TC IIa Imunologia

Sebenta

IMUNODEPRIMIDOS
Baseada no Abbas

Autores: Catarina Jacinto Correia Filipa Pereira Helena Couto Ins Pacheco Nunes Joana Miranda Joo Pedro Apolinrio Joo Pedro Soares Joo Pedro Sousa Manuel Matos Margarida Nunes Mariana Gabriel Marta Bento Rui Carvalho Tatiana Oksentyuk Teresa Perico Pina

Reviso & Correco: Mnica Santos

Realizada a Janeiro de 2012

PREFCIO
Imunologia - Uma doena com imunidade adquirida

Caros colegas,
Existe uma multiplicidade de stios para estudar Imunologia e sabemos que, devido ao seu imenso valor relativo no exame de Mdulo II a), h a tendncia para a deixar ficar para trs. Tentmos, por isso, compilar a informao de vrios stios num s local. A nossa ideia no era que esta sebenta fosse uma traduo do Abbas, mas mais um resumo que aborde a matria da disciplina de forma concisa. Juntmos ento os temas das aulas tericas, os temas principais descritos no livro aconselhado, e tambm do Arosa, e crimos um ndice que nos parece ser o mais indicado. Para uma mais fcil navegao, iro notar que no incio de cada tema tm o ttulo correspondente respectiva aula terica, a data em que foi leccionada e ainda os recursos que foram usados para aprofundar esse tema. Esperamos que a sebenta d para desenrascar na poca de exames; porm, se desejarem aprofundar mais os temas, devero recorrer aos livros aconselhados. ATENO: a ltima aula que ser leccionada, a 26 de Janeiro de 2012, com o ttulo Imunologia Avanada, no consta na sebenta porque, para j, ainda no foi dada, e depois, no fazemos ideia do que isso (de qualquer maneira, no moodle diz que esta facultativa) Agradecemos ainda Mnica Santos, que teve a pacincia de ler e rever a sebenta antes da sua publicao. Estamos ainda vossa disposio caso queiram fazer algum reparo, encontrem algum erro/qualquer coisa que queiram ver esclarecida. Contactem-nos pelo e-mail da nossa comisso de curso (comissaodecurso1016@aefml.com). Com os votos de que o ano de 2012 seja bem aproveitado (fiesta!),

Os autores

ndice
T1: Introduo Imunologia .......................................................................... 3 T2: Imunidade Inata........................................................................................... 5 T3 I: Inflamao Resposta Inflamatria ...............................................10 T3 II: Inflamao Migrao Leuccitos para os Tecidos ................22 T4: Homeostasia e Clonalidade ...................................................................28 TP4: Introduo/Diferenciao e Activao Linfocitria .................34 T5: Activao de Linfcitos T .......................................................................51 T6 I: Imunidade Humoral Activao de Linfcitos B e Produo de Anticorpos......................................................................................................57 T6 II: Imunidade Humoral Mecanismos Efectores da Imunidade Humoral ................................................................................................................75 T7: Imunidade Celular Mecanismos Efectores da Imunidade Mediada por Clulas.........................................................................................97 T8: Apresentao de Antignios pelo MHC ......................................... 112 T9: Imunodeficincias Primrias............................................................. 124 T10: Tolerncia ............................................................................................... 131 *Hipersensibilidade ...................................................................................... 141 T11: Memria imunolgica, adjuvantes e vacinas ............................ 162 T12: Imunodeficincias secundrias-HIV/SIDA................................ 169

Nota: TPs 2,3,5 e 6 abordadas nas aulas tericas correspondentes.

T1: Introduo Imunologia

Data terica de 3 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 1 Captulos do Arosa Slides aulas: sim Elaborado por: Ins Pacheco

INTRODUO IMUNOLOGIA
Historicamente, imunidade significava proteco contra a doena, mais especificamente, doena infecciosa. As clulas e molculas responsveis por essa imunidade constituem o sistema imunitrio, e a sua aco colectiva e coordenada em resposta introduo de substncias exgenas denominada de resposta imunitria. A funo fisiolgica do sistema imunitrio a defesa contra microrganismos infecciosos. No entanto, at substncias exgenas no-infecciosas podem desencadear resposta imunitria. E ainda, mecanismos que tm como finalidade a proteco do organismo face a ameaas externas, tambm so capazes de provocar dano ao nvel dos tecidos e, at mesmo, doena. Em certas situaes, at molculas do prprio podem desencadear respostas imunitrias (assim chamadas de respostas auto-imunes). Assim, uma melhor definio de resposta imunitria:

Reaco contra componentes de microrganismos, assim como macromolculas, como protenas e polissacridos, e pequenos qumicos que so reconhecidos como estranhos, independentemente das suas consequncias fisiolgicas ou patolgicas.
Imunologia o estudo das respostas imunitrias no seu sentido mais abrangente e dos eventos celulares e moleculares que ocorrem quando, e aps, um organismo contactar com microrganismos ou macromolculas estranhas.

IMUNIDADE INATA E ADAPTATIVA

A imunidade inata proporciona uma primeira linha de defesa contra agentes patognicos. Consiste num conjunto de mecanismos celulares e bioqumicos que se encontram presentes antes da infeco e proporcionam uma resposta rpida e pouco especfica infeco. Estes reagem principalmente aos microrganismos e clulas danificadas, actuando da mesma forma praticamente independentemente da natureza da infeco. Em contraste imunidade inata, existem outro tipo de respostas imunes que so estimuladas pela exposio a agentes infecciosos, aumentando em magnitude e eficcia a cada exposio sucessiva. Porque esta forma de imunidade se desenvolve em resposta infeco e se adapta mesma, denominada de imunidade adaptativa. As caracterstica que definem esta forma de imunidade:

Especificidade

Grande especificidade entre uma enorme variedade molculas.

Memria

Resposta imune aumenta em magnitude e eficcia a cada exposio a um determinado agente Capacidade de distinguir entre diferentes molculas por muito parecidas que sejam. Habilidade de distinguir as molculas do prprio organismo dasquelas que lhe so estranhas. Sistema imunitrio responde a uma grande variedade de antignios.

Capacidade de distingir o self do non-self

Diversidade

Expanso clonal

Aumenta o nmero de linfcitos especificos para acompanhar o possvel aumento da quantidade de antignio.

Especializao

Gera respostas optimizadas de acordo com o tipo de ameaa. Permite ao sistema imunitrio restituir-se aps uma resposta para que facilmente se encontre pronto a responder a uma outra ameaa de antignios.

Promoo da Homeostasia
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T2: Imunidade Inata (O tema da imunidade adquirida ser, entre outros, abordado ao longo desta sebenta)
Data terica de 4 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 4 Captulos do Arosa Slides aulas: sim Elaborado por: Ins Pacheco

IMUNIDADE INATA
IMUNIDADE INATA (NO-ESPECFICA) CARACTERSTICAS:
Primeira linha de defesa do organismo face invaso por microorganismos estranhos. Consiste num conjunto de mecanismos de defesa, celulares e bioqumicos, pr-existentes infeco, que desencadeiam uma resposta rpida no sentido de prevenir, controlar e minimizar a infeco. Resposta sem grande especificidade. No possui memria imunolgica. Componentes de defesa inata reagem de modo diferente consoante a infeco. A Imunidade Inata contra micrbios estimula a resposta imunitria adaptativa (imunidade adquirida), optimizando-a contra diferentes tipos de micrbios. Reconhece produtos de clulas mortas ou danificadas, trata de eliminlas e iniciar um processo de reparao dos tecidos afectados. Reconhece substncias intrnsecas que no se deviam encontrar em tecidos saudveis, como cristais intracelulares.

COMPONENTES:
1- BARREIRAS ANATMICAS E FISIOLGICAS: Pele e mucosas:
o Epiderme: vrias camadas de clulas epiteliais, sendo a mais externa constituda por clulas mortas e por uma cama impermeabilizante, a 5

queratina. o Derme: com vasos sanguneos, glndulas sudorparas e folculos pilosos. Estes contm glndulas sebceas, que produzem sebum. O sebum tem cidos lcticos e cidos gordos que mantm o pH da pele cido (3-5), inibindo o crescimento de microrganismos. o Mucosas: organismos de defesa aguda inata que impedem a entrada de microrganismos nas mucosas: saliva, lgrimas e secrees mucosas. Possuem substncias anti-bacterianas e anti-virais.

Movimentos intestinais Oscilao dos clios bronco-pulmonares Tosse e espirros 2- BARREIRAS QUMICAS:
Lisozimas (secrees oro-naso-farngicas e lgrimas): o Enzimas hidrolticas presentes nas secrees mucosas e nas lgrimas, capazes de clivar o peptidoglicano.

Enzimas digestivas e pH baixo (sistema digestivo) Defensinas (pptidos anti-microbianos) Flora comensal Ex: E. coli (colicinas - protenas antibacterianas) o Organismos no patognicos que competem com os patognicos por superfcies de aderncia e alimento.

