada extraordinria administrao disseminada pelas provncias do imprio. As armas surgem no sculo IX a.C. Neste perodo os cavaleiros ainda combatiam em duplas, enquanto um guiava as rdeas dos cavalos, o outro manipulava o arco de flecha. O condutor do carro e a funo de arqueiro eram posies de prestgio, ou seja, armas nobres por excelncia, tanto que, o soberano, quando era representado em relevos de batalhas, aparecia sempre em alguma destas frentes.
CONSIDERAES FINAIS
A partir desta aproximao as imagens se prestam a reflexes sobre o potencial do imaginrio coletivo. Os relevos, em sua maioria, situavam-se nas salas dos palcios, local de circulao restrita, freqentadas somente pela corte, pelo rei, altos funcionrios e embaixadores estrangeiros. A representao das batalhas, em uma demonstrao
REFERNCIAS
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Anlises comparativas dos acervos de dois stios arqueolgicos histricos e urbanos (Guaba e Porto Alegre/RS)
SIMONE RIBEIRO BOULHOSA1 GISLENE MONTICELLI2 NGELA MARIA CAPPELLETTI3 PRISCILA PEDROSO DIAS4 LISIANE DA MOTTA5 ISABEL CRISTINA GOMES6 JOCYANE RICELLY BARETTA7
RESUMO
O presente trabalho consiste em analisar e comparar as diversas evidncias materiais encontradas durante a realizao das intervenes arqueolgicas que ocorreram em dois locais: no restauro arquitetnico da Casa Gomes Jardim, em Guaba, e nas obras do Conduto Forado lvaro Chaves Goethe, em Porto Alegre, e na apresentao dos resultados parciais da anlise das louas. Palavras-chave: Anlise comparativa, acervos, stios arqueolgicos, histricos e urbanos.
Licenciada em Histria (ULBRA, 2008), Bolsista PROICT/ ULBRA Professora - Orientadora do Curso de Histria/ULBRA e Coordenadora do Laboratrio de Arqueologia e Etnologia (LAE) do Museu de Cincias Naturais (MCN), ULBRA Arqueloga do Departamento de Esgotos Pluviais (DEP), Prefeitura Municipal de Porto Alegre (PMPA) Licenciada em Histria (ULBRA, 2007), Pesquisadora do LAE/
MCN-ULBRA
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Especialista em Memria Social e Identidades (ULBRA, 2007), Pesquisadora do LAE/MCN-ULBRA Acadmica do Curso de Histria /ULBRA, Estagiria do LAE/ MCN ULBRA Acadmica do Curso de Histria/ULBRA, Estagiria do LAE/ MCN ULBRA
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ABSTRACT
This paper is to analyze and compare the various material evidence found during the implantation of interventions that occurred at two archaeological sites: the architectural restoration of the Casa Gomes Jardim in Guaiba, and the works of Conduct Forced lvaro Chaves Goethe, in Porto Alegre, and the presentation of partial results of the analysis of pottery. Key word: Comparative analysis, collections, archaeological sites, historical and urban.
INTRODUO
O presente trabalho consiste em apresentar resultados parciais sobre a anlise dos artefatos obtidos nas pesquisas arqueolgicas realizadas em duas obras. Uma refere-se ao monitoramento arqueolgico do Conduto Forado lvaro Chaves Goethe (Porto Alegre) e a outra a obras do restauro arquitetnico da Casa Gomes Jardim (Guaba). As pesquisas permitiram a obteno de um grande nmero de evidncias materiais como fragmentos de louas importadas e nacionais, fragmentos de vidros, cermicas indgenas, couro, carvo, material construtivo e outros. Este trabalho consiste em analisar e comparar as diversas evidncias encontradas durante a realizao dessas obras. Ambas encontramse encerradas. Apenas a Casa Gomes Jardim ainda funciona como um stio escola, aberto a visitao, onde alunos do curso de Graduao e Ps-Graduao em Histria da Ulbra podem vivenciar a rotina da pesquisa em campo. A casa est situada na regio central do municpio de Guaba (Figura 1). Ela foi construda em 1790, pelo sesmeiro Antnio Ferreira Leito, para servir de sede para sua estncia. Mais tarde, a partir de 1800, a casa torna - se a residncia de
Isabel Leonor Ferreira Leito e de Gomes Jardim, que se casou com a filha de Antnio e passa assim a administrar a fazenda. A residncia ficava localizada no Distrito de Pedras Brancas, pertencente a Porto Alegre at 1926 (hoje municpio de Guaba) e foi a partir dela que a regio comeou a ser colonizada. Existem registros de stios arqueolgicos de grupos caadores coletores e ocupaes de ndios ceramistas Guarani, encontrados no municpio de Guaba. Somase a isto, o fato de que o local onde se encontra a casa est no alto do morro e prximo ao Lago Guaba, ou seja, em posio privilegiada. Ento, se imagina que o lugar tenha servido como habitao, passagem ou acampamento para populaes indgenas em tempos prhistricos (DIAS, 2007, p. 2 apud PROJETO, 2006). A rea serviu de escola e armazm de secos e molhados. Na dcada de 1930, a antiga sede, com a casa e parte do terreno inicial, passou a pertencer famlia Leo. Hoje a casa dividida em duas partes: uma de propriedade do Sr. Gasto Leo, e a outra pertencente a Sra. Tais Leo, sua filha. Durante o sculo XX, acompanhando o processo de urbanizao, o prdio sofreu algumas alteraes em sua fachada, sendo aplicada, por exemplo, uma platibanda, de acordo com o estilo ecltico clssico, e instaladas calhas, atendendo a legislao municipal (PROJETO, 2006).
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Figuras 1 - Fachada da Casa Gomes Jardim antes e depois das obras do restauro.
Gomes Jardim viveu entre 1783 a 1854, era considerado mdico prtico, sem formao acadmica, mas usava de seus conhecimentos homeopticos para tratar os doentes. Foi um personagem de destaque da Revoluo Farroupilha (1835-1845) e o primeiro presidente da Repblica Rio-Grandense. Ele assumiu o lugar de Bento Gonalves, quando o lder esteve preso na Bahia, e organizou a primeira tropa de soldados para invadir Porto Alegre. Atravs da iniciativa e dos esforos da famlia, a casa foi tombada em 1994 pelo Instituto do Patrimnio Histrico e Artstico do Estado/RS (IPHAE), que reconheceu seu valor histrico para cidade e estado. A casa uma das mais antigas construes do municpio e em seu entorno se encontram outros lugares que fazem parte do seu contexto como os restos mortais de Gomes Jardim (que ficam na Praa com seu nome), a Praa e a Igreja Nossa Senhora do Livramento que foi a primeira capela na regio. Assim juntamente com o restauro da casa, foi realizado um acompanhamento arqueolgico com o objetivo de resgatar as evidncias materiais de antigas ocupaes humanas que ali poderiam ser
encontradas e poder avaliar as diferentes ocupaes que naquele lugar estiveram. O responsvel pelo trabalho em campo foi o arquelogo Junior Marques Domiks, juntamente com alunos voluntrios do Curso de Historia da Universidade Luterana do Brasil (ULBRA/Canoas). O monitoramento arqueolgico no Conduto Forado lvaro Chaves Goethe (Porto Alegre) foi implantado pelo Departamento de Esgotos Pluviais (DEP), como um sistema de proteo contra as enchentes e a maior obra de drenagem urbana executada na cidade nos ltimos 30 anos. No passado a cidade sofreu uma srie de graves enchentes, tendo sido a principal em 1941, quando o centro ficou submerso aproximadamente por 30 dias. Houve um monitoramento arqueolgico em todas as escavaes executadas pela equipe da obra, o que totalizou 26 ruas localizadas em quatro bairros divididos em trs lotes (Figura 2). O trabalho consistia em realizar o acompanhamento em cada abertura de sondagem de vala e efetuar o registro e a coleta dos vestgios arqueolgicos evidenciados. Esse monitora-
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mento est vinculado ao Programa de Arqueologia Urbana de Porto Alegre, do Museu Joaquim Jos Felizardo rgo da Secretaria Municipal da Cultura, que possui autorizao do Instituto do Patrimnio Histrico e Artstico Nacional (IPHAN) para as intervenes arqueolgicas na cidade e est sob a coordenao da Arqueloga Fernanda Bordin Tocchetto. Desta forma, a guarda e a curadoria do acervo ficaro. Ao final da pesquisa, sob os cuidados do referido Museu.
Todo o material encontrado durante a realizao do monitorameto foi devidamente identificado e acondicionado, e o trabalho de limpeza, quantificao, catalogao e anlise esto sendo realizados no Laboratrio de Arqueologia e Etnologia da Universidade Luterana do Brasil (ULBRA), em Canoas, atravs de um acordo entre a Prefeitura e o Departamento de Histria da Universidade. A responsvel pelo trabalho de monitoramento nas obras foi a Arqueloga ngela Maria Cappelletti.
Figuras 2 - Monitoramento arqueolgico das obras do Conduto Forado.
O objetivo deste trabalho consiste em analisar e comparar as diversas evidncias encontradas durante a realizao das intervenes que ocorreram nos dois locais e na apresentao dos resultados parciais da anlise das louas. Essas evidncias materiais permitem identificar os diferentes hbitos e costumes da populao que viveu em Porto Alegre, durante os sculos XIX e XX.
MATERIAL E MTODOS
Praticamente todo o material j est limpo e organizado, e neste momento os fragmentos de
louas e vidros passam por anlises individuais. O material arqueolgico da Casa Gomes Jardim se encontra analisado no que diz respeito s louas. J quanto ao material do Conduto Forado, as louas e vidros ainda esto passando por esse processo. Cabe ressaltar que a loua j examinada do Conduto Forado diz respeito a apenas a Rua Santa Rita, que por vez apresentou diferentes categorias de deposio de material arqueolgico, algumas classificadas como reas de Ocorrncia Arqueolgica, outra como stio arqueolgico, devendo assim ser analisada separadamente. A anlise foi individual, ou seja, trabalhouse com cada rea de ocorrncia arqueolgica,
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identificada nessa rua, separada da parte que foi considerada stio histrico. As peas de loua foram classificadas primeiramente pelo tipo de pasta (faiana fina, porcelana, etc.) depois se observou
a possibilidade de colar os fragmentos que faziam parte de uma mesma pea, na seqncia o material foi dividido pelo tipo de esmalte e pelo tipo de decorao.
Figuras 3 - Anlise dos fragmentos de louas.
Posteriormente foram elaboradas fichas de identificao para as peas, nas quais deveriam constar todas as informaes, alm do tipo de pea que se formava, tais como malga, xcara, pires, prato, etc. Atravs dessas anlises, foi possvel identificar suas decoraes, perodos de fabricao e at mesmo as marcas dos fabricantes e pas de origem. Com relao s louas encontradas na Casa Gomes Jardim, a maneira de se trabalhar foi diferente, pois a escavao ocorreu atravs de quadrculas. Assim tivemos a oportunidade de analisar o material arqueolgico de forma unificada. Deste modo, vrios fragmentos puderam ser reunidos, enquanto outros no foram identificados. O objetivo era tentar reunir e identificar o maior nmero de fragmentos que fizessem parte de uma mesma pea. Aps o exame de ambos os materiais, foram preenchidas as fichas de anlise para a contagem e identificao desse material.
Durante as anlises e comparaes realizadas, foram encontrados vrios tipos de louas com tcnicas e decoraes semelhantes nos dois trabalhos. Em ambos os acervos as decoraes com o Padro Trigal, o Transfer Printing e o Decalco estavam presentes (Figura 4). Com relao ao Padro Trigal, durante as pesquisas foram identificadas tanto marcas nacionais quanto marcas importadas. Alm disso, destacam-se algumas marcas, como as inglesas W & E. Corn, produzida entre 1890 e 1903 (KOVEL, 1996) e Johnson & Bros, cuja datao do carimbo da marca ainda no foi encontrada. No momento os trabalhos esto concentrados na investigao da origem da tcnica decorativa com a utilizao do Estncil. Esta tcnica consiste na pintura das superfcies das louas tanto interna quanto externamente utilizando-se um molde vazado.
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Considera-se que esta tcnica de decorao para louas de mesa tenha sido uma criao das fbricas nacionais do sculo XX. Em diferentes pesquisas no se verificou, at o presente momento, a ocorrncia de louas com marcas de fbricas estrangeiras com essa tcnica decorativa. Pelo contrrio, as marcas de fabricantes, quando aparecem, so sempre nacionais (BOULHOSA et al, 2008). Sabemos que no incio da produo nacional de louas de mesa, imitavam-se as tcnicas decorativas, os padres e motivos, sobretudo, das fbricas europias, como o Transfer Printing, o Decalco e o Trigal, entre outros. Esta investigao ainda est em fase inicial. A informao j obtida indica que os motivos deco-
rativos apresentados nessas louas (na maioria dos casos, florais, mas tambm geomtricos) tiveram inspirao em revistas de poca, como foi relatado em estudo sobre a fbrica Rio Branco, da cidade de Campo Largo, Paran, segundo pesquisa realizada por Carviquiolo e Kistmann (2007). A presena da tcnica de decorao Estncil, do sculo XX, uma evidncia comum entre os dois acervos. Alm disso, podemos destacar outros tipos de materiais tambm encontrados como as pastas Ironstone, Porcelana, e a loua com pasta vermelha e utilizada em piquenique (SCHVELZON), no muito comum devido ao nmero de peas encontradas em ambos os acervos, alm da faiana portuguesa, loua encontrada apenas na Casa Gomes Jardim.
Figuras 4 - Detalhe das tcnicas Transfer Printing e Estncil.
CONSIDERAES FINAIS
As anlises das louas da Casa Gomes Jardim j foram concludas. Ainda necessrio a finalizao das anlises das louas do Conduto Forado lvaro Chaves, alm disso, devemos ressaltar que as louas so apenas uma parte do projeto a ser realizado. Faltam ainda ser realizadas s anlises
dos demais materiais como o vidro, os metais, ossos, entre outros. Podemos dizer que essa anlise nos forneceu uma pequena parte de algumas informaes sobre o modo de vida e de consumo da populao na poca, em ambas as margens do lago Guaba nos sculos XIX e XX, e que ainda sero complementadas no final das anlises.
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AGRADECIMENTOS
Agradeo a PROICT/ULBRA pela bolsa de Iniciao Cientfica; a professora Gislene Monticelli, pela orientao e oportunidade de iniciao na pesquisa, pelo incentivo e pela liberdade de trabalho; a arqueloga ngela Maria Cappelletti, pela pacincia, pela disposio de dividir seus conhecimentos, por todo o apoio; as minhas amigas Priscila Pedroso Dias, Isabel Cristina Gomes, Lisiane da Motta e Jocyane Ricelly Baretta, pela grande colaborao e auxlio durante as pesquisas e, finalmente, aos colegas do Curso de Histria, que passaram pelo LAE durante esse ano de 2008 e que apiam o trabalho que realizamos.
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Educao de Jovens e Adultos: investigao sobre os processos de fatorao numrica e algbrica
LUIZ EDUARDO CORNELIO1 OCSANA SNIA DANYLUK2 CARMEN HESSEL PEIXOTO GOMES3 MAGDA INS MOREIRA4
RESUMO
Na educao de Jovens e Adultos (EJA) do Ensino Mdio, geralmente os estudantes encontram dificuldades na decomposio de um nmero em fatores, impedindo-os de identificar os mltiplos e de divisores de um nmero. O mtodo de Fermat para fatorar nmeros usando a diferena entre dois quadrados nos motivou a investigar os processos de fatorao em classes de EJA. O objetivo desta pesquisa analisar a compreenso dos estudantes sobre fatorao numrica usando o baco, e sobre fatorao algbrica usando o mtodo de Fermat. A pesquisa de cunho essencialmente qualitativo e o mtodo utilizado o fenomenolgico-hermenutico. Os sujeitos da pesquisa tm idade entre 18 e 43 anos, sendo que os resultados parciais mostram que os estudantes da classe pesquisada desconheciam o significado de fatores. Entretanto, constata-se que os mais jovens conseguiram, sem dificuldades, realizar a decomposio de um nmero em fatores. Palavras-chave: Educao de Jovens e Adultos, mtodos de ensino, processos de fatorao, mtodo sistemtico de Fermat, baco.
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Acadmico do Curso de Matemtica - Licenciatura Plena/ UPF Professora do Curso de Matemtica - Licenciatura Plena/ UPF
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Professora do Curso de Matemtica - Licenciatura Plena/ UPF Professora do Curso de Matemtica - Licenciatura Plena/ UPF
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ABSTRACT
In the education of Youth and Adults (EJA) of high school, students often encounter difficulties in the decomposition of a number of factors, preventing them from identifying and dividing multiples of a number. The method for factors of Fermat numbers using the difference between two squares in motivated to investigate the process of factorization in classes of EJA. The objective of this research is to analyze the students understanding of numerical factorization using the abacus and on algebraic factorization using the method of Fermat. The research is mainly qualitative in nature and the method is the phenomenological-hermeneutic. The research subjects are aged between 18 and 43 years, and the partial results show that students know the class investigated the significance of factors. However, it appears that younger people have, without difficulty, perform the decomposition of a number of factors. Key words: Adult and youth education, teaching methods, processes factorization, systematic method of Fermat; Abacus.
INTRODUO
Quando se fala em fatorao numrica ao estudante da 5a srie do ensino fundamental, normalmente no conseguimos remet-lo situao de quando ele aprendeu a operao de multiplicao. Desse modo, para muitos deles o significado de fatorao parece desconhecido e, por conseqncia, o significado da palavra fator lhes estranho e, ainda, que os nmeros primos causam confuso. Caso essas relaes no sejam realizadas fica a impresso de que aquilo que aprenderam no passado no importa. No entanto, essa discusso necessria, pois, do contrrio, muitos conceitos so abandonados e esquecidos, causando assim grandes prejuzos aprendizagem matemtica. Nas primeiras sries do ensino de matemtica os estudantes aprendem o que fator. Quando aprendem a tabuada, que continua sendo tabuada na cabea dos estudantes de muitas classes escolares, os termos da operao so multiplicados, ou seja, o multiplicando e o multiplicador, so denominados fatores. Na maioria das vezes, no entanto, no levado em conta nem pelo professor e nem pelo
estudante a importncia dos termos da operao realizada; ou seja, no ressaltada a linguagem matemtica, ficando assim os termos multiplicando, multiplicador ou fatores sem sentido e significado para o estudante. Desse modo, a linguagem matemtica, bem como a compreenso do tema ficam relegados ao esquecimento. Por outro lado, o modo como muitas vezes ensinado ao estudante tambm faz com que este no relacione o ensinamento a outro que vir mais tarde na construo da matemtica. Por isso, entendemos que os jovens e os adultos, os sujeitos de nossa pesquisa, tiveram dificuldade em responder o que fator, no compreendendo que fatorar um nmero encontrar uma multiplicao de nmeros da qual resulte o nmero a ser fatorado. Para ns professores de matemtica simples: 50 = 25 x 2; 144 = 12 x 6 x 2 ou ento, que 144 o mesmo que: a)122 ou seja 12 x 12 Ou ainda: b)2 x 2 x 2 x 2 x3 x 3 = 24 x 32
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Em b temos fatores primos que mostram a decomposio multiplicativa de 144. Para Rodrigues Neto (2009, p.1), a fatorao um recurso usado para auxiliar e estudar melhor os nmeros com o objetivo de aperfeioar o clculo. Dessa forma, ao invs de termos um contedo onde os estudantes no vem sentidos e nem significado, podemos transformar em nossas salas de aula a fatorao num conhecimento fcil e divertido, sendo apreendido com significado e tendo aplicaes em vrios outros assuntos matemticos. Estes so elos necessrios para que os estudantes percebam o significado dos contedos que esto aprendendo. Ao fatorar um nmero qualquer, geralmente, o estudante no chega a perceber que est realizando o exerccio de transformar um nmero diferente de zero, em uma operao de multiplicao, com pelo menos dois fatores. Em palavras simples, o estudante poderia lembrar a fatorao, que vem da multiplicao e vem de transformao de nmeros em fatores. Quando bem compreendido pode ser um excelente recurso mental, ou de jogo de clculo mental. Segundo Rodrigues Neto (2009, p.1): se os nmeros no forem primos podero ser transformados em multiplicao de outros dois nmeros, permitindo a construo de um jogo de clculo mental. Diante do que estamos expondo ficam as indagaes: Porque nossos estudantes, desde a segunda srie do ensino infantil e aps na sexta e stima sries do ensino fundamental e, ainda, no ensino mdio e na educao de jovens e adultos, no conseguem lembrar, ou melhor, construir esse conhecimento? Por que no identificam que fatorar transformar nmeros em multiplicao? Por que esquecem que fatorar um nmero escrev-lo na forma de multiplicao ou potenciao, na condi-
o de que os fatores ou as bases sejam nmeros primos? Dessa forma, esse mtodo nos motivou a investigar os processos de fatorao em classes de EJA, e assim nossa questo norteadora inicial foi: estudantes da EJA conseguem compreender a fatorao de nmeros mpares usando o baco e o mtodo sistemtico de Fermat? A motivao inicial da pesquisa originou-se de uma proposta de trabalho realizada na disciplina de Metodologia do Ensino da Matemtica, na qual os alunos foram instigados a buscar diferentes metodologias para a prtica de ensino. Os resultados da proposta em sala de aula foram positivos, levandonos criao deste projeto de pesquisa. A pesquisa, portanto, tem por objetivo analisar a compreenso dos estudantes de EJA sobre fatorao numrica usando o baco, e sobre fatorao algbrica usando o Teorema de Fermat. Sabe-se que na Educao de Jovens e Adultos (EJA) do Ensino Fundamental e Mdio os estudantes geralmente encontram dificuldades na decomposio de um nmero em fatores, talvez por no compreenderem tanto o significado da palavra fatorar quanto os algoritmos usados para o processo de fatorao. Disto decorre a no identificao de mltiplos e divisores de um nmero e, conseqentemente, dificuldades para operar com a multiplicao. As dificuldades so ainda maiores medida que avanam nas sries e comeam os estudos da lgebra, onde muito forte a presena da linguagem matemtica que, sendo simblica, se torna subjetiva. comum a apresentao inadequada da linguagem matemtica em sala de aula, quando o professor usa, essencialmente, o uso de smbolos e termos
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tcnicos especficos da rea sem preocupar-se em trabalhar a compreenso dos mesmos. Deixando de clarear os seus significados, consegue um efeito contrrio: dificulta o processo de aprendizagem em matemtica. Assim, no fcil compreender os processos de fatorao de expresses algbricas. Na Educao de Jovens e Adultos, mais do que em outras modalidades de ensino, os conhecimentos j trazidos pelos estudantes costumam ser diversificados e, em alguns casos, encarados, por equivoco, como obstculos aprendizagem. Tomase com isso que, o ponto inicial para a construo dos novos conhecimentos matemticos parte dos conhecimentos j adquiridos pelos estudantes.
Ultimo Teorema de Fermat, ficando em aberto por mais de 350 anos. Ao longo destes anos, muitos matemticos dedicaram suas carreiras tentativa de provar este teorema, sendo que o matemtico Andrew Wiles conseguiu prov-lo em 1995. Estudando a histria do Ultimo Teorema de Fermat, encontramos um mtodo sistemtico baseado na procura de nmeros x e y tais que:
N = x 2 y 2 = (x + y )(x y ) , sendo N o nmero a ser fatorado. Todos os nmeros primos podem ser encaixados em duas categorias: aquelas que so iguais a 4n+1 e aqueles que so iguais a 4n-1, onde n igual algum nmero. Para Fermat isso era mais uma de suas demonstraes secretas, sendo que Euler, um dos maiores matemticos do sculo XVIII, foi desafiado a reconstruir essa demonstrao. Aps sete anos de trabalho, em 1749, quase um sculo aps a morte de Fermat, Euler obteve sucesso provando o teorema de Fermat para os nmeros primos. Podemos considerar que, a partir da curiosidade de Fermat, outros matemticos tiveram despertada a necessidade de gerar a construo dos nmeros primos. Pierre de Fermat nasceu em 20 de agosto de 1601 na cidade de Beceumont de Lamagne na Frana. Seu pai era um rico mercador de peles e desse modo Fermat pode receber uma educao privilegiada no monastrio franciscano de Grandselve, graduando-se, posteriormente, em Direito pela Universidadede Toulouse (Singh, 2005, p.55). curioso afirmar que enquanto jovem e mesmo aps adulto Fermat no foi um matemtico, o fato que ele gostava de resolver exerccios matemticos. No h registro algum de que, quando jovem, mostrasse qualquer talento para a matemtica. A profisso de Fermat, na verdade, foi de ser-
A CURIOSIDADE DE FERMAT E OS NMEROS PRIMOS

