Вы находитесь на странице: 1из 0

Universitatea de tiine Agronomice

i Medicin Veterinar din Bucureti


Facultatea de Agricultur

Departamentul de Studii pentru nvmnt cu Frecven Redus
(DIFRED - FA)

Specializarea: Biologie



Prof. univ. dr. Viorica BLAN





GENETICA I
AMELIORAREA PLANTELOR






















Bucureti
2012
1
CUPRINS

CAPITOLUL 1-PRIVIRE DE ANSAMBLU ASUPRA TEMATICILOR DEZVOLTATE
N MANUALUL GENETICA I AMELIORAREA PLANTELOR.
SPECIFICUL METODELOR I MATERIALULUI BIOLOGIC EXPERIMENTAT
N DOMENIUL TIINELOR GENETICE I DE AMELIORARE A PLANTELOR..1

TEMA NR. 1 (Capitol 1) -PARTICULARITI ALE STUDIULUI GENETICII I
AMELIORRII LANTELOR.............................................................................................................2

1.1. Domeniile i metodele de studiu ale geneticii incluznd genetica plantelor ....................................3
1.1.1 Domeniile de studiu ale geneticii ....................................................................................................3
TEST DE EVALUARE............................................................................................................................4
1.1.2. Metodele specifice folosite n experimentele de genetica plantelor...............................................5..
TEST DE EVALUARE............................................................................................................................7
1.1.3 Caracteristici generale ale organismelor folosite n studiile genetice..............................................7
1.1.4 Caracteristici generale ale organismelor folosite n genetica plantelor............................................9
TEST DE EVALUARE...........................................................................................................................10.
1.2 Particularitile ameliorrii plantelor i tehnicile de lucru folosite....................................................11
TEST DE EVALUARE............................................................................................................................16
REZUMATUL TEMEI NR.1( Capitol 1).................................................................................................17
TEST RECAPITULATIV PENTRU TEMA NR. 1 (Capitol 1)...............................................................19


CAPITOLUL 2 - STUDII DE GENETIC CLASIC A PLANTELOR.........................................21
TEMA NR. 1 (Capitol 2) - STUDII I EXPERIMENTE FCUTE DE GREGOR MENDEL
I LEGILE GENETICE PE CARE SE BAZEAZ EXPERIMENTELE ACTUALE
DE GENETIC A PLANTELOR .....................................................................................................21

1.1 Definirea termenilor folosii n genetica mendelian..........................................................................22
TEST DE EVALUARE............................................................................................................................24
1.2 Experimente fcute de Gregor Mendel la mazrea de grdin (Pissum sativum), prin care a
stabilit prima lege genetic (legea segregrii) ........................................................................................24

1.2.1 Producerea dihibrizilor de mazre (F
1
)............................................................................................24
TEST DE EVALUARE............................................................................................................................26
1.2.2 Experimente ale lui Gregor Mendel prin care se explic segregarea unei singure caracteristici
a plantelor de mazre..............................................................................................................................27

1.3 A doua lege a lui Mendel Legea privind independena genelor.....................................................33
TEST DE EVALUARE............................................................................................................................34
1.4. Experimente efectuate la cais pentru pentru a pune n eviden mecanismele genetice ale
motenirii caracteristicii formei fructului..............................................................................................35

TEST DE EVALUARE............................................................................................................................37
2
REZUMATUL TEMEI NR.1(Capitol 2)...............................................................................................41
TEST RECAPITULATIV PENTRU TEMA NR. 1 (Capitol 2)............................................................42
TEMA NR. 2 (Capitol 2) - MEIOZA I MITOZA LA PLANTE....................................................44
2.1 De ce se divid celulele?.....................................................................................................................45
TEST DE EVALUARE...........................................................................................................................46
2.2 Mitoza la plantele superioare.............................................................................................................47
2.2.1 Fazele de diviziune ale mitozei la plantele superioare....................................................................50
TEST DE EVALUARE............................................................................................................................51
TEST DE EVALUARE............................................................................................................................56

2.2.2 Mitoza i clonarea57
2.3 Meioza i ciclul de via al plantelor..58
2.3.1 Cromozomii diploizi i haploizi la plante........................................................................................58
2.3.2 Alternarea generaiilor la algele multicelulare.................................................................................58
2.3.3 Ciclul de via la plantele Angiospermae59
TEST DE EVALUARE............................................................................................................................64
2.3.4 Meioza, etap esenial n alternarea generaiilor............................................................................64
2.3.5 Fazele de diviziune ale meiozei, n timpul procesului de formare a polenului prin
microsporogenez la Lilium i la porumb (Zea mays).............................................................................66

TEST DE EVALUARE............................................................................................................................ 75
REZUMATUL TEMEI NR 2(Capitol 2...................................................................................................77
TEMA NR. 3 (Capitol 2) - LINKAGE GENETIC I HARTA LINKAGE LA PLANTE.............79
3.1 Noiuni introductive...........................................................................................................................80
3.2 Mecanismul linkage la plante ........................................................................................................... .81
TEST DE EVALUARE............................................................................................................................83
3.3 Linkage genetic i harta genetic........................................................................................................83
3.4 Harta cromozomal la fenotipurile de porumb analizate...................................................................85
TEST DE EVALUARE...........................................................................................................................87
3.5 Harta genetic i harta fizic a genelor..............................................................................................88
3.5.1 Harta genetic.................................................................................................................................88
3.5.2 Harta fizic a genelor......................................................................................................................91
3.5.3 Asocierea genetic..........................................................................................................................91

TEST RECAPITULATIV PENTRU TEMA 3(Capitol 2)......................................................................92
REZUMATUL TEMEI NR. 3 (Capitol 2) ...............................................................................................93
TEMA NR. 4 (Capitol 2) - CROSSING OVER CROMOZOMAL LA PLANTE...........................95
4.1. Crossingover cromozomal, meiotic..................................................................................................95
4.1.1. Cuplarea cromozomilor omologi n zigoten..................................................................................96
4.1.2. Condensarea i spiralizarea cromozomilor n pachiten n procesul sinapsei ................................97
3
4.1.3 Clivajul cromozomilor n diploten...................................................................................................98
4.1.4 Mecanismul crossing over-ului meiotic ..........................................................................................96
TEST DE EVALUARE............................................................................................................................99
4.1.5 Recombinarea genetic prin conversia genelor ............................................................................101
4.1.6 Recombinarea genetic nebalansat............................................................................................103.
4.2 Crossingover-ul meiotic la cais........................................................................................................103
4.2.1 Etape ale determinrii cross overului meiotic la cais.....................................................................103
TEST DE EVALUARE..........................................................................................................................109
4.3 Crossingover-ul mitotic....................................................................................................................109

REZUMATUL TEMEI NR. 4 (Capitol 2 ).............................................................................................110
TEST RECAPITULATIV PENTRU TEMA 4 (Capitol 2 )...................................................................111
TEMA NR. 5 (Capitol 2 ) INTERACIUNEA GENELOR LA PLANTE.....................................112
5.1 Interacia diferitelor gene care controleaz identitatea organelor florale.........................................114
TEST DE EVALUARE..........................................................................................................................117
5.2 Interaciunea genelor alele la plante.................................................................................................117
TEST DE EVALUARE..........................................................................................................................120
5.3. Interaciunea genelor care ocup loci diferii n cromozom, la plante............................................121
TEST DE EVALUARE..........................................................................................................................127
TEST RECAPITULATIV PENTRU TEMA NR. 5(Capitol 2) .............................................................128
REZUMAT AL TEMEI NR. 5 (Capitol 2) ............................................................................................129
TEMA NR. 6 (Capitol2) - VARIAII N NUMRUL DE CROMOZOMI I EFECTELE
SEMNIFICATIVE ASUPRA AMELIORRII UNOR CARCTERISTICI ALE
PLANTELOR..........................................................................................................................................130

6.1 Cariotipul - criteriu de recunoatere a speciilor..................................................................................131
TEST DE EVALUARE
6.2 Variaiile numeric-cromozomale la plante.........................................................................................133
6.2.1 Aneuploidia.....................................................................................................................................133
TEST DE EVALUARE...........................................................................................................................135
6.2.1.1 Originea aneuploidiei i dezvoltarea aneuploizilor.....................................................................136
6.2.1.2 Efectele fenotipice ale Aneuploidiei i importana lor pentru genetica
i ameliorarea plantelor.............................................................................................................................138

TEST DE EVALUARE............................................................................................................................141
6.2.2 Euploidia............................................................................................................................. .............141
6.2.2.1 Monoploidia..142
6.2.2.2 Poliploidia.143
TEST DE EVALUARE............................................................................................................................146
6.3 Inducerea i selectia autopoliploizilor................................................................................................147
4
6.4. Inducerea i ameliorarea alopoliploizilor..........................................................................................148
REZUMATUL TEMEI NR.6 (Capitol 2)...............................................................................................150
TEST RECAPITULATIV PENTRU TEMA NR.6 (Capitol 2)..............................................................151


CAPITOLUL 3 - GENETICA CARACTERISTICILOR CANTITATIVE I APLICAII N
AMELIORAREA PLANTELOR........................................................................................................154

TEMA NR. 1 (Capitol3) - ANALIZE CONVENIONALE I MOLECULARE A EREDITII
CARACTERISTICILOR POLIGENICE LA PLANTE....................................................................155

1.1. Ereditatea caracteristicilor cantitative ..............................................................................................156
TEST DE EVALUARE...........................................................................................................................159
1.2. Cartarea locilor caracteristicilor cantitative (QTL) i markeri care asist selecia pentru ameliorarea
produciei plantelor...................................................................................................................................160

1.2.1 Markeri genetici care asist selecia plantelor.................................................................................161
1.2.1.1 Ce sunt markerii genetici?............................................................................................................161
TEST DE EVALUARE............................................................................................................................164
1.2.1.2 Construcia hrii genetice............................................................................................................164
a.Ce este harta genetic.......................................................................................................................164

TEST DE EVALUARE............................................................................................................................165
b. Comparaii ntre markerii (A) codominani i (B) dominani.........................................................166
1). Realizarea hrii populaiilor.........................................................................................................166


TEST DE EVALUARE............................................................................................................................168
2). Identificarea polimorfismului........................................................................................................169


TEST DE EVALUARE............................................................................................................................171
3). Analiza markerilor moleculari .......................................................................................................172


TEST DE EVALUARE172
4). Distana genetic i funciile cartrii................................................................................................174

TEST DE EVALUARE............................................................................................................................174


1.2.1.3 Analize QTL.174
a.Principii ale analizelor QTL...............................................................................................................175
b.Principii de detectare a QTL cartat.....................................................................................................176
TEST DE EVALUARE............................................................................................................................177

REZUMATUL TEMEI NR.1(Capitol 3).................................................................................................177
TEST RECAPITULATIV PENTRU TEMA NR.1..................................................................................179
TEMA NR 2 (Capitol 3) - METODE DE DETECTARE A QTL I A MARKERILOR CARE
ASIST SELECIA PLANTELOR N PROGRAMELE DE AMELIORARE..............................181

5
2.1 Metode de detectare QTL................................................................................................................182
2.1.1.Analiza unui singur marker .........................................................................................................182
2.1.2. Metoda intervalului simplu de hart ..........................................................................................182
2.1.3. Metoda intervalului compus de hart .........................................................................................183
TEST DE EVALUARE........................................................................................................................185
2.2. Reprezentarea i descrierea QTLs detectat n intervalul de hart..................................................186.
2.3 Numrul de markeri i de spaii marker..........................................................................................188
2.4 Compararea hrilor linkage............................................................................................................188
2.5. Factorii care influeneaz detectarea QTLs....................................................................................189


TEST DE EVALUARE..........................................................................................................................196
2.6 Drum mai scurt al identificrii genelor marker de interes pentru caracteristicile cantitative..........197
2.6.1 Analizele segreganilor cantitativi BSA..........................................................................................197
2.6.2 Genotiparea selectiv ......................................................................................................................198
2.7 Decizii importante ce pot fi luate pe baza cartrii QTL....................................................................199
2.8 Cu privire la markerii care asist selecia plantelor n procesul de ameliorare..................................201
2.8.1 Validarea sau confirmarea markerilor depistai..............................................................................201
2.8.2 Conversia markerilor.......................................................................................................................202
TEST DE EVALUARE...........................................................................................................................203
2.9. Ameliorarea plantelor asistat de markeri.........................................................................................204
2.10 Costuri i beneficii ale analizelor MAS............................................................................................207
2.11 Markeri care asist ameliorarea plantelor prin backross..................................................................207
TEST DE EVALUARE...........................................................................................................................208

2.12 Tendine de folosire n viitor a cartrii QTL....................................................................................209
REZUMATUL TEMEI NR. 2 (Capitol 3)...............................................................................................211
TEST RECAPITULATIV PENTRU TEMA NR. 2 (Capitol 3)..............................................................214
TEMA NR.3 (Capitol 3) - NOI TEHNICI DE CARTARE A GENOMULUI PLANTELOR N
SCOPUL DEPISTRII MARKERILOR GENETICI CARE ASIST SELECIA .....................216

3.1. Secvenializarea PCR ( Polymerase Chain Reaction) ......................................................................217
3.2 Tipurile de markeri moleculari folosii n ameliorarea plantelor.......................................................218
3.2.1 Markerii RFLP.................................................................................................................................218
3.2 2 Markerii RAPD................................................................................................................................219
3.2.3. Markerii AFLP...............................................................................................................................220
3.2.4 Markerii STSs (Succesiunea situsurilor ataate)............................................................................221
3.2.5 Markerii microsatelii sau SSR, (Simple secvene repetate) (Simple sequence Repeat).................222
3.2.6 Single Nucleotide Polymorphism (SNP).........................................................................................223
3. 3 Markerii izozimici ...........................................................................................................................224

6
3.4 Unele avantaje i dezavantaje ale celor mai cunoscui markeri moleculari pretabili n ameliorarea
plantelor......................................................................................................................................................224
TEST DE EVALUARE.............................................................................................................................227
3.5 Tehnici de detectare a polimorfismului ADN.....................................................................................228
3.5.1 Gel Electroforeza ........................................................................................................................... ..228
3.5.2 Electroforeza capilar array................................................................................................................230
3.5.3 Matrix asistat de laser (Procedeul mass-spectrofotometric MALDI-TOF MS) ...............................230
TEST DE EVALUARE.............................................................................................................................230
3.6.Tipuri de populaii folosite n cartarea molecular..............................................................................231
TEST RECAPITULATIV PENTRU TEMA NR. 3 (Capitol 3)...............................................................232
REZUMATUL TEMEI NR. 3 (Capitol3).............................................................................................. ....234

1
CAPITOLUL 1

PRIVIRE DE ANSAMBLU ASUPRA TEMATICILOR DEZVOLTATE N
MANUALUL GENETICA I AMELIORAREA PLANTELOR
SPECIFICUL METODELOR I MATERIALULUI BIOLOGIC EXPERIMENTAT
N DOMENIUL TIINELOR GENETICE I DE AMELIORARE A PLANTELOR

Genetica i ameliorarea plantelor sunt tiine de sintez bazate pe cunoatere, cu o
evoluie continu, care contribuie la nelegerea i conservarea biodiversitii lumii
vegetale. Referindu-ne ntr-un nceput la cunoaterea n domeniul geneticii plantelor, este
important s plasm genetica general ntr-un cadru conceptual. Pentru a face acest lucru
este important s nelegem dimensiunea geneticii ca tiin. Dup concepiile moderne de
dup anul 2000, genetica are trei arii mari de studiu i anume: Genetica clasic bazat pe
prima i a doua Lege a lui Mendel, Genetica molecular, bazat pe Dogma central a
Geneticii moleculare i Genetica evoluionist, bazat pe teoria seleciei naturale lansat de
Charles Darwin (Phillip McClean, 2000).
Ameliorarea modern a plantelor se bazeaz pe nelegerea i cunoaterea geneticii
mendeliene i nonmendeliene, a geneticii cantitative i calitative, a geneticii populaiilor i
a geneticii moleculare.
Manualul Genetica i ameliorarea plantelor, va pune accentul pe mecanismele
genetice care sunt aplicate n ameliorarea plantelor i tehnicile de ameliorare bazate pe
aceste mecanisme.
Studenii vor cpta cunotine teoretice eseniale i o experien practic n
interpretarea i analizarea datelor colectate din experimente genetice, n estimarea unor
parametrii genetici i a heritabilitii caracteristicilor motenite.
Vom regsi n manual, designul unor programe de ameliorare bazate pe tehnici
eficiente de selecie, inclusiv ctigul genetic ateptat, ca urmare a aplicrii diferitelor
metode de ameliorare i selecie i cum vom adapta metodele de ameliorare la speciful
culturilor, respectiv a speciilor de plante i a interacionrii expresrii unor caracteristici
genetice, cu condiiile de mediu.
Factorii care trebuie luai n seam atunci cnd se lucreaz cu linii consangvinizate,
linii sintetice sau cu indivizi i familii hibride se vor regsi de asemenea n manual.
Studenii vor nva s aplice tehnici pentru selecia unor caracteristici multiple, incluznd
aici indicii i markerii moleculari care asist selecia. Se vor arta cile prin care se pot
2
controla erorile experimentale n experienele de genetic i ameliorare a plantelor i
interaciile genotipului cu mediul.

TEMA NR. 1 (Capitol 1)

PARTICULARITI ALE STUDIULUI GENETICII I AMELIORRII
PLANTELOR

Uniti de nvare:
domeniile de studiu ale geneticii, incluznd genetica plantelor
metodele specifice folosite n experimentele de genetica plantelor
caracteristici generale ale organismelor folosite n studiile genetice
caracteristici generale ale organismelor folosite n genetica plantelor
particularitile ameliorrii plantelor i tehnicile de lucru folosite

Obiectivele temei:
- familiarizarea cu tematica manualului Genetica i ameliorarea plantelor;
- nelegerea i fixarea aspectelor privind domeniile, metodele de studiu i a
particularitilor organismelor folosite n experimentele de genetic n general i n
genetica plantelor n special;
- nelegerea necesitii studierii ameliorrii plantelor ca pe un domeniu aplicativ al
geneticii plantelor;
- cunoaterea tehnicilor folosite n ameliorarea plantelor, a cror detalii studenii i
le vor nsui ulterior n cadrul tematicii special consacrate.
Timpul alocat temei: 4 ore
Bibliografie recomandat:
1. Phil McClean website, 2012, http/www.ndsa.nodal.edu/instruct/mcclean (Department of
Plant Sciences, Loftsgard Hall 270BNDSU Dept, Director, Genomics and Bioinformatics
Program, North Dakota State University)
2. www.eu-sol.net/public/plant-breeding
3. George Acquaah, 2006. Principles of Plant Genetics and Breeding. Blackwell Publishing
ISBN: 9781405136464, http://www.blackwellpublishing.com

1.1. Domeniile i metodele de studiu ale geneticii incluznd genetica plantelor
3
Pentru nelegerea ulterioar a temelor ce vor fi aprofundate n manual, vom face o
incursiune de sintez n domeniile i metodele de studiu ale geneticii, inclusiv a geneticii
plantelor.
1.1.1 Domeniile de studiu ale geneticii
Genetica clasic bazat pe prima i a doua lege a lui Mendel.
1. Prima i a doua lege a lui Gregor Mendel cu privire la motenirea ereditar a
caracteristicilor calitative
2. Meioza i mitoza la plante
3. Cartarea cromozomilor somatici i ai sexului, bazat pe Linkage i Crossingover
4. Ereditatea extracromozomial
5. Citogenetica, cu referire la schimbarea structurii i numrului cromozomilor
6. Genetica cantitativ
Genetica molecular bazat pe dogma central a Geneticii moleculare
1. Structura ADN nuclear i a organitelor celulare
2. Structura i replicarea ADN
3. Transcripia i translaia informaiei genetice
4. Clonarea ADN
5. Controlul expresiei genelor
6. Mutaia i repararea ADN
Genetica evoluiei, bazat pe teoria seleciei naturale a lui Darwin
1. Evoluia ( teoria modern a evoluiei bazat pe echilibrul Hardy-Weinberg)
2. Speciaia
3. Genetica populaiei
Particularitile fiecreia dintre cele trei arii, sau domenii ale geneticii plantelor
sunt datorate n principal particularitilor structurale ale celulei vegetale, a modului de
reproducere i a metabolismului plantelor. De aceea, n experimentele genetice este
obligatoriu s se foloseasc i s se obin un material biologic autentic. Fiecare din cele
trei arii ale geneticii are cerinele proprii pentru experimentele performate. n genetica
clasic, cerina principal este ca materialul genetic cercetat s aib n zestrea sa genetic
alele alternative. Cnd experimentul este performat n aria geneticii moleculare, este
4
nevoie, ca materialul biologic s conin n fondul su genetic alelele specifice pe care
vrem s le studiem la nivel molecular i s avem proba de identificare i de analiz a
alelelor specifice. n multe studii, alelele pe care le vom studia sunt alele de tip slbatic. n
sfrit, populaia genetic cu o variaie accentuat a frecvenei genelor, este necesar
pentru succesul experimentului n domeniul geneticii evoluioniste. Pentru a determina
care tip de alele sunt coninute n fondul genetic sau care populaie este mai bun pentru
experimentul specific, este necesar s nelegem avantajele i dezavantajele diferitelor
specii biologice, care sunt folosite ca organisme test.

TEST DE EVALUARE
1. Cror cauze sunt datorate particularitile celor trei arii sau domenii ale geneticii
plantelor?
Rspuns:


2. Care sunt domeniile de cercetare ale geneticii plantelor?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
Subdomeniile geneticii clasice sunt:
a. Prima i a doua lege a lui Gregor Mendel cu privire la motenirea ereditar a
caracteristicilor calitative;
b. Meioza i mitoza la plante;
c. Cartarea cromozomilor somatici i ai sexului, bazat pe Linkage i Crossing over;
d. Ereditatea extracromozomial;
e. Citogenetica, cu referire la schimbarea structurii i numrului cromozomilor;
f. Genetica cantitativ;
g. Echilibrul Hardy-Weinberg.
Rezolvare: a, b, c, d, e, f
De rezolvat:
Subdomeniile geneticii moleculare sunt:
Particularitile celor trei domenii ale geneticii plantelor, se datoreaz n principal
particularitilor structurale ale celulei vegetale, a modului de reproducere i a
metabolismului plantelor.
5
a. Structura ADN nuclear i a organitelor celulare
b. Structura i replicarea ADN
c. Transcripia i translaia informaiei genetice
d. Clonarea ADN
e. Controlul expresiei genelor
f. Mutaia i repararea ADN
g. Speciaia

1.1.2. Metodele specifice folosite n experimentele de genetica plantelor
Ca orice tiin, tiina geneticii a progresat, folosind metode tiinifice adecvate.
Aceste metode au nceput a fi folosite, cnd genetistul (sau oricare dintre oamenii de
tiin), a fcut observaii asupra lumii biologice i apoi a propus ipoteze, prin care a
ncercat s explice observaiile fcute. Geneticianul iniiaz apoi un experiment sau o serie
de experimente proiectate pentru a dovedi sau a infirma ipotezele. La prima vedere,
parcurgerea acestui drum pare a fi unul drept, dar adevrul este c pot s apar multe
capcane.
Haidei s vedem, care sunt paii ce pot fi urmai n experimentele de genetica
plantelor:
1. Efectuarea unei observaii. Cnd facem o observaie (percepia structural de intelect),
trebuie s ne punem ntrebrile: Este observaia noastr unicat? Suntem siguri c
observaia nu a fost explicat? O trecere n revist a literaturii tiinifice de specialitate ar
putea da o explicaie acestor ntrebri. Desigur, n msura n care ne familiarizm cu un
anumit subiect, vom studia i vom cunoate literatura de specialitate i aceasta este un
lucru absolut necesar.
2. Formularea ipotezelor. Ipoteza i are etimologia n grecescul hypo sub i thesis
poziie. n tiin, o ipotez este o legtur ntre dou variabile (pot avea diferite valori,
de la caz la caz, sau i n funcie de timp). Ipoteza poate fi o supoziie care se bazeaz
provizoriu pe observaii i care servete la explicarea anumitor fenomene (evenimente
observabile, direct sau cu ajutorul instrumentelor i aparatelor), dar care nu se poate
verifica att de temeinic prin experien sau experiment, (din latin din ex- i periri,
despre ncercare), mijloc fundamental n cercetare, ca s ajung s formuleze o teorie. n
schimb, o ipotez, care s-a confirmat prin experiment sau experien (ipotez "verificat"),
respectiv care poate fi dovedit prin concluzii logice care se bazeaz pe premise valide,
poate deveni o teorie sau o parte a unei teorii. Ipoteza trebuie s fie plasat ntr-un cadru
6
conceptual. Spre exemplu, poate s apar un nou fenotip, sau poate fi observat pe
neateptate un nou fenotip ntr-un fond genetic prezervat in situ sau ex situ. Genetistul
trebuie s decid, dac aceast nou observaie este cel mai bine explicat prin rezultatul
ncrucirii liniei luate n studiu cu o alt linie cunoscut i cu acelai fenotip, aceasta fiind
n aria geneticii clasice, sau dac noua alel ar trebui s fie clonat i analizat la nivel
molecular, ceea ce este n aria geneticii moleculare. n general, geneticianul modern va
aborda ambele arii de cercetare, sau va colabora cu un cercettor mai experimentat n aria
n care el are mai puin pricepere.
3. Proiectarea cadrului conceptual. Odat ce cadrul conceptual a fost proiectat,
abordarea experimental este ct se poate de evident pentru genetist: 1) se fac cele mai
potrivite ncruciri i se analizeaz rezultatele, sau 2) se izoleaz ADN, care este
responsabil pentru fenotipul cercetat, se secvenializeaz i se analizeaz secvenele ADN.
4. Efectuarea experimentului i colectarea datelor. Dup ce vom colecta datele, pe baza
rezultatelor, putem, fie s acceptm ipotezele, fie s propunem noi ipoteze i s repetm
experimentul. De aici i puterea metodelor tiinifice dat tocmai de autoperpetuarea lor.
Odat ce vom demonstra c ipotezele sunt corecte, mergem mai departe, facem alte
observaii, prezentm alte ipoteze, bazate pe noi rezultate de cercetare. n acest mod,
printr-o abordare tiinific ordonat se dobndesc noi i noi cunotine despre genetica
plantelor, care pot avea fie conotaie teoretic i vor sta la baza a noi ipoteze, observaii i
rezultate, fie c vor avea aplicabilitate n ameliorarea genetic a plantelor.
5. Analizarea datelor de cercetare pentru a verifica ipotezele.
Dac rezultatele confirm ipotezele, vom putea pune bazele unei noi teorii n studiul
geneticii plantelor.
Dac nu se confirm ipotezele, reformulm ipotezele i le testm.
Paii descrii mai sus, urmai n experimentele de genetica plantelor i gsim
reprezentai n figura nr.1, n care vom vedea i interconexiunile dintre paii urmai.
7

Figura 1. Diagrama pailor urmai n experimentele de genetica plantelor i
interconexiunile dintre acetia (dup Viorica Blan)

TEST DE EVALUARE
1. Care sunt paii care trebuie urmai n experimentele de genetica plantelor?
Rspuns:


2. Care sunt ntrebrile pe care ni le punem cnd facem o observaie n cadrul unui
experiment de genetica plantelor? Cum putem aduce explicaii acestor ntrebri?
Rspuns:
1.1.3 Caracteristici generale ale organismelor folosite n studiile genetice
Pentru studiile de genetic, organismele trebuie s ntruneasc urmtoarele
caracteristici: 1. s conin un bun fond genetic; 2. generaiile s se succead rapid; 3. s
fie uor de manipulat genetic; 4. s fie uor de finanat; 5. s prezinte interes economic i
social.
Facem observaii
Formulm ipoteze
Dezvoltm cadrul conceptual
Proiectm experimentul
Dac se confirm ipotezele
Vom pune bazele unei noi teorii n studiul geneticii plantelor care vor sta la
baza a noi observaii, ipoteze i experimente

Dac se infirm ipotezele
Reformulm ipotezele
1. Efectuarea unei observaii; 2. Formularea ipotezelor; 3. Proiectarea cadrului
conceptual; 4. Efectuarea experimentului i colectarea datelor; 5. Analizarea datelor de
cercetare pentru a verifica ipotezele.
8
De aceea cele mai multe studii s-au realizat cercetndu-se: virusurile, bacteria
Escherichia coli, organismul uman, Drosophilla, iar la plante, mai ales porumbul.
Pentru susinere, voi prezenta caracteristicile generale ale celor mai folosite organisme
n studiile genetice.
Virusurile:
cresc repede n cultur;
au multe generaii n timp scurt;
codific puine proteine, ceea ce permite analize n detaliu i definirea sistemului
citogenetic;
pot fi manipulate prin inginerie genetic, au o organizare cromozomial facil studiului;
nu pot fi extrapolate la alte organisme caracteristicile genetice testate la virusuri.
Escherichia coli:
crete repede n cultur, are multe generaii n timp scurt;
are multe mutante ce pot fi luate n studiu i este relativ simplu s se genereze noi
mutante, sunt implicate multe gene;
ciclul de via este foarte bine definit;
poate fi manipulat genetic;
conine cromozomi rudimentari;
nu toate caracteristicile genetice pot fi extrapolate la organismele superioare.
Organismul uman:
prezint un iminent interes public i prin urmare fondurile sunt alocate cu mai mare
uurin;
caracteristicile genelor cartate prin secvenializarea genomului uman, sunt relativ uor de
interpolat pentru alte specii de eucariote;
multe fenotipuri mutante datorit nelegerii clinice a diferitelor boli;
sistemul citogenetic este bine definit;
timp lung de la o generaie la alta;
multe caracteristici pot fi studiate doar n culturi de celule;
nu se pot face ncruciri controlate;
nu se poate aplica ingineria genetic.
Drosophilla:
timp scurt de la o generaie la alta, pentru un organism eucariot (dou sptmni);
apar i se pot produce multe mutante care controleaz un fenotip specific;
cromozomi mari cu un sistem citogenetic bine definit;
9
crete i se nmulete bine n condiii de laborator;
un foarte bun organism pentru dezvoltarea studiului geneticii;
elementele transpozabile pot fi manipulate pentru clonarea genelor;
poate fi aplicat ingineria genetic.

1.1.4 Caracteristici generale ale organismelor folosite n genetica plantelor
Genetica plantelor este un termen foarte larg i complex. Dup cum tim, genetica
este o ramur a biologiei care se ocup cu ereditatea, n special cu mecanismele
transmiterii ereditare a caracteristicilor i cu variabilitatea caracteristicilor motenite, la
organisme (care se organizeaz singure), similare sau nrudite. Prin definiie plantele sunt
organisme eucariote, multicelulare, care i fabric hrana prin fotosintez, aparin regnului
Plantae, produc n mod caracteristic embrioni n procesul de reproducere, conin
cloroplaste, au perei celulari care conin celuloza (component organic cu formula (C
6
H
10
O
5
)
n
, un polizaharid format dintr-un lan linear de cteva sute sau mii de (14) uniti
legate de D glucoz i sunt lipsite de locomoie (actul de autopropulsare). i atunci,
genetica plantelor, ca ramur a biologiei, studiaz mecanismele transmiterii ereditare a
caracteristicilor i variabilitatea caracteristicilor motenite, folosind metode specifice
dictate de particularitile plantelor de a face fotosintez i de a-i produce singure hrana,
de a produce embrioni fie prin autofecundare, fie prin fecundarea cu polen de la alte plante,
sau chiar prin partenocarpie sau apomixie, la care se adaug particularitile de a conine
cloroplaste, implicate n ereditatea citoplasmatic i nu n ultimul rnd de componenta
celulaz a pereilor celulari.
Dou dintre organismele vegetale mai profund i mai larg cercetate genetic, datorit
caracteristicilor lor sunt: Arabidopsis thaliana i Zea mays (porumbul).
Arabidopsis thaliana
un genom mic cu puine secvene repetitive de ADN;
timp scurt de la o generaie la alta (ase sptmni);
multe mutante n timp scurt;
polenizarea artificial migloas, dar se pot produce mii de descendeni;
este denumit Drosophilla plantelor, fiind la fel de intens i curent studiat;
poate fi aplicat ingineria genetic cu uurin.
Zea mays (porumbul)
specie bine cartat genetic;
10
se produc multe gene mutante care controleaz caracteristicile plantelor obinute din
semine mutante;
are un sistem citogenetic bine definit;
elementele transpozabile sunt bine nelese i pot fi utilizate la clonarea genelor;
polenizarea artificial mai migloas, dar se pot obine sute de descendeni dintr-o
ncruciare;
are trei generaii pe an;
poate fi aplicat ingineria genetic;
nu pot fi gsite uor fondurile pentru finanare.
Dei a existat o adevrat revoluie, n ultimii 20 de ani, n domeniul tiinelor
biologice, prin urmare i n genetica plantelor, rmne nc o mare cantitate de
necunoscute care trebuie cercetat i descoperit. Finalizarea secvenializrii genomului
uman, precum i a genomului unor importante plante de cultur, cum sunt orezul i
porumbul, cresc incomensurabil posibilitile de cercetare n domeniul geneticii plantelor,
fie a celor din specii tehnice i de cmp, a celor din pajiti, a celor furajere, a plantelor din
specii multianuale cum sunt cele pomicole i viticole, ba chiar i a speciilor de arbuti i
arbori ornamentali i a arborilor pentru mpduriri, att de necesari pentru echilibrul climei
pe glob.

TEST DE EVALUARE
1. Care sunt cele mai folosite organisme n studiile de genetic?
Rspuns:



2. Care sunt cele mai folosite organisme n experimentele de genetica plantelor?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Caracteristicile principale ale plantei Arabidopsis thaliana sunt:
a. un genom mic cu puine secvene repetitive de ADN;
b. timp scurt de la o generaie la alta (ase sptmni);
c. multe mutante n timp scurt;
Cele mai folosite organisme n studiile de genetic sunt: virusurile, Escherichia coli,
organismul uman, Drosophilla.
:

11
d. polenizarea artificial migloas, dar se pot produce mii de descendeni;
e. este denumit Drosophilla plantelor, fiind la fel de intens i curent studiat;
f. nu poate fi aplicat ingineria genetic cu uurin.
Rezolvare: a, b, c, d, e
De rezolvat:
2. Caracteristicile principale ale plantei Zea mays sunt:
a. specie bine cartat genetic;
b. se produc multe mutante care controleaz caracteristicile plantelor obinute din semine
mutante;
c. are un sistem citogenetic bine definit;
d. elementele transpozabile sunt bine nelese i pot fi utilizate la clonarea genelor;
e. polenizarea artificial mai migloas, dar se pot obine sute de descendeni dintr-o
ncruciare;
f. are patru generaii pe an;
g. nu poate fi aplicat ingineria genetic;
h. nu pot fi gsite uor fondurile pentru finanare.
Rezolvare:

1.2 Particularitile ameliorrii plantelor i tehnicile de lucru folosite
Pentru nceput, s rspundem la ntrebarea: Ce este ameliorarea plantelor?
Ameliorarea genetic a plantelor, denumit n termeni comuni selecia vegetal, este
ansamblul de demersuri tiinifice i tehnice care permit s fie puse la dispoziia
agriculturii varieti de plante din ce n ce mai performante (Ives Herv).
Exist de asemenea rspunsul dat de Andr Gallais n Mthodes des cration de
varits en amlioration des plantes ISBN 9782759216574 din 27.10.2011(Station de
Gntique Vgtale UMR 320 INRA-CNRS-UPS-AgroParisTech- Ferme du Moulon-
91190 Gif-sur-Yvette France) n 1990 i anume: Ameliorarea plantelor este arta i
tiina de a crea varieti de plante.
Ne vom referi acum la rspunsul dat de Dor i Varoquaux n 2006, care spune c:
Ameliorarea plantelor este un ansamblu de activiti prin care se pune genetica plantelor
n serviciul omului i se realizeaz multiple adaptri la mediul fizic, biologic i economic.
i un ultim rspuns (Viorica Blan n Note de curs, 2011): Ameliorarrea plantelor
este definit de identificarea i selecia unor caracteristici dorite i combinarea acestor
caracteristici ntr-o singur plant individ sau, ameliorarea plantelor este tiina
12
agrobiologic aplicativ, bazat n mare parte pe rezultatele cercetrilor de genetica
plantelor i care studiaz soiurile i hibrizii de plante, elaboreaz metode de mbuntire
a acestora i de obinere a unor genotipuri noi cu valoare agronomic superioar.
O alt ntrebare pe care o vom pune firesc, este: De ce este important ameliorarea
plantelor?
Ameliorarea plantelor este acel domeniu, la care nu ne oprim s ne gndim, dar fr
efortul oamenilor care lucreaz n acest domeniu, denumii amelioratori de plante, viaa
noastr ar fi cu totul diferit.
Ameliorarea plantelor este necesar pentru c plantele sunt adaptate la a tri n
slbticie i nu pentru a fi utilizate de ctre oameni. Spre exemplu, tuberculii de cartofi
sunt o rezerv de hran pentru plant i nu pentru alte organisme, drept pentru care, multe
plante de cartof slbatic, descurajeaz animalele s le mnnce, datorit toxinelor pe care
le produc. Aceast caracteristic a fost nlturat prin ameliorare, la cartoful de cultur, pe
care noi l mncm (Contract nr. Food CT-2006-016214, susinut de comisia european
prin Programul 6 de cercetare, www.eu-sol.net/public/plant-breeding).
Ameliorarea plantelor este un proces continuu, necesar acum i ntotdeauna. Agenii
patogeni evolueaz pentru a nvinge rezistena plantelor la atacul lor i atunci plantele au
nevoie de ajutorul omului pentru a le ameliora continuu rezistena. Populaia uman
continu s creasc i atunci, pentru a-i asigura hrana, este nevoit s creasc nivelul
productiv al plantelor de cultur. Dac ne uitm n viitor, vom vedea c schimbrile
climatice vor provoca schimbarea condiiilor de cretere ale plantelor i atunci
amelioratorii trebuie s munceasc pentru ca noile organisme create s fie adaptate noilor
condiii, iar culturile vor fi schimbate pentru a ine pasul cu noile condiii.
O a treia ntrebare pe care cu siguran o punem, este aceasta: Care sunt tehnicile
folosite n ameliorarea plantelor?
Ameliorarea plantelor poate fi realizat prin diferite tehnici, ce variaz de la simpla
selecie a plantelor cu caracteristici dorite, care apoi vor fi multiplicate, pn la complexe
tehnici moleculare. Sunt folosite tehnici fundamentale pentru mbuntirea
caracteristicilor plantelor utile omului. Acestea au stat la baza eforturilor de ameliorare a
plantelor de acum o sut de ani pn n prezent. Pn de curnd, amelioratorii au depins n
principal de metode clasice de lucru, dar o dat cu dezvoltarea biotehnologiilor acetia au
ncorporat tehnici moleculare n munca lor, ceea ce a eficientizat i scurtat procesul de
ameliorare. Att metodele clasice ct i cele biotehnologice se aplic la aceast dat,
completndu-se unele pe celelalte.
13
Acestea fiind zise, s facem acum o scurt trecere n revist a tehnicilor de ameliorare,
pentru a cunoate sintetic i a nelege rolul acestora n viaa noastr i de ce va trebui s ni
le nsuim mai n profunzime n cadrul temei destinate special acestora.
1. Selecia artificial. Este cea mai simpl metod de ameliorare. Agricultorul selecteaz
plantele care apoi vor avea urmai. n msura n care descendenii vor semna (n medie)
cu plantele selectate, au posibilitatea de a determina ce recolt vor avea de la aceste plante,
denumite selecii. Acest proces se numete selecie artificial. Termenul deriv din cel de
selecie natural, inventat de Darwin pentru a descrie procesul prin care cele mai bine
adaptate animale vor supravieui avnd un anumit fond de gene. Acelai proces se ntmpl
i n cazul seleciei artificiale, numai c el se petrece datorit interveniei omului n
favoarea nevoilor sale.






Foto 1. Charles Darwin la scurt timp dup publicarea cunoscutei sale cri Originea
speciilor,1859; http://commons.wikimedia.org/wiki/File:CharlesDarwinHuntingSnark.jpg

Trebuie subliniat c, nevoile omului ca parte a naturii, nu trebuie s perturbe ns,
biodiversitatea natural, fondul de gene al plantelor cu care matricea genetic uman este
n echilibru. Pe genetistul i amelioratorul modern, acest lucru l preocup, nvnd s nu
ngusteze prin presiunea seleciei fondul genetic creat natural i s l prezerve pentru a nu
strica echilibrul lumii vii.
Pentru a nelege i mai bine procesul de selecie artificial, s lum urmtorul
exemplu:
S ne imaginm c un agricultor are o parcel cultivat cu plante de tomate i c
aceste plante sunt subtil diferite; unele au frunze mai mari, altele au fructe mai mari i de
un rou mai aprins, etc. O important parte a acestor diferene sunt datorate diferenei ntre
14
genele din genomul plantelor care controleaz aceste caracteristici i de aceea pot fi
transmise ereditar descendenilor. Genele din plantele parentale sunt transmise prin
smn descendenilor lor. i acum s ne ntoarcem la parcela pe care ne-am imaginat-o
cu tomate i s decidem c vrem s nfiinm o nou parcel cu plante de tomate care au
fructe mai mari i mai roii. Aceasta nseamn c vom extrage seminele din fructele
plantelor selectate, vom obine rsadul i vom planta n noua noastr parcel. Putem primi
felicitri, pentru c am fcut selecie artificial prin care am mbuntit nivelul i calitatea
produciei de tomate.

Foto 2. Tomate mai mari (www.eu-sol.net/public/plant-breeding, copyright GFDL)
2. Ameliorarea prin ncruciarea plantelor sau prin hibridizare.
Ameliorarea prin ncruciarea plantelor, sau ameliorarea prin hibridizare presupune
a porni de la fertilizarea florilor unei plante cu polenul florilor altei plante.





Foto 3. Transferarea polenului colectat de la unele flori, cu ajutorul unei pensule moi,
pe stigmatul unei alte flori (www.eu-sol.net/public/plant-breeding)
Ameliorarea plantelor prin hibridizare este mai complicat dect ameliorarea prin
selecie artificial, aceasta presupunnd s determinm care plante le vom ncrucia unele
15
cu altele, s obinem semine i s recoltm apoi aceste semine, s obinem descendeni, s
studiem pe baza geneticii clasice i moleculare a mecanismelor de transmitere ereditar a
caracteristicilor dorite, s stabilim apoi un program i o strategie de ameliorare i de creare
de noi genotipuri de plante, care s cumuleze caracteristicile utile umanitii.
Exist dou motive principale pentru a face acest lucru:
1. Pentru a determina care sunt prinii care trebuie ncruciai pentru a obine
descendenii ateptai.
2. Pentru a combina ntr-o singur plant caliti regsite n dou plante.
S lum acelai exemplu cu tomate i s presupunem c o varietate de tomate are
fructe mari, dar cu gust mediocru, iar alt varietate are fructe mici dar cu gust dulce. Prin
hibridizarea celor dou varieti se vor obine descendeni cu fructe mari i cu gust dulce.
Dup ncruciarea celor dou varieti, este de dorit s se fac selecia
descendenilor, care pe de o parte se pot cultiva pentru a obine produciile dorite, pe de
alt parte se vor folosi n studiile genetice i pe de alta, pentru a se selecta noi prini care
vor fi ncruciai mai departe i din care se vor obine descendeni cu un nou ctig genetic.
Aceste dou tehnici de mai sus constituie baza ameliorrii plantelor. Toate tehnicile
noi cum este spre exemplu backross-ul, sunt doar mbuntiri ale acestor dou tehnici de
baz.
3. Backross-ul.
Backross-ul este o tehnic specific a ameliorrii prin hibridizare (hibridizare napoi) n
care un descendent se polenizeaz cu unul din prinii lui. Aceasta se face cnd un
ameliorator de plante ncearc s transfere o caracteristic particular de la o specie
slbatic, sau de la un soi vechi, la descendeni ce sunt necesari pentru culturile moderne.
Dup ncruciarea celor dou tipuri de plante, slbatic i de cultur, urmeaz un
proces ciclic de backrossare i de selecie artificial, care permite amelioratorului de
plante s reuneasc multe caracteristici ale plantei cultivate pe care amelioratorul nu vrea
s le piard, dar i caracteristici de interes de la specia slbatic (cazul ameliorrii mrului
cu rezisten la boli i cu fructe de calitate, a ameliorrii caisului, folosindu-se soiuri vechi
i soiuri moderne, a ameliorrii grului, etc).
Sunt desigur mai multe tehnici care deriv din tehnicile de baz i ne referim la selecia
n mas, metode de ameliorare prin ncruciarea n bloc, metoda pedigree, selecia
recurent, metoda de ameliorare Full-sib, ameliorarea performanelor prin autopolenizarea
descendenilor, selecia half-sib i testarea descendenilor, selecia half-sib i aplicarea
16
testcrossului, transferarea unei singure gene linkate prin aplicarea backcross-ului
tradiional (George Acquaah, 2006).
Ameliorarea bazat pe tehnicile de hibridizare, cu toate mbuntirile ei, este limitat
la folosirea plantelor compatibile sexual i compatibilitatea redus cu creterea distanei
relaionale ntre plante. Ameliorarea plantelor ar putea beneficia de pe urma accesului la
caracteristicile nnscute la plantele incompatibile sexual.
Tehnicile biotehnologice, cum sunt: fertilizarea in vitro, embriocultura (salvarea
embrionilor imaturi pe mediu nutritiv in vitro), hibridizarea somatic i tehnologiile ADN,
au fost folosite pentru a depi barierele de incompatibilitate sexual a plantelor
ndeprtate taxonomic i genetic.
Hibridizarea somatic implic ndeprtarea enzimatic a pereilor celulari din frunze i
semine, pentru a furniza celule goale, numite protoplati, care pot apoi s fuzioneze pentru
a produce hibrizi somatici. Asemnarea structurii membranei n tot regnul plantelor,
permite fuziunea protoplatilor ndeprtai genetic pe scara acestui regn. Fuziunea celulelor
poate conduce la fuziunea nucleelor, rezultnd celule amphidiploide, hibride somatic.
Fuziunea protoplatilor plantelor incompatibile sexual, a nregistrat progrese la plantele cu
flori. Un exemplu foarte cunoscut este cel al hibrizilor somatici ntre cartof i tomate,
denumit pomato (Solanum tuberosum + Lycopersicum esculentum).
Tehnologiile ADN, permit izolarea genelor dorite din bacterii, plante, animale. Astfel
la plante au fost izolate gene care confer rezisten la erbicide, sau rezisten sau toleran
la factorii de stres ai mediului, iar la animale au fost decodificate enzime sau proteine care
au valoare pentru procesarea industrial. Apoi aceste gene au fost inserate n celulele
plantelor prin asimilare direct sau indirect, conducnd la transformarea genetic a
celulelor plantelor.
Spre deosebire de hibrizii obinui prin polenizare ncruciat, astfel de plante sunt
diferite de prinii lor prin unul sau dou nsuiri unice, bine definite.

TEST DE EVALUARE
1. Ce este ameliorarea plantelor?
Rspuns:

1. De ce este important ameliorarea plantelor?
Rspuns:

Ameliorarea plantelor este tiina agrobiologic aplicativ, bazat n mare parte pe
rezultatele cercetrilor de genetica plantelor i care studiaz soiurile i hibrizii de
plante, elaboreaz metode de mbuntire a acestora i de obinere a unor genotipuri
noi cu valoare agronomic superioar.

17
Exerciii:
Exemplu rezolvat:
2. Tehnicile de baz folosite n ameliorarea clasic sunt:
a. Selecia artificial
b. Ameliorarea prin ncruciarea plantelor sau prin hibridizare
c. Backross
d. Selecia half-sib
Rezolvare: a, b, c
De rezolvat:
3. Tehnicile de ameliorare derivate din tehnicile de baz sunt:
a. selecia n mas
b. metode de ameliorare prin ncruciarea n bloc
c. metoda pedigree, selecia recurent, metoda de ameliorare
d. Full-sib, ameliorarea perfomanelor prin autopolenizarea descendenilor
e. Selecia half-sib i testarea descendenilor
f. Selecia half-sib i aplicarea testcrossului
g. transferarea unei singure gene linkate prin aplicarea backross-ului tradiional
h. Hibridizarea somatic
Rezolvare:
REZUMATUL TEMEI NR.1 (Capitol 1)

Genetica plantelor, ca ramur a biologiei, studiaz mecanismele transmiterii ereditare a
caracteristicilor i variabilitatea caracteristicilor motenite, folosind metode specifice
dictate de particularitile plantelor de a face fotosintez i de a-i produce singure hrana,
de a produce embrioni fie prin autofecundare, fie prin fecundarea cu polen de la alte plante,
sau chiar prin partenocarpie sau apomixie, la care se adaug particularitile de a conine
cloroplaste, implicate n ereditatea citoplasmatic i nu n ultimul rnd de componenta
celuloz a pereilor celulari.
n studiile de genetica plantelor se parcurg paii urmtori: 1. Efectuarea unei
observaii; 2. Formularea ipotezelor; 3. Proiectarea cadrului conceptual; 4. Efectuarea
experimentului i colectarea datelor; 5. Analizarea datelor de cercetare pentru a verifica
ipotezele.
Dou dintre organismele vegetale mai profund i mai larg cercetate genetic, datorit
caracteristicilor lor sunt: Arabidopsis thaliana i Zea mays (porumbul).
18
Finalizarea secvenializrii genomului uman, precum i a genomului unor
importante plante de cultur, cum sunt orezul i porumbul, cresc incomensurabil
posibilitile de cercetare n domeniul geneticii plantelor, fie a celor din specii tehnice i de
cmp, a celor din pajiti, a celor furajere, a plantelor din specii multianuale cum sunt cele
pomicole i viticole, ba chiar i a speciilor de arbuti i arbori ornamentali i a arborilor
pentru mpduriri, att de necesari pentru echilibrul climei pe glob.
Ameliorarea plantelor este tiina agrobiologic aplicativ, bazat n mare parte pe
rezultatele cercetrilor de genetica plantelor i care studiaz soiurile i hibrizii de plante.
Ameliorarea plantelor este un proces continuu, necesar acum i ntotdeauna.
Agenii patogeni evolueaz pentru a nvinge rezistena plantelor la atacul lor i atunci
plantele au nevoie de ajutorul omului pentru a le ameliora continuu rezistena. Populaia
uman continu s creasc i atunci este nevoit s creasc nivelul productiv al plantelor de
cultur. Dac ne uitm n viitor, vom vedea c schimbrile climatice vor provoca
schimbarea condiiilor de cretere ale plantelor i atunci amelioratorii trebuie s munceasc
pentru ca noile organisme create s fie adaptate noilor condiii, iar culturile vor fi
schimbate pentru a ine pasul cu noile condiii.
Tehnicile de baz folosite n ameliorarea clasic sunt: selecia artificial, ameliorarea
prin ncruciarea plantelor sau prin hibridizare i backross.
Tehnicile de ameliorare derivate din tehnicile de baz sunt: selecia n mas, metode de
ameliorare prin ncruciarea n bloc, metoda pedigree, selecia recurent, metoda de
ameliorare full-sib, ameliorarea perfomanelor prin autopolenizarea descendenilor, selecia
half-sib i testarea descendenilor, selecia half-sib i aplicarea testcrossului, transferarea
unei singure gene linkate prin aplicarea backross-ului tradiional.
Tehnicile biotehnologice, cum sunt: fertilizarea in vitro, embriocultura (salvarea
embrionilor imaturi pe mediu nutritiv in vitro) la care se adaug, hibridizarea somatic i
tehnologiile ADN, au fost folosite pentru a depi barierele de incompatibilitate sexual a
plantelor ndeprtate taxonomic i genetic.
Fuziunea protoplatilor plantelor incompatibile sexual, a nregistrat progrese la
plantele cu flori. Un exemplu foarte cunoscut este al hibrizilor somatici ntre cartof i
tomate, denumit pomato (Solanum tuberosum + Lycopersicum esculentum).




19
TEST RECAPITULATIV PENTRU TEMA NR. 1 (Capitol 1)

1. Metodele specifice de cercetare n genetica plantelor sunt dictate de urmtoarele
particulariti:
a. fac fotosintez i i produc singure hrana;
b. unele, produc embrioni prin autofecundare;
c. unele, produc embrioni prin fecundarea cu polen de la alte plante;
d. unele, produc embrioni prin partenocarpie;
e. unele, produc embrioni prin apomixie;
f. conin cloroplaste, implicate n ereditatea citoplasmatic;
g. au componenta celuloz n pereii celulari.
2. Caracteristicile generale ale virusurilor folosite n studiile genetice sunt:
a. cresc repede n cultur;
b. au multe generaii n timp scurt;
c. codific puine proteine ceea ce permite analize n detaliu i definirea sistemului
citogenetic;
d. pot fi manipulate prin inginerie genetic, au o organizare cromozomial facil
studiului;
e. nu pot fi extrapolate la alte organisme caracteristicile genetice testate la virusuri.
3. Escherichia coli are urmtoarele caracteristici, utile studiilor genetice:
a. crete repede n cultur, are multe generaii n timp scurt;
b. are multe mutante ce pot fi luate n studiu i este relativ simplu s se genereze
noi mutante, sunt implicate multe gene;
c. ciclul de via este foarte bine definit;
d. poate fi manipulat genetic;
e. conine cromozomi organizai;
f. nu toate caracteristicile genetice pot fi extrapolate la organismele superioare.
4. Organismul uman are urmtoarele caracteristici utile studiilor genetice:
a. prezint un iminent interes public i prin urmare fondurile sunt alocate cu mai
mare uurin;
b. caracteristicile genelor cartate prin secvenializarea genomului uman, sunt
relativ uor de interpolat pentru alte specii de eucariote;
c. multe fenotipuri mutante datorit nelegerii clinice a diferitelor boli;
d. sistemul citogenetic este bine definit;
20
e. timp lung de la o generaie la alta;
f. multe caracteristici pot fi studiate doar n culturi de celule;
g. nu se pot face ncruciri controlate;
h. nu se poate aplica ingineria genetic.
5. Drosophilla este mult folosit n studiile genetice pentru urmtoarele caracteristici:
a. timp scurt de la o generaie la alta, pentru un organism eucariot (dou
sptmni);
b. apar i se pot produce multe mutante care controleaz un fenotip specific;
c. cromozomi mari cu un sistem citogenetic bine definit;
d. crete i se nmulete bine n condiii de laborator;
e. un foarte bun organism pentru dezvoltarea studiului geneticii;
f. elementele transpozabile pot fi manipulate pentru clonarea genelor;
g. poate fi aplicat ingineria genetic.
6. Tehnologiile ADN permit izolarea genelor dorite din:
a. bacterii;
b. plante;
c. animale.
7. Tehnicile moderne folosite n ameliorare pentru a depi barierele de
incompatibilitate sexual a plantelor ndeprtate taxonomic i genetic sunt:
a. fertilizarea in vitro;
b. embriocultura (salvarea embrionilor imaturi pe mediu nutritiv in vitro);
c. hibridizarea somatic;
d. tehnologiile ADN.