3- CLULAS FAGOCITRIAS (NEUTRFILOS, MACRFAGOS), DENTRTICAS E NATURAL KILLER (NK) 4- VASOS SANGUNEOS (VASODILATAO/VASOCONSTRIO) 5- PROTENAS:
Citoquinas (regulam e coordenam actividades das clulas da imunidade inata): o Grupo de protenas serosas que circulam em estado inactivo. Quando activas, destroem as membranas dos organismos patognicos. Interferon: o Grupo proteico produzido por clulas infectadas por vrus. Ligase a clulas vizinhas e despoleta um estado geral anti-vrico. Sistema Complemento Proteina C-Reactiva 6

CLULAS FAGOCITRIAS (MACRFAGOS E NEUTRFILOS)

Clulas com funes fagocitrias especializadas, primeira linha de defesa contra microorganismos que invadem barreiras epiteliais. Tm como funo interiorizar (fagocitar) microrganismos e elimin-los. Produzem citoquinas que promovem a resposta inflamatria. Intensificam a funo anti-microbial de clulas no local da infeco.

Outras clulas conseguem, na sua maioria, realizar outras formas de endocitose, como a endocitose mediada por receptores ou pinocitose.

RECONHECIMENTO DE AGENTES PATOGNICOS

Clula Fagoctica
PRR
(Pattern Recognition Receptors) Receptores para reconhecimento de padres Cada receptor reconhece uma classe de PAMPs comum a vrios microrganismos

Microorganismos
PAMPs ou MAMPs
(Pathogen-Associated Molecular Patterns) (Microbe-Associated Molecular Patterns)

Clulas Danificadas
DAMPs
(Damage-Associated Molecular Patterns)

P Padres moleculares associados a Apatognese

Classes de molculas M expressas por agentes P patognicos

P Padres moleculares associados A a dano celular M Molculas expressas por clulas danificadas ou a P morrer. (no so expressas por clulas s em apoptose) o u M

s o u

RESPOSTA INATA A INFECES VIRAIS

dsRNA na clula infectada

Produo de interfero tipo I (IFN)

Activao de clulas NK - Natural Killer

Morte das clulas infectadas (citotoxicidade)

SISTEMA COMPLEMENTO
Grupo de protenas serosas que circulam em estado inactivo. Quando activas, destroem as membranas dos organismos patognicos e promovem a fagocitose.

Vrias dessas protenas plasmticas so activadas em cascata no sentido de opsonizar* microrganismos, recrutar fagcitos para o local de infeco e, em alguns casos, eliminar os prprios microorganismos. Inclui cascatas proteolticas de activao:

PATHWAY Classical Alternative Lectin

Desencadeado pela protena plasmtica mannose-binding Lectin (MBL) que, como o nome indica, reconhece resduos terminais de manose em glicoprotenas e glicolpidos de micrbios e liga-se a eles. MASP1 e MASP2 so activadas com funes semelhantes C1r e C1s associamse MBL e desencadeiam cascatas proteolticas semelhantes ao classical pathway.

Clssico, porque foi Activado quando C3 descoberto primeiro. reconhece estruturas associadas a micrbios. Protena plasmtica C1q detecta C3 encontra-se em baixos anticorpos ligados nveis sricos pois liga-se superfcie do agente facilmente s superfcies patognico e liga-se celulares, sendo inibida por poro Fc dos molculas reguladoras anticorpos activando presentes nas clulas prprias duas protases, C1r dos mamferos. e C1s que iniciam a cascata proteoltica Como os micrbios no que activa o sistema possuem estas molculas, a complemento. activao espontnea de C3 amplificada nessas clulas. Como os anticorpos naturais IgM so eficientes na ligao C1q, o classical pathway tambm participa na imunidade inata.

O reconhecimento de micrbios por algum dos trs pathways resulta num recrutamento sequencial e activao de protenas complemento em complexos de protases. (ver Terica 6 - Imunidade Humoral Mecanismos Efectores da Imunidade Humoral)

*Opsonizao o processo que facilita a aco do sistema imunolgico por fixar opsoninas ou fragmentos do complemento na superfcie bacteriana, permitindo a fagocitose.

T3 I: Inflamao Resposta Inflamatria

Data terica de 4 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 4 (a partir pg. 74) Captulos Arosa: 3 (a partir pg. 56) Slides aulas: sim Elaborado por: Catarina Jacinto Correia

RESPOSTA INFLAMATRIA
Inflamao: Processo de que o organismo dispe para localizar, neutralizar ou
eliminar um agente agressor (viral, bacteriano, outro); i.e., o afluxo de leuccitos, protenas e molculas do plasma sanguneo ao foco inflamatrio, desencadeando-se os mecanismos reaccionais que caracterizam este processo.

Calor Rubor Edema Dor

Citocinas pr-inflamatrias

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REACO INFLAMATRIA
Neutrfilos
Recrutados em 1 lugar Permanecem - tempo nos tecidos No voltam circulao/so eliminados

Moncitos
Recrutados depois dos neutrfilos Permanecem + tempo nos tecidos DIFERENCIAO EM MACRFAGOS Podem voltar a circular novas funes

Claro que todo este processo de recrutamento precisa de mediadores e de outros intervenientes. H, ento, algumas protenas plasmticas que so especialmente importantes: Protenas do Complemento Anticorpos Reagentes de Fase Aguda Para alm disso, a passagem para o local da inflamao depende de mudanas reversveis nos vasos sanguneos do tecido lesado ou infectado, induzidas por citocinas: - fluxo sanguneo (devido dilatao arteriolar) - adeso leucocitria ao endotlio de revestimento dos vasos - permeabilidade dos capilares e vnulas a protenas plasmticas e fluidos

, assim, essencial ao desenvolvimento do processo inflamatrio o fenmeno da vasodilatao que constitui, por assim dizer, o primum movens da inflamao. Esta vasodilatao sobretudo desencadeada por aminas vasoactivas, histamina e 5-hidroxitriptamina (serotonina), libertadas pela desgranulao dos basfilos e mastcitos tecidulares e plaquetas. A histamina, cujo efeito dominante, tem um importante efeito vasodilatador, pois promove a contraco das fibras musculares lisas de alguns esfncteres capilares e venulares, o que favorece o aumento da permeabilidade vascular e a passagem de plasma para o espao extravascular. Este processo de activao celular, desencadeado por alguns fragmentos do complemento, e a gnese de algumas citocinas levam libertao de outros importantes mediadores da inflamao, de aco mais lenta e sustentada, sobretudo devido activao do cido araquidnico das membranas celulares. Activao cido Araquidnico Formao Leucotrienos e Prostaglandinas

Efeitos Contraco M. Liso & Vasodilatao

efeito Histamina 11

Estes mediadores da inflamao, juntamente com outros sistemas de enzimas plasmticos, consolidam o processo inflamatrio que tende a localizar, limitar e neutralizar o agente agressor. Referimo-nos aos sistemas de coagulao, fibrinoltico e das cininas e, claro, ao sistema do complemento cujo papel fundamental de facto, o sistema do complemento essencial aos mecanismos de imunidade inata mas tambm coopera nos mecanismos celulares e humorais que levam formao de anticorpos, actuando como um elo de ligao fundamental entre o processo inflamatrio inicial e os mecanismos imunolgicos adaptativos (iremos abordar esta temtica mais frente).

MIGRAO CELULAR
De um modo geral a migrao celular processa-se em quatro tempos: Fixao das clulas circulantes ao endotlio vascular e rolamento sobre este; Activao; Adeso mais firme s clulas endoteliais; Travessia desse endotlio, atradas para o foco inflamatrio sob o efeito dos estmulos quimiotcticos ali gerados. Os padres de migrao celular so complexos: dependem no s da variabilidade das suas molculas de superfcie como da natureza e da densidade das molculas expressas pelas clulas endoteliais. Assim, por exemplo, as clulas endoteliais das chamadas vnulas de endotlio alto (presentes em rgos linfides secundrios) so muito diferentes das clulas endoteliais encontradas em tecidos no linfides. Ou seja, com este exemplo pretende-se demonstrar que a expresso de novas molculas de adeso, ou o aumento da sua densidade, nas clulas endoteliais, sob influncia de citocinas produzidas no foco inflamatrio , assim, um fenmeno que acompanha o processo inflamatrio no geral. Para alm da migrao celular, participam activa e decisivamente no processo inflamatrio as molculas que chegam ao foco da inflamao por transudao do plasma processo determinado, sobretudo, pelo aumento de permeabilidade vascular. , assim, possvel a grandes molculas, como anticorpos, componentes do complemento e molculas de outros sistemas enzimticos do plasma aflurem ao foco inflamatrio. Assim, geram-se factores quimiotcticos com vrias origens, citocinas e quimiocinas. Por sua vez, as clulas que intervm no processo inflamatrio produzem citocinas cujo papel particularmente importante na sinalizao e interaco celular.