Fermat, por volta de 1637, criou uma equao semelhante ao Teorema de Pitgoras, que por sua vez no tinha soluo. No lugar de considerar a equao de Pitgoras x + y = z , Fermat modificava as potncias da equao, no obtendo uma soluo para qualquer nmero inteiro. Assim, ele alterou ainda mais a equao, trocando as potncias para nmeros maiores que trs, constatando que em parte alguma do infinito universo dos nmeros existia um trio de nmeros que se encaixassem perfeitamente em sua equao:
2 2 2
x n + y n = z n , onde n representa nmeros inteiros positivos maiores ou iguais a trs. Fermat, que afirmava ter a demonstrao para este resultado, acabou morrendo sem divulgar sua soluo. Este problema ficou conhecido como O
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vidor pblico, sendo que em 1631 foi nomeado conselheiro na Cmera de Requerimentos, na qual prestaria servios ao juiz, desenvolvendo todas as suas atribuies de modo eficiente. Com o fato de chamar a ateno para si mesmo, pois no tinha grandes ambies polticas, evitou disputas no parlamento. Dedicava todas as suas energias, nas horas vagas, matemtica, que era seu hobby. No sculo em que Fermat tinha como profisso a funo pblica e amadoria pela matemtica, os matemticos no eram respeitados e no tinha prestgio. A nica instituio que encorajava o estudo de matemtica na Europa era a Universidade de Oxford. Galileu buscou um professor particular. J Pascal, Beamgrand e o padre Marin Mersenne formavam um grupo que conseguiu estudar, sendo esse ltimo o responsvel por avanos nessa cincia. Quando o padre Mersenne chegou a Paris lutou contra a questo do sigilo na matemtica, ou seja, tentou encorajar os matemticos a trocarem idias uns com os outros. Apesar dos esforos do padre Mersenne, Fermat se recusava a revelar suas demonstraes e Descartes acabou a amizade com o padre. Porm isso no fez com que o padre desistisse de continuar divulgando as ltimas descobertas pelo exterior. Apesar dos esforos do padre Mersenne, a publicao e o reconhecimento pblico nada significaram para Fermat. No decorrer da histria possvel verificar que: O gnio tmido e retrado tinha um toque travesso, o qual, combinado com o sigilo, levava-o a comunicar-se com outros matemticos unicamente para ganhar deles. Fermat escrevia contas enunciando seu mais recente teorema, sem fornecer a demonstrao (SINGH, 2005, p.58)
Sendo assim, muitos matemticos viam Fermat como amador, brincalho, Descartes o chamou de fanfarro e John Walluis se referia a ele como aquele maldito francs. Fermat parecia se divertir com a matemtica e com os matemticos. Fermat dedicou-se aritmtica devido o contato com livros sobre a teoria dos nmeros. Um deles apresentava cerca de mil problemas e solues; conhecimentos obtidos por Pitgoras e Euclides. Relata Sing (2005, p76) que Fermat, ao resolver os problemas de Diofante: [...] limitava-se a escrever o que achava necessrio para convencer a si mesmo de que tinha uma soluo [...] no se importava em registrar o resto da demonstrao. Frequentemente atirava suas anotaes no lixo e passava para o problema seguinte.
MATERIAL E MTODOS
Esta pesquisa tem cunho essencialmente qualitativo e o mtodo escolhido o fenomenolgicohermenutico. Percebemos que esse aporte metodolgico fornece elementos substanciosos para um pensar rigoroso que interage com a subjetividade humana presente no processo de educao. Pereira (2002, p.34) descreve que: O pesquisador pe-se frente ao fenmeno com um olhar hermenutico, um olhar que busca no se ater a uma interpretao da estrutura textual do discurso emitido por aquele ser, o qual vivenciou ou vivencia o fenmeno, mas avana na tentativa de encontrar o significado do discurso no prprio universo de onde este surgiu, confrontando esse significado com suas prprias vivncias,
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luz do que tambm seu real vivido, trazendo, para isso elementos de sua histria e tradio. Dessa forma, elegemos a abordagem fenomenolgica-hermenutica para esta pesquisa, partindo daquilo que os estudantes sabem e de como eles compreendem os contedos, para lev-los ao conhecimento formal. A observao do fenmeno foi feita em uma escola de ensino fundamental de EJA, onde estudantes e professores estavam em atividades de ensino e aprendizagem. Os encontros foram gravados e, posteriormente foram transcritos, na ntegra, servindo de material de anlise. Desta atividade surgiram as unidades de significado e as categorias abertas que nos levaram s consideraes finais da pesquisa. Para a coleta dos dados utilizamos materiais elaborados pelo grupo de pesquisadores como as fichas de trabalho, o baco e argolas de plstico para fazer a representao dos nmeros a serem fatorados, alm dos materiais de uso dirio que se encontram na sala de aula. Os sujeitos da pesquisa tinham idade que variavam entre 18 e 43 anos. Foram realizados quatro encontros semanais no Instituto Estadual de Educao Cardeal Arcoverde, em Passo Fundo (RS), numa turma de EJA do primeiro ano do Ensino Mdio, no 2 semestre de 2008. Registramos todos os encontros, com reflexes dirias, e as descries e escritas dos estudantes serviro para anlise e interpretao da pesquisa.
Ex: Vamos encontrar os fatores do nmero 33. Para fatorar este nmero preciso distribuir as argolas da esquerda para direita comeando com uma argola no primeiro lugar, adicionando duas a mais nos lugares posteriores assim como mostra a Figura 1, que elaboramos para o projeto:
Figura 1 - Demonstrao do mtodo de fatorao no baco.
- Podemos observar na Figura 1 que o sexto lugar do baco deveria conter onze argolas ao invs de oito, por isso devemos complet-lo, remanejando as trs primeiras argolas do primeiro e segundo lugar, como podemos ver na Figura 2.
Procedimentos: - Fatorar um nmero impar no primo usando argolas e o baco.
Figura 2 - Demonstrao do mtodo de fatorao no baco (Passo 7).
- Agora retiramos as argolas dos trs primeiros lugares seguindo a mesma idia de antes (Figura 3).
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RESULTADOS
Percebemos, inicialmente, que os estudantes do 1 ano do Ensino Mdio de EJA desconheciam o significado de fatores. Usavam os termos diviso, separao, multiplicao e at aperfeioamento. Os mais jovens, no entanto, conseguiram realizar as tarefas sem dificuldades. A maioria dos estudantes decompe os nmeros tanto no baco quanto na escrita, sem anotar as regras do processo de fatorao numrica. Ao trabalhar com o baco e as argolas para decompor os nmeros sugeridos, como o 15, o 21, e o 33 em fatores, os estudantes realizaram as tarefas com facilidade, o que os instigou a realizar a fatorao de nmeros com mais de trs ordens, sendo que no baco isso seria invivel. Partindo dessa questo levantada pelos estudantes, podemos afirmar a existncia de um mtodo sistemtico de fatorao de nmeros mpares, sendo este mtodo utilizado por Fermat para fatorar o nmero 100895598169, desafio proposto pelo matemtico Mersenne, em 1643. A fatorao a partir deste mtodo sistemtico ser trabalhada no prximo semestre.
Figura 3 - Demonstrao do mtodo de fatorao no baco (Passo 8).
- Logo encontramos uma configurao onde a quantidade de argolas no lugar central do baco corresponde a um dos fatores e o nmero de lugares com argolas sendo o outro fator. Dessa forma temos: 11 argolas no elemento central, e 3 lugares contendo argolas. Portanto 33 = 11x3 Esses procedimentos foram realizados com nmeros de, no mximo 2 algarismos. Para fatorar nmeros com mais de dois algarismos os alunos utilizaro o mtodo sistemtico de Fermat. A idia central do mtodo de Fermat comear com x igual ao menor inteiro maior ou igual a N e calcular x 2 N . Se o resultado for um quadrado perfeito, o problema est resolvido. Caso contrrio repete-se o processo, sucessivamente, para os nmeros x+1, x+2,..., at encontrar um quadrado perfeito, conforme o exemplo da Tabela 1.
Tabela 1 - Demonstrao do mtodo de Fermat para o nmero 407.
CONSIDERAES FINAIS
Fermat no foi um matemtico, o que ocorreu que ele gostava de resolver exerccios matemticos. De certo modo, podemos conjecturar que ele, o grande admirador dos nmeros, realmente poderia ter contribudo muito mais com a matemtica e com os matemticos. Podemos tambm pensar que a ele no importava registrar suas descobertas e deix-las para outras geraes ou matemticos,
x 21 22 23 24
x - N 441 407 = 34 (no quadrado perfeito) 484 407 = 77 (no quadrado perfeito) 529 407 = 122 (no quadrado perfeito) 576 407 = 169 = 13
Ento, 407 = 24 - 13 = (24 +13).(24 -13) = 37.11
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pois talvez ele apenas se divertisse como se estivesse fazendo palavras cruzadas. A investigao mostrou que o mtodo de fatorao a partir do baco pode contribuir para a compreenso do significado de fatorao e que, em classes de EJA, importante a utilizao de estratgias metodolgicas mais dinmicas que propiciem a construo de significados. Ao consideramos as dimenses curriculares para uma formao matemtica na Educao de Jovens e Adultos, no se pode pensar em um processo de ensino-aprendizagem da matemtica fora do contexto cultural, declarando-a como absoluta, abstrata e universal. Essa viso seria a principal razo para a alienao e os fracassos da maioria dos estudantes nessa disciplina, considerando-se jovens e adultos que j abandonaram a escola muitas vezes, por haverem nela fracassado. Na continuidade do trabalho, investigaremos as compreenses que os estudantes conseguiro obter a respeito das expresses algbricas usando o mtodo sistemtico de Fermat.
especial, aos alunos da turma de EJA no qual foi aplicado o projeto; e equipe diretiva da escola, que possibilitou tal experincia.
REFERNCIAS
CRUSIUS, M. F.; DANYLUK, O.; GOMES, C.H.P . Sistema de numerao e operao em diversas bases. Passo Fundo: Grfica Editora UPF, [s.d.]. DANYLUK, O.S. (Org.). Educao de adultos: ampliando horizontes de conhecimento. Porto Alegre: Editora Sulina, 2001. PEREIRA, L.H.F. Teorema de Pitgoras: lembranas e desencontros na matemtica. Passo Fundo: Editora UPF, 2002. RODRIGUES NETO, A. Fatorao: transformando os nmeros em multiplicao. Disponvel em: <http:://educao.uol.com. br/matemtica/fatorao.jhtm> Acesso em fevereiro de 2009. SAMPAIO, F.A. Revista do Professor de Matemtica. So Paulo: Sociedade Brasileira de Matemtica, 2004. SINGH, S. O ltimo Teorema de Fermat. 11.ed. Rio de Janeiro: Record, 2005.
AGRADECIMENTOS
Agradecemos Escola Estadual de Ensino Fundamental e Mdio Cardeal Arcoverde, em
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Personalidade criminal: do ato de matar ao requinte de crueldade
PAULA CANANI1 UREA ADILES MACHADO DOS SANTOS2 ANDREA BERNARDES LOPES3 SHEILA COITINHO DE ANDRADE4 CARMEM ARISTIMUNHA DE OLIVEIRA5
RESUMO
O presente estudo objetivou identificar as caractersticas semelhantes de personalidade em homicidas simples e qualificados. Realizou-se uma pesquisa de cunho quantitativo descritivo, com 9 sujeitos do sexo masculino condenados por homicdio simples, e 10 sujeitos do sexo masculino condenados por homicdio qualificado e cumprindo pena no Presdio Central de Porto Alegre, utilizando-se um questionrio sociodemogrfico e o CPS Escalas de Personalidade de ComRey (2003). A personalidade dos homicidas simples e qualificados diferiu de maneira estatisticamente significante na Escala O: Ordem versus Falta de Compulso, e a anlise revelou que os homicidas simples so indivduos cuidadosos, meticulosos, ordeiros e muito organizados, que se preocupam com limpeza e apreciam a rotina. Palavras-chave: Personalidade; homicidas simples; homicidas qualificados.
1 2 3
Acadmica do Curso de Psicologia Bolsista PROICT/ULBRA Acadmica do Curso de Psicologia pesquisadora voluntria Acadmica do Curso de Psicologia pesquisadora voluntria
4 5
Acadmica do Curso de Psicologia pesquisadora voluntria Professora - Orientadora do Curso de Psicologia/ULBRA (aristimunha@uol.com.br)
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ABSTRACT
The present study has as its purpose to identify similar characteristics of personality between murderers simple and qualified. A research of qualitative descriptive cue, with 9 subjects of the masculine sex condemned for simple homicide, and 10 subjects of the masculine sex condemned for qualified homicide and serving time at the Central Penitentiary of Porto Alegre, being utilized a social and demographic quiz and the CPS Comrey Personality Scales (2003). The personality of the simple and qualified murderers differed in statistics considerably on Scale O: Order versus Lack of Compulsion, and analysis revealed that the simple murderers are careful, meticulous, and very organized individuals, worried about cleanness and very fond of routine. Key words: Personality; simple murderers; qualified murderers. Teixeira (2004) refere que na dcada de 1990 os homicdios assumiram o primeiro lugar entre as mortes resultantes de causas externas (quase 40%). Entre 1990 e 2000, os homicdios foram responsveis por 401.090 bitos. J em 2001 registrou-se 46.685 homicdios, a maior parte causada pelo uso de armas de fogo (71,5%). Embora a letra da lei seja clara no sentido de punir com rigor delitos desta natureza, h quem acredite na possibilidade de ressocializao desses indivduos e defenda o retorno deles sociedade. No entanto, uma disciplina puramente normativa e sistemtica como o Direito Penal necessita de complementao de outras disciplinas, como a Psicologia, que identifique as causas do problema e atue preventivamente. Entre as ferramentas disponveis, acredita-se que a determinao das caractersticas de personalidade do criminoso que capaz de cometer crimes cruis possa servir para o implemento de programas de preveno criminalidade e para a prpria Criminologia. nesta perspectiva que o presente trabalho se inscreve, objetivando verificar a existncia de caractersticas semelhantes de personalidade entre sujeitos que cometeram crimes com requinte
INTRODUO
Atualmente, um dos problemas sociais mais graves, no Brasil, o aumento da violncia. Diariamente, um nmero considervel de cidados brasileiros se v diante da incerteza de que voltaro para seus lares no final da jornada de trabalho. De um lado, o perigo iminente do criminoso nas ruas, ou espreita para um seqestro relmpago, e, de outro lado, o perigo velado do trnsito, do motorista embriagado que vitima crianas na calada, ou do imprudente que se mata e leva com ele dois ou trs inocentes. Nesse contexto, no exagero afirmar que os crimes hediondos povoam no apenas as mentes, mas enchem os olhos dos brasileiros de horror diante do noticirio dirio da televiso ou das pginas dos jornais. Neste contexto, fcil entender porque a Constituio Federal de 1988 definiu como inafianveis e insuscetveis de graa ou anistia os crimes considerados hediondos. Embora os Estados Unidos sejam, tradicionalmente, formadores de personalidades perturbadas, capazes de cometer crimes inominveis, principalmente os praticados por crianas, o Brasil no fica atrs nesse ranking mundial de violncia.
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de crueldade, ou seja, homicdio qualificado, que elencado como crime hediondo, e sujeitos que cometeram homicdio simples. Dentre os crimes contra a vida, o Cdigo Penal brasileiro (CP) tipifica homicdio no artigo 121 como matar algum, qualificando-o em trs dimenses: privilegiado, quando cometido por motivo de relevante valor moral ou social, ou sob domnio de violenta emoo aps injusta provocao da vtima; culposo, quando o indivduo realiza ao imprpria que cria certa margem de risco e perigo aos interesses de outrem (negligncia, imprudncia, impercia); e qualificado, quando o xito letal da vtima desejado por motivos particulares (mercenrio, torpe ou ftil), com a utilizao de meios e modos de execuo para tal. Neste ltimo tipo de homicdio, agregam-se circunstncias que elevam e intensificam a reprovabilidade do crime e evidenciam a ao intencional do autor, ou seja, que o agente quis o resultado morte ou assumiu o risco de produzi-lo (DEL PINO e WERLANG, 2008). O comportamento violento e criminal tem persistido como um significativo problema de sade pblica em nvel internacional e nacional. Os resultados da violncia auto-infligida, interpessoal e coletiva em nveis mundiais representaram uma taxa de mortalidade no ano de 2000 de 28,8 por 100.000 habitantes (DEL PINO e WERLANG, 2006). Krug, Dahlberg e Lozano (2003) informam que cerca de 520.000 destas mortes foram por homicdio. No Brasil, as taxas de violncia fatal, em especial homicdio, foram as que apresentaram maior crescimento (109%) nas dcadas de 1980 e 1990. Na regio sul do pas, os ndices de homicdio atingiram 21,8% em 1998, como constataram Souza, Reis e Minayo (2002). Del Pino e Werlang (2006) afirmam que, em Porto Alegre e na regio metropolitana, a