Bibliografie selectiv
1. George Acquaah. 2006. Principles of Plant Genetics and Breeding. Blackwell Publishing
ISBN: 9781405136464, http://www.blackwellpublishing.com).
2. Blan Viorica, 2008. Genetica plantelor (manual), Editura ALPHA MDN, ISBN
978-973-139-047-5, 240 pag.
3. Brooker Robert, 2009. Genetics Analysis and Principles. 3rd. New York: McGraw-
Hill Irwin.
4. Claire Dor Editorial coordination by, Fabrice Varoquaux Editorial coordination
by Edition 2006 Histoire et amelioration de 50 plantes ISBN 9782738012159
21
5. Andr Gallais, 2011. Mthodes des cration de varits en amlioration des plantes,
ISBN 9782759216574
6. Phillip McClean, 2000. Genomics and Bioinformatics Program, North Dakota State
University, modified from Principles of Genetics, The Fields Of Genetics
http/www.ndsa.nodal.edu/instruct/mcclean
7. Herv Y., T. Lunn, Mabeau S.,1997. An introduction to vegetable crop PRODUCTION
AND PLANT BREEDING IN BRITTANY ISHS Acta Horticulturae 459: International
Symposium Brassica 97, Xth Crucifer Genetics Workshop
CAPITOLUL 2
STUDII DE GENETIC CLASIC A PLANTELOR

TEMA NR. 1 (Capitol 2)
STUDII I EXPERIMENTE FCUTE DE GREGOR MENDEL I LEGILE
GENETICE PE CARE SE BAZEAZ EXPERIMENTELE ACTUALE DE
GENETIC A PLANTELOR

Uniti de nvare:
definirea termenilor folosii n genetica mendelian
experimente fcute de Gregor Mendel la mazrea de grdin (Pissum sativum), prin
care a stabilit prima lege genetic (legea segregrii)
confirmarea ipotezelor primei legi genetice a lui Mendel
a doua lege genetic a lui Mendel, numit Legea motenirii independente a
caracteristicilor
condiiile cunoscute astzi prin care se ia n considerare cea de a doua lege a lui
Mendel
experimente privind motenirea caracteristicilor calitative la cais (Prunus
armeniaca), bazate pe genetica mendelian
Obiective
- Cunoaterea i fixarea termenilor folosii n genetica Mendelian
- nsuirea metodelor experimentale folosite n genetica Mendelian
- nelegerea motenirii genetice a unor caracteristici ale plantelor
- nelegerea rolului de inovator al lui Mendel pentru genetic n general i pentru
genetica plantelor n special
- Cunoaterea unor realizri ale geneticii plantelor n Romnia
22

Timpul alocat temei 4 ore
Bibliografie recomandat
1. Blan Viorica, 2008, Genetica plantelor (manual), Editura ALPHA MDN, ISBN 978-
973-139-047-5
2. Phil McClean website, 2012, http://www.ndsa.nodal.edu/instruct/mcclean

1.1 Definirea termenilor folosii n genetica mendelian
Alele: o form alternativ a perechii alelice date: nalt i dwarf, sunt alele pentru
nlimea plantei de mazre. Mai mult dect dou alele exist pentru fiecare gen specific,
dar, doar dou din ele vor fi gsite pentru fiecare caracteristic calitativ.
Pereche de alele: combinarea a dou alele cuprinse n perechea de gene.
Dominante: alelele care se expreseaz pe ele nsele pe seama alelelor alternante.
Fenotipul controlat de asemenea alele este expresat n generaia F
1
(ca urmare a ncrucirii
liniilor pure).
Recesive: alele a cror expresare este reprimat n prezena alelelor dominante;
fenotip ce nu apare n generaia F
1
din ncruciarea a dou linii pure i reapare n generaia
F
2.
Homozigot: un individ care conine doar o alel din perechea de alele; spre exemplu
DD este homozigot dominant i dd este homozigot recesiv; linia pur este homozigot
pentru gena care intereseaz.
Heterozigot: un individ care conine unul din fiecare membru al perechii de gene;
spre exemplu, Dd heterozigot.
Genotip: combinaie specific de alele pentru unele gene sau set de gene.
Fenotip: literar nseamn "forma care se vede", ea fiind n exterior, fizic aprnd ca o
caracteristic particular.
Plantele de mazre folosite n experiment de Mendel exteriorizeaz urmtoarele
fenotipuri:
1. semine rotunde sau zbrcite;
2. semine galbene sau verzi;
3. flori roii sau albe;
4. plante nalte sau dwarf .
ncruciarea monohibrid: este ncruciarea ntre prini care difer pentru o
singur pereche de gene n mod uzual AA x aa
23
Monohibridul: este un descendent a doi prini care sunt homozigoi pentru alele
alternante ale unei perechi de gene.
A se reine! ncruciarea monohibrid nu este ncruciarea a doi monohibrizi.
Monohibrizii se folosesc pentru descrierea relaiilor dintre alele. Cnd o alel este
homozigot i vom vedea fenotipul. Este fenotipul unui heterozigot care ne permite s
determinm relaia dintre alele.
ncruciarea dihibrid: este ncruciarea ntre doi prini care difer prin dou
perechi de alele (AABB x aabb).
Dihibridul: este un individ heterozigot pentru dou perechi de alele (AaBb)
Din nou a nu se uita! ncruciarea dihibrid nu este ncruciarea ntre doi
dihibrizi.
ncruciare parental: ncruciarea monohibrid, sau dihibrid a prinilor,
simbolizai P
1
i P
2.

Generaia F
1
: populaia hibrid obinut n urma ncrucirii parentale
Generaia F
2
: populaia hibrid obinut prin autofecundarea plantelor hibride din
generaia F
1.

Segregare (lat. a separa): separarea perechilor de alele homologe (provenite una de la
mam, alta de la tat ) n meioz, n timpul fecundarii gameilor.
Exemplu:
Pasul 1. ncruciarea parental P
1 X
P
2
Pasul 2. Rezult generaia hibrid F
1
(autofecundarea plantelor din F
1
)

Pasul 3. Rezult generaia hibrid F
2
Linia pur: este acea populaie fr caracteristici segregante, de la care se obin
rezultate genetice experimentale neconfuze, aceasta fiind n fapt o important inovaie
pentru cercetrile genetice de mai trziu.
Backross: ncruciarea unui hibrid F
1
cu unul din prinii homozigoi; pentru plantele
de mazre nalte ncruciarea a fost Dd x DD sau Dd x dd; cel mai adesea backross-ul este
ncruciarea ntregii generaii cu prinii recesivi.
Testcross: este ncruciarea unui individ cu un printe homozigot recesiv i este
folosit pentru a determina dac individul este homozigot dominant sau heterozigot.




24
TEST DE EVALUARE
1. Ce este ncruciarea dihibrid ?
Rspuns:



2. Ce este ncruciarea monohibrid?
Rspuns:
Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Segregare ( lat. a separa ) este:
a. separarea perechilor de alele homologe (provenite una de la mam, alta de la tat) n
meioz, n timpul fecundrii gameilor;
b. separarea perechilor de alele homologe n timpul mitozei;
c. separarea perechilor de alele n timpul fecundrii gameilor.
Rezolvare: a
De rezolvat:
2. Homozigot este:
a. un individ care conine doar o alel din perechea de alele; spre exemplu DD este
homozigot dominant i dd este homozigot recesiv; linia pur este homozigot pentru gena
care intereseaz;
b. un individ care conine unul din fiecare membru al perechii de gene spre exemplu
Dd.
Rezolvare:
1.2 Experimente fcute de Gregor Mendel la mazrea de grdin (Pissum sativum),
prin care a stabilit prima lege genetic (legea segregrii)
1.2.1 Producerea dihibrizilor de mazre (F
1
)
Gregor Mendel a ncruciat varieti care au fost pure genetic pentru caracteristicile
seminelor rotund (RR), galben (YY), zbrcit (rr) i verde (yy).
Toi descendenii (F
1
) produi din aceste ncruciri au fost dihibrizi, heterozigoi
pentru fiecare pereche de alele (RrYy). Toate seminele au fost rotunde i galbene, aceasta
nsemnnd c genele pentru caracteristicile rotund i galben sunt dominante.


ncruciarea dihibrid este ncruciarea ntre doi prini care difer prin dou
perechi de alele (AABB x aabb).

25
Obinerea dihibrizilor F
1




Gregor Mendel a ncruciat apoi dihibrizii F
1
cu caracteristici fenotipice, boabe
rotunde i galbene pentru obinerea generaiei F
2,
rezultatele ncrucirii fiind prezentate n
tabelul 1 denumit ahul combinaiilor gameilor femeli i masculi .

Tabel 1. ahul combinaiilor gameilor femeli i masculi


Se atepta ca seminele rotunde s fie galbene i cele zbrcite s fie verzi, n raportul
de 75% rotund galben i 25% zbrcit verde.
n realitate, nu a fost aa, obinnd toate combinaiile posibile de caracteristici privind
culoarea i textura seminelor.
Raporturile fenotipice de segregare ale descendenilor au fost urmtoarele:
9/16 rotund -galben
3/16 rotund -verde
3/16 zbrcit -galben
F
1
Gamei / RY

Ry rY ry
RY

RRYY
Rotund
Galben
RRYy
Rotund
Galben
RrYY
Rotund
Galben
RrYy
Rotund
galben
Ry

RRYy
Rotund
Galben
RRyy
Rotund
verde
RrYy
Rotund
Galben
Rryy
Rotund
Verde
Ry RrYY
Rotund
Galben
RrYy
Rotund
Galben
rrYY
Zbrcit
galben
rrYy
Zbrcit
galben
Ry

RrYy
Rotund
Galben
Rryy
Rotund
verde
rrYy
Zbrcit
Galben
rryy
zbrcit
verde
RRYY x rryy
F
1
RrYy (boabe rotunde i galbene)
RrYy x RrYy
F
2

26
1/16 zbrcit-verde
Fenotipurile i genotipurile generate n F
2
ca urmare a ncrucirii plantelor de
mazre din generaia F
1
cu fenotipul rotund galben i genotipul RrYy sunt prezentate n
tabelul 2.
Tabel 2. Fenotipurile, combinaiile gametice i genotipurile generate n F
2
la
mazrea de grdin
Fenotipuri(semine) Combinaii gametice Genotipul de baz
( 9) Galben rotund (1) RRYY
(2) RRYy
(2) RrYY
(4) RrYy

R_Y_

(3 ) Galben zbrcit (1) rrYY
(2) rrYy
r_Y_

(3) Rotund verde (1) RRyy
(2) Rryy
R_ y_
(1) Verde zbrcit (1) rryy r_y_

n experimentul descris mai sus, Gregor Mendel a analizat motenirea a dou
caracteristici alternative ale bobului de mazre de grdin:form rotund:1- culoare
galben , 2- form zbrcit, culoare verde.
TEST DE EVALUARE
1. Cnd Gregor Mendel a studiat motenirea genetic a dou caracteristici ale
bobului de mazre, ce combinaii fenotipice i gametice a determinat n generaia
hibrid F
2
?
Rspuns:









Gregor Mendel a obinut n generaia hibrid F
2,
urmtoarele combinaii fenotipice, i
gametice :
combinaii fenotipice: 9/16 rotund galben, 3/16 rotund - verde, 3/16 zbrcit
galben,1/16 zbrcit - verde
combinaii gametice
penru fenotipul rotund - galben (1) RRYY, (2) RRYy,(2) RrYY,(4)RrYy
pentru fenotipul rotund verde (1) Rryy, (2) Rryy
pentru fenotipul zbrcit - galben: (1) rrYY, (2) rrYy
pentru fenotipul zbrcit - verde: (1) rryy

penru fenotipul rotund - galben: R_Y (genotipul de baz)
entru fenotipul rotund verde : R_ y_ (genotipul de baz)
pentru fenotipul zbrcit - galben: r_Y_ (genotipul de baz)
27


2. Ce s-a ntmplat n generaia hibrid F
2
, atunci cnd Gregor Mendel a studiat
motenirea genetic a cte o singur caracteristic a plantelor de mazre de grdin?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. n generaia hibrid F
1,
ntotdeauna vedem:
a. doar unul din cele dou fenotipuri parentale
b. ambele fenotipuri parentale
Rrpuns: a
De rezolvat:
2. n generaia hibrid F
2,
Gregor Mendel a obinut urmtoarele combinaii
fenotipice, gametice i genotipice cnd a studiat caracteristica culoarea bobului de
mazre :
Fenotipuri:
a. 3 galben : 1 verde
b. 3 verde : 1 galben
Rspuns:
combinaii gametice:
a. galben (1.YY,2.Yy)
b. galben(1.Yy,2.Yy)
c. verde (yy)
Rspuns:
Combinaii genotipice
a. galben (Y_)
b. verde(y_)
Rspuns:
1.2.2 Experimente ale lui Gregor Mendel prin care se explic segregarea unei singure
caracteristici a plantelor de mazre
Vom vedea n cele ce urmeaz, ce s-a ntmplat cnd Gregor Mendel a analizat
motenirea genetic a cte o singur caracteristic a plantelor de mazre. Ne vom referi la:
culoarea bobului de mazre: galben i verde
28
forma bobului: rotund i zbrcit
nlimea plantei: dwarf i nalt
culoarea florii de mazre: alb i rou
n tabelul 3, prezentm rezultatele lui Gregor Mendel cu privire la aceste experimente.
Tabel 3. Rezultate din experimentele lui Gregor Mendel
ncruciri parentale
Fenotipuri parentale
Fenotipuri
F
1

Nr. semine pentru
fiecare fenotip F
2

Raportul F
2

Semine rotund x zbrcit Rotund
5474 Rotund :1850
Zbrcit
2,95 :1
Semine galben x verde Galben
6022 Galben:2001
Verde
3,00 :1
Flori rou x alb Rou 705 Rou : 224 Alb 3,14:1
nlimea plantelor
nalt x dwarf
nalt 687 nalt:227 Dwarf 3,02:1
Analiznd tabelul de mai sus, vom putea da rspunsurile la ntrebrile de mai jos:
Ce se vede n generaia F
1
? ntotdeauna vedem doar unul din cele dou fenotipuri
parentale. Dar F
1,
posed informaii prin care se vor produce ambele fenotipuri parentale n
generaia urmtoare.
Ce se ntmpl n F
2
? Generaia F
2
produce raportul 3:1, unde caracteristica
dominant este prezent de trei ori, iar cea recesiv numai o dat. Termenii de dominant i
recesiv sunt inventai de Gregor Mendel pentu a descrie relaiile fenotipurilor de baz din
F
1
i F
2.

Cum explicm segregarea unei singure caracteristici experimentate de Gregor
Mendel n F
2
?
1. Culoarea bobului de mazre: galben i verde
- ncrucirile parentale i obinerea monohibrizilor F
1
i a generaiei F
2


P
1
x P
2
Gamei parentali Y x y
F
1
Yy (boabe galbene
Yy x Yy
F
2

29
Gregor Mendel a ncruciat apoi monohibrizii cu caracteristica fenotipic boabe
galbene pentru obinerea generaiei F
2,
rezultatele ncrucirii fiind prezentate n tabelul 4,
ahul combinaiilor gameilor femeli i masculi .

Tabel 4. ahul combinaiilor gameilor femeli i masculi pentru caracteristica
culoarea bobului de mazre, pentru generaia F
2

F
1
Gamei / Y Y Raportul fenotipic de segregare
Y YY Yy 3-galben (1.YY,2.Yy)
Y Yy Yy 1-verde(yy)

2. Forma bobului: rotund i zbrcit
ncrucirile parentale i obinerea monohibrizilor F
1
i a generaiei F
2






Tabel 5. ahul combinaiilor gameilor femeli i masculi pentru caracteristica
forma bobului de mazre pentru generaia F
2

F1Gamei / R R Raportul fenotipic de segregare
R RR Rr 3-galben (1.RR,2.Rr)
R Rr Rr 1-verde(rr)


3. nlimea plantei: dwarf i nalt
ncrucirile parentale i obinerea monohibrizilor F
1
i a generaiei F
2





Tabel 6. ahul combinaiilor gameilor femeli i masculi pentru caracteristica
nlimea plantei de mazre, pentru generaia F
2
P
1
x P
2
Gamei parentaliR x r
Gamei F
1
Rr (boabe rotunde
Rr x Rr
F
2

P
1
x P
2
DD x dd
Gamei parentali D d
F
1
Dd (plante nalte)
F
2

30
F
1
Gamei / D d Raportul fenotipic de segregare
D DD Dd 3-nalt (1.DD,2.Dd)
d Dd Dd 1-verde(dd)


4. Culoarea foriide mazre: alb i rou
ncrucirile parentale i obinerea monohibrizilor F
1
i a generaiei F
2





Tabel 7. ahul combinaiilor gameilor femeli i masculi pentru caracteristica
culoarea florii la mazre, n generaia F
2
F
1
Gamei / A a Raportul fenotipic de segregare
A AA Aa 3-rou (1.AA,2.Aa)
a Aa Aa 1-alb(aa)

Pe baza experimentelor efectuate i a confirmrii ipozelor formulate, Gregor Mendel
a pus bazele teoretice a motenirii caracteristicilor cercetate i a formulat prima sa lege.
Prima lege a lui Gregor Mendel - legea segregrii, se formuleaz astfel: n timpul
formrii gameilor n descendena hibrid, fiecare membru al perechii de alele se separ de
alt membru pentru a forma combinaii genetice ale gameilor parentali.
Confirmarea ipotezelor primei legi a lui Mendel
Pe baza observaiilor fcute, Mendel a putut formula ipoteze despre segregare. Pentru
a testa ipotezele, Mendel a autopolenizat plantele F
2.
Pentru c legea lui a fost corect, el a
putut s prevad rezultatele care vor fi. i ntr-adevr, rezultatele au fost cele ateptate,
dup cum se vede mai jos:
Fenotipul F2

Autofecundare plante Autofecundare plante
nalte (DD) Dwarf(d d)
Fenotipul segregant 1/3nalte:2/3 segregante Toate plantele dwarf
3 nalte: 1 dwarf
Din aceste rezultate putem astzi confirma genotipul descendenilor F
2.

P
1
x P
2
A x a
Gamei parentali A a
F
1
(Flori roii)
Gamei F
1
Aa
F
2

31
Fenotipuri Genotipuri Descriere genetic
F
2
Plante nalte 1/3 D D Linii pure homozigot dominante
2/3 D d Heterozigoi
F
2
Plante Dwarf toate d d Linii pure homozigote recesive

Astfel, F
2
este genotipic reprezentat astfel: 1/4DD : 1/2Dd : 1/4 dd.
Aceste date au fost de asemenea analizate n ahul combinaiilor, folosind gameii
indivizilor F
1
. Astfel raportul fenotipic este 3:1 i raportul genotipic este 1:2:1 dup cum se
vede din tabelul 6.
Mendel a efectuat alte ncruciri pentru a confirma ipoteza segregrii i anume
ncruciarea backross i testcross.
Backross: Dd x DD
F
1
Gamei
/
D Raportul fenotipic de
segregare
Raportul genotipic de
segregare
D DD 1. nalt 1.DD
d Dd 1. scund 1.dd

Testcross: Dd x dd
F
1
Gamei / d Raportul fenotipic
de segregare
Raportul genotipic
de segregare
D Dd 1.nalt 1.Dd
d dd 1.scund 1.dd

Backcross - ncruciarea unui hibrid F
1
cu unul din prinii homozigoi. Pentru plantele de
mazre nalte ncruciarea a fost Dd x DD sau Dd x dd.
Testcross retroncruciarea sau backcrossarea indivizilor cu fenotip dominant (cu
Structur genetic necunoscut) cu printele recesiv sau cu un tester recesiv (cu genotipul
aa) pentru a determina dac genotipul indivizilor dominani este heterozigot (Aa) sau
homozigot (AA) pentru o alel oarecare.
Gregor Mendel, a studiat motenirea genetic a caracteristicilor la mazrea de
grdin parcurgnd toi paii necesari pentru un studiu de genetic: 1). A efectuat
observaii; 2). A formulat ipoteze; 3). A proiectat cadrul conceptual; 4). A efectuat
32
experimentul i a colectat datele de cercetare; 5. A analizat datele de cercetare, a verificat
ipotezele i a sintetizat concluzii.
Iat acum, care sunt concluziile lui Gregor Mendel:
1. Determinanii ereditari sunt de natur particular. Aceti determinani se numesc
gene.
2. Fiecare printe are perechi de determinani, gene, n fiecare celul pentru fiecare
caracteristic studiat. Descendenii F
1,
rezultai din ncruciarea liniilor pure, conin o alel
pentru fenotipul dominant i o alel pentru fenotipul recesiv. Aceste dou alele formeaz o
pereche de gene

sau determinani, dup cum i-a denumit Gregor Mendel
.

3. Un membru al unei perechi de gene segreg n cte un gamet, asfel c n fiecare
gamet va trece un membru al unei perechi de gene.
4. Gameii se unesc randomizat i fr s in seama de implicarea altor perechi de
gene.
Gregor Mendel a avut ansa ca fiecare pereche de gene pe care a studiat-o s
rspund la una sau la alta din aceste cerine.
Astfel toate genele ce se prezint ntr-o aranjare independent au fost n fapt sintetice
cu trei loci n cromozomul 4, doi n cromozomul 1, unul n cromozomul 7 i unul n
cromozomul 5.
Oricum, distana care separ locii sintetici a fost suficient de mare pentru ca genele s
fie motenite ca i cum ar fi fost n cromozomi diferii.
n tabelul 8 sunt prezentate combinaiile celor apte perechi de alele pe care le-a
studiat Mendel.

Tabel 8. Combinaiile celor apte perechi de alele care au fost studiate de
Gregor Mendel i cromozomii pe care sunt situate.
Caracteristici Fenotip Alele Cromozomi
Forma seminei rotund - zbrcit R-r 7
Culoarea seminei galben - verde Y-y 1
Culoarea pstii verde - galben Gp-gp 5
Textura pstii neted - rugos V-v 4
Culoarea florii rou - alb A-a 1
Aezarea florii axial - terminal Fa-fa 4
nlimea plantei nalt - dwarf Dd 4

33
Gsind c fiecare din aceste apte caracteristici au fost motenite independent unele
fa de altele, Mendel a formulat cea de-a doua lege, numit: Legea motenirii
independente a caracteristicilor.
Astzi tim c aceast lege poate fi luat n considerare doar n dou condiii:
1. genele sunt n cromozomi separai
2. genele sunt larg separate n acelai cromozom
1.3 A doua lege a lui Mendel Legea privind independena genelor. n timpul formrii
gameilor segregarea alelelor dintr-o pereche de gene este independent fa de segregarea
alelelor altei perechi de gene.
Ca i la ncrucirile monohibride, rezultatele obinute la ncrucirile dihibride, au
confirmat ipoteza lui Mendel, prin ncrucirile backross fcute - F
1
dihibrid x printe
recesiv.
S folosim un exemplu, cu semine galben, rotunde F
1:
Backross RRYy x rryy
Gamei RY Ry rY ry

Tabel 9. ahul combinaiilor pentru Backross
Gamei femeli
RY Ry rY ry
Gamei
masculi
ry
RrYy(Galben
rotund)
Rryy(verde
rotund)
rrYy(galben
zbrcit)
rryy(Verde
zbrcit)

Raportul fenotipic (semine) pentru testcross este:
1 Galben, rotund
1 Verde, rotund
1 Galben, zbrcit
1 Verde, zbrcit
Legile lui Mendel (1865) formeaz o baz teoretic pentru nelegerea motenirii
genetice a caracteristicilor.
Mendel a fcut dou inovaii n tiina geneticii:
1. a dezvoltat liniile pure
2. a calculat rezultatele i a pstrat notele statistice
34
Linia pur este acea populaie fr caracteristici segregante, de la care se obin
rezultate genetice experimentale neconfuze, aceasta fiind n fapt o important inovaie
pentru cercetrile genetice de mai trziu.

TEST DE EVALUARE

1. Care sunt ncrucirile pe care le-a fcut Gregor Mendel pentru a confirma ipoteza
segregrii?
Rspuns:



2. Care sunt inovaiile fcute de Gregor Mendel n tiina geneticii?
Rspuns :

Exercii:
Exemplu rezolvat:
1. n ncrucirile de testare a ipotezei, Gregor Mendel a obinut urmtorul raport
fenotipic (semine de mazre) pentru testcross:
a. 1 Galben, rotund : 1 Verde, rotund : 1 Galben, zbrcit : 1 Verde, Zbrcit
b. 1 Galben rotund; 2 Verde, rotund : 2 Galben, zbrcit; 1 Verde, Zbrcit
Rspuns: a
De rezolvat:
2. Cea de-a doua lege, numit Legea motenirii independente a caracteristicilor,
poate fi luat n considerare doar n urmtoarele condiii:
a. genele sunt n cromozomi separai;
b. genele sunt larg separate n acelai cromozom;
c. alelele sunt n gene diferite.
Rezolvare:

Experimente privind motenirea caracteristicilor calitative de la prini au fost
dezvoltate de-a lungul timpului de la Mendel ncoace, n foarte multe pri ale lumii i la
foarte multe specii de plante.
Pentru a confirma ipoteza segregrii Gregor Mendel a fcut ncrucurile backross i
testcross.
35
Un asemenea experiment este i cel realizat la cais n Romnia de Viorica Blan
(1991).
1.4. Experimente efectuate la cais pentru pentru a pune n eviden mecanismele
genetice ale motenirii caracteristicii formei fructului.
Experimentul 1. Mecanismul genetic a motenirii caracteristicii forma fructului
alungit.
Pentru a pune n eviden acest mecanism, s-au ncruciat reciproc genotipurile
Comandor i Excelsior al cror fenotip este fruct alungit.
1.1 Mecanismul genetic a motenirii caracteristicii formei fructului alungit, n cadrul
familiei hibride de cais COMANDOR x EXCELSIOR








Tabel 10. ahul combinaiilor n F
1
pentru caracteristica forma fructului la cais,
n cadrul familiei hibride COMANDOR x EXCELSIOR

Gameti /
Gameti
A a
A AA Aa
a Aa aa





Tabel 11. Raportul de segregare n F
1
, genotipic i fenotipic n familia hibrid
COMANDOR x EXCELSIOR
Fenotipuri Genotipuri
3 Alungit 1 AA-homozigot dominant.
2 Aa heterozigot dominant
COMANDOR EXCELSIOR
P1 x P2

Form alungit Form alungit
Aa Aa
F
1

36
1 Sferic aplatizat 1 aa- homozigot recesiv

Din datele tabelului 11 rezult c raportul fenotipic de segregare n F
1
, a
caracteristicii forma fructului la cais este 3:1 (3 alungit : 1 sferic aplatizat) i cel genotipic,
este 1:2:1(1AA: 2Aa: 1aa).
Experimentul 2. Mecanismul genetic al motenirii formei fructului alungit n cadrul
familiei hibride de cais EXCELSIOR x COMANDOR









Segregarea n generaia hibrid F
1,
a fost determinat n aceleai raporturi i n cadrul
familiei hibride EXCELSIOR x COMANDOR (tabele 12 i 13), unde dup cum se
vede, EXCELSIOR este folosit de aceast dat ca printe matern.

Tabel 12. ahul combinaiilor n F
1
pentru caracteristica forma fructului la cais
n familia hibrid EXCELSIOR x COMANDOR)

Gameti /
Gameti
A a
A AA Aa
a Aa aa

Tabel 13. Raportul de segregare n F
1
, genotipic i fenotipic n familia hibrid
COMANDOR x EXCELSIOR
Fenotipuri Genotipuri
3 Alungit 1 AA-homozigot dominant.
2 Aa heterozigot dominant
1 Sferic aplatizat 1 aa- homozigot recesiv

COMANDOR EXCELSIOR
P1 x P2

Form alungit Form alungit
Aa Aa
F
1

37
Din datele tabelului 13 rezult c raportul fenotipic de segregare n F
1
, a
caracteristicii forma fructului la cais este 3:1 (3 alungit : 1 sferic aplatizat) i cel genotipic,
este 1:2:1(1AA: 2Aa: 1aa).
Comparnd datele obinute n cadrul celor dou experimente, n care genotipurile
Comandor i Excelsior au fenotipul alungit, pentru caracteristica fructului i au fost
folosite alternativ ca printe matern i patern putem sintetiza urmtoarele concluzii:
Genotipurile de cais Comandor i Excelsior, cu fruct alungit sunt heterozigote i de
aceea segreg n generaia F
1
, n raportul fenotipic de 3:1; i genotipic de 1:2:1 spre
deosebire de mazrea de grdin, care este homozigot pentru caracteristica forma bobului
i de aceea segreg abia n generaia F
2
, n acelai raport fenotipic de 3:1 i genotipic de
1:2:1.

TEST DE EVALUARE

1. Care este raportul fenotipic i cel genotipic de segregare a caracteristicii forma
fructului la cais, n combinaia hibrid COMANDOR x EXCELSIOR ?
Rspuns:




2. Care este raportul fenotipic i cel genotipic de segregare a caracteristicii forma
fructului la cais, n combinaia hibrid EXCELSIOR x COMANDOR ?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
a. Genotipurile de cais Comandor i Excelsior, cu fruct alungit sunt heterozigote i de
aceea segreg n generaia F
1.

b. Genotipurile de cais Comandor i Excelsior, cu fruct alungit sunt heterozigote i de
aceea segreg n generaia F
2.

Rspuns: a
De rezolvat:
n combinaia hibrid de cais COMANDOR x EXCELSIOR raportul fenotipic
de segregare, a caracteristicii forma fructului este 3:1 (3 alungit : 1 sferic aplatizat) i cel
genotipic, este 1:2:1(1AA:homozigot dominant: 2Aa heterozigot : 1aa homozigot
recesiv).

38
a. Genotipul DACIA a acionat ca tester recesiv n combinaia hibrid COMANDOR x
DACIA
b. Genotipul GOLDRICH a acionat ca tester recesiv n combinaia hibrid
EXCELSIOR x GOLDRICH.
Rspuns:

Experimentul 3. Mecanismul genetic al motenirii formei fructului sferic, n cadrul
familiei hibride de cais EXCELSIOR x GOLDRICH







Tabel 14. ahul combinaiilor n F
1
pentru caracteristica forma sferic a
fructului la cais, n familia hibrid EXCELSIOR x GOLDRICH
Gameti /
Gameti
a a
A Aa Aa
a aa aa

Tabel 15. Raportul de segregare n F
1
, genotipic i fenotipic, n familia hibrid
EXCELSIOR x GOLDRICH
Fenotipuri Genotipuri
1 Alungit 2 Aa heterozigot dominant.
1 Sferic 2 aa- homozigot recesiv
Experimentul 4. Mecanismul genetic al motenirii formei fructului sferic, n
cadrul familiei hibride de cais GOLDRICH x EXCELSIOR





GOLDRICH EXCELSIOR
P1 x P2

Form alungit Form sferic
Aa aa
F
1

EXCELSIOR GOLDRICH
P1 x P2

Form alungit Form sferic
aa Aa
F
1

39


Tabel 16. ahul combinaiilor n F
1
pentru caracteristica forma sferic a fructului la
cais, n familia hibrid GOLDRICH x EXCELSIOR
Gameti /
Gameti
A A
a Aa Aa
a Aa aa

Tabel 17. Raportul de segregare n F
1
, genotipic i fenotipic, n familia hibrid
GOLDRICH x EXCELSIOR
Fenotipuri Genotipuri
1 Alungit 2 Aa heterozigot dominant
1 Sferic 2 aa homozigot recesiv

n combinaiile Excelsior fruct alungit Aa x Goldrich fruct sferic aa, i
Goldrich aa x ExcelsiorAa, segregarea caracteristicii forma fructului n raport de 1:1 a
evideniat aciunea de tester dublu recesiv a genotipului Goldrich i a confirmat natura
heterozigot a genotipului Excelsior.












Figura 1. Repartizarea alelelor n gameii descendenilor F
1
n combinaiile genomale
Excelsior x Goldrich i Goldrich x Excelsior




40

Experimentul 5. Mecanismul genetic al motenirii formei fructului alungit n cadrul
familiei hibride de cais COMANDOR x DACIA









n experimentul prezentat, alelele celor dou genotipuri, nu au segregat, dominnd
cele care exprim caracteristica forma alungit a fructului Aa, asupra alelelor recesive aa
care exprim caracteristica forma sferic a fructului.
Vom sintetiza acum, rezultatele celor cinci experimente prezentate.
1. La cais alelele care determin caracteristica forma fructului vor segrega n
generaia F
1,
n unele combinaii genomale, sau nu vor segrega n F
1
n alte combinaii
genomale.
2. Alelele care determin caracteristica forma fructului alungit, sunt heterozigot
dominante (Aa), iar alelele care determin caracteristica forma sferic a fructului sunt
homozigot recesive (aa).
3. Segregarea caracteristicii forma fructului n F
1,
demonstreaz natura heterozigot a
unor genotipuri de cais, pentru caracteristica analizat, spre deosebire de natura
homozigot a caracteristicii forma bobului la mazrea de grdin.
Testul
2
(hi ptrat)
O ntrebare important la care trebuie s rspundem n oricare din experimentele
genetice, este cum putem decide dac datele noastre sunt potrivit raportului Mendelian sau
nu. Pentru aceasta se efectueaz testul statistic
2
sau testul bunei ncadrri n raportul
Mendelian.
Pentru calcularea lui
2
se folosete urmtoarea formul:

2
= (valori observate valori ateptate)
2
/ valori ateptate
Gradele de libertate (df) = n-1, unde n este numrul de clase.
COMANDOR DACIA
P1 x
P2

Form alungit Form sferic
Aa aa
F
1



41
S urmrim urmtoarele exemple, pentru a determina dac rezultatele sunt potrivit
raportului de 9:3:3:1
Valori observate - semine Valori ateptate - semine
315 Rotund, Galben (9/16)(556) = 312.75 Rotund,Galben
108 Rotund, Verde (3/16)(556) = 104.25 Rotund, Verde
101 Zbrcit, Galben (3/16)(556) = 104.25 Zbrcit, Galben
32 Zbrcit, verde (1/16)(556) = 34.75 Zbrcit, Verde
556 Total Semine 556.00 Total Semine

2
=(315 - 312,75)
2
/312,75 + (108 104,25)
2
/104,25 + (101-104,25)
2
/104,25
+(32- 34,75)
2
/34,75
Numrul de clase (n) = 4
df = 4-1 = 3
Valoarea
2
= 0,47
n tabelul cu gradele de libertate ale lui
2
la df = 3, vedem c probabilitatea valorilor
lui
2
(hi ptrat), este mai mare de 0.90. Convenional, conform statisticii, utilizm nivelul
probabilitii de 0.05, ca valoare critic. Dac valorile calculate ale lui hi ptrat
2
, sunt
mai mici de 0.05 acceptm ipoteza, iar dac valorile sunt mai mari dect 0.05, eliminm
ipoteza. De aceea, din cauz c valorile calculate ale lui hi ptrat sunt mai mari dect
acceptm ipoteza, eliminm posibilitatea ca datele s se ncadreaze n raportul de 9:3:3:1.
Tabel cuprinznd grade de libertate









REZUMATUL TEMEI NR.1 (Capitol 2)

Gregor Mendel (1822-1884) a analizat motenirea primit de la prini, analiznd o
serie de perechi contrastante de caracteristici la mazrea de grdin.
Probabilitatea
Grade
de libertate
0.9 0.5 0.1 0.05 0.01
1 0.02 0.46 2.71 3.84 6.64
2 0.21 1.39 4.61 5.99 9.21
3 0.58 2.37 6.25 7.82 11.35
4 1.06 3.36 7.78 9.49 13.28
5 1.61 4.35 9.24 11.07 15.09
42
Toi descendenii (F
1
), produi din aceste ncruciri au fost dihibrizi, heterozigoi
pentru fiecare pereche de alele (RrYy). Toate seminele au fost rotunde i galbene, aceasta
nsemnnd c genele pentru caracteristicile rotund i galben sunt dominante.

Legile lui Mendel (1865) formeaz o baz teoretic pentru
nelegerea motenirii genetice a caracteristicilor.
Pe baza experimentelor sale, Gregor Mendel a formulat o serie
de concluzii care au stat la baza multora dintre experimentele
ulterioare de genetic.
Experimente privind motenirea caracteristicilor calitative de la
prini au fost dezvoltate de-a lungul timpului de la Mendel ncoace, n foarte multe pri
ale lumii i la foarte multe specii de plante.
Un asemenea experiment este i cel realizat la cais n Romnia de Viorica Blan
(1991). La cais alelele care determin caracteristica forma fructului vor segrega n
generaia F
1,
n unele combinaii genomale, sau nu vor segrega n F
1
n alte combinaii
genomale. Alelele care determin caracteristica forma fructului alungit, sunt heterozigot
dominante (Aa), iar alelele care determin carcteristica forma sferic a fructului sunt
homozigot recesive (aa). Segregarea caracteristicii forma fructului n F
1,
demonstreaz
natura heterozigot a unor genotipuri de cais, pentru caracteristica analizat, spre deosebire
de natura homozigot a caracteristicii forma bobului la mazrea de grdin.

TEST RECAPITULATIV PENTRU TEMA NR. 1 (Capitol 2)

1. Plantele de mazre folosite n experimente de Gregor Mendel exteriorizeaz
urmtoarele fenotipuri:
a. semine rotunde sau zbrcite
b. semine galbene sau verzi
c. flori roii sau albe
d. flori roz sau mov
e. plante nalte sau dwarf
2. ncruciarea monohibrid nu este :
a. ncruciarea a doi monohibrizi
b. descendent a doi prini care sunt homozigoi pentru alele alternante ale unei perechi de
gene
43
3. Gregor Mendel a ncruciat :
a. dihibrizii F
1
cu caracteristici fenotipice, boabe rotunde i galbene pentru obinerea
generaiei F
2
b. monohibrizii F
2
cu caracteristici fenotipice, boabe rotunde i verzi pentru obinerea
generaiei F
2.
4.

Testcross este:
a. retroncruciarea sau backrossarea indivizilor cu fenotip dominant (cu structura genetic
necunoscut) cu printele recesiv sau cu un tester recesiv
b. retroncruciarea sau backcrossarea indivizilor cu fenotip recesiv (cu structura genetic
necunoscut) cu printele recesiv sau cu un tester dominant
5. Hibridarea testcross se aplic:
a. pentru a determina dac genotipul indivizilor dominani este heterozigot (Aa) sau
homozigot (AA) pentru o alel oarecare
b. pentru a determina dac genotipul indivizilor este heterozigot sau homozigot
6. Gregor Mendel a avut ansa:
a. ca fiecare pereche de gene pe care a studiat-o s se prezinte ntr-o aranjare independent
b. alele s fie n fapt sintetice cu trei loci n cromozomul 4, doi n cromozomul 1, unul n
cromozomul 7 i unul n cromozomul 5.
c. alelele s fie cu doi loci n cromozomul 4, doi n cromozomul 1, unul n cromozomul 7
i unul n cromozomul 5.
7. Alelele care determin caracteristica forma fructului alungit, la cais sunt:
a.heterozigot dominante (Aa)
b. homozigot recesive (aa)
8. Segregarea caracteristicii forma fructului n F
1
:

a. demonstreaz natura homozigot a unor genotipuri de cais
b. demonstreaz natura heterozigot a unor genotipuri de cais
9. Caracteristica forma bobului la mazrea de grdin:
a. segreg n generaia hibrid F
1
b. segreg n generaia hibrid F
2

10. Genele care controleaz caracteristicile, forma seminei, culoarea seminei,
textura pstii, culoarea florii, aezarea florii, nlimea plantei la mazrea de
grdin, sunt:
a. homozigote
b. heterozigote

44



Bibliografie selectiv
1. Andr Gallais, 27.10.2011. Mthodes des cration de varits en amlioration des
plantes ISBN 9782759216574
2. Blan Viorica, 2008. Genetica plantelor (manual), Editura ALPHA MDN, ISBN
978-973-139-047-5, 240 pag.
3. Blan V.,1991. Cercetri privind variabilitatea genetic la cais cu privire
special la adaptabilitate i calitate. Research on the genetic variability of the
apricot-tree with special focus on adaptability and quality, PhD Thesis,

University
of Agronomic Sciences and Veterinary Medicine Bucharest, Romania, 247 pp
4. Crciun T., 1981. Genetica Plantelor Horticole. Genetics of Horticultural Plants,
Ceres Publishing House, Bucharest, 537 pp
5. Dejampour J., Zeinalabedini M., 2006. Determination of some vegetative and bloom
characteristics of some local apricots in Azarbaijan (Iran) ecological conditions. Acta
Horticulturae 717, 63-66
6. Cheryl Bardoe, 2006. Gregor Mendel: The Friar who grew peas, HN Abrams.
7. Vtzslav Orel, 1996. Gregor Mendel: the first geneticist, Oxford University Press.
ISBN 0198547749


TEMA NR. 2 (Capitol 2)
MEIOZA I MITOZA LA PLANTE
Uniti de nvare:
Cauzele pentru care se divid celulele
Mitoza la plantele superioare
Mitoza i clonarea plantelor
Meioza i ciclul de via al plantelor (cromozomii diploizi i haploizi la plante;
alternarea generaiilor la algele multicelulare; ciclul de via la plantele Angiospermae;
microsporogeneza, microgametogeneza, megasporogeneza; megagametogeneza; dubla
fertilizare a grunciorilor de polen; dezvoltarea embrionului; meioza etap esenial n
alternarea generaiilor; fazele de diviziune ale meiozei n timpul procesului de formare a
polenului)
45
Semnificaia biologic a mitozei i meiozei i diferenele ntre mitoz i meioz.
Obiectivele temei:
- nelegerea locului i rolului mitozei n creterea i clonarea plantelor
- cunoaterea i evidenierea diviziunilor mitotice la plantele superioare
- nelegerea i fixarea aspectelor privind rolul meiozei ca etap esenial n
alternarea generaiilor la plantele superioare, n procesele de microsporogenez
- microgametogenez, megasporogenez i megagametogenez
- cunoaterea i evidenierea diviziunilor meiotice la plante.
Timpul alocat temei: 6 ore
Bibliografie recomandat:
1. Viorica Blan, 2008. Genetica Plantelor, Editura ALPHA MDN, ISBN 978-973-139-
047-5
2. http://www.biology.uc.edu/vgenetic/meiosis
3. http://www.iasprr.org/old/iasprr-pix/lily
4. http://wwwoxfordjournals.org.

2.1 De ce se divid celulele?
Toate organismele vii de pe pmnt sunt formate din una sau mai multe celule, care
sunt cele mai simple uniti de via capabile de o existen independent i de a se
reproduce. Celulele au o extraordinar abilitate de a-i face copii aproape identice prin
procesul de diviziune. Deoarece celulele noi sunt produse doar de celulele existente,
diviziunea celular este esenial pentru continuitatea vieii.
Exist o varietate de cauze pentru care o celul se divide, din care s reinem:
- Organismele multicelulare cresc n dimensiune i complexitate prin multitudinea
de celule format prin diviziune.
- Celulele btrne i deteriorate sunt nlocuite prin procesul de diviziune
- Organismele unicelulare, cum sunt bacteriile, se divid pentru a da natere unui
nou organism.
Dou evenimente sunt necesare pentru ca reproducerea sexuat s aib succes:
1. primul este acela n care celula parental trebuie s se asigure c noua celul
fiic primete o copie complet a informaiei ereditare. Aceast informaie este transmis
n forma moleculelor complexe de ADN, care direcioneaz variata activitate a celulei pe
ntreaga sa via.
2. n al doilea eveniment, citoplasma din celula parental va trebui s fie
46
divizat (mprit) celor dou celule fiice.
n timpul diviziunii, ADN ul transferat de la celula mam la celulele fiic, trebuie
s sufere schimbri deosebit de eficiente. n caz contrar, ar fi afectat integritatea codului
su genetic, ceea ce ar altera informaia transmis n noile celule formate i ar conduce la
moartea acestora.
Biologii au fost uimii de frumuseea i acurateea procesului de diviziune celular.
Aceast acuratee se datoreaz pregtirii i perfectrii procesului n milioane de ani.
Fr multele etape complicate care apar n timpul diviziunii, ansa ca organismele s
se dezvolte fr boli este aproape imposibil.
A fost demonstrat n multe experimente c unele substane chimice pot ntrerupe unul
sau mai multe din aceste procese complicate ale diviziunii, drept pentru care rezult celule
moarte sau cu defeciuni.
Exist dou tipuri ale diviziunii nucleare: mitoza i meioza. Prin mitoz rezult noi
celule somatice (ale corpului). Formarea unui organism adult din ovulul fecundat,
reproducerea asexuat i meninerea integr sau repararea unor pri ale corpului plantelor
sau animalelor sunt realizate prin diviziunea mitotic a celulelor.
Prin diviziunea meiotic rezult celule reproductive specializate, fie gamei la
animale sau spori la plante. Aceste celule au jumtate din numrul de cromozomi ai celulei
parentale, creia i se mai spune i celula mam.
Vom concluziona c, toate celulele noi provin din celulele existente ale organismului.
Aceste celule noi se formeaz prin procesul de diviziune, care implic att replicarea
nucleului, numit cariochinez ct i diviziunea citoplasmei, numit citochinez.
Diviziunea celular trece printr-o serie de evenimente ordonate, denumite ciclul
celular (fig.2).
TEST DE EVALUARE

1. De ce este esenial diviziunea celular pentru continuitatea vieii?
Rspuns:



2. Ce se ntmpl cu ADN ul transferat de la celula mam la celulele fiice?
Rspuns:

Deoarece celulele noi sunt produse doar de celulele existente. Aceste celule noi se
formeaz prin procesul de diviziune, care implic att replicarea nucleului, numit
cariochineza ct i diviziunea citoplasmei, numit citochineza.

47
Exerciii:
Exemplu rezolvat:
Pentru ca reproducerea sexuat s aib loc, sunt necesare evenimentele:
a. celula parental trebuie s se asigure c noua celul fiic, primete o copie
complet a informaiei ereditare
b. citoplasma din celula parental trebuie s fie divizat (mprit) celor dou celule
fiice.
Rezolvare: a i b
De rezolvat:
Diviziunea celular trece printr-o serie de evenimente ordonate, numite:
a. ciclul celular
b. ciclul de via
Rspuns:

Prin mitoz rezult:
a. noi celule somatice (ale corpului)
b. celule reproductive specializate
Rspuns:
2.2 Mitoza la plantele superioare
La plantele superioare, mitoza este faza ciclului celular n care materialul genetic din
celula parental se divide egal ntre cele dou celule fiice.
nainte ca celulele plantelor s intre n divizunea mitotic, trebuie s-i multiplice
materialul genetic i s-i dezvolte organitele (cloroplastele i mitocondriile) i citoplasma.
Acestea se petrec n faza numit interfaza.
Interfaza
n anii trecui, interfaza era considerat o etap de repaus, dar
cercetrile actuale, au artat c este unul dintre stagiile cele mai
active ale celulei, n care ea trebuie s se pregteasc pentru
ntregul proces. Datorit duratei sale lungi i a variatei activiti
biochimice acest stagiu al celulei a fost mprit n fazele G1, S i
G2, din care, faza G1 are cea mai variabil durat.
igura 1. Interfaza n celulele meristemului rdcinii de Allium
(biology.north west college.edu/biology/)

48
n interfaz activitatea biochimic a celulei este deosebit de intens, avnd loc:
- sintetiza precursorilor ADN,
- sinteza histonelor,
- sinteza actinininei,
- sinteza tubulinei,
- asamblarea proteinelor.
Uneori ciclul celular rmne n acest stagiu al interfazei i trece printr-o perioad
de odihn, denumit stagiul G
0
, care variaz ntre ore i ani. n acest stagiu G
0
, toate
activitile celulei stau n repaus.
1. SubfazaG1 presintetic (din eng. G-gop gol).
n perioada G
1
nu se produce sinteza ADN-ului (cantitatea de ADN este 2n (2c), dar
se sintetizeaz intensiv mARN, proteinele, enzimele. n afar de aceasta, n celul se
acumuleaz ATP, iar numrul de organite celulare crete.
Perioada G
1
constituie 25-50% din timpul interfazei (4-10 ore). La o serie de celule,
cum sunt celulele maligne, plasmodiul mixomicetei (Fusarium), aceast perioad poate
lipsi. n orice caz, doar stagiul G1 este acela n care ADN-ul nc neduplicat trece n faza
urmtoare numit faza S (fig.2).
2. Subfaza S sintetic (din eng. S-synthesis sintez).
n aceast perioad are loc reduplicarea ADN-ului, cantitatea lui variind ntre 2c i 4c
(dup numrul de cromatide). Paralel cu sinteza rARN continu sinteza mARN.
Perioada S ocup 35-40% (5-8 ore) din interfaz. Ea nu poate lipsi n ciclul celular.
n aceast faz cromozomul este supus duplicrii. n cursul acestui proces, se
detensioneaz lunga i dubla spiral i este iniiat replicarea semiconservativ n cteva
puncte simultan. Apoi, replicarea progreseaz n ambele direcii pn cnd ntlnesc
segmente vecine de replicare.
n timpul replicrii una dintre moleculele surori de ADN, pstreaz unele histone
parentale, proteine de baz, iar altele se asociaz cu noi uniti de histone sintetizate,
pentru a forma firele de cromatin. Astfel, firele de cromatin se formeaz n aproape apte
ore, n timp ce stagiul G1, dureaz n jur de 5 ore.
3. Subfaza G2 postsintetic. O dat ce firele de cromatin sunt duplicate, faza G2 este
iniiat. n aceast faz, sau stagiu, sunt necesare intense activiti biochimice pentru
contracia cromozomal i are loc dezvoltarea aparatului mitotic. Acest stagiu dureaz
aproximativ trei ore.
49
n aceast perioad continu sinteza ARN i a proteinelor. Se sintetizeaz n cantiti
mari tubulinele, actinina i miozina, acestea fiind necesare dividerii celulare.
Perioada G
2
are o durat de 20-35% (3-5 ore) din interfaz. Dup interfaz celula se
divide. Reproducerea celulelor asigur vieii creterea, multiplicarea, diferenierea i
regenerarea.
Este important s notm c pe lng activitile prezentate, n acest stagiu, se
sintetizeaz i variate tipuri de ARN. Chiar i cnd cromatina ADN este n curs de
replicare, sinteza ARN continu. n finalul acestor stagii, rezult creterea dimensiunii
nucleului i celula este acum pregtit s intre n dramatice i condensate faze de diviziune
ale mitozei, cu care se ncheie un ciclu de fabricare a unei copii a celulei parentale. Dup
mitoz, celulele fiice, pot rmne n stagiul G
0
, sau pot s treac prin toate stagiile ciclului
celular.

Figura 2. Ciclul celular i stagiile interfazei (http://oxfordjournals.org)

Figura 3. Modificrile suferite de cromozomi n timpul ciclului celular
(http://oxfordjournals.org)
50
2.2.1 Fazele de diviziune ale mitozei la plantele superioare
Mitoza (Din gr. mitos - filament) reprezint diviziunea indirect a celulelor
somatice cu dublarea prealabil i repartizarea uniform a numrului de cromozomi
(materialul ereditar) n celulele-fiice. Mitoza are loc n celulele ce se
afl n plin cretere: esutul embrionar i esuturile meristematice ale
plantelor, organele hematopoetice i esuturile epidermice ale
animalelor, etc. Aceast diviziune asigur nmulirea celulelor,
creterea i diferenierea individual, continuitatea genotipului.

Foto 1. W. Fleming n 1879

Mitoza a fost descoperit pentru prima dat de W. Fleming n 1879 (foto 1).
Diviziunea mitotic are loc n celulele-mam diploide (cu 2n cromozomi sau 2c). n urma
diviziunii mitotice, celula se dubleaz, genernd dou celule-fiice identice cu celula-mam
(cu 2n cromozomi sau 2c). Ea ocup circa 10% din ciclul celular. n funcie de specia din
care fac parte celulele, mitoza poate dura ntre cteva minute i cteva ore.
Mitoza este alctuit din 4 faze succesive:
1. Profaza
2. Metafaza
3. Anafaza
4. Telofaza
1. Profaza
n profaz materialul genetic numit cromatin, condenseaz i formeaz cromozomii.
Cromozomii sunt conectai mpreun formnd perechi, conectarea fcndu-se n punctul
central denumit centromer. n afara nucleului, structurile denumite centrozomi se dezvolt.
Rolul centrozomilor este de a crea un fel de tije tubulare, denumite
microtubuli. n pregtirea pentru stagiul de metafaz a mitozei,
microtubulii se introduc n nucleu i se ataeaz la centromerii
cromozomilor.

Figura 4. Profaza n celulele meristemului rdcinii de Allium
(biology.north west college.edu/biology/)

51
Profaza este prin urmare, faza din diviziunea mitotic n care cromozomii devin
vizibili ca rezultat al spiralizrii i condensrii. Fiecare cromozom este dublat longitudinal
i se evideniaz cele dou cromatide rsucite una n jurul celeilalte i unite n regiunea
centromerului. Spre sfritul profazei, apar centri mitotici, nucleolii devin mai mici i
chiar dispar complet, se degradeaz membrana nuclear.
n concluzie, profaza mitozei se caracterizeaz prin urmtoarele procese:
dublarea centriolilor (nc n interfaz) i migrarea lor spre polii celulei;
condensarea cromatinei i evidenierea cromozomilor;
degradarea nucleolilor;
degradarea membranei nucleare (i ca rezultat, a unei pri din reticulul
endoplasmatic rugos);
formarea fusului de diviziune (n celulele animale fusul de diviziune este radial, n
celulele vegetale el este aranjat ntr-un singur plan);
amestecul carioplasmei i hialoplasmei ;
formarea centrozomilor;
formarea microtubulilor i ataarea lor la centromerii cromozomilor.
Profaza ocup circa 50% (30 min) din mitoz.

TEST DE EVALUARE
1. Care sunt concluziile cercetrilor actuale n legtur cu interfaza ?
Rspuns:



2. Ce nu se produce n perioada G
1
a interfazei?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Mitoza este alctuit din urmtoarele faze succesive:
a. interfaza
b. profaza
c. metafaza
Interfaza este unul dintre stagiile cele mai active ale celulei, n care ea trebuie s se
pregteasc pentru ntregul proces de diviziune.
52
d. anafaza
e. telofaza
Rspuns: b, c, d, e
Exemplu de rezolvat:
2. n pregtirea pentru stagiul de metafaz a mitozei, microtubulii formai n
profaz:
a se introduc n nucleu i se ataeaz la centromerii cromozomilor
b. rmn n afara nucleului
Rspuns:

2. Metafaza este etapa n care cromozomii sunt delimitai i se aranjeaz n regiunea
ecuatorului unde formeaz placa metafazic. n timpul metafazei mitozei plantelor,
centromerii cu microtubulii ataai se deplaseaz spre diferite capete ale celulei. Acest
lucru duce la tragerea cromozomilor n sens opus capetelor celulei.
Centromerii ncep s formeze puncte de separare n acest stagiu.




Figura 5. Metafaza n celulele meristemului din rdcinile de
Allium, (biology.northwestcollege.edu/biology/)

Cromozomii se ataeaz cu centromerul de fibrele fusului de diviziune (pe fiecare
fibr cte un cromozom). Cele dou cromatide ale fiecrui cromozom sunt aezate una
lng alta i sunt unite n regiunea centromerului. Cnd metafaza se apropie de sfrit,
centromerii ncep s se divid, iar de fiecare jumtate rmne prins cte o cromatid.
n metafaz poate s continuie degradarea membranei nucleare.
Aadar, particularitile metafazei sunt urmtoarele:
aranjarea cromozomilor la ecuatorul celulei;
formarea plcii metafazice;
aranjarea cromozomilor n form de stea (cu centromerul spre centru);
fixarea cromozomilor prin intermediul fusului de diviziune (fusul de diviziune
este alctuit din fibrele centriolo-cromozomiale i fibrele centriolo-centriolare).