Citocinas Mediadores celulares pequenos, inicialmente derivados de clulas

residentes nos tecidos (macrfagos, mastcitos e clulas endoteliais) em resposta a um estmulo PAMP ou DAMP. medida que o processo inflamatrio se desenvolve, as citocinas podero derivar das protenas do complemento ou dos leuccitos que migraram para os tecidos.

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CITOCINAS DA IMUNIDADE INATA

Citocina Origem Alvos e Efeitos celulares
Cls Endoteliais: activao inflamao, coagulao Neutrfilos: activao Hipotlamo febre Fgado: sntese de protenas de fase aguda Msculo e Adipcitos: catabolismo ( caquexia) Outros tipos celulares: apoptose! Cls.Endoteliais: activao inflamao, coagulao Hipotlamo febre Fgado: sntese de protenas de fase aguda Leuccitos: quimiotaxia, activao, migrao p/ tecidos

TNF* (tumor necrosis factor)

Macrfagos, Linf. T

IL-1*

Macrfagos, Clulas Endoteliais, algumas clulas epiteliais Macrfagos, Clulas Endoteliais, Linf. T, Fibroblastos, Plaquetas Macrfagos, Clulas Dendrticas

Quimiocinas

Linf. T: diferenciao TH1 Linf. T e NK: sntese IFN-, actividade citotxica Interferes Tipo I: Todas as clulas: IFN-: Macrfagos IFN- estado antiviral, expresso MHC I IFN-: Fibroblastos IFN- Linf. NK: activao Macrfagos e Cls. Dedrticas: IL-10 Macrfagos, Linf. T inibio produo IL-12, expresso de co-estimuladores e MHC II Fgado: sntese de protenas de Macrfagos, Clulas fase-aguda IL-6* Endoteliais, Linf. T Linf. B: proliferao de clulas produtoras de anticorpos Linf. NK: proliferao IL-15 Macrfagos, outros Linf. T: proliferao (clulas de memria CD8+) IL-18 Macrfagos Linf. T e NK: sntese IFN- Macrfagos e Clulas Linf. T: manuteno dos linfcitos IL-23 Dendrticas produtores de IL-17 Linf. T: diferenciao TH1, inibio Macrfagos e Clulas IL-27 clulas TH1 Dendrticas Linf. NK: sntese IFN- *Major Proinflammatory Cytokines (citocinas principais do processo inflamatrio) IL-12

CITOCINAS PRINCIPAIS DO PROCESSO INFLAMATRIO: TNF, IL-1 E IL-6

A secreo de citocinas pelas clulas dos tecidos afectados crucial para a resposta inflamatria aguda. As citocinas mais importantes neste processo so, ento, a TNF, a IL-1 e a IL-6 que provm, sobretudo, de macrfagos e mastcitos. 13

CARACTERSTICAS DESTAS CITOCINAS TNF um mediador da resposta inflamatria aguda devido a infeces
microbianas, sobretudo bacterianas. Pode ser, tambm, denominado TNF- para se distinguir da linfotoxina ou TNF-, com a qual est intimamente relacionada. Os receptores para TNF encontramse presentes na maioria dos tipos celulares e so membros de uma grande famlia de protenas chamada TNF receptor superfamily; a maioria destes receptores est envolvida na resposta imunitria e inflamatria. A produo de TNF pelos macrfagos estimulada por PAMPs e DAMPs; TLRs, NLRs e RLRs podem tambm induzir expresso do gene que codifica o TNF. Assim, muitos e diferentes produtos microbianos podem induzir a produo de TNF grande quantidade desta citocina pode ser produzida durante infeces por bactrias grampositivas e gram-negativas, que libertam TLR-ligandos e cido lipoteico das suas paredes celulares. O TNF ainda um dos principais mediadores do choque sptico. Mas, como funciona a aco do TNF e dos seus receptores? Citocinas que se ligam a algum receptor da famlia dos TNF-receptors provocam, como resposta, o recrutamento de protenas denominadas TRAFs (TNF receptorassociated factors) que vo activar factores de transcrio. Contudo, caso as citocinas se liguem a outros membros da famlia, como os TNF-RI, iro desencadear o recrutamento de uma protena adaptadora que por sua vez activar caspases desencadeando a apoptose celular. Assim, conclui-se que diferentes membros da famlia de receptores TNF podem induzir expresso gnica, morte celular ou ambas as coisas, tendo assim funes e importncias diferentes.

IL-1 um mediador da resposta inflamatria aguda e muitas das suas aces

so semelhantes do TNF. A maior fonte celular de IL-1 so os fagcitos mononucleares. Contudo, e ao invs do TNF, a IL-1 tambm produzida por muitos outros tipos celulares (ver tabela das citocinas). Existem duas formas de IL-1: a IL-1 e a IL-1 que, apesar de as suas semelhanas moleculares serem inferiores a 30%, se ligam aos mesmos receptores celulares de superfcie e tm a mesma actividade biolgica. A forma activa que mais secretada a IL-1. A produo de IL-1 requer, normalmente, dois sinais distintos: um que activa a transcrio gnica e produo de percursor para o polipptido pr-IL-1; outro que que activa o inflammassome para que este clive o percursor que activar a protena madura para o IL-1. A IL-1 libertada por uma via no clssica porque, contrariamente maioria das protenas, nem a IL-1 nem a IL-1 possuem sequncias-alvo de sinalizao hidrofbica para identificar a nascente do polipptido e permitir o seu transporte para a membrana do RE. Assim, uma das possibilidades sugeridas para contornar este problema de libertao da IL-1 a de que esta ser, ento, maioritariamente libertada quando ocorre 14

morte celular das clulas infectadas ou de macrfagos activados. Algumas bactrias patognicas induzem tanto o processamento de IL- e IL- mediado pelos inflammassomes nos macrfagos, como a morte celular caspase-1 dependente que leva libertao de citocinas inflamatrias. O TNF pode, tambm, estimular fagcitos e outros tipos celulares para produzirem IL-1. A IL-1 medeia os seus efeitos biolgicos atravs do receptor IL-1 tipo I, um receptor de membrana que expressado em diversos tipos celulares. Este receptor uma protena membrana que contm um domnio Ig de ligao extracelular e um domnio de sinalizao do receptor Toll/IL-1 (TIR) na regio citoplasmtica. Os eventos de sinalizao que ocorrem quando IL-1 se liga ao receptor IL-1 tipo I so semelhantes aos desencadeados pelos TLRs e resultam na activao de factores de transcrio (NF-B e AP-1).

IL-6 outra citocina importante na resposta inflamatria aguda que tem efeitos
a nvel local e a nvel sistmico. Inclui, como efeitos, a sntese de inmeros mediadores inflamatrios no fgado, a estimulao da produo de neutrfilos na medula ssea e a diferenciao de linfcitos TH que produzem IL-17. A IL-6 sintetizada por fagcitos mononucleares, clulas endoteliais vasculares, fibroblastos e outras clulas em resposta a PAMPs, IL-1 e ao TNF. O receptor para a IL-6 consiste basicamente numa cadeia polipeptdica com um ligando para a citocina e numa sub-unidade de transduo de sinal. O receptor para a IL-6 impulsiona uma via de sinalizao que activa o factor de transcrio STAT3.

PAPEL DESTAS CITOCINAS NA INFLAMAO

RECRUTAMENTO DE LEUCCITOS PARA O LOCAL DA INFECO O recrutamento de um grande nmero de neutrfilos, seguido de moncitos, da circulao para os tecidos ocorre tipicamente como parte da resposta inflamatria aguda a infeces ou leses teciduais. O TNF, a IL-1, a IL-6 e as quimiocinas (que so libertadas no local da infeco) tm variados efeitos nas clulas endoteliais vasculares, nos leuccitos e na medula ssea que, juntos, aumentam a disponibilidade de clulas que combatem infeces e reparam tecidos. Tanto o TNF como a IL-1 induzem as clulas endoteliais das vnulas pscapilares a expressar E-selectin e a aumentar a sua expresso de ICAM-1 e VCAM-1, ligandos para integrinas leucocitrias. Estas mudanas na adeso endotelial resultam da activao de factores de transcrio pelo TNF e pela IL-1, levando transcrio gnica de uma nova molcula de adeso. A expresso de Pselectin tambm induzida nas clulas endoteliais em grande parte devido ao efeito da histamina e da trombina que estimulam a rpida mobilizao da P-selectin armazenada nos grnulos das clulas. TNF e IL-1 estimulam, ainda, diversos tipos celulares para que estes secretem quimiocinas como as CXCL1 e CCL2 que se ligam a receptores nos neutrfilos e 15

moncitos, respectivamente, e aumentam a afinidade das integrinas leucocitrias aos seus ligandos estimulando, ento, o movimento direccional dos leuccitos. O aumento da expresso de selectina, integrina e quimiocinas leva a um aumento da adeso dos neutrfilos e moncitos s clulas endoteliais e promove a sua transmigrao atravs das paredes dos vasos. A aco do TNF no endotlio e nos leuccitos essencial para a resposta inflamatria local aos agentes microbianos. Se uma quantidade inadequada de TNF estiver presente (ex. pacientes tratados com bloqueadores dos TNF ou em ratinhos com knockout do gene para o TNF) uma das consequncias ser uma falha no processo inflamatrio e na conteno de infeces. Para alm disto, TNF, IL-1 e IL-6 podem ainda entrar na medula ssea e estimular a produo de neutrfilos e, assim, aumentar o suprimento celular que pode ser recrutado para combater infeces.