porcentagem de mortes por causas violentas vem avanando gradualmente nos ltimos anos. Os nmeros de bitos por homicdio em 2002 foram de 950 pessoas, e destas, 429 aconteceram na capital (DIPLANCO, 2003). Existe um consenso generalizado em considerar que a preveno do delito constitui um objetivo importante do sistema penal. Afirma-se com freqncia que melhor prevenir o crime do que reprimi-lo. De forma mais concreta, quase todos os especialistas na matria estimam que a preveno do delito representa se no a principal funo, pelo menos uma das funes mais importantes e tradicionais da polcia (CAFEZEIRO JNIOR, 2007). Para Aguiar (2008), no Brasil, os condenados por qualquer crime so vistos pelo Estado da mesma forma que um passageiro de avio v a floresta abaixo, ou seja, de modo absolutamente homogneo. O princpio da individualizao da pena freqentemente esquecido nas penitencirias, sendo comum o tratamento igualitrio de pessoas com personalidade e condutas absolutamente dspares. Outro problema grave da poltica criminal vem de nossos intelectuais, que, embebidos na doutrina de Rousseau do bom selvagem, acreditam piamente que no h ningum bom ou mau; h simplesmente pessoas que foram contaminadas pela sociedade. No h, de acordo com esse ponto de vista, nada inato pessoa, nem nada que seja de sua responsabilidade. Existe apenas uma culpa difusa de algo que no existe de fato: a sociedade. A culpa dos crimes torna-se to diluda que, na prtica, ningum , de fato, culpado (AGUIAR, 2008). Sidou (1996) refere crime como ato ou efeito de criminar, ou incriminar, como infrao penal a que a lei comina pena de recluso ou de deteno, isolada, alternativa ou com pena de multa.
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Feu Rosa (1995, p. 35) apresenta definio de homicdio que ele chama de moderna como sendo a destruio culpvel e antijurdica da vida de um homem por outro homem. J o homicdio, como refere Albergaria (1988), um crime cometido por agressividade e por reao primitiva, ou seja, como expresso de um estado crnico de tenso ou excitao, como vingana ou dio acumulado. Esse autor considera a agresso no comportamento homicida a partir do agente agressor, para depois examinar o agente agredido e, finalmente, obter uma viso, a partir de um observador, ou de um terceiro. O fenmeno homicida contribuiu para revelar caractersticas da conduta humana, quando fatores biolgicos, psicolgicos e sociais influenciam todo o processo. O crime de homicdio simples ou qualificado caracterizado pela censurabilidade ou perversidade do agente, o que traduz a crueldade do comportamento (OLIVEIRA e GONALVES, 2007, p. 2). Homicdio qualificado consiste em matar algum mediante paga ou promessa de recompensa, ou por outro motivo torpe, por motivo ftil, com o emprego de veneno, fogo, explosivo, asfixia, tortura ou outro meio insidioso ou cruel, ou de que possa resultar perigo algum, cometido traio, de emboscada, ou mediante dissimulao de outro recurso que dificulte ou torne impossvel a defesa do ofendido, ou para assegurar a execuo, a ocultao, a impunidade ou a vantagem de outro crime (MONTEIRO, 1999, p. 54). Neste ponto entende-se ser importante focalizar-se as idias relacionadas personalidade homicida, apresentadas pelos autores revisitados.
Personalidade um conceito complexo que se completa no indivduo adulto em sintonia com a norma cultural, social e tnica em que vive (CMARA, 2001). Para Svrakic e Cloninger, (2005), a personalidade se desenvolve por meio de interaes de predisposies hereditrias e de influncias ambientais. Todos os indivduos possuem um conjunto de pressupostos individuais e de valores, um repertrio pessoal de emoes, com formas tpicas de lidar com elas, e modos caractersticos de comportamento, especialmente nas relaes pessoais (KIPPER, 2007). Oliveira e Gonalves (2007) referem que no possvel afirmar que exista uma personalidade homicida, porm inquestionvel que os homicidas apresentam caractersticas psicolgicas e/ou de atuaes comuns. Salienta-se que os atos delituosos estariam relacionados com os processos da personalidade ao nvel da construo de significados e de valores da realidade, alm das opes de relacionamento da pessoa com essa realidade (MASSONI et al., 2005). Historicamente, j no clssico Cesare Lombroso (1983, p. 189) encontra-se o interesse pelo estudo de caractersticas comuns aos criminosos, preocupado com o comportamento do homem considerado delinqente, atravs da anlise de suas aes. Em sua obra L uomu Delinqente, o autor frisa que o estudo antropolgico sobre o homem criminoso deve necessariamente basear-se nas suas caractersticas anatmicas. Lombroso encontrou no criminoso, em sentido natural-cientfico, uma variedade especial de homo sapiens caracterizada por sinais (stigmata) fsicos-
200
psquicos. Constatou nas formas cranianas os estigmas que caracterizariam o criminoso nato, e, assim, pde enumerar: a sensibilidade dolorosa diminuda, crueldade, leviandade; averso ao trabalho, instabilidade, vaidade, tendncia a supersties e precocidade sexual. Encontrou, na relao entre a epilepsia e a chamada moral insanity, as caractersticas para distinguir os pseudo criminosos, os ocasionais e passivos (FERNANDES, 1995). Nas concluses de sua doutrina, de muito interesse para a Poltica Criminal, a sociedade teria o direito de proteger-se do tipo criminoso, condenando-o priso perptua e, como medida de seleo, morte. Assim, classificou os criminosos em nato; falso delinqente, ou pseudo delinqente, ou delinqente ocasional; e criminalide, classificao ou conceito exclusivamente lombrosiano, que se refere existncia do meio delinqente, assemelhado ao meio louco, chamado de fronteirio. Ainda, Almeida (1999), mesmo com a subsistncia de crticas e limitaes, dividiu os homicidas em nove grupos, de acordo com a avaliao de suas caractersticas de personalidade, que incluem: o autocontrole, a impulsividade, a ligao com o meio, os antecedentes criminais e prisionais, o contexto de passagem ao ato, bem como a carga emocional, a premeditao, o consumo de substncias e a doena mental. Props esta diviso na inteno de melhor percepo e compreenso das caractersticas de quem comete homicdio. Em termos de apresentao social dos criminosos homicidas, Bezerra (2008) coloca que muitas vezes so criminosos que aparentemente convivem satisfatoriamente em sociedade, e nunca cometeram nada que os desabonem ou os coloquem como suspeito de possurem uma personalidade cruel e dissimulada.
Palomba (1996, p. 223) complementa referindo que geralmente apresentam deformidade na falta de senso moral, na afetividade subdesenvolvida, na insensibilidade e no egosmo, podem apresentar uma mente organizada, serem loucos ou fronteirios difcil de diagnosticar.
MATERIAL E MTODOS
O presente estudo de cunho quantitativo do tipo transversal, tendo, em um primeiro momento, um enfoque descritivo e, posteriormente, fazendo uma comparao entre variveis. Os participantes so indivduos que cumprem pena por homicdio simples ou qualificado no Presdio Central na Cidade de Porto Alegre. A amostra localizada por convenincia ficou constituda por 10 sujeitos que cumprem pena por homicdio simples e 10 sujeitos por homicdio qualificado do gnero masculino, independente de raa e nvel socioeconmico. Entre os 20 sujeitos avaliados, um teve seu instrumento invalidado, pelas Escalas de Tendenciosidade (T) ou Validade (V) do CPS Escalas de Personalidade de ComRey (2003), sendo excludo do estudo. A amostra ficou composta, ento, por 9 sujeitos condenados por homicdio simples e 10 sujeitos por homicdio qualificado. Para obteno de dados que caracterizam os participantes do estudo foi utilizada uma Ficha de Dados Sociodemogrficos. Para a identificao das caractersticas de personalidade foi aplicado de forma individual o CPS Escalas de Personalidade de ComRey (2003), que corresponde a um inventrio de personalidade baseado no mtodo de autodescrio para identificao dos principais fatores de constituio do indivduo, permitindo avaliar qualitativa e quantitativamente diferentes fatores de personalidade atravs de escalas especficas. Suas subescalas so:
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Escala T: confiana versus atitude defensiva; Escala O: ordem versus falta de compulso; Escala C: conformidade versus rebeldia; Escala A: atividade versus falta de energia; Escala S: estabilidade emocional versus instabilidade emocional; Escala E: extroverso versus introverso; Escala M: masculinidade versus feminilidade; e Escala P: empatia versus egocentrismo. As informaes coletadas a partir do instrumento CPS foram organizadas em banco de dados no programa estatstico Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) for Windows, verso 2.0, e posteriormente realizada anlise standardizada. O projeto que deu origem ao estudo foi aprovado pelo Comit de tica em Pesquisa da ULBRA, e os participantes assinaram um termo de consentimento informado, conforme prev a legislao.
de 40 anos. Dos 10 sujeitos que cumprem pena por homicdio qualificado, 2 (20,0%) so casados, 1 (10,0%) divorciado, 5 (50,0%) so solteiros e 2 (20,0%) so vivos, e 4 (40,0%) tm entre 20 e 29 anos, 3 (30,0%) tm entre 30 e 39 anos, 2 (20,0%) tm entre 40 e 49 anos, e somente 1 (10,0%) tem entre 50 e 59 anos. Dos resultados do CPS Escalas de Personalidade ComRey, apresenta-se na Tabela 1, a Escala O: ordem versus falta de compulso/tipo de homicdio, que apresentou maior significncia.
Tabela 1 - Ordem X falta de compulso/tipo de homicdio.
TIPO DE HOMICDIO SIMPLES
N
QUALIFICADO 4 66,7% ,5 0 ,0% -1,0 0 ,0% -1,3 4 100,0% 1,3 2 50,0% -,1 10 52,6%
TOTAL 6 100,0% 2 100,0% 3 100,0% 4 100,0% 4 100,0% 19 100,0%
2 33,3% -,5 2 100,0% 1,1 3 100,0% 1,3 0 ,0% -1,4 2 50,0% ,1 9 47,4%
EXTREMA
% STANDARD RESIDUAL
N
ACENTUADA
% STANDARD RESIDUAL
N
Os dados do teste CPS Escalas de Personalidade ComRey foram analisados seguindo manual prprio, levantando as caractersticas predominantes de personalidade de acordo com as escalas avaliadas pelo teste. Posteriormente, organizou-se um banco de dados no programa estatstico SPSS for Windows, verso 2.0 e realizada anlise standardizada. Foram participantes dessa pesquisa 19 sujeitos do sexo masculino, que se encontram cumprindo pena no PC da cidade de Porto Alegre. Dos 9 sujeitos que cumprem pena por homicdio simples, 6 (66,7%) so solteiros e 3 (33,3%) so casados, 4 (44,4%) tm entre 20 e 29 anos, 4 (44,4%) tm entre 30 e 39 anos e apenas 1 (11,2%) tem mais
ELEVADA
% STANDARD RESIDUAL
N
REGULAR
% STANDARD RESIDUAL
N
MDIA
% STANDARD RESIDUAL
N
TOTAL %
Considerando-se os resultados obtidos, a personalidade dos homicidas simples e qualificados diferiu de maneira estatisticamente significante (p=0,047) basicamente em uma subescala, na qual os homicidas simples apresentam elevado ndice
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nesta escala enquanto os homicidas qualificados apresentam ndice regular. Desta forma, a anlise revelou que os homicidas simples so indivduos cuidadosos, meticulosos, ordeiros e muito organizados. Esses indivduos tendem a se preocuparem com limpeza e apreciam a rotina (Escala O: Ordem X Falta de Compulso). Tais achados levam a inferir que estes indivduos, pelo fato de estarem privados de liberdade, tendo de viver conforme as normas carcerrias, e estando fadados a passar boa parte de sua vida dentro do sistema, podem estar tentando a adaptao. Evidencia-se que o criminoso tem uma representao da realidade diferente das demais pessoas, com ordem de valores e significados diferentes, na qual o crime tem um determinado sentido e se forma num dado momento de sua histria de vida. Deve-se considerar que o fenmeno homicida contribui para revelar as caractersticas da conduta humana, j que os fatores biolgicos, psicolgicos e sociais influenciam todo o processo (KIPPER, 2007; OLIVEIRA e GONALVES 2007). Na medida em que se conhecem os determinantes sociais e pessoais da criminalidade, Taborda (2004) afirma que melhor se pode entender a complexa articulao de fatores contextuais (extrapsquicos) e psicopatolgicos (intrapsquicos) e a verdadeira responsabilidade de cada um pela conduta delituosa tomada. Observa-se que o ambiente de suma importncia na constituio de qualquer personalidade. Maranho (1995) refere que, no ambiente deficitrio em que muitas pessoas vivem, acabam incorporando maus valores, e que, em reao a algum abandono, estas pessoas tornam-se adversas estrutura social. Entretanto, alguns indivduos possuem uma capacidade de aproveitar ou incorporar a experincia
vivida, e se saem caracteres malformados, tudo se deve a uma inconveniente estrutura cultural. So malformados porque no tiveram oportunidade de serem bem formados. O mesmo autor refere ainda que exista outro grupo de indivduos que se mostram incapazes de aprender pela experincia, de integrar grupos, estando, conseqentemente, impossibilitados de efetivar um plano de vida. Tudo faz crer que j nascem com um defeito impediente do aproveitamento da experincia vivida. No so malformados: so mal constitudos. Acredita-se que, mediante as caractersticas apresentadas por ambos os grupos (homicidas simples e qualificados), possam ser inseridos nos conceitos apresentados por Hare (1995), que definiu a personalidade psicoptica como TG (transtorno global da personalidade), e TP (transtorno parcial da personalidade), como uma forma mais atenuada de Transtorno de Personalidade Anti-Social, com preservao da integridade de alguns aspectos da ressonncia emocional. importante salientar que nosso estudo foi direcionado a investigar as semelhanas nas caractersticas de personalidade, no tendo como objetivos a classificao e o diagnstico. Esses pacientes freqentemente enganam ou manipulam os outros, com a inteno de obter vantagens pessoais ou prazer, podem mentir repetidamente, usar nomes falsos, ludibriar ou fingir. As decises so tomadas ao sabor do momento, de maneira impensada e sem considerar as conseqncias para si mesmo ou para outros, o que pode levar a mudanas sbitas de empregos, de residncia ou de relacionamentos (BALLONE, 2004). Considerando essa premissa, Morana (1999) refere que a populao carcerria possui ndices bas-
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tante avantajados de Transtorno de Personalidade anti-social. Da mesma forma, Kaplan (2004) salienta que nas populaes carcerrias a prevalncia da personalidade anti-social pode chegar a 75%. No contexto dos homicidas, inserem-se os ncleos familiares e sua dinmica de funcionamento, sendo que eles esto intrinsecamente relacionados na construo da identidade fsica e psquica dos indivduos. Diversos estudos apresentados na publicao de Krug et al. (2003) apontam alguns fatores intrafamiliares que contribuem para determinar a violncia: vnculos afetivos deficientes, falta de outros apoios sociais, castigos e abuso fsico/sexual severo e prolongado, e negligncia no cuidado com os filhos. A falta de afeio, a auto-imagem deteriorada, a dificuldade de relaes familiares e a orientao voltada para a violncia so consideradas variveis centrais na discusso dos comportamentos de riscos. A dinmica da violncia, repleta de desvalorizao, conduz a uma diminuio da confiana nas prprias percepes (ASSIS, AVANCI e MALAQUIAS, 2004). Dessa forma complexa, salienta-se ser esse estudo de notria importncia social, podendo subsidiar e fundamentar formas de interveno e entendimento, nos casos que tratam de homicdio simples e homicdio qualificado considerada a faceta mais severa e incompreensvel da violncia. Por tal gravidade, a realizao desse estudo e os dados encontrados em nossos sujeitos foram proeminentes no sentido de melhor conhecer a populao carcerria e as personalidades criminosas, especialmente homicidas. No h milagre que possa ser feito com todo este dficit do sistema penitencirio e de outros setores. No entanto, existe uma gama de intervenes que
podem ser utilizadas pelo profissional da rea da sade inserido neste contexto e at mesmo pela prpria sociedade. preciso conhecer este indivduo antes mesmo de julg-lo, para que possam ser criadas estruturas que impeam que ele busque novamente no crime estes limites e este apossamento (MATTOS, 2004).
CONSIDERAES FINAIS