53

Figura 6. Placa metafazic n diviziunea mitotic la Armeniaca vulgaris
(dup Viorica Blan)

Metafaza este stadiul n care se pot stabili, cu deosebit precizie, numrul, forma,
mrimea cromozomilor specifici fiecrei specii.
Spre exemplu, studiile citogenetice efectuate la cais au scos n eviden faptul c
pn n prezent, garnitura cromozomic cunoscut este 2n=16 (Darlington C.D.,1945;
Blan V.,1991).
n figura de mai sus este artat garnitura cromozomic n metafaza mitotic din
rdcinuele active ale caisului Armeniaca vulgaris, la individul hibrid 88.4.11 BI.
Metafaza alctuiete circa 13% (8 min) din mitoz.
3. Anafaza const n clivarea longitudinal a cromozomilor i deplasarea lor (fiecare
cromozom este monocromatidic) spre polii opui ai celulei. Astfel, la polii celulei se
formeaz dou seturi de cromozomi cu aceeai constituie genetic ca i nucleul celulei-
mam.
n stagiul de anafaz al mitozei plantelor, perechile de
cromozomi se separ i jumtate din ei migreaz ctre un capt al
al celulei i cealalt jumtate ctre cellalt capt sau pol.



Figura 7. Anafaza n celulele meristemului rdcinii de Allium
(biology.northwestcollege.edu/biology/)

Microtubulii lucreaz n celula plantelor, care posed centriol, pentru a o ntinde, a o
lungi. n celulele plantelor care nu au centriol, rolul microtubulilor l are fragmoplastul i
n aceast situaie, citochineza se numete citochineza prin fragmoplast. n timpul acestui
54
tip de citochinez, se produc numeroase vezicule membranoase care deriv din complexul
Golgi i reticulul endoplasmatic. Aceste vezicule apar n regiunea interzonal a plcii
ecuatoriale, la fel ca i microtubulii.
ntr-un anume interval de timp, mai muli microtubuli se ataeaz la periferia fusului
mitotic, astfel c aparatul mitotic pare a fi bombat. Aceast structur bombat a
aparatului mitotic se numete fragmoplast. Mai trziu, veziculele ce se gsesc n zona
ecuatorial, n cadrul aparatului mitotic, fuzioneaz cu o alt cistern membranoas
circular i se extinde gradual n lateral pn cnd ntlnete suprafaa plcii ecuatoriale.
n final, cisterna i fragmoplastul, ntlnesc plasmamembrana lateral i fuzioneaz
cu ea. Astfel, citoplasma este divizat n dou de cisterna membranoas, care acioneaz
ca noi plasmambrane ale celulelor fiice.
Spaiul gsit ntre aceste membrane, va fi curnd umplut cu pectat de calciu care
joac rolul de lamel median. Apoi veziculele derivate din aparatul Golgi, umplute cu
fibre de celuloz sunt ndreptate cu ajutorul microtubulior din apropiere.
n concluzie, anafaza dureaz circa 7% (4 min) din timpul mitozei i se
caracterizeaz prin:
deplasarea cromatidelor fiecrui cromozom spre polii celulei (viteza deplasrii
este de 0,2-5,0 m/min);
aranjarea cromatidelor n timpul deplasrii n conformitate cu poziia
centromerului dup cum putem distinge din schema alturat.

Figura 8. Ciclul mitotic la plante dup Plik: Mitoza schemat.jpg, Wikipedia wolna
encyklopedia

55
Exist diferite opinii referitoare la natura forelor care mobilizeaz cromozomii
monocromatidici (cromatidele) spre polii celulei.
Conform ipotezei biochimice, deplasarea cromozomilor, la desprinderea lor de
centromer, are loc datorit polimerizrii tubulinei (protein contractil) din fusul de
diviziune n apropierea centriolilor, n regiunea centromerilor (chinetocorului).
Conform ipotezei fiziologice, deplasarea cromatidelor este rezultatul contraciilor
proteinelor microtubulilor (actinina i miozina).
Ambele ipoteze merit atenie, mai ales c unele celule (celulele plantelor
superioare) nu au centrioli.
4. Telofaza se caracterizeaz prin formarea la fiecare pol al celulei a cte unui nucleu
separat, care dup despiralizarea cromozomilor, devine optic omogen. Spre sfritul
telofazei apar nucleolii. Coninutul nucleolilor este similar cu cel al celulei (fig. 9).

Figura 9. Telofaza mijlocie i trzie n celulele meristemului rdcinilor de
Allium, (biology.northwest college.edu/biology/)

Cnd celulele plantelor sunt n telofaz, microtubulii i centrozomii se
dezintegreaz. Simultan cromozomii ncep s se decondenseze i s se alungeasc.
Activitatea de transcripie a ADN-ului ncepe n acest stagiu. n acelai timp veziculele
membranei nucleare apar i n curnd se organizeaz n nveliuri nucleare. Resturile
nucleului de la celula iniial creaz un nucleu n jurul cromozomilor la captul sau polul
opus al celulei. n acest punct, cromozomii se transform din nou n cromatin. Cromatina
relaxat se ataeaz la matricea proteinelor n regiunea numit MARS. Dac filamentele
cromozomale se relaxeaz, ADN-ul prezent n regiunea constriciei secundare se bucleaz
n afar i regiunea nucleolar ncepe s se organizeze. Genele ARNr, adunate, pornesc s
transcrie precursorii ARNs i proteinele asociate acestora asamblate n nucleol. Un pic
mai trziu proteinele structural ribozomale motenite se asambleaz n ARNr i nucleolul
pornete s se organizeze. Este important s reinem c n acest stagiu cromozomii rmn
ca singur filament. Atunci cnd celula intr n citochinez, se mparte n dou celule
56
independente. Cele dou celule fiice se despart apoi unele de altele,
fiecare dintre ele avnd n posesie o copie exact a meterialului
genetic original, din celula paternal.


Figura 10. Formarea celulelor fiice n esutul meristematic al
rdcinilor de Allium, (biology.northwestcollege.edu/biology/)

TEST DE EVALUARE

1. De cine este divizat citoplasma n anafaza mitotic a plantelor?
Rspuns:



2. Cum se numete structura bombat a aparatului mitotic, format atunci cnd mai
muli microtubuli se aeaz la periferia fusului mitotic?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. n timpul citochinezei prin fragmoplast se produc vezicule membranoase care
deriv din:
a. complexul Golgi
b. reticulul endoplasmatic
c. microtubuli
Rspuns: a,b
De rezolvat:
2. Anafaza dureaz circa 7% (4 min) din timpul mitozei i se caracterizeaz prin:
a. deplasarea cromatidelor fiecrui cromozom spre polii celulei (viteza deplasrii este de
0,2-5,0 m/min);
b. aranjarea cromatidelor n timpul deplasrii n conformitate cu poziia centromerului
Rspuns:

n finalul anafazei, cisterna i fragmoplastul, ntlnesc plasmamembrana lateral i
fuzioneaz cu ea. Astfel, citoplasama este divizat n dou de cisterna membranoas,
care acioneaz ca noi plasmamembrane ale celulelor fiice.

57
2.2.2 Mitoza i clonarea
Folosind proprietatea de totipoten, n cazul n care o singur celul poate fi
indus pentru a se divide mitotic i a se dezvolta ntr-un organism complet, biologii au
reuit s propage clonal multe specii de plante. n mod normal, producerea descendenilor
implic reproducerea sexuat, unde doi prini contribuie cu fondul lor genetic n gameii
rezultai. n aceast situaie, fiecare descendent posed un amestec al genelor de la cei doi
prini. n schimb, dac o celul diploid a doar unuia dintre prini este indus de a se
dezvolta pn la faza de descendent, atunci acel descendent se numete clon. O astfel de
propagare clonal este n vog, n mod particular la plante, unde tehnica culturii in vitro a
esuturilor a fost foarte bine exploatat. n acest proces, o celul sau un grup de celule
prelevate din orice parte a corpului plantei sunt explantate pe un mediu de nutriie de baz,
lichid sau solid format din agar, la care se adaug fitohormoni. Explantele se vor dezvolta
pn la faza de calus, de la care se va induce formarea embrionilor, care apoi vor fi
cultivai pe alte medii, pn la formarea plantelor cu rdcinue. Aceast metod,
dezvoltat prin cunoaterea mecanismelor diviziunii mitotice i a biotehnologiei, respectiv
a aplicrii tiinei genetice n biotehnologie, a contribuit din plin la cultivarea unor plante
horticole, a plantelor de cultur care au dificulti n multiplicarea pe cale vegetativ sau
prin reproducere sexuat. Este important de reinut c acest proces angajeaz mitoza i
rmne cel mai important mecanism de multiplicare celular, cu toate c procesul
diviziunii este precedat sau urmat de diferenierea celular. n ciuda inovaiilor tehnice
actuale, mecanismul diferenierii la nivel molecular nu este nc cunoscut.

2.3 Meioza i ciclul de via al plantelor
2.3.1 Cromozomii diploizi i haploizi la plante
La plantele superioare ca i la animale, meioza se petrece pentru a produce
generaii gametofitice, sau gameii nsei. Gameii fuzioneaz pentru a produce generaii
diploide, care apoi cresc devenind aduli. La plantele inferioare, generaia haploid
produs prin meioz este forma dominant. Spre exemplu, la briofitele, muchii tericoli
(pe sol), saxicoli (pe stnci) i corticoli (pe scoara copacilor, (Regn Plantae, Subregn.
Bryobionta, ncreng. Bryophyta), generaia haploid produs prin meioz, este forma
dominant.
Meioza este procesul care reduce mai nti numrul de cromozomi la jumtate
din perechile parentale de cromozomi i apoi separ perechile de cromozomi homologi
sau potrivete perechile de cromozomi. Celulele care conin perechi de cromozomi
58
homologi se numesc diploide. Cnd o celul are perechi de cromozomi, ne referim la un
numr diploid al cromozomilor. Numrul diploid de cromozomi, este constant i
caracteristic pentru fiecare specie fie la plante, fie la animale, fie la om. La specia uman
spre exemplu, numrul diploid de cromozomi este 46, iar cel haploid 23. Numrul i
forma cromozomilor a fost i este obiectul diverselor cercetri citogenetice la plante,
constituindu-se bnci de date cu privire la genomul multor specii din diferite zone ale
globului. Spre exemplu, numrul diploid la Armeniaca vulgaris familia Rosaceae este
2n=16, iar cel haploid este n= 8, (Viorica Blan,1991), la Holodiscus discolor, (sau cream
bush, arbustul crem) familia Rosaceae 2n=32, n=16 (Peter Goldblat, 1990).
Cromozomii homologi formeaz baza variaiei genetice a caracteristicilor
plantelor. Meioza, prin urmare are o funcie secundar pentru organismele vii, meninnd
variaia genetic. Produsul meiotic este jumtate din cromozomii parentali i prin urmare
este haploid. Nucleul celulei haploide are doar un set de cromozomi i nu perechi de
cromozomi homologi.
2.3.2 Alternarea generaiilor la algele multicelulare
Cele mai multe specii de plante au ambele stagii multicelulare, adic att cel
haploid ct i cel diploid, pe parcursul ciclului lor de via. Aceast alternan ntre
haploid i diploid, se numete alternarea generaiilor. Pentru multe plante predomin fie
stagiul diploid, fie stagiul haploid, astfel c oamenii nu au avut posibilitatea s se
familiarizeze cu aceste forme diferite de via al plantelor.
n plante, structura n care se petrece meioza, se numete sporangium. Partea
multicelular a plantei care produce sporangia se numete sporofit (spori care produc
plante). Meioza nu produce direct gamei, dar produce celule haploide, numite spori, care
la rndul lor cresc prin mitoz, ajungnd o structur multicelular, numit gametofit
(gamei care produc plante). Gametofiii pot produce eventual structuri care fac gamei
prin procesul de mitoz.
59

Figura 11. Diagrama alternrii generaiilor la algele multicelulare,
http://www.mbari.org/staff/conn/botany/greens/anna/frontpages/default.htm, 2011

n diagrama de mai sus, sunt artate elementele fundamentale ale alternrii
generaiilor la unele alge multicelulare ( exemplu din genul Cladophora) care au
sporofitul i gametofitul destul de asemntori, dar nu identici. Iat care sunt elementele
fundamentale ale alternrii generaiilor la algele multicelulare.
Dou celule gametice haploide, fiecare coninnd N cromozomi neperechi,
fuzioneaz pentru a forma o celul zigot diploid, care acum conine N perechi
cromozomi i n total 2N (2n) cromozomi.
Celula diploid zigot, se divide apoi, prin procesul normal de mitoz i n acest
mod, i menine numrul total de cromozomi de 2N. Rezultatul este un organism
multicelular diploid, denumit sporofit (pentru c la maturitate va produce la plantele
superioare cu flori, polenul i la plantele inferioare sporii).
Cnd ajunge la maturitate, sporofitul produce una sau mai multe sporangii
(singular sporangium), care este organul care produce sporii diploizi ai celulei
mam(sporocit). Acetia se divid prin procesul de meioz, rezultnd patru celule haploide,
fiecare dintre ele coninnd N cromozomi neperechi.
Celula spor haploid germineaz i se divide prin procesul de mitoz, drept
pentru care i menine numrul N (1n) de cromozomi. Rezultatul este un organism
multicelular haploid, care se numete gametofit, care la maturitate va produce gamei.
Cnd ajunge la maturitate, gametofitul produce una sau mai multe gametangii
(singular gametangia). Unii dintre gamei vor ntlni ali gamei i vor fuziona cu acetia.
2.3.3 Ciclul de via la plantele Angiospermae
n regnul animal, producerea gameilor urmeaz imediat dup diviziunea meiotic, ceea ce
face ca acetia s fie reprezentativi pentru stagiul haploid (1n) din ciclul de via al
60
animalelor. La plante ns, n mod invariabil (i fr excepie la plantele superioare),
producia imediat a diviziunilor meiotice nu sunt gameii, ci sporii. Plante superioare din
Angiosperme, cum sunt stejarul, caisul, piersicul, ierburile de gazon, trifoiul, grul,
porumbul, sunt diploide 2n, sau n stagiul sporofitic al ciclului de via. n ciclul de via al
acestor plante, stagiul vegetativ gametofitic, haploid 1n, este scurt i destul de greu de
remarcat. Sporofitul produce spori, ca urmare a sporogenezei, sau meiozei. Sporii sunt
supui ctorva diviziuni, n procesul numit gametogenez, pentru a forma gametofitul
matur. Gameii se formeaz n cadrul gametofitului. Toate plantele superioare produc dou
tipuri de spori: microspori i megaspori. Corespunztor acestor dou tipuri de spori, sunt
dou moduri de dezvoltare a lor, numite microgametogeneza i megagametogeneza, care
culmineaz cu dou plante diferite i relativ simple, numite n faza matur microgametofit
i megagametofit.
Microsporogeneza
Microsporogeneza este procesul prin care se formeaz gameii masculi (grunciorii de
polen). Acest proces se petrece n trei faze principale i anume Meioza I, Meioza II i
Endomitoza.
Fiecare dintre multele microsporocite (polenul celulelor mam), sufer n interiorul
anterelor procesul de diviziune prin meioz, rezultnd astfel cte 4 celule haploide (1n),
numite microspori, ( 4 celule haploid pentru fiecare microsporocit) (fig. 12).

Figura 12. Diagrama microsporogenezei la porumb (Zea mays)
(http:// masters mve agron iastate edu, University of Leicester Department of Biology)


61
Microgametogeneza (dezvoltarea gametofitului mascul i a gameilor)
Singurul nucleu al fiecrui microspor se divide o dat prin mitoz i unul din
nucleii celor dou celule fiice atrage ctre sine colorarea profund a citoplasmei. Acest
nucleu se numete nucleu generativ n timp ce cellalt este nucleul tubului polinic. Nucleul
generativ trece printr-o diviziune mitotic, formeaz doi gamei masculi, sau celule
spermatice (n unele celule aceast diviziune nu se petrece pn ce polenizarea nu a avut
loc i nucleul generativ se mic prin tubul polinic). Acesta constituie grunciorul de polen
sau microgametofitul matur (fig. 13).



Figura 13. Diagrama microgametogenezei la porumb (Zea mays)
(http:// masters mve agron iastate edu, University of Leicester Department of Biology)

Megasporogeneza
Megasporogeneza este procesul prin care se formeaz gameii femeli (ovule).
Din diagrama de mai jos (fig.14), se observ c 2n megasporocitele (megasporii din sacul
embrionar al celulei mam), sunt supuse procesului de meioz. n urma acestui proces,
rezult patru megaspori, fiecare dintre ei avnd numr haploid de cromozomi. Trei dintre
cei patru megaspori se dezintegreaz i al patrulea se dezvolt n gametofit matur.
62



Figura 14. Diagrama microgametogenezei la porumb (Zea mays),
(http:// masters mve agron iastate edu, University of Leicester Department of Biology)


Megagametogeneza (dezvoltarea gametofitului femel i a gameilor)
Megasporul care a supravieuit se mrete foarte mult, pentru a forma sacul
embrionar i n continuare se petrec trei diviziuni mitotice, ncepnd cu nucleul original al
acestui megaspor. n urma acestui proces, se produc, n interiorul sacului embrionar, opt
nuclei fiice, cu numr haploid de cromozomi(1n). Acetia se orienteaz dup cum
urmeaz: doi nuclei polari se aeaz mpreun n mijlocul sacului embrionar, trei nuclei
sunt localizai la captul sacului embrionar, unde va intra gametul mascul, sau spermatia.
Una dintre celulele din centrul sacului embrionar devine gamet femel, sau ou, dou sunt
sinergide, la unul din capetele sacului embrionar, iar trei celule sunt antipodale i se aeaz
la captul opus sinergidelor. Sacul embrionar cu cei opt nuclei aranjai dup cum am artat
mai sus i se vede din figura 15, megagametofitul matur.
63
.

Figura 15. Diagrama macrogametogenezei la porumb (Zea mays),
(http:// masters mve agron iastate edu, University of Leicester Department of Biology)

Dubla fertilizare a grunciorilor de polen
Grunciorii de polen sunt eliberai prin deschiderea anterelor i sunt transportai pe
stigmatul florilor altor plante, n cazul de fa, a celor de porumb. Fiecare gruncior de
polen, va emite curnd n afar tubul polinic (generat de nucleul tub), care penetreaz
esuturile stigmatului i i diger propria cale prin acestea i prin esuturile stilului, pn
ajunge jos la unul dintre ovule. Celulele spermatice trec prin tubul polinic n spatele
nucleului tub. Unul dintre tuburile polinice va ntlni ovulul i va penetra sacul embrionar.
Nucleul tub se va dezintegra i cele dou celule spermatice vor intra i ele. Una dintre
celulele spermatice va fuziona cu gametul femel, sau oul, pentru a produce zigotul 2n, n
timp ce o alt celul spermatic fuzioneaz cu doi nuclei polari, din care se va produce
nucleul 3n (triploid) al endospermului.

Dezvoltarea embrionului
La nceput, esutul endospermului triploid crete mai repede dect embrionul. Mai
trziu, embrionul care se dezvolt din zigot, crete pe seama endospermului. n funcie de
specie, esutul endospermului poate persista sau nu, atunci cnd smna a crescut complet.
n timp ce se rencepe creterea plntuei, prin germinarea seminei, embrionul continu s
64
se dezvolte, pn cnd ajunge la maturitate sporofitul i se produc din nou microspori i
megaspori.
TEST DE EVALUARE

1. Care este principala particularitate a numrului diploid de cromozomi?



2. Cte seturi de cromozomi are nucleul celulei haploide?

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. La plante, n mod invariabil, producia imediat a diviziunilor meiotice sunt:
a. gameii
b. sporii
Rezolvare: b
De rezolvat:
2. Megasporogeneza este procesul prin care :
a. se formeaz gameii femeli (ovule)
b. se dezvolt gametofitul femel i gameii
Rspuns:

2.3.4 Meioza, etap esenial n alternarea generaiilor
Ciclul de via la plantele superioare din Angiospermae, este o alternare ntre generaia
diploid (2n) a sporofitului i generaia haploid (1n) a gametofitului, n care meioza are
un rol esenial (fig. 16).


Numrul diploid de cromozomi, este constant i caracteristic pentru fiecare specie fie la
plante, fie la animale, fie la om.
65


Figura 16. Ciclul diploid (2n), ciclul haploid (1n) i alternarea generaiilor la
Angiospermae

Care este rolul meiozei?
La aceast ntrebare vom rspunde punctual n cele ce urmeaz:
1. Asigur constana numrului de cromozomi n cadrul reproducerii sexuate, micornd
de dou ori numrul lor n celulele sexuale. n urma fecundaiei, n zigot, se restabilete de
fiecare dat numrul diploid de cromozomi. Este bine cunoscut c numrul de cromozomi
este stabil pentru fiecare specie, aceast nsuire fiind determinat de meioz.
2. Meioza acioneaz pentru a avea loc recombinri ntre cromozomii homologi parentali.
3. Deoarece cromozomii parentali homologi se aranjeaz randomizat n prima plac
metafazic, cromozomii segreg randomizat i independent.
4. Recombinarea genetic i segregarea randomizat determin producerea gameilor cu
genotip variabil.
5. Genotipurile variabile, ajut ele nsele la a determina prin rezultate variabile, producerea
ca urmare a fertilizrii, a gameilor cu genotip variabil.
6. Variaia genetic indus prin producerea gameilor cu genotip variabil, joac un rol
esenial n evoluie.
7. Asigur diversitatea (heterogenitatea) genetic ca rezultat al crossing-overului. Astfel,
populaiile organismelor devin mai heterogene i evident, se pot adapta mai uor la
condiiile mediului.


66
2.3.5 Fazele de diviziune ale meiozei, n timpul procesului de formare a polenului prin
microsporogenez la Liliumi la porumb (Zea mays)
Dup cum tim, microsporogeneza este procesul prin care gameii masculi (grunciorii
de polen) se formeaz. Acest proces se divide n trei pri:
1. Meioza I,
2. Meioza II,
3. Endomitoza.
Formarea gameilor este precedat de dou diviziuni succesive deosebite:
A. diviziunea reducional (sau primar, heterotipic, meioza I);
B. diviziunea ecuaional (sau secundar, homotipic, meioza II).
Ca rezultat al primei diviziuni, dintr-o celul diploid (2n) se obin dou celule haploide
(n). A doua diviziune este echivalent celei mitotice, iar din cele dou celule haploide se
obin 4. n urma unor procese specifice, aceste celule dau natere gameilor.
Particularitile fiecrei faze sunt artate n imaginile de mai jos:

Interfaza premeiotic la Zea mays. Se observ n imagine: forma neregulat a celulei
mam polinice,care are protoplasm dens, nu are vacuol, structura peretelui celular nu
este clar, i nucleul nu este difereniat
Profaza I, este cea mai lung faz a meiozei I. n timpul Profazei I, membrana nuclear
dispare, cromozomii vin n contact i se formeaz fusul nuclear. Profaza I, are cteva
substagii: leptoten, zigoten, pachiten, diploten i diachineza.
67

La Lilium, n profaza timpurie se aliniaz
cromozomii

La Zea mays n Leptoten, celula devine
rotujit, cu protoplasma dens. Firele de
cromatin sunt foarte extinse i se nfoar
n jurul nucleolului. Sinapsa cromozomilor
este iniiat. Configurarea componentelor
duble de cromatin i simple este evident.
Cromomerele sunt vizibile.

La Zea mays, Zigotenul trziu, pachitenul
timpuriu: Formarea perechilor de
cromozomi homologi este complet.
Cromozomii sunt condensai i se vd
detalii ale protuberanelor i ale hetero-
cromatinei sunt vizibile. Nucleolul i
organizarea regiunii nucleolare a
cromozomului ase sunt vizibili.

La Zea mays, Cromozomii continu s se
condenseze, avnd forma unor fire scurte i
groase. Perechile de cromozomi par a se
respinge unii pe alii, exceptnd regiunile n
care apar chiasmele i acolo are loc crossing-
overul. Chiasmata se vede frecvent ca un X
ceea ce configureaz buclarea cromozomilor.
68

La Lilium, faza se apropie de pachiten,
unde cromozomii sunt foarte extini, iar
perechile de cromozomi homologi sunt
formate i i schimb materialul genetic.




La Lilium, cromozomii homologi continu
s se condenseze, avnd o form mult mai
compact n diachinez

La Zea mays, n diplotenul trziu, chiasmata
este la final i perechile de cromozomi sunt
separate unele de celelalte. Forma de X i
buclarea cromozomilor este nc vizibil.
Organizarea regiunii nucleolare a ase
cromozomi este ferm ataat la nucleol.

La Lilium, Diachineza este ultimul stadiu al
profazei I, nainte de metafaza I.

La Zea mays, Diachineza. Perechile de

La Zea mays, Diachineza trzie. Perechile
69
cromozomi condensai sunt separate unele
de celelate. Chiasmata, forma de X i
configuraia buclat este nc vizibil.

de cromozomi sunt nchise la culoare, forma
este rotunjit, iar nucleolul ncepe s dispar.
Metafaza I . n timpul metafazei I, cromozomii migreaz ctre ecuatorul fusului nuclear.

Metafaza I, Lilium. Se vede n imagine ansamblul de cromozomi, vzui polar i
longitudinal .

Metafaza I Zea mays, vedere
longitudinal. Nucleolul dispare. Perechile
de cromozomi se afl pe placa ecuatorial
a structurii fusului. Chiasmata s-a mutat la
capetele perechilor de cromozomi.

Metafaza I Zea mays, vedere polar.
Perechile de cromozomi apar ca structuri
foarte dense distribuite ntr-un singur plan al
protoplastului.
70

Anafaza, Lilium. Cromozomii homologi
au migrat ctre polii opui ai celulei, iar
materialul genetic a fost mprit la
jumtate.

Anafaza I, Zea mays. Perechile de
cromozomi se separ i se mut la polii
opui. Configuraia n form de V a
cromozomilor, este dat de mutarea
centromerului, naintnd pe braele acestora.
Numrul de cromozomi la fiecare pol, este
acum redus la jumtate fa de numrul pe
care l posed celula mam a microsporului.

Telofaza I, Lilium. Se distinge stratul
peretelui celular, format ntre cele dou
faze ale meiozei. Fazele celei de a doua
jumti a meiozei, decurg foarte repede.

Telofaza I, Zea mays. Cromozomii de la
fiecare pol al celulei sunt acum extini.
Nucleolul reapare i citoplasma se divide
(citochineza), pentru a forma dou jumti
de celule n form de semilun.
Meioza II este o diviziune ecuaional n timpul creia, cromatidele se separ i se
distribuie n cei doi nuclei ai celulelor fiice. Astfel, fiecare nucleu primete un numr
haploid de cromozomi Meioza II se mparte n patru faze: profaza II, metafaza II, anafaza
II i telofaza II. Aceste faze sunt analoage cu fazele meiozei I.
71

Profaza II. La Zea mays, cromozomii condenseaz n forma unor fire scurte i groase,
aezate n jurul nucleolilor

Metafaza II Lilium. Cromozomii suport
separarea cromatidelor, n cea de a doua
parte a meiozei, ntr-un ciclu asemntor
mitozei, cu excepia c nu are loc
recombinarea cromozomilor homologi.

Metafaza II. Zea mays .Cromozomii (fiecare
cromozom are dou cromatide surori), se afl
pe placa ecuatorial a fusului de diviziune.
Nucleolii au disprut din nou.

Anafaza II. Zea mays. Cele dou cromatide surori, vzute ca o mas nchis colorat sunt
separate acum i se mut spre polii opui.
72

Telofaza II, Lilium. Citochineza ntre
membrii tetradei este complet. Separarea
celulelor de peretele microsporului va avea
loc curnd.

Telofaza II, Zea mays. Cromozomii de la
fiecare pol sunt n extensie, nucleolul reapare
i citoplasma se divide formnd patru celule
n form de con.
Lilium. Tetrade nconjurate de o
caloz. Caloza se formeaz n jurul
tetradelor, din vechiul perete a
microsporocitului. Microsporii separai din
peretele megasporocitului, devine rotunjit
i formeaz primexina, un precursor
ablon, pentru depozitarea exinei de mai
trziu.
Lilium. Tetradele cu stagiul complet al
calozei. Cnd microsporii au acest stagiu
complet, se alungesc ntructva, lund
oarecum forma unei mingii de fotbal
american.
Realizarea microsporilor
73

Lilium. n acest stagiu, microsporii au
exin, (peretele exterior al sporopolinin),
dar are nc loc depozitarea exinei i
peretele rmne pliabil pentru scurt timp.

Zea mays. Se formeaz patru microspori n
form de con i au inclus n interior
materialul din care este construit peretele,
care ncepe s fie digerat i n felul acesta cei
patru microspori sunt formai i eliberai.

Microgametogeneza

Lilium, Polen bicelular. Celulele
generative se formeaz mai nti n contact
cu intina, (peretele interior al polenului),
dar celulele apoi se scufund n
citoplasm, devenind cu adevrat o celul
ntr-o celul

Lilium, Celula generativ este frecvent
ncovoiat, sau ncrligat, dar apare
ntotdeauna asociat cu nucleul vegetativ n
unitatea germinal mascul. Citoplasma
celulei generative este dens i tot aa i
nucleul generativ, n ciuda lipsei de
mobilitate a acestor celule.
Polenul matur
74

Zea mays. Grunciorul de polen matur are acum trei nuclei. Cei doi din partea de sus,
condenseaz, iau forma de semilun, iar n jurul porilor germinativi se formeaz polenul.
Nucleul mai mare din partea de jos a celulei, este vegetativ.
Germinarea polenului i creterea tubului polinic.

Atunci cnd grunciorii de polen poposesc
pe stigmatul florii, germineaz i formeaz
tubul polinic, care continu s se
alungeasc pn cnd penetreaz stilul.
Dup aceea, ptrunde n ovar, apoi intr n
micropil i depoziteaz celulele
spermatice, ntr-o locaie specific din
sacul embrionar

Germinaia polenului i formarea tubului
polinic pe mediu de agar i zaharoz, la cais
- Armeniaca vulgaris, soiul Dacia (dup
Viorica Blan)

Celulele obinute n rezultatul meiozei au o evoluie diferit. La organele mascule
ale florii, toate cele patru celule vor deveni gamei-masculi sau spori n consecina
procesului de spermatogenez (sau microsporogenez). La organele femele, trei dintre
cele patru celule avorteaz, transformndu-se n nuclee polare, iar cea de-a patra celul se
transform n gamet-femel.

75










Figura 17. Faze ale meiozei la Armeniaca vulgaris (diachineza, profaza 1,
metafaza 1, anafaza 1, telofaza 1, metafaza 2 i anatelofaza 2)

La cais (Armeniaca vulgaris), dou dintre celulele tetradei (uneori toate patru)
particip la formarea sacului embrionar, n care are loc formarea ovulului, a sinergidelor, a
celulelor-antipod i a celulelor diploide centrale.
Spre exemplu, n studiile citogenetice efectuate de Viorica Blan (1991), s-a
observat c diviziunile meiotice la unele soiuri i hibrizi de cais nu au evideniat anomalii,
aceasta reflectnd asigurarea transmiterii n descenden a unor caracteristici ale
prinilor, sau altfel spus, continuitatea genetic a acestora. n figura 17, se vede c
diviziunile meiotice la descendentul hibrid 88.4.11.BI (diachineza, profaza 1, metafaza 1,
anafaza 1, telofaza 1, metafaza 2 i anatelofaza 2), s-au desfurat normal, procesul
finalizndu-se cu formarea tetradelor.

TEST DE EVALUARE

1. Care sunt particularitile telofazei II la Zea mays?
Rspuns:



2. Care sunt particularitile telofazei I la Lilium?
Rspuns:


Cromozomii de la fiecare pol sunt n extensie, nucleolul reapare i citoplasma se
divide formnd patru celule n form de con.
76
Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Meioza II este:
a. o diviziune ecuaional n timpul creia, cromatidele se separ i se distribuie
n cei doi nuclei ai celulelor fiice
b. o diviziune reducional n timpul creia, cromatidele se separ i se distribuie
n cei doi nuclei ai celulelor fiice
Rspuns: a
De rezolvat:
2. La organele mascule ale florii:
a. toate cele patru celule obinute ca rezultat al meiozei vor deveni gamei-masculi sau
spori n consecina procesului de spermatogenez (sau microsporogenez).
b. trei dintre cele patru celule avorteaz, transformndu-se n nuclee polare, iar cea de-a
patra celul se transform n gamet mascul.
Rezolvare:

n concluzie, diferitelor grupe de organisme le sunt caracteristice diverse tipuri de meioz:
meioza gametic (sau terminal) n rezultatul meiozei apar spermatozoizi i
ovule care nu se divizeaz ulterior i sunt apte de fecundaie (se ntlnesc la animalele
superioare);
meioza zigotic (sau iniial) n rezultatul meiozei apar celule vegetale cu un
numr haploid de cromozomi (se ntlnete la alge i ciuperci);
meioza sporal (sau intermediar) n rezultatul meiozei se formeaz mega sau
microspori haploizi, la dividerea ulterioar a crora se formeaz gamei.
Este o parte component a procesului general de sporogenez (se ntlnete la
plantele superioare).
Din cele menionate anterior se impune concluzia c meioza i mitoza se deosebesc
esenial, dup cum vedem n tabelul de mai jos.






77
Deosebirile dintre mitoz i meioz

Mitoza Meioza
Este caracteristic celulelor somatice. Este caracteristic celulelor germinale.
n rezultatul dividerii se obin dou
celule diploide.
n consecina dividerii se obin patru celule
haploide.
Este compus dintr-o singur
diviziune.
Este compus din dou diviziuni succesive.
Profaza este de scurt durat. Profaza are o durat lung (n comparaie cu
cea a mitozei) i este alctuit din 5 stadii
succesive.
Cromozomii omologi nu formeaz
organizat bivaleni.
Cromozomii omologi n profaza I formeaz
bivaleni.
Nu se formeaz sinapsa (complexul
sinaptonemal).
n profaza I se formeaz sinaptonul.
De regul, nu apar chiasme i nu are
loc crossing-overul.
n profaza I are loc (cu o frecven destul de
nalt) crossing-overul.
n profaz nu se sintetizeaz
suplimentar ADN.
n profaz se poate sintetiza suplimentar o
mic cantitate de ADN (0,3% z ADN i 0,1%
p ADN).
n anafaz spre poli migreaz cte o
cromatid din fiecare cromozom.
n anafaza I spre poli migreaz cte un
cromozom din fiecare bivalent.


REZUMATUL TEMEI NR 2 (Capitol 2)

Reproducerea celulelor asigur vieii creterea, multiplicarea, diferenierea i
regenerarea esuturilor, iar n cele din urm, continuitatea.
Celulele procariotese reproduc ca rezultat al dividerii simple, fie prin strangulaie
(bacteriile gramnegative), prin lamel median (bacteriile grampozitive), sau prin
nmugurire (la rizobii).
78
n prealabil, n celula iniial are loc reduplicarea moleculei de ADN cu participarea
nemijlocit a plasmalemei, astfel celulele fiice primesc aceieai informaie ereditar
localizat n nucleoid.
Celulele eucariote se reproduc pe dou ci: prin diviziunea direct (amitoz) i prin
diviziunea indirect (cariochinez i citochinez).
Diviziunea direct reprezint o simpl scindare a nucleului i a citoplasmei, iar
diviziunea indirect are loc n urma unor schimbri ale substanei nucleare. Diviziunea
indirect poate fi: tipic sau ecvaional (mitoza); alotipic sau reducional (meioza).
Semnificaia biologic a meiozei este aceea c: a) asigur constana numrului de
cromozomi n cadrul reproducerii sexuate i b) asigur diversitatea (heterogenitatea)
genetic ca rezultat al crossing-overului. Astfel, populaiile organismelor devin mai
heterogene i evident, se pot adapta mai uor la condiiile mediului.

Bibliografie selectiv
1. Blan V., 1991. Cercetri privind variabilitatea genetic la cais cu privire special la
adaptabilitate i calitate. Research on the genetic variability of the apricot-tree with
special focus on adaptability and quality, PhD Thesis,

University of Agronomic Sciences
and Veterinary Medicine Bucharest, Romania, 247 pp
2. Bell, P.R. & Hemsley, A.R., 2000. Green Plants: their Origin and Diversity (2nd ed.),
Cambridge, etc.Cambridge University Press, ISBN 978-0-521-64109-8
3. Ming T. Chang, M. G. Neuffer, 1989. A Simple Method for Staining Nuclei of Mature
and Germinated Maize Pollen. Vol. 64, No. 4 , Pages 181-184
4. Foster, A.S., Gifford, E.M.,1974. Comparative Morphology of Vascular Plants (2nd
ed.), San Francisco: W.H. Freeman, ISBN 978-0-7167-0712-7
5. Guiry, M.D.; Guiry, G.M. (2008), "Cladophora", AlgaeBase (World-wide electronic
publication, National University of Ireland, Galway),
http://www.algaebase.org/search/genus/detail/?genus_id=37, retrieved 2011-07-21
6. Kirby, A., 2001. Ulva, the sea lettuce, Monterey Bay Aquarium Research Institute,
http://www.mbari.org/staff/conn/botany/greens/anna/frontpages/default.htm, retrieved
2011-01-01
7. Scott, Thomas, 1996. Concise Encyclopedia Biology, Berlin: Walter de Gruyter,
ISBN 978-3-11-010661-9
79
8. Shyam, R., 1980. On the life-cycle, cytology and taxonomy of Cladophora callicoma
from India, American Journal of Botany 67 (5): 61924, doi:10.2307/2442655,
JSTOR 2442655
9. Sporne, K.R., 1974a. The Morphology of Angiosperms, London: Hutchinson,
ISBN 978-0-09-120611-6
10. Sporne, K.R.,1974b. The Morphology of Gymnosperms (2nd ed.), London:
Hutchinson, ISBN 978-0-09-077152-3
11. Stewart, W.N., Rothwell, G.W., 1993. Paleobotany and the Evolution of Plants (2nd
ed.), Cambridge, UK: Cambridge University Press, ISBN 978-0-521-38294-6
12. Sturtevant A. H., 1965. A history of genetics, Harper and Row, p. 12.
13. Wood R. J. and Orel V., 2005. Scientific Breeding in central Europe during the early
nineteenth century: background to Mendel's later work. J. Hist. Biol. 38: 239 272.


TEMA NR. 3 (Capitol 2)

LINKAGE GENETIC I HARTA LINKAGE LA PLANTE

Uniti de nvare:
Cum se poate calcula distana relativ dintre dou gene?
Ce este i cum se manifest mecanismul linkage genetic?
Ce este linkage dezechilibrat i de cine este cauzat?
Care este relaia ntre harta genetic i harta fizic a cromozomilor?
Ce este asocierea genetic?
Obiectivele
1. Cunoaterea i fixarea mecanismului Linkage genetic, n baza progresului fcut de
genetica modern.
2. nelegerea modului de construire a hrii linkage, ca hart a distanelor dintre
caracteristicile pozitive i negative care sunt prezente n acelai cromozom.
3. Cunoaterea cilor de a se evita transmiterea nlnuit a unor caracteristici
negative i crearea posibilitii recombinrilor multiple.



80
Bibliografie recomandat:
1. Viorica Blan, 2008. Genetica Plantelor, Editura ALPHA MDN, ISBN 978-973-139-
047-5
2. Etsuko Moritsuka, Yosuke Hisataka,Miho Tamura, Kentaro Uchiyama, Atsushi
Watanabe, Yoshihiko Tsumura, and Hidenori Tachida, 2011. Extended Linkage
Disequilibrium in Noncoding Regions in a Conifer, Cryptomeria japonica Genetics March
2012 190:1145-1148; doi:10.1534/genetics.111.136697 Genetics Society of America
Timpul alocat temei:2 ore

3.1 Noiuni introductive
Linkage genetic se petrece atunci cnd loci sau alele ale unor gene sunt motenite
mpreun, Locii genelor aceluiai cromozom sunt fizic legai i tind s segrege mpreun n
timpul meiozei, fiind astfel linkai.
Alelele genelor din cromozomi diferii nu sunt n mod obinuit linkate, ceea ce
determin independena cromozomilor n meioz.
Datorit faptului c atunci cnd segreg cromozomii perechi pot schimba ntre ei
segmente de ADN, n procesul numit crossing over, alele din acelai cromozom pot fi
separate i ajung n celule fiice diferite. Exist o mare probabilitate ca acest lucru s se
ntmple cnd alelele sunt separate la distan mic n cromozom.
Distana relativ ntre dou gene poate fi calculat utiliznd progenii, sau
descendenii unui organism, la care se evideniaz dou caracteristici linkate i n acelai
timp se gsete procentajul caracteristilor care nu se transmit linkate n descenden.
Procentul ridicat al descendenilor care nu au caracteristici linkate arat c locii sunt la
distane mai mari n cromozomii n care se afl genele responsabile pentru acele
caracteristici.
Se ntmpl ca fenotipurile studiate n diferite populaii sau specii, sau anumite
caracteristici s fie randomizate unele fa de altele n maniera cunoscut ca i
caracteristici independente.
Astzi este cunoscut c se pot transmite la descendeni aceste caracteristici
independente atunci cnd genele care afecteaz fenotipul se gsesc n cromozomi diferii
sau separate de o distan suficient de mare n acelai cromozom, ceea ce conduce la
recombinarea lor.
Excepii de la transmiterea independent fac genele care se afl aproape unele de
altele n acelai cromozom i sunt astfel motenite ca o singur unitate denumit "grup
81
linkage". Spre exemplu la Drosophylla genele care afecteaz culoarea ochilor i lungimea
aripii se motenesc mpreun, din cauz c genele responsabile de aceste caracteristici sunt
apropiate n acelai cromozom.
Dar n multe cazuri chiar dac genele sunt apropiate n acelai cromozom se pot
obine descendeni cu neateptate recombinri ale alelelor. Aceste rezultate se obin ca
urmare a procesului denumit crossing over. La nceputul meiozei normale, cte un
cromozom de la mam i unul de la tat, se mpletesc i i schimb ntre ei fragmente ale
cromozomilor, ceea ce duce la formarea unei perechi de cromozomi diferii fa de cei ai
prinilor. Dup ce acest proces are loc, se produc descendeni care au noi caracteristici
rezultate din combinarea celor ale mamei i ale tatlui, aceasta contribuind la intensificarea
supravieuirii.

3.2 Mecanismul linkage la plante

Mecanismul linkage genetic a fost
descoperit de genetitii englezi William
Bateson i Reginald Punnet cu puin timp
dup ce legile lui Mendel au fost
redescoperite.
William Bateson (1861-1926) i
Reginald Crundall Punnet (1875-1967),
au fost primii genetiti englezi, care au
artat contrar lui Gregor Mendel c unele caracteristici se pot moteni mpreun, datorit
unui fenomen care se va numi mai apoi linkage.
William Bateson are n acelai timp meritul de a fi adus legile lui Mendel n atenia
cercettorilor englezi i de a introduce termenul de genetic, iar Reginald Punnet pe acela
de a introduce statistica genetica Mendelian.
Ei au fost interesai de motenirea unor caracteristici la mazrea zaharat i au studiat
gena privind culoarea florilor, notnd cu P pentru culoarea rou-vineie i p pentru culoarea
roie i gena care controleaz forma grunciorului de polen, simboliznd cu L pentru forma
lung i l pentru forma sferic. Cei doi profesori i cercettori englezi au ncruciat liniile
pure PPLL i ppll i apoi au autofecundat descendenii PpLl. n concordan cu legile lui
Mendel fenotipurile ateptate ar fi trebuit s segrege n raportul 9:3:3:1 al genelor
PL:Pl:pL:pl. Spre surprinderea lor, au observat ns c a crescut frecvena fenotipurilor Pl
82
i pl i a sczut frecvena fenotipului pl, dup cum se poate vedea n schema de mai jos
(tabel 1).

Tabel 1. Frecvena fenotipurilor PL:Pl:pL:pl la mazrea zaharat (dup William
Bateson i Reginald Punnet)

Fenotipul i genotipul Observate Ateptate n raportul de
9:3:3:1
Vineiu ,lung P,L 284(+ 68) 216 (9)
Vineiu, sferic P,l 21(-51) 72 (3)
Rou, lung p,L 21(-51) 72 (3)
Rou, sferic p,l 58(+34) 24(1)

Experimentul celor doi, a scos n eviden fenomenul linkage sau cuplarea ntre
alelele P i L i ntre alelele p i l. Frecvena cuplrii alelei P cu alela L, precum i a alelei
p cu l este mai ridicat dect a recombinanilor Pl i pL. Frecvena recombinrilor nu a
putut fi calculat, dar intuitiv a fost mai mic de 50%.
Descendenii primesc n aceast situaie dou alele linkate n acelai cromozom, cu
referire la cuplare sau la aranjarea sau poziia cis. Cu toate acestea, dup crossover, unii
descendeni pot primi un cromozom parental cu o alel dominant pentru o caracteristic
(ex. vineiu), linkat cu o alel recesiv pentru o alt caracteristic (ex. sferic) sau alela
recesiv pentru caracteristica rou linkat cu alela dominant pentru caracteristica alungit.
Aceast situaie exprim fenomenul de repulsie sau aranjamentul, sau poziia trans.
Fenotipul poate fi floare roie i gruncior de polen alungit, ns test crossul acestuia
cu printele recesiv poate produce descendeni cu o proporie mai ridicat a crossoverelor
celor dou fenotipuri. Atunci cnd lucrurile nu se petrec aa ca n exemplul dat, nseamn
c exist un fenomen de repulsie, ca n situaiile cnd se fac ncruciri pentru rezistena la
boli.
Cnd genele sunt localizate n acelai cromozom, ansa de a se produce
recombinarea lor datorit crossing overelor este direct proporional cu distana dintre dou
gene. De aceea frecvena recombinrilor a fost folosit pentru construirea hrii linkage sau
a hrii genetice.


83
TEST DE EVALUARE

1. Ce a scos n eviden experimentul profesorilor William Bateson (1861-1926) i
Reginald Crundall Punnet (1875-1967)?
Rezolvare:




2. Cum se numete aranjarea sau poziia a dou alele linkate n acelai cromozom?
Rezolvare:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Cnd genele sunt localizate n acelai cromozom, ansa de a se produce recombinarea
lor datorit crossingoverelor:
a. este direct proporional cu distana dintre dou gene
b. este direct proporional cu frecvena recombinrilor
Rezolvare: a
De rezolvat:
2. Notrile fcute de William Bateson i Reginald Crundall Punnet la mazrea
zaharat au fost:
a. P pentru culoarea rou-vineie a florii
b. p pentru culoarea roie a florii
c. L pentru gena care controleaz forma alungit a polenului
d. l pentru gena care controleaz forma sferic a graunciorului de polen.

3.3 Linkage genetic i harta genetic
Prin renaterea geneticii n secolul XX, s-au intensificat experimentele care au
evideniat c aparent cea de-a doua lege a lui Mendel nu se aplic la muli dintre dihibrizii
obinui la alte specii de plante dect mazrea. n multe situaii dou alele motenite de la
prini, arat o puternic tendin de a sta mpreun, fenomenul fiind cunoscut dup cum se
tie sub denumirea de linkage sau gene linkate sau legate.

Experimentul celor doi, a scos n eviden fenomenul linkage sau cuplarea ntre alelele P i
L i ntre alelele p i l, la mazrea zaharat. Frecvena cuplrii alelei P cu alela L, precum i
a alelei p cu l este mai ridicat dect a recombinanilor Pl i pL.
84
Iat un exemplu clasic de linkage:
S-a pornit de la dou fenotipuri de porumb:
-un fenotip care este homozigot pentru dou caracteristici, acestea fiind:
a. bob galben (CC)
b. neted lucios (ShSh)(cu endospermul plin, care determin formarea bobului)
-al doilea fenotip, este homozigot pentru :
a. culoarea deschis a bobului (cc),
b. zbrcit (shsh) (cu endospermul zbrcit)
Cnd polenul primului fenotip fertilizeaz al doilea fenotip sau invers, boabele
produse n descendena F
1
sunt galbene i netede, asta nsemnnd c alelele pentru culoarea
galben (C) i neted (Sh) sunt dominante, pe cnd alelele pentru culoare deschis i
endosperm zbrcit sunt recesive.
S-a aplicat analiza testcross (care exprim genotipul tuturor gameilor fenotipurilor
analizate), obinndu-se un dihibrid homozigot dublu recesiv (ccshsh).
Toi gameii produi de homozigoii dublu recesivi vor fi csh.
Conform celei de-a doua legi a lui Mendel, genele care determin culoarea
endospermului pot fi motenite independent fa de genele care determin textura. n F
1
ar
trebui s se produc

ambele tipuri de gamei n numr aproximativ egal. CSh motenit de
la un printe, csh motenit de la cellalt printe, Csh un recombinant, cSh cel de-al doilea
recombinant.
Tabel 2. Analiza testcross (care exprim genotipul tuturor gameilor
fenotipurilor analizate la porumb c,c,sh,sh)
Genotipul testcross, al
tuturor gameilor
fenotipurilor parentale:
c,c,sh,sh
Genotipurile gameilor prinilor heterozigoi: C,c,Sh,sh
Genotipul descendenilor
testcross
Genotipul descendenilor heterozigoi
Csh C,c,Sh,sh c,c,sh,sh C,c,sh,sh c,c,Sh,sh
Fenotipuri aprute Colorat,
neted
Slab colorat
zbrcit
Colorat
zbrcit
Slab colorat
neted
Procentul ateptat 25% 25% 25% 25%
Procentul rezultat 48,6
%
48,6% 1.4% 1,4%
85

Din tabel se observ c rezultatele sunt contrar ateptrilor, existnd o puternic
tendin a celor dou alele de a sta mpreun, ntruct locii sunt apropiai n acelai
cromozom. Doar 2,8 % din genotipuri sunt recombinani i nu 25%, cum s-ar fi ateptat
conform testului testcross.
n timpul profazei I a meiozei, perechile de cromozomi homologi se unesc n sinaps
i apoi cromatidele nesurori schimb segmente n procesul de crossingover, avnd ca
rezultat formarea recombinanilor gametici. n aceast situaie crossoverul se petrece ntre
locusul culorii bobului de porumb i textura lui original, combinaia alelelor CSh i csh
este rupt i va rezulta combinaia Csh i cSh (fig.1).














Figura 1. Formarea recombinanilor genetici Csh i cSh la porumb

3.4 Harta cromozomal la fenotipurile de porumb analizate
Procentul de recombinani formai n F
1
poate varia ntre 1% i 50%. Procentul de
recombinani pentru o pereche de caracteristici este arbitrar, fiind determinat de distana n
centimorgan ntre doi loci, denumit asfel de Thomas Hunt Morgan.
n exemplul dat, locii c i sh au 2,8 cM. Procedeul poate continua i cu ali loci, n
acelai cromozom ca n exemplul de mai jos.
Testcrossul dihibrizilor de porumb pentru alelele C,c i pentru alelele care determin
culoarea bronz (Bz,bz), a produs 4,6% recombinani.
86
Asta nseamn c cei doi loci au 4,6 cM. Dar se pune ntrebarea: Este locusul bz n
aceiai poziie cu c, la fel ca i sh, sau ntr-o alt poziie?. Rspunsul poate fi gsit prin
aplicarea testcrossului la dihibridul Shsh, Bzbz. Dac procentul de recombinani este mai
mic dect 4,6%, atunci locusul bz poate avea aceiai poziie cu c ca i locusul sh. i,
desigur dac procentul este mai mare dect 4,6%, atunci locusul bz este ntr-o alt poziie
fa de c.
De fapt frecvena recombinrilor este mai mic dect 1,8%, ceea ce ne spune c
ordinea locilor este c sh bz (fig. 2)



Figura 2. Ordinea locilor c sh bz la porumb

Efectuarea hrii linkage este cu att mai facil cu ct locii sunt mai apropiai, avnd
puini centimorgani ntre ei. Altfel, dac distana dintre doi loci crete, probabilitatea ca un
al doilea crossover s aib loc este mai mare.
Numai c cel de al doilea crossover va desface efectul primului i va restaura
combinaiile de alele parentale, aceasta artndu-ne nonrecombinanii. Dac distana
dintre loci crete, procentul de recombinani care se formeaz ne permite s cunoatem
actuala distan n centimorgani care i separ.
Este ceea ce ce ntmpl n urmtorul exemplu:
Folosind trei puncte cross, iese n eviden existena unui numr mic de dublu
recombinani, artndu-ne distana actual:
C- sh= 3 cM
sh-bz= 2 cM
c-bz= 5 cM
Rezultatele celor trei puncte cross, nu numai c au acuratee dar vorbesc despre
ordinea genelor n aceste trei puncte cross.
Alte probleme de care trebuie s inem cont atunci cnd se efectueaz harta
cromozomial, le prezentm n cele ce urmeaz:
Probabilitatea crossoverelor nu este uniform, de-a lungul cromozomului
Crossing overul este inhibat n anumite regiuni, cum este spre exemplu centromerul
Unele regiuni sunt puncte fierbini, pentru recombinri
87
La oameni, aproximativ 80% dintre recombinanii genetici sunt definii de un sfert
din genom.
n genomul uman frecvena locilor recombinai, n muli cromozomi este mai mare
la femei dect la brbai, aa c harta cromozomilor femeli este mai lung dect a celor
masculi.
Harta cromozomal efectuat pe baza calculrii fenotipurilor, are denumirea de hart
genetic. Se cunosc astfel de hri la multe dintre eucariote, din care amintim: Drosophilla,
oarece, porumb, tomate.
Mai sus este prezentat harta genetic a cromozomului 9, la porumb (Zea Mays) cel
care are locii C,Sh, i bz.
Dup cum se poate vedea din imagine, numrul centimorganilor n cromozomul 9,
depete 100, acest rezultat fiind posibil i n alte situaii. Cu toate c se depesc 100 de
centimorgani, frecvena maxim a recombinanilor care se formeaz nu vor depi 50%. i
aceasta este de asemenea frecvena recombinanilor pe care i vedem la genele asortate
independent n cromozomi diferii. Aa c, nu putem pune pe seama numrrii
recombinanilor dac o pereche de loci este localizat departe n acelai cromozom sau n
cromozomi diferii.
Dup cum s-a vzut mai sus, unele caracteristici independente sunt controlate de gene
localizate n acelai cromozom, dar la o distan mare, ceea ce determin ca acestea s fie
motenite ca i cum ar fi n cromozomi diferii.
Genele care sunt prezente n acelai cromozom se numesc sintetice.