FAGOCITOSE E MORTE MICROBIANA ATRAVS DE CLULAS FAGOCTICAS ACTIVADAS Neutrfilos e Macrfagos que so recrutados para os locais de infeco ingerem micrbios em vesculas atravs de um processo denominado fagocitose. Estas duas linhagens celulares expressam receptores que especificamente reconhecem os microrganismos estranhos e se ligam a eles (primeiro passo da fagocitose ligao aos receptores). Os receptores existentes nas membranas destas clulas podem ser: PRRs (inclui lectinas do tipo-C e scavenger receptors) Receptores de alta afinidade para opsoninas, inclundo anticorpos, protenas do complemento e lectinas plasmticas. Estes receptores so cruciais para a fagocitose de diferentes microrganismos que esto revestidos por opsoninas. Um dos mecanismos mais eficientes para opsonizar microrganismos revestilos com anticorpos.

A partir do momento em que um microrganismo ou uma partcula se liga aos receptores dos fagcitos, a membrana plasmtica na regio do receptor comea a redistribuir-se e estende-se at formar uma projeco volta do microrganismo/partcula, formando de seguida uma vescula intracelular. Esta vescula, denominada fagossoma, contm a partcula estranha e separa-se da membrana plasmtica. Os receptores celulares de superfcie, para alm de permitirem a fagocitose, permitem tambm a activao de um processo de sinalizao que estimula a actividade antimicrobiana dos fagcitos. O material fagocitado destrudo ao mesmo tempo que se formam pptidos atravs das protenas dos micrbios que so apresentadas aos linfcitos T para se iniciar a resposta imunitria adaptativa.

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Macrfagos e neutrfilos activados matam os microrganismos fagocitados atravs da aco microbiana de molculas presentes nos fagolisossomas. Diversos receptores que reconhecem estes microrganismos (incluindo TLRs, receptores acoplados a protena-G, anticorpo Fc, receptores C3 do complemento e receptores para citocinas) funcionam de forma a activar os fagcitos para que estes destruam o invasor. A fuso dos vacolos fagocticos (fagossomas) com os lisossomas resulta na formao de fagolisossomas onde a maioria dos mecanismos microbicidas esto concentrados. Existem trs tipos essenciais de mecanismos com aco microbicida: Reactive Oxygen Species (espcies de oxignio reactivas) macrfagos e neutrfilos activados convertem oxignio molecular em espcies de oxignio altamente reactivas (ROS) que so agentes oxidantes altamente reagentes que destroem microrganismos. O processo atravs do qual estas espcies de oxignio so produzidas denominado respiratory burst dado que ocorre durante a respirao celular (quando o oxignio consumido). A gerao de ROS txico, comummente vista como a principal funo da phagocyte oxidase (enzima oxidase-fagocitria) no , contudo a nica funo; esta enzima ainda responsvel pela manuteno das condies dentro dos vacolos fagocticos necessrias actividade das enzimas proteolticas. A oxidase cria, assim, um gradiente electroqumico atravs da membrana do vacolo cujo resultado o aumento do pH e da osmolaridade dentro do prprio vacolo, mudanas necessrias actividade de elastase e da catepsina G. 1. xido Ntrico os macrfagos tambm produzem muitas espcies reactivas de nitrognio, maioritariamente xido ntrico, atravs da aco de uma enzima chamada inducible nitric oxide synthase (iNOS), que uma enzima citoslica que est ausente nos macrfagos em repouso mas que pode ser 17

induzida em resposta a produtos microbianos que activam TLRs. Basicamente, a iNOS cataliza a converso de arginina em citrulina, libertando xido ntrico em forma de gs livre. No fagossoma, o NO pode ser combinado com perxido de hidrognio ou superxido e produzir, assim, peroxonitratos altamente reactivos que levam destruio dos microrganismos. Enzimas Proteolticas macrfagos e neutrfilos activados produzem diversas enzimas proteolticas que funcionam para destruir microrganismos. Uma das enzimas mais importantes nos neutrfilos a elastase que mata diversos tipos de bactrias; outra enzima importante a catepsina G.

Quando os neutrfilos e os macrfagos so activados de forma extrema, estes mecanismos podem causar leses no hospedeiro saudvel atravs da libertao das enzimas lisossomais, ROS e xido ntrico. Os produtos microbicidas destas clulas no distinguem entre tecidos do prprio organismo e tecidos estranhos. Como resultado, quando estes produtos entram no ambiente extracelular podem causar leses teciduais graves nos tecidos do prprio hospedeiro.

OUTRAS FUNES DOS MACRFAGOS ACTIVADOS Para alm de matarem o material fagocitado, os macrfagos so ainda importantes para outras funes de defesa do organismo contra infeces. Estas funes so sobretudo mediadas pelas citocinas que eles produzem que, em conjunto com as quimiocinas, melhoram a resposta inflamatria contra micrbios e permitem um maior n de leuccitos e protenas plasmticas no local de infeco. Os macrfagos activados tambm produzem factores de crescimento para os fibroblastos e clulas endoteliais, participando assim na remodelao dos tecidos aps infeces e leses.

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CONSEQUNCIAS SISTMICAS E PATOLGICAS DA RESPOSTA INFLAMATRIA AGUDA

TNF, IL-1 e IL-6 produzidos durante a resposta imunitria inata a uma infeco ou leso de tecidos tm efeitos sistmicos que contribuem para a defesa do hospedeiro e so responsveis por muitos dos sinais de infeco e inflamao. Podem ter efeitos positivos que ajudam no combate da seleco ou efeitos patolgicos.

TNF, IL-1 e IL-6 actuam no hipotlamo para induzir um aumento na

temperatura corporal febre. Estas citocinas so, por isso, denominadas de pirognios endgenos. A produo de febre em resposta ao TNF, IL-1 e IL-6 mediada pelo aumento da sntese de prostaglandinas por clulas hipotalmicas citocino-estimuladas. A febre traz vantagens que no so ainda bem compreendidas mas pensa-se que esto relacionadas com uma melhoria nas funes metablicas das clulas imunitrias e talvez na criao de condies menos favorveis para os microrganismos. Pode, contudo, ser tambm considerado um efeito patolgico caso atinja valores que desregulem o organismo a tal ponto que ponha em risco de vida o hospedeiro. IL-1, TNF e IL-6 induzem a expresso de reagentes de fase-aguda, incluindo CRP, SAP e fibrinognio, pelos hepatcitos e a sua libertao para a corrente sangunea. CRP e SAP tm papis protectores nas infeces e o fibrinognio contribui para a homeostase e reparao tecidual. Em caso de infeces severas, o TNF pode ser produzido em grandes quantidades e causar anormalidades sistmicas e patolgicas. Se o estmulo para 19

a produo de citocinas for suficientemente forte, a quantidade de TNF produzida pode ser to excessiva que ao ser posta em circulao na corrente sangunea ir actuar em locais distantes como hormona endcrina. As suas principais aces sistmicas so: Inibio da contractilidade do miocrdio e do tnus do M. liso, resultando numa demarcada diminuio da PA, ou at mesmo em choque; Causa trombose intravascular, sobretudo devido perda de propriedades anticoagulantes normais do endotlio TNF promove a expresso de tissue factor, um potente activador da coagulao, e inibe a expresso de trombomodulina um inibidor da coagulao. Estas alteraes endoteliais so exacerbadas pela activao dos neutrfilos, levando a um plugging vascular. A abilidade do TNF de causar necrose tumoral um resultado da trombose dos vasos sanguneos. Produo prolongada de TNF causa um desperdcio de massa muscular e adiposa, tambm denominado de caquexia. Este desperdcio resulta de uma supresso do apetite induzida pelo TNF e uma supresso da sntese da lipoprotena lpase. Outra consequncia nefasta da sobre-actuao das citocinas pode ser um agravamento do choque sptico. O choque sptico uma complicao sistmica de spsis provocada por inmeras bactrias e que pode ser causado por LPS libertado por bactrias gram-negativas (choque endotxico) ou cido lipoteico por gram-positivas. Pode ser caracterizado pelo colapso vascular, coagulao intravascular disseminada e distrbios metablicos e deve-se ento sinalizao induzida por LPS ou cido lipoteico que leva produo de TNF e outras citocinas, incluindo IL-12, IFN- e IL-1. A concentrao srica de TNF pode ser preditiva do outcome de infeces bacterianas graves.