O crime to antigo quanto a prpria sociedade. Historiadores sociais e antroplogos tm referido que inexistem culturas que tenham vivido na total ausncia de violncia, pois, como se sabe, a agressividade e conseqentemente a violncia tambm constituem o acervo de emoes que permeiam a vida de todos ns. Com isso, observa-se que uma dose de agressividade indispensvel a fim de preservar a prpria existncia, mas, em que momento isso se torna desmedido e desproporcional ameaando a integridade do sujeito e a sociedade da qual faz parte? Assim, a busca pela etiologia da violncia caminha pelos diversos estgios da histria da evoluo humana, culminando em estudos voltados para aspectos clnicos, epidemiolgicos e etiolgicos do comportamento violento. Com a leitura e a explorao do referencial terico, infere-se que os nmeros relacionados violncia e entre suas facetas, a de maior morbidez, o homicdio s fazem crescer a cada ano. Tais fatores evidenciam o carter agudo de tal fenmeno e a complexidade da busca do entendimento, resoluo e preveno da criminalidade e comprova a necessidade da integrao das mais diversas reas da cincia ao tema relacionadas, na
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busca de um desdobramento melhor para o caos social ameaador imposto pela alta criminalidade e que torna a todos vulnerveis. Ressalta-se o aspecto da escolha pela atitude mais acertada quando se tem a responsabilidade jurdica, pericial ou teraputica de um criminoso desse porte. Atualmente, a discusso ampla, questionando-se dever dispensar a esses sujeitos castigo ou tratamento, e mesmo no caso do cumprimento de medida de segurana, em instituio forense para recuperao, inevitveis so as vezes em que novas barbries se cumprem devido ao comportamento manipulador e insensvel perpetuado por tais sujeitos. Considerando os altos ndices anuais de homicdios mundiais e nacionais, aliados ao fato de que estudos cientficos em Psicologia e Psiquiatria Forense so escassos, e em contraste com a imensa preocupao jurdica, sociolgica e popular com o tema, destaca-se a necessidade de uma maior apropriao de conhecimentos e estudos advindos da rea da sade, para que possam ser desenvolvidas efetivamente formas de preveno, recuperao e conteno desses casos que rotineiramente barbarizam e expem nossa sociedade, evitando progresses de regime inadequadas e indicativos altssimos de recidivas criminais que devolvem ao meio e convivncia social, diariamente, centenas de criminosos da mais alta periculosidade. Por fim, importante atentar para as limitaes do presente estudo. Sendo uma amostra pequena e com a utilizao de um instrumento especfico, no permitiu maiores concluses sobre a existncia de transtorno de personalidade nesta populao em especfico. De qualquer maneira, no invalida os resultados apresentados, pois refora o que est divulgado na literatura e que pouco valorizado no momento em que se avaliam
indivduos que cometeram homicdio simples e qualificado. Concluindo, os resultados analisados permitem afirmar que existem caractersticas semelhantes de personalidade em sujeitos que cometeram homicdio simples e qualificado.
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Cincias Sociais
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Capital social e desempenho institucional na Amrica Latina: Brasil, Uruguai e Chile
CNTIA VIVIANE VENTURA DA SILVA1 EVERTON SANTOS2
RESUMO
Este artigo tem como objetivo principal testar a hiptese de Putnam (1996) de que o capital social (CS) impacta positivamente no desempenho institucional, levando a uma maior eficincia do Estado nas reas da sade, da educao, segurana, realizao de obras e lazer. Em outras palavras, de que os nveis de solidariedade e confiana interpessoais esto positivamente relacionados capacidade dos governos em atender e realizar as demandas da populao de maneira mais satisfatria. A hiptese testada utilizando os dados de trs capitais sul americanas: Porto Alegre (Brasil), Montevidu (Uruguai) e Santiago do Chile (Chile), a partir de trs surveys aplicados nestes pases. Palavras-chaves: Capital social, instituies, desempenho institucional, cultura poltica.
ABSTRACT
This article has as main objective to build a preliminary theoretical model to make possible to understand the reasons determining the institutional performance, in other words, the mechanisms allowing the governments to accomplish their purposes, such as to build highways, to educate the children and to promote development. For
1
Acadmica do Curso de Psicologia. Bolsista de iniciao cientfica
Professor - Orientador do Curso de Cincia Poltica/ULBRA e dos PPG em Direito e Ondontologia. Professor no Centro Universitrio Feevale (evertons@feevale.br)
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that, the starting point is the theoretical presumption that the possibilities of the institutional performance are connected not only to the effectiveness of the formal political institutions (neo-institutionalism), but, above all, to the patterns of values (political culture) which support them (the endogenous circuits of mutual determination). In that way, the concept of Social Capital (CS), which is constituted of cultural practices which favor relationships based on trust, not only interpersonal (in the horizontal plan) but also institutional (in the government), constitutes the center of reference for this article, social capital which, allied with the institutions, can favor the governments performance. Key words: Social capital, institutions, institutional performance, political culture.
INTRODUO
Nas ltimas dcadas com o processo de redemocratizao na Amrica latina, assistimos a um avano poltico institucional inegvel no continente. De uma maneira geral, as eleies tornaram-se rotineiras e as liberdades polticas de organizao e participao tm adquirido uma importncia central nestas sociedades. Todavia, nem sempre estes avanos polticos institucionais significaram uma melhora efetiva das condies de vida destas populaes da regio. Convivendo majoritariamente com os partidos, o parlamento, as eleies, os governantes da Amrica Latina tm-se deparado com uma demanda crescente da sociedade sobre as instituies do Estado e de suas polticas pblicas. Este um fenmeno tpico de sociedades democrticas, em que as comportas que represavam a presso social sobre o Estado durante os tempos pretritos do autoritarismo foram abertas. Desta forma, uma das grandes questes colocadas ao Estado neste incio de sculo exatamente sobre sua eficincia e capacidade em atender as demandas provenientes da sociedade. Isto nos remete a questionarmos quais so as variveis que podem determinar um desempenho satisfatrio das instituies do Estado e de suas fraes, como estados, prefeituras? Sob que condies polticas institucionais ou mesmo societais podemos ter um bom desempenho dos governos?
Buscando responder a este questionamento, o objetivo deste artigo mostrar que o desempenho do Estado, materializado nos mecanismos que permitem aos governos realizar seus propsitos, como educar as crianas, promover a sade, a segurana e o desenvolvimento, proporcional existncia de capital social existente em determinada sociedade. Nossa hiptese de trabalho de que o acmulo de capital social (CS) em uma determinada sociedade implica positivamente no bom desempenho institucional, ou seja, de que ele impacta positivamente nestas ltimas, levando a uma maior eficincia das instituies polticas. Em outras palavras, de que os nveis de solidariedade e confiana interpessoais esto positivamente relacionados capacidade dos governos em atender e realizar as demandas da populao, razo pela qual s polticas pblicas devem ser arquitetadas no sentido de estimular o acmulo de CS.
METODOLOGIA
Essa pesquisa foi realizada atravs do mtodo quantitativo tipo survey em trs cidades da Amrica Latina: Porto Alegre, Montevidu e Santiago. Foram aplicados cerca de 500 questionrios em cada capital, entre maio e julho de 2005, observando um
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intervalo de confiana de 95% e um erro amostral de 4%. Utilizamos o banco de dados da pesquisa Desenvolvimento Sustentvel e Capital Social na Promoo da Cidadania e Qualidade de Vida na Amrica Latina do Ncleo de Pesquisas Sobre a Amrica Latina - NUPESAL/UFRGS.
capitalista industrial em alguns casos ps-industrial ao sul tradicional agrcola. Estas diferenas entre estes dois extremos necessitaram da ajuda de reformas polticas para resolver seus problemas de administrao pblica, posto que na dcada de 70 criaram-se diversos governos regionais procurando descentralizar a administrao poltica italiana. Foram criadas 20 regies idnticas quanto aos seus poderes, entretanto, os desempenhos destas regies foram muito diferentes. Como explicar esta diferena? O autor procura testar sua hiptese de que a cultura poltica, em outras palavras, as tradies cvicas que determinam o desenvolvimento scio-econmico de uma regio e nela o CS. Este conceito est ligado idia de um bem comunitrio (PUTNAM, 1996; FUKUYAMA, 1996). Para Putnam (1996), CS so prticas sociais, normas e relaes de confiana que existem entre cidados numa determinada sociedade, bem como, sistemas de participao e associao que estimulam a cooperao. Nesta conceituao, quanto maior for a capacidade dos cidados confiarem uns nos outros, para alm de seus familiares, ou seja superando o familismo, assim como maior e mais rica for o nmero de possibilidades associativas numa sociedade, maior ser o volume de CS. Assim, a confiana a expectativa que nasce no meio de uma comunidade de comportamento estvel e cooperativo, baseado em normas compartilhadas por estes mesmos membros (FUKUYAMA, 1996). A questo central para Putnam (1996) que a confiana, a cooperao e os espaos de participao social entre o Estado e a Sociedade so elementos positivos e essenciais para o bom funcionamento das instituies polticas2. Ou seja, ele toma a cultura poltica, a varivel civismo,
2
Cultura Poltica e Capital Social Em seu trabalho, Comunidade e Democracia, Putnam (1996) estava preocupado em compreender como os governos democrticos podem funcionar de maneira satisfatria, uma vez que na contemporaneidade, as democracias liberais vitoriosas com o fim do socialismo real e a queda do muro de Berlim, no esto satisfazendo adequadamente as demandas dos cidados. Ento, o autor investigou o que era necessrio para o bom funcionamento dos governos democrticos, quais eram os pressupostos indispensveis para que a democracia respondesse aos desafios contemporneos. Assim, uma das questes centrais que o autor investigou foi porque alguns governos democrticos tem um bom desempenho institucional e outros no? O que determina o bom desempenho das instituies polticas? As instituies podem mudar a prtica dos governos? O desempenho dos governos depende da cultura poltica1 de seus cidados? Perseguindo esta questo, o autor vai analisar vinte anos da histria poltica da Itlia, demonstrando que este pas apresenta uma grande diferena regional tanto ao Norte em Seveso, por exemplo, quanto ao Sul do pas em Pietraportesa. De uma localidade a outra se vai da modernidade
1
Influenciados por Verba e Almond (1989) a cultura poltica entendida aqui como um conjunto de atitudes e comportamentos que os cidados tm em relao ao sistema poltico e social e que so indispensveis para a sustentao das instituies estatais.
No somente para as instituies democrticas, mas tambm econmicas. Fukuyama (1996), demonstrou que a existncia de CS numa dada sociedade fator explicativo do tamanho da estrutura industrial ali existente, bem como, do desempenho econmico conseqentemente.
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como uma varivel independente e o desenvolvimento econmico e o desempenho institucional como uma varivel dependente. Isto novo no debate posto em tela, pois haveria uma forte tendncia em acharmos, contrariamente do que o exposto, de que a situao scio-econmica das regies na Itlia que levaram ao civismo, colocando o civismo como uma varivel dependente. Entretanto, o autor demonstra, em favor de sua tese, de que as regies mais cvicas da Itlia (o norte), no comearam sendo mais ricas e nem sempre foram mais ricas, mas pelo contrrio, permaneceram mais cvicas desde o sculo XI. E precisamente foi este civismo que levou ao desenvolvimento econmico e no o contrrio. H uma correlao muito forte entre civismo e desenvolvimento para Putnam (1996). O exemplo da regio da Emlia-Romagna no norte e da Calbria no sul italiano ilustra bem sua tese. No incio do sculo XX, argumenta o autor, as cidades do norte eram menos industrializadas (20% na indstria e 65% no campo) contra as do sul ligeiramente mais industrializadas (26% na indstria e 63% no campo). No entanto, o norte era mais cvico do que o sul. Oitenta anos depois o norte mais cvico estava mais industrializado do que o sul, menos cvico. Ou seja, As possibilidades de desenvolvimento scio-econmico de uma regio neste sculo dependeram menos de seu potencial scio-econmico inicial do que de seu potencial cvico (PUTNAM 1996, p.166). Mas, como a comunidade cvica (por meio de que mecanismos) pode contribuir para a prosperidade econmica? Ela pode contribuir, por exemplo, pela cooperao horizontal entre empresas nos distritos industriais na Itlia, demonstra Putnam (1996). Isto se reflete na cooperao nos servios administrativos, na aquisio de matriasprimas, no financiamento e na pesquisa (PUTNAM,
1996). Ou mesmo subcontratando os concorrentes temporariamente. Elas competem sim, na inovao de produtos e na eficincia. Todavia, so as normas de reciprocidade e os sistemas de participao cvica que esto na base do sucesso dos distritos industriais. Pelo lado da demanda, os cidados das comunidades cvicas querem um bom governo e Eles exigem servios pblicos mais eficazes e esto dispostos a agir coletivamente para alcanar seus objetivos comuns. J os cidados das regies menos cvicas costumam assumir o papel de suplicantes cnicos e alienados (PUTNAM, 1996, p.191). Pelo lado da oferta de servios do setor pblico, o governo favorecido pela infra-estrutura social das comunidades cvicas que acabam colaborando e cooperando com o governo visando os interesses comuns (PUTNAM, 1996). Assim, o autor, argumenta que se formaram dois sistemas sociais equilibrados na Itlia, no norte, de comunidade cvica, um equilbrio virtuoso, ou seja, cooperao, confiana e reciprocidade. No sul, no cvico, um equilbrio vicioso desero, desconfiana, omisso, explorao. Desta forma, estes equilbrios esto subordinados a trajetria. Em outras palavras, que o lugar de onde voc veio determina o lugar para onde voc pode chegar (PUTNAM, 1996). por esta razo que o autor conclui que tanto os Estados Unidos quanto os pases da Amrica Latina coincidem no fato de receberem heranas culturais significativas, no entanto, distingue-se pois os norte-americanos foram beneficiados pelas tradies inglesas de descentralizao, enquanto os latino-americanos foram prejudicados pelo autoritarismo centralizado, o familismo e o clientelismo que haviam herdado da Espanha e de Portugal medievais. Os latino-americanos herdaram tradies de dependncia vertical, ao passo que os americanos herdaram tradies cvicas horizontais e isto fez toda a diferena.
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RESULTADOS
A pesquisa realizada em Porto Alegre (Brasil), Montevido (Uruguai) e Santiago (Chile) mostra que existe uma correlao significativa entre o estoque de capital social, mensurado pela varivel confiana interpessoal, e o desempenho institucional, avaliado pela varivel satisfao do cidao com o servio ou instituio pblica. As variveis so alimentadas com pesquisa quantitativa de opinio, que revela a impresso dos cidados a respeitos dos servios pblicos e suas instituies responsveis. Encontramos em Montevidu o maior ndice de confiana interpessoal. Quando perguntamos: Em termos gerais, o senhor (a) diria que se pode ou no se pode confiar nas pessoas? Cerca da metade dos uruguaios (50,2%) responderam que se pode confiar nas pessoas como se pode verificar na Figura 1. O percentual cai em Porto Alegre e Santiago do Chile com 32,9% e 23,7% respectivamente.
Na Figura 2 apresentamos os resultados da questo sobre os servios pblicos nos setores da educao, sade, obras, segurana pblica e esporte/lazer/cultura. A populao de Montevidu apresentou os maiores ndices de avaliao boa em todos os setores se comparados com Porto Alegre e Santiago do Chile, com exceo de esporte/lazer/ cultura em que o maior ndice de avaliao boa foi em Porto Alegre com 38,6% de avaliao boa, seguida de Montevidu com 30,7% e Santiago do Chile com 24,4%.
Figura 2 - Avaliao dos servios pblicos.