TEST DE EVALUARE

1. n experimentul prin care s-a pus n eviden mecanismul linkage la porumb,
pentru care caracteristici au fost homozigote fenotipurile experimentate?
Rspuns

2. Ci centimorgani au locii c i sh n experimentul pentru punerea n eviden a
mecanismului linkage la porumb?.
Un fenotip homozigot dominant pentru bob galben (CC) i endosperm neted lucios
(ShSh). Al doilea fenotip homozigot recesiv pentru culoarea deschis a bobului (cc) i
pentru endospermul zbrcit (shsh).
88
Rspuns:
Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Deoarece frecvena recombinrilor la locii studiai este mai mic dect 1,8%,
putem spune c ordinea locilor este:
a. c-sh-bz
b. c-bz-sh
Rezolvare: a
De rezolvat:
2. Numrul centimorganilor n cromozomul 9 la porumb, este:
a. mai mare dect 100
b. mai mic dect 100
Rezolvare:

3.5 Harta genetic i harta fizic a genelor
3.5.1 Harta genetic
Observaiile fcute de Thomas Hunt Morgan cu privire la crossoverele ntre gene
linkate au condus la ideea c frecvena crossoverelor poate indica distana dintre genele
separate n acelai cromozom. Studentul lui Morgan, Alfred Sturtevant, a alctuit prima
hart a genelor linkate.
Sturtevant a propus ca distana dintre genele linkate s constituie ansa de a
reprezenta crossoverele cromatidelor nesurori n acele zone ale genelor.
Lucrndu-se cu un numr mare de recombinani este posibil s se obin msura
distanelor ntre gene. Aceast distan se numete unitate a hrii genetice (m.u), sau
centimorgan-cM i se definete ca distana dintre genele fiecrui produs al meiozei din 100
de recombinri. Frecvena recombinrilor (FR) de 1% este echivalent cu 1m.u. Harta
pentru linkage genetic este creat pentru a gsi harta distanelor dintre caracteristicile
pozitive i negative care sunt prezente n acelai cromozom i de a se evita transmiterea lor
nlnuit ceea ce creaz posibilitatea recombinrilor multiple.
Harta Linkage genetic este de importan critic pentru identificarea localizrii
genelor care cauzeaz bolile genetice. ntre caracteristicile i markerii genetici ideali ai
unei populaii se vor produce toate posibilele combinri cu o frecven determinat de
frecvena fiecrei gene individuale.
89
Spre exemplu, dac alelele A i a se ntlnesc cu frecvena de 90% i 10% i alele B
i b cu frecvena de 70% i 30%, frecvena descendenilor cu combinaiile AB vor fi de
63%, ca rezultat al frecvenei individuale A i B, artnd ct de apropiate sunt aceste dou
gene.
Dac mutaii ale genei B care cauzeaz anumite boli se petrec recent n anumite
subpopulaii, acest lucru se poate aproape ntotdeauna ntmpla i cu alele particulare ale
genei A, dac indivizii mutani au variante ale genei A i nu au suficiente generaii pentru
ca recombinrile s se petreac ntre cele dou gene, ateptndu-ne la linkage foarte strns
n harta genetic. n acest caz denumit Linkage dezechilibrat, este posibil s se caute
poteniali markeri n subpopulaii i s se identifice care dintre markerii mutaiei sunt de
asemenea apropiai, determinnd astfel localizarea mutaiilor n hart i identificndu-se
genele a cror mutaii s-au petrecut.
Odat ce aceste gene au fost identificate, elul nostru este s se gseasc cile pentru
reducerea bolii.
Harta Linkage este harta cromozomilor unei specii sau a unei populaii
experimentale care arat poziia genelor cunoscute sau/i a markerilor n relaie cu
frecvena recombinrii lor, pe baza distanei fizice de-a lungul fiecrui cromozom.
Harta genetic este acea hart bazat pe frecvena recombinrilor ntre markeri n
timpul crossoverelor cromozomilor omologi. O frecven mare a recombinrilor sau
segregrilor ntre doi markeri genetici este de ateptat s se ntmple.
Istoric, markerii originali folosii au fost fenotipic detectabili (producerea de enzime,
culoarea ochilor sau a florilor), derivai din secvene codificate de ADN, eventual secvene
necodificate de ADN, confirmate, cum sunt microsateliii, sau cei care genereaz
polimorfismul lungimii fragmentelor restrictive RFLPs.
Harta genetic ajut pe cercettori s localizeze ali markeri sau alte gene pe baza
testelor linkage ale markerilor deja cunoscui.
Trebuie precizat c harta genetic nu este unul i acelai lucru cu harta genelor.
Pentru estimarea frecvenei recombinrilor se folosete calculul logaritmic n baz
10, al diferenelor, care este un calcul statistic folosit pentru analize linkage n populaii de
oameni, de animale sau de plante.
Testul a fost dezvoltat de Newton E. Morton, n cartea Computer applications in
genetics(Aplicaii computerizate n genetic), publicat mpreun cu Laurence H.
Snyder, n 1969, Editura Honolulu, Univ. of Hawaii Press.
90
Newton E. Morton, este profesor la University of Hawaii (Honolulu), iar Laurence
H. Snyder, cerceteaz la National Institute of General Medical Sciences (U.S.), National
Institutes of Health (U.S.), Division of Research Grants, Genetics Study Section.
Analiza logaritmic computerizat este o cale simpl de a analiza pedigree-ul
complex al unor familii n scopul determinrii nlnuirii dintre caracteristici mendeliene,
sau dintre markeri. n metoda folosit, NR semnific numrul descendenilor
nerecombinani i R, semnific numrul descendenilor recombinani.
Raiunea folosirii numitorului 0.5 este pentru acele alele care sunt complet nelinkate,
respectiv alele din cromozomi diferii, care au ansa de recombinare de 50%, datorit
sortimentului de gene independente. n practic rezultatele pot fi gsite n tabele
logaritmice pentru diferite pedigree standard i diferite valori ale frecvenelor
recombinrilor.
Convenional, valoarea mai mare de 3.0 este considerat convenional pentru situaia
de linkage, la pedigree-ul dat, dac doi loci care nu sunt linkai reprezint 1 din 1000.
De asemenea, dac se obine valoarea de 3.0 dar pentru un singur pedigree, nu este
concludent matematic s ne exprimm asupra caracteristicilor linkate.
Frecvena recombinrilor () se ntmpl atunci cnd crossing overul se petrece ntre
doi loci sau gene n timpul meiozei. Frecvena recombinrilor este msura linkage-ului
genetic i este folosit pentru crearea hrii linkage-ului genetic. Centimorganul (cM), este
unitatea de msur care descrie frecvena de 1% a recombinrilor.
n timpul meiozei cromozomii se aeaz randomizat n gamei astfel c segregarea
alelelor unei gene este independent de alelele altei gene. Aceasta este stabilit n cea de-a
doua lege a lui Mendel cunoscut ca legea transmiterii independente a caracterelor.
Aceast lege este valabil atunci cnd genele sunt localizate n cromozomi diferii dar nu i
atunci cnd genele sunt localizate n acelai cromozom.
Un exemplu al caracteristicilor independente, este considerat ncruciarea ntre
forme parentale, pure, homozigote, unul dintre prini avnd genotipul AABB iar cellalt
genotipul aabb, iar Aa i Bb, sunt alele ale genelor Ai B. Descendena F
1
rezultat din
ncruciare va avea genotipul AaBb, iar gameii produi vor fi AB, Ab, Ab i ab, cu o
frecven de 25%, datorit nivelului mai sczut al independenei unor caracteristici. De
notat c 2 din 4 gamei (50%) Ab i ab nu au fost prezeni n garnitura parental. Acetia
reprezint gamei recombinai. Frecvena recombinrii va fi de 50% cnd dou gene sunt
localizate n cromozomi diferii sau cnd ele sunt la distan mare n acelai cromozom.
Cnd sunt apropiate n acelai cromozom vor fi transmise linkat.
91
Despre harta genetic la oameni.
Evident, nu putem controla mperecherea genelor n cromozomii umani. Totui este
posibil s estimm poziia alelelor examinnd linkage-ul cteva generaii ale rudelor.
Spre exemplu, au fost prelevate i stocate probe de snge ale tuturor membrilor unor
familii de Mormoni din Utah, cu referire la ultimele trei generaii. Probele respective au
fost folosite pentru stabilirea linkage-ului genetic. Aceste probe vor fi folosite n anii
urmtori pentru studierea altor gene umane care vor fi identificate, utiliznd fragmente
polimorfice (RFLP), mai ales pentru localizarea bolilor cauzate genetic.
3.5.2 Harta fizic a genelor
Toate genele din cromozom sunt ncorporate ntr-o singur molecul de ADN.
Genele sunt simple poriuni ale moleculei, a cror structur poate fi citit (open reading
frames sau ORF
S
), decodificnd produii genetici care determin caracteristicile fenotipice.
Progresul rapid al secvenierii ADN, a condus la decodificarea complet a genomului
uman i a altor eucariote, precum i a genomului a sute de microbi. Avnd secvenierea
complet este posibil s determinm direct ordinea sau spaierea genelor. Harta realizat n
acest mod se numete harta fizic a cromozomilor. Care este relaia ntre harta genetic i
harta fizic a cromozomilor?
n harta genetic poziia genelor este determinat pe baza unitii de msur 1cM,
care reprezint 1 megabaz (1Mb= 10
6
bp) a ADN, aceasta conducnd la stabilirea unor
relaii aproximative ntre gene. Cu toate c harta genetic a organismului uman feminin
este n medie 90% mai lung dect harta genetic a organismului mascul, cromozomii lor
conin acelai numr de perechi de baze, astfel c harta fizic este identic.
3.5.3 Asocierea genetic
Studiile privind Asocierea genetic se bazeaz pe principiul c genotipurile pot fi
comparate direct cu secvene ale actualului genom.
Aceste studii pot fi realizate pentru a determina dac variana genetic este asociat
cu o boal sau cu o alt caracteristic. Aceste asocieri pot fi ntre fenotip i caracteristica
vizibil, cum ar fi culoarea florii, sau nlimea, ntre fenotip i polimorfismul genetic, cum
ar fi un nucleotid polimorfic, sau ntre dou nucleotide polimorfice.
Asocierea ntre dou caracteristici genetice polimorfice, se petrece atunci cnd
alelele, sunt nonrandomizate, ca rezultat al apropierii n acelai cromozom i este
cunoscut sub denumirea de linkage genetic.


92
Linkage dezechilibrat
n populaiile genetice, linkage-ul dezechilibrat este o asociere nerandomizat de
alele la doi sau mai muli loci, situai nu neaprat n acelai cromozom. Nu este desigur
acelai lucru cu linkage-ul, care presupune asocierea a doi sau mai muli loci situai n
acelai cromozom, la limite care s permit recombinarea lor.
Asocierea nerandomizat ntre diferii loci polimorfici se msoar n grade ale
linkage-ului dezechilibrat (LD).
Linkage dezechilibrat este n general cauzat de linkage-ul genetic i de rata
recombinrilor, rata mutaiilor, driftul (mprtierea) sau non randomizarea perechilor,
structura populaiilor. Spre exemplu, unele organisme, cum sunt bacteriile, pot avea
linkage dezechilibrat, din cauza reproducerii asexuate i nu exist recombinri care s
sparg dezechilibrul linkage-ului.
Prin urmare dac definim perechea vizat LD cu parametrul (delta), considerm
indicator variabil alela a doi loci pe care i numim I
1
, I
2.
Aici, p
1
, p
2
reprezint frecvena
alelelor marginale, a doi loci i h
12
, reprezint frecvena haplotipului, n poligonul de
distribuie a ambelor alele. Pot s apar derivai ai acestor parametri. n literatura de
specialitate, se spune c doi loci sunt n LD cnd din contr se implic linkage n echilibru,
ceea ce denot cazul = 0.

TEST RECAPITULATIV PENTRU TEMA 3 (Capitol 2)

1. Frecvena crossoverelor poate indica:
a. distana dintre genele separate n acelai cromozom
b. distana dintre genele perechilor de cromozomi
2. Trebuie precizat c harta genetic:
a. nu este unul i acelai lucru cu harta genelor
b. este unul i acelai lucru cu harta genelor
3. Avnd secvenierea complet a ADN:
a. este posibil s determinm direct ordinea sau spaierea genelor
b. este posibil s realizm harta fizic a cromozomilor
4. Frecvena recombinrilor este msura:
a. linkage-ului genetic
b. hrii linkage-ului genetic.
5. Centimorganul (cM) este unitatea de msur:
93
a. care descrie frecvena de 1% a recombinrilor
b. care descrie frecvena a 100 de recombinri.
6. Studiile privind Asocierea genetic se bazeaz pe principiul c:
a. genotipurile pot fi comparate direct cu secvene ale actualului genom
b. variana genetic este asociat cu o boal
7. Asocierile genetice pot fi ntre:
a. fenotip i polimorfismul genetic
b. fenotip i nucleotidul polimorfic
c. ntre dou nucleotide polimorfice
8. Linkage genetic este un mecanism care se petrece atunci cnd:
a. loci ale unor gene se motenesc n comun
b. alele ale unor gene se motenesc n comun
9. n populaiile genetice, linkage-ul dezechilibrat este:
a. o asociere nerandomizat de alele la doi sau mai muli loci, situai nu neaprat n acelai
cromozom
b. o asociere randomizat de alele la doi sau mai muli loci situai n acelai cromozom.

REZUMATUL TEMEI NR. 3 (Capitol 2)

Linkage genetic este un mecanism ce se petrece atunci cnd loci sau alele ale unor
gene se motenesc n comun. Locii genelor aceluiai cromozom sunt fizic legai i tind s
segrege mpreun n timpul meiozei, fiind astfel linkai.
Alelele genelor din cromozomi diferii nu sunt n mod obinuit linkate, ceea ce
determin independena cromozomilor n meioz.
Lucrndu-se cu un numr mare de recombinani este posibil s se obin msura
distanelor ntre gene. Aceast distan se numete unitate a hrii genetice (m.u), sau
centimorgan (cM) i se definete ca distana dintre genele fiecrui produs al meiozei din
100 de recombinri. Frecvena recombinrilor (FR) de 1% este echivalent cu 1.m.u. Harta
pentru Linkage genetic este creat pentru a gsi harta distanelor dintre caracteristicile
pozitive i negative care sunt prezente n acelai cromozom i de a se evita transmiterea lor
nlnuit ceea ce creaz posibilitatea recombinrilor multiple.
Un exemplu clasic de linkage este considerat experimentul lui William Bateson i
Reginald Punnet.
94
Dou alele linkate n acelai cromozom, cu referire la cuplare, se spune c au
aranjarea sau poziia cis. Dac dup crossover, unii descendeni pot primi un cromozom
parental cu o alel dominant pentru o caracteristic, ex.vineiu, linkat cu o alel
recesiv pentru o alt caracteristic, ex.sferic sau alela dominant pentru o caracteristic
ex. rou linkat cu alela recesiv pentru o caracteristic ex.alungit, spunem c aceast
situaie exprim fenomenul de repulsie sau aranjamentul, sau poziia trans.
n populaiile genetice, asocierea nerandomizat de alele la doi sau mai muli loci,
situai nu neaprat n acelai cromozom conduce la linkage dezechilibrat. Acesta nu este
desigur acelai lucru cu linkage-ul, care presupune asocierea a doi sau mai muli loci situai
n acelai cromozom, la limite care s permit recombinarea lor.
Asocierea nerandomizat ntre diferii loci polimorfici se msoar n grade ale
linkage-ului dezechilibrat (LD).

Bibliografie selectiv
1. Griffiths, Anthony J. F.; Miller, Jeffrey H.; Suzuki, David T; Lewontin, Richard C.;
Gelbart, William M. (Eds.). 1993. An Introduction to Genetic Analysis (5th ed.) Chap 5
New York: W.H. Freeman and Company ISBN -0-7167-2285-2
2. Poehlman, John M., Sleper, David A.1995. Breeding Field Crops (4th ed.) Chap. 3
Iowa: Iowa State Press. ISBN 0-8138-2427-3
3. Robbins, R.B. 1918. Some applications of mathematics to breeding problems III.
Genetics 3: 375-389.
4. R.C. Lewontin and K. Kojima. 1960. The evolutionary dynamics of complex
polymorphisms. Evolution 14: 458-472.
5. P.W. Hedrick and S. Kumar. 2001. Mutation and linkage disequilibrium in human
mtADN. Eur. J. Hum. Genet. 9: 969-972.
6. Devlin B., Risch N. 1995. A Comparison of Linkage Disequilibrium Measures for Fine-
Scale Mapping. Genomics 29: 311-322.
7. Hao K., Di X., Cawley S. 2007. LdCompare: rapid computation of single- and multiple-
marker r2 and genetic coverage. Bioinformatics 23: 252-254.





95


TEMA NR. 4 (Capitol 2)

CROSSING OVER CROMOZOMAL LA PLANTE

Uniti de nvare:
Cuplarea cromozomilor omologi n zigoten
Condensarea i spiralizarea cromozomilor n pachiten n procesul sinapsei
Clivajul cromozomilor n diploten
Mecanismul crossingover meiotic la plante
Recombinarea genetic prin conversia genelor i crossingover meiotic
Recombinarea genetic nebalansat
Crossingover meiotic la cais
Crossingover mitotic
Timpul alocat temei: 2 ore

Bibliografie recomandat:
1. Viorica Blan , 2008 . Genetica Plantelor , Editura ALPHA MDN, ISBN 978-973-139-
047-52. L.K.Anderson.sm Stock, 2002. Meiotic Recombination in plants issn13892029 in
Curent genomics
2. www.pearson.com4. www.ehow.com/about_ 6628252_crossingovergenetics-html

Obiective
1. Cunoaterea mecanismului crossing overului meiotic i mitotic i a consecinelor
acestora asupra evoluiei organismelor eucariote.
2. Aplicaii ale analizei genetice a unor caracteristci ale plantelor datorate recombinrilor
genetice.

4.1. Crossingover cromozomal, meiotic
Crossingover cromozomal (sau cross over) este procesul prin care dou perechi de
cromozomi se apropie i i schimb seciuni de ADN (fig.1).


96





Figura 1. Ilustrarea crossingover dup Thomas Hunt Morgan (1916)
Aceasta se ntmpl adesea n timpul profazei meiozei n procesul denumit sinaps.
Sinapsa ncepe nainte de dezvoltarea complexului sinaptenomal i nu este complet pn
aproape de sfritul profazei. Crossoverul se petrece uzual cnd regiunile perechi ale
cromozomilor perechi, se rup i se reconecteaz ntr-un alt cromozom. Rezultatul acestui
proces al schimbului de gene, se numete recombinare genetic. Recombinarea implic
rupturi i replicri ale perechilor de cromozomi parentali. Teoria crossing overului a fost
descris pentru prima oar de Thomas Hunt Morgan n 1916. Bazele fizice ale
crossingoverului au fost demonstrate pentru prima dat de Harriet Creighton i Barbara
McClintock n 1931. Crossoverul cromozomal se petrece de asemenea n organismele
asexuate i n celule somatice, avnd un rol important n formele de reparare a ADN.
4.1.1. Cuplarea cromozomilor omologi n zigoten
n zigoten (din gr. zigon=cuplu, se ating unul pe altul) are loc mperecherea
cromozomilor omologi (unul matern i unul patern) pe axul longitudinal n procesul
sinapsei (fig.2 i fig.3). Perechile de cromozomi omologi formeaz bivalenii descoperii
de T. H. Montgomery (1901) i W.S. Sutton (1902). Cromozomii sunt inui mpreun de
ctre proteine n procesul sinaptonemal. Se poate petrece un crossingover ntre moleculele
de ADN dublu helicoidal al cromozomilor omologi. Poate fi identificat fiecare din cele 6
perechi de cromozomi.

Figura 2. Cuplarea cromozomilor n zigoten
97







Figura 3. Zigoten - imagine la microscopul electronic n celula de secara

Sinapsa nceput n zigoten degradeaz n diploten. Complexul sinaptonemal
(sinaptonul) este o structur axial tripartit: a) un element central (10-40 nm) situat de-a
lungul celor doi cromozomi omologi conjugai; b) dou elemente laterale (30-40 nm), cte
unul pentru fiecare cromozom omolog; c) zona central (de 60-120 nm) (fig.4).

Figura 4. Sinapsa format n zigoten (www.pearson.school.com, Peerson
education.inc)

Sinaptonul are o mrime de 120-240 nm, iar la suprafa este nconjurat de fibre
radiare care contacteaz cu membrana nuclear.
4.1.2. Condensarea i spiralizarea cromozomilor n pachiten n procesul sinapsei
n pachiten (din gr. pachys = gros) are loc condensarea i spiralizarea
cromozomilor n procesul sinapsei care a fost nceput n zigoten. Cei doi cromozomi
omologi formeaz o figur tetracromatidic (fig.5). ntre cromatidele omoloage nesurori se
evideniaz punctele de contact (chiasmele), considerate drept expresie citologic a
crossing over-ului. Crossing over-ul reprezint prin urmare schimbul de segmente dintre
cromatidele nefiice ale cromozomilor omologi.
98

Figura 5. Figura tetracromatidic format de cromozomi n pachiten

4.1. 3 Clivajul cromozomilor n diploten
n diploten (din gr. diploos=dublu) are loc clivajul cromozomilor pe toat lungimea
lor i respingerea cromatidelor cromozomilor omologi. Acest proces ncepe n regiunea
centromerului (fig. 6). Cromozomii omologi (formai din 4 cromatide 4 c) mai sunt unii
prin chiasme. Prezena chiasmelor este dovada crossing over-ului. Spre sfritul
diplotenului, sinaptonul se descompune, iar nucleolii se reduc n dimensiuni.

Figura 6. Clivajul cromozomilor n diploten

4.1.4 Mecanismul crossing over-ului meiotic
Dup cum reiese din fig. 7, mecanismul crossing over, este parcurs n 5 faze i
anume:
1. Dubla ruptur a lanului de nucleaze la captul 5
2. Invazia prin lanul rupt catalizat de RecA sau Rad S1
3. Repararea ADN
4. Formarea jonciunii Holliday
5. Migrarea bratelor
99


Figura 7. Mecanismul crossing over-ului meiotic la plante

TEST DE EVALUARE

1. De cine sunt inui cromozomii mpreun n zigoten i ce se poate petrece ntre
moleculele de ADN dublu helicoidal?
Rspuns:



2. Cnd are loc clivajul cromozomilor pe toat lungimea lor i respingerea
cromatidelor cromozomilor omologi ?
Rspuns:


Cromozomii sunt inui mpreun de ctre proteine n procesul sinaptonemal. Se poate
petrece un crossing over ntre moleculele de ADN dublu helicoidal al cromozomilor
omologi.
100
Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Mecanismul crossing over este parcurs n urmtoarele faze:
a. Dubla ruptur a lanului de nucleaze la captul 5
b. Invazia prin lanul rupt catalizat de RecA sau Rad S1
c. Repararea DNA
d. Formarea jonciunii Holliday
e. Migrarea braelor
Rezolvare: a, b, c, d, e.
De rezolvat:
2. Recombinarea genetic este iniiat cu o plaj dubl de rupturi care a fost
introdus n ADN de:
a. proteina Spo 11
b. recombinaza RadS1
Rezolvare:

Recombinarea meiotic este iniiat cu o plaj dubl de rupturi care a fost introdus
n ADN de proteina Spo 11. Una sau mai multe exonucleaze, dup ce diger captul 5
generat de dubla plaj de ruptur, produc singura plaj a terminaiei 3. Recombinaza
Dmc1, specific meiozei i general recombinaza RadS1, mbrac singura plaj ADN i
formeaz filamente de nucleoproteine. Recombinazele catalizeaz invazia cromatidei
opuse de ctre singura plaj ADN dup sfritul rupturii. Apoi, captul 3 la sfritul
invaziei ADN, ncepe sinteza ADN, cauznd deplasarea plajei complementare, care
ulterior se anexeaz la singura plaj ADN, generat de alt sfarit al iniierii rupturii dublei
plaje. Structura care rezult este datorat schimbului de plaje cunoscut ca Holliday
junction (Jonciunea Holliday) (fig.8).






Figura 8. Structura molecular a jonciunii Holliday

101
Jonciunea Holliday este o structur tetraedric (fig.9) care poate fi 'tras' de o alt
recombinare, mutnd-o de-a lungul a patru structuri de plaje ADN.
Consecine. La cele mai multe eucariote, n celule sunt dou copii pentru fiecare
gen, aceasta referindu-se la alele. Fiecare printe transmite cte o alel la fiecare
descendent. Un gamet individual motenete garnitura complementar haploid a alelelor
care sunt independent selectate din fiecare pereche de cromatide a cromozomilor, n placa
metafazic.









Figura 9. Structura tetraedric a Jonciunii Holliday

Fr recombinare, toate alelele pentru acele gene linkate n acelai cromozom vor fi
motenite mpreun. Recombinarea meiotic a dou alele care ocup poziiile unei singure
gene, amestec coninutul alelelor ntre cromatidele surori. Recombinarea nu are nici o
influen, arat probabilitatea statistic, dac un alt descendent are aceiai combinaie.
Aceast teorie a asortrii independente a alelelor este fundamental pentru motenirea
genetic.

4.1.5 Recombinarea genetic prin conversia genelor
Conversia genelor este un transfer nereciproc de informaii.
Explicarea figurii 10
1.- clivarea ADN
S
din cele dou cromatide, cu aceiai enzim de restricie. 2-
amestecarea fragmentelor de ADN, ceea ce permite asocierea perechilor de baze. 3.-
incubarea cu ADN ligaza pentru a lega covalent fragmentele ADN care au fost clivate. 4 -
se formeaz molecula de ADN recombinant, n care s-a fcut schimbul reciproc de
fragmente ADN i
s-au refcut perechile de baze GAATTC i CTTAAG.
102


Figura 10. Conversia genelor


Figura 11. Situaii n care conversia genelor este corectat

a) Heteroduplex format de rezoluia structurii Holliday, sau prin alte mecanisme. b)
ADN folosete segmentul invadat (e'), ca ablon pentru a corecta nepotrivirea genelor
rezultate prin conversie. c) ambele molecule ADN, folosesc secvena ablon pentru a
corecta nepotrivirea genelor, situaie n care conversia genelor nu are loc.

103
4.1.6 Recombinarea genetic nebalansat
Dac crossing over-ul tipic se petrece ntre regiuni homoloage ale cromozomilor
apropiai, uneori se pot petrece similariti ale acestuia la secvene aliniate neapropiat.
Acest proces se numete recombinare nebalansat. Recombinarea nebalansat este foarte
rar comparat cu recombinarea normal, dar probleme severe se ivesc dac gametul
conine recombinri nebalansate care provin de la zigot.
Rezultatul poate fi o duplicare local a genelor unui cromozom i deleia altora,
translocarea unei pri a cromozomului ntr-un altul, sau inversarea genelor.
4.2 Crossingover-ul meiotic la cais
Prin hibridarea dialel ntre fenotipuri cu coroan oval (Os,Oa) i aplatizat (as), au
rezultat descendeni cu trei forme de coroan: oval (Os,Oa), aplatizat (as) i sferic (ss).
Analiznd frecvenele formelor de coroan ale descendenilor hibrizi F1, s-a reliefat c nu
se poate stabili un raport de segregare a acestei caracteristici i prin urmare forma
neparental aprut (sferic), nu se datoreaz unor noi combinaii de gene, ci
recombinanilor genetici (Viorica Blan,1991). n aceast raiune, au fost determinate
probabilitatea de recombinare (p), probabilitatea gameilor (Os,as,Oa,ss), frecvena
fenotipurilor i n final totalul crossingoverelor i al noncrossingoverelor, pentru
descendenii din familiile hibride: Excelsior(oval) x Goldrich(aplatizat),
Excelsior(oval) x Comandor(aplatizat), Comandor(aplatizat) x Excelsior(oval),
Comandor(aplatizat) x Dacia(oval), Comandor(aplatizat) x 77.3.52 BV(oval).
4.2.1 Etape ale determinrii cross overului meiotic la cais
probabilitatea de recombinare (p),
probabilitatea gameilor(Os,as,Oa,ss),
frecvena fenotipurilor
n final totalul crossingoverelor i al noncrossingoverelor, pentru descendenii din
familiile hibride:
Excelsior(oval) x Goldrich(aplatizat), Excelsior(oval) x Comandor(aplatizat),
Comandor(aplatizat) x Excelsior(oval), Comandor(aplatizat) x Dacia(oval),
Comandor(aplatizat) x 77.3.52 BV(oval).





104

1. FAMILIA EXCELSOR X GOLDRICH
(oval x aplatizat)
Gamei Os 0,48 Oa 0,02 as 0,48 Ss 0,02
Os 0,48

Oa 0,02

As 0,48

Ss 0,02


1. Frecvena fiecrui fenotip segregant (%)

2. Probabilitatea de recombinare:
p = 2/47 =0,04
3. Probabilitile gameilor:
Os = 0,48; as = 0,48; Oa = 0,02; ss = 0,02.
4. Frecvenele fenotipurilor:
Os = 0,73 =73%
Oa = 0,02 = 2%
as = 0,24 = 24%
ss = 0,01 = 1%
5. Total crossover:
0,02 + 0,01 = 0,03 = 3%
Total noncrossovere
0,73 + 0,24 = 0,97 = 97%





105

2. FAMILIA EXCELSOR X COMANDOR
(oval x aplatizat)
Gamei Os 0,42 Oa 0,08 as 0,42 Ss 0,08
Os 0,42

Oa 0,08

As 0,42

Ss 0,08


1. Frecvena fiecrui fenotip segregant (%)

2. Probabilitatea de recombinare:
p = 3/18 = 0,16
3. Probabilitile gameilor:
Os = 0,42; as = 0,42; Oa = 0,08; ss = 0,08
4. Frecvenele fenotipurilor:
Os = 0,66 = 66%
Oa = 0,086 = 8,6%
as = 0,21 = 21%
ss = 0,04 = 4%
5. Total crossover:
0,086 + 0,04 = 0,126 = 12,6%
Total noncrossovere
0,66 + 0,21 = 0,87 = 87%





106

3. FAMILIA EXCELSOR X COMANDOR
(aplatizat x oval)
Gamei Os 0,45 Oa 0,05 as 0,45 Ss 0,05
Os 0,45

Oa 0,05

As 0,45

Ss 0,05


1. Frecvena fiecrui fenotip segregant (%)

2. Probabilitatea de recombinare:
p = 1/10= 0,1
3. Probabilitile gameilor:
Os = 0,45; as = 0,45; Oa = 0,05; ss = 0,05
4. Frecvenele fenotipurilor:
Os = 0,69= 69%
Oa = 0,05 = 5%
as = 0,22 = 22%
ss = 0,04 = 4%
5. Total crossover:
0,05 + 0,04 = 0,09 = 9%
Total noncrossovere
0,69 + 0,22 = 0,91 = 91%





107

4. FAMILIA COMANDOR x DACIA
(aplatizat x oval)

Gamei Os 0,48 Oa 0,02 as 0,48 Ss 0,02
Os 0,48

Oa 0,02

As 0,48

Ss 0,02


1. Frecvena fiecrui fenotip segregant (%)

2. Probabilitatea de recombinare:
p = 1/22= 0,04
3. Probabilitile gameilor:
Os = 0,48; as = 0,48; Oa = 0,02; ss = 0,02
4. Frecvenele fenotipurilor:
Os = 0,73= 73%
Oa = 0,02 = 2%
as = 0,24 = 24%
ss = 0,01 = 1%
5. Total crossover:
0,02 + 0,02 = 0,03 = 3%
Total noncrossovere
0,73 + 0,24 = 0,97 = 97%




108

5. FAMILIA COMANDOR x 77.3.52 BV
(aplatizat x oval)
Gamei Os 0,43 Oa 0,07 as 0,43 Ss 0,07
Os 0,43

Oa 0,07

As 0,43

Ss 0,07


1. Frecvena fiecrui fenotip segregant (%)

2. Probabilitatea de recombinare:
p = 1/7= 0,14
3. Probabilitile gameilor:
Os = 0,43; as = 0,43; Oa = 0,07; ss = 0,07
4. Frecvenele fenotipurilor:
Os = 0,675= 67,5%
Oa = 0,075 = 7,5%
as = 0,21 = 21%
ss = 0,035 = 3,5%
5. Total crossover:
0,075 + 0,035 = 0,11 = 11%
Total noncrossovere
0,675 + 0,21 = 0,885= 88,5%
Analiznd datele prezentate n tabel, rezult c fenotipurile parentale datorate
noncrossoverelor, pot avea frecvena de la 87% (Excelsior x Comandor) la 97%
(Excelsior x Goldrich i Comandor x Dacia). Fenotipurile neparentale datorate
noncrossoverelor pot avea frecvena de la 3% (Excelsior x Goldrich iComandor x
Dacia), la 13 %(Excelsior x Comandor).
109

TEST DE EVALUARE

1. Ce este conversia genelor ?
Rspuns:



2. Ce este crossingover nebalansat?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Probleme severe se ivesc dac gametul conine recombinri nebalansate care
provin de la zigot:
a. o duplicare local a genelor unui cromozom
b. deleia unor cromozomi
c. translocarea unei pri a cromozomului ntr-un altul
d. inversarea genelor
Rezolvare: a, b, c, d
De rezolvat:
2. Fenotipurile neparentale de cais datorate noncrossovere-lor pot avea frecvena de:
a. 3% (Excelsior x Goldrich) i (Comandor x Dacia)
b. 13 %(Excelsior x Comandor)
c. 87% (Excelsior x Comandor)
Rezolvare:

4.3 Crossingover ul mitotic
Crossover-ul mitotic este un tip de recombinri genetice mai rar ntlnite, care se
petrec n unele tipuri de celule somatice, n timpul mitozei. Crossover-ul mitotic se petrece
n organisme care nu au ciclu de reproducere sexuat, unde crossover-ul genetic se petrece
normal n timpul meiozei, genernd variabilitate genetic. Se petrece n celule diploide i
sunt necesare perechi de cromozomi pentru ca aceasta s se ntmple.
Conversia genelor este un transfer nereciproc de informaii (o molecul de ADN,
doneaz o parte din informaie altei molecule ADN).

110
Rezultatul crossoverul-ui mitotic const n producerea combinaiilor de alele
homozigote n toate genele heterozigote care sunt aezate n braul distal al cromozomului.
Cnd se petrece crossover-ul mitotic, genele recesive se exprim, crend un nou fenotip.
Crossover-ul mitotic este cunoscut a se petrece la unii fungi cu reproducere asexuat
(fig. 12) i n celule umane, unde expresarea genelor normal recesive permite ca
evenimentul cancer, spre exemplu, s aib loc i aceasta predispune la dezvoltarea lui ntr-
un individ.



Figura 12. Crossingover mitotic la Aspergillus

REZUMATUL TEMEI NR. 4 (Capitol 2 )

Crossingover cromozomal (sau crossover) este procesul prin care dou perechi de
cromozomi se apropie i i schimb seciuni de ADN.
Aceasta se ntmpl adesea n timpul profazei meiozei n procesul denumit sinaps.
Sinapsa ncepe nainte de dezvoltarea complexului sinaptenomal i nu este complet
pn aproape de sfritul profazei. Crossover-ul se petrece uzual cnd regiunile perechi ale
cromozomilor perechi se rup i se reconecteaz ntr-un alt cromozom.
Rezultatul acestui proces al schimbului de gene, se numete recombinare genetic.
Recombinarea implic rupturi i replicri ale perechilor de cromozomi parentali. Teoria
crossing overului a fost descris pentru prima oar de Thomas Hunt Morgan n 1916.
Bazele fizice ale crossing over-ului au fost demonstrate pentru prima dat de Harriet
Creighton i Barbara McClintock n 1931.
Crossover-ul cromozomal se petrece de asemenea n organismele asexuate i n
celule somatice, avnd un rol important n formele de reparare a ADN.
111
Fenotipurile parentale datorate crossovere-lor, pot avea frecvena de la 87%
(Excelsior x Comandor) la 97% (Excelsior x Goldrich) i (Comandor x Dacia).
Fenotipurile neparentale datorate noncrossovere-lor pot avea frecvena de la 3%
(Excelsior x Goldrich) i (Comandor x Dacia), la 13 %(Excelsior x Comandor).
Crossover-ul mitotic este un tip de recombinri genetice mai rar ntlnite, care se
petrec n unele tipuri de celule somatice, n timpul mitozei. Crossover-ul mitotic se petrece
n organisme care nu au ciclu de reproducere sexuat, unde crossover-ul genetic se petrece
normal n timpul meiozei, genernd variabilitate genetic. Se petrece n celule diploide i
sunt necesare perechi de cromozomi pentru ca aceasta s se ntmple.

TEST RECAPITULATIV PENTRU TEMA 4 (Capitol 2 )

1. Sinapsa ncepe n:
a. zigoten
b. pachiten
c. diploten

2. Sinapsa se degradeaz n:
a.diploten
b.zigoten

3. Prezena chiasmelor este dovada:
a. crossing overului
b. conversiei genelor

4. Cnd se petrece crossoverul mitotic la fungi:
a. genele recesive se exprim, crend un nou fenotip.
b.genele dominante se exprim

5. Crossover-ul mitotic:
a.este un tip de recombinri genetice mai rar ntlnite, care se petrec n unele tipuri de
celule somatice, n timpul mitozei
b. este un tip de recombinri genetice mai rar ntlnite, care se petrec n unele tipuri
de celule somatice, n timpul meiozei
112

6. Jonciunea Holliday este o structur:
a. tetraedric
b. triedric

7. Forma coroanei neparentale sferic (ss) la descendenii de cais rezultai din
hibridarea dialel oval (Os, Oa) x aplatizat (as) este datorat:
a. crossingover-ului mitotic
b.crossingover-ului meiotic

Bibliografie selectiv
1. Creighton H, McClintock B.,1931. A Correlation of Cytological and Genetical Crossing-
Over in Zea Mays. Proc Natl Acad Sci U S A 17 (8): 492-7. PMID 16587654. (Original
paper)
2. Griffiths et al.,1999. Modern Genetic Analysis. W. H. Freeman and Company
3. Keeney S, Giroux CN, and Kleckner N., 1997. Meiosis-specific ADN double-stranded
breaks are catalyzed by Spo11, a member of a widely conserved protein family. Cell
88(3):375-384. PMID 9039264 doi:10.1016/S0092-8674(00)81876-0
4. Li X, Heyer WD., 2008. Homologous recombination in ADN repair and ADN damage
tolerance. Cell Res. 18 (1): 99-113. PMID 18166982
5. Sauvageau S, Stasiak AZ, Banville I, Ploquin M, Stasiak A, and Masson JY., 2005.
Fission yeast rad51 and dmc1, two efficient ADN recombinases forming helical
nucleoprotein filaments. Mol Cell Biol 25(11):4377-4387. PMID 15899844
doi:10.1128/MCB.25.11.4377-4387


TEMA NR. 5 (Capitol 2 )
INTERACIUNEA GENELOR LA PLANTE
Uniti de nvare:
Interacia diferitelor gene care controleaz identitatea organelor florale
Interacia genelor alele la plante (a. dominana complet; b. dominana
incomplet; c. letalitatea)
Interacia genelor nealele la plante (a.complimentaria, b. polimeria sau poligenia,
c. epistasia)
113

Timpul alocat temei 4 ore

Bibliografie recomandat:
1.Viorica Blan, 2008. Genetica Plantelor, Editura ALPHA MDN, ISBN 978-973-139-
047-5
2. web. mit.edu/star/genetics
3. www.ndsu.edu/pubweb/../flower/flower3ht.

Obiective
1. nelegerea mecanismelor interaciunii genelor n expresarea unor caracteristici ale
plantelor.
2. Cunoaterea mecanismelor prin care raporturile Mendeliene sunt modificate la
descendenii unor varieti ale speciilor de plante.
3. nelegerea mecanismelor genetice a motenirii unor caracteristici prin aciunea
genelor aezate n aceiai loci, denumite i gene alele.
4. nelegerea mecanismelor genetice a motenirii unor caracteristici prin aciunea
genelor aezate n loci diferii denumite i gene nealele.
5. nsuirea rezultatelor unor experimente privind interaciunea genelor alele i
nealele ca fundament al explicrii mecanismului motenirii unor caracteristici ale plantelor.
Teza c o gen, sau un numr relativ mic din fiecare cromozom, determin o anume
caracteristic, nu poate s explice marea diversitate de caracteristici care se motenesc
ereditar. n acelai timp este bine cunoscut faptul c genotipul fiecrui organism reprezint
un sistem complex. Genele interacioneaz ntre ele, fapt determinat de organizarea
genomic a materialului ereditar.
Se deosebesc dou tipuri principale de interaciune a genelor: interaciunea genelor care
ocup aceiai loci sau gene alele i interaciunea genelor care nu ocup aceiai loci, sau
gene nealele.






114

5.1 Interacia diferitelor gene care controleaz identitatea organelor florale


Figura 1. Diagrama interaciei diferitelor gene care controleaz identitatea
organelor florale ( www.ndsu.edu/pubweb/../flower/flower 3ht)

Genele care controleaz identitatea organelor florale, prezentate n fig.1, au fost
clasificate n funcie de expresarea uneia dintre cele trei caracteristici, A, B, sau C.
Gena A controleaz dezvoltarea sepalelor i petalelor; Gena B controleaz
dezvoltarea petalelor i staminelor; Gena C controleaz dezvoltarea staminelor i a
carpelelor.
Funciile genei A








Figura 2. APETAL 2 mutant la Arabidopsis Thaliana
(www.ndsu.edu/pubweb/flower/flower)
Gena A are dou funcii APETALA2 i APETALA1.
Alelele acestor dou gene au fost izolate i aceasta a artat c efectul lor variaz n
diferite grade. Dac funcia genei A sufer mutaie, primul verticil se dezvolt ca i
carpel i al doilea ca i stamine.
115
A fost demonstrat prin experimente c OVULATA este funcia genei A a florii de
Antirrhinum majus - Gura leului, asemntor genei APETALA 2.
Funcia genei B

Figura 3. APETALA 3 mutant Antirrhinum majus Arabidopsis thaliana
(www.ndsu.edu/pubweb/../flower/flower 3ht)

Funcia genei B este definit de gena APETALA 3 i PISTILLATA.
Efectul genei B mutant, este acela c verticilul 2, se dezvolt mai degrab ca sepal
i nu ca petal, iar verticilul 3 se dezvolt ca o carpel i nu ca sepal.
T. Deficiens i globosa sunt gene ale florii de Gura leului, care au funcii omoloage
cu genele B ale Arabidopsis thaliana (gscaria).
Funcia genei C
Funcia genei C este definit de gena AGAMOUS.
Mutanta acestei gene, are trei verticile de stamine nlocuite cu o petal i al patrulea
verticil dezvoltat ntr-o nou floare de tipul sepal-petal-petal.
Mai mult, dezvoltarea florii la mutanta AGAMOUS este nedeterminat i nu determinat.
Gena asemntoare cu AGAMOUS la Gura leului este PLENIFLORA.








Figura 4. Mutanta AGAMOUS (dup www.ndsu.edu/pubweb/../flower/flower 3ht)

116
Efectele fenotipice al mutantelor A, B, C, ca urmare a interaciei acestora asupra
identitii organelor florale, sunt prezentate n tabelul nr. 1.

Tabel 1. Efectele fenotipice ale mutaiilor genelor A, B sau C, asupra identitii
organelor florale la Arabidopsis thaliana (www.ndsu.edu/pubweb/../flower/flower 3ht)
Efectele fenotipice ale mutaiilor genelor A, B, C, asupra identitii organelor florale
Fenotipul
Mutatia Spirala 1 Spirala 2 Spirala 3 Spirala 4
Tipul salbatic Sepal Petal Stamin Carpel
Functia A Carpel Stamin Stamin Carpel
Functia B Sepal Sepal Carpel Carpel
Functia C Sepal Petal Petal Floare nou

Concluzii privind funciile i interaciile genelor A, B i C asupra formrii
organelor florale la Arabidopsis thaliana.
1. Studiindu-se o singur mutant :
Din cauz c din mutaia funciei genei A rezult expresarea organului controlat
de gena C, nseamn c gena A represeaz expresarea funciei genei C, n verticilul care
va da natere la sepale i petale.
Apariia petalelor n al treilea verticiliu al genei mutante C, sugereaz c genele
C represeaz activitatea genei A, n organul pe care ele l controleaz.
Cu privire la dezvoltarea carpelelor i staminelor, funcia mutantei APETALA2
A, determin funcia genelor C n dezvoltarea carpelelor i staminelor n primele dou
verticile.
2. Cnd se studiaz dou mutante A i C
Aceste mutante nu vor avea nici o funcie exclusiv controlat de funciile A i
C. ntr-adevr, aceasta s-a vzut cnd s-au dezvoltat ambele mutante APETALA2 i
AGAMOUS T.
Primul verticil s-a dezvoltat ca frunze iar cel de al doilea ca stamine sau
petale.
Al doilea verticil al fenotipului mutant este rezultatul activitii funciei genei B.
3. Ce se poate atepta cnd A, B i C, funcioneaz ca i triple mutante?
Aceste mutante nu vor avea gene funcionale care s determine dezvoltarea
117
organelor florale normale. De aceea, se vor dezvolta frunze din fiecare verticil.

TEST DE EVALUARE

1. Care sunt funciile genei A, n controlul identitii organelor florale la Arabidopsis
thaliana?
Rspuns:



2. Care sunt funciile genei B, n controlul identitii organelor florale la Arabidopsis
thaliana?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Din cauz c din mutaia funciei genei A rezult expresarea organului controlat de
gena C, nseamn c:
a. gena A represeaz expresarea funciei genei C, n verticilul care va da natere la sepale i
petale.
b. gena C represeaz exprimarea funciei genei A.
Rezolvare: a
2. Cnd genele A, B i C, funcioneaz ca i triple mutante, la Arabidopsis thaliana:
a. nu vor avea gene funcionale care s determine dezvoltarea organelor florale normale i
se vor dezvolta frunze din fiecare verticil
b. vor avea gene funcionale i se vor dezvolta organe florale
Rezolvare:

5.2 Interaciunea genelor alele la plante
S ne amintim c se numesc alele acele gene care ocup aceiai loci (locusuri) n
cromozom. Se disting urmtoarele tipuri de interaciune a genelor alele:
a) dominana complet;
b) dominana incomplet;
c) letalitatea;
Gena A are dou funcii APETALA2 i APETALA1. Dac funcia genei A sufer
mutaie, primul verticil se dezvolt ca i carpel i al doilea ca i stamine.

118
d) codominarea;
a) Dominana complet.
n cazul dominanei complete o gen domin complet o alt gen. n acest situaie
sunt valabile legile lui G. Mendel, iar homozigoii i heterozigoii nu se disting fenotipic.
Drept exemplu de dominana complet poate servi motenirea culorii galbene i verzi a
bobului de mazre (gena culorii galbene domin gena culorii verzi), motenirea culorii
ochilor la om (gena culorii ochilor cprui domin gena culorii ochilor albatri), etc.
b) Dominana incomplet.
Dominana incomplet este un fenomen de interaciune dintre genele alele, care determin
la formele heterozigote (Aa), apariia unui fenotip intermediar al formelor homozigote
parentale (AA, aa). Acest fenomen vine n concordan cu legile lui G. Mendel i a fost
descris chiar de C. Correns la planta barba mpratului (Mirabilis jalapa). La
ncruciarea plantelor cu flori roii (AA) i a plantelor cu flori albe (aa), n prima generaie
(F
1
) toi heterozigoii (Aa) aveau plante cu flori roz. La ncruciarea hibrizilor F
1
(Aa) ntre
ei, n generaia a doua s-a obinut o descenden alctuit din circa 25% de plante cu flori
roii, 50% de plante cu flori roz i 25% de plante cu flori albe.














Figura 5. Dominana incomplet la Mirabilis jalapa ( www.tutorvista S.U.A)

n cazul dominanei incomplete raportul de segregare fenotipic coincide cu raportul
de segregare genotipic 1AA : 2Aa : 1aa., dup cum vedem n figura 5.
119
Fenomene similare de motenire a caracterelor au fost descoperite i la alte
organisme, inclusiv la plante (culoarea boabelor de porumb, culoarea florilor de gura-
leului, etc.) i la animale (culoarea penajului ginilor de Andaluzia, tipul prului la om,
etc.).
c. Letalitatea
Fenomenul de letalitate este provocat de aciunea unor gene care se mpart n mod
convenional n:
gene letale (cauzeaz o mortalitate de peste 90%);
gene semiletale (cauzeaz o mortalitate ntre 50% i 90%);
gene subvitale (au o letalitate ntre 10% i 50%);
gene cvasinormale (au o letalitate sub 10%).
De regul, genele letale cauzeaz moartea organismului n primele stadii de
dezvoltare. Celelalte grade de letalitate sunt determinate de natura genomului, interaciunea
dintre gene, condiiile mediului.
Genele care provoac fenomenul de letalitate la plante pot fi recesive, n stare
homozigot
sau heterozigot.
Letalitatea determinat de gene homozigot recesive la Antirrhinum majus
Exemplu: segregarea genotipic 1:2:1 i fenotipic 2:1 la Antirrhinum majus var.
aurea
Letalitatea determinat de gene homozigot recesive a fost semnalat de E. Baur n
1930 la Antirrhinum majus.









Figura 6. Letalitatea determinat de gene homozigot recesive la Antirrhinum
majus (www stireal edu.nd/biology/candidat/most_interact pdf)

120
n cadrul acestei specii, exist varieti cu frunze verzi i o varietate aurea cu
frunze de culoare verde-glbuie.
La ncruciarea unor plante aurea, n F
1
, s-au obinut trei tipuri de segregare
genotipic:
1 galben : 2 aurea : 1 verde.
Plantele cu frunzele de culoare galben (aa) pier n primele faze ale vieii, dup
epuizarea substanelor de rezerv din semine i atunci raportul fenotipic devine 2 aurea :
1verde, dup cum putem vedea n figura 6.
De menionat c letalitatea poate fi influenat i de condiiile de mediu (raze
ionizante, temperatura, etc.).

TEST DE EVALUARE

1. Ce este dominanaa incomplet?
Rspuns:



2. n ce stadii de dezvoltare a plantelor cauzeaz genele letale moartea plantelor?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. La ncruciarea hibrizilor F
1
(Aa), cu flori roz ntre ei, n generaia a doua s-a
obinut o descenden alctuit din:
a. 25% plante cu flori roii, 50% plante cu flori roz i 25% plante cu flori albe
b.50% plante cu flori roz, 25% plante cu flori roii, 25% plante cu flori albe
c. 25% plante cu flori roii, 25% plante cu flori roz i 50% plante cu flori albe
Rezolvare: a
De rezolvat:
2. Plantele cu frunzele de culoare galben (aa) pier n primele faze ale vieii, dup
epuizarea substanelor de rezerv din semine i atunci raportul fenotipic devine:
a. 1 galben : 2 aurea : 1 verde
b. 2 aurea : 1verde,
Dominana incomplet este un fenomen de interaciune dintre genele alele, care
determin la formele heterozigote (Aa), apariia unui fenotip intermediar al formelor.
homozigote parentale (AA, aa).
121
Rezolvare:

5.3. Interaciunea genelor care ocup loci diferii n cromozom, la plante
Se disting urmtoarele tipuri principale de interaciune a genelor aezate n loci
diferii n cromozom, sau gene nealele:
a. complimentaria;
b. polimeria sau poligenia
c. epistasia.
a) Complementaria.
n cazul complimentariei, prezena ntr-un genotip a dou gene dominante (recesive)
nealele determin apariia unui nou caracter. Ca rezultat, pot fi obinute noi abateri de la
legile mendeliene.
Exemplul 1. Segregarea 9 : 7 (motenirea culorii boabelor de porumb)
La ncruciarea a dou soiuri de porumb, ambele cu boabe necolorate, dar cu
genotipuri diferite (aaCCRR i AAccRR), n F
1
, se obine o form nou cu boabe colorate
(AaCcRR). n F
2
apar dou grupe fenotipice n raport de 9 colorat : 7 necolorat, dup cum
se vede din tabelul 2.
P Fenotip:Genotip: Necolorat
aaCCRR x
Necolorat
AaccRR
F
1
Fenotip:Genotip: Colorat
AaCcRR
Tabel 2. Segregarea n raportul 9:7 a caracteristicii culoarea bobului de porumb
(dup cat.inist.fr/aModele=afficheN&cpsidt=1815040)








ACR AcR aCR acR
ACR AACCRR
colorat
AACcRR
colorat
AaCCRR
colorat
AaCcRR
colorat
AcR AACcRR
colorat
AaccRR
necolorat
AaCcRR
Colorat
AaccRR
Necolorat
aCR AaCCRR
colorat
AaCcRR
colorat
aaCCRR
necolorat
aaCcRR
necolorat
acR AaCcRR
colorat
AaccRR
necolorat
aaCcRR
necolorat
aaccRR
necolorat
122
Apariia n F
1
i F
2
a unui caracter nou (boabe colorate de porumb) este determinat
de prezena concomitent a dou gene nealele complementare A i C, care numai mpreun
pot determina apariia culorii bobului, datorit aciunii aleuronei.

Exemplul 2. Raportul de segregare 9 : 7 (motenirea culorii florii la mazrea
dulce)
Dac dou gene sunt implicate ntr-o situaie i produsul funcional din ambele gene
este necesar pentru expresarea fenotipic, iar apoi se implic o pereche de alele recesive de
la alt pereche alelic va rezulta un fenotip nou.
Dac linia pur de plante cu flori colorate (genotip = CCPP), este ncruciat cu linia
pur homozigot recesiv, de plante cu flori albe, plantele F
1
vor avea flori colorate i
genotipul va fi CcPp. Raportul normal al dihibrizilor este 9 : 3 : 3 : 1, dar interaciunea
complementar a genelor C i P va modifica raportul de segregare, la 9 flori colorate : 7
flori albe.
n tabelul 3 sunt descrise interaciunile pentru fiecare genotip i cum se realizeaz
raportul de segregare.

Tabel 3. Raportul de segregare 9 : 7 a caracteristicii culoarea florii la mazrea dulce
(Phillip.Mcclean@ndsu.edu)
Gen
otipul
Culoarea florii Activitatea enzimelor
9 C_P_ Flori colorate
producerea antocianinei
Enzime funcionale de la ambele gene
3 C_pp Flori albe
nu se produce antocianina
P enzim non-funcional
3 ccP_ Flori albe
nu se produce antocianina
C enzim non-funcional
1 ccpp Flori albe
nu se produce antocianina
C i p enzim non-funcional

Pentru c ambele gene sunt necesare pentru expresarea fenotipului flori colorate
interaciunea se numete aciunea complementar a genelor.