A inflamao aguda pode ainda causar leses nos tecidos devido aos mecanismos efectores que os fagcitos usam para matar os microrganismos dado que so altamente txicos para os tecidos hospedeiros. As enzimas proteolticas e as ROS produzidas pelos fagcitos e que se acumulam nos locais das infeces podem lesar as clulas do hospedeiro e degradar matriz extracelular se estiverem em grandes quantidades, especialmente quando h uma resistncia microbiana e a infeco se prolonga continuando a estimular uma resposta imunitria inata. De facto, muitas das manifestaes patolgicas associadas a infeces devemse s respostas inflamatrias e no aos efeitos txicos dos microrganismos em si. Inflamao aguda pode ainda causar leses teciduais que podem desencadear doenas auto-imunes, caso em que os neutrfilos e macrfagos ficam activados parte da estimulao do sistema imunitrio pelos antignios do prprio organismo. Tal como na inflamao induzida por infeco, TNF, IL-1, IL-6 e IL-12 so os indutores-chave da doena auto-imune.

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INFLAMAO AGUDA VS INFLAMAO CRNICA

Quando a reaco inflamatria no suficiente para neutralizar ou eliminar o agente agressor, a permanncia de inflamao permite estabelecer resposta imune adaptativa: Resposta Humoral (com anticorpos), Resposta Celular Aco Citotxica

Inflamao Aguda
Desenvolve-se em minutos a horas Imediata Pode manter-se durante dias Recrutamento da 1 linha de defesa sobretudo neutrfilos Sem alteraes estruturais Reaco Imunolgica Inata

Inflamao Crnica
Desenvolve-se aps estado de inflamao aguda quando infeco no eliminada - Tardia Maior perodo de durao Envolve recrutamento e activao de moncitos e linfcitos; [neutrfilos] Sofre remodelao tecidual com angiognese e fibrose Reaco Imunolgica Adaptativa

Componentes da resposta imunolgica Ocorrncia Temporal Barreira Fsica e Qumica Clulas Fagocticas NK/NKT Linf. T Linf. B Anticorpos Complemento Citocinas

Resposta Inata ou Natural Imediata + + + - (excepto: T) - (excepto: B-1) - (excepto: naturais) + + Largo Espectro (pouco especfica) -

Resposta Adaptativa ou Adquirida Tardia + + + + + + + Restrita (antignios particulares para um dado agente patognico; detalhes estruturais) + + (clonal)

Especificidade

Memria Imunolgica Amplificao + presente; - ausente

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T3 II: Inflamao Migrao Leuccitos para os Tecidos

Data terica de 4 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 3 Captulos do Arosa: 3.3 Slides aulas: sim

Elaborado por: Teresa Perico Pina

MIGRAO DOS LEUCCITOS PARA OS TECIDOS

MOLCULAS DE ADESO E SEUS LIGANDOS, E QUEMOQUINAS E SEUS RECEPTORES
O recrutamento dos leuccitos do sangue para os tecidos depende da adeso destes ao endotlio das vnulas e do seu movimento atravs deste ultimo e da membrana basal subjacente para o tecido extravascular. Este processo requer vrios passos, cada um controlado por diferentes molculas (molculas de adeso e quemoquinas). Embora haja diferentes tipos de leuccitos, o processo bsico de migrao semelhante. No entanto, as molculas expressas variam de tipo para tipo, resultando em diferentes propriedades de migrao. Para que ocorra migrao so necessrias molculas de adeso, e os respectivos ligandos, entre os leuccitos circulantes e as clulas do endotlio. Estas molculas pertencem a duas famlias: as selectinas e as integrinas (NOTA: As quemoquinas NO SO molculas de adeso!). A expresso destas molculas varia entre os tipos de leuccitos e diferentes locais nos vasos sanguneos.

SELECTINAS E SEUS LIGANDOS

As selectinas so molculas de adeso presentes na membrana plasmtica que se ligam a ligandos glicdicos. Medeiam um passo inicial, de baixa afinidade entre os leuccitos e o endotlio. As selectinas so expressas nas clulas endoteliais enquanto os seus ligandos so expressos na superfcie dos leuccitos. O endotlio expressa 2 tipos de selectinas: P-selectinas e E-selectinas.

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A P-selectina armazenada em grnulos citoplasmticos e distribuda pela superfcie das clulas endoteliais em resposta a produtos microbianos, citocinas, histamina (libertada pelos mastcitos) e trombina (gerada na coagulao sangunea). A E-selectina sintetizada e expressa na superfcie do endotlio 1 a 2h aps deteco (e como resposta a esta) de IL-1, TNF e produtos microbianos como o LPS. Os ligandos para as selectinas existentes nos leuccitos so grupos glicdicos existentes em glicoprotenas membranares dos granulcitos, moncitos e em algumas clulas T efectoras e de memria previamente activadas. A L-selectina, um caso particular, expressa na superfcie dos leuccitos mas no nas clulas endoteliais. Os seus ligandos encontram-se expressos nas vnulas de alto endotlio (high endothelial venules). So importantes no homing dos linfocitos T naive nos ndulos linfticos (imunidade adaptativa). Os linfcitos expresso L-selectina e ligandos para as P- e E-selectinas (no cume das suas microvilosidades, facilitando a interaco com o endotlio).

INTEGRINAS E SEUS LIGANDOS

As integrinas so protenas heterodimricas, existentes na membrana plasmtica dos leuccitos, constitudas por 2 cadeias polipeptdicas ligadas no covalentemente. Medeiam a adeso dos leuccitos s clulas endoteliais atravs de interaces especficas com os seus ligandos. O domnio citoplasmtico das integrinas interage com o citoesqueleto da clula. As duas integrinas mais importantes nos leuccitos so a LFA-1 e a VLA-4. A LFA-1 liga-se ICAM-1, uma glicoprotena membranar expressa em clulas endoteliais activadas por citocinas, linfcitos, clulas dendrticas e macrfagos, entre outras. A poro extracelular da ICAM-1 apresenta uma sequncia homloga e estrutura terciria semelhante a domnios encontrados nas imunoglobulinas.

Outros dois ligandos para a LFA-1 so a ICAM-2, expressa nas clulas endoteliais, e a ICAM-3, expressa nos linfcitos. A VLA-4 liga-se VCAM-1, expressa nas clulas endoteliais activadas por citocinas de alguns tecidos. Esta interaco importante para o recrutamento de leuccitos para o local da inflamao. As integrinas aumentam a afinidade para os seus ligandos como resposta a sinais intracelulares. Esta activao provocada pela ligao de quemoquinas 23

aos seus receptores (ou do antignio ao receptor no caso dos linfcitos), o que leva alterao da conformao do domnio extracelular das integrinas para uma conformao em que a interaco destas com os seus ligandos mais fcil. As quemoquinas tambm induzem o agrupamento das integrinas na membrana, o que aumenta a avidez destas para os ligandos no endotlio, fortalecendo a ligao leuccito-endotlio.

QUEMOQUINAS E SEUS RECEPTORES

Famlia estruturalmente homloga s citocinas que estimula o movimento leucocitrio e regula a migrao dos leuccitos do sangue para os tecidos. So polipptidos que contem 2 ligaes bissulfito. As duas maiores famlias so as CC e as CXC. Regra geral, as CC e seus receptores medeiam o recrutamento de neutrfilos e linfcitos enquanto as CXC recrutam moncitos e linfcitos. As quemoquinas CC e CXC so produzidas por leuccitos e por outras clulas, como as endoteliais, as epiteliais e os fibroblastos como resposta a estmulos externos. A sua secreo induzida pelo reconhecimento de micrbios (por receptores da imunidade inata) e pela presena de IL-1 e TNF. Algumas CC so tambm produzidas por clulas T previamente estimuladas por antignios (ligao do recrutamento de leuccitos na inflamao com a imunidade adaptativa). Os receptores de quemoquinas pertencem superfamlia das GTP-bindingprotein G-coupled-receptors. So estes receptores que iniciam a resposta intracelular atravs das protenas G trimricas associadas. As protenas G estimulam mudanas no citoesqueleto, que levam ao aumento da motilidade da clula e alterao da conformao das integrinas na sua superfcie, aumentando a afinidade destas ultimas para os seus ligandos. Os receptores de quemoquinas diminuem de quantidade na presena de quemoquinas, o que pode ser um mecanismo de terminao do processo inflamatrio. Diferentes combinaes de receptores de quemoquinas esto presentes nos diferentes tipos de leuccitos, o que leva a padres de migrao diferentes. So os padres de expresso de receptores que determina que leuccito vai responder a cada quemoquina. As quemoquinas tm um papel fundamental: o So essenciais no recrutamento de leuccitos em circulao do sangue para os tecidos. A entrada dos linfcitos nos ndulos linfticos e a entrada de

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linfcitos, moncitos e neutrfilos nos locais de infeco so controladas por quemoquinas. o As quemoquinas extravasculares estimulam o movimento dos leuccitos e a sua migrao segundo o gradiente qumico de protenas secretadas, processo este chamado que quemocinese. Assim, os leuccitos so direccionados para clulas infectadas nos tecidos ou para zonas especficas nos rgos linfodes. As quemoquinas esto envolvidas no desenvolvimento dos rgos linfodes e regulam o trfego de linfcitos e outros leuccitos para os tecidos linfodes perifricos. As quemoquinas so essenciais para a migrao de clulas dendrticas do local de infeco para os ndulos linfticos. As clulas dendrticas tm um papel fundamental na ligao entre os sistemas imunes inato e adaptativo.