Fonte: Pesquisa Desenvolvimento Sustentvel e Capital Social na Promoo da Cidadania e Qualidade de Vida na Amrica Latina NEM/NUPESAL/ UFRGS/CNPQ 2005.
Figura 1 - Confiana interpessoal.

Fonte: Pesquisa Desenvolvimento Sustentvel e Capital Social na Promoo da Cidadania e Qualidade de Vida na Amrica Latina NEM/ NUPESAL/UFRGS/CNPQ 2005.
Onde o ndice de confiana pessoal foi maior, encontramos tambm melhores avaliaes do desempenho de suas instituies polticas. Por outro lado, onde o ndice de confiana foi menor as avaliaes tambm tiveram menor escore. Na Figura 3 mostramos que Santiago do Chile obteve um ndice de 76,3% de pessoas que responderam que no se pode confiar nas pessoas e em Porto Alegre este nmero foi de 67,1%. Nestas cidades com um nvel de confiana interpessoal menor, observamos maiores ndices de avaliao ruim nos servios pblicos.
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satisfeitos com a educao so os chilenos. Uma possvel explicao o fato do Chile ter sido o pas onde as polticas neoliberais foram precocemente experimentadas, desde o incio da dcada de 1980. Um dos primeiros setores a serem regulamentados e repassados iniciativa privada, na sua quase totalidade foi o do ensino superior.
Figura 3 - Avaliao dos servios pblicos
Em relao educao, evidencia-se uma significativa similaridade nos trs pases pois, conforme observa-se na Figura 4, quando no existe confiana interpessoal, ocorre um significativo aumento da insatisfao dos cidados com a educao, consideram-na ruim.
A segurana um tema que tem destaque significativo no perodo contemporneo. Isto ocorre em razo da emergncia ou ebulio da violncia e do crime organizados: terrorista, mafioso ou narcotraficante e, de outro lado, em razo do processo crescente de empobrecimento e excluso social. No obstante, notria a pouca capacidade do Estado contemporneo de construir mecanismos que reprimam e, muito menos, previnam a ocorrncia da violncia. Isto pode ser observado nos resultados do survey que mostram a pouca satisfao dos cidados em relao segurana nos pases analisados, cuja informao seguramente no difere nos demais pases da Amrica Latina. O survey mostra que os cidados que esto satisfeitos com a segurana (definindo-a como boa) no ultrapassam 7%, e os que esto instatisfeitos no baixam de 42%, mostrando uma insatisfao geral na regio. No entanto, quando estabelece-se a relao entre confiana interpessoal e segurana, observase situao similar segurana nos trs pases, conforme mostra a Figura 5. Quando no existe confiana interpessoal, significativo o aumento da insatisfao dos cidados. O cidado que no confia nos pares, sente-se mais insatisfeito em relao segurana em comparao com aqueles que confiam.
Figura 4 - Relao entre a confiana interpessoal e a satisfao com educao