123
b) Polimeria sau poligenia
Polimeria sau poligenia reprezint fenomenul n care o caracteristic sau o nsuire
calitativ este determinat de mai multe gene nealele cu aciune asemntoare i simultan.
Aceste gene se numesc polimere sau poligene i de regul, se noteaz cu aceiai liter.
Polimeria poate fi:
1. cumulativ - cnd intensitatea fenotipului depinde de numrul de poligene
dominante;
2. necumulativ - cnd intensitatea fenotipului nu depinde de numrul de poligene
dominante.
Tabel 4. Raportul de segregare 15:1.a caracteristicii culoarea bobului de gru
dup Crciun Teofil)


















n ambele cazuri, segregarea n F
2
are loc n raport de 15 : 1 (dac caracteristica
respectiv este determinat de dou poligene).
Fenomenul polimeriei cumulative a fost observat de cunoscutul genetician i
ameliorator H. Nilsson-Ehle. ncrucind soiuri de gru cu boabe rou-intens cu soiuri de
gru cu boabe albe, n F
1
el obinea plante cu boabe de un rou mai deschis.
124
Explicarea interaciunii genelor i a raportului de segregare 15 : 1 n
mecanismul motenirii caracteristicii culoarea bobului de gru.
n F
2
se obinea o segregare dup fenotip n raport de 15 boabe colorate : 1 boabe
albe. Intensitatea culorii depinde de numrul de gene dominante A
1
i A
2.
Aciunea genelor
n mecanismul genetic al motenirii culorii seminelor la gru este cunoscut i ca aciune
duplicat a genelor.
n aceast situaie, dac linia pur a plantelor de gru cu semine colorate (genotip =
AABB), este ncruciat cu plante cu semine albe (genotip = aabb) i plantele F
1
au fost
autopolenizate, s-a produs modificarea raportului 9:3:3:1. n tabelul 5 se furnizeaz
explicaii biochimice pentru modificarea raportului Mendelian de 9 : 3 : 3 : 1 n raportul de
15 : 1.
Pentru acest tip de situaie enzimele funcionale de la genele A i B pot realiza un
produs de la un singur precursor. Podusul d culoarea bobului de gru (tabel 5).
Precursor Produs
Gena A Gena B
Enzima A Enzima B

Tabel 5. Explicaii ale funcionrii enzimelor de la perechile de gene A_ i B_, n
exprimarea fenotipului culoarea bobului de gru (PhillipMcclean@ndsu.edu)

Genotip
Fenotipul
seminelor
Activitatea enzimatic
9
A_B_
Semine
colorate
Enzime funcionale de la ambele gene
3
A_bb
Semine
colorate
Enzime funcionale de la perechea de gene A
3
aaB_
Semine
colorate
Enzime funcionale de la perechea de gene B
1
aabb
Semine
necolorate
Enzime funcionale produse de ambele gene

Dac nsumm cele trei genotipuri diferite care produc culoarea seminei, putem
vedea c vom obine raportul 15 : 1. Pentru c enzimele de la genele A_B_ interacioneaz
125
n exprimarea fenotipului culoarea bobului de gru, aceast interacie se numete aciune
duplicat.
c. Epistasia
Epistasia este acel tip de interaciune a genelor nealele, n care o gen suprim
expresia altei gene. Epistasia poate fi determinat de gene dominante (epistasie dominant)
sau gene recesive (epistasie recesiv).
c.1. Epistasia dominant.
Aciunea epistatic a unei gene dominante nealele a fost semnalat de H.Nilsson-
Ehle nc n 1909-1911.
Raportul de segregare 12 : 3 : 1 n mecanismul motenirii caracteristicii
culoarea bobului de Avena fatua.
La ncruciarea plantelor de Avena fatua, (NNGG), cu boabe negre x Avena sativa
(nn gg) cu boabe albe s-a obinut o descenden cu boabe negre (Nn Gg).
Din tabelul 6, reiese c plantele dezvoltate din aceste boabe au produs la rndul lor n
F
2
raportul de segregare, de 12 negre : 3 gri : 1 alb.

Tabel 6. Segregarea n raportul de 12 : 3 : 1 a caracteristicii culoarea bobului la
Avena fatua (dup Teofil Crciun)












Gena N determin culoarea neagr, iar gena G culoarea gri, ambele gene recesive
culoarea alb. n acest caz, gena G determin culoarea gri numai n absena genei N.
Raportul de segregare 12 : 3 : 1 n mecanismul motenirii caracteristicii culoarea
fructului la dovlecei.
126
n aceast interacie, alelele care controleaz culoarea fructului la dovlecei, sunt
recesive pentru caracteristica necolorat. Aceste alele recesive trebuie s fie expresate
nainte ca alelele specifice ale culorii din al doilea locus s fie expresate.
La primul exemplu, genele culorii alb a patisonului, este dominant i simbolul
genelor este
W=alb i w=colorat
La al doilea, culoarea galben este dominant fa de verde i simbolul folosit este
G=galben, g=verde. Dac dihibridul este autofecundat, se produc trei fenotipuri, care
segreg n raportul 12 : 3 : 1. n tabelul 7 se dau explicaiile pentru modul n care se obine
raportul.

Tabel 7. Segregarea n raportul de 12 : 3 : 1 a caracteristicii culoarea fructului la
dovlecei ( Phillip.Mcclean@ndsu.edu)

Genotipul

Fenotipul: culoarea
fructului
Aciunea genelor
9 W_G_ Alb Albul dominant al alelei W, mpiedic efectul
alelei G
3 W_gg Alb Albul dominant al alelelor mpiedic efectul
alelei G
3 wwG_ Galben Alelele recesive pentru culoare permit expresarea
alelelor pentru culoarea galben
1 wwgg Verde Alelele recesive pentru culoare au permis
expresarea alelelor pentru culoarea verde





127
TEST DE EVALUARE
1. Ce este polimeria?
Rspuns:




2. Ce este complimentaria?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat
1. Raportul normal de segregare a culorii florilor la dihibrizii de mazre dulce, ar
trebui s fie 9 : 3 : 3 : 1, dar interaciunea complementar a genelor C i P va
modifica raportul de segregare la:
a. 9 flori colorate : 7.flori albe
b.15 flori colorate : 1 flori albe
Rezolvare: a
2. Raportul normal de segregare a culorii bobului la dihibrizii de porumb ar trebui s
fie 9 : 3 : 3 : 1, dar interaciunea complementar a genelor A i C va modifica
raportul de segregare, la:
a.9 boabe colorate : 7 boabe necolortae
b.15 boabe colorate : 7 boabe necolorate
Rezolvare:
Pentru c prezena alelei dominante W, mascheaz efectul alelei G i g, acest tip de
interacie este numit epistasie dominant.
c2. Epistasia dominant supresoare
Raportul de segregare 13 : 3, n producerea malvidinei la Primula
Unele gene au abilitatea de a stnjeni expresarea genelor din locusul secund.
Producerea substanei chimice malvidina n plantele de Primula, este un exemplu
pentru acest tip de situaie.
Ambele activiti, sinteza malvidinei (controlat de gena K) i stnjenirea sintezei,
controlat (de gena D) sunt dominante.
Polimeria sau poligenia reprezint fenomenul n care o caracteristic sau o nsuire
calitativ este determinat de mai multe gene nealele cu aciune asemntoare i
simultan.
128
Plantele F
1
cu genotipul KkDd nu va produce malvidin din cauza prezenei alelei
dominante D. Care va fi distribuia fenotipurilor F
2
dup ce plantele F
1
au fost ncruciate ?
Aceasta reise din tabelul nr. 8.

Tabel 8. Segregarea n raportul 13 : 3 a producerii malvidinei la Primula (
Phillip.Mcclean@ndsu.edu)
Genotip Fenotipul i explicaia genetic
9 K_D_ Nu se sintetizeaz malvidina pentru c este prezent alela dominant D
3 K_dd Se sintetizeaz malvidina pentru c este prezent alela dominat K
3 kkD_ Nu se sintetizeaz malvidina pentru c este prezent alela dominant D
1 kkdd Nu se sintetizeaz malvidina pentru c este prezent alela recesiv k
Raportul de interaciune este 13 nesintetizarea malvidinei i 3 producerea malvidinei.
Pentru c aciunea alelei dominante D, mascheaz gena de la locusul K, acest tip de
interacie se numete epistasia dominant supresoare.
Supresor este un factor care mpiedic expresarea alelelor din locusul secund.

TEST RECAPITULATIV PENTRU TEMA NR. 5 (Capitol 2)

1. La ncruciarea plantelor de Avena fatua (NNGG) cu boabe negre x Avena sativa
(nn gg) cu boabe albe, s-a obinut o descenden F
1
cu boabe negre (Nn Gg) i plantele
dezvoltate din aceste boabe au produs la rndul lor n F
2
raportul de segregare, de:
a.12 negre : 3 gri : 1 alb.
b.9 negre : 6 gri : 1 alb
2. La Avena fatua, gena G determin culoarea gri numai:
a. n absena genei N
b. n prezena genei N
3. Mecanismul motenirii caracteristicii culoarea bobului la Avena fatua, este datorat:
a.aciunii epistatice a unei gene dominante
b.aciunii epistatice a unei gene recesive
4. n mecanismul motenirii caracteristicii culoarea bobului de Avena fatua, raportul
de segregare este:
a.12 negru: 3 gri: 1 alb
129
b.15 negru: 1 alb
5. La patison, Albul dominant al alelei W, mpiedic efectul:
a. alelei G
b.alelei g
6. Pentru c prezena alelei dominante W, mascheaz efectul alelei G i g acest tip de
interacie este numit:
a.epistasie dominant.
b.epistasie recesiv
c.epistasie dominant represoare.
7. La Primula, raportul de segregare datorat interaciunii genelor este:
a.13 nesintetizarea malvidinei : 3 nesintetizarea malvidinei
b.13 sintetizarea malvidinei : 3 nesintetizarea malvidinei
8. n mecanismul sintetizrii malvidinei la Primula, interaciunea genelor, n care
gena G mascheaz gena K, se numete:
a. epistasie dominat
b. epistasie dominant represoare
9. Supresor este un factor care mpiedic expresarea alelelor:
a. din locusul secund.
b. din acelai locus

REZUMAT AL TEMEI NR. 5 (Capitol 2)

Genele unui individ nu opereaz izolat una fa de cealalt, ci evident ele
funcioneaz n comun n mediul celular. Astfel, este de ateptat a se petrece o interaciune
a lor.
Se deosebesc dou tipuri principale de interaciune a genelor: interaciunea genelor
care ocup aceiai loci sau gene alele i interaciunea genelor care nu ocup aceiai loci,
sau gene nealele.
Se disting urmtoarele tipuri de interaciune a genelor alele: a) dominana complet;
b) dominana incomplet; c) letalitatea; d) codominarea.
Se cunosc urmtoarele tipuri principale de interaciune a genelor aezate n loci
diferii n cromozom, sau gene nealele: a.complimentaria; b.polimeria sau poligenia; c.
epistasia.
130
n cazul dominanei incomplete la Mirabilis jalapa raportul de segregare fenotipic
coincide cu raportul de segregare genotipic: 1AA : 2Aa : 1aa.
Dac linia pur de plante de mazre cu flori colorate (genotip = CCPP), este
ncruciat cu linia pur homozigot recesiv, de plante cu flori albe, plantele F
1
vor avea
flori colorate i genotipul va fi CcPp. Raportul normal al dihibrizilor este 9 : 3 : 3 : 1, dar
interaciunea epistatic ale genelor Ci P vor modifica raportul, la 9 : 7.
Dac linia pur a plantelor de gru cu semine colorate (genotip = AABB), este
ncruciat cu plante cu semine albe (genotip = aabb) i plantele F
1
sunt autopolenizate, se
produce modificarea raportului 9 : 3 : 3 : 1, n raportul 15 : 1.
Unele gene au abilitatea de a stnjeni expresarea genelor din locusul secund.
Producerea substanei chimice malvidina n plantele de Primula, este un exemplu
pentru acest tip de situaie.

Bibliografie selectiv
1. Crciun T., 1981. Genetica Plantelor Horticole. Genetics of Horticultural Plants, Ceres
Publishing House, Bucharest, 537 p
2. Crciun T.,1987. Geniul Genetic i Cultura Plantelor. Genetic Genius and Plant
Breeding, Ceres Publishing House, Bucharest, 265 pp
3. Griffiths, Anthony J. F.; Miller, Jeffrey H.; Suzuki, David T; Lewontin, Richard C.;
Gelbart, William M. (Eds.) (1993) An Introduction to Genetic Analysis (5th ed.)Chap 5
New York: W.H. Freeman and Company ISBN -0-7167-2285-2
4. Poehlman, John M.; Sleper, David A. (1995) Breeding Field Crops (4th ed.) Chap. 3
Iowa: Iowa State Press. ISBN 0-8138-2427-3


TEMA NR. 6 (Capitol 2)
VARIAII N NUMRUL DE CROMOZOMI I EFECTELE
SEMNIFICATIVE ASUPRA AMELIORRII UNOR CARCTERISTICI ALE
PLANTELOR

Uniti de nvare:
Cariotipul - criteriu de recunoatere a speciilor;
Tipuri de manifestare ale Aneuploidiei la plante;
Originea Aneuploidiei i dezvoltarea Aneuploizilor la plante;
131
Efectele fenotipice ale Aneuploidiei la plante i importana lor pentru ameliorarea
plantelor;
Particulariti ale condiiei genomului de Monoploidie la plante;
Particulariti ale condiiei genomului de Autopoliploidie la plante;
Particulariti ale condiiei genomului de Alopoliploidie la plante;
Inducia i selecia Autopoliploizilor;
Inducia i ameliorarea Alopoliploizilor.
Obiective
nsuirea i nelegerea particularitilor condiiilor genomului de
Aneuploidie, Monoploidie sau de Haploidie, Autopoliploidie i Alopoliploidie.
Cunoaterea i nelegerea rolului plantelor monoploide, sau haploide n
studiile genetice i n ameliorare
nsuirea metodelor de inducere i de ameliorare a Autopoliploizilor i
Alopoliploizilor pentru caracteristici ale plantelor, cum sunt gradul de mrime a fructelor,
seminelor sau rezistena la factorii de stres.
Timpul alocat temei: 4 ore

Bibliogarfie recomandat:
1. Blan Viorica, 2008 . Genetica Plantelor, Editura ALPHA MDN, ISBN 978-973-139-
2. Casian Hellene, 2010. Genetic, www.horticulturabucureti.ro/fisiere/file/Genetica
pdf
3. Iancu Paula, 2010. Genetic, Manual universitar pentru nvmntul la distan, www
agro-craiova.ro/fisiere//AGRICULTURA%20SEM%2011

6.1 Cariotipul - criteriu de recunoatere a speciilor
Fiecrei specii i este caracteristic un anumit numr fix de cromozomi, denumit i
numr de baz de cromozomi sau genom, care se noteaz cu X.
Prin numr de baz de cromozomi (X) a unui gen se nelege numrul monoploid
sau setul haploid (n) al unei specii diploide din cadrul genului, cu cel mai mic numr de
cromozomi n celulele somatice.
Numrul, forma i mrimea cromozomilor sunt trsturi caracteristice stabile
pentru diferite specii. Acestea alctuiesc cariotipul, care este un criteriu de recunoatere.a
speciilor. n general, fiecrei specii eucariote i este caracteristic un anumit numr de
132
cromozomi, dublu n celulele somatice (2n) i simplu (n), n cele sexuale i constituie un
criteriu pentru recunoaterea speciilor (tab.1).

Tabel 1. Numrul de baz de cromozomi, diploid i tetraploid caracteristic
unor genuri i specii de plante
Genul Specia Numrul de
baz de
cromozomi
Numrul de
cromozomi
caracteristici
speciei
Gradul de
ploidie
Solanum nigrum X = 12 2n = 24 Diploid
chacoense 2n = 24 Tetraploid
tuberosum 2n = 48 Tetraploid
Nicotiana glauca X = 12 2n = 24 Diploid
tabacum 2n = 48 Tetraploid
Datura ferox X = 12 2n = 24 Diploid
2n = 48 Tetraploid
Armeniaca vulgaris X= 8 2n = 16 Diploid

Numrul de cromozomi, care formeaz garnitura de cromozomi din celulele
somatice (2n), reprezint o nsuire specific relativ constant, deoarece pot aprea
schimbri n numrul de cromozomi, ca urmare a unor tulburri n procesul diviziunilor
celulare sau a ncrucirilor ndeprtate.

TEST DE EVALUARE

1. Ce se nelege prin numrul de baz de cromozomi (X) al unui gen de plante?
Rspuns:



2.Ce este cariotipul?
Rspuns:


Prin numr de baz de cromozomi (X) a unui gen se nelege numrul monoploid sau
setul haploid (n) al unei specii diploide din cadrul genului, cu cel mai mic numr de
cromozomi n celulele somatice.

133
Exerciii:

Exemplu rezolvat:
1. La specia Solanum nigrum(x =12; 2n=24) gradul de ploidie este:
a. diploid
b. tetraploid
Rezolvare: a
De rezolvat:
2. La specia Nicotiana glauca (x=12; 2n=24), gradul de ploidie este:
a. diploid
b. tetraploid
Rezolvare:

6.2 Variaiile numeric-cromozomale la plante
Schimbarea numrului de cromozomi, poate avea loc spontan, sau artificial sub
aciunea factorilor mutageni. Modificarea numrului de cromozomi, constituie una din
cile evoluiei speciilor, fiind corelat cu modificarea cantitii de ADN din celule.
Mutaiile cromozomale numerice sunt cunoscute i sub denumirea de mutaii de genom i
sunt foarte numeroase la plante. Schimbrile n numrul de cromozomi pot avea loc fie
prin adiia tuturor cromozomilor sau doar a unei pri din numrul de baz de cromozomi
(aneuploidia), fie prin pierderea ntregului set de cromozomi (monoploidia), sau
ctigarea unuia sau a mai multor seturi complete de cromozomi (euploidia). Fiecare din
aceste condiii reprezint o variaie a numrului diploid de cromozomi, iar efectul acestei
variaii este drastic asupra expresiei fenotipice.
6.2.1 Aneuploidia
Aneuploidia reprezint o variaie n numrul de cromozomi al unui individ
concretizat prin pierderea sau adugarea unuia sau a ctorva cromozomi, dar nu a
ntregului genom.
Acest tip de variaie a prezentat o deosebit importan pentru evoluie, contribuind la
obinerea de noi surse de variabilitate. Existena a numeroase genuri care prezint n nucleu
un numr de baz diferit constituie o dovad a faptului c diversitatea speciilor s-a realizat
i pe aceast cale.
134
De asemenea, acest fenomen prezint o importan deosebit pentru genetiti n
elucidarea unor probleme legate de completul cromozomial, precum i pentru amelioratori
n sensul obinerii a noi surse de variaie.
Aneuploidia, este o condiie genetic, unde unul sau mai muli cromozomi din setul
specific de cromozomi lipsete sau este prezent n mai mult dect numrul normal al
copiilor.
Aneuploidia reprezint n fapt, o variaie n numrul de cromozomi, cu o deosebit
importan pentru evoluie, contribuind la obinerea de noi surse de variabilitate. Existena
a numeroase genuri care prezint n nucleu un numr de baz diferit constituie o dovad a
faptului c diversitatea speciilor s-a realizat i pe aceast cale. Aneuploidia poate avea
cteva tipuri de manifestare (tab.2).
Tabel 2. Tipuri de manifestare a Aneuploidiei
Tipul de aneuploizi Formula cromozomal Dotarea cromozomic
A,B,C, reprezint
cromozomi
Monosomici 2n-1 (ABC) (AB-)
Monosomici dubli 2n-1-1 (ABC) (A- -)
Nulisomici 2n-2 (AB-) (AB-)
Trisomici 2n +1 (ABC) (ABC) (C)
Tetrasomici 2n+2 (ABC) (ABC) (C) (C)
Tetrasomici dubli 2n + 1 +1 (ABC) (ABC) (C) (B)

1. Nulisomia este definit prin pierderea ambelor perechi ale cromozomilor omologi.
Indivizii respectivi se numesc nulisomici i compoziia cromozomal este 2n-2.
2. Monosomia, este definit prin pierderea unui singur cromozom, indivizii se numesc
monosomici, iar compoziia cromozomal este reprezentat de formula 2n-1.
3. Trisomia, este definit de ctigarea unei copii a cromozomului, indivizii se numesc
trisomici, iar compoziia cromozomal este reprezentat de formula 2n+1.
4. Tetrasomia, este definit de ctigarea unei extraperechi a cromozomilor omologi,
indivizii se numesc tetrasomici, iar compoziia cromozomal este reprezentat de formula
2n+2.
n plus fa de aceste condiii, explicate mai sus, sunt situaii n care mai mult dect
o pereche de cromozomi omologi pot fi implicate n aneuploidie. Spre exemplu, n dubla
135
monosomie, se pierde un cromozom din fiecare pereche a cromozomilor omologi, formula
cromozomilor fiind 2n-1-1, iar n tetrasomia dubl, se ctig o extrapereche din cele dou
perechi a cromozomilor omologi i formula cromozomilor este 2n+2+2 (tab.7).
Pe lng variaiile n numrul de cromozomi, pot fi ntlnite mai ales la plante,
situaii n care se dezvolt structuri genetice, unde sunt pstrate pri ale cromozomilor. Un
exemplu n acest sens l reprezint cromozomii telocentrici, la care centromerul este
terminal. Aceast structur, reprezint cromozomi care pierd materialul genetic situat dup
centromer.
Plantele care conin aceti cromozomi se numesc monotelosomici sau prescurtat
monotelos.
Un alt tip de structur genetic, ntlnit la plante este aceea care conine
isocromozomi, n care cromozomul conine acelai material genetic n ambele brae.
Plantele care conin acest cromozom se numesc monoisosomici sau prescurtat monoisos.

TEST DE EVALUARE
1. Ce este aneuploidia?
Rspuns:



2. Care sunt tipurile de manifestare ale aneuploidiei?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Formula cromozomal a monosomicilor este:
a. 2n-1
b. 2n-1-1
c. 2n+1
Rezolvare: a
De rezolvat:
2. Formula cromozomal a nulisomicilor este:
a. 2n-2
b. 2n+2
Aneuploidia, este o condiie genetic, unde unul sau mai muli cromozomi din setul
specific de cromozomi lipsete sau este prezent n mai mult dect numrul normal al
copiilor.
136
Rezolvare:

6.2.1.1 Originea aneuploidiei i dezvoltarea aneuploizilor
Originea aneuploidiei i dezvoltarea aneuploizilor nu sunt cunoscute nc foarte
bine, dar se cunosc unele dintre cauzele apariiei ei i anume: nondisjuncia cromozomilor
n meioza 1 sau meioza 2; distribuia neechilibrat a cromozomilor n gamei la unele
plante poliploide; mutantele asinaptice; mitozele multipolare; lipsa de asociere a
cromozomilor (asinapsa); mozaicismul genetic.
a. Nondisjuncia cromozomilor n meioza I sau meioza II
Studii moderne (Phillip McClean,1997, Anthony SF Griffits, Susan R Wessler,
Richard Lewantin, Sean B.Carroli, 2006, Jindrich Briza, 2010 ), susin c principala cauz
a apariiei aneuploidiei este nondisjuncia cromozomilor (nesepararea cromozomilor) n
timpul anafazei meiozei I, sau a meiozei II. Rezultatul direct al acestui proces este
dezvoltarea unui gamet care are mai puini sau mai muli cromozomi. Dac nondisjuncia
se ntmpl n meioza I, atunci, nu se dezvolt gamei normali, iar dac se petrece n
meioza II, jumtate din gamei vor fi normali i alt jumtate vor fi anormali (fig 1).
Aneuploizii pot s apar n mod spontan ca rezultat al faptului c unii gamei primesc mai
muli sau mai puini cromozomi dect n mod normal.














Figura 1. Nondisjuncia cromozomilor n Meioza I i Meioza II (dup Phillip
McClean)
137

b. Distribuia neechilibrat a cromozomilor n gamei la unele plante poliploide
Uneori aneuploizii apar la plantele poliploide care n timpul meiozei realizeaz diferite
tipuri de asociaii multiple ale cromozomilor (trivaleni, tetravaleni, pentavaleni etc.) ceea
ce determin o distribuie neechilibrat a cromozomilor n gamei.
Un exemplu de aneuploizi aprui la plantele poliploide, sunt cercetrile lui A. MTZING
(1951), la Secale cereale autotetraploid, arat c din 808 plante studiate, 77,23% au fost
disomice (2n = 28), restul aneuploide de diferite tipuri.
Pe aceast cale este posibil realizarea experimental de aneuploizi, aa cum a obinut E.
R. SEARS (1959)la Triticum aestivum (2n = 42), garnituri complete de 21 nulisomici, 21
monosomici, 21 trisomici i 21 tetrasomici.
Alte cauze ale apariiei aneuploizilor, menionate n literatura de specialitate, mai pot fi:
c. Mutantele asinaptice.
La unele plante (Datura stramonium, Nicotiana tabacum, Lycopersicum esculentum, etc.),
pot aprea aa numitele mutante asinaptice, la care cromozomii n meioz nu se asociaz
n bivaleni. Ca urmare a acestui fenomen, repartizarea cromozomilor n gamei este
anormal: apar gamei cu cromozomi n plus, ct i gamei cu cromozomi n minus.
d. Mitozele multipolare.
Mitozele multipolare, nsoind aberaiile cromozomiale, duc, de asemenea, la o repartizare
neregulat a cromozomilor n celulele fiice i la posibile apariii ale aneuploizilor
e. Lipsa de asociere a cromozomilor (asinapsa)
Alunecarea cromozomilor la cei doi poli se face ntmpltor, la un pol alunec un
cromozom n plus, la cellalt pol unul n minus.
f. Mozaicismul genetic
n 1998, Philip Mc Clean, meniona c nondisjuncia cromozomilor, poate avea loc
i n timpul mitozei, iar rezultatul este un individ care expreseaz fenotipic mozaicismul
cromozomal. Dac aceasta se petrece n stagiile timpurii ale diviziunii celulare, atunci
organismul plantei va avea cromozomi care provin de la diferite celule alterate. Acest
fenomen se poate ntmpla la hibrizii interspecifici sau intergenerici. Vom exemplifica ca
plante la care a fost ntlnit mozaicism genetic: Curcuma sp. (Jana Leong Skornicova and
all.,2007), Pandanus fascicularis (Kamal K. Panda and all., 2010), Ficus sp.( Thomas
J.D.and all,1991). La plantele menionate, expresii fenotipice mai puin sau mai mult
severe, au fost asociate cu mozaicismul genetic depistat.

138










Figura 2. Cucurma xanthorriza Fam. Zingerberaceae ( www.tropilabcomkoenir.html)





Figura 3. Pandanus fascicularis. Fam.Pandanaceae ( http://3pp.blogspot.com)
Cu titlu informativ, menionm c, uneori mozaicismul poate fi confundat cu
himerele genetice.
6.2.1.2 Efectele fenotipice ale Aneuploidiei i importana lor pentru genetica i
ameliorarea plantelor
Dup cum am menionat, efectul aneuploidiei, nu este aa de pronunat la plante.
Dei organismele aneuploide nu au importan economic direct, cercetrile n acest
domeniu au luat amploare, datorit rolului lor n procesul de ameliorare a plantelor.
O dovad a celor afirmate, o reprezint realizrile experimentului realizat de Dr.E.R.Sears
regsite n lucrarea "The Aneuploids of Common Wheat", publicat n University of
Missouri Research Bulletin, November 1954. E.R. Sears a reuit s creeze 21 de linii
nulisomice la soiul de gru Chinese spring, stabilind astfel rolul genetic al fiecrui
cromozom. Numrul diploid al grului studiat este 21. Analizele efectuate, au scos n
eviden c n genomul acestuia sunt 7 grupe omoloage, fiecare grup coninnd cte 3
139
cromozomi. Nulisomicii cunoscui la gru, pot fi utilizai pentru a desemna genele
dominante dintr-un cromozom. Aceasta se poate realiza prin ncruciarea a o serie de linii
nulisomice cu o linie homozigot recesiv pentru caracteristica studiat. n cele mai multe
cazuri descendenii vor exterioriza fenotipul dominant. Singura excepie o constituie o linie
nulisomic, la care lipsete cromozomul n care este prezent alela responsabil pentru
caracteristica studiat. n acest caz, raportul de segregare va fi 0 : 1 respectiv 0 dominant :
1 recesiv (tab.3).

Tabel. 3. Rezultatul ncrucirii liniilor nulisomice de gru Chinese spring cu o linie
homozigot recesiv (wheat.pw.usda.gov/wEST/nsf/main.html)

Genele sunt localizate pe cromozomul
nulisomic (20 din 21 de ncruciri)
Genele sunt localizate pe cromozomul
nulisomic(1 din 21 de ncruciri)
DD x dd
D d
1 : 0
Toi descendenii exteriorizeaz fenotipul
dominant
00 x dd
D d
0 : 1
Raportul de segregare este 0 dominant :
1 recesiv

Cu doi ani mai trziu, B.C. Jenkins (1956), publica rezultatele sale cu privire la
adiia i substituia de cromozomi de la secar. Prin ncruciarea speciei donor, purttoare a
caracteristicilor valoroase de rezistena la ger, la soluri acide i duntori cu specia receptor
de gru rezistent la ger, a obinut linii de substituie cu 2n=42 cromozomi, dintre care 40
de cromozomi ai grului i doi cromozomi de la secar, purttori de gene valoroase.
Aneuploidia este folosit n ameliorarea plantelor decorative, pentru inducerea
variabilitii genetice i a posibilitii de a se selecta fenotipuri noi, cerute de consumatori.
Raportul de segregare n ncrucirile care implic aneuploizi la plante, este afectat de
faptul c gametul mascul aduce n combinaie un extracromozom neviabil. De aceea, un
singur gamet haploid normal se produce n raportul ateptat. Un exemplu, n acest sens este
acela al ameliorrii plantei decorative Poinsetia "Steaua Crciunului", denumit tiinific
Euphorbia pulcherrima (o specie spectaculoas din Genul Euphorbia).



140








Figura 4. Euphorbia pulcherrima ( www. 800florals.com /care/ poinsettias. asp.)

Dac se ncrucieaz plante cu frunze purpurii cu plante cu frunze albe, alelele (p
+
)
ale plantei cu frunze roii vor fi dominante fa de alelele (p) ale plantei cu frunze albe.
ncruciarea pe care o vom analiza implic trisomici masculi i femeli, care au genotipul
p+p+p. n tabelul 4, scuarul Punnet, ilustreaz rezultatele obinute n astfel de ncruciri.

Tabel 4. Scuarul Punnet, al ncrucirii Poinsetia cu frunze purpurii x Poinsetia
cu frunze albe
Gamei femeli
P
+
p
+
p
+
p P
+
p p
+
p
+
P
Gamei masculi
p
+
P
+
p
+
p
+
p
+
pp
+
P
+
pp
+
p
+
p
+
p
+
p
+
Pp
+

p
+
P
+
p
+
p
+
p
+
pp
+
P
+
pp
+
p
+
p
+
p
+
p
+
Pp
+

p P
+
p
+
p p
+
pp P
+
pp p
+
p p
+
p pp

Procentul de segregare al descendenilor rezultai din aceast ncruciare este 17
frunze purpurii : 1 frunze albe (alele p
+
, bolduite sunt folosite n scuar pentru caracteristica
frunze albe, orice alt alel p
+
nebolduit este folosit pentru caracteristica frunze purpurii).
Acest raport de 17 : 1, este tipic pentru ncruciri ntre trisomici la plante.
Utilizarea aneuploidiei n ameliorarea plantelor poate avea i dezavantaje, atunci cnd
specia receptoare pierde gene valoroase, situate pe cromozomul substituit i prin
ncorporarea cromozomului strin, pot fi incluse i gene nedorite pe lng cele valoroase i
desigur dorite.


141
TEST DE EVALUARE

1. Care sunt cauzele cunoscute pentru apariia aneuploidiei?
Rspuns:




2. Pentru ce studii pot fi utilizai nulisomicii cunoscui la gru?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Mutaiile asinaptice, apar la acele plante, la care:
a. repartizarea cromozomilor n gamei este anormal
b. apar gamei cu cromozomi n plus
c. apar gamei cu cromozomi n minus
Rezolvare: a, b, c.
De rezolvat:
2. Mutaii asinaptice pot fi ntlnite la speciile de plante:
a. Datura stramonium
b. Nicotiana tabacum
c. Lycopersicum esculentum
d. Pandanus fascicularis
Rezolvare:

6.2.2 Euploidia
Euploidia este starea genomului n care ntreg setul de cromozomi al celulelor somatice
(2n) se reduce la jumtate sau se mrete cu un multiplu al numrului de baz (X). Ea este
de dou feluri: monoploidia i poliploidia.
Indivizii afectai de euploidie reprezint organisme care posed un singur set de
baz de cromozomi (x) monoploizi sau organisme care posed mai mult dect dou seturi
de baz (2x, 3x, 4x...) poliploizi.
Cauzele cunoscute pentru apariia aneuploidiei sunt: nondisjuncia cromozomilor n
meioza 1 sau meioza 2; distribuia neechilibrat a cromozomilor n gamei la unele plante
poliploide; mutantele asinaptice; mitozele multipolare; lipsa de asociere a cromozomilor
(asinapsa); mozaicismul genetic.

142
Variaiile numerice ale cromozomilor n starea genomului de euploidie, este
prezentat n tabelul 5.

Tabel 5. Variaii numerice ale cromozomilor n starea genomului de euploidie.
Tipul de euploidie Formula
cromozomal
Dotarea cromozomic A,B,C,D,E,F,
reprezint cromozomi.
Monoploidie N (ABC)
Diploidie 2n (ABC) (ABC)
Triploidie 3x (ABC)(ABC)(ABC)
Tetraploidie 4x (ABC)(ABC)(ABC)(ABC)
4X=2n (ABC)(ABC)(DEF) (DEF)

6.2.2.1 Monoploidia
Plantele care conin n genom, numrul de baz de cromozomi (x), respectiv
jumtate din numrul normal de cromozomi ai celulelor somatice (2n), pentru specia din
care acestea fac parte, sunt monoploide iar fenomenul genetic se numete monoploidie.
Monoploidia corespunde cu starea haploid a organismelor diploide i este foarte rar n
natur, din cauza mutaiilor recesive letale ale alelelor care fac ca monoploizii s moar
nainte de a fi detectate aceste alele. n mod normal n stare diploid aceste alelele recesive
nu au probleme, pentru c sunt mascate n genom de alelele dominante. Cu consecven,
indivizii monoploizi sunt sterili. Monoploidia poate fi ntlnit la unele specii de fungi, n
anumite stagii i la plantele superioare. La plantele superioare, monoploidia, este aplicat
n biotehnologie pentru dezvoltarea rapid a plantelor din culturi de antere, care posed
genotipul fix de cromozomi. Sunt folosite antere ale unor descendeni F
1
crora li se aplic
tehnica culturilor de esuturi, pentru a se regenera noi plante.
Plantele obinute din aceste culturi, vor fi monoploide i vor fi utile pentru studiul geneticii
acestora, sau pot fi tratate chimic pentru dublarea numrului de cromozomi.
Se pune ntrebarea: Care este avantajul acestei tehnici?. Teoretic, avantajul tehnicii
este acela al fixrii mult mai rapide a unor recombinri produse, fa de tehnicile de
ameliorare convenionale. Prin tehnicile convenionale, amelioratorii, fac ncruciri, obin
generaia hibrid F
1
i apoi generaia hibrid F
2.
La speciile pomicole, selecia pentru
caracteristicile dorite se poate face n F
1
, respectiv dup 4 ani, iar la speciile anuale n F
2
,
respectiv dup 2 ani. Dar aceste selecii nu sunt homozigote i de aceea, la plantele anuale
143
vor fi testate mai multe generaii, pentru fiecare generaie fiind necesar cte un an, iar la
speciile pomicole, pentru fiecare generaie fiind necesari 4 ani, respectiv un ciclu de
reproducie. Prin urmare sunt necesare cteva generaii, pentru a fixa caracteristicile dorite
n liniile obinute.
Dup cum am mai spus, prin cultura de antere, gameii recombinani din F
1
sunt fixai
imediat ce cromozomii au fost dublai, prin utilizarea unor substane precum colchicina. De
ce sunt fixate? Pentru c dup dublarea cromozomilor, indivizii vor fi homozigoi pentru
fiecare gen a genomului. Aceasta face ca selecia liniilor cu caracteristici dorite s fie
semnificativ accelerat. Pentru a cunoate factorii limitativi ai culturii de antere, a fost
experimentat tehnica la multe specii de plante de cultur. Rezultate notabile, au fost
obinute la gru.
6.2.2.2 Poliploidia
Genomul care conine trei sau mai multe copii ale numrului haploid de
cromozomi, este poliploid, iar fenomenul genetic se numete poliploidie. Ca regul
general, poliploidia este bine tolerat n genomul plantelor i mai puin n cel animal.
nainte de a discuta n detaliu despre poliploidia la plante, (este bine s precizm c exist
dou clase), facem distincia ntre dou clase majore de poliploizii, acetia fiind
autopoliploizii i alopoliploizii.
Urmtoarea definiie se va baza pe descrierea cromozomilor. Vom considera dou specii A
i B.
Compoziia cromozomal a unei specii este:
A = a
1
+ a
2
+ a
3
. . . a
n
, unde a
1
, a
2
,... etc, reprezint cromozomii individuali i n este
numrul haploid de cromozomi.
Compoziia cromozomal a celei de-a doua specii, va fi:
B = b
1
+ b
2
+ b
3
. . . b
n

Autopoliploidul este un individ care are adiionat un set de cromozomi care este identic cu
specia parental. Astfel, compoziia cromozomal a unui autotriploid va fi AAA, a unui
autotetraploid va fi AAAA, comparativ cu a diploidului care este AA.
Alopoliploidul, este un individ care are un set adiional de cromozomi derivat de la o alt
specie, aceasta ntmplndu-se dup ce setul cromozomal s-a dublat, iar compoziia
cromozomal va fi AABB. Dac ambele specii au acelai numr de cromozomi, atunci
specia derivat ar putea fi un alotetraploid.
Un alotriploid ar putea s apar dac un gamet normal (n) este unit cu un gamet care nu a
suferit reducia i atunci este 2n. Atunci, zigotul poate fi 3n. Un triploid poate de asemenea
144
s se produc, prin mperecherea unui diploid (gamet =n) cu un tetraploid (gamet = 2n),
rezultnd un individ al crui gamet este 3n.
Dificultatea apare atunci cnd autotriplodul ncearc s se mperecheze, deoarece se vor
produce gamei dezechilibrai, din cauza problemelor create de asocierea setului de
cromozomi. Astfel, descendenii rezultai vor fi invariabil sterili.
Autotetraploizii apar ca urmare a dublrii setului cromozomal. Acetia pot s apar n
mod natural, prin dublarea setului, n timpul ciclului de via, sau artificial, prin aplicarea
temperaturilor ridicate, sau coborte, i a colchicinei. Pentru c setul adiional de
cromozomi exist, la autotetraploizi poate (dar nu obligatoriu n toate cazurile), s se
petreac o meioz normal.
n general, autotetraploizii au dimensiuni mai mari dect omologul lor diploid. Spre
exemplu, florile i fructele lor, sunt mai mari, iar cauza pare a fi mrimea celulelor i nu
numrul lor mai mare. Aceast mrime crescut, ofer o serie de avantaje comerciale. Sunt
n prezent o serie de triploizi larg cultivai i comercializai, care includ: cartofi, banane,
pepeni verzi, soiul de mr de plcint originar din nordul Americii, Winesap apples. Toi
aceti triploizi se pot propaga asexuat.
Speciile cu grad ridicat de poliploidie sunt rare n natur cu toate acestea, unele specii
cultivate reprezint serii ploide destul de mari, ex.: Genul Solanum, cu 2n = 24, 36, 48, 60,
72, 96, 108, 120, 132; Genul Rosa cu 2n = 14, 21, 28, 35, 42, 56; Genul Chrysantemumcu
2n = 18, 38, 45, 54, 70 i 90 de cromozomi.
Exemple de tetraploizi cultivai sunt: lucerna, plantele de cafea, ananasul, soiul de mr
McIntosh. Acetia au de asemenea fructe mari i sunt mai viguroi.
Compoziia cromozomal a alopoliploizilor deriv din dou specii diferite.
Organismele care prin hibridare interspecific urmat de dublarea pe cale natural
sau arificial a numrului de cromozomi a celor dou genomuri poart numele de
amfiploizi. n natur, se cunosc numeroase specii amfiploide, care reprezint strmoii cei
mai importani ai unor plante cultivate (Triticum aestivum2n = 42, Nicotiana tabacum 2n
= 48, Brassica napus 2n = 38 s.a.).
n funcie de modul cum iau natere, amfiploizii pot fi de mai multe tipuri:
amfiploidie genomic n cazul n care la hibridare particip genomuri diferite,
astfel c, n genomul rezultat cromozomii nu se pot mperechea datorit lipsei de
homologie i planta este steril;
145
amfiploidie segmental: la hibridare particip genomuri parial sau complet
omoloage ceea ce determin ca n meioz s se formeze tetravaleni, trivaleni i
univaleni, conducnd la un grad ridicat de sterilitate al hibrizilor.
Dac hibridul F
1
steril sufer o dublare a numrului de cromozomi (sub influena
colchicinei), el devine fertil, acest alotetraploid avnd comportamentul unei specii noi,
diferit fa de prini, avnd dou seturi de cromozomi care se mperecheaz corect n
meioz (cromozomii fiecrei specii i au omologii corespunztori n urma dublrii
seturilor).
Pentru ameliorare, amfiploizii reprezint forme deosebit de valoroase deoarece
manifest stabilitate n descenden i un grad ridicat de fertilitate datorit conjugrii
normale n meioz. De asemenea, datorit dublrii, seturilor de cromozomi, variabilitatea
fenotipic poate aprea doar prin mutaie.
Prin natura lui amfiploidul este un hibrid, deci manifest fenomenul heterozis prin
fixarea strii heterozigote.
Un experiment clasic care a fost iniiat n cercetarea alopoliploizilor a fost realizat de G.
Karpechenko n 1928. El cunotea numrul diploid de 18 cromozomi, ai verzei i ridichei
i a presupus c dac va ncrucia aceste dou specii, ar trebui s obin descendeni cu 18
cromozomi. Principalul lui obiectiv de ameliorare, a fost de a obine noi plante care s aib
rdcinile de ridiche i cpna de varz. Spre dezamgirea lui, toi descendenii apreau a
fi sterili. Aceasta ne duce la deducia c sterilitatea descendenilor se datoreaz faptului c
nu a fost posibil mperecherea ntre cele dou seturi de cromozomi i sinapsa i disjuncia
normal a cromozomilor nu este posibil. n aceast situaie, gameii au fost nefuncionali.
Surprinztor ns, dup un timp au nceput s rsar unele plante din seminele obinute.
Aceste plante au crescut i analiza cromozomilor a artat c numrul de cromozomi era 36,
ceea ce nsemna c aparent numrul de cromozomi se dublase. Prin urmare gameii
balansai au fost generai, pentru c fiecare cromozom a avut un partener cu care s-a
asociat.
Acest tip de situaie, unde poliploidul este format prin unirea unor seturi complete de
cromozomi de la dou specii de plante este denumit amfidiploidie iar specia este numit
amfidiploid (de notat experimentul Karpencenko a produs plante cu rdcinide varz i
partea superioar de ridiche).
Poliploidia are efecte dintre cele mai semnificative asupra ameliorrii plantelor
horticole, dintre care menionm:
146
creterea numrului de cromozomi n nucleu este nsoit de creterea n
dimensiune a celulelor, a esuturilor i respectiv, a organelor plantelor, uneori ducnd la
fenomene de gigantism. Aceasta justific folosirea poliploidiei n ameliorarea acelor specii
de la care se consum n principal, diferite organe vegetative (rdcini, tulpini, frunze,
fructe, etc.);
poliploidia determin sporirea rezistenei plantelor la factorii limitativi de mediu;
creterea numrului de cromozomi poate avea n unele cazuri efecte duntoare
prin mascarea unor gene recesive nefavorabile, care apar cu frecven redus, n funcie de
gradul poliploidiei;
poliploidia mpiedic sau ntrzie segregarea genetic motiv pentru care, este
indicat ca metod genetic de fixare a heterozisului.

TEST DE EVALUARE
1. Ce este euploidia?
Rspuns:



2. Ce este monoploidia?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Autopoliploidul este un individ ce are adiionat un set de cromozomi care:
a. este identic cu specia parental
b. are un set adiional de cromozomi derivat de la o alt specie
Rezolvare:a
De rezolvat:
2. Compoziia cromozomal a unui autotriploid este:
a. AAAA
b. AAA
c. AA
d. AABB
Rezolvare:
Euploidia este condiia genomului n care ntreg setul de cromozomi al celulelor
somatice (2n) se reduce la jumtate sau se mrete cu un multiplu al numrului de baz
(X). Ea este de dou feluri: monoploidia i poliploidia.

147
6.3 Inducerea i selectia autopoliploizilor prezint importan deosebit pentru speciile
alogame cu numr relativ mic de cromozomi. Cauza principal care limiteaz folosirea
autopoliploizilor la plantele autogame este sterilitatea pronunat a plantelor datorat unor
anomalii frecvente n meioz i dificultile pentru realizarea polenizrii, mai ales n cazul
obinerii triploizilor.
Pentru inducerea autopoliploizilor s-au folosit o serie de metode care sunt grupate n
funcie de natura agentului poliploidizant n:
metode biologice - utilizate mai ales la nceputul lucrrilor de inducere a
autopoliploizilor, cum ar fi: metoda poliembrioniei sau cea a acionrii cu insecte parazite
asupra vrfurilor de cretere.
metode fizice - cum ar fi cea a regeneraiei, a centrifugrii, a ocurilor termice sau
a iradierilor, dar care pe lng autopoliploidie induc i apariia de celule aneuploide.
metode chimice - sunt n prezent cele mai eficace i mai utilizate. Se folosesc
dou mari grupe de substane chimice pentru inducerea autopoliploizilor, i anume:
substane din grupa paradiclorbenzenului: monoclorbenzen, monobrombenzen, orto i meta
diclorbenzen i ali derivai halogenai ai benzenului i toluenului care acioneaz asupra
celulelor n diviziune, n telofaz asupra plasmodierezei i substane din grupa colchicinei:
izocolparadiclorbenzenului: monoclorbenzen, monobrombenzen, orto i meta diclorbenzen
i ali derivai halogenai ai benzenului i toluenului care acioneaz asupra celulelor n
diviziune, n telofaz asupra plasmodierezei i substane din grupa colchicinei:
izocolchicina, acenaftalenul, cloroformul, derivaii halogenai ai naftalenei.
Dup descoperirea efectului colchicinei (alcaloidul toxic extras din brndua de
toamn) asupra celulelor vegetale s-a intensificat foarte mult interesul pentru producerea
de indivizi autotetraploizi. Sub influena colchicinei are loc inhibarea formrii fusului de
diviziune ceea ce conduce la blocarea diviziunii regiunii centromerice a cromozomilor,
fr a afecta ns, la sfritul diviziunii clivajului longitudinal al acestora. n lipsa fusului
de diviziune cromozomii se disperseaz n toat celula, astfel nct, la sfritul diviziunii n
loc de dou celule fiice, rezult o singur celul de restituie cu numr dublu de
cromozomi. n continuare, aceast celul, n absena colchicinei, se va divide normal.
Prin tratarea esuturilor meristematice aparinnd diferitelor organe ale plantei cu
soluie de colchicin avnd concentraii cuprinse ntre 0,05 0,1% timp de 24 2 ore (n
funcie de concentraia utilizat) se constat o hipertrofiere i o umflare a vrfurilor de
cretere. Pentru a aprecia efectul colchicinei se determin prin metode directe (analize
citologice) pe baza numrului de metafaze poliploide, indicele de poliploidie (I
P
), care
148
trebuie s depeasc 60% pentru ca forma analizat s poat fi considerat poliploid sau
prin metode indirecte prin analize macroscopice i microscopice., aa cum reiese din fig.5,
n care sunt vzui cromozomii metafazici la Lilium turbinata, n stare diploid i
tetraploid.


Figura 5. Lilium turbinata 2n=30(diploid) i 2n=60(tetraploid).
(dup Ecaths.S3.amaznaws.com//457982126 VARIACIONES%20 NUMERICAS pdf)

n funcie de sistemul de reproducere al speciei la care s-a indus poliploidia, dup
obinerea primei descendene se aplic lucrri de selecie pedigree sau selecie individual
pe grupe i selecie individual intraclonal intens. Deoarece procentul de indivizi
corespunztori este redus se impune detectarea genotipurilor tetraploide care s prezinte o
meioz normal i deci, o fertilitate corespunztoare, precum i toate celelalte caracteristici
urmrite n procesul de ameliorare.

6.4 Inducerea i ameliorarea alopoliploizilor
Schematic obinerea unui alotetraploid se prezint astfel:

P: AA BB
(2n = 2x) (2n = 2x)
G: A B
F
1
: AB hibrid steril
dublarea numrului de cromozomi
AABB amfiploid (hibrid fertil)

Dac se continu procesul prin hibridarea amfidiploidului cu o a treia specie CC
poate rezulta n final un amfihexaploid AABBCC.
149
Pentru multe specii cultivate genele de rezisten sau de importan economic se
gsesc amplasate n genomurile speciilor slbatice, necultivate. Pentru transferul acestora
la speciile sau soiurile importante pentru producie se propune obinerea de indivizi care s
nglobeze n acelai genotip att caracterele de rezisten, ct i cele legate de
productivitate, calitate, etc. S-a constat deci, c aceti indivizi pot fi obtinui prin hibridare
interspecific sau intergeneric, deci obinerea de alopoliploizi. Aceasta presupune ntr-o
prim etap identificarea formelor ce vor fi utilizate pentru hibridri, forme ce trebuiesc
studiate n amnunt pentru evidenierea caracterelor utile procesului de ameliorare, precum
i a gradului de nrudire. Genitorii alei vor fi supui hibridrii urmat apoi, de inducerea
diploidizrii la hibridul F
1
(AB) prin tratarea cu colchicin sau ali ageni poliploidizani.
Indivizii amfiploizi obtinui (AABB) fiind fertili, vor asigura mai departe
descendena care va fi supus unui proces de selecie intens. Selecia are drept scop
identificarea acelor genotipuri amfiploide care prezint meioza normal i deci, sunt
capabile s asigure descendeni fertili i cu caracterele urmrite n procesul de ameliorare.
n cazul folosirii la ncruciare a unor specii ndeprtate pentru identificarea i
selecia formelor amfiploide se va avea n vedere efectuarea de observaii macroscopice i
microscopice care s confirme natura hibrid a amfiploidului i de asemenea, se va avea n
vedere identificarea hibrizilor F
1
fertili, acetia fiind o dovad concret a poliploidizrii
suferite.
Formele amfiploide F
1
, trebuie s fie recoltate i semnate individual pentru a obine
generaiile F
2
i respectiv F
3
asupra crora se vor efectua analize de amnunt n vederea
stabilirii structurii lor genetice i a valorii pentru ameliorare.
Dup analiza timp de dou - trei generaii a acestor forme amfiploide, dac i menin
constante caracteristicile pot fi folosite ca material iniial n lucrrile de ameliorare.
Astfel, liniile amfiploide pot fi:
a) supuse unor activiti sistematice de hibridare interliniar, urmat de selecii ale
descendenilor obinui n vederea detectrii unor linii homozigote, stabile i uniforme;
b) folosite ca genitori n lucrrile de ncruciare cu hibrizi F
1
ndeprtai, urmnd ca
descendenii s fie supui seleciei pentru identificarea genotipurilor valoroase;
c) folosite ca donori de gene utile pentru producie la soiurile cultivate valoroase, dar
deficiente pentru acestea. Descendenii obinui vor fi backcrossai timp de mai multe
generaii pentru a transfera doar genele ce determin caracterele dorite. Aceast utilizare
nltur caracterele nefavorabile ale amfiploidului, caractere care ar mpiedica utilizarea lui
ca atare, n producie.
150

REZUMATUL TEMEI NR. 6 (Capitol 2)

Fiecrei specii i este caracteristic un anumit numr fix de cromozomi, denumit i
numr de baz de cromozomi sau genom, care se noteaz cu X.
Numrul de cromozomi, care formeaz garnitura de cromozomi din celulele somatice
(2n), reprezint o nsuire specific relativ constant, deoarece pot aprea schimbri n
numrul de cromozomi, ca urmare a unor tulburri n procesul diviziunilor celulare sau a
ncrucirilor ndeprtate.
Aneuploidia, este o condiie genetic, unde unul sau mai muli cromozomi din setul
specific de cromozomi lipsete sau este prezent n mai mult dect numrul normal al
copiilor. Aneuploidia reprezint n fapt, o variaie n numrul de cromozomi, cu o
deosebit importan pentru evoluie i pentru ameliorarea plantelor, contribuind la
obinerea de noi surse de variabilitate. Aneuploidia poate avea cteva tipuri de manifestare
i anume: monosomia (2n-1), monosomia dubl (2n-1-1), nulisomia (2n-2), trisomia (2n+
1),tetrasomia (2n+2), tetrasomia dubl (2n+1+1).
Originea aneuploidiei i dezvoltarea aneuploizilor nu sunt cunoscute nc foarte
bine, dar se cunosc unele dintre cauzele apariiei ei i anume: nondisjuncia cromozomilor
n meioza 1 sau meioza 2, distribuia neechilibrat a cromozomilor n gamei la unele
plante poliploide, mutantele asinaptice, mitozele multipolare, lipsa de asociere a
cromozomilor (asinapsa), mozaicismul genetic.
Fenomenul oligosomiei respectiv al monosomiei i nulisomiei are rol n studiul
geneticii i ameliorrii plantelor cu privire la apartenena genelor la anumii cromozomi i
la nlocuirea unui cromozom de la un genotip deficient n anumite caractere importante
agronomic, cu cromozomul ce conine aceste gene, dar prezent ntrun alt genotip, aceasta
n corelaie cu studierea grupelor linkage i a metodelor moderne de genetic molecular .
Euploidia este starea genomului n care ntreg setul de cromozomi al celulelor somatice
(2n) se reduce la jumtate sau se mrete cu un multiplu al numrului de baz (X). Ea este
de dou feluri: monoploidia i poliploidia. Indivizii afectai de euploidie reprezint
organisme care posed un singur set de baz de cromozomi (x) monoploizi sau
organisme care posed mai mult dect dou seturi de baz (2x, 3x, 4x...) poliploizi.
Sunt urmtoarele tipuri de manifestare a euploidiei: monoploidia (n), diploidia(2n),
triploidia(3x), tetraploidia (4x i 4x=2n). Numrul de baz (x) de cromozomi reprezint
setul haploid al speciei ancestrale diploide (n = x).
151
Importana deosebit a indivizilor haploizi n lucrrile de ameliorare rezid din
faptul c i manifest constituia genetic integral n fenotip, ceea ce face posibil
efectuarea selectiei la acest nivel, eliminnd indivizii care manifest gene nefavorabile. De
asemenea, indivizii haploizi afectai de mutaie (prin tratamente cu ageni mutageni) vor
manifesta nc din prima generaie gena mutant, chiar dac aceasta este recesiv.
Poliploidia are efecte dintre cele mai semnificative asupra ameliorrii plantelor horticole,
dintre care menionm: ameliorarea acelor specii de la care se consum n principal,
diferite organe vegetative (rdcini, tulpini, frunze, fructe, etc.); sporirea rezistenei
plantelor la factorii limitativi de mediu; fixarea genetic a heterozisului.
Creterea numrului de cromozomi poate avea n unele cazuri efecte duntoare prin
mascarea unor gene recesive nefavorabile, care apar cu frecven redus, n funcie de
gradul poliploidiei.
Alopoliploidia reprezint ncruciarea ntre specii sau genuri diferite, urmat de
dublarea numrului de cromozomi. Organismele care prin hibridare interspecific urmat
de dublarea pe cale natural sau arificial a numrului de cromozomi a celor dou
genomuri poart numele de amfiploizi.
Pentru ameliorare, amfiploizii reprezint forme deosebit de valoroase deoarece
manifest fenomenul heterozis prin fixarea strii de heterozigoie, stabilitate n
descenden i un grad ridicat de fertilitate datorit conjugrii normale n meioz. De
asemenea, datorit dublrii, seturilor de cromozomi, variabilitatea fenotipic poate aprea
doar prin mutaie.