MIGRAO DOS LEUCCITOS DO SANGUE PARA OS TECIDOS INFLAMADOS

INTERACES LEUCCITOS LEUCCITO-ENDOTLIO E EXTRAVASAO DOS

As selectinas, integrinas e quemoquinas controlam em conjunto as interaces leuccito-endotlio necessrias para a migrao dos leuccitos para os tecidos inflamados. A migrao feita por uma sequncia de eventos comum maioria dos leuccitos:

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1. ROLLING: como resposta a micrbios e/ou citocinas produzidas por clulas que estiveram em contacto com os micrbios, a expresso de selectinas na superfcie do endotlio vai aumentar. Os leuccitos, que se moveram para perto da superfcie endotelial das vnulas (devido dilatao dos vasos e diminuio do fluxo sanguneo nos locais em que ocorre a resposta imunitria inata) vo se ligar, atravs das selectinas no endotlio e respectivos ligandos nos leuccitos, ao endotlio. Como esta ligao de baixa afinidade, os leuccitos vo se ligando e desligando sucessivamente, rolando ao longo da superfcie endotelial. 2. AUMENTO DA AFINIDADE DAS INTEGRINAS: no local da infeco, como resposta a estmulos patognicos ou endgenos, as clulas vo produzir quemoquinas. Estas vo ser transportadas para as vnulas poscapilares e vo se ligar a proteoglicanos nas paredes destas. 1 vez fixadas, vo se ligar aos seus receptores na membrana dos leuccitos em rolling, alterando a conformao e distribuio das integrinas nas membranas destes, o que aumenta a afinidade das integrinas para os ligandos destas. 3. ADESO DOS LEUCCITOS AO ENDOTLIO MEDIADA POR INTEGRINAS: simultaneamente com a activao das integrinas, o TNF e a IL-1 (citocinas) vo tambm aumentar a expresso de ligandos para as integrinas no endotlio (maioritariamente VCAM-1 e ICAM-1). Estas alteraes vo levar a que os leuccitos adiram firmemente ao endotlio, com a reorganizao do seu citoesqueleto, e sua disperso pela superfcie endotelial. 4. TRANSMIGRAO DOS LEUCCITOS ATRAVS DO ENDOTLIO: geralmente, os leuccitos atravessam a parede das vnulas entre clulas endoteliais (migrao paracelular). Para que isto acontea, necessria uma quebra transitria e reversvel das junes de aderncia que mantm as clulas endoteliais fixas umas s outras. Embora seja muito menos comum, j foi provado que por vezes os leuccitos atravessam a clula endotelial em si (migrao transcelular). A especificidade existente na migrao leucocitria deve-se expresso de diferentes combinaes de molculas de adeso e de quemoquinas em cada tipo de leuccito.

MIGRAO DOS NEUTRFILOS E MONCITOS PARA OS LOCAIS DE INFECO OU DANO NO TECIDO

Aps a sua maturao na medula ssea, os neutrfilos e moncitos entram na circulao sangunea, de onde so recrutados na resposta inflamatria por um processo semelhante ao descrito anteriormente.

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Os neutrfilos e moncitos expressam combinaes distintas de molculas de adeso e de receptores de quemoquinas (em diferentes locais ou diferentes alturas), o que os leva a migrar para locais (onde est a ocorrer resposta inflamatria) diferentes, ou para o mesmo local em alturas diferentes. Os neutrfilos so os primeiros a ser recrutados, sendo seguidos, umas horas mais tarde, pelos moncitos, que so recrutados continuamente. Em alguns casos, os neutrfilos no so recrutados de todo. Os neutrfilos e moncitos expresso receptores de quemoquinas diferentes, o que provavelmente o maior determinante da divergncia dos seus comportamentos no que respeita a sua migrao.

PATOLOGIAS ASSOCIADAS

Existem patologias provocados por defeitos na adeso dos leuccitos s clulas endoteliais. Estes defeitos devem-se a alteraes no mecanismo da adeso leucocitria. So conhecidas por Deficincias na adeso leucocitria (LAD Leokocyte Adhesion Deficiency) 1, 2 e 3. Estas esto descritas na terica n9, correspondente s Imunodeficincias Primrias.

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T4: Homeostasia e Clonalidade

Data terica de 6 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 1,2,8,9,14 Captulos do Arosa: 3,7,8 Slides aulas: Sim Elaborado por: Mariana Gabriel

NOTA INTRODUTRIA:
Neste captulo so focados os pontos essenciais sobre os temas homeostasia e clonalidade, com base na informao contida (e dispersa por vrios captulos) no Abbas. Para alm disso, encontram-se inseridas algumas informaes adicionais (tambm espalhadas em diferentes captulos) do Arosa, e, ainda, informaes da aula terica. Estas ltimas no se encontram na totalidade, visto que algumas partes da aula incidiram sobre a parte da investigao laboratorial destes temas, que so de difcil compreenso apenas atravs dos slides.

INTRODUO
Todas as respostas a antignios, tanto humorais como mediadas por clulas, possuem um conjunto de propriedades fundamentais que refletem as propriedades dos linfcitos que medeiam essas mesmas respostas (Abbas, 2012). Nesse conjunto de propriedades fundamentais encontram-se a Homeostasia e a Clonalidade.

HOMEOSTASIA
PERSPECTIVA HISTRICA
Em 1932, Walter Cannon definiu homeostasia como sendo a manuteno do equilbrio, ou de condies constantes, num sitema biolgico atravs de mecanismos de feedback que neutralizam perturbaes que tendem a desequilibrar esse mesmo sistema. Cannon, para explicar o que acontecia em sistemas biolgicos, utilizou como modelo/paradigma a manuteno da presso na mquina a vapor. Por exemplo, quando a presso inferior necessria para manter a funcionalidade da mquina a vapor, accionam-se uma srie de engenhos que produzem um aumento da presso at aos valores desejados. Da mesma forma, quando o nmero de linfcitos insuficiente para dar resposta a um agente patognico, por exemplo, 28

existem mecanismos que levam a um aumento de produo de linfcitos, tentando-se assim controlar as perturbaes que ocorrem no organismo.

Como acabmos de ver, esta ideia de regulao por mecanismos homeostticos pode ser aplicada na imunidade, mais propriamente, na manuteno de um nmero constante de linfcitos no organismo.

HOMEOSTASIA NUMA RESPOSTA IMUNE

Todas as respostas imunes normais diminuem com o tempo depois de uma ligao a um antignio, fazendo com que o sistema imunitrio retorne ao seu estado basal, para que este possa, posteriormente, responder com eficcia a novos antignios a este processo designa-se de homeostasia. A manuteno da homeostasia ocorre, principalmente, porque as respostas imunitrias que so desencadeadas por antignios tm como objectivo elimin-los, o que, consequentemente, gera um estmulo essencial para a activao e sobrevivncia dos linfcitos; e tambm porque, simultaneamente, os linfcitos privados desses estmulos morrem por apoptose (Abbas et al., 2012). Os mecanismos homeostticos fazem com que o sistema recupere o estado de equilbrio e de capacidade reactiva que existia antes do estmulo antignico, o que lhe permite responder prontamente a novo estmulo, se tal for necessrio, cumprindo assim o seu papel fundamental de preservar a individualidade biolgica (Arosa et. al, 2007).