Interessante destacar que o maior percentual de cidado que consideram-se medianamente
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Figura 5 - Relao entre confiana interpessoal e satisfao com segurana

Figura 6 - Relao entre confiana interpessoal e satisfao com transporte

relevante destacar que os cidados que consideram a segurana pior so os brasileiros que no confiam. Essa informao pode ser explicada pelo processo histrico de industrializao e urbanizao rpida e desordenada que no final do sculo XX produziu um crescimento significativo da excluso e da pobreza, ao mesmo tempo em que cresceu o consumo e o comrcio de drogas e armas nas periferias das grandes cidades. A varivel satisfao com o transporte segue a mesma trajetria das variveis educao e segurana, ou seja, os cidados que no confiam so mais insatisfeitas que os que confiam. A excesso ocorre no Uruguai, onde a diferena sutil (de 1%), muito embora seguindo a mesma lgica, conforme mostra a Figura 6.
O alto ndice de satisfao com o transporte no Brasil (de 52 a 73,90%) ocorre em razo do survey ter sido aplicado em Porto Alegre, capital do estado do Rio Grande do Sul, que possui um dos melhores sistemas de trasporte coletivo do pas. No entanto, isto no invalida a correlao que pode ser estabelecida que quando os cidados no confiam uns nos outros, sentem-se mais insatisfeitos com o transporte que quando confiam. As informaes apresentadas nos grficos anteriores permitem observar uma clara relao entre a confiana interpessoal e a satisfao em relao aos servios pblicos. A esta altura possvel inferir a veracidade da nossa hiptese de trabalho, ou seja, os dados mostram que existe uma relao de mutua determinao e reforamento entre o capital social, verificado pela confiana
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interpessoal, e o desempenho institucional, avaliado pela satisfao com os servios pblicos. A satisfao com os servios pblicos utilizada como indicador de desempenho institucional pois, as sociedades que possuem capital social crem que as instituies e organizaes pblicas esto empreendendo os esforos possveis para cumprirem suas misses. Alm disso, empreendem iniciativas no mbito da sociedade civil com o objetivo de contribuir com a soluo de problemas sociais o que, seguramente, contribui para o desenvolvimento enquanto um processo de crescento aumento de capacidades individuais e sociais (SEN, 2000).
os e recursos pblicos aos setores mais subalternizados da sociedade latino-americana mas tambm ativando, importantes setores da comunidade, caracterizando um crculo virtuoso desejvel e necessrio na dinmica relao entre Estado e sociedade.
AGRADECIMENTOS
Prestamos o nosso agradecimento ao professor doutor Hemerson Luiz Pase que nos auxiliou na constituio deste trabalho e ao Ncleo de Pesquisas Sobre a Amrica Latina - NUPESAL/UFRGS pela parceria.
CONSIDERAES FINAIS
Este artigo esboou primeiramente um referencial terico que nos possibilitasse compreender as razes que determinam o desempenho satisfatrio das instituies polticas. Num segundo momento, com base na empiria recolhida nas trs capitais latino americanas, corroborar a tese de Putnam (1996) da associao entre capital social e desempenho institucional. Desta forma, este trabalho procurou oportunamente chamar a ateno para um dos grandes desafios colocados ao Estado neopatrimonialista latino neste incio de sculo. Ou seja, o desafio de ser eficiente e capaz de atender as demandas provenientes da sociedade, promover a segurana, criar empregos, construir escolas, atender estas populaes locais. Isto nos remete a pensarmos nas possibilidades de tornarmos este Estado mais eficiente, o que pode ser impulsionado atravs da reforma das instituies e pela melhora das dotaes de CS, para seguirmos coerentemente o que os dados aqui nos revelam. Estes dois movimentos podem colaborar para a diminuio das desigualdades sociais na regio. Melhorando a distribuio de servi-
REFERNCIAS
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VERBA, S.; ALMOND, G. The Civic culture. Political attitudes and democracy in five nations. Newbury Park: Sage, 1989.
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Engenharias
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220
Estudo da viabilidade da utilizao de carepa de ao na produo de concreto
GISELE LOPES PEREIRA1 RAFAEL JESUS COSSA2 FERNANDA MACEDO PEREIRA3
RESUMO
A carepa de ao um resduo slido gerado na fabricao do ao, normalmente depositado ao ar livre no ptio de siderrgicas. O presente trabalho visa avaliar a possibilidade de incorporao da carepa de ao em concretos de cimento Portland, como substituio areia natural quartzosa. Foram produzidos concretos com traos 1:3,5; 1:5,0 e 1:6,5, com diferentes teores do resduo (0%, 10%, 25% e 40%) e abatimento de 11010mm, para determinao da resistncia compresso absoro de gua. Os concretos com carepa de ao exigiram maior quantidade de gua para manuteno da trabalhabilidade fixada. A anlise dos resultados indicou para concretos com relaes gua/cimento 0,55 e 0,65 reduo da resistncia compresso e maior absoro de gua medida que o teor de carepa de ao aumenta. Palavras-chave: Carepa de ao, concreto, resistncia compresso, absoro de gua.
ABSTRACT
Mill scale is a solid waste formed on steel surface during steel manufacture, usually deposited outdoor at steelmaking industries. This work aims to evaluate the use of mill scale in cement Portland concrete, as a replacement
1
Acadmico do Curso de Engenharia Civil/ULBRA Bolsista PROICT/ULBRA Acadmico do Curso de Engenharia Civil/ULBRA Bolsista BIC/FAPERGS
Professora-Orientadora do Curso de Engenharia Civil/ULBRA e do PPG Engenharia: Energia, Ambiente e Materiais/ULBRA (fernanda.pereira@ulbra.br)
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for natural fine aggregate. Concretes with mix proportioning 1:3,5, 1:5,0 and 1:6,5 were produced varying the mill scale content from 0% to 40%, with a given slump 11010mm, for determination of compressive strength and water absorption. Concrete with mill scale has demanded greater water content to maintain the workability. The results indicated that concretes with water/cement ratio 0,55 and 0,65 have a reduction in the compressive strength and greater water absorption as the mill scale content increases. Key words: Mill scale, concrete, compressive strength, water absorption.
INTRODUO
A preocupao com a preservao do meio ambiente e aspectos vinculados gesto ambiental crescente nos ltimos anos, apresentando-se como uma constante nos diversos segmentos industriais (LEVY, 2001). Exigncias sociais e governamentais, bem como instncias legais, incentivam cada vez mais a adoo de prticas ecoeficientes pelas indstrias, com investimentos em atualizaes tecnolgicas que possibilitem otimizar a utilizao de recursos naturais e o desenvolvimento de alternativas para a disposio adequada de subprodutos industriais. O problema dos rejeitos industriais no termina com a sua captao, visto que a disposio inadequada dos resduos, com deposio de grandes quantidades em locais imprprios, ocasiona efeitos deletrios ao meio ambiente, gerando riscos de contaminao do solo, atmosfera e fontes de gua. Conseqncia direta desse fato so os recentes avanos no desenvolvimento de novos materiais e aproveitamento de resduos de diversos setores produtivos como subproduto de valor agregado, visando assegurar a integrao e o equilbrio entre o desenvolvimento industrial e a proteo ambiental. Alm disso, em diversos setores da indstria, esforos tecnolgicos tm sido concentrados em aes que levem utilizao de tecnologias de produo mais limpas que possibilitem a reduo dos resduos
ou incorporao destes dentro do prprio processo produtivo que os gerou ou ainda como insumo em outros processos produtivos. A carepa de ao um resduo slido gerado na fabricao do ao, produzida na oxidao da superfcie do ao quando este se encontra a elevada temperatura. O metal a alta temperatura reage com o oxignio formando um xido de ferro com baixa aderncia. A carepa deve ser removida para evitar incluses que diminuem a qualidade do ao durante sua conformao mecnica por laminao ou outro processo de deformao plstica. A quantidade de carepa gerada na fabricao do ao significativa, sendo normalmente depositada ao ar livre no ptio de siderrgicas. Dados apresentados por Oliveira (2004) revelam que, em usinas integradas, a produo de 1 tonelada de ao produz 10 kg de carepa. A disposio da carepa de ao em ptios deve ser realizada seguindo-se as normas ambientais pertinentes, visto que este resduo pode ser classificado como classe I, resduos perigosos, segundo a NBR 10004 (2004). A indstria da construo civil, por ser grande consumidora de recursos naturais, constitui-se em potencial consumidora de subprodutos e resduos provenientes de outras indstrias, tais como as siderrgicas (JONHN, 2000). De acordo com Sjstrm, citado por Pagnussat (2004), a construo civil consome entre 14% a 50%
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dos recursos naturais extrados no planeta. Considerando que no Brasil so produzidas aproximadamente 35 milhes de toneladas de cimento por ano e que, na produo de concreto, o cimento misturado com agregados, em mdia, a partir de um trao 1:5 (cimeto:agregados), em massa, possvel estimar uma consumo anual de aproximadamente 200 milhes de toneladas de agregados, sem levar em conta o volume de agregados utilizados em pavimentao. Alguns resduos provenientes de operaes de siderurgia e metalurgia j possuem uso consagrado e disseminado no setor da construo civil, como, por exemplo, as escrias granuladas de alto-forno provenientes da produo do ferro-gusa, utilizadas na fabricao de cimentos Portland (MOURA, 2000). Alternativas para a utilizao de subprodutos decorrentes da fabricao do ao, como a escria de aciaria (MASUERO, 2001) e a carepa de ao, vm sendo desenvolvidas, podendo vir a viabilizar a reduo do consumo de matrias-primas naturais e os impactos decorrentes da sua extrao no meio ambiente. Estudos realizados pela Gerdau (2003) verificaram a viabilidade de reciclagem da carepa de ao em artefatos de cimento para calamento, atravs da substituio da areia e brita por carepa. Os resultados obtidos apontaram possibilidade da obteno de produtos com custo significativamente inferior aos existentes no mercado. Cunha et al. (2006) estudaram o beneficiamento e a reciclagem de carepas geradas no processo siderrgico atravs de caracterizaes fsicas e qumicas que permitiram investigar suas propriedades e potencialidades industriais. Martins (2006) em seu trabalho de mestrado realizou a caracterizao qumica e mineralgica de
diversos resduos industriais, incluindo a carepa de laminao, a fim de contribuir para a incorporao dos resduos como matria-prima em aplicaes industriais, de modo a minimizar impactos ambientais e reduzir custos. A utilizao da carepa de ao como insumo na construo civil pode proporcionar resultado amplamente positivo em relao a tendncias atuais de gesto ambiental, como o conceito de resduo zero, onde um resduo de uma produo industrial matria-prima para outro processo industrial. Alm disso, a reciclagem de resduos contribui significativamente para a reduo do consumo de recursos naturais, alm de minimizar a deposio inadequada e, conseqentemente, reduzir os impactos deletrios ao meio ambiente. A consagrao de um processo de reciclagem e incorporao de resduos representa um paradigma de desenvolvimento sustentvel sociedade, com eliminao ou minimizao de riscos para o meio ambiente. Dentro deste contexto, a utilizao da carepa de ao pode apresentar-se como alternativa relevante na produo de concretos de cimento Portland, sendo imperativo, no entanto, o desenvolvimento de novos estudos que permitam verificar a viabilidade tcnica e potencialidade do emprego desse material. O presente trabalho apresenta com objetivo avaliar a viabilidade de incorporao da carepa de ao em concretos de cimento Portland, como substituio de areia natural quartzosa normalmente utilizada na sua produo, analisando-se a resistncia compresso e a absoro de gua de concretos com diferentes teores do resduo.
223
MATERIAL E MTODOS
Para o estudo experimental foi utilizado cimento do tipo CP IV-32, por ser amplamente utilizado no Estado do Rio Grande do Sul, com caractersticas de acordo com as especificaes da ABNT NBR 5736 (1991). Como agregados foram utilizados areia natural quartzosa proveniente do leito do rio Jacu, comercialmente denominada areia regular, e brita de origem basltica com dimenso mxima caracterstica 19 mm. A carepa de ao foi
proveniente da Siderrgica Gerdau Riograndense, localizada em Sapucaia do Sul/RS. Na produo dos concretos foi utilizada gua proveniente da rede de abastecimento local da ULBRA Canoas. A Tabela 1 apresenta a composio granulomtrica dos agregados e da carepa de ao, determinada de acordo com a ABNT NBR NM 248 (2003). Na Tabela 2 apresentada a massa especfica dos agregados e da carepa de ao, determinadas pelo mtodo do picnmetro.
Tabela 1 - Composio granulomtrica dos agregados.

% EM MASSA PENEIRAS AREIA 19MM 12,5MM 9,5MM 6,3MM 4,75MM 2,36MM 1,18MM 600M 300M 150M <150M TOTAL Mdulo de nura Dimenso mxima caracterstica (mm) 0,008 0,031 0,048 0,121 0,433 0,320 0,039 1 MASSA RETIDA (KG) RETIDA BRITA 0,052 0,378 0,320 0,222 0,019 0,007 0,000 0,002 1,000 CAREPA 0,004 0,016 0,035 0,066 0,069 0,116 0,194 0,500 AREIA 1 3 5 12 43 32 4 100 BRITA 5 38 32 22 2 1 0 0 100 CAREPA 1 3 7 13 14 23 39 100 AREIA 1 4 9 21 64 96 100 195 1,95 2,36 ACUMULADA BRITA 5 43 75 97 99 100 100 100 100 100 100 679 6,79 19 CAREPA 1 4 11 24 38 61 100139 1,39 2,36
Tabela 2 - Massa especfica dos agregados.

Agregado AREIA NATURAL Brita Carepa de ao MASSA ESPECFICA (KG/DM3) 2,63 2,92 4,28
na faixa de 110 10mm, para determinao da resistncia compresso aos 7 e 28 dias de idade e da absoro de gua. A carepa de ao foi utilizada como agregado mido, nos teores determinados, em substituio areia natural. Tendo em vista a diferena das massas especficas da areia natural e da carepa de ao, foi realizada a correo da massa de agregado mido, de modo a manter-se constante para cada
Foram realizadas dosagens de concreto pelo mtodo IPT/EPUSP apresentado por Helene e Terzian (1992), com traos de concreto de 1:3,5; 1:5,0 e 1:6,5, com teores de carepa de 0%, 10%, 25% e 40% e abatimento pelo tronco de cone fixado
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combinao trao/teor de carepa o consumo de cimento por metro cbico de concreto. Para a realizao dos ensaios propostos foram utilizados corpos-de-prova cilndricos (10 x 20 cm), moldados segundo a ABNT NBR 5738 (2003),
sendo dois corpos-de-prova para o ensaio de resistncia compresso para cada idade e trs corposde-prova para o ensaio de absoro de gua, para cada combinao de trao e porcentual de carepa por idade, conforme mostra a Tabela 3, num total de 84 corpos-de-prova.
Tabela 3 - Corpos-de-prova para a realizao dos ensaios propostos.