TEST RECAPITULATIV PENTRU TEMA NR. 6 (Capitol 2)

1. Uneori aneuploizii apar la plantele poliploide care n timpul meiozei realizeaz
asociaii multiple ale cromozomilor de:
a. trivaleni
b. tetravaleni
c. bivaleni
d. pentavaleni
Rezolvare:

2. Apariia asociaiilor multiple de cromozomi la poliploizi determin :
a. o distribuie neechilibrat a cromozomilor n gamei
152
b. o distribuie echilibrat a cromozomilor n gamei
Rezolvare:

3. E.R. Sears a reuit s creeze 21 de linii nulisomice la soiul de gru Chinese Spring,
stabilind:
a. rolul genetic al cromozomilor grului
b.rolul genetic al fiecrui cromozom al soiului Chinese spring
Rezolvare:

4. Nulisomicii cunoscui la gru pot fi utilizai pentru a desemna genele dominante
dintr-un cromozom, aceasta realizndu-se prin ncruciarea:
a. unei serii de linii nulisomice cu o linie homozigot recesiv pentru caracteristica studiat
b. unei serii de linii monosomice cu o linie homozigot recesiv pentru caracteristica
studiat
c. unei serii de linii nulisomice cu o linie recesiv pentru caracteristica studiat
Rezolvare:

5. Raportul de segregare a liniei n care se poate desemna gena dominant este:
a. 0 : 1, respectiv 0 dominat : 1 recesiv
b. 1 : 0, respectiv 1 dominant : 0 recesiv
Rezolvare:

6. Procentul de segregare de 17 frunze purpurii : 1 frunze albe al descendenilor
rezultai din ncruciarea plantelor cu frunze purpurii cu plante cu frunze albe a
speciei Euphorbia pulcherima (Poinsettia) este tipic pentru:
a. ncruciri ntre trisomici
b.ncrucuri ntre monodomici
c.ncruciri ntre tetrasomici
Rezolvare

7. Prin cultura de antere gameii recombinani din F
1
, sunt fixai imediat ce
cromozomii au fost dublai prin utilizarea unei substane precum colchicina, pentru
c:
153
a.dup dublarea cromozomilor indivizii dihaploidizai vor fi homozigoi pentru fiecare
gen a genomului
b.dup dedublarea cromozomilor indivizii devin heterozigoi
Rezolvare:
8. Liniile de plante amfiploide pot fi folosite:
a.n activiti de hibridare interlinear
b.ca genitori
c.ca donori de gene
d.ca soiuri noi
e.ca linii homozigote
Rezolvare:
Bibliografie selectiva
1. Ceapoiu N.,1980. Evoluia Speciilor. Evolution of Species, Romanian Academy
Publishing .House, Bucharest, 480 pp
2. Ceapoiu N., Negulescu F., 1983. Genetica i Ameliorarea Rezistenei Plantelor. Disease
Resistance Genetics and Improvement of Plants, Romanian Academy Publishing
House, Bucharest, 538 pp
3. Crciun T., Tomozei I., Coles N., Nasta A.,1978. Genetica. Genetics, Didactic and
Pedagogic Publishing House, Bucharest, 623 pp
4. Crciun T., 1981. Genetica Plantelor Horticole. Genetics of Horticultural Plants, Ceres
Publishing House, Bucharest, 537 pp
5. Crciun T., 1987. Geniul Genetic i Cultura Plantelor. Genetic Genius and Plant
Breeding, Ceres Publishing House, Bucharest, 265 pp
6. Christopher Cramer, 1999. Laboratory Technology for determining Ploidy in plants
hortech ashspublicationorg/content/914,594.fullpdf
7. Doc.RN Dr Jindrich Briza Csc.PiFJY CeskeBudejovice, 2010. Cytogenetika Lekce 7_GI
pdfIM
8. Kim E Sultan, M.J.Donag, 2008. Allopoliploid speciationin Persicaria (Poligonaceae)
insights from a low copynuclear region. Proceedings of the National Academy of
Sciences USA105:12370-12375
9. Ecaths.S3.amaznaws.com//457982126 VARIACIONES%20 NUMERICAS pdf
10. www.ndsu.edu/pubweb/~mcclean/plsc431/chromnumber/number7.htm -
11. http:www.agtr.gov.aninternet/publishing nsf/Content/weat.4/FILF/biologywheat.rtf

154
CAPITOLUL 3
GENETICA CARACTERISTICILOR CANTITATIVE I APLICAII N
AMELIORAREA PLANTELOR

Multe din caracteristicile agronomice i horticole sunt controlate de gene multiple i
atunci cnd se analizeaz motenirea lor ereditar, apar a fi distribuite fenotipic ntr-o serie
continu de clase.
Aceste tipuri ale fenotipului se definesc a fi caracteristici continue i nu pot fi
analizate n acelai mod ca i caracteristicile discontinue sau calitative.
Pentru c astfel de caracteristici continue dau valori cantitative, ele se refer adesea la
caracteristici cantitative i aria geneticii care studiaz modul lor de motenire este numit
genetica caracteristicilor cantitative, iar ereditatea este denumit ereditatea cantitativ sau
ereditatea genelor (factorilor) multiple. Mai mult, locii care controleaz aceste
caracteristici se numesc loci ai caracteristicilor cantitative sau QTL.
Majoritatea dintre cele mai importante caracteristici ale organismului, fie ale
plantelor, fie ale animalelor, au o ereditate cantitativ. Aa sunt: cantitatea produciei,
greutatea animalului, cantitatea de grsime a crnii, nlimea pomului, limea coroanei
pomului, diametrul trunchiului pomului, greutatea fructului, nlimea fructului, diametrul
fructului. Multe dintre fenotipurile umane cum este IQ-ul, abilitatea de a nva, presiunea
sngelui, sunt caracteristici cantitative.
Multe dintre cercetrile cu privire la modul n care se motenesc aceste caracteristici
au fost realizate de genetitii din agricultur, ceea ce a contribuit la atingerea unor
obiective n ameliorarea plantelor i a animalelor.
mbuntirea caracteristicilor cantitative a fost un scop important pentru multe
programe de ameliorare a plantelor, din foarte multe ri ale lumii, incluznd i Romnia.
Amelioratorii plantelor i genetitii specialiti n genetic molecular i unesc astzi
eforturile pentru a dezvolta teoria i tehnicile pentru aplicarea geneticii moleculare la
identificarea QTLs.
Genetica cantitativ clasic definete caracteristicile cantitative n termeni ai
varianei. Variana fenotipic a fost mprit n variana genetic i variana de
mediu.Variana genetic poate fi apoi mprit n efecte aditive, de dominan i
epistatice. Aceste informaii au folosit pentru aprecierea heritabilitii caracteristicii i
prevederea rspunsului la selecie, pentru caracteristica respectiv. A fost de asemenea
155
posibil s se estimeze numrul minim de gene care controleaz caracteristica cantitativ
cercetat.
n genetica molecular, prin cartarea markerilor linkai cu QTL se identific
regiunile genomului care pot conine gene implicate n expresarea unor caracteristici
cantitative.
Multe analize moleculare i statistice ale caracteristicilor cantitative pot fi condiia
unor noi instrumente de selecie pentru amelioratori, dar i ca puncte tari pentru clonarea
genelor cunoscute i a cunoaterii markerilor moleculari.

TEMA NR. 1 (Capitol3)
ANALIZE CONVENIONALE I MOLECULARE A EREDITII
CARACTERISTICILOR POLIGENICE LA PLANTE

Uniti de nvare
Despre studiul ereditii caracteristicilor cantitative prin metode convenionale i
neconvenionale
Markerii care asist selecia pentru ameliorarea caracteristicilor cantitative ale
plantelor
Cum se construiete o hart genetic
Distana genetic i funciile cartrii markerilor genetici
Analize QTL
Obiectivele temei
Cunoaterea i aprofundarea noiunilor folosite n studiul ereditii
caracteristicilor cantitative ale plantelor prin metode convenionale i neconvenionale
Trecerea n revist a principalelor particulariti ale caracteristicilor
cantitative la plante, comparativ cu caracteristicile calitative
nelegerea unor mecanisme genetice ale ereditii caracteristicilor cantitative
Acumularea unor cunotine cu privire la ceea ce sunt markerii genetici, care
este importana lor n asistarea seleciei plantelor i care sunt metodele folosite n prezent
pentru detectarea markerilor genetici
nelegerea noiunii de hart genetic i cunoaterea importanei utilizrii ei n
identificarea locaiei cromozomale care conine genele cercetate, markerii genetici i
QTLs, asociai cu caracteristici cantitative de interes ale plantelor.
156
Timpul alocat temei: 4ore
Bibliografie recomandat:
1.Viorica Blan , 2008, Genetica Plantelor, Editura ALPHA MDN, ISBN-978-973-139
2. www.knoledgebank.irri.org/.../ Bertrand Chao Young Collard. Lesson on Marker
assisted breeding.2011

1.1. Ereditatea caracteristicilor cantitative
Mare parte dintre caracteristicile agronomice, cum sunt producia, calitatea fructelor,
calitatea seminelor i unele forme ale rezistenei la boli, sunt controlate de multiple gene,
care sunt cunoscute drept caracteristici cantitative sau poligenice, multigenice,
polifactoriale sau complexe.
Ereditatea sau motenirea poligenic este cunoscut i sub denumirea de ereditate sau
motenire cantitativ sau multifactorial.
Motenirea unei caracteristici fenotipice cantitative, sau poligenice poate fi rezultatul
interaciunii a dou sau mai multor gene i a interaciunii acestora cu mediul nconjurtor.
Spre deosebire de caracteristicile monogenice sau calitative, caracteristicile poligenice
nu urmresc tiparele Legilor lui Mendel.
Caracteristicile fenotipice cantitative variaz continuu fiind descrise grafic printr-o
curb clopot, denumit curba Gauss.
Motenirea poligenic nu va urma acelai model ca o monohibridului simplu sau dublu,
sau a dihibridului. Motenirea poligenic poate fi explicat prin aplicarea Legilor lui
Mendel la muli loci, rezultnd o caracteristic care este distribuit normal.
n cazul n care n este numrul de loci implicat, atunci coeficienii de expansiune a
binomului (a + b) 2n vor da frecvena de distribuie a tuturor n recombinaii alelice.
Pentru un n suficient de mare, aceast distribuie binomial va ncepe s semene cu o
distribuie normal.
Pentru a avea o imagine a distribuiei fenotipice sub forma grafic a curbei Gauss, vom
lua ca exemplu distribuia caracteristicii fenotipice producia de boabe de orez a
indivizilor din dou linii de orez AA i aa folosite n ameliorare (fig.1).

157

Figura 1. Distribuia fenotipic a caracteristicii producia de boabe de orez la liniile
AA i aa. Dup Gary Atlin,Canada , International Rice Research Institute
(http:/www.knowledgy et bank.irri.org/rice breeding )

Media produciei liniei AA este 3100 s.e.m
Media produciei liniei aa este 2900 s.e.m
Genetica cantitativ clasic definete caracteristicile cantitative n termeni ai
varianei. Variana fenotipic a fost mprit n variana genetic i variana de mediu.
Variana genetic poate fi apoi mprit n efecte aditive, de dominan i epistatice.
Aceste informaii au folosit pentru aprecierea heritabilitii caracteristicii i prevederea
rspunsului caracteristicii la selecie. A fost de asemenea posibil s se estimeze numrul
minim de gene care controleaz aceast caracteristic.
Spre exemplu, pe baza experimentelor efectuate de Viorica Blan i colaboratorii la
cais, n Romnia, s-a determinat variana total, variana de mediu, variana genetic i
heritabilitatea caracteristicilor cantitative: nlimea pomului, nlimea coroanei, diametrul
mare al coroanei i diametrul mic al coroanei. Scopul experimentelor a fost dezvoltarea
teoretic i practic a unor metode de selecie timpurie, n faza juvenil a pomilor de cais
cu talie mic, dar purttori ai genelor productivitii, cu mult timp nainte de plantarea n
parcele pentru testarea productivitii i calitii fructelor (Blan V., 1991, 1999). n
exteriorizarea fenotipic a caracteristicii nlimea pomului, variana genetic V
G
a
reprezentat ntre 43% i 49%, iar variana de mediuV
E
ntre 51% i 57%, cu o pondere ceva
mai mare, din variana total V
P.
Heritabilitatea n sens larg h
2
, a caracteristicii nlimea pomului a fost ntre 0,43 i
0,49, reflectnd proporia n care descendenii hibrizi motenesc talia genitorilor dup cum
reiese din tabelul de mai jos.


158

Heritabilitatea caracteristicii nlimea pomului la cais
Familia hibrid
Nr.
descen
deni
V
P
M V
E
m/% V
G
m/% H
2
ComandorxExcelsior 15 1.91 1,01/53 0,91/47 0,48
ExcelsiorxComandor 18 2,05 1,06/52 0,99/48 0,48
Comandor xDacia 22 3,43 1,73/51 1,70/49 0,49
Comandorx77.3.52BV 12 1,66 0,94/57 0,72/43 0,43
ExcelsiorxGoldrich 50 1,91 1,0/53 0,91/47 0,48

Evidenierea n proporie de 30-50% a descendenilor hibrizi cu talie scund,
meninerea acestei caracteristici pe msur ce au parcurs ciclul ontogenetic de
cretere i dezvoltare (anul II-VIII), valoarea destul de ridicat a varianei
geneticeV
G
, a nlesnit alegerea dup fenotip, a elitelor de cais cu talie mai mic dect
a prinilor.
Variana genetic V
G
pentru nlimea coroanei, diametrul mare al coroanei i
diametrul mic al coroanei, a fost mai mic dect variana de mediuV
E,
n toate familiile
hibride studiate, reprezentnd minim 28% i maxim 48% din variana total.
Valoarea de ameliorare a caracteristicilor nlimea coroanei, diametrul mare al
coroanei i diametrul mic al coroanei, poate fi prevzut n proporie de 21-47%,
heritabilitatea n sens larg h
2
fiind cuprins ntre 0,27-0,47 pentru nlimea coroanei, 0,21-
0,40 pentru diametrul mare al coroanei i 0,25-0,33 pentru diametrul mic al coroanei.
n genetica molecular, cartarea markerilor linkai cu QTLs identific regiunile
genomului care pot conine gene implicate n expresarea unor caracteristici cantitative. Dar
cum poate fi codificat funcia acestor gene? Pentru a rspunde la aceast ntrebare trebuie
s considerm producia ca i caracteristic. Ce tip de gene calitative (gene, motenite ca
simpli factori genetici) pot fi implicai n expresarea produciei? Prima posibilitate pentru
aprecierea capacitii normale de producie este meioza. De aceea, orice gen implicat n
formarea gametului poate fi considerat QTL.
Unele gene implicate n biosinteza proteinelor sau a carbohidrailor pot afecta n final
producia i pot fi considerate QTLs.
159
Dup cum am spus mai sus, fiecare marker asociat cu QTL, este evaluat pentru o
parte a varianei genetice.
O important ntrebare care se pune acum este dac pot fi cartate genele cunoscute ca
i cum ar fi QTLs.
Beavis i colab. (1991, TAG 83:141-145), au analizat patru populaii de porumb i au
gsit markeri moleculari linkai cu nlimea plantelor. Nici un marker nu a fost ns
consistent asociat ca un QTL cu nlimea plantei, n cele patru populaii.
Autorii au fost capabili s demonstreze c numrul QTLs identificat la cartarea
markerilor moleculari n regiunile care conin gene cunoscute ar avea efecte calitative
asupra nlimii plantelor. Spre exemplu, n cromozomul 9 gena d3 este aezat la 10 cM
de QTLs pentru nlimea plantelor.
ntrebarea care se ridic acum, este dac i gena d3 este QTLs. Poate fi posibil pentru
c ce este actual msurat, este markerul linkat cu aceast gen.
Analizele statistice ale caracteristicilor cantitative sunt condiia furnizrii de
informaii valoroase pentru amelioratorii de plante. Multe analize moleculare i statistice
ale caracteristicilor cantitative pot fi condiia unor noi instrumente de selecie pentru
amelioratori, dar pot fi considerate i ca puncte tari pentru clonarea unor gene. Aceste
obiective nu vor putea fi ns realizate fr markeri moleculari.

TEST DE EVALUARE

1. Care sunt interaciunile care influeneaz motenirea unor caracteristici fenotipice
cantitative sau poligenice?
Rspuns:



2. Cum variaz caracteristicile fenotipice cantitative?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Variana genetic include urmtoarele efecte:
a. aditive
Motenirea unei caracteristici fenotipice cantitative, sau poligenice poate fi rezultatul
interaciunii a dou sau a mai multor gene i a interaciunii acestora cu mediul
nconjurtor.

160
b. de dominan
c. epistatice
d. aditive, de dominan i epistatice
Rezolvare: e
De rezolvat:
2. n genetica molecular, cartarea markerilor linkai cu QTLs identific:
a. regiunile genomului care pot conine gene implicate n expresarea unor caracteristici
cantitative
b. regiunile genomului care pot conine gene implicate n expresarea unor caracteristici
calitative
Rezolvare:

1.2 Cartarea locilor caracteristicilor cantitative (QTL) i markeri care asist selecia
pentru ameliorarea produciei plantelor
mbuntirea caracteristicilor cantitative a fost un scop important pentru multe
programe de ameliorare a plantelor. Amelioratorii au ncruciat doi prini i au aplicat
selecia pn la generaia avansat compus din cele mai bune fenotipuri pentru
caracteristicile cantitative dorite. Aceste linii vor fi angajate ntr-o serie de teste de
replicare i vor fi evaluate n scopul pstrrii celor mai bune linii ale cultivarului. Se
presupune c aceste linii care s-au reprodus i s-au comportat cel mai bine n aceste teste,
au n genom cea mai favorabil combinaie de alele pentru expresarea acestor
caracteristici.
Dar, realizarea programelor de ameliorare bazate doar pe metode convenionale, cer
totui mult efort, pmnt i bani. De aceea amelioratorii plantelor sunt interesai s
identifice cele mai promitoare linii ct mai timpuriu cu putin, astfel ca s conin alele
QTLs, care s contribuie la mbuntirea caracteristicilor prin selecie i noile soiuri s
ajung ct mai curnd pe pia. Amelioratorii plantelor i genetitii, specialiti n biologie
molecular, protecia plantelor i biochimitii i unesc astzi eforturile, pentru a dezvolta
teoria i tehnicile de genetic molecular n scopul identificrii QTLs.
Regiunile din genomuri care conin gene asociate cu caracteristici cantitative particulare
sunt cunoscute sub denumirea de loci ai caracteristicilor cantitative (QTLs). Identificarea
QTLs care este bazat numai pe evaluarea convenional fenotipic, nu este posibil. O
major oportunitate pentru selecia QTLs a fost creat prin dezvoltarea tehnicilor pentru
evidenierea markerilor ADN sau moleculari dup anul 1980.
161
Una dintre cele mai importante realizri a folosirii markerilor ADN n agricultur, a
fost construcia hrilor linkage pentru diferite specii de plante de cultur. Hrile linkage
sunt folosite pentru identificarea regiunilor cromozomale care conin gene ce controleaz
caracteristici monogenice i caracteristici cantitative folosind analize QTLs (Mohanetal,
1997). Procesul construirii hrii genetice i al analizelor QTL, pentru a identifica regiunile
din genom asociate cu caracteristici cantitative, este cunoscut sub denumirea de cartare
QTL, sau cartare genetic, a genelor sau a genomului (McCouch & Doerge, 1995; Mohan
et al., 1997; Paterson, 1996 a, b).
Markerii ADN care sunt strns linkai cu gene importante pentru caracteristicile
dorite, numite gene marker, pot fi folosite ca instrumente moleculare pentru markerii care
asist selecia (MAS), n ameliorarea plantelor (Ribaut & Hoisington, 1998). MAS, implic
prezena/absena markerilor ca suplinitori, pentru a asista n selecia fenotipic, ceea ce o
face mult mai eficient, mai sigur i cu costuri comparabile cu multe dintre metodologiile
convenionale aplicate n ameliorarea plantelor.
Markerii ADN sunt larg acceptai ca instrumente valoroase pentru mbuntirea
produciei la orez (Mackilletal, 1999; McCouch & Doerge 1995; Sanfordetal, 2001), la
gru (Eaglesetal, 2001; Koebner & Summers, 2003), la porumb (Stuberetal,1999;
Tuberosaeta, 2003), la orz (Thomas, 2003; Williams, 2003), la cartof i alte plante cu
tuberculi (Barone, 2004; Fregene et al., 2001; Gebhardt& Valkonen, 2001), la legume cu
psti (Kelly et al., 2003; Muehlbauer et al., 1994; Svetleva et al., 2003; Weeden et al.,
1994), plante cu semine pentru ulei (Snowdon & Friedt, 2004), specii de plante din
horticultur, (Baird et al., 1996, 1997; Mehlenbacher, 1995) i specii pentru puni i
nutreuri (Jahufer et al., 2002).
1.2.1 Markeri genetici care asist selecia plantelor
1.2.1.1 Ce sunt markerii genetici?
Markerii genetici reprezint diferenele genetice ntre organisme individuale sau
ntre specii. Markerii genetici nu reprezint ele nsele gene int, dar joac rolul de
indicatori sau de marcaje. Markerii genetici care sunt localizai n proxima apropiere a
genelor (strns linkai) care fac obiectul studiului, se vor numi gene marker sau
indicatoare. Aceti markeri, nu exprim fenotipic caracteristicile studiate, ei doar fiind
linkai cu genele care controleaz caracteristicile respective. Fiecare marker genetic ocup
o poziie genomic specific n cromozomi (asemntor genelor), denumite loci (singular
locus). Sunt trei tipuri majore de markeri genetici:
162
1. Markeri morfologici (sau clasici, sau vizibili), care sunt ei nii caracteristici sau
nsuiri fenotipice.
2. Markeri biochimici, care includ variante alelice ale enzimelor, numite izozime.
3. Markeri ADN sau moleculari, care relev situri ale variaiei ADN (Jones et al., 1997;
Winter &Kahl, 1995)
Markerii morfologici sunt n mod curent caracteristici fenotipice vizibile, din care
exemplificm: culoarea florilor, forma seminei, habitusul plantei, pigmentaia fructului.
Markerii izozimici sunt diferite enzime detectate prin electroforez, iar benzile izozimice
sunt colorate specific (B.C.Y. Collard, M.Z.Z. Jahufer, JB Brouwer, E.C.K. Pang, 2005).
Dei au dezavantajul de a fi limitai ca numr i sunt influenai de factorii de mediu i ai
stadiilor dezvoltrii plantelor, markerii morfologici i biochimici sunt utili amelioratorilor
de plante (Eagles et al, 2001; Weeden et al, 1994). Markerii ADN, sunt cei mai larg
folosii, aceasta datorndu-se n principal abundenei lor. Ei provin din diferite clase ale
mutaiilor ADN, cum sunt: mutaiile de substituie, inseriile sau deleiile, erorile n
replicare ale ADN ( Paterson, 1996). Markerii sunt selectiv neutri, pentru c n mod curent
nu sunt localizai n regiuni codificate ale ADN. Markerii ADN, nu sunt afectai de
condiiile de mediu i nici de cei de cretere i dezvoltare (Bairdetal,1997; Henry, 1997;
Jahufer, 2003; Weising et.al., 1995). Dup metodele de detecie, markerii ADN, se pot
divide n trei clase, (Guptael, 1999; Jones et al, 1997; Winter& Kahl, 1995, citai de
M.Z.Z. Jahufer, J.B. Brouwer & E.C.K. Pang, 2005) astfel:
1. Hibridizare
2. PCR
3. Secvenializarea ADN
Markerii ADN, pot s evidenieze diferene genetice, care pot fi vizualizate prin
gel-electroforez sau prin colorare cu etidium bromid sau cu argint, sau detectai radioactiv
sau colorimetric. Markerii care relev diferene ntre indivizii aceleiai specii sau din specii
diferite, se numesc markeri polimorfici, (fig. 2 i 3) n timp ce markerii care nu
discrimineaz dup genotip se numesc monomorfici. n fig.2, este reprezentat
Diagrama.dup BCY Collard, M.Z.Z. Jahufer J.B. Brouwer& E.C.K. Pang 2005. Aceast
diagram reprezint n mod ipotetic markeri ADN ai genotipurilor A,B,C i D. Markerii
polimorfici, sunt indicai prin linii.
Explicaia digramei:
a) Exemplu al markerilor SSR: Markerii polimorfici relev mrimea diferenelor pentru
alelele markeri a patru genotipuri i reprezint un singur locus genetic.
163
b) Exemple ale markerilor generai prin tehnica RAPD. De notat c aceti markeri pot
exista sau nu.



Figura 2. Diagrama ipotetic a markerilor genotipurilor A,B,C,D.
(http://www.mendely.com/inter; http://wwwspringelink.com)











Figura 3. Markeri polimorfici la dou linii de orez
(http:www.training.irri.org;www.knoledgebank

Mrimea acestor markeri este estimat prin greutatea molecular (MW/GM) a
perechilor de baze (bp) care i formeaz. Pentru ambii markeri polimorfici sunt doar dou
alele marker diferite. Markerii polimorfici pot fi de asemenea descrii ca i codominani
sau dominani. Markerii codominani indic diferene n mrime, n timp ce markerii
dominani sunt prezeni sau abseni. Putem spune c diferitele forme ale markerilor ADN
164
(diferite mrimi ale benzilor de gel), sunt numite markeri alele. Markerii codominani pot
avea diferite alele, n timp ce markerii dominani au doar dou alele.


TEST DE EVALUARE

1. Ce reprezint markerii genetici?
Rspuns:


2. Cum se numesc markerii care relev diferene ntre indivizii aceleiai specii sau din
specii diferite?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Markerii ADN provin din diferite clase ale mutaiilor ADN, cum sunt:
a. mutaiile de substituie
b. inseriile sau deleiile
c. erorile n replicare ale ADN
d. nereplicarea ADN
Rezolvare: a,b,c
De rezolvat:
2. Markerii polimorfici pot fi:
a. codominani
b. dominani
c. recesivi
Rezolvare:

1.2.1.2 Construcia hrii genetice
a.Ce este harta genetic?
Harta genetic ne poare duce cu gndul la harta rutier a cromozomilor care se
realizeaz pe baza recombinrilor diferiilor prini (Paterson, 1996). Harta genetic indic
poziia i distana genetic relativ ntre markeri de-a lungul cromozomului, care este
Markerii genetici repezint diferenele genetice ntre organisme individuale sau ntre
specii
165
asemntoare cu semnele rutiere sau pietrele kilometrice de pe traseu (B.C.Y. Collard,
M.Z.Z. Jahufer, J.B. Brouwer& E.C.K. Pang, 2005). Pe baza informaiilor din literatura de
specialitate vom defini harta genetic ca fiind acea nscriere grafic a rezultatelor cartrii,
care se realizeaz pe baza recombinrilor diferiilor prini.
Cea mai important utilizare a hrilor linkage, este aceea de a identifica locaia
cromozomal care conine genele cercetate i markeri QTLs asociate cu caracteristici de
interes. Aceste hri genetice sau QTLs, au la baz principiul c genele i markerii segreg,
prin recombinrile cromozomului, sau crossingovere, n timpul meiozei, astfel c pot fi
depistate prin analizarea descendenilor. Genele sau markerii care sunt strns linkai se vor
transmite mpreun.

TEST DE EVALUARE
1. Ce este harta genetic?
Rspuns:


2. Ce indic harta genetic?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Hrile genetice sau QTLs, au la baz principiul:
a. genele i markerii segreg, prin recombinrile cromozomului, sau crossingovere, n
timpul meiozei
b. genele segreg prin recombinrile cromozomului n timpul mitozei
c. genele i markerii segreg
Rezolvare: a
De rezolvat:
2. Genele i markerii de interes pot fi depistate prin:
a. analiza prinilor
b. analiza descendenilor
Rezolvare:


Harta genetic reprezint nscrierea grafic a rezultatelor cartrii, care se realizeaz pe
baza recombinrilor diferiilor prini

166
b. Comparaii ntre markerii (A) codominani i (B) dominani.
Markerii codominani pot discrimina n homozigoi i heterozigoi, n timp ce
markerii dominani nu pot discrimina. Genotiparea a doi loci marker (A i B) este
reprezentat n gel-diagrama din figura 4, att pentru prini ct i pentru descendeni. n
populaia segregant exist un amestec al genotipurilor parentale i recombinani.
Frecvena genotipurilor recombinante pot fi utilizate pentru a calcula fracia de
recombinare, care poate fi folosit pentru a deduce distana genetic dintre markeri. Prin
analiza segregrii markerilor, poate fi determinat distana relativ dintre markeri,
frecvena recombinanilor dintre doi markeri, ct de apropiai sunt n cromozom
(conversia, frecvena ridicat a recombinanilor ntre markeri, urmtoarea distan la care
vor fi situai n cromozom).








Figura 4.Gel-diagrama genotiprii markerilor A i B la prinii P1, P2 i descendenii
F1; http://www.mendely.com/inter ; http://wwwspringelink.com

Markerii care au frecvena recombinrii de 50%, sunt acceptai ca nelinkai i
aezai la distan mare n acelai cromozom sau n cromozomi diferii.
Funciunile hrii genetice sunt acelea de a converti fraciile recombinrilor, sau raporturile
de segregare, n uniti de hart, care dup cum ne este cunoscut se numesc centi-Morgani
(cM). Harta linkage se construiete pe baza rezultatelor a multor analize ale markerilor
segregani. n construcia hrii se parcurg trei pai importani i anume: 1). realizarea
hrii populaiilor, 2). identificarea polimorfismului i 3). analize ale markerilor moleculari.
1). Realizarea hrii populaiilor
Pentru construcia hrii linkage, sunt necesare populaii de plante segregante,
rezultate prin reproducere sexuat. Prinii selectai pentru harta populaiilor de plante, vor
diferi prin una sau mai multe caracteristici de interes. Pentru acurateea rezultatelor,
numrul de indivizi ntr-o populaie trebuie s fie de 50 250.
167
Dac harta va fi folosit pentru studiul QTLs, ceea ce se ntmpl n mod curent,
atunci, trebuie adunate foarte multe date cu privire la caracteristicile fenotipice, nainte de
realizarea hrii QTLs.
n general la speciile de plante care rezult prin autopolenizare, harta se construiete
folosind ambii prini homozigoi. Multe dintre plantele folosite n polenizri, sunt
poliploide, ceea ce trebuie luat n seam, deoarece multe dintre ele nu suport
autopolenizarea sau ncruciarea n cadrul familei (inbreed), ceea ce complic construirea
hrii.
Pentru harta populaiilor, se folosesc plante rezultate din ncrucirile ntre prini
heterozigoi sau haploizi, sau homozigoi (Wu et al., 1992). Spre exemplu, din ncrucirile
fcute n cadrul speciilor de trifoi alb (Trifolium repens L.) i reigras (Lolium perene L.),
au rezultat descendeni F1, pentru care a fost realizat cu succes, harta populaiilor.
Populaiile respective au fost obinute prin ncruciarea perechilor de plante heterozigote
distincte prin diferite i importante caracteristici, asociate cu persistena sau viabilitatea
plantelor (durata culturii) i produca de semine (Barrett et al., 2004; Forster et al., 2000).
Mai multe populaii din specii diferite de plante, pot fi folosite pentru cartare, fiecare dintre
tipurile de populaii avnd i avantaje i dezavantaje (McCouch & Doerge, 1995; Paterson,
1996a) (fig. 5). Populaiile F2 descendente din hibrizii F1 i populaiile backross (BC),
descinse din ncruciarea unui hibrid F1 cu unul dintre prini sunt tipuri simplu de cartat i
cer un timp scurt pentru aceasta. ncrucirile n cadrul familiilor F2, (inbreeding), permit
construcia hrilor liniilor recombinanilor inbreed (RI), care constau dintr-o serie de linii
homozigote, fiecare coninnd o unic combinaie a secvenelor cromozomale provenit de
la prinii originali. Exist ns i un dezavantaj al folosirii acestei metode, care este timpul
ndelungat pentru obinerea recombinanilor RI, deoarece sunt necesare ase i chiar opt
generaii. Dublu haploizii (DH), pot fi produi prin regenerarea plantelor haploide la care
au fost dublai cromozomii din grunciorii de polen. De reinut, c producerea populaiilor
de dublu haploizi (DH), este posibil doar la speciile pretabile pentru culturi de esuturi
(exemplu: cereale (orezul, orzul, grul), diferite specii horticole). Majorul avantaj al
populaiilor RI i DH, este acela c se produc homozigoi care se pot multiplica i
reproduce fr a surveni modificri genetice, aceasta fcnd posibil replicarea indivizilor
din populaiile respective.



168
TEST DE EVALUARE

1. Cum pot discrimina markerii codominani i dominani?


2. Pentru ce folosete cunoaterea frecvenei genotipurilor recombinante?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Sunt acceptai ca nelinkai :
a. markerii care au frecvena recombinrii de 50%
b. markerii care sunt aezai n cromozomi diferii
c. markerii care au frecvena recombinrii de 50% i sunt aezai n cromozomi diferii sau
n acelai cromozom la distan mare.
Rezolvare: c

De rezolvat:
2. Pentru construcia hrii linkage, sunt necesare populaii de plante segregante
a. rezultate prin reproducere sexuat
b. rezultate prin reproducere vegetativ
c. compuse din 50-250 de idivizi rezultai prin reproducere sexuat
Rezolvare:











Markerii codominani pot discrimina n homozigoi i heterozigoi, n timp ce
markerii dominani nu pot discrimina.
169












Figura 5 Diagrama principalelor tipuri de cartare a populaiilor pentru specii
autopolenizate , experimente din diferite locaii i ani.4 http://www.mendely.com/inter
;http://wwwspringelink.com

Diagrama indic crossingover, sau procese genetice care se petrec n timpul
meiozei. Gameii care se produc dup meioz sunt fie parentali (P), fie recombinani (R).
Distana mic dintre doi markeri reduce ansa recombinrilor care se pot petrece ntre doi
markeri. Prin urmare, recombinrile ntre markerii G i H, se vor petrece cu mai mare
frecven, dect recombinrile ntre E i F. Aceasta se poate observa n harta populaiei
segregante. Prin analizarea tuturor recombinanilor din populaii, se poate determina dac
markerii E i F, sunt mai apropiai n comparaie cu G i H (Mohan et al., 1997).
Putem spune c populaiile RI i DH, reprezint resurse permanente pentru cartarea QTL.
Mai mult, semine sau material biologic din indivizii liniilor RI sau DH, pot fi transferate
ntre diferite laboratoare pentru analize linkage suplimentare i adugarea de noi markeri la
harta existent, ceea ce asigur c toi colaboratorii au examinat un material biologic
identic.
2). Identificarea polimorfismului
Al doilea pas n construcia hrii genetice este identificarea markerilor ADN,
(markeri polimorfici) care scot n eviden diferene ntre prini. n general, speciile care
se reproduc prin polenizare ncruciat, au un nivel mai ridicat al polimorfismului ADN, n
comparaie cu speciile care suport hibridarea apropiat, n cadrul familiei. Pentru cartarea
speciilor inbreed, este necesar selecia prinilor care au un grad de rudenie ndeprtat.
170
n multe cazuri, prinii care sunt nzestrai cu un polimorfism corespunztor, sunt selectai
n baza nivelului diversitii diferenelor ntre prini. (Anderson et al., 1993; Collard et al.,
2003; Joshi & Nguyen, 1993; Yu & Nguyen, 1994).
Alegerea markerilor ADN folosii pentru cartare pot depinde de disponibilitatea markerilor
de a fi caracterizai sau de specificitatea markerilor particulari pentru speciile studiate.

Figura 6. Exemple de cernere (selecie) a markerilor genetici
(http://www.mendely.com/inter; http://wwwspringelink.com)

Odat ce markerii au fost identificai, ei trebuie cernui (selectai), de la un capt la cellalt
al ntregii populaii cartate, incluznd prinii i F1, dac este posibil. Aceast operaiune
este cunoscut ca genotipare a markerilor populaiei. De aceea, ADN trebuie extras din
fiecare individ al populaiei de la care sunt alei markerii moleculari. Exemple de markeri
ADN cernui (selectai) sunt prezentate n figura 6.
Raportul de segregare ateptat este prezentat n tabelul 1 i figura 7.

Tabel 1. Raportul de segregare ateptat pentru markerii codominani i dominani n
diferite tipuri de populaii
Tipul populaiei Markeri codominani Markeri dominani
F2 1:2:1(AA,Aa,aa) 3:1(B_, bb)
Backross 1:1(Cc:cc) 1:1(Dd:dd)
Recombinai n cadrul familiei(RI),
sau dublu haploizi(DH)
1:1(EE:ee) 1:1(FF:ff)

171
n figura 7, gel fotografia ipotetic, reprezint segregarea markerilor codominani (partea
stng), i a markerilor dominani (partea dreapt), pentru cartarea tipic a populaiilor.
Markerii codominani, indic genotipul complet al plantelor. De notat c markerii
dominani nu pot diferenia ntre genotipul heterozigot i genotipul populaiei F2. Raportul
de segregare al markerilor, poate fi neles prin folosirea ptratului Punnet, pentru a obine
testul chi squar al genotipurilor populaiilor. n general, markerii vor segrega n raport
Mendelian, astfel c acesta poate fi calculat (Sayed et al., 2002; Xu et al.,1997). n unele
specii poliploide, cum este trestia de zahr, identificarea markerilor polimorfici, este mai
complicat (Ripol et al,1999). Cartarea plantelor diploide, nrudite cu speciile poliploide,
poate fi un mare beneficiu pentru dezvoltarea cartrii markerilor la poliploizi, cu toate c
nu exist plante diploide nrudite pentru toate speciile poliploide (Ripol et al.,1999; Wu et
al., 1992). Metoda general pentru cartarea speciilor poliploide este bazat pe utilizarea
unei singure doze a fragmentelor de restricie (Wu et al., 1992).













Figura 7. Fotografia gel ipotetic care reprezint segregarea markerilor codominani
i dominani; http://www.mendely.com/inter; http://wwwspringelink.com

TEST DE EVALUARE
1. Care sunt condiiile n care se pot alege markerii ADN?
Rspuns:



Disponibilitatea markerilor de a fi caracterizai i specificitatea lor pentru speciile studiate
sunt condiiile n care se pot alege markerii ADN.
172
2. Sub ce denumire este cunoscut operaiunea de cernere a markerilor ADN
identificai?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. ADN trebuie extras din:
a. diferii indivizi
b. unii dintre indivizii populaiei
c. fiecare individ al populaiei de la care se vor alege markerii moleculari
Rezolvare: c
De rezolvat
2. Markerii dominani:
a. indic genotipul complet al plantelor
b. nu pot diferenia ntre genotipul heterozigot i genotipul populaiei F2.
Rezolvare:

3). Analiza markerilor moleculari
Ultimul pas n construirea hrii populaiilor, respectiv a hrii linkage, implic codificarea
datelor pentru fiecare marker ADN al fiecrui individ din populaia studiat i analizarea
grupelor linkage folosind programe computerizate. Linkage ntre doi markeri este n mod
curent calculat, folosind raportul distanelor, acest raport fiind numit logaritmul distanelor,
valori LOD, sau scor LOD. Dac valoarea LOD este>3, atunci se pornete la construirea
hrii linkage, pentru c aceast valoare de 3, indic linkage de 1000 de ori mai mult, dect
sub aceast valoare.
Valorile LOD, pot fi mai sczute, pentru a detecta nivelul linkage, sau pentru a plasa
markeri suplimentari, n interiorul hrilor care sunt construite cu valori ridicate LOD. n
mod obinuit, programele software includ MAP markeri /EXP (Lander et al., 1987;
Lincoln et al., 1993), Map Manager QTX (Manly et al., 2001), Join Map (Stam, 1993) i
sunt accesibile liber pe internet.
Construcia hrii linkage bazat pe populaii mici de recombinani inbreed (20 de
indivizi), este prezentat n figura 8. Primul printe P1, este nregistrat A, iar printele P2,
este nregistrat B. Codificarea markerilor variaz n dependen de tipul populaiilor
173
folosite. Harta linkage a fost construit folosind Map Manager QTX (Manly et al., 2001),
utililiznd funcia cartrii Haldane.


Figura 8. Construcia hrii linkage bazat pe populaii inbreed mici (20 indivizi);
http://www.mendely.com/inter; http://wwwspringelink.com

Markerii linkage sunt grupai mpreun n grupuri linkage, care reprezint segmente
cromozomale sau cromozomi ntregi. Prin analogia cu harta rutier, grupurile linkage
reprezint semne sau marcaje. n acest tip de populaii, mai mici, exist o oarecare
dificultate n asocierea markerilor cu un numr redus de grupuri linkage detectate,
deoarece aceti markeri nu sunt polimorfici.
Harta linkage cadru ideal, este aceea n care distanele markerilor sunt egale fa
de urmtorul QTL i sunt prezeni markerii ancorai, astfel c ei pot fi folosii pentru a
compara regiunile cartate. Pentru construirea hrii linkage ideale, sunt necesari 50 de
indivizi.

174
4). Distana genetic i funciile cartrii
Importana distanei ntre gene i markeri a fost discutat anterior. Cea mai mare
ans a recombinrilor se datoreaz meiozei. Distana genetic de-a lungul hrii linkage
este msurat n termeni ai frecvenei recombinanilor ntre markerii genetici
(Paterson,1996). Funciile cartrii cer convertirea fraciilor de recombinri n centi
Morgani (cM), deoarece frecvena recombinanilor i frecvena crossingoverelor nu este
linear (Hartl& Jones,2001; Kearsey & Pooni, 1996). Cnd distanele genetice sunt mici
<10 cM, atunci aceste distane sunt egale cu frecvena recombinanilor. Totui, aceast
relaie nu poate fi aplicat pentru distane de hart mai mari de 10 cM (Hartl & Jones,
2001). Dou dintre cele mai comune funcii ale hrii, sunt: a). funcia Kosambi, care
admite c evenimentele de recombinare influeneaz existena evenimentelor adiacente ale
recombinrii i b). funcia cartrii Haldan, care nu admite interferene ntre evenimentele
crossingover (Hartl & Jones, 2001; Kearsey & Pooni, 1996). Trebuie reinut c distana
genetic, n harta linkage, nu este egal cu distana ntre markerii genetici, dar depinde de
mrimea genomului speciei plantei (Paterson, 1996). Pe deasupra, relaia ntre distana
genetic i cea fizic variaz de-a lungul cromozomului (Kunzel et al., 2000;
Tanksleyetal.,1992;Young,1994). Spre exemplu, exist recombinani hot spot-zone
fierbini i cold spot-zone reci, n care recombinrile se petrec cu frecven mai mare sau
mai mic (Faris et al., 2000; Ma et al., 2001; Yao et al., 2002).

TEST DE EVALUARE
1. Ce indic valoarea LOD >3?
Rspuns:


2. Care este relaia ntre frecvena recombinanilor i frecvena crossingoverelor?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Distanele genetice sunt egale cu frecvena recombinrilor atunci cnd:
a. distanele genetice sunt < 10 cM
b. distanele genetice sunt egale cu 10 cM
c. distanele genetice sunt >10 cM
Valoarea LOD >3 indic linkage ntre doi markeri moleculari.
175
Rezolvare: a
De rezolvat:
2. Distana genetic n harta linkage, sau harta populaiilor:
a. este egal cu distana ntre markerii genetici
b. nu este egal cu distana ntre markerii genetici
c. depinde de mrimea genomului speciei plantei studiate
Rezolvare:

1.2.1.3 Analize QTL
a.Principii ale analizelor QTL
Identificarea genelor QTL n genomul plantelor este asemntor proverbialului gsirea
acului n carul cu fn. Cu toate acestea, analizele QTL pot fi folosite pentru a mpri
carul cu fn n grmezi mici, urmnd apoi studierea atent a acestora.
n termeni simpli, analizele QTL se bazeaz pe principiul detectrii asocierii ntre fenotip
i genotipul markerilor. Markerii sunt folosii pentru a diviza harta populaiilor n diferite
grupuri genotipice bazate pe prezena sau absena locilor markerilor particulari i apoi,
determinarea diferenelor, (dac ele exist), ntre diferitele grupuri, cu privire la
caracteristicile care pot fi msurate (Tanksley, 1993; Young, 1996).
Diferene semnificative ntre mediile valorilor caracteristicilor fenotipice ale grupurilor
(altele dect 2 i 3), apar n funcie de sistemul de markeri i de tipul populaiei, indicnd
locusul markerului care poate fi utilizat la divizarea hrii populaiei, el fiind linkat de QTL
ce controleaz caracteristica cercetat (fig.9).










Figura 9 Harta linkage ipotetic a cinci cromozomi (reprezentai prin grupuri
linkage) i 26 markeri; http://www.mendely.com/inter; http://wwwspringelink.com
176
n aceast situaie, se vor pune urmtoarele ntrebri logice: 1). De ce valorile
semnificative obinute pentru diferenele ntre mediile valorilor caracteristicilor indic
linkage ntre marker i QTL? 2). Ct de aproape este markerul de QTL? 3). Care este ansa
minim ca s se petreac recombinrile ntre marker i QTL?.
De notat c, n descenden QTL i markerul se vor moteni mpreun i media markerilor
strns linkai va avea diferene semnificative.
b. Principii de detectare a QTL cartat (adaptat dup Young, 1996, citat de B.C.Y.
Collard, M.Z.Z. Jahufer, J.B.Browner i E.C.K. Pang, 2005)
Markerii care sunt linkai de o gen sau de QTL care controleaz o caracteristic
particular (exemplu nlimea plantei) vor indica diferene semnificative, cnd cartarea
populaiei este divizat n acord cu genotipul markerului. Analiza rezultatelor din diagram
(fig.9), arat c markerul E, este linkat cu QTLs, deoarece exist o diferen semnificativ
ntre medii. Markerul H nu este linkat cu QTL, pentru c nu exist diferene semnificative.
Apropierea markerului este n interesul QTL, ansa recombinrilor ntre marker i QTL,
fiind altfel mic, dup cum arat probabilitatea P<005 a mediei grupului fr markeri
(fig.9). Cnd markerul este slab linkat sau nelinkat de QTL exist o segregare
independent a markerului i a QTL .
n aceast situaie va exista o diferen nesemnificativ ntre mediile genotipurilor
grupurilor, bazate pe prezena sau absena markerului slab linkat (fig.9). Din pcate,
markerii localizai departe de QTL, sau n ali cromozomi, sunt motenii randomizat cu
QTL. Astfel, vor fi detectate diferene nesemnificative ntre mediile genotipului grupurilor.

Figura 10 Markerii E linkai cu QTL, markeri H nelinkai cu QTL;
http://www.mendely.com/inter; http://wwwspringelink.com
177
TEST DE EVALUARE

1. Pe ce principiu se bazeaz analizele QTL?
Rspuns:



2. Cum se vor moteni n descenden markerul depistat i QTL?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Apropierea markerului de QTL:
a. asigur ansa recombinrilor ntre marker i QTL
b. nu asigur o ans recombinrilor ntre markeri i QTL.
Rezolvare : b
De rezolvat:
2. Diferene semnificative ntre mediile caracteristicilor fenotipice cantitative, apar n
funcie de:
a. sistemul de markeri i tipul populaiei studiate
b. locusul markerului
c. QTL
Rezolvare:

REZUMATUL TEMEI NR.1 (Capitol 3)

Motenirea unei caracteristici fenotipice cantitative sau poligenice poate fi
rezultatul interaciunii a dou sau a mai multor gene i a interaciunii acestora cu mediul
nconjurtor.
Caracteristicile fenotipice cantitative variaz continuu fiind descrise grafic printr-o curb
clopot, denumit curba Gauss.
Genetica cantitativ clasic definete caracteristicile cantitative n termeni ai
varianei. Variana fenotipic a fost mprit n variana genetic i variana de mediu.
Variana genetic poate fi apoi mprit n efecte aditive, de dominan i epistatice.
Analizele QTL se bazeaz pe principiul detectrii asocierii ntre fenotip i genotipul
markerilor.
178
Aceste informaii au folosit pentru aprecierea heritabilitii caracteristicii i prevederea
rspunsului caracteristicii la selecie. A fost de asemenea posibil s se estimeze numrul
minim de gene care controleaz aceast caracteristic.
Regiunile din genomuri care conin gene asociate cu caracteristici cantitative
particulare sunt cunoscute sub denumirea de loci ai caracteristicilor cantitative (QTLs).
Identificarea QTLs care este bazat numai pe evaluarea convenional fenotipic, nu este
posibil. O major oportunitate pentru selecia QTLs a fost creat prin dezvoltarea
tehnicilor pentru evidenierea markerilor ADN sau moleculari, dup anul 1980.
Markerii genetici reprezint diferenele genetice ntre organisme individuale sau ntre
specii.
Markerii ADN, sunt cei mai larg folosii, aceasta datorndu-se n principal
abundenei lor. Ei provin din diferite clase ale mutaiilor ADN, cum sunt: mutaiile de
substituie, inseriile sau deleiile, erorile n replicare ale ADN ( Paterson, 1996).
Markerii sunt selectiv neutri, pentru c n mod curent nu sunt localizai n regiuni
codificate ale ADN. Markerii care relev diferene ntre indivizii aceleiai specii sau din
specii diferite, se numesc markeri polimorfici, n timp ce markerii care nu discrimineaz
dup genotip se numesc monomorfici.
Harta genetic indic poziia i distana genetic relativ ntre markeri de-a lungul
cromozomului, care este asemntoare cu semnele rutiere sau pietrele kilometrice de pe
traseu. Hrile genetice sau QTLs, au la baz principiul c genele i markerii segreg, prin
recombinrile cromozomului, sau crossingovere, n timpul meiozei.
Markerii codominani pot discrimina n homozigoi i heterozigoi, n timp ce markerii
dominani nu pot discrimina.
Markerii care au frecvena recombinrii de 50%, sunt acceptai ca nelinkai i
aezai la distan mare n acelai cromozom, sau n cromozomi diferii.
Pentru construcia hrii linkage, sunt necesare populaii de plante segregante,
rezultate prin reproducere sexuat. Prinii selectai pentru harta populaiilor de plante, vor
diferi prin una sau mai multe caracteristici de interes. Pentru acurateea rezultatelor,
numrul de indivizi ntr-o populaie trebuie s fie de 50 250.
Odat ce markerii au fost identificai, ei trebuie cernui (selectai), de la un capt la cellalt
al ntregii populaii cartate, incluznd prinii i F1, dac este posibil. Aceast operaiune
este cunoscut ca genotipare a markerilor populaiei. De aceea, ADN trebuie extras din
fiecare individ al populaiei de la care sunt alei markerii moleculari. Markerii
codominani, indic genotipul complet al plantelor. De notat c markerii dominani nu pot
179
diferenia ntre genotipul heterozigot i genotipul populaiei F2. Raportul de segregare al
markerilor, poate fi neles prin folosirea ptratului Punnet, pentru a obine testul chi squar
al genotipurilor populaiilor. n general, markerii vor segrega n raport Mendelian.
Funciile cartrii cer convertirea fraciilor de recombinri n centiMorgani (cM), deoarece
frecvena recombinanilor i frecvena crossingoverelor nu este linear.
Analizele QTL se bazeaz pe principiul detectrii asocierii ntre fenotip i genotipul
markerilor. Diferene semnificative ntre mediile valorilor caracteristicilor fenotipice ale
grupurilor de plante cercetate, apar n funcie de sistemul de markeri i de tipul populaiei,
indicnd locusul markerului care poate fi utilizat la divizarea hrii populaei, el fiind linkat
de QTL ce controleaz caracteristica cercetat.