CLONALIDADE
Numa resposta imune, os linfcitos T naive so ativados por um antignio, entram em diviso e produzem uma descendncia de clulas-filhas ou clones, processo designado por expanso clonal. A expanso clonal dos linfcitos especficos de um antignio a multiplicao de clulas que especificamente reconhecem, se ligam e so activados por um s tipo de antignio, constituindo uma famlia de clulas morfolgica e funcionalmente idnticas, aquilo que se designa de clone (Arosa et al., 2007). Este aumento nas clulas antignio-especficas confere resposta imune adaptativa a capacidade de acompanhar o nmero de agentes patognicos infeciosos, que se dividem rapidamente. (Abbas et al., 2012)

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Estudos in vitro indicam que a proliferao como resposta a um antignio promovida pela IL-2 produzida pelos prprios linfcitos T em diviso (aco autcrina), garantido, assim, que as clulas T antignio-especficas sejam as que mais proliferam. Porm, in vivo a proliferao induzida por antignios pouco dependente da IL-2, sugerindo que outros sinais ou factores de crescimento podem contribuir para a diviso celular, para alm da IL-2 (Arosa et al., 2007). Antes da exposio ao antignio, a frequncia de clulas T naive especficas para qualquer antignio de 1 em cada 105/106 linfcitos. Aps a exposio ao antignio, a frequncia das clulas T CD8+ especficas para determinado antignio pode aumentar para cerca de 1 em cada 3 a 1 em 10 linfcitos, enquanto que o nmero de clulas T CD4+ especficas aumenta para cerca de 1 em cada 100 linfcitos a 1 em cada 1000 linfcitos (Abbas et al., 2012). Estudos em ratinhos mostraram pela primeira vez esta tremenda expanso da populao celular antignio-especfica em algumas infeces virais agudas. Constatou-se ainda que, durante esta expanso clonal, clulas T bystander (no especficas para o vrus) no proliferaram. Como se pode ver na figura seguinte, a fase inicial de expanso sempre seguida de uma fase de contrao durante a qual alguns linfcitos naive inicialmente activados sofrem morte celular programada ou apoptose, enquanto outros sobrevivem.

A morte e a sobrevivncia so processos dependentes altamente regulados. O balano entre um e outro ir determinar, em grande medida, a magnitude da resposta mediada pelos linfcitos T e, em ltima instncia, contribuir para a homeostasia dos linfcitos T. Anomalias no equilbrio entre apoptose e sobrevivncia podem resultar quer em doenas linfoproliferativas quer em imunodeficincias de clulas T associadas a processos autoimunes (Arosa et al., 2007). 30

MANUTENO DE UM NMERO CONSTANTE DE LINFCITOS

Num estado de equilbrio, o pool de linfcitos naive mantido num nmero constante porque existe um balano entre a morte espontnea dessas clulas e a produo de novas clulas (Abbas et al., 2012).

O turnover celular, referido na imagem abaixo, a substituio de clulas envelhecidas por novas clulas e ocorre em cerca de 1% dos linfcitos por dia. De uma forma simples, podemos dizer que a quantidade de linfcitos que morre naturalmente igual s quantidades de linfcitos resultantes da produo nos rgos linfides primrios e da proliferao por expanso clonal.

Qualquer perda de linfcitos leva a uma proliferao compensatria das clulas que sobrevivem a essa perda, aumentando, assim, a quantidade de linfcitos. Por exemplo, se clulas naive forem transferidas para um ratinho que possui uma deficincia linfocitria, os linfcitos que foram transferidos comeam a proliferar e sua quantidade aumenta at que se atinja, aproximadamente, o nmero de linfcitos que se encontrariam num ratinho sem linfopenia. Este processo designado de proliferao homeosttica, uma vez que o objectivo obter o nmero ptimo de linfcitos de forma a manter a homeostasia do sistema imunitrio.

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A proliferao homeosttica parece ser influenciada pelos mesmos sinais que so necessrios para a manuteno de linfcitos naive, ou seja, o reconhecimento de alguns autoantignios e citocinas (IL-7, principalmente) (Abbas et al., 2012).

COMO ESTUDAR/INVESTIGAR LINFCITOS T?

OS

MECANISMOS

DE

MANUTENO

DE

Atravs de enxertos de timo: se, em ratinhos, aumentarmos o nmero de timos, o nmero de linfcitos existentes aumenta, mas no directamente proporcional, como se pode verificar no grfico a seguir. Ao aumentar a produo tmica, a proliferao dos linfcitos diminuir por feedback negativo, para que no se gerem mais clulas do que aquelas que morrem naturalmente.

COMO DEMONSTRAR O FEEDBACK?

Atravs da quantificao da proliferao por diluio de CFSE (fluorocromo que marca clulas em proliferao) e linfopenia induzida (radiao que far diminuir o nmero de linfcitos). Primeiro, induz-se a linfopenia, em ratinhos, e posteriormente, contam-se as clulas marcadas (linfcitos em proliferao). Nesta experincia laboratorial verificou-se um aumento da proliferao linfocitria. Com a ideia de turnover celular em mente, inferimos que ao aumentar a morte celular, a proliferao de clulas sobreviventes tambm ir aumentar (estimulada pela IL-7 e por ligandos MHC-pptido) num esforo de restabelecer o nmero de linfcitos normal. 32

CONCLUSO
Atravs dos resultados anteriores, podemos concluir que o mecanismo de feedback negativo, essencial para a regulao homeosttica de linfcitos, depende da densidade/nmero de clulas.

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TP4: Introduo/Diferenciao e Activao Linfocitria

Captulos do Abbas: 8 Captulos do Arosa: 11 Slides aulas: no
Elaborado por: Joo Pedro Sousa

NOTA INTRODUTRIA: Este captulo tem como objectivo abordar as temticas que, apesar de no terem sido abordadas nas tericas, foram o foco de muitos dos trabalhos realizados nas aulas terico-prticas, em particular da 4 aula, sobre o Desenvolvimento e Activao Linfocitria. Posto isto, vamos centrar-nos apenas no Desenvolvimento Linfocitrio.

DESENVOLVIMENTO LINFOCITRIO
O processo que d origem a linfcitos, B e T, capazes de reconhecer antignios especficos denomina-se de desenvolvimento ou maturao linfocitria. Deste processo, fazem parte mecanismos que permitem: o desenvolvimento de linhagens diferentes de linfcitos a partir dos mesmos progenitores; o rearranjo gentico necessrio expresso de diferentes receptores, especficos para determinados ligandos e antignios; a proliferao dos linfcitos com os receptores adequados aco a que esto pr-destinados e a eliminao de outros, com receptores inadequados. O resultado final so linfcitos de vrias populaes distintas, com receptores devidamente funcionais e capazes de dar uma resposta o mais rpido e eficazmente possvel presena de antignios estranhos ao organismo. Neste processo de maturao, muitas fases e mecanismos so comuns a todas as populaes linfocitrias. Portanto, antes de especificar o desenvolvimento para os dois diferentes tipos de linfcitos que pretendemos abordar (B e T), convm abordar os aspectos comuns ao desenvolvimento dos linfcitos em geral.

DESENVOLVIMENTO LINFOCITRIO: VISO GERAL

Todos os linfcitos provm, tal como as restantes clulas do sangue, de clulas estaminais hematopoiticas (hematopoietic stem cells, ou HSCs). Estas clulas so pluripotentes e, portanto, no so especficas para qualquer uma das linhagens de clulas que podem originar. Estas clulas provm quer da medula ssea, quer do fgado fetal.

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Posteriormente, as HSCs iro desenvolver-se em progenitores linfocitrios comuns (CLPs) capazes ento de dar origem a linfcitos T, linfcitos B e algumas clulas dendrticas. Os progenitores linfocitrios comuns vo, de seguida, atravessar alguns passos comuns ao desenvolvimento de todos os linfcitos: Comprometimento (commitment) dos progrenitores linfocitrios a uma das duas linhagens linfocitrias, B ou T; Proliferao, no sentido de aumentar o pool de clulas, quer de progenitores comuns, quer de percursores j comprometidos a uma linhagem; Rearranjo gentico sequencial e expresso dos genes que codificam os receptores prprios a cada populao linfocitria Seleco, no sentido de preservar apenas os linfcitos com receptores eficazes e eliminar receptores que reconhecem antignios self (do prprio organismo) Diferenciao dos linfcitos B e T nas suas diversas subpopulaes; Migrao para os rgos linfides perifricos (gnglios), onde aguardam activao por outros factores. A localizao anatmica onde ocorre o desenvolvimento varia consoante o tipo de clula que vo originar e o estado da sua maturao. De um modo geral, aps o commitment, os percursores de linfcitos B terminam o seu desenvolvimento na medula ssea, ao passo que os percursores de linfcitos T (ou timcitos) migram para o timo no sentido de continuar a sua maturao.

COMMITMENT
O processo que define a linhagem a que pertence cada progenitor linfocitrio comum depende de diversos receptores superfcie das clulas e de factores de transcrio. So fundamentais, por um lado, para induzir protenas essenciais diferenciao e ao rearranjo gentico. Por outro, vo tornar os genes que codificam os 35

receptores correctos acessveis a essas mesmas protenas isto feito descondensando a cromatina em pores particulares do DNA do progenitor linfocitrio. Assim sendo, num progenitor de linfcitos B, o locus codificante das imunoglobulinas (Ig) libertado; nos percursores de linfcitos T, corresponde poro codificante do TCR (T-cell receptor).

Para os linfcitos T (excepto os NK), o Notch-1, em colaborao com o GATA-3, que compromete um progenitor a esta linhagem. No caso dos linfcitos B, destaca-se a aco dos factores de transcrio EBF e E2A, que vo induzir um outro factor de transcrio, o Pax-5, e no seu conjunto iro comprometer um progenitor formao de linfcitos B.