Trao/Carepa 1:3,5 1:5,0 1:6,5 = resistncia compresso 7 dias = resistncia compresso 28 dias = absoro de gua 28 dias 0% 10% 25% 40%
As Figuras 1 e 2 ilustram, respectivamente, a produo do concreto e a moldagem dos corposde-prova.
Figura 2 - Moldagem dos corpos-de-prova.
Figura 1 - Produo do concreto.
O ensaio de abatimento pelo tronco de cone foi realizado segundo a ABNT NBR NM 67 (1998), conforme mostra a Figura 3. Os ensaios de resistncia compresso foram realizados conforme os procedimentos estabelecidos na ABNT NBR 5739 (2007), aos 7 e 28 dias de ida-
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de, com capeamento base de enxofre e os ensaios de absoro de gua conforme as recomendaes da ABNT NBR 9778 (2006). A Figura 4 mostra a determinao da resistncia compresso, em prensa eletro hidrulica com capacidade de 150 toneladas.
A partir das curvas de comportamento obtidas (diagramas de dosagem) foram calculados os parmetros de resposta para as relaes a/c 0,55 e 0,65.
A Tabela 4 apresenta os resultados obtidos na produo dos concretos e a Tabela 5 os resultados dos ensaios de resistncia compresso e absoro de gua.
Tabela 4 - Parmetros de moldagem dos concretos produzidos.
Trao 1:3,5 1:5,0 1:6,5 1:3,5 1:5,0 1:6,5 10 0 Teor de carepa (%) Abatimento (mm) 110 110 110 105 105 100 115 25 105 110 110 40 105 120 H (%) 10,03 9,58 9,58 10,79 9,81 9,78 11,20 10,60 10,60 11,40 10,45 10,87 Relao gua/cimento 0,51 0,63 0,80 0,49 0,60 0,75 0,53 0,67 0,84 0,55 0,68 0,90
Figura 3 - Ensaio de abatimento pelo tronco de cone.
1:3,5 1:5,0 1:6,5 1:3,5 1:5,0 1:6,5
Tabela 5 - Resistncia compresso e absoro de gua dos concretos produzidos.

Trao 1:3,5 1:5,0 1:6,5 1:3,5 1:5,0 1:6,5 1:3,5 1:5,0 1:6,5 1:3,5 25 10 0 Teor de carepa (%) Resistncia compresso (MPa) * 7 dias 24,8 16,6 10,2 19,9 14,9 9,1 16,0 10,4 5,6 17,7 40 12,0 7,2 28 dias 33,5 24,1 15,2 29,2 22,5 13,6 25,9 16,8 9,4 22,7 15,2 8,3 Absoro de gua (%) 4,01 4,67 6,34 7,34 7,91 8,03 7,31 8,84 8,95 4,50 5,69 7,33
Figura 4 - Determinao da resistncia compresso.
1:5,0 1:6,5
* Resultados potenciais (maior valor do par de corpos-de-prova).
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Nas Figuras 5 a 8 so apresentados os diagramas de dosagem obtidos a partir da produo dos concretos e realizao dos ensaios de resistncia compresso.
Figura 7 - Diagrama de dosagem 25% de carepa de ao.
A Figura 9 apresenta os resultados de resistncia compresso, determinados a partir dos diagramas de dosagem, para as relaes gua/cimento 0,55 e 0,65, pr-estabelecidas para comparao do desempenho dos concretos com os diferentes teores de carepa de ao analisados.
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gua/cimento 0,55 e 0,65 reduo da resistncia compresso e uma maior absoro de gua quando utilizada a carepa de ao em substituio areia natural. Para concretos com relao gua/cimento 0,55, com os teores de carepa 10%, 25% e 40% a resistncia compresso diminuiu, respectivamente, 17%, 18% e 24%, em relao ao concreto de referncia (reduo mdia de 20%). A absoro de gua aumentou, respectivamente, 80%, 82% e 10% em relao ao concreto de referncia. Concretos com relao gua/cimento 0,65 apresentaram com a substituio de 10%, 25% e 40% resistncia compresso, respectivamente, 19%, 23% e 26% menor em relao ao concreto de referncia (reduo mdia de 23%). Para esta mesma relao gua/cimento a substituio de 10%, 25% e 40% de areia natural por carepa de ao aumentou a absoro de gua, respectivamente, em 59%, 66% e 8%. Uma hiptese considerada para a reduo da resistncia compresso a presena de leos e graxas na carepa de ao, oriundos da laminao e lingotamento contnuo, que podem influenciar nas reaes de hidratao do cimento Portland. Ensaios para determinao dos teores desses elementos esto sendo realizados.
Figura 10 - Absoro de gua relaes gua/cimento 0,55 e 0,65.
Figura 9 - Resistncia compresso relaes gua/ cimento 0,55 e 0,65.
Na Figura 10 so apresentados os resultados da absoro de gua para as relaes gua/cimento 0,55 e 0,65, determinados a partir das curvas de comportamento apresentadas na Tabela 6.
Tabela 6 - Relao entre a absoro de gua e a relao gua/cimento.
TEOR DE CAREPA 0% 10% 25% 40% RELAO ABSORO X RELAO A/C ABS = 1,753*EXP(1,5942*A/C) ABS = 6,3287*EXP(0,3312*A/C) ABS = 5,4194*EXP(0,6325*A/C) ABS = 2,167*EXP(1,384*A/C)
A partir dos resultados obtidos foi identificado que a utilizao de carepa de ao aumentou o teor de gua (H%) para a manuteno de um mesmo abatimento. A anlise dos resultados, realizada a partir das curvas de comportamento obtidas para cada trao estudado, indicou para concretos com relaes
J Goergen (2006), ao estudar o emprego de carepa de ao em concretos para confeco de peas pr-moldadas de pavimentao, concluiu que o resduo melhorou o desempenho dos concretos estudados quanto resistncia compresso em relao ao concreto convencional, com um incremento de aproximadamente 10%. O autor ainda comenta que o aspecto visual e a trabalhabilidade do concreto no apresentaram modificaes relevantes.
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Salienta-se, no entanto, que os traos utilizados pelo autor, com e sem a carepa de ao, apresentam proporcionamentos de materiais distintos.
REFERNCIAS
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CONSIDERAES FINAIS
No desenvolvimento desta pesquisa foi investigado o efeito da substituio de areia natural quartzosa, usualmente empregada para a produo de concretos, pela carepa de ao resultante da fabricao do ao, no desempenho de concretos de cimento Portland. De acordo com os resultados obtidos possvel concluir que: O emprego da carepa de ao aumentou a demanda de gua para a manuteno da trabalhabilidade requerida; Concretos, tanto com relao a/c igual a 0,55, como com relao a/c igual a 0,65 apresentaram uma reduo mdia na resistncia compresso de 20% e 23%, respectivamente, em relao ao concreto de referncia; A absoro de gua para concretos com relaes a/c 0,55 e 0,65 apresentou um aumento mdio de 57% e 44%, respectivamente, em relao ao concreto de referncia.
AGRADECIMENTOS
ULBRA, pela bolsa de Iniciao Cientfica, Gerdau Riograndense, pela doao da carepa de ao; Engemix S.A., pela realizao dos ensaios de resistncia compresso e Fundao de Cincia e Tecnologia CIENTEC, pelos ensaios de massa especfica dos agregados e da carepa de ao.
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Sistema de monitoramento de sinais vitais para testes fsicos com transmisso de dados sem fios
CRISTIAN TEIXEIRA DANIEL1 JOO D. KLEIN1 VALNER J. BRUSAMARELLO2
RESUMO
Este projeto desenvolve o sistema de medio e monitoramento dos sinais vitais, para ser aplicado na realizao de testes fsicos ergomtricos, que determinam os nveis adequados de exerccios para quem deseja iniciar atividades fsicas regulares. Estes testes podem ser realizados em campo ou em laboratrio. Realizando a aquisio dos sinais de eletrocardiograma (ECG), temperatura corporal (TC) e estimativa da presso arterial (PA), utilizando transmisso de dados sem fios. Palavras-chave: ECG, PA, sem fios.
ABSTRACT
This project has the objective to develop a measurement system and checking for the vital signals, to be applied in the accomplishment of ergometric physical tests, which determine adequate levels of exercises activities. These tests can be carried set through both field and laboratory. Signals of the electrocardiogram signals (ECG), body temperature (TC) and estimate of the arterial pressure (PA), were acquired and transmitted though wireless. A Texas MSP430F133 microcontroller was used for the signal. Key words: ECG, PA, without contact.
1
Aluno do Curso de Engenharia Eltrica/ULBRA - Bolsista PROICT/ULBRA
Professor - Orientador do Curso de Engenharia Eltrica/ ULBRA (brusamarello.valner@gmail.com)
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INTRODUO
O bem estar fsico e mental atua significativamente na estrutura orgnica do ser humano, distrbios fsicos causados por modificaes no ambiente, so constantemente notados nas pessoas e nos seres vivos em geral. Na troca de um ambiente familiar para um estranho, involuntariamente a freqncia cardaca sobe, a percepo aumenta e o corpo fica em estado de alerta. Neste contexto em 1990, um grupo de pesquisadores norte-americanos desenvolveu um estudo cientfico, coletando 300 amostras de casos onde pacientes foram avaliados em suas prprias residncias, com que diz respeito presso arterial (PA) (ROURKE; KELLY; AVOLIO, 1992), e a freqncia cardaca, (FC), (MARCONDES, 1998). Verificou-se uma variao considervel na PA e FC, comparadas com as medies das mesmas pessoas, nos mesmos horrios e com a mesma preparao, feitas no consultrio mdico. Concluiu-se que a presena do mdico e o local no familiar alteravam as condies normais dos pacientes; e que o bem estar do paciente, no momento de uma anlise clnica, ser refletido na coerncia dos resultados obtidos. O teste consiste em o paciente sofrer um aumento gradual da carga fsica, que na esteira aumento da velocidade e inclinao, e na bicicleta as marchas so alteradas para variar os esforos feitos pelo paciente. Os testes prosseguem at uma freqncia cardaca alvo, ou a menos que o paciente sofra algum mal estar. Para que o paciente possa realizar o teste confortavelmente sem a utilizao de cabos ligando os sensores ao monitor, foi desenvolvido neste projeto um sistema micro-processado que faz a aquisio dos sinais vitais e o transmite via radio ao computador, que a partir de um software dedicado gerencia estas informaes.
MATERIAL E MTODOS
Este sistema tem a propriedade de monitorar o eletrocardiograma, temperatura superficial da pele e presso arterial, a partir de um sistema criado com prioridade na utilizao de componentes de alta tecnologia, no que diz respeito confiabilidade, consumo de energia e capacidade de identificar situaes especficas, da condio fsica do paciente durante o monitoramento. O funcionamento do sistema dividido em trs importantes etapas, o diagrama da Figura 1, mostra essas etapas simplificadas:
Figura 1 - diagrama de etapas do projeto.
Sinais O ECG ser medido continuamente para que as condies gerais do paciente possam ser monitoradas durante o teste, a temperatura pode ser adquirida em um espao de tempo mais longo pois sua taxa de variao baixa. A presso arterial de maneira peridica ser coletada a cada perodo definido a critrio do profissional de sade, que estar aplicando exame.
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Temperatura. A temperatura do paciente ser adquirida atravs de um sensor semicondutor, neste caso o LM35, do fabricante National Semiconductor, que estar preso ao corpo junto aos eletrodos de ECG. A variao em tenso para medida de temperatura durante o teste varia de 340mV a 410mV. Isto foi verificado em uma amostragem feita em dois indivduos em teste feito numa bicicleta ergomtrica. A temperatura corporal tem uma elevao de 3C em um perodo de 5 minutos. Visto as caractersticas de resposta deste componente ele acoplado ao C no pino 60, entrada A1 referente ao canal analgico 1.
Cada eletrodo fixado sobre a pele, logo aps estar limpa, e conectados ao amplificador de instrumentao, esquema na Figura 3. O amplificador de instrumentao (AI), tem a caracterstica de eliminar a tenso de modo comum existente no sinal, que no caso da ECG fica em torno de 1,5V , e amplificar o sinal que sai dos eletrodos com um valor de 0,5mV a 30mV . Condicionando assim o sinal a uma tenso em torno de 500mV a 3V , adequando assim ao valor caracterstico do C. A Figura 4 mostra as tenses tpicas de um teste vistas no osciloscpio logo aps serem amplificadas.
Eletrocardiograma (Cooper, 1986) Para aquisio do sinal de ECG trs eletrodos fixados ao trax (Figura 2) captam a diferena de potencial gerado pela atividade eltrica dos msculos cardacos, amplificados por um amplificador de instrumentao para serem tratados no microcontrolador.
Figura 3 - Amplificador de instrumentao com LMC6084.
Figura 2 - Posio dos eletrodos em funo do microcontrolador.
Figura 4 - Valores de tenso do ECG na sada do AI.
233
Com estes nveis de tenso o ADC12 do C trabalha com uma boa folga. E com a freqncia do sinal variando de 0,5Hz a 100Hz, a taxa de amostragem fica referenciada ao oscilador de 5MHz, pr-fixado pelo fabricante do C, podendo ser alterado em tempo de excusso para ajuste da amostragem. O amplificador de instrumentao LMC6084 foi calculado, mantendo todos os resistores R iguais (Figura 5) somente com RG para variar o ganho, utilizando as seguintes frmulas:
da presso real no interior das artrias. O principal objetivo registrar a variao da presso com referncia ao antes, durante e depois da carga de exerccios do teste ergomtrico. Nesta medida ser utilizado o sensor piezo eltrico, que capta a variao da presso atravs de uma cmara de ar, que envolve o pulso do paciente, inflada a partir de um sistema automtico, (aparelho comercial da empresa MARK of FITNESS, modelo MF-81, Figura 6) at que atinja um valor de presso ligeiramente acima da presso arterial comum, cerca de 200mmHg. Este sensor, localizado no interior do MF81, est acoplado cmara de ar que alimenta o sistema, e gera uma sada em onda quadrada com freqncia de 15,78kHz fixa, variando conforme a diferena de presso a sua largura de pulso (Figura 7). Os componentes internos mostrados na Figura 8, tm seu controle automtico necessitando apenas que o paciente ligue o aparelho.
Sendo Av o ganho de tenso R = 10k.
Figura 5 - Ligao da sada do amplificador de instrumentao.
Presso Arterial A presso arterial adquirida atravs de um mtodo no invasivo, traduz apenas uma estimativa
Figura 6 - local do sensor no MF-81.
234
A Figura 7 detalha o sinal originado do sensor. O canal 1 do osciloscpio, mostra uma tenso negativa de 2,4V, anulando assim a possibilidade de ligao direta no C. Neste caso foi utilizado um circuito com um FET utilizado como chave, gerando um valor que pode ser lido pelo MSP430, o esquema eltrico est na Figura 9.
Figura 7 - Sinal do sensor do monitor MF-81
Figura 9 - Circuito condicionamento para o sensor do MF-81.
Com este circuito, o C fica encarregado de processar a variao da largura de pulso. Para isso o sinal vindo do sensor conectado no pino TA0 e TB1 com a funo de interrupo timer. Verificando na Figura 10, a largura de pulso reduzida at que a presso sistlica seja percebida pelo sensor. Da para frente ela incrementada, a cada pulsao, at que uma variao seja menor que a percebida pelo ouvido humano, com referncia ao mtodo de Riva Rossi (VARDAN, 1983).
Figura 8 - Componentes internos do MF-81.
Ao ser ligado, o MF-81 leva trs segundos e inicia a bomba de ar para encher o compartimento. Neste momento aguarda uma resposta do sensor que se ativa logo aps 3mmHg em sua entrada, na Figura 8 a tubulao que sai da bomba alimenta tambm o sensor. O MF-81 enche a cmara de ar at 185mmHg e esvazia a uma taxa de 2mmHg/s, o sensor capta qualquer variao de presso na cmara devido expanso e contrao das artrias, ento a partir do mtodo oscilomtrico convertida a oscilao em mmHg e mostrada na tela.
Figura 10 - 1= procura sistlica. 2 = procura diastlica.
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ZigBee Logo aps a aquisio e tratamento dos sinais pelo MSP430, eles so transmitidos via radio ao software supervisrio pelo modulo ZigBee, que est ligado diretamente a porta serial do MSP430. O ZigBee trabalha em uma freqncia de 2GHz e permanece no modo dormindo (sleep) que destaca seu baixo consumo e ativado automaticamente no instante de uma transmisso ou recepo. Para a efetivao da transmisso so necessrios dois mdulos, um coordenador e outro fim de rede. O coordenador estabelece uma comunicao USB com o PC, enquanto que o mdulo fim de rede fica conectado ao RX e TX do microcontrolador. Esta transmisso pode chegar a 100m em campo aberto. A Figura 11 mostra os mdulos.
diferentes em uma rede, necessrio a identificao do n, que vai estabelecer comunicao com o coordenador, basta especificar em Networking, o nome do n fim de rede a comunicar (www. maxstream.net).
MSP430F133 Com o microcontrolador MSP430F133 sero adquiridos os trs sinais, ECG, temperatura e presso arterial, ligando a sada do amplificador do ECG em uma entrada ADC12-A0 mais especificamente, o LM35 na entrada ADC12-A1 e o sensor do aparelho de presso ao pino de interrupo do timer A e o ZigBee nos pinos da comunicao serial. A Figura 12 mostra as ligaes do MSP430 sensores e serial.
Figura 11 - Mdulo de comunicao ZigBee.
Figura 12 - Esquema simplificado de ligao dos sensores ao microcontrolador.
Dentre as configuraes mnimas, para uma comunicao serial RS-232, esto a velocidade de comunicao (BD Baud Rate), paridade (NB Parity) e bit de finalizao (Stop Bit). Como os mdulos ZigBee tem uma grande capacidade de comunicao entre mdulos, chegando a 65535 ns
O IAR (IAR Embedded Workbench IDE), foi escolhido entre algumas alternativas para compilao do programa para este projeto. No site (www.iar. com), est disponvel a verso free, deste montador limitado em 2kbytes de programa.
236
Para estabelecer comunicao com o MSP430F133 est disponvel no site (www.olimex.com), o circuito de comunicao entre o PC e o MSP430, que neste projeto foi integrado na mesma placa da aplicao.
Assim, para essa aplicao, alguns perifricos so destacados na Figura 13. As portas P1 a P6, ADC12 o Timer A e a USART, encarregada da comunicao serial.
Figura 13 - Perifricos do MSP430 utilizados neste projeto.
Das portas, so utilizadas a P1.1, interrupo Timer A, entrada do sensor de presso, P3.4 e P3.5 comunicao serial, P6.0 entrada do ECG e P6.1 sensor de temperatura.
Um esquemtico simplificado da placa de controle est na Figura 14.
Figura 14 - Esquema simplificado da placa de aquisio.
237
Software SISULBRA ElipseSCADA O ElipseScada com suas flexibilidades e de relativamente facilidade de configurao, na comunicao com outros dispositivos, foi aplicado para fazer o gerenciamento das informaes necessrias para realizar o monitoramento dos testes fsicos. O aplicativo para o Elipse foi projetado para disponibilizar uma tela inicial, (Figura 15), que serve para cadastrar o paciente que realizar o teste, para fins de histrico e relatrio do exame.
Figura 16 - Tela de trabalho.
Nesta tela esto disponveis os botes para iniciar o monitoramento do ECG e temperatura, bem como a presso arterial. Tambm so indicados sinais de emergncia para avisar caso alguma varivel esteja fora do valor pr-determinado.
CONCLUSES
Figura 15 - Tela inicial do SISULBRA software de gerenciamento.
Para iniciar o monitoramento, basta clicar no boto iniciar exame, no entanto possvel cadastrar o paciente antes de iniciar o processo, s clicar em novo paciente e a tela de cadastro aparecer. Logo aps, basta voltar para a tela principal e clicar em iniciar exame, para que a tela de trabalho inicie, como na Figura 16.
O SISULBRA contempla testes fsicos realizados em esteira ou bicicleta ergomtrica, e tambm em pista atltica, este sistema foi concebido para dar ao paciente mais conforto na hora de um exame de condicionamento fsico, onde o mdico avalia a evoluo dos sinais vitais do paciente durante o esforo fsico. A tecnologia wireless disponvel, neste caso o ZigBee, teve tambm o propsito de disponibilizar ao profissional que avalia um condicionamento fsico, a possibilidade de agregar ao teste situaes reais, sendo possvel, pelo fato de o ZigBee comunicar-se simultane-
238
amente com at 65535 dispositivos diferentes. Que viabilizaria, por exemplo, o teste de uma equipe esportiva, a fim de avaliar qual o atleta mais preparado fisicamente para uma competio. O fato de libertar o paciente dos cabos, que em um teste convencional o prende ao aparelho monitor, mantendo o mesmo tipo de exame, agregando outros parmetros, como a temperatura, abre condies para ampliar este projeto, agregando outras tecnologias como o envio deste teste on-line, para um consultrio mdico remoto. Este projeto tem como principal objetivo futuro, a implementao da medida de presso, pelo tempo de trnsito de cada pulsao sangunea, a fim de correlacionar, estimar a presso sangunea continuamente evitando que, como neste projeto o paciente ter que parar o exerccio, at que a presso seja medida.
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240
ndice de Autores
ALLGAYER, Maringela da Costa ............................................................................................................................11 ANDRADE, Sheila Coitinho de ...............................................................................................................................197 BAKKAR, Fernanda Cristina ...................................................................................................................................123 BARETTA, Jocyane Ricelly ......................................................................................................................................181 BERNARDI, Roberto Tesi...........................................................................................................................................21 BESKOW, Ana Paula .................................................................................................................................................85 BONA, Silvia ...........................................................................................................................................................109 BORBA, Miriam Santos .............................................................................................................................................47 BOULHOSA, Simone Aparecida Ribeiro .................................................................................................................181 BRUSAMARELLO, Valner Joo..............................................................................................................................231 BUSANELLO, Estela Natacha Brandt ......................................................................................................................85 CANANI, Paula ......................................................................................................................................................197 CAPPELLETTI, ngela Maria ...............................................................................................................................181 CASANOVA, Yara Silva ...........................................................................................................................................27 CASTRO, Mauro Antnio Alves................................................................................................................................47 CERVEIRA, Fabricia Alves ........................................................................................................................................27 CHRISTOFF , Alexandre Uarth ..................................................................................................................................71 COLVARA, Diego....................................................................................................................................................135 CORNELIO, Luiz Eduardo......................................................................................................................................189 COSSA, Rafael Jesus ................................................................................................................................................221 CRISPIM, Daisy .........................................................................................................................................................53 DALAGNA, Raquel ................................................................................................................................................135 DALLAROSA, Diovana Maria................................................................................................................................123 DAMICO, Jos Geraldo Soares ................................................................................................................................157 DANIEL, Cristian Teixeira .......................................................................................................................................231 DANYLUK, Ocsana Snia.......................................................................................................................................189 DAVID, Cntia de .......................................................................................................................................................97 DIAS, Priscila Pedroso ...............................................................................................................................................181 DREYER, Cristina ....................................................................................................................................................123 FAGANELLO, Josiane ..............................................................................................................................................27
241
FERNANDES, Carolina Gonalves ...........................................................................................................................85 FERRAZ, Alexandre de Barros Falco ........................................................................................................................37 FERREIRA, Luiz Alberto dos Santos ........................................................................................................................157 FERST, Juliana Germano..........................................................................................................................................123 FONSECA, Andr Salvador Kazantzi........................................................................................................................27 FRANCESCONI, Carlos Fernando ...........................................................................................................................61 FREITAS, Cintia de la Rocha ...................................................................................................................................135 FURTADO, Tatiane Chao .........................................................................................................................................11 GAMA, Kelly Cristina Leite da...................................................................................................................................47 GOMES, Carmen Hessel Peixoto ..............................................................................................................................189 GOMES, Isabel Cristina ..........................................................................................................................................181 GONALVES, Andra Krger................................................................................................................................135 GONALVES, Mariane Hanke ................................................................................................................................53 GUEDES, Neiva Maria Robaldo ................................................................................................................................11 GUIMARES, Jos Luiz ..........................................................................................................................................123 IKUTA, Nilo ..............................................................................................................................................................27 JUNG, Diego Marques Henriques ...............................................................................................................................71 KAHL, Vivian Franclia Silva ......................................................................................................................................37 KLEIN, Joo Daniel de Oliveira ................................................................................................................................231 KOERICH, Priscilla Karina Vitor ...............................................................................................................................27 KOSACHENCO, Beatriz Guilhembernard ..............................................................................................................123 KRUG, lisson Bohnert............................................................................................................................................145 KUNSLER, Alexandre Bosquetti ..............................................................................................................................157 LIMA, Jssica Santos de ............................................................................................................................................169 LOBO, Ftima de Almeida ......................................................................................................................................135 LOPES, Andrea Bernardes .......................................................................................................................................197 LOPES, Beatriz MachadoTerra ...................................................................................................................................27 LOPES, Paulo Tadeu Campos ...................................................................................................................................135 LORENZI, Fabiana ..................................................................................................................................................145 LUNGE, Vagner Ricardo .....................................................................................................................................21, 27 MARQUES, Edmundo Kanan ...................................................................................................................................27 MARRONI, Cludio Augusto ....................................................................................................................................97 MARRONI, Norma Anair Possa ........................................................................................................................97, 109 MATHIAS, Joana Bittencourt ....................................................................................................................................27 MAZZOLENI, Luiz Edmundo ...................................................................................................................................61 MONTICELLI, Gislene ...........................................................................................................................................181 MORALES, Analcia Schiaffino ..............................................................................................................................145 MOREIRA, Fernanda Kieling .....................................................................................................................................27
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MOREIRA, Magda Ins ...........................................................................................................................................189 MOTTA, Lisiane da .................................................................................................................................................181 MOTTIN, Vanessa Daniele ........................................................................................................................................21 MOURA, Alana Pimentel ..........................................................................................................................................85 NICOLAO, Mariano ...............................................................................................................................................145 NUNES, Roberta da Silva ..........................................................................................................................................37 OLIVEIRA, Carmem Aristimunha de ......................................................................................................................197 OLIVEIRA, Marcelo Ganzarolli de ............................................................................................................................97 OLIVEIRA, Sandro Teixeira de.................................................................................................................................169 OLIVEIRA, Srgio Jos de ..........................................................................................................................................21 OSRIO, Marlia Correa ...........................................................................................................................................61 PARRAGA, Adriane ................................................................................................................................................145 PASSOS, Daniel Thompsen ..................................................................................................................................11, 21 PEREIRA, Fernanda Macedo ...................................................................................................................................221 PEREIRA, Gisele Lopes ............................................................................................................................................221 POZZER, Katia Maria Paim .....................................................................................................................................169 RAUDALES, Jos Jesus Casco .................................................................................................................................123 RECH, Tssia Flores ..................................................................................................................................................61 RICHTER, Marc Franois .........................................................................................................................................37 RODRIGUES, Graziella ............................................................................................................................................97 RODRIGUES, Paulo Ricardo Centeno .....................................................................................................................123 ROSA, Darlan Pase da .............................................................................................................................................109 ROTH, Paulo Ricardo de Oliveira ...............................................................................................................................71 RYBARCZYK FILHO, Jos Luiz ................................................................................................................................47 SANDER, Guilherme Becker......................................................................................................................................61 SANTOS, Ana Maria Pujol Vieira ...........................................................................................................................135 SANTOS, urea Adiles Machado dos......................................................................................................................197 SANTOS, verton Rodrigo.......................................................................................................................................211 SANTOS, Jssica Boaventura dos...............................................................................................................................53 SANTOS, Ktia Gonalves dos ..................................................................................................................................53 SARMENTO, Merielen da Silva ................................................................................................................................37 SERRES, Ricardo Silva ............................................................................................................................................169 SESTI, Lus Fernando Castagnino...............................................................................................................................53 SILVA, Cntia Viviane Ventura da .............................................................................................................................211 SILVA, Juliana da .......................................................................................................................................................37 SILVA, Luciano Basso da ............................................................................................................................................61 SILVA, Lucila de Bortoli da.........................................................................................................................................85 SILVA, Simone Silva da ............................................................................................................................................169 SILVEIRA, Fabiana ....................................................................................................................................................11
243
SIMON, Daniel ..........................................................................................................................................................61 SOUZA, Gabriela Freitas de .......................................................................................................................................97 TEIXEIRA, Adriane Ribeiro .....................................................................................................................................135 THEISEN, Themis Medeiros ....................................................................................................................................123 TIEPPO, Juliana.........................................................................................................................................................97 VALIATTI, Bruna Borba ...........................................................................................................................................97 VERCELINO, Rafael .................................................................................................................................................97 VOGT, Felipe Incio ...................................................................................................................................................21 WAJNER, Moacir ......................................................................................................................................................85 WEIMER, Tania de Azevedo ......................................................................................................................................11 WOBETO, Ana Paula ...............................................................................................................................................27 ZAGO, Alcides Jos ..................................................................................................................................................123 ZAGO, Alexandre do Canto .....................................................................................................................................123
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REVISTA DE INICIAO CIENTFICA DA ULBRA 2008