TEST RECAPITULATIV PENTRU TEMA NR.1 (Capitol 3)

1. Caracteristicile fenotipice cantitative:
a. variaz continuu fiind descrise grafic printr-o curb clopot, denumit curba Gauss
b. variaz discontinuu fiind descrise grafic printr-o curb
c. variaz fie continuu fie discontinuu
2. Variana fenotipic a fost mprit n:
a. variana genetic i variana de mediu
b. variana genotipic i variana fenotipic
3. Markerii genetici care sunt localizai n proxima apropiere a genelor (strns
linkai) care fac obiectul studiului, se vor numi:
a. gene marker sau indicatoare
b. gene QTL
c. gene marcatoare
4. Markerii ADN nu sunt afectai de:
a. condiiile de mediu i nici de cei de cretere i dezvoltare
b. factorii de mediu
c. factorii fenotipici
5. Prin analiza segregrii markerilor, poate fi determinat de:
a. distana relativ dintre markeri
b. frecvena recombinanilor dintre doi markeri
c. ct de apropiai sunt n cromozom recombinanii, (conversia, frecvena ridicat a
recombinanilor)
180
6. Markerii care au fost identificai, trebuie:
a. cernui (selectai), de la un capt la cellalt al ntregii populaii cartate, incluznd prinii
i F1
b. genotipai
7. Funciile cartrii cer convertirea fraciilor de recombinri n centiMorgani (cM),
deoarece:
a. frecvena recombinanilor i frecvena crossingoverelor nu este linear
b. frecvena recombinanilor i frecvena crossingoverelor este linear
8. Markerii genetici sunt folosii pentru a:
a. diviza harta populaiilor n diferite grupuri genotipice
b. diviza harta populaiilor n grupe de markeri

Bibliografie selectiv
1. Elena Albrecht, aus Detmold, 12.02.2008, Comparative genetic linkage map for
Solanum ochranthum and S. juglandifolium and genetic diversity and population structure
in S. lycopersicoides and S. Sitiens Inaugural-Dissertation zurErlangung des GradesDoktor
der Agrarwissenschaften (Dr. Agr) Hohen Landwirtschaftlichen Fakultt der Rheinischen
Friedrich-Wilhelms-Universitt Bonn, Erster Berichterstatter: PD Dr. Klaus Pillen,
http://hss.ulb.uni-bonn.de/diss_online elektronisch publiziert.
2. Viorica Blan, 1992. Variabilitatea iniiala si indusa prin hibridare a unor insusiri si
caracteristici morfologice la cais. Probleme de genetica teoretica si aplicata vol XXIV, nr. l -
2, 31-49.
3. Blan V, 1999. Cumulus of positive characteristics of different apricot parental
phenotypes and the way to transmitting in apricot hybrids descendants. Acta Horticulturae
488, 257-266)
4. Viorica Blan,2008. Genetica Plantelor, Editura ALPHA-MDN, ISBN-978-973-139
5. Bernardo,R, 2002. Breeding for quantitative traitsin plants, chapter 13 and 14, pdf online
www knowledgebank.irri.org
6. B.C.Y. Collard, M.Z.Z. Jahufer, J.B. Brouwer & E.C.K. Pang, 2005. An introduction to
markers, quantitative trait loci (QTL) mapping and marker-assisted selection for crop
improvement: The basic concepts, Euphytica (2005) 142: 169196 DOI: 10.1007/s10681-
005-1681-5, www.researchgate.net/publication/226925645; www.springerlink.com


181
TEMA NR. 2 (Capitol 3)
METODE DE DETECTARE A QTL I A MARKERILOR CARE ASIST
SELECIA PLANTELOR N PROGRAMELE DE AMELIORARE

Uniti de nvare
Metode de detectare QTLs
Reprezentarea i descrierea QTLs detectat n intervalul de hart
Numrul de markeri i de spaii marker
Compararea hrilor linkage
Factorii care influeneaz detectarea QTLs
Drum mai scurt al identificrii genelor marker de interes pentru caracteristicile
cantitative
Despre markerii MAS, care asist selecia n procesul de ameliorare
Ce decizii se pot lua pe baza cartrii QTLs
Cum se valideaz sau se confirm markerii depistai
Conversia markerilor
Ameliorarea plantelor asistat de markeri
Markeri care asist ameliorarea plantelor prin backross
Tendine de folosire n viitor a tehnicilor de cartare QTLs, combinate cu genomica
funcional

Obiective:
1. Cunoaterea metodelor de detectare a QTLs, a factorilor care influeneaz
detectarea QTLs, a modului de reprezentare i descriere a QTLs detectat n intervalul de
hart.
2. nelegerea scopului i rolului comparrii hrilor linkage
3. nvarea metodelor moderne i de baz ale ameliorrii plantelor asistat de
markeri
4. Cunoaterea dezvoltrii n viitor a tehnicilor de cartare QTLs, combinate cu
tehnici de genomic funcional i influena acestora asupra prediciei genotipului i
implicit a fenotipului n ameliorarea plantelor.
Timpul alocat temei: 6 ore
Bibliografie selectiv
1.Viorica Blan, 2012. Genetica i ameliorarea plantelor. Note de curs - power point
182
2 Bertrand Chao Young Collard, 2011. Lesson on Marker assisted breeding;
www.knoledgebank.irri.org/.../
3. Petrua Cornea, 2005. Genetic, ISBN 973-40-0689-4

2.1 Metode de detectare QTLs
Trei metode sunt folosite pe scar larg pentru detectarea QTL, acestea fiind: 1).
analiza unui singur marker, 2). intervalul simplu de hart i 3). intervalul de hart compus
(Liu, 1998; Tanksley,1993).
2.1.1.Analiza unui singur marker (de asemenea, analiza unui singur punct), este cea mai
simpl metod pentru detectarea QTL asociat cu un singur marker. Metodele statistice
folosite pentru analiza unui singur marker includ: testul t, analiza varianei (ANOVA) i
regresia linear. Diagrama linear, (fig. 5) prezentat n tema nr.1, indic linkage strns sau
nu cu QTL (a). Recombinri (indicate de cruciulie) se petrec ntre QTL i locii markerului
(b). Markerii care sunt strns linkai cu QTL (Marker E), se motenesc mpreun cu QTL,
dup cum am discutat n tema 1, iar markerii care sunt slab legai cu QTL (Marker H) se
motenesc randomizat. Regresia linear este mult folosit, deoarece coeficientul de
determinare R
2
al markerului, explic variaia fenotipic care decurge din linkarea QTL cu
markerul. Aceast metod nu cere o hart linkage complet i poate fi efectuat cu un
program software cu metode statistice de baz. Totui, este depistat un dezavantaj major al
acestei metode, datorat distanei reale a QTL, mai mare fa de cea care va fi detectat.
Recombinrile ntre QTL i marker, pot avea loc i aceasta cauzeaz o magnitudine a
efectului QTL, la nivelul estimrii (Tanksley, 1993). Utilizarea unui larg numr al
segreganilor ADN, acoper ntregul genom. n mod obinuit intervalul mai mare de 15
cM, poate minimiza ambele probleme (Tanksley,1993). Rezultatele analizrii unui singur
marker sunt prezentate n tabele, care indic cromozomul, (dac se cunoate), sau grupul
linkage, care conine markerul, valorile probabilitii i procentajul variaiei fenotipice
explicat prin QTL. Uneori mrimea alelelor markerului este de asemenea notat Genele Q
i Harta Manager QTX, folosete programul computerizat pentru a realiza analizele
markerului unic sau singur (Manly et al., 2001; Nelson, 1997).
2.1.2. Metoda intervalului simplu de hart (SIM), a hrii linkage i analizele simultane
ale intervalelor ntre perechile adiacente de markeri linkai, de-a lungul cromozomului, este
mai degrab folosit n schimbul metodei analizei markerului unic. Folosirea markerilor
linkai pentru analize, compenseaz recombinrile ntre marker i QTL i sunt considerate
183
statistic, mult mai puternice comparativ cu analizarea markerului unic, sau a singurului
punct (Lander & Botstein, 1989; Liu, 1998).
2.1.3. Metoda intervalului compus de hart (CIM), este folosit alturi de SIM, pentru a
realiza profilul posibilelor situri pentru QTLs, ce se pot poziiona ntre markerii linkai
adiaceni. Rezultatele acestui test statistic pentru SIM i CIM, sunt obinute prin aplicarea
logaritmului diferenelor (LOD) sau a raportului statistic al posibilitilor de acoperire
(LRS). Exist transformarea direct unu la unu, ntre rezultatul LOD i rezultatul LRS
(conversia poate fi calculat cu relaia LRS =46 LOD) (Liu, 1998 citat de B.C.Y. Collard,
M.Z.Z. Jahufer, J.B.Brouwer& E.C.K. Pang, 2005). Acest profil LOD sau LRS este folosit
pentru a identifica cea mai probabil poziie pentru QTL, n relaie cu harta linkage, poziia
fiind aceea pentru care s-a obinut cea mai mare valoare LOD. Cel mai mare randament al
intervalului de hart l reprezint diagrama sau graficul, grupurilor markerilor compui
linkai, reprezentai (fig. 1) pe axa X i testul statistic reprezentat pe axa Y. Vrful sau
maximum curbei valorilor statistice trebuie s depeasc nivelul semnificaiei specifice,
pentru ca s fie declarat QTL real(semnificaie statistic). Determinarea pragului
semnificaiei este n mod practic realizat, folosind testul permutrii (Churchill &
Doerge,1994 citai de B.C.Y.Collard, M.Z.Z. Jahufer, J.B.Brouwer& E.C.K. Pang, 2005).
Valoarea fenotipic a populaiei determinat pe baza testului permutrii, se amestec cu
genotipul markerului, semnificndu-l.
184

Figura 1. Diagrama grupurilor markerilor compui linkai;
http://www.mendely.com/inter; http://wwwspringelink.com

nainte de a fi folosit testul permutrii a fost larg acceptat metoda determinrii
pragului semnificaiei rezultatului LOD, care era ntre 2,0 i 3,0 ( mai des 3,0)( fig. 1).
n figura 2, este reprezentat randamentul ipotetic al profilului LOD pentru cromozomul 4.
Liniile punctate reprezint pragul semnificaiei determinat prin testele permutrii.
Randamentul indic c cea mai acceptat poziie este lng markerul Q (indicat prin
sgeat). Cel mai bun marker flancat pentru acest QTL va fi Q sau R.

185

Figura 2. Randamentul ipotetic al profilului LOD pentru cromozomul 4;
http://www.mendely.com/inter; http://wwwspringelink.com

TEST DE EVALUARE

1. Care sunt metodele folosite pe scar larg pentru detectarea QTL?
Rspuns:



2. Care este dezavantajul major al analizrii uni singur marker pentru detectarea
QTL?
Rspuns:

Exemplu rezolvat:
1. Metoda intervalului compus de hart, (CIM), este folosit alturi de SIM
(intervalul simplu de hart), pentru:
a. a realiza profilul posibilelor situri pentru QTLs
b. aplicarea logaritmului diferenelor (LOD) sau a raportului statistic al posibilitilor de
acoperire (LRS)
Rezolvare: a.
De rezolvat:
2. Profilul LOD sau LRS este folosit pentru a identifica:
Sunt folosite trei metode pentru detectarea QTL i anume: 1). analiza unui singur
marker; 2). intervalul simplu de hart; 3). intervalul de hart compus.
186
a. poziia QTL n relaie cu harta linkage
b. randamentul intervalului de hart
Rezolvare:

2.2. Reprezentarea i descrierea QTLs detectat n intervalul de hart
Cel mai comun mod de reprezentare a QTLs este prin indicarea n hrile linkage a
celui mai apropiat marker n tabel, i/sau cu bare (sau n form oval, sau cu sgei)
(Beattie et al., 2003; Georgeet, 2003; Hittalmani et al., 2002; Jampatong et al.,2002;
McCouch & Doerge, 1995; Pilet-Nayel et al.,2002). Regiunile cromozomale reprezentate
prin bare i sgei sunt n mod curent regiuni care depesc pragul semnificaiei statistice
(fig. 2). Perechea de markeri-linkai, reprezentai de o parte i de alta a QTL este denumit
markeri flancai.
Raiunea cercetrii i reprezentrii markerilor flancai, const n consistena i
credibilitatea mai mare a seleciei bazat pe doi markeri, fa de selecia bazat pe un
singur marker, aceasta datorndu-se ratei sczute de recombinare a markerilor cu QTL.
Cu toate acestea, cu scopul de a maximiza datele obinute din studiul hrii QTL, unele
criterii pot fi folosite pentru evaluarea fenotipic a unei singure caracteristici (Flandez-
Galvez et al., 2003a; Paterson et al., 1988; Pilet-Nayel et al., 2002).
QTLs care este detectat n regiuni comune (bazat pe diferite criterii pentru o
singur caracteristic), poate fi important pentru controlul caracteristicii cercetate. Cartarea
populaiei poate fi de asemenea bazat pe segregarea caracteristicilor multiple. Aceasta
reprezint un avantaj, deoarece QTLs care controleaz diferite caracteristici pot fi
localizate ntr-o singur hart (Beattie et al.,2003; Khairallah et al., 1998; Marquez-Cedillo
et al., 2001; Serquen et al., 1997; Taran et al., 2002). Cu toate acestea, nu este posibil ca
mai multe genotipuri parentale s fie folosite n construcia unei singure hri, deoarece ele
segreg pentru o singur caracteristic de interes. Mai mult, aceiai linie a populaiei
cartate, folosit pentru evaluarea fenotipic, trebuie s fie folositoare i pentru genotiparea
markerilor i a ulterioarelor analize QTL, ceea ce poate fi dificil pentru testele biologice
complete sau semidestructive, cum ar fi: selecia prin cernere pentru caracteristica de
rezisten la fungii patogeni necrotrofici.
n termeni generali, QTL individual poate fi de asemenea descris ca major sau
minor. Aceast definiie este bazat pe proporia variaiei fenotipice explicat prin QTL
i bazat pe valoarea R
2
. QTL major va fi calculat pentru o cantitate relativ mare (>10%) i
QTL minor pentru o cantitate <10%. Uneori QTLs major se refer la QTL care este stabil
187
nefiind influenat de condiiile de mediu, iar QTL minor, este acel QTL care este sensibil la
condiiile de mediu, n special pentru QTL care este asociat cu rezistena la boli (Liet al.,
2001; Lindhout, 2002; Pilet-Nayel et al., 2002).
n termeni convenionali, QTLs poate fi clasificat astfel: 1). sugestiv, 2).
semnificativ, 3). foarte semnificativ. Aceast clasificare a fost propus de Lander &
Kruglyak, 1995, cu scopul de a se evita falsele interpretri i s se asigure c linkage real
nu a fost omis. Nivel semnificativ i foarte semnificativ al QTLs a fost gsit la
probabilitatea de 5% i 0,1%, pe cnd QTL sugestiv este ateptat a se petrece n QTL cartat
randomizat (cu alte cuvinte, exist o avertizare demn de ncredere a QTLs sugestiv).
Programul de cartare Map Manager QTX, reprezint rezultatele cartrii QTL cu aceast
clasificare (Manly et al., 2001).
Prin cartarea QTL a caracteristicilor nlimea plantelor i rezistena la boli (fig.3),
QTL ipotetic a fost depistat pe cromozomii 2, 3, 4 i 5. O gen major QTL pentru
nlimea plantelor a fost depistat pe cromozomul 2. Dou gene majore QTL, pentru
rezistena la boli au fost depistate pe cromozomul 4 i 5, n timp ce o gen minor QTL a
fost depistat pe cromozomul 3 (adaptare dup Hartl & Jones, 2001 citat de B.C.Y.
Collard, M.Z.Z. Jahufer, J.B.Brouwer& E.C.K. Pang, 2005).

Figura 3. Cartarea QTL a caracteristicilor nlimea plantelor i rezistena la boli;
(Intervalele de ncredere sau de confiden pentru QTLs),
http://www.mendely.com/inter; http://www.springelink.com
188
Cu toate c multe poziii probabile ale QTL sunt poziii ale hrii n care a fost
detectat rezultatul LOD sau LRS, actualul QTLs se petrece n intervalul de ncredere, sau
cum mai este cunoscut, intervalul de confiden. Sunt cteva ci prin care poate fi calculat
intervalul de confiden. Mai simplu este acela al intervalului suport LOD, care este
determinat prin gsirea regiunii pe ambele laturi ale vrfului QTL care corespunde cu
descreterea rezultatului LOD (Liu, 1998; Visscher et al.,1996) i poate fi uor aplicat prin
unele programe software cum este MapManager QTX (Manly et al., 2001).
2.3 Numrul de markeri i de spaii marker
Nu exist valoare absolut pentru numrul de markeri ADN, cerut pentru harta
genetic, numrul de markeri variind cu numrul i lungimea cromozomilor, n organism.
Pentru detectarea QTLs, studiile preliminare ale hrii genetice conin ntre 100 i 200
markeri. (Mohan et al.,1997). Cu toate acestea, acest numr depinde de mrimea
genomului speciei cartate. Darvasi et al., 1993, relata c puterea de detectare a QTL, a fost
virtual asemntoare pentru markerii spaiai la 10 cM, att pentru un numr infinit de
markeri ct i doar pentru un singur marker, dar aceast putere poate descrete pentru o
spaiere a markerilor de 20 sau 50 cM pentru un genom mai mare fiind desigur necesari
mai muli markeri.
2.4 Compararea hrilor linkage
Toate hrile linkage sunt unice, fiind produsul cartrii populaiei rezultat din
ncruciarea a doi prini specifici, unicitatea fiind dat i de tipul markerilor folosii. Chiar
dac se folosete la construirea hrii un set de markeri asemntori, nu exist garania c
toi markerii vor fi polimorfici ntre diferite populaii. Ca atare, pentru corelarea
informaiei dintr-o hart cu informaia dintr-o alt hart, sunt necesari markeri, comuni
ambelor hri. Markerii comuni care sunt polimorfici ntr-un nivel ridicat, sunt numii
markeri anchor sau cor. Markerii anchor sunt tipic SSR sau RFLP (Ablett et al., 2003;
Flandez-Galvez et al., 2003b; Gardiner et al., 1993).
Grupurile specifice de markeri anchor, care sunt localizai ct mai apropiai unii de
alii n regiuni specifice ale genomului, sunt folosite la integrarea hrilor. Aceste regiuni
sunt de 10-20 cM, de-a lungul cromozomilor. Limitele fiecrei regiuni sunt definite de
setul de markeri core RFLP (Polacco et al.,2002). Dac markerii anchor au fost ncorporai
n diferite hri, atunci hrile respective pot fi aliniate sau potrivite mpreun pentru a se
realiza harta de consens (Ablett et al.,2003; Karakousis et al, 2003).
Consensul hrilor se realizeaz prin combinarea sau contopirea diferitelor hri,
construite din diferite genotipuri. Acest consens al hrilor, este deosebit de util i eficient
189
pentru construirea unei noi hri (cu markeri simetrici), sau cartare int, sau localizata.
Spre exemplu, consensul hrii poate indica care markeri sunt localizai n spaierea
regiunii care conine QTL i astfel este util pentru a identifica cei mai puternici markeri
linkai, care pot s asiste construirea unei noi hri, sau localizarea hrii unei regiuni
genomice specifice i predicia caracteristicilor.
Studierea asemnrii sau a diferenelor ntre markeri i genuri, specii de plante, se
realizeaz prin compararea hrilor (Paterson et al., 1991 citat de B.C.Y.Collard, M.Z.Z.
Jahufer, J.B.Brouwer& E.C.K. Pang, 2005). Aceasta implic analizarea extinderii i a
conservrii n interiorul hrilor a markerilor colineari, n msura n care acetia se gsesc.
Aceast conservare se refer la sintenie, respectiv la localizarea a dou trei gene pe
acelai cromozom. Harta comparativ poate s localizeze QTL n diferite populaii cartate
(Young, 1994). Harta linkage previzibil poate asigura o indicaie privind polimorfismul
markerilor i grupurile linkage coninute i ordinea markerilor inclui n diferitele hri.
Mai mult de att, harta comparativ poate da o imagine asupra relaiilor evoluioniste n
cadrul unor taxoni.
2.5. Factorii care influeneaz detectarea QTLs
Sunt muli factori care influeneaz detecia segregrii QTLs n populaie (Asins,
2002; Tanksley, 1993). Unii dintre cei mai importani sunt: 1). proprietatea genetic a
QTLs de a controla caracteristici, 2). efectul mediului asupra exprimrii caracteristicilor,
3). mrimea populaiei i 4). erorile experimentale. Proprietile genetice ale QTLs, care
controleaz caracteristici includ magnitudinea efectului individual QTLs. n funcie de
magnitudinea sa, doar QTLs cu un efect fenotipic suficient de mare va fi detectat, pe cnd
QTLs cu efecte fenotipice mici, va avea puine anse de a fi detectat.
O alt proprietate genetic care influeneaz detectarea QTLs, este distana ntre
QTLs linkat i gena de interes. QTLs care este apropiat linkat de gena respectiv, adic la
20 cM, sau mai puin chiar, va fi detectat ca singurul QTLs n populaia de mrime tipic
(<500) (Tanksley, 1993 citat de B.C.Y.Collard, M.Z.Z. Jahufer, J.B. Brouwer& E.C.K.
Pang, 2005). Efectul mediului poate avea o profund influen asupra expresiei
caracteristicilor cantitative. Experimentele care multiplic amplasamentul ncrucirii i
timpul n care au fost fcute (exemplu, diferitele sezoane ale anului), permit cercettorilor
s investigheze influenele mediului asupra QTLs care controleaz caracteristica luat n
studiu (George et al., 2003; Hittalmani et al., 2002; Jampatong et al., 2002; Lindhout,
Paterson et al,1991b; Price& Courtois, 1999).
190
Dup cum tim, populaiile RI sau DH, sunt ideale pentru detectarea QTLs. Mrimea
populaiei este foarte important i de aceea, cu ct aceasta este mai numeroas, cu att
ansa este mai mare, pentru a detecta QTLs cu efecte mici (Haley & Andersson, 1997;
Tanksley, 1993).
Creterea populaiei, influeneaz mai marea putere de apreciere a metodelor
statistice i implicit a estimrii efectelor genelor i a intervalului de confidenialitate a
locaiilor QTLs (Beavis, 1998; Darvasi et al., 1993, citai de B.C.Y.Collard, M.Z.Z.
Jahufer, J.B.Brouwer& E.C.K. Pang, 2005). Principalele surse ale erorilor experimentale,
sunt greelile n genotiparea markerilor i erori n evaluarea fenotipic. Erorile de
genotipare i absena unor date pot afecta ordinea i distana ntre markeri n harta linkage
(Hackett, 2002). Corectitudinea evalurii fenotipice este de cea mai mare importan
pentru precizia cartrii QTLs, n sensul c o cartare credibil se poate obine doar pe baza
unor date fenotipice credibile. Repetarea msurtorilor fenotipice, sau folosirea clonelor
pot fi utile pentru sporirea preciziei cartrii QTLs, reducnd background-ul flecrelii
(Danesh et al., 1994; Haley& Andersson, 1997), sau mai clar spus, al comentariilor fr
fundament tiinific riguros.
Unele studii minuioase includ evaluri fenotipice fcute att n parcelele de cercetare ct
i n sere, sau fitotron.
Un exemplu, pentru susinerea acestei informaii, este experimentul fcut pentru rezistena
la Ascochyta pinodes a nutului - Cicer arietinum (Dipak K.Santraa, Mucella Tekeoglub,
MiLind Ratnaparkhea, Walter J.Kaiserc and Fred J.Muehlbauer, 2000; Flandez-Galvez et
al., 2003 citai de B.C.Y.Collard, M.Z.Z. Jahufer, J.B. Brouwer& E.C.K. Pang, 2005).








Figura 4. Controlul n laborator al infectrii seminelor de nut Cicer arietinum cu
Ascochyta pinodella (dup 20/20 Labs Inc, Nisku AB.Canada;
http://gateway.isknowledge.ca/contact

191
Spre informare artm n figura 4 imaginea controlului infectrii seminelor de nut
iar n figura 5, ciclul biologic a ciupercii Ascochyta.


Figura 5. Ciclul biologic a mlurii (Ascochyta blight) la nut Cicer arietinum;
http:www rennes inra /Lr bio3 p-eng/ accuell/ actualites/ umr_igepp)

Un alt exemplu, este experimentul privind rezistena fasolei (Phasaeolus vulgaris),
la atacul agentului patogen care produce petele negre bacteriene (Jung et al., 2003).










Figura 6. Boala petelor brune bacteriene la fasole podus de Pseudomonas syringae
pv Phaseolicola; http://vegetablemdoline ppath cornell edu/images/Beans
192

Aceast boal a devenit foarte pgubitoare n multe state din America,
contaminarea fcndu-se i prin smn. De aceea ca msur biologic de nlturare a
pierderilor de producie cauzate de aceast boal, sau de alte boli, au fost fundamentate
programe de ameliorare a rezistenei la atacul agenilor patogeni, n care lucreaz echipe
interdisciplinare, formate din genetist, ameliorator, biolog specialist n biologia
molecular, biochimist, fitopatolog. Dei fitopatologul este cel ce cunoate simptomele
bolii i ciclul biologic al agentului patogen, genetistul i amelioratorul ca specaliti de
sintez i responsabili ai populaiilor de plante obinute n procesul de ameliorare, trebuie
s cunoasc i s recunoasc bolile i agenii patogeni pentru a putea avea comunicare cu
fitopatologul i cu toi ceilali membrii ai echipei.
Dup cum reiese din studiile efectuate de Helene R. Dillard i Daniel E. Legard
(Department of Plant Pathology, NYS Agricultural Experiment Station at Geneva, Cornell
University, 1991), bolile bacteriene la fasole, pot fi produse de Pseudomonas syringae pv.
syringae - boala petelor negre bacteriene, Xanthomonas campestris pv. phaseoli - focul
bacterian i Pseudomonas syringae pv. phaseolicola - halo de arsur bacterian.
Tot ca exemplu, s reinem experimentul privind comportarea la atacul mucegaiului pufos,
produs de agentul patogen Sclerospora glaucum, (fig.7) a unor noi soiuri de Penisetum
glaucum (fig.6), un mohor galben ameliorat folosit n alimentaia oamenilor i a animalelor
n India i alte ri din Asia i Africa.














Figura. 7. Penisetum glaucum;
http://media now public.com
/environement/pearl
millet penisetum glaucum
Figura 8. Mucegaiul pufos produs de
Sclerospora graminicola la Penisetum
glaucum; http:// online library willi (Anals
of Applied Biology
193
Unele studii confirmate (cu referire la studiile repetate ale lui Lander & Kruglyak,
1995), arat c se pot obine populaii independente din unii prini genotipai, sau din
prini nrudii genotipai , care au fost folosii n cartarea primar a QTL. Uneori sunt
folosite populaii largi pentru hrile genetice, mai mult chiar, studiile recente propun ca
poziiile QTLs i efectele sale s fie evaluate n populaii independente, deoarece din
cartarea QTL bazat pe mrimea tipic a populaiilor, rezult capacitate redus a deteciei
QTL i o larg palet a efectelor QTLs (Melchinger et al., 1998; Utz et al., 2000 citai de
B.C.Y. Collard, M.Z.Z. Jahufer, J.B. Brouwer& E.C.K. Pang, 2005). Din pcate, din cauza
fondurilor, a timpului i a posibilitii de nelegere, studiile de cartare a QTLs, sunt rareori
confirmate. Sunt excepii demne de notat, aa cum sunt studiile care confirm QTLs,
asociat cu rezistena rdcinilor la nematozi (Li et al., 2001) i rezistena la arsura
mugurilor de soia (Fasoula et al., 2003).
Un alt mod de abordare a experimentelor pentru confirmarea QTLs, este acela de a
studia populaii denumite lng linii izogenice NILs (near isogenic lines). NILs sunt
create prin ncruciarea printelui donor, cum ar fi spre exemplu un printe slbatic (din
flora spontan) care posed caracteristica specific de interes (ex. rezistena la boli), cu un
printe recurent (ex. o elit sau un soi, sau cultivar) (fig. 9 i fig. 10).

Figura 9. Transferul unei singure gene:Linkage dragat prin Backross tradiional ;
http://www.blackwellpublishing.com

194

Figura 10. Transferul unei singure gene prin inginerie genetic, o form a
Backrossului; http://www.blackwellpublishing.com

Hibizii F1 sunt apoi backrossai cu printele donor pentru a produce prima
generaie Backross BC1. Generaia BC1 este apoi backrossat cu un printe recurent, timp
de 7 generaii.
Ultima generaie BC7, va conine practic ntregul genom al printelui recurent,
exceptnd o mic regiune cromozomal ce conine gena sau QTL de interes.

METODA BACKCROSS DE AMELIORARE

A = printe recurrent
B = printe non-recurent, parinte donor
pasul 1: ncruciare ( A x B)

F1
50% din genom de la printele recurent A
+50% din genom de la printele non-recurent
B




50% gene ale printelui recurent
pasul 2: backross (A x F1)

BC1F1
50% din genom de la printele recurent A
50% din genom de la descendenii F1, care
sunt ei nii 50% din A.
Prin urmare 50% + 50%(50%) =


75% gene ale printelui recurent
195
50% + 25% = 75% din genomul A

pasul 3: backross (AxBC1F1)

BC2F1
50% genom din parintele recurent A +
50% din genomul BC1F1, care este el nsu
75% din A
prin urmare 50% + 50% (75%) =
50% + 37,5%= 87,5% din genomul parintelui
recurent A




87,5% din parintele recurent
pasul 4: backross (A x BC2F1

BC3F1
50% din genomul parintelui A + 50% din
genomul F1, care este el nsui 87,5% din A
Atunci 50% + 50% (87,5%) = 50%+43,75%
=93,75% din genomul A


93,75% din parintele recurent
pasul 5 : backross (A xBC3F1)

BC4F1
50% din genomul A plus
50% din genomul F1, care este acum el nsui
93,75% din A,
prin urmare: 50% + 50% (93,75%) =
50% + 46,875%= 96,875% din genomul A




96,875% din genomul recurent
pasul 6 : backross (A xBC4F1)

BC5F1
50% din genomul A plus


98,4375% din genomul recurent
196
50% din genomul F1, care este acum el nsui
96,875% din A,
prin urmare: 50% + 50% (96,875%) =
50% + 48,4375%= 98,4375% din genomul A

pasul 7 : backross (A xBC5F1)

BC5F1
50% din genomul A plus
50% din genomul F1, care este acum el nsui
98,4375% din A,
prin urmare: 50% + 50% (98,4375%) =
50% + 49,2187%= 99,2187% din genomul A



99,2187% din genomul

Liniile homozigote F2, pot fi obinute prin autofecundarea plantelor BC7. Trebuie subliniat
c pentru a obine NILs, care conin gena int, ea trebuie selectat n fiecare generaie
backross, dup cum reiese din schema prezentat mai sus.
Prin genotiparea NILs cu markeri importani i compararea mediei valorilor
caracteristicii liniilor NILs cu valorile caracteristicii printelui recurent, efectul QTLs
poate fi confirmat. Un exemplu care susine cele afirmate, este studiul motenirii genetice a
caracteristicii de rezisten la rugin a frunzelor de orz , sau a rezistenei la nematozi a
plantelor de soia i rolul fosforului la orez. Prin utilizarea populaiilor NILs, a fost
confirmat QTLs, att la tomate (Bernacchi et al., 1998; ElenAa lbrecht, aus Detmold,
2008), ct i la soia (Glover et al., 2004) i la orez (Wissuwa & Ae, 2001).

TEST DE EVALUARE

1. Cum poate fi clasificat QTLs n termeni convenionali?
Rspuns:



n termeni convenionali QTLs poate fi clasificat astfel:1). sugestiv, 2). semnificativ, 3).
foarte semnificativ
197
2. Care este probabilitatea calculat, care ne permite s afirmm c exist nivel
semnificativ i foarte semnificativ al QTLs?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Harta comparativ poate s localizeze QTL n diferite populaii cartate, poate
asigura sau poate s dea:
a. o indicaie privind polimorfismul markerilor i grupurile linkage coninute
b. ordinea markerilor inclui n diferitele hri
c. o imagine asupra relaiilor evoluioniste n cadrul unor taxoni.
Rezolvare: a, b, c
De rezolvat:

2. Cei mai importani factori care influeneaz detectarea segregrii QTLs n
populaie sunt:
a. proprietatea genetic a QTLs, de a controla caracteristici
b. efectul mediului asupra exprimrii caracteristicilor
c. mrimea populaiei
d. erorile experimentale
Rezolvare:

2.6 Drum mai scurt al identificrii genelor marker de interes pentru caracteristicile
cantitative
Construirea hrilor likage i analizele QTLs cer mult timp, efort i sunt i scumpe
pentru cei cu resurse mai mici. De aceea, metode alternative care pot salva timp i bani, pot
fi extrem de utile. Dou metode care scurteaz drumul spre identificarea markerilor care
urmresc QTLs, sunt actual folosite, prima fiind analizele segreganilor cantitativi BSA i
cea de-a doua, genotiparea selectiv. Ambele metode solicit cartarea populaiilor.
2.6.1 Analizele segreganilor cantitativi BSA
Metoda analizelor BSA, este folosit pentru detectarea markerilor localizai n
regiuni cromozomale specifice (Michelmore et al.,1991). Aceast metod const n
combinarea n timp scurt a dou fonduri genetice, sau mai exact spus, combinarea
probelor cantitative de ADN, din 10-20 de plante individuale provenite din dou populaii
198
segregante. Aceste dou probe cantitative difer prin caracteristici de interes, cum sunt spre
exemplu, rezistena versus sensibilitatea la boli specifice.
Prin realizarea probei cantitative de ADN, toi locii sunt randomizai, exceptnd regiunea
care conine gena de interes (fig. 3). ntreaga populaie care conine markerii polimorfici
este genotipat i se genereaz harta linkage. Aceste analize fac posibil poziionarea i
determinarea QTLs, (Fordetal,1999). BSA este folosit n general pentru a marca sau a
eticheta genele care controleaz caracteristici simple, dar aceast metod, poate fi de
asemenea folosit pentru identificarea markerilor linkai de QTLs de interes major (Wang
& Paterson,1994 citai de B.C.Y. Collard, M.Z.Z. Jahufer, J.B. Brouwer& E.C.K. Pang,
2005). Tehnicile RAPD sau AFLP care pot genera markeri multipli dintr-o singur prob
ADN, sunt n general preferate pentru BSA.
2.6.2 Genotiparea selectiv
Metoda genotiprii selective este cunoscut i sub denumirea de analizele extremei
distribuii sau caracteristici, bazate pe analizele markerilor. Aceast metod implic
selecia indivizilor din populaii analizate pentru caracteristici extreme sau cu succesiune
limitat (Foolad & Jones, 1993; Lander & Botstein,1989; Zhang et al., 2003).
Construcia hrii linkage i analizele QTLs, pot fi realizate utiliznd doar indivizi cu
caracteristici fenotipice extreme (fig. 11). Prin genotiparea subprobelor populaiilor,
costurile studiilor de cartare pot fi substanial reduse. Genotiparea selectiv este tipic
folosit acolo unde cresc i sunt fenotipai indivizii din populaiile cartate i se face
folosind markeri ADN. Dezavantajul acestei metode este acela c nu este eficient pentru
determinarea efectelor QTLs i c este testat doar o singur caracteristic, deoarece
indivizii selectai pentru valori fenotipice extreme ale unei caracteristici nu au valori
fenotipice extreme i pentru alte caracteristici (Tanksley, 1993). Mai mult, un singur punct
de lucru n care se fac analizele, nu este suficient pentru detectarea QTLs, deoarece
efectele fenotipice pot fi estimate eronat. De aceea, trebuie folosit metoda intervalului de
hart (Lander & Botstein, 1989 citai de B.C.Y. Collard, M.Z.Z. Jahufer, J.B. Brouwer&
E.C.K. Pang, 2005).
Intervalul de hart, este segmentul situat ntre 2 markeri. Metoda intervalului de
hart folosete ca informaie valorile a 2 markeri flancai pentru a estima poziia QTLs (fig.
11). Poziia QTLs, este determinat pe baza calculelor de probabilitate, considerndu-se
foarte semnificativ valoarea cea mai mare determinat.
199

Figura 11. Markerii M1 i M2 care flankeaz QTLs(Aa). Gamei recombinani : M1a,
m1A, Gamei parentali: M1A, m1a; www.knowledge bank.irri.org/rice breeding.com

Frecvena recombinrilor reflect distana de hart.
Sunt totui unele dezavantaje ale folosirii intervalului de hart i s vedem care sunt
acestea:
1. Nu poate s rezolve doi QTLs n intervalul de hart.
2. Dei pragurile LOD sunt foarte ridicate, prea muli QTLs sunt declarai.
3. Ignor epistasia.
4. Nu prezint precizie pentru QTL cu efecte mici, deoarece nu sunt nc metode
eficiente.
2.7 Decizii importante ce pot fi luate pe baza cartrii QTL
Un principal scop al cartrii QTLs este acela de a produce un cadru cuprinztor,
aa cum este schia hrii linkage, care ne pune la curent cu toi cromozomii, adic ne
aduce informaii cadru asupra tuturor cromozomilor (fig. 3).
Rezultatele analizrii probelor cantitative de ADN pentru determinarea QTLs care
controleaz caracteristicile rezistena la boli (a) i caracteristica cantitativ, culoarea florii
(b), sunt prezentate n fig. 12. n ambele cazuri, au fost conturate dou mrimi B1 i B2,
din rezultatul fenotipic extrem (c).
Markerii polimorfici care au fost identificai, indicai n figur prin sgeat, sunt linkai cu
gene QTLs care controleaz caracteristicile amintite.
200

Figura 12. Paii parcuri pentru identificarea Markerilor polimorfici linkai cu gene
QTLs care controleaz caracteristicile rezistena la boli i culoarea florii;
http://www.mendely.com/inter; http://wwwspringelink.com

Astfel de markeri sunt folosii apoi pentru genotiparea ntregii populaii cartate i se
realizeaz analizele QTLs. Aceasta nseamn c pot avea loc recombinri ntre markeri i
QTLs, ceea ce reduce sigurana i folosirea n toat plenitudinea a markerilor. Prin
folosirea unei largi populaii i un numr mare de markeri, pot fi identificai muli markeri
strns linkai, acest proces fiind cunoscut cu termenul de cartare fin sau cartare cu o
nalt rezoluie. De aceea, cartarea cu nalt rezoluie a QTLs, poate fi folosit pentru
identificarea markerilor credibili, care asist selecia cu distana ntre gene, acceptabil,
respectiv < 5Cm, dar ideal este ns ca aceast distan s fie <1cM. i, mai poate fi
folosit aceast cartare pentru identificarea diferenierii ntre o singur gen i cteva gene
linkate (Michelmore,1995;Mohan et al., 1997 citai de B.C.Y.Collard, M.Z.Z. .Jahufer, J.B.
Brouwer& E.C.K. Pang, 2005).
Nu exist un numr universal acceptat pentru mrimea potrivit a populaiei
necesar construirii hrii de mare rezoluie. Totui, populaia care se folosete pentru acest
tip de hart, va conine frecvena f >1000 de indivizi, ceea ce garanteaz distana ntre
genele flancate i QTLs<1 cM (Blair et al., 2003; Chunwongse et al., 1997; Li et al., 2003).
Tehnicile nalte, care genereaz loci multipli pe combinaiile de primeri (exemplu
AFLP), sunt n mod obinuit preferai pentru a spori densitatea markerilor (fig.13). Analiza
201
segreganilor cantitativi poate fi de asemenea folosit pentru identificarea markerilor
adiionali linkai pe regiuni cromozomale specifice (Campbell et al.,2001; Giovannoni et
al., 1991).
O decizie important este aceea asupra aplicrii metodei genotiprii selective.
n aceast situaie, ntreaga populaie este evaluat fenotipic pentru o caracteristic
particular (exemplu, rezistena la boli). Totui, din populaia cartat, doar indivizii ce
reprezint valori extreme fenotipice, sunt selectai pentru genotiparea markerilor i pentru
ulterioare analize linkage i QTL.
Hri cu nalt rezoluie ale regiunilor specifice cromozomale pot fi de asemenea
construite folosind NILs (Blair et al., 2003 citai de C.Y.Collard, M.Z.Z. Jahufer,
J.B.Brouwer& E.C.K. Pang, 2005). Markerii care sunt polimorfici ntre NILs i prinii lor,
reprezint markeri care sunt linkai cu gene int i pot fi ncorporai n harta de nalt
rezoluie.
2.8 Cu privire la markerii care asist selecia plantelor n procesul de ameliorare
Selecia plantelor asistat de markeri (MAS), este o metod prin care fenotipul este
selectat pe baza genotiprii markerului. n orice caz, markerii identificai n studiile
preliminare de cartare genetic, sunt rareori potrivii ca markeri utili pentru selecia
plantelor fr a se face teste ulterioare. Markerii care nu sunt testai nainte de a fi folosii
n programele MAS, nu sunt prin urmare demni de ncredere de a fi folosii pentru
predicia fenotipului. n general, paii cerui pentru identificarea markerilor folosii n
programele MAS impun mai nti o rezoluie ridicat a cartrii, apoi confirmarea
markerilor i n final posibila conversie a markerilor.
2.8.1 Validarea sau confirmarea markerilor depistai
n general, markerii pot fi confirmai prin testarea eficacitii lor n determinarea
fenotipului int n populaii independente i diferite fonduri genetice (Cakir et al., 2003;
Collins et al., 2003; Jung et al.,1999; Langridge et al., 2001; Li et al., 2001, Sharpetal.,
2001). Cu alte cuvinte, confirmarea markerilor implic testarea siguranei markerilor n
predicia fenotipului.
Aceasta indic dac markerii pot fi folosii n screening-ul (cernerea) de rutin
pentru MAS (Ogbonnaya et al., 2001; Sharp et al.,2001). Markerii pot fi de asemenea
confirmai prin testarea prezenei lor n genomul unor cultivare sau a unor alte genotipuri
importante (Sharp et al., 2001; Spielmeyer et al., 2003 citai de C.Y. Collard, M.Z.Z.
Jahufer, J.B. Brouwer& E.C.K. Pang, 2005).
202
Unele studii atrag atenia asupra asumrii faptului c exist pericolul ca QTLs
linkat, depistat n diferite fonduri genetice, sau n diferite fenotipuri testate, s fie influenat
de relaia fenotipului cu mediul, n special pentru caracteristici complexe, cum este aceea a
produciei plantelor (Reyna & Sneller, 2001). Chiar atunci cnd o singur gen controleaz
o caracteristic particular, nu exist garania c markerii ADN identificai ntr-o populaie
vor fi utili n diferite alte populaii, n special cnd populaiile aparin unor rude ndeprtate
din fondul de germoplasm (Yu et al., 2000). Pentru ca markerii s fie mult mai utili n
programele de ameliorare, ei trebuie s aib un polimorfism relevant n diferite populaii
derivate, dintr-un sortiment larg al diferitelor genotipuri parentale (Langridge et al., 2001).
2.8.2 Conversia markerilor
Sunt dou situaii n care markerii necesit a fi convertii ntr-un alt tip de markeri
i anume: 1). cnd exist probleme cu reproductibilitatea (exemplu RAPDs) i 2).cnd
tehnica de cartare a mrkerilor este complicat, cernd mult timp, sau costuri ridicate
(exemplu RFLPs, sau AFLPs).













Figura 13. Identificarea markerilor adiionali ntre Q i R pe cromozomul 4 i regiuni
cromozomale int SCARs, ntre V i W pe cromozomul 5;
http://www.mendely.com/inter; http://wwwspringelink.com

Markeri adiionali au fost folosii pentru a umple golul ntre markerii deja fixai.
Identificarea markerilor adiionali n vecintatea QTLs (spre exemplu ntre Q i R, a
cromozomului 4), poate fi util pentru MAS. Analizele segreganilor cantitativi sunt aplicate
la regiuni specifice cromozomale int, aa cum se vede n regiunile amplificate ale
203
secvenelor caracteristice SCARs de pe cromozomul 5 (ntre V i W), sau secvene de
situri markate (STSs) derivate din clonarea i secvenializarea markerilor specifici RAPD
(fig. 13) (Jung et al., 1999; Paran & Michelmore, 1993). Markerii SCARs sunt viguroi i
credibili. Aceti markeri detecteaz un singur locus, care este probabil unul codominant
(Paran & Michelmore, 1993). Markerii RFLP i AFLP pot fi convertii de asemenea n
markeri SCARs sau STS (Lehmensiek et al., 2001; Shan et al.,1999). Tehnica folosirii
markerilor PCR, care sunt convertii din markeri RFLP sau AFLP este relativ simpl i mai
ieftin. La rndul lor, markerii STS pot i ei transferabili la specii nrudite (Brondani et al.,
2003; Lem & Lallemand, 2003).

TEST DE EVALUARE

1. Cum sunt create populaiile NILs (near isogenic lines)?
Rspuns:



2. Care sunt metodele care scurteaz drumul spre identificarea markerilor care
urmresc QTL?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Confirmarea markerilor implic:
a. testarea siguranei markerilor n predicia fenotipului
b. conversia unui tip de markeri ntr-un alt tip de markeri
Rezolvare: a
De rezolvat:
2. Identificarea markerilor adiionali , n vecintatea QTLs:
a. sunt utili pentru MAS
b. nu sunt utili pentru MAS
Rezolvare:


Populaiile NILs sunt create prin ncruciarea printelui donor care posed caracteristica
specific, cum este spre exemplu rezistena la boli, cu un printe recurent, care poate fi o
elit, sau un soi.
204
2.9. Ameliorarea plantelor asistat de markeri
O component important a ameliorrii plantelor, este aceea c plantele selectate n
descendena segregant trebuie s conin combinaia potrivit de gene (Ribaut&Betran,
1999; Weedenet al., 1994). Foarte muli amelioratori de plante, lucreaz cu cteva sute
pn la dou mii de plante n populaie i uneori i mai multe (Ribaut & Betran,
1999;Witcombe & Virk, 2001).
Markerii care asist selecia, cunoscui i ca markeri care asist ameliorarea
plantelor, sau markeri care ajut selecia, sporesc eficiena i eficacitatea metodelor de
ameliorarea plantelor, comparativ cu metodele convenionale.
Unii dintre markerii strns linkai cu gene QTLs de interes, pot fi identificai n
cmp, prin evaluarea unui numr mare de plante. Amelioratorii pot folosi markeri ADN,
respectiv alele specifice, ca instrumente pentru identificarea plantelor care poart gene
QTLS de interes (Michelmore,1995; Ribautetal, 1997; Young,1996).
Unul dintre cele mai importante avantaje ale folosirii MAS, este acela c salveaz
prin substituie un ntreg complex de teste aplicate n cmpul de selecie, care trebuie s fie
fcute obligatoriu ntr-un anume timp i ntr-un anume loc sau cu tehnici complicate.
Substituia testelor din cmp se face cu teste moleculare, eliminndu-se astfel
evalurile fenotipice mai puin concludente, din cauza interaciei cu condiiile de mediu.
Selecia dup genotip, a plantelor aflate n cmpul de selecie, piramidnd sau combinnd
simultan multiple gene, evit transferul unor gene nedorite, sau duntoare, cum ar fi cele
rezultate prin linkage dragat, datorate implicrii genelor de la speciile slbatice, sau se
evit selecia nefezabil, pentru caracteristici cu heritabilitate redus, (exemplu, pentru
prevenirea folosirii n screening a patogenilor exotici restricionai prin reguli de
carantin).


205


Figura 14. Markeri care asist piramidarea genelor de rezisten. Selecia
homozigoilor n generaia F2; http://www. training.irri.org; www.knoledgebankirri.org

Piramidarea este procesul prin care se combin ntr-un singur genotip, simultan mai
multe gene QTLs (fig. 14). n fig. 15, este prezentat schema pentru selecia ntr-o
generaie timpurie folosit n programul de ameliorare pentru rezistena la boli (adaptare
dup Ribaut & Hoisington,1998; Ribaut & Betran, 1999). Printele susceptibil (S) este
ncruciat cu printele rezistent (R). n generaia F1, plantele sunt autopolenizate pentru a
se produce generaia F2. n diagram se indic cu ajutorul sgeilor markerii robuti pentru
QTL major care controleaz rezistena la boli. Prin utilizarea markerilor care asist
selecia, amelioratorii substituie o mare parte din testele fcute n cmp, elimin multe
genotipuri nedorite (indicate prin cruciulie) i rein doar acele plante care au genotipul
dorit (indicat cu sgei). De notat c 75% din plante pot fi eliminate dup un ciclu al
aplicrii MAS (fig. 15).
206


Figura 15. Schema seleciei n generaia timpurie asistat de markeri, MAS,
comparativ cu selecia prin metoda clasic, pedigree; http://www. training. irri. org,
www.knoledge bank irri.org

Aceast etap este foarte important, deoarece amelioratorii folosesc largi populaii, de
peste 2000 indivizi n F2, ce descind din sute i chiar mii de ncruciri realizate ntr-un
singur an.
Una dintre cele mai comune ntrebri care se pune, este urmtoarea: Cte caracteristici
cantitative pot fi controlate de un minim QTLs i cte gene QTLs, pot fi tipic selectate
pentru MAS?
Teoretic, toi markerii care sunt strns linkai de QTLs, pot fi folosii pentru MAS. n
orice caz, n funcie de costul aplicrii unor QTLs, doar markerii care sunt strns linkai de
trei i nu mai mult de trei QTLs, sunt utilizabili (Ribaut & Betran, 1999 citai de
C.Y.Collard, M.Z.Z. Jahufer, J.B.Brouwer& E.C.K. Pang, 2005).
n acest sens, este de menionat c la tomate numrul maxim este de 5 QTLs legai cu
MAS (Lecomte et al., 2004; Elena Albrecht, aus Detmold, 2008 ).
Chiar dac se face selecia unui singur QTLs, pentru MAS, metoda este benefic pentru
ameliorare, astfel c QTLs poate conta ntr-o proporie larg a varianei fenotipice pentru
207
caracteristica studiat (Ribaut&Betran, 1999; Tanksley,1993). Mai mult de att, toi QTLs
selectai pentru MAS, trebuie s fie stabili.
2.10 Costuri i beneficii ale analizelor MAS
Costurile metodelor sau instrumentelor de lucru folosite n ameliorarea plantelor
sunt definitorii pentru alegerea ntre metodele convenionale i cele bazate pe MAS.
Factorii care influeneaz costurile folosirii markerilor includ metodele de evaluare
fenotipic n cmp sau n sere, costurile de dotare a laboratoarelor i costurile pentru
resurse. n unele cazuri, metodele de screening sau cernere dup fenotip pot fi mai ieftine
dect metodele de selecie bazate pe markeri moleculari i atunci sunt folosite preferenial
metodele convenionale (Bohn et al.,2001; Dreher et al., 2003). n alte cazuri, cum sunt
acelea n care se consum mult timp i costuri ridicate pentru probe i teste, metodelor
convenionale le sunt preferate folosirea markerilor care asist selecia.
Unele studii cu referire la markerii investigai pentu rezistena la boli, arat c metodele
MAS, sunt mai ieftine dect cele convenionale (Yu et al., 2000). Ceea ce trebuie ns
subliniat, este c totui, costurile pentru iniierea i dezvoltarea acestor metode sunt
ridicate. O estimare a costului, pentru organizarea i efectuarea cercetrilor n scopul
evidenierii unui singur marker, au fost n 2001 de 100.040 $ (Langridge et al., 2001 citai
de B.C.Y. Collard, M.Z.Z. Jahufer, J.B. Brouwer& E.C.K. Pang, 2005).
2.11 Markeri care asist ameliorarea plantelor prin backross
Folosind metodele convenionale de ameliorare, trebuie s fie parcurse 6-8
generaii backross pentru a fi refcut genomul printelui recurent.
n generaia BC1, descendenii au 75% din genomul printelui recurent. Unii dintre
indivizi pot avea chiar mai mult din genomul recurent. De aceea, dac markerii care
flancheaz QTL sunt strns linkai cu acesta i n mod regulat markerii spaiai n ali
cromozomi (nelinkai cu QTL), provenii de la printele recurent sunt folosii pentru
selecie, introgresiunea, de QTLs, respectiv formarea de noi gene QTLs, ca urmare a
hibridrii de tip backross i refacerea genomului printelui recurent poate fi accelerat.
Acest proces se numete markeri care asist backrossul.

208

Figura 16. Graficul PLABSIM (Frisch et al., 2000), al simulrii pe computer a
genomului printelui recurent (RPG), refcut prin utilizarea markerilor care asist
backross (MAS) i metodele convenionale. Folosirea markerilor poate conduce la
reducerea numrului de generaii cerut pentru atingerea proporiei genomului
printelui recurent, (indicat prin linie punctat); http://www.mendely.com/inter;
http://wwwspringelink.com

Utilizarea markerilor adiionali pentru a accelera obinerea de noi cultivare, se
refer la full MAS, sau MAS total, sau linii complete de conversie(Morris et al., 2003;
Ribaut et al., 2002).
Sunt de asemenea studii de simulare a recombinrilor n timpul meiozei, care
folosesc programul de computer PLABSIM, studii care indic c eficiena refacerii
genomului printelui recurent prin folosirea markerilor, este mai mare dect prin folosirea
metodelor convenionale de backrossare (fig. 16) (Frisch et al., 1999, 2000 citai de B.C.Y.
Collard, M.Z.Z. Jahufer, J.B. Brouwer& E.C.K. Pang, 2005).

TEST DE EVALUARE

1. Care sunt situaiile n care un tip de markeri necesit a fi convertii ntr-un alt tip
de markeri?
Rspuns:

2. Care sunt metodele care scurteaz drumul spre identificarea markerilor care
urmresc QTL?
Un tip de markeri necesit a fi convertii ntr-un alt tip de markeri atunci cnd: 1). exist
probleme cu reproductibilitatea (exemplu RAPDs) i 2). cnd tehnica de cartare a
markerilor este complicat cernd mult timp sau costuri ridicate (exemplu RFLPs, sau
AFLPs) .
209
Rspuns:
2.12 Tendine de folosire n viitor a cartrii QTL
Cu toate c sunt numeroase studii de cartare QTLs, pentru un larg sortiment de
caracteristici, ale unor diverse specii de cultur, relativ puini markeri au fost implementai
n programe de ameliorare (Young, 1999, citat de C.Y.Collard, M.Z.Z. Jahufer,
J.B.Brouwer& E.C.K. Pang, 2005).
Principala cauz a neadoptrii markerilor studiai este lipsa de ncredere pentru
predicia fenotipului dorit. n multe cazuri, aceasta se ntmpl datorit nerecunoaterii
acurateei studierii cartrii QTLs, sau unei confirmri neadecvate (Sharp et al., 2001;
Young, 1999). Cu toate acestea exist un optimism precaut al cercettorilor lideri n
domeniu, cu privire la rolul MAS n viitorul apropiat al ameliorrii plantelor. n anul 1999,
Young, citat de B.C.Y. Collard n 2005, (Department of Biotechnology and Environmental
Biology, RMIT University, P.O. Box 71, Bundoora, Victoria 3083, Australia), arta dou
dintre raiunile pe care se bazeaz acest optimism precaut: 1). dezvoltarea software
pentru cartare, bazat pe puternice metode statistice, 2). adoptarea unor strategii inovative i
eficiente pentru introducerea MAS n programele de ameliorare. Metodele statistice sunt
un important component al studiilor de cartare i dup anul 2000 mai ales, progresele au
fost considerabile n acest domeniu (Doerge, 2002).
Un important pas n studierea integrrii efective a MAS n ameliorarea plantelor, a fost
propunerea ca metod de ameliorare a backrossului avansat (fig. 17).


Figura 17. Integrarea MAS n Backross avansat; http://www.mendely.com/inter;
http://wwwspringelink.com
210

Lecia nvat din cercetrile trecute, ncurajeaz pe muli cercettori n biologia i
genetica molecular s dezvolte markeri credibili i pe amelioratori s adopte MAS.
Dup anul 2000, este cunoscut o nou dezvoltare i mbuntire a tehnologiei
markerilor, a integrrii genomului funcional cu cartarea QTLs i utilitatea a multor hri
de mare densitate. Noile tipuri de markeri i tehnicile complete, joac un rol important n
construcia hrii generaiei secunde, cu condiia ca aceast metod s nu fie prea scump.
Datorit abundenei depistrilor a cte unui singur nucleotid polimorfic (SNPs) i
dezvoltarea sistemului sofisticat de detecie SNP, studiile din anii 2002-2003 (Rafalski,
2002; Koebner &Summers, 2003) i de dup aceti ani, au artat c markerii SNP, au o
mare influen n studiile actuale i de viitor ale MAS. n ultimii ani, metodele pentru
detecia i analiza unui larg numr de markeri, au nceput s fie mai rapide i mai
sofisticate, unele dintre ele fiind automatizate ( B.C.Y. Collard et al, 2005). Un exemplu
privind eficientizarea metodelor de depistare a markerilor, sunt analizele PCR, care sunt
capabile s testeze simultan loci multipli.
n mod curent ns, costurile sunt un factor limitativ al implementrii MAS. Se
estimeaz c pe msur ce vor fi aplicate noile tehnologii i programele de ameliorare vor
folosi tot mai muli markeri, costurile vor fi implicit mai mici (Dreher et al., 2003).
Ultimele curente n domeniu, sunt acelea de a combina cartarea QTL cu metode din
genomica funcional, dezvoltate pentru studiul expresiei genelor. Aceste tehnici includ
expresarea secvenelor markate, sau etichetate, EST (expressed sequence tag) i analize
microarray, care pot fi utilizate pentru a depista markeri din nsei genele secvenializate
(Gupta et al., 2001; Morgante & Salamini,2003). Utilizarea genelor secvenializate deriv
din ESTs, sau gene analog, descrise ca gene candidat accesibile, care au o mare influen
asupra identificrii genelor care controleaz caracteristicile dorite (Cato et al.,2001;
Pieger et al., 2001).
Aceste metode pot fi de asemenea folosite pentru identificarea SNPs (Rafalski,
2002). Expresarea secvenelor markate EST i markerii SNP sunt curent integrai n hrile
existente care conin locaia QTLs determinat (Hayashi et al,2004; Ishimaru et al, 2001;
Skiba et al, 2004; Wang et al, 2001; Zhang et al., 2004). Mai mult de att, numrul EST i
secvenele genomice folositoare n baza de date, cresc cu rapiditate (n special n proiectele
de secvenializare a genomului, cum este cel de orez) i acumularea acestor secvene este
deosebit de util pentru descoperirea SNPs i exploatarea datelor pentru identificarea de
noi markeri n viitor (Gupta et al., 2001; Kantety et al., 2002).
211
Dezvoltarea hrilor de mare densitate (sau saturate), care ncorporeaz SNPs, EST-
markeri derivai i STSs, furnizeaz cercettorilor un arsenal de mijloace, unelte, sau
instrumente, pentru cartarea QTLs i MAP. Este de subliniat c hrile comparative se vor
extinde n practic (Laurie & Devos, 2002). Utilitatea hrilor de mare densitate este
recunoscut prin consens, ea facilitnd construirea de noi hri i cartarea regiunilor
cromozomale specifice (Chalmers et al., 2001; Harker et al.,2001; Karakousis et al., 2003;
Lefebvre et al., 2002; Lombard & Delourme, 2001). Hrile comparative pot fi folosite
pentru a face noi progrese n cartarea QTLs la specii nrudite. Spre exemplu, markerii
depistai la orez pot fi folosii pentru a identifica noi markeri sintetici la orz (Han et al,
1998, Perovic et al, 2004) i la gru (Liu & Anderson, 2003). Mai mult, acest mod de
abordare poate fi utilizat pentru a mbunti producia unei specii neglijate sau orfane,
cum este meiul.
Este de ateptat ca dezvoltarea hrilor de mare rezoluie s nlesneasc izolarea
actualelor gene (mai degrab markeri), pe calea cartrii bazate pe clonare, de asemenea
poziionarea clonrii. Harta bazat pe clonare, include folosirea markerilor strns linkai,
pentru a izola gene int, utiliznd markerii ca sond a cernerii bibliotecii de gene
(Tanksley et al., 1995; Meyer et al., 1996).
Identificarea genelor care controleaz caracteristici importante permite
cercettorilor genetiti i amelioratori de plante s prevad genele funcionale, s izoleze
homologi i s conduc experimente cu plante transgenice. Pentru a spori eficiena MAS,
cunoaterea secvenelor ADN, face posibil designul unui diagnostic bun a localizrii
markerilor fa de gena secvenializat, eliminnd astfel posibilitatea recombinrii ntre
marker i gen (Ellis et al., 2002; Ogbonnaya et al., 2001). Totui, secvenele ADN pentru
majoritatea genelor care controleaz importante caracteristici agronomice, rmn nc
necunoscute.
Pe termen mediu (muli din anii care vor veni de acum nainte), cercettorii din
domeniul geneticii i ameliorrii plantelor vor continua s utilizeze pentru selecia
caracteristicilor agronomice dorite, cartarea QTLs i markeri linkai cu gene int de
interes.