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Caracterizao de redes de interao protica associadas ao desenvolvimento do melanoma ...........................47

Estudo do polimorfismo -31C/T do gene da interleucina 1-beta em pacientes disppticos funcionais................61

Papel da melatoninano estresse oxidativo do fgado e sangue de ratos cirrticos ............................................109

CINCIAS HUMANAS A Casa t cheia!: alguns significados da Praa Dona Mocinha.................................................................157

A tecnologia da guerra nos relevos Neo-Assrios..........................................................................................169

Personalidade criminal: do ato de matar ao requinte de crueldade ................................................................197

ENGENHARIAS Estudo da viabilidade da utilizao de carepa de ao na produo de concreto..............................................221

ndice de Autores ......................................................................................................................................241

Dr. Erwin Francisco Tochtrop Jnior

Dra. Ndia Schrder

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Avaliao hematolgica e bioqumica de filhotes de arara-azul (Anodorhynchus hyacinthinus) no Pantanal-MS

Acadmica do Curso de Biomedicina/ULBRA Professora-Orientadora do Curso de Medicina Veterinria/ ULBRA (angelallgayer@uol.com.br)

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1,00,3 (21)A 35,631,0 (07) 195,466,1 (11) 1,70,8 (16)A

Nmero entre parnteses corresponde ao tamanho da amostra; signicativas entre idades.

e : diferenas signicativas entre sexos;

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teriologia do Hospital Veterinrio/ULBRA

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Figura 1 - Leses de grau 1 em estmago de Suno (paraqueratose).

Figura 4 - lcera gstrica com hemorragia (grau 4).

Figura 2 - Leses de grau 2 (paraqueratose e Sulcos na regio esofagiana).

Figura 3 - Leses de grau 3 (diminui a rea amarelada e aumentam os sulcos).

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Deteco de fatores de virulncia de Escherichia coli atravs da PCR em tempo real

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LT F5 Threshold cycle F18

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Figura 1 - Classes de danos no Ensaio Cometa.

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Caracterizao de redes de interao protica associadas ao desenvolvimento do melanoma