REZUMATUL TEMEI NR. 2 (Capitol 3)

Sunt folosite trei metode pentru detectarea QTL i anume: 1). analiza unui singur
marker; 2). intervalul simplu de hart; 3). intervalul de hart compus.
212
n termeni convenionali, QTLs poate fi clasificat astfel: 1) sugestiv, 2)
semnificativ, 3) foarte semnificativ. Nivel semnificativ i foarte semnificativ al QTLs a
fost gsit la probabilitatea de 5% i 0,1%, pe cnd QTL sugestiv este ateptat a se petrece
n QTL cartat randomizat. Programul de cartare Map Manager QTX, reprezint rezultatele
cartrii QTL cu aceast clasificare.
Nu exist valoare absolut pentru numrul de markeri ADN, cerut pentru harta
genetic, numrul de markeri variind cu numrul i lungimea cromozomilor n organism.
Pentru detectarea QTLs, studiile preliminare ale hrii genetice conin ntre 100 i 200
markeri.
Puterea de detectare a QTL, poate fi virtual asemntoare pentru markerii spaiai la
10 cM, att pentru un numr infinit de markeri ct i doar pentru un singur marker.
Pentru corelarea informaiei dintr-o hart cu informaia dintr-o alt hart, sunt necesari
markeri, comuni ambelor hri. Markerii comuni care sunt polimorfici ntr-un nivel ridicat,
sunt numii markeri anchor sau cor. Markerii anchor sunt tipic SSR sau RFLP.
Grupurile specifice de markeri anchor, care sunt localizai n regiuni specifice ale
genomului, la 10-20 cM de-a lungul cromozomilor, sunt folosite la integrarea hrii.
Studierea asemnrii sau a diferenelor ntre markerii unor genuri i specii de plante
se realizeaz prin compararea hrilor, ceea ce implic analizarea extinderii i a
conservrii, n interiorul hrilor a markerilor colineari, n msura n care acetia se gsesc.
Aceast conservare se refer la sintenie, respectiv la localizarea a dou - trei gene pe
acelai cromozom. Harta comparativ poate s localizeze QTL n diferite populaii cartate,
poate asigura o indicaie privind polimorfismul markerilor i grupurile linkage coninute,
ordinea markerilor inclui n diferitele hri, sau poate s dea o imagine asupra relaiilor
evoluioniste n cadrul unor taxoni.
Sunt muli factori care influeneaz detectarea segregrii QTLs n populaie, dintre
care cei mai importani sunt: 1). proprietatea genetic a QTLs, de a controla caracteristici,
2). efectul mediului asupra exprimrii caracteristicilor, 3). mrimea populaiei i 4). erorile
experimentale.
Un alt mod de abordare a experimentelor pentru confirmarea QTLs, este acela de a
studia populaii denumite lng linii izogenice NILs (near isogenic lines). NILs sunt
create prin ncruciarea printelui donor, cum ar fi spre exemplu un printe slbatic (din
flora spontan) care posed caracteristica specific de interes (ex. rezistena la boli), cu un
printe recurent (ex. o elit, soi, sau cultivar).
213
Exist dou metode ce scurteaz drumul spre identificarea markerilor care urmresc
QTL: 1). analizele segreganilor cantitativi BSA i 2). genotiparea selectiv. Ambele
metode solicit cartarea populaiilor. Tehnicile RAPD sau AFLP care pot genera markeri
multipli dintr-o singur prob ADN, sunt n general preferate pentru BSA.
Metoda genotiprii selective este cunoscut i sub denumirea de analizele extremei
distribuii sau caracteristici bazate pe analizele markerilor. Aceast metod implic selecia
indivizilor din populaii analizate pentru caracteristici extreme sau cu succesiune limitat.
Dezavantajul acestei metode este acela c nu este eficient pentru determinarea efectelor
QTLs i c este testat doar o singur caracteristic, deoarece indivizii selectai pentru
valori fenotipice extreme ale unei carcteristici nu au valori fenotipice extreme i pentru alte
caracteristici. De aceea, trebuie folosit metoda intervalului de hart, care folosete ca
informaie valorile a doi markeri flancai pentru a estima poziia QTLs. Frecvena
recombinrilor reflect distana de hart.
Sunt totui unele dezavantaje ale folosirii intervalului de hart i anume: nu poate s
rezolve doi QTLs n intervalul de hart, dei pragurile LOD sunt foarte ridicate, prea muli
QTLs sunt declarai, ignor epistasia, nu prezint precizie pentru QTL cu efecte mici,
deoarece nu sunt nc metode eficiente.
Cartarea cu nalt rezoluie a QTLs, poate fi folosit pentru identificarea markerilor
credibili, care asist selecia cu distana ntre gene, acceptabil, respectiv < 5 cM, dar ideal
este ns ca aceast distan s fie <1cM i pentru identificarea diferenierii ntre o singur
gen i cteva gene linkate.
Populaia care se folosete pentru acest tip de hart, va conine frecvena f >1000 de
indivizi, ceea ce garanteaz distana ntre genele flancate i QTLs<1 cM.
Selecia plantelor asistat de markeri (MAS), este o metod prin care fenotipul este selectat
pe baza genotiprii markerului. n general, paii cerui pentru identificarea markerilor
folosii n programele MAS impun: 1). o rezoluie ridicat a cartrii, 2). confirmarea
markerilor, 3). posibila conversie a markerilor.
Sunt dou situaii n care markerii necesit a fi convertii ntr-un alt tip de markeri
i anume: 1). cnd exist probleme cu reproductibilitatea (exemplu RAPDs) i 2). cnd
tehnica de cartare a markerilor este complicat, cernd mult timp, sau costuri ridicate
(exemplu RFLPs, sau AFLPs).
Unul dintre cele mai importante avantaje ale folosirii MAS, este acela c salveaz
prin substituie un ntreg complex de teste aplicate n cmpul de selecie, care trebuie s fie
fcute obligatoriu ntr-un anume timp i ntr-un anume loc sau cu tehnici complicate.
214
Selecia dup genotip, a plantelor aflate n cmpul de selecie, piramidnd sau combinnd
simultan multiple gene, evit transferul unor gene nedorite, sau duntoare, cum ar fi cele
rezultate prin linkage dragat, datorate implicrii genelor de la speciile slbatice, sau se
evit selecia nefezabil, pentru caracteristici cu heritabilitate redus, (exemplu, pentru
prevenirea folosirii n screening a patogenilor exotici restricionai prin reguli de
carantin).
Utilizarea markerilor adiionali pentru a accelera obinerea de noi cultivare, se
refer la full MAS, sau MAS total, sau linii complete de conversie (Morris et al., 2003;
Ribaut et al., 2002).
Sunt de asemenea, studii de simulare a recombinrilor n timpul meiozei, care
folosesc programul de computer PLABSIM, studii care indic c eficiena refacerii
genomului printelui recurent prin folosirea markerilor, este mai mare dect prin folosirea
metodelor convenionale de backrossare.
Se estimeaz c pe msur ce vor fi aplicate noile tehnologii i programele de
ameliorare vor folosi tot mai muli markeri, costurile vor fi implicit mai mici. Ultimele
curente n domeniu, sunt acelea de a combina cartarea QTL cu metode din genomica
funcional, dezvoltate pentru studiul expresiei genelor. Aceste tehnici includ expresarea
secvenelor markate, sau etichetate, EST (expressed sequence tag) i analize microarray,
care pot fi utilizate pentru a dezvolta markeri din nsei genele secvenializate.
Pe termen mediu (muli din anii care vor veni de acum nainte), cercettorii din domeniul
geneticii i ameliorrii plantelor vor continua s utilizeze pentru selecia caracteristicilor
agronomice dorite, cartarea QTLs i markeri linkai cu gene int de interes.

TEST RECAPITULATIV PENTRU TEMA NR. 2 (Capitol 3)

1. Pentru detectarea QTLs, studiile preliminare ale hrii genetice conin :
a. 500 markeri
b. 1000 markeri
c. ntre 100 i 200 markeri
2. Markerii anchor, care sunt localizai n regiuni specifice ale genomului, la 10-20 cM
de-a lungul cromozomilor, sunt folosii la
a. integrarea hrii linkage
b. construirea hrii linkage
3. Selecia dup genotip, a plantelor aflate n cmpul de selecie se realizeaz:
215
a. piramidnd multiple gene
b. combinnd simultan multiple gene
4. Markerii care asist selecia plantelor n programele de ameliorare pot fi
confirmai prin testarea:
a. eficacitii lor n determinarea fenotipului int n populaii independente i diferite
fonduri genetice
b. prezenei lor n genomul unor cultivare sau a unor alte genotipuri importante
5. O component important a ameliorrii plantelor, este aceea c:
a. plantele selectate n descendena segregant trebuie s conin combinaia potrivit de
gene
b. plantele selectate trebuie s conin gene multiple
6. n funcie de costul aplicriii QTLs, sunt utilizabili:
a. doar markerii strns linkai de mai mult de trei QTLs
b. doar markerii strns linkai de trei QTLs
7. Utilizarea markerilor adiionali pentru a accelera obinerea de noi cultivare, se
refer la
a. full MAS
b. MAS total
c. linii complete de conversie
8. Tehnicile moderne de combinare a cartrii QTLs cu metode din genomica
funcional, folosite pentru studiul expresiei genelor include:
a. analize microarray
b. utilizarea genelor secvenializate pentru a dezvolta markeri
c. analize microarray pentru a depista markeri din gene secvenializate

Bibliografie selectiv
1. Jrme Bernier, Gary N. Atlin, Rachid Serraj, Arvind Kumar and Dean Spaner, Review:
Breeding upland rice for drought resistance,2008, PDF, http://online library.wiley.com
2. B.C.Y. Collard, M.Z.Z. Jahufer, J.B. Brouwer & E.C.K. Pang, 2005, An introduction to
markers, quantitative trait loci (QTL) mapping and marker-assisted selection for crop
improvement: The basic concepts, Euphytica (2005) 142: 169196 DOI: 10.1007/s10681-
005-1681-5, www.researchgate.net/publication/226925645, www.springerlink.com
3. Daryl L. Klindworth, Zhixia Niu, Shiaoman Chao, Timothy L. Friesen, Yue Jin, Justin
D. Faris, Xiwen Cai, and Steven S. Xu, 2012, Introgression and Characterization of a
216
Goatgrass Gene for a High Level of Resistance to Ug99 StemRust in Tetraploid Wheat G3
Genes/ Genomes/Genetics.vol 2, GSA http: // www. g3 journal.org / content 2/ 6/ 665 full
4. Dipak K. Santra, Mucella Tekeoglu, MiLind Ratnaparkhe, Walter J. Kaiser, and Fred J.
Muehlbauer, 2000. Identification and Mapping of QTLs Conferring Resistanceto
Ascochyta Blight in Chickpea, Journal Crop Science,CROP SCI VOL 40
http://academic.research.microsoft.com /Paper / 10699078
5. Inga Schmalenbach, Timothy J. March, Thomas Bringezu, Robbie Waugh, and Klaus
Pillen, 2011, High-Resolution Genotyping of Wild Barley Introgression Lines and Fine-
Mapping of the Threshability Locus thresh-1 Using the IlluminaGoldenGate Assay G3
Genes/ Genomes/Genetics.vol 2, GSA http:// www. g3 journal.org / content/1/3/187 full;
6. C Tom Hash, 2002, Contiguous segment substitution lines: New tool for elite pearl
millet hybrid parental lines enhancement http://www.researchintouse.com /nrk /RIU info
/outputs /R7382_FTR.pdf
7. Felix Marza, Guihua Bai, and Brett F. Carver, 2005,MAPPING QUANTITATIVE
TRAIT LOCI FOR QUALITY FACTORS IN AN INTER-CLASS POPULATION OF
U.S.AND CHINESE WHEAT http://digital.library.okstate.edu /etd/umi-okstate-1248.pdf
8. .Young N.D., 1996, QTL maping and Quantitative disease resistance in plant,AnnuRev-
Phytopathol 34479-501, http://www. Gate way.isknowledge.com
9. http://www.high learn.com
TEMA NR. 3 (Capitol 3)
NOI TEHNICI DE CARTARE A GENOMULUI PLANTELOR N SCOPUL
DEPISTRII MARKERILOR GENETICI CARE ASIST SELECIA

Uniti de nvare
Particulariti ale markerilor moleculari folosii n evaluarea materialului
genetic n curs de ameliorare fa de markerii fenotipici tradiionali
Tipurile de markeri moleculari aplicabili actual n ameliorarea plantelor
Tipurile de populaii ale plantelor folosite pentru cartarea molecular
Tehnicile folosite n era genomic pentru a cerne rapid un mare numr de probe
pentru cartare.
Obiective
1. Cunoaterea tehnicilor actuale de cartare a genomului plantelor, care se aplic n
ameliorarea plantelor
217
2. nsuirea diferitelor tehnici de genetic molecular, pentru depistarea
polimorfismului locilor de interes n ameliorarea plantelor.

Timpul alocat temei: 4 ore
Bibliografie recomandat:
1.Viorica Blan , 2008. Genetica Plantelor, Editura ALPHA MDN, ISBN-978-973-139
2.http://www.pioneer.com/pv_obj_cache/pv_obj_id_ADF6E20FC9D7467B07DBDB4131
2D57213BF40700/filename/MolecularMarkers.pdf

3.1. Secvenializarea PCR ( Polymerase Chain Reaction)
Procesul determinrii ordinei bazelor nucleotidice de-a lungul spiralei ADN, este
cunoscut ca secvenializare ADN, ceea ce ne face capabili ca prin analizele ADN s avem
informaii asupra ordinei exacte a bazelor, A-Adenin, T-Timin, C-Citozin i G-
Guanin, n segmentul de ADN a plantei de intres n ameliorare. n anul 1974, o echip de
cercettori americani condus de Maxam i Gilbert i o alta de cercettori englezi, condus
de Sanger, au dezvoltat dou metode de analize a secvenelor ADN. Dei ambele echipe au
fost premiate cu premiul Nobel n anul 1980, mai larg folosit este metoda echipei de
cercettori englezi condus de Sanger. Aceast metod produce degradarea chimic a
terminaiei lanului ADN i are ca design reproducerea procesului natural de replicare
ADN. Metoda Sanger a fost standardizat, datorit faptului c prin secvenializarea PCR,
orice regiune genomic a plantelor poate fi amplificat i analizat individual fr a
necesita clonarea i izolarea unei mari cantiti de ADN pur genomic (Schltterer, 2004
citat de P. Kumar, V.K. Gupta, A.K. Misra, D. R. Modi and B. K. Pandey, 2009).
Secvenializarea PCR, implic determinarea secvenelor de nucleotide din fragmente ADN
amplificate de PCR, folosind primeri specifici pentru un sit particular al genomului
analizat. Metoda Sanger este astzi mult folosit pentru a determina secvenele de
nucleotide la plantele n curs de ameliorare, bazndu-se pe terminaiile replicrii ADN in
vitro.
Procedura este iniiat prin nclzirea primerului din fragmentul ADN amplificat,
urmat de dividerea i amestecarea a patru subprobe. Ulterior, ADN este replicat in vitro
prin adugarea a patru deoxinucleotide (adenin-d A, citozin-d C, guanin-d G, i timin-
d T), o singur didenucleotid (ddA, ddC, ddG or ddT) i enzima ADN polimeraza pentru
fiecare reacie. Secvenializarea se petrece pe lungimea noii spirale insesizabile de ADN, n
care au fost ncorporate dideoxinucleotidele. Deoarece fiecare reacie conine multe
218
molecule de ADN i ncorporarea dideoxinucleotidelor decurge randomizat, fiecare din
cele patru subprobe conine fragmente ale variatelor lungimi terminale, particularizate n
funcie de dideoxibaza folosit n subprob. n final, fragmentele celor patru subprobe sunt
separate prin metoda Sanger, a gel electroforezei terminaiilor lanului ADN.

3.2 Tipurile de markeri moleculari folosii n ameliorarea plantelor
n ultimele cteva decade, folosirea markerilor moleculari, care relev
polimorfismul ADN, a jucat un rol important n dezvoltarea studiilor de genetic i de
biotehnologie cu aplicabilitate n ameliorarea plantelor. Dup cum cunoatem, markerii
folosii n predicia genotipului i a fenotipului plantelor pot fi morfologici, biochimici i
mai nou markeri moleculari, sau markeri ADN. Cei mai folosii markeri ADN, sunt de
dou tipuri i anume: 1). markeri non PCR, RFLP i 2). markeri PCR sau microsatelii, din
care fac parte markerii RAPD, AFLP, SSR, SNP. Markerii microsatelii sunt mult folosii
datorit tehnicilor simple PCR, urmate de denaturarea electroforetic pentru determinarea
mrimii alelelor i pentru un nalt grad de informare ce provine din numrul mare de alele
dintr-un locus.
Izozimele sunt markeri proteici. Tehnica este bazat n principal pe variaia alelic
existent ntre diferite proteine.
Pe lng aceti markeri, se ia tot mai mult n studiu un nou tip de marker numit SNP, ce
este folosit pentru polimorfismul unei singure nucleotide i care joac din ce n ce mai mult
un rol n ameliorarea plantelor, chiar dac este un tip de marker bialelic.
Zi de zi, dezvoltarea acestui nou i specific tip de markeri, joac un rol tot mai
important n nelegerea variabilitii genomice i implicit a biodiversitii plantelor n
cadrul aceleiai specii sau din specii diferite, aceasta fiind condiia esenial a evoluiei i
implicit a seleciei genitorilor i a noilor genotipuri i fenotipuri din descendena acestora.

3.2.1 Markerii RFLP
RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) sunt markeri moleculari non
PCR bazai pe hibridizarea difereniat a clonelor ADN sau a fragmentelor ADN n probele
enzimelor de restricie digerate ADNs, markerii fiind specifici pentru o singur clon
/combinaie a enzimei de restricie.
Markerii RFLP sunt definii ca i combinaii de probe ale enzimelor specifice. Primul
pas n analizele efectuate, este de a deriva setul de clone care poate fi folosit pentru
identificarea RFLPs. Clonele genomice care reprezint secvene randomizate, sunt cu
219
puine anse de a fi probe hibridizate, deoarece genomul plantelor consist ntr-un procent
ridicat de secvene repetate. Astfel, multe din clone vor conine secvene repetate i
hibridizarea cu aceste clone va genera benzi hibridizate greu de analizat genetic.
Sunt dou surse principale de clone pentru cartarea RFLP a plantelor i anume:
clonele cADN i PstI, respectiv clone derivate genomic. Aceste dou surse de clone sunt n
general gene expresate ntr-un numr mic de copii. Clonele cADN sunt copii ADN ale
genelor expresate. Clonele PstI se bazeaz pe faptul c genele expresate nu sunt metilate.
Este cunoscut c enzimele GCi GXC metilate, sunt cele mai proeminente forme de
metilare n plante. Enzima PstI ns, este uor C metilat i aceasta este cauza pentru care
aceast enzim va tia doar siturile nemetilate. Dac o gen va fi expresat, atunci secvena
ei nu va fi metilat i va fi susceptibil de a fi digerat de PstI. Datorit faptului c ea
conine o secven expresat, acest fragment va avea o mare probabilitate de a exista ntr-
un numr mic de copii.
Odat ce serii ale clonelor sunt obinute, ADN din genotipul parental este digerat cu o
serie de enzime i hibridizate cu clone. Unele din aceste hibridizri vor genera fragmente
de o singur mrime i nu sunt polimorfice. Alte hibridizri vor da o mostr distinct de
hibridizare pentru fiecare printe. Acest polimorfism are loc datorit faptului c secvenele
probelor sunt omoloage la fragmentele de restricie de diferite mrimi. Acele genotipuri
care sunt ridicat polimorfice sunt candidate ca prini din care poate fi obinut populaia
pentru a fi cartat.

3.2 2 Markerii RAPD
RAPD (Randomly Amplified Polymorphic ADN) sunt markeri moleculari bazai
pe amplificarea PCR a probei ADNs, difereniat din secvenele scurte de oligonucleotide.
Markerii RAPD au nceput a fi aplicai de curnd n ameliorarea plantelor i se
bazeaz pe amplificarea PCR a locusurilor randomizate amplasate n genomul plantelor.
Cu aceast tehnic, un singur nucleotid este folosit ca primer n amplificarea ADN
genomic. Pentru c acest primer are 10 nucleotide, el are posibilitatea de a anexa un numr
de locusuri din genom. Pentru a amplifica produsul obinut, legtura trebuie s fie invertit
la o secven cu o distan de 150-4000 perechi de baze. Numrul de produi amplificai
este direct legat de numrul i orientarea secvenelor care sunt complementare cu primerul
din genom.
Fazele amplificrii PCR a probei ADN la plante, n scopul depistrii markerilor
RAPD.
220
1. Izolarea ADN din indivizii de interes
2. Stabilirea condiiilor pentru amplificarea ADN din specia analizat
Scopul experimentelor RAPD este de a compara populaii. Acestea cer consecvena
surselor i a cilor folosite. Astfel va trebui s fim siguri c fiecare surs a ciclului va
produce acelai rezultat, dnd aceiai int ADN, aceiai concentraie a primerului i
dNTP. Fr acest control nu putem fi siguri c amplificarea polimorfismului este rezultatul
variabilitii populaiei sau variabilitatea ciclului.
3. Alegerea materialelor folosite n laborator pentru amplificarea ADN.
Se folodesc urmtoarele materiale i substane: 25 ng ADN, 200 mM Dntp, 200 u M
primer, 1,5 mM MgCl2, 1X Promega Taq polimeraza buffer, 1 unitate Taq polimeraza, 10
l overlaid cu 35 l ulei mineral
4. Amplificarea PCR
Sunt obligatorii n aceast faz urmtoarele temperaturi i timpi: 1 minut pentru
denaturare la temperatura de 94
0
C, 30 secunde pentru anexare la temperatura de 35
0
C i 2
minute pentru extensie, la temperatura de 72
0
C (P. E. Mc Clean, 2002).
Acest protocol se petrece de 45 de ori i dup aceea se completeaz cu o singur
extensie pentru 7 minute la 72
0
C.
5. Produii amplificai sunt separai n gel de agaroz 2%, care apoi sunt colorai i
fotografiai.
6. n final este evaluat variabilitatea n prezena sau absena produilor specifici de
amplificare.
Pentru cartarea RFLP, trebuie mai nti s determinm clona sau combinaia enzimei
de restricie, care este polimorfic ntre prini. Aceti primeri i condiiile prezentate
trebuie folosite pentru a amplifica i a evalua produii de segregare a populaiei.

3.2.3. Markerii AFLP
AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) sunt markeri generai de
combinarea enzimelor de restricie digerate i amplificarea PCR.
Amplified Fragment Length Polymorphism (AFLP), (Fragmente amplificate
polimorfice), este o clas mai recent a markerilor moleculari. Aceti loci sunt generai
folosindu-se procedura care combin digestia restrictiv cu amplificarea PCR. Fora acestei
proceduri const n posibilitatea de a genera un mare numr de loci ce pot fi cartai cu o
singur amplificare. Aceasta ajut s fie saturat regiunea genomului destul de repede.
221
Defectul este c procedeul este oarecum consumator de timp i cere nentreruperea gelului
cu secvene ADN.
Procedura AFLP
1. Digestia probelor ADN cu enzimele de restricie EcoRI i MseI
5'----GAATTCN------------------------NTTAA----3'
3'----CTTAAGN------------------------NAATT----5"
AATTCN------------------------NT
GN------------------------NAAT
2. Anexarea adaptorilor EcoRI i MseI la produii de restricie
??????AATTCN-------------------------NTTA??????
??????TTAAGN-------------------------NAAT??????
(?????? = secvene necunoscute care sunt unice pentru primerii companiei)
3. Preselecia produilor prin amplificarea PCR cu primerii
oligonucleotidelor "EcoRI + A" i "MseI +C" .
EcoRI Primer+A
????????AATTCN---------------------NTTA????????
????????TTAAGN---------------------NAAT????????
primer C+MseI
4. Amplificarea selectivitii preseleciei produilor PCR , folosind primerii
oligonucleotidelor "EcoRI + 3" i "MseI +3"
Primer EcoRI +AAC
????????AATTCA----------------------GTTA????????
????????TTAAGN----------------------CAAT????????
Primer AAC+MseI
5. Separarea fragmentelor denaturate, prin electroforez pe gel de poliacril
amid (P. E. Mc Clean, 2002).

3.2.4 Markerii STSs (Succesiunea situsurilor ataate)
Pentru multe laboratoare, sistemul markerilor moleculari nu este atractiv datorit
necesitii dezvoltrii laboratorului i a radioizotopilor. Succcesiunea situsurilor ataate,
poate deveni o acceptat alternativ a markerilor RFLP, deoarece se bazeaz pe PCR i nu
necesit probe radioactive. STSs se dezvolt prin primele secvene ale produsului final
RAPD, sau a clonelor folosite ca probe RFLP ( P. E. Mc Clean, 2002).
222
De la secvena informativ, primerii de oligonucleotide lungi de 18-20 de nucleotide,
ce sunt sintetizai, sunt complementari cu fiecare produs RAPD, sau clon.
Noii primeri sunt folosii pentru amplificarea ADN cu PCR. Pot s apar dou
rezultate. Unul, fiind mrimea produilor amplificai din diferii ADNs (spre exemplu, doi
prini ce difer pentru locusul rezistenei la boli), care pot fi polimorfici (P. E. Mc Clean,
R.K. Lee, C. Otto, P. Gepts and M. J. Basset, 2002). Alternativ, produii amplificai pot fi
monomorfici (de aceiai mrime).
n aceast situaie, va fi necesar s tiem produii cu diferite enzime de restricie,
pentru a identifica polimorfismul.
Deoarece primerii sunt mai lungi dect cei folosii pentru cartarea RAPD, reacia
PCR, poate fi activat cu o temperatur nalt. Aceast prob i schimb reacia datorit
temperaturii i rezult un patern specific amplificat care este foarte reproductibil de la
laborator la laborator.
Nu acelai este cazul folosirii tehnologiei RAPD.
Pentru c paternul este portabil i reproductibil de la un laborator la altul, este posibil
s se dezvolte mai mult n viitor markerii STSs, care s fac posibil amplasarea rapid a
oricrei gene n harta molecular comparat.
Mai nti este necesar s ne definim asupra a dou sau trei situri pare, STS, din
fiecare cromozom, la specia cu care vrem s lucrm. Apoi, oricnd noua gen este
identificat, se stabilete relaia linkage dintre aceste gene i fiecare din locii STS. Noile
gene vor fi cartate n intervalul a 25 cM, pentru unul din locii STS. Odat ce noua gen
este localizat n relaie cu STS, dup aceea vom recurge la cartarea RFLP sau RAPD i la
selecia probelor sau primerilor care ne vor permite s identificm markerii strns linkai
cu noile gene (P. E. Mc Clean, 2002, citat de Viorica Blan, 2008 ).

3.2.5 Markerii microsatelii sau SSR, (Simple secvene repetate) (Simple sequence
Repeat)
Termenul de microsatelii a fost introdus n 1989 de Litt & Lutty, citai de Kumar,
V.K. Gupta, A.K. Misra, D. R. Modi and B. K. Pandey, n 2009. Markerii microsatelii
SSR, sunt seciuni de ADN, constnd n repetarea n tandem a uniti de mono, di, tri, tetra
sau penta nucleotide care sunt regsite n ntreg cuprinsul genomului multor specii de
eucariote inclusiv a speciilor de plante (Powell et al. 1996, citat de Kumar, V.K. Gupta,
A.K. Misra, D. R. Modi and B. K. Pandey, 2009 ).
223
Microsateliii sunt potrivii pentru a face distincie ntre genotipurile strns nrudite, care
sunt preferate totui n studiul populaiilor datorit gradului ridicat al variabilitii genetice
(Smith & Devey, 1994), dar i n studiul cultivarelor strns nrudite (Vosman et al., 1992).
Polimorfismul microsateliilor poate fi depistat prin hibridizarea sudic sau PCR.
Deoarece microsateliii, ca i minisateliii, reprezint repetarea unor perechi de baze,
designul PCR poate fi conceput prin amplificarea unor secvene de 1-6 perechi de baze i
foarte adesea 20-25 perechi de baze.
Microsateliii i secvenele lor flancate pot fi identificate prin construcia bncii
genomice inserate, screening-ul bncii genomice cu oligonucleotide sintetice etichetate i
secvenializarea clonelor pozitive.
Alternativ, microsateliii pot fi identificai prin screening-ul bazelor pentru
secvenele microsateliilor, din care primerii pot fi apoi machetai i proiectai pentru specii
nrudite.
Expansiunea i contracia genelor repetate SSR ale unor funcii cunoscute, pot fi
folosite pentru asocierea cu variaii fenotipice sau cu funcii, caracteristici i nsusiri
biologice. Markerii SSR pot fi de asemenea utili pentru evaluarea variabilitii genetice a
speciilor, genurilor, cultivarelor i biotipurilor prezervate n coleciile genetice, condiie
esenial n procesul de ameliorare a plantelor ( Kumar, V.K. Gupta, A.K. Misra, D. R.
Modi and B. K. Pandey, 2009 ).

3.2.6 Single Nucleotide Polymorphism (SNP)
O nou clas de markeri ADN, numii SNP, poziia singurului nucleotid, a nceput
recent s fie mult preferat n studiile genomice. n fapt, dac n multe organisme o mare
parte a polimorfismului rezult din schimbarea poziiei unui singur nucleotid (mutaie
punctual), legat de dezvoltarea tehnicilor de studiere a polimorfismului unui singur
nucleotid, SNPs. Procedura analitic cere informaii ale secvenelor de baze, pentru a
proiecta primerii alelici PCR specifici, sau ale probelor de oligonucleotide SNP i
secvenele flancate pot fi construite i secvenializate sau pot fi realizate prin screening-ul
secvenelor de baz.
Odat ce locaia SNPs a fost identificat i primerii potrivii sunt proiectai, unul
din avantaje este marea posibilitatea a automatizrii.
Pentru a obine o prob complet, multiplicarea PCR i hibridizarea microarray, sau
automatizarea secvenializrii sunt adesea folosite pentru a detecta prezena SNPs.
224
Analizele SNP, pot fi utile pentru diferenierea cultivarelor n culturile n care este dificil
s fie depistat polimorfismul, aa cum este spre exemplu n cultura de tomate SNPs, poate
fi de asemenea folosit pentru a completa locusuri n harta linkage, n ordinea localizrii
relevante a caracteristicilor i nsuirilor n genom.
Spre exemplu, n harta linkage de mare densitate a speciei Arabidopsis thaliana, evidena
markerilor ADN a fost uoar dup ce SNPs a nceput s fie disponibil (Cho et al. 1999,
citat de Kumar, V.K. Gupta, A.K. Misra, D. R. Modi and B. K. Pandey, 2009 ).
Totui, datorit costurilor ridicate, markerii SNPs nu au devenit nc markeri de rutin.

3. 3 Markerii izozimici
Izozimele sunt markeri proteici. Tehnica este bazat n principal pe variaia alelic
existent ntre diferite proteine. Spre exemplu, alelele dehidrogenazei malice ar ndeplini
corect funcia enzimatic, dar e posibil ca mobilitatea electroforetic a ambelor variante
alelice s difere. De aceea, dou alele nu pot migra spre acelai loc n gel de amidon.
Procedeul de identificare a variaiei izozimice este simplu. Extractul proteic brut este
separat prin electroforez n gel de amidon. Gelul este dup aceea plasat n soluie care
conine agenii cerui pentru activitatea enzimatic a enzimelor monitorizate. n plus,
soluia conine resturi moarte rezultate din cataliza reactivului folosit pentru colorarea
proteinei. n acest mod variantele alelice ale proteinelor pot fi vizualizate n gel
electroforez.

3.4 Unele avantaje i dezavantaje ale celor mai cunoscui markeri moleculari pretabili
n ameliorarea plantelor
Muli dintre markerii moleculari sunt selectiv neutri. Acest avantaj nu implic ns
nevalabilitatea altor date obinute tradiional pentru caracterizarea biodiversitii, implicit
a biodiversitii resuselor genetice folosite n ameliorarea plantelor. Ba din contr, datele
obinute prin metode tradiionale pentru markeri morfologici i ecologici au o conotaie
practic pentru caracterizarea resurselor genetice. Markerii moleculari difer n multe
caracteristici. De aceea, cercettorii trebuie s fie foarte ateni n alegerea i analizarea
diferiilor markeri, bazndu-se pe avantajele i dezavantajele tehnicilor de evideniere i a
proprietilor markerilor respectivi, aa cum sunt descrise n tabelul 1.
Unii dintre markerii moleculari au un polimorfism ridicat, alii au ns un
polimorfism intermediar. Nivelul polimorfismului este important n alegerea markerilor i
acesta rezult din substituia, sau deleia unor baze, care modific primerii din siturile
225
nclzite i desigur recunoaterea enzimelor de restricie, sau schimbarea dimensiunii
fragmentului de restricie i a produilor amplificai
Tabel 1. Unele avantaje i dezavantaje ale celor mai cunoscui markeri moleculari
pretabili n ameliorarea plantelor
TIPUL
MARKERULUI
AVANTAJE DEZAVANTAJE
RFLP
(Restriction Fragment
Length Polymorphism)

-Abunden genomic
- Markeri codominani
-Reproductibilitate ridicat
-Filtrele pot fi folosite timp
ndelungat
-Acoper bine genomul
plantelor
-Poate fi folosit la descendene
obinute din ncruciare n
cadrul speciilor de plante
-Nu necesit informaii despre
secvene de baze nucleotidice
-Poate fi folosit la plante de
ncredere, bine testate
-Sunt necesari pentru hri
bazate pe clonare
-Necesit o mare cantitate de
ADN de calitate nalt
-Metod de detectare
laborioas, comparativ cu
RAPD
-Dificultate la automatizare
-Necesit marcarea
radioactiv.
- Necesit clonarea i
caracterizarea probelor.

RAPD
(Randomly Amplified
Polymorphic DNA)

-Abunden genomic ridicat
-Acoper bine genomul
plantelor
-Nu necesit informaii despre
secvenele de baze
-Ideal pentru automatizare
-Necesit o mic cantitate de
ADN de calitate acceptabil
-Nu necesit marcarea
radioactiv
-Metod relativ rapid
-Nu ofer informaii despre
primeri.
-Markeri dominani
-Nu sunt reproductibili
-Nu pot fi folosii n
interiorul speciilor de plante
-Nu sunt foarte bine testai

226
SSR
(Simple Sequence
Repeat)
-Abunden genomic
-Reproductibilitate ridicat
-Acoperire complet a
genomului
-Polimorfism ridicat
-Nu necesit marcare
radioactiv.
-Uor de automatizat
-Ofer informaii despre alele
multiple (caracteristici
cantitative)
-Nu pot fi folosii n
interiorul speciilor
-Necesit informaii despre
secvenele de baze
-Nu sunt nc bine testai
AFLP
(Amplified Fragment
Length Polymorphism)

-Abunden genomic
-Polimorfism ridicat
-Nu necesit informaii despre
secvene de baze
-Pot fi folosii la descendenele
din interiorul speciilor de
plante.
-Se lucreaz cu mici fragmente
RFLP
-Utili n construirea hrilor
secvenelor nvecinate
-Foarte neltori, datorit
schimbrilor produse n
patern, n relaie cu
materialele folosite.
-Nu conduc la construirea
hrilor de consisten.
-Necesit lucrul cu primeri
foarte buni
STS
(Sequence-Tagged
Site)
(Secvenializarea
siturilor repetate)

-Utili n construirea hrilor
siturilor apropiate
-Nu necesit marcarea
radioactiv
-Acoper complet genomul
-Reproductibilitate ridicat
-Pot fi folosite filtrele timp
ndelungat
-Metod laborioas
-Nu pot fi detectate mutaii
n afara siturilor repetate
-Necesit informaii despre
secvenele de baze.
-Se cere clonarea i
caracterizarea probelor

IZOZIME -Utile n studiile de evoluie a
speciilor de plante
-Izolarea este relativ mai uoar
-Metod laborioas
-Polimorfism limitat
-Este o metod scump,
227
dect a ADN.
-Pot fi folosite la descendenele
din interiorul speciilor de plante
-Nu necesit marcarea
radioactiv
-Nu necesit informaii despre
secvene de baze
fiecare sistem fiind unic
-Trebuie s se cunoasc
situaia esutului
-Nu este uor de automatizat

n alegerea tehnicii adecvate, nivelul polimorfismului detectat de markeri necesit a
fi considerat n relaie cu gradul prezumtiv de nrudire genetic a materialului biologic
studiat. O mare putere de decizie trebuie s existe atunci cnd probele provin de la plante
apropiat nrudite. Spre exemplu, analizele genetice ale descendenelor obinute n cadrul
speciei sau prin hibridarea ntre specii cu grad ridicat de rudenie, se vor face folosind
markeri evolutivi rapizi, aa cum sunt microsateteliii SSR.
Din contr, dac se studiaz descendene obinute din hibridri ntre genuri de plante, sau
intergenerice, este mai bine s fie alei markerii AFLP sau RFLP, din cauza comigrrii
rapide a markerilor evolutivi, care ofer o mic ans de a fi omologi. Ghidul primar al
selectrii markerilor este acela c markerii conservativi, care au o rat evolutiv sczut
sunt necesari cu condiia creterii distanei evoluionare (Kumar, V.K. Gupta, A.K. Misra,
D. R. Modi and B. K. Pandey, 2009).

TEST DE EVALUARE

1. Care sunt tipurile de markeri ADN folosii n ameliorarea plantelor?
Rspuns:



2. n ce tip de markeri se ncadreaz izozimele?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
n ameliorarea plantelor sunt folosite dou tipuri de markeri: non PCR din care fac
parte markerii RFLP i markerii PCR din care fac parte RAPD, AFLP, SSR, SNP.
228
1. Sursele principale de clone derivate genomic pentru cartarea RFLP a plantelor
sunt:
a. cADN
b. PstI
c. cADN i PstI
Rezolvare: c
De rezolvat:
2. Markerii microsatelii SSR, sunt seciuni de ADN, constnd n:
a. repetarea nucleotidelor
b. repetarea n tandem a nucleotidelor
c. repetarea n tandem a uniti de mono, di, tri, tetra sau pentanucleotide,
d. repetarea n tandem a uniti de mono, di, tri, tetra sau pentanucleotide, regsite n ntreg
genomul plantelor
Rezolvare:
3.5 Tehnici de detectare a polimorfismului ADN
Din cauz c orice molecul ADN mai mare de 10 perechi de baze conine n mod
esenial aceiai mas a ratei de schimb, orice procedur care separ moleculele bazat pe
masa molecular este folositoare pentru a acoperi polimorfismul ADN.
n mod curent, electroforeza pe substrat de gel este frecvent folosit pentru detectarea
acestui polimorfism. Dar, dac ne mutm n era genomic, aici apar tehnicile care cern
rapid un mare numr de probe. n mare msur cea mai recent procedur este
electroforeza array capilar.
n viitorul apropiat, multe din procedurile curente vor fi plasate n sfera matrixului
asistat de laseri, bazate pe timpul de ionizare a masei spectrofotometrice (MALDI-TOF
MS).
3.5.1 Gel Electroforeza
Gel electroforeza este n mare msur o tehnic adaptat pentru detectarea
polimorfismului. Probele sunt ncrcate pe gel i li se permite s migreze n mediu electric.
Cnd ADN este ncrcat negativ, probele vor fi legate lng polul negativ, iar apoi, ele
migreaz ctre polul pozitiv. Separarea moleculelor este strict bazat pe fragmentele mici
ce se mut mai departe pe gel pentru c pot naviga prin pori n gel mai bine dect
moleculele mari.
Cele dou matrice folosite pentru separarea moleculelor sunt agaroza i
poliacrilamida. Capacitatea de separare a fiecrei molecule, este n funcie de concentraia
229
polimerului n gel. Tabelul de mai jos arat rezoluia care poate fi obinut cu diferite
concentraii de polimeri.
Agaroz Poliacrilamid
% Rezoluie (kb) % Rezoluie (bp)
0.9 0.5 - 0.7 3.5 1000 2000
1.2 0.4 - 6.0 5.0 80 500
1.5 0.2 - 3.0 8.0 60 400
2.0 0.1 - 2.0 12.
0
440 200

Vom alege tipul de polimeri n funcie de categoria fragmentului care trebuie s fie
remarcat. Astfel, pentru procedura RFLaP i RAPD, agaroza este polimerul ce trebuie ales.
Pentru c microsateliii i procedurile AFLPs genereaz mici fragmente, pentru comparare
polimerul tipic este poliacrilamida.
n aplicarea gel electroforezei pentru separarea moleculelor spre exemplu, di ethil
bromidul este folosit pentru evidenierea polimorfismului RAPD, pe agaroz, sau, nitratul
de argint este folosit pentru evidenierea polimorfismului, atunci cnd polimerul este
poliacril amida, pentru microsatelii i AFLPs. Pentru acest sistem de markeri, vom opta de
asemenea ca s includem radionucleotidele etichetate n timpul aplicrii PCR. Dac aceast
opiune a fost aplicat, gelul va fi folosit pentru autoradiografierea filmului. Filmul este
apoi analizat pentru depistarea polimorfismului.
Tehnologia cu laser este de asemenea aplicat pentru sistemul de markeri. Cnd se
folosete acest mod de lucru, primerul este marcat cu difluor. Probele sunt atunci separate
n gel de poliacrilamid. Dac probele se scurg spre partea inferioar a gelului, fragmentele
sunt detectate cu laser care detecteaz de asemenea prezena fluorului. Programul din
computer va furniza date care pot fi analizate.
Pentru detectarea RFLPs este necesar a se folosi procedura hibridizrii sudice.
Moleculele sunt separate pe gel de agaroz i apoi transferate pe membran de nylon.
Membrana va conine un fidel reprezentant al distribuirii fragmentului gsit pe gel. Proba
secvenei care ne intereseaz este apoi hibridizat pe membran i proba nelimitat este
trecut printr-o serie de splri stricte. Membrana este dup aceea folosit pentru a fi
230
expus autoradiografierii filmului. Polimorfismul se determin prin studierea filmului (P.
E. Mc Clean, 2002).

3.5.2 Electroforeza capilar array
Fragmente mici de ADN pot fi separate rapid n capilare nguste. Pentru c este rapid
pierdut cldura din aceste capilare, moleculele pot fi separate rapid, folosind voltaj ridicat.
Aceasta proceseaz cu vitez mare probele. Recent, instrumentele care conin capilare
array pot fi gsite pe pia. Aceste aparate conin 8 (Beckman-Coulter) pn la 96 (Applied
Biosystems) capilare. Probele pot fi introduse simultan n fiecare din array. Tehnologia
laser este dup aceea folosit pentru a detecta probele care au ieit prin capilare (P. E. Mc
Clean, 2002, citat de Viorica Balan, 2008).
3.5.3 Matrix asistat de laser (Procedeul mass-spectrofotometric MALDI-TOF MS)
MALDI-TOF MS, este un nou procedeu folosit pentru a detecta polimorfismul
microsateliilor. n general mass-spectrometria implic ionizarea moleculelor, accelernd
ionii n mediu electric i pasarea ionilor pe un mediu magnetic.
Genotiparea ADN, presupune micarea rapid a moleculelor n mediul magnetic.
MALDI-TOF este o recent perfecionare a mass-spectrometriei. Moleculele de ADN
pentru a fi analizate se afl mpreun cu matrixul neionizat, i se adaug n proba ionizat
molecule mari (mai mult de 100.000 daltoni), asemntoare ADN. Timpul scurs permis
este rapid, pentru o mare sensitivitate a ionilor. Probele pot fi analizate n cteva secunde
folosind acest procedeu.
Procedeul de baz ce urmrete amplificarea PCR, se soldeaz cu producerea
primerilor specifici ai microsateliilor. Este foarte bine dac primerii sunt localizai ct mai
apropiat posibil. Aceasta ne asigur c moleculele mai mici au fost amplificate. Primerii
conin molecule ataate de biotin. Produsul rezult din reacia PCR cu picturi de
streptavidin magnetic. Produsul este amestecat cu matrixul i apoi analizat. Ambele alele
ale individului heterozigot pot fi uor evaluate. n unele cazuri, alelele difer printr-o
singur copie a tetranucleotidului repetat (P. E. Mc Clean, 2002).
TEST DE EVALUARE
1. Ce este gelelectroforeza?
Rspuns:



Gel electroforeza este n mare msur o tehnic adaptat pentru detectarea
polimorfismului markerilor ADN.
231
2. Ce se petrece cu fragmente mici de ADN prin aplicarea electroforezei capilar
array?
Rspuns:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Probele sunt introduse n fiecare din capilarele array:
a. simultan
b. pe rnd
c. dup un timp
Rezolvare: a
De rezolvat:
2. MALDI-TOF MS, este un nou procedeu folosit pentru a detecta:
a. polimorfismul microsateliilor
b. diversitatea markerilor
c. specificitatea markerilor
Rezolvare:

3.6.Tipuri de populaii folosite n cartarea molecular
F
2
, backross i recombinanii autofecundai sunt trei tipuri primare ale populaiilor
folosite pentru cartarea moleculer. Populaia F
2
este dezvoltat prin autopolenizarea
indivizilor F
1
(polenizarea speciilor). Aceti indivizi F
1
s-au obinut prin ncruciarea a doi
prini care prezint un semnificant polimorfism pentru orice tip de loci pe care l vom
evalua. Populaiile backross se dezvolt din ncruciarea indivizilor F
1
cu unul dintre cei
doi prini folosii n ncruciarea iniial. Deficiena major a folosirii populaiilor F
2
sau
backross este aceea c aceste populaii nu sunt eterne. De aceea, sursa de esuturi pentru
izolarea ADN sau a proteinelor va fi epuizat dup un timp, cnd se va ncepe cartarea unei
alte populaii. Populaiile de linii recombinante inbreed pot fi o soluie pentru rezolvarea
acestei probleme. Liniile recombinante inbreed sunt dezvoltate prin selecia unei singure
semine dintr-o plant a populaiei F
2
. Singurul descendent din singura smn este
repetat pentru cteva generaii. Se ajunge ntr-un punct, n care toate seminele de la o
singur plant devin o cantitate. Spre exemplu, populaia F
34
RI a trecut prin etapa de
singur smn i singurul descendent a generaiei F3 i apoi ntreaga cantitate de semine
a fost folosit pentru obinerea generaiei F
4.
Aceast populaie de semine poate fi apoi
232
semnat pentru obinerea liniilor de indivizi. Important de tiut, c fiecare linie este fix
pentru multe posibiliti de recombinare.

Nivelul de
inbreed a
Populaiei RI
% de homozigotare la fiecare
locus a liniilor inbreed
F
3:4
75.0
F
4:5
87.5
F
5:6
92.25
F
6:7
96.875
F
7:8
98.4375
F
8:9
99.21875
Aceste linii au cteva utilizri. Prima este aceea c poate fi folosit pentru a obine
harta genetic, deoarece este esenial c populaia etern F
2
are posibiliti nelimitate de
cartare. n plus, aceste linii pot fi evaluate pentru caracteristicile morfologice, cum ar fi
rezistena la boli, sau culoarea florilor, sau pentru caracteristici cantitative, cum sunt
producia i maturitatea. Aceste date pot fi apoi compilate, iar caracteristicile pot fi
amplasate n harta molecular construit. Aceste linii sunt forte pentru analiza
caracteristicilor cantitative, deoarece replicrile obinute pot fi analizate folosind material
genetic identic. Caracteristicile cantitative pot fi astfel folosite pentru a determina dac
vreun marker molecular este strns asociat cu aceste caracteristici.

TEST RECAPITULATIV PENTRU TEMA NR. 3 (Capitol 3)

1. Secvenializarea ADN este:
a. procesul determinrii ordinei bazelor;
b. determinarea bazelor;
c. procesul determinrii bazelor nucleotidice;
d. procesul determinrii bazelor nucleotidice n spirala ADN.
Rezolvare:
2. Metoda Sanger se bazeaz pe:
a. determinarea secvenelor de nucleotide la plante
233
b. terminaiile replicrii ADN in vitro
c. nclzirea primerului din fragmentul de ADN
Rezolvare:
3. Markerii RAPD se bazeaz pe:
a. amplificarea PCR
b. amplificarea PCR a locusurilor randomizate din genomul plantelor
c. amplificarea microarray
Rezolvare:
4. Markerii AFLP sunt generai prin:
a. procedura digestiei restrictive
b. amplificarea PCR
c. procedura combinrii digestiei restrictive cu amplificarea PCR
Rezolvare:
5. STSs, se dezvolt din:
a. primele secvene ale produsului final RAPD, sau a clonelor folosite ca probe RFLP
b. primele secvene ale produsului final RAPD
c. clone folosite ca probe RFLP
Rezolvare:
6. Prezena SNP este detectat prin:
a. multiplicarea PCR
b. hibridizarea microarray
d. multiplicarea PCR i hibridizarea microarray
Rezolvare:
7. Markerii SSR se vor folosi n analizele genetice:
a. analizele genetice ale descendeelor apropiate genetic
b. analizele genetice ale descendenelor din specii ndeprtate genetic
Rezolvare:
8. Tipurile de populaii primare folosite pentru cartarea molecular sunt:
a. populaia F2
b. populaia backross
c. populaia inbreed
d. populaii F2, backross i linii recombinate inbreed
Rezolvare:
9. Indivizii F
1
sunt obinui prin:
234
a. autofecundarea a doi prini
b. ncruciarea a doi prini
c. ncruciarea a doi prini cu polimorfism ridicat
Rezolvare:
10. Populaia F
2
este dezvoltat prin:
a. autopolenizarea indivizilor F
1

b. ncruciarea indivizilor F
1

c. ncruciarea F
1
cu unul dintre prini
Rezolvare:

REZUMATUL TEMEI NR. 3 (Capitol3)

n ultimele cteva decade, folosirea markerilor moleculari, care relev polimorfismul
ADN, a jucat un rol important n dezvoltarea studiilor de genetic i de biotehnologie cu
aplicabilitate n ameliorarea plantelor. Dup cum cunoatem, markerii folosii n predicia
genotipului i a fenotipului plantelor pot fi: morfologici, biochimici i mai nou markeri
moleculari, sau markeri ADN. Cei mai folosii markeri ADN, sunt de dou tipuri i anume:
1). markeri non PCR, RFLP i 2). markeri PCR sau microsatelii, din care fac parte
markerii RAPD, AFLP, SSR, SNP.
Unii dintre markerii moleculari au un polimorfism ridicat, alii au ns un
polimorfism intermediar. Nivelul polimorfismului este important n alegerea markerilor i
acesta rezult din substituia sau deleia unor baze, care modific primerii din siturile
nclzite i desigur recunoaterea enzimelor de restricie, sau schimbarea dimensiunii
fragmentului de restricie i a produilor amplificai.
n mod curent, electroforeza pe substrat de gel este frecvent folosit pentru detectarea
acestui polimorfism. Dar, dac ne mutm n era genomic, aici apar tehnicile care cern
rapid un mare numr de probe. n mare msur, cea mai recent procedur este
electroforeza array capilar.
n viitorul apropiat, multe din procedurile curente vor fi plasate n sfera matrixului
asistat de laseri, bazate timpul de ionizare a masei spectrofotometrice (MALDI-TOF MS).
F
2
, backross i recombinanii autofecundai sunt trei tipuri primare ale populaiilor folosite
pentru cartarea molecular.


235
Bibliografie selectiv
1.Antohi t. , Lucian Gavril,1981 Progrese n genetica molecular,Editura tiinific i
enciclopedic Bucureti , 481pp
2. Grenbaum et al,1981 "Methylation of Cytosines in Higher Plants", publicat n Nature
297:86 August 1981
3. Griffiths, Anthony J. F.; Miller, Jeffrey H.; Suzuki, David T; Lewontin, Richard C.;
Gelbart, William M. (Eds.) (1993) An Introduction to Genetic Analysis (5th ed.)Chap 5
New York: W.H. Freeman and Company ISBN -0-7167-2285-2
4. P. E. Mc Clean, R.K. Lee, C. Otto, P. Gepts and M. J. Basset, 2002 Molecular and
Phenotipic Mapping of Genes Controlling Seed Coat Pattern and color in Common Bean
(Phaseolus vulgaris L), http://www.plantsciences.ucdavis.edu
gepts/McClean%20et%20al.%202002.pdf
5.P. Kumar, V.K. Gupta, A.K. Misra, D. R. Modi and B. K. Pandey, 2009, Potential of
Molecular Markers in Plant Biotechnology, Plant Omics Journal Southern Cross Journals
2(4):141-162 ISSN: 1836-3644, http://www.pomics.com
6.Tharachand C, Immanuel Selvaraj C and Mythili MN Research in Plant Biology, 2012
Molecular markers in characterization of medicinal plants:An overview Research in Plant
Biology, 2(2): 01-12, 2012 ISSN 2231-5101, http:// www.resplantbiol.com