PROLIFERAO
A proliferao garante, como j foi dito, um pool de clulas percursoras considervel, para que se possa originar uma quantidade aceitvel de linfcitos funcionais (contando que haver mutaes, nem todos os linfcitos formados inicialmente so devidamente eficazes, sendo eliminados). Para promover a proliferao, so necessrios sinais mediados por citocinas. Experincias permitiram saber que a IL-7, produzida na medula ssea e no timo, importante sobretudo na proliferao dos progenitores de linfcitos T. A doena da imunodeficincia combinada severa ligada ao cromossoma X (X-linked severe sombined immunodeficiency disease) corresponde a uma mutao numa cadeia da IL7, e resulta em graves bloqueios no desenvolvimento de linfcitos T e NK, mas com normal desenvolvimento de linfcitos B. A proliferao cessa quando expressa a primeira cadeia do receptor de antignios especfico. No caso do BCR B-cell receptor, que corresponde Ig -, expressa-se inicialmente a cadeia pesada do Ig. No caso do TCR, expressa inicialmente a cadeia do TCR. Este um passo essencial sobrevivncia, expanso e continuao do desenvolvimento de um linfcito.

REARRANJO GENTICO E EXPRESSO DOS RECEPTORES DE ANTIGNIO

O rearranjo dos genes codificantes dos receptores de antignio, Ig e TCR, tambm denominado rearranjo V(D)J, importantssimo na gerao de diversidade de receptores de antignio. Este rearranjo permite obter milhes de receptores antignicos diferentes a partir do mesmo locus. Caso contrrio, seria necessria uma poro muitssimo maior de DNA a codificar estes receptores para que essa variedade ocorresse. Note-se, ainda, que tudo isto ocorre antes do contacto do linfcito com qualquer antignio. Esta variabilidade atingida a partir da recombinao de regies/segmentos de genes, dentro do locus que codifica os receptores. As regies seleccionadas so denominadas variveis (variable regions, V), de diversidade (diversity, D) e de juno 36

(juction, J). As restantes regies, de domnio constante, designam-se como regies C (constant). O resultado desta recombinao um exo novo, funcional, resultante da juno de um segmento V com um segmento J, ou de trs segmentos, se um segmento D estiver ainda presente (nem sempre acontece). Este exo ir codificar a regio varivel de cada receptor de antignio, e ao mesmo tempo conferir especificidade a esse receptor. Esta juno aleatria, podendo um segmento V juntar-se com um de vrios segmentos J ou D, pelo que a variabilidade atingida imensa. Assim sendo, a variabilidade aumenta consoante o nmero de segmentos V, (D) e J que esto presentes num determinado locus. No entanto, o factor que mais contribui para a diversidade nos receptores acaba por ser a adio ou deleo aleatria de nucletidos nos locais de juno dos segmentes V-D, D-J ou V-J. Esta adio de nucletidos mediada pela enzima terminal deoxynucleotidil transferase, ou TdT.

Resultante desta diversidade na juno, h uma regio de hipervariabilidade em todos os receptores Ig e TCR, localizada na juno do segmento V com o segmento constante C, denominada CDR3. a regio mais importante na determinao da especificidade de um receptor ao antignio. Inicialmente, todas as clulas possuem a mesma linhagem de genes, a ocupar sempre as mesmas posies no DNA. S aps este rearranjo so criados os genes que verdadeiramente codificam os receptores de antignio. Claro est, nem todos os receptores expressos aps o rearranjo so teis ou funcionais, pelo que grande parte destes linfcitos eliminada nos processos de seleco.

SELECO
Vrios mecanismos no decurso da maturao linfocitria checkpoints - permitem que apenas linfcitos com os devidos receptores, capazes de reconhecer antignios estranhos e, alm disso, no reconhecer antignios self sobrevivam e proliferem futuramente. No geral, muitos desses mecanismos dividem-se em processos de 37

seleco positiva e processos de seleco negativa. O primeiro induz mecanismos de sobrevivncia, ao passo que o segundo activamente provoca a morte celular de um linfcito indevidamente desenvolvido. Estes processos sero descritos com maior detalhe mais frente, relativamente a cada um dos tipos de linfcitos, B e T. De seguida, apresenta-se um esquema que resume alguns dos processos que regulam e seleccionam a populao linfocitria no organismo.

DIFERENCIAO
No final do desenvolvimento, sero obtidas no apenas duas populaes de linfcitos, B e T, mas vrias subpopulaes dentro de cada uma das duas principais. Assim sendo, um linfcito B pode desenvolver-se num linfcito B folicular, num linfcito B-1, ou num linfcito B de zona marginal. Por sua vez, encontramos quatro subtipos de linfcitos T: CD4+, CD8+, linfcitos T e linfcitos T NK.

Agora, iremos abordar em particular alguns aspectos especficos do desenvolvimento dos linfcitos B e posteriormente, dos linfcitos T.

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DESENVOLVIMENTO DE LINFCITOS B
O desenvolvimento dos linfcitos B decorre, na maior parte dos casos, totalmente na medula ssea, sendo que independentemente da provenincia dos progenitores linfocitrios comuns, l que terminam a sua maturao em clulas B maduras. Consideram-se vrias fases no desenvolvimento de um linfcito B, consoante os marcadores de superfcie que apresentam e pelo receptor que os caracterizam. So elas: linfcito pr-B linfcito pr-B linfcito B imaturo linfcito B maduro

Vamos agora descrever o que caracteriza cada uma destas fases e que processos ocorrem, especificamente, em cada uma.

LINFCITO PR-B
So os linfcitos que se seguem imediatamente ao commitment de progenitores comuns, correspondendo linhagem percursora de linfcitos B. Distinguem-se de outros linfcitos imaturos por expressarem CD19 e CD10, entre outros marcadores de superfcie.

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Nesta fase, comeam a ser expressadas as protenas Rag, essenciais ao incio do rearranjo V(D)J dos genes codificantes do receptor Ig. Inicialmente, apenas se inicia o rearranjo e a expresso da cadeia pesada deste receptor.

LINFCITO PR-B
Estes linfcitos diferem dos anteriores na medida em que j expressam a protena , resultado do rearranjo da cadeia pesada do receptor Ig. Assim, pode-se dizer que expressam Ig - correspondente cadeia pesada do receptor Ig maduro. Esta associa-se a outras protenas, como a V pr-B e a 5, produzidas pelo pr e prlinfcitos B e anlogas s cadeias leves do receptor Ig, substituindo-as temporariamente (denominam-se, por isso, cadeias de aluguer). Fazem tambm parte deste complexo protenas Ig e Ig, que depois iro constituir parte do receptor BCR maduro. No conjunto, este novo receptor tambm denominado receptor pr-B, ou pr-BCR. No se sabe ao certo quais os ligandos deste receptor, ou o que ele reconhece. No entanto, sabe-se que a presena de um pr-BCR funciona como checkpoint, emitindo sinalizaes que permitem o avano para a fase seguinte. Mais propriamente, produzida uma enzima, a BTK (Brutons tyrosine kinase), que a partir deste ponto se torna importante para mediar sinais do pr-BCR no sentido de regular a sobrevivncia, proliferao e maturao dos linfcitos pr-B, seja nesta fase ou em fases seguintes do desenvolvimento. Alm disso, o pr-BCR tem um papel na continuidade do rearranjo das cadeias que faro parte do receptor maduro. Isto faz-se de duas formas: a presena de uma protena produzida pelo rearranjo num dos cromossomas inibe o rearranjo dos genes que codificam a cadeia pesada do Ig no outro cromossoma, permitindo que cada linfcito produza apenas um receptor BCR, mantendo a especificidade deste. Este fenmeno denomina-se excluso allica. Isto permite, ainda, que o rearranjo seja terminado caso o primeiro tenha sido mal sucedido (induzindo o rearranjo no cromossoma restante), ou que a clula sofra apoptose caso ambos os cromossomas tenham efectuado rearranjos ineficazes. o Ig vai ainda induzir o rearranjo da cadeia leve do BCR, e inactivar a expresso das cadeias anlogas que as substituam e que foram inicialmente produzidas pelo linfcito pr-B (as cadeias de aluguer).

LINFCITO B IMATURO (NAVE)

No estgio seguinte, os linfcitos pr-B adquirem no so um receptor BCR com cadeia pesada, mas tambm completado o rearranjo e expresso de uma cadeia leve seja uma cadeia ou uma cadeia (normalmente, s se forma uma cadeia quando o rearranjo do locus para uma cadeia no foi bem sucedido, e fenmenos de excluso de isotipo de cadeia leve previnem a expresso de ambos os tipos de

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cadeia leve). Em ambos os casos, estamos perante uma molcula IgM completa. A partir deste ponto, o linfcito denomina-se linfcito B imaturo. A molcula de IgM, em associao com as protenas Ig e Ig, vo servir como ponto de ancoragem do antignio, conferindo a especificidade a este. Se o linfcito, nesta fase, no for reactivo a antignios self, so emitidos sinais pelo BCR que permitem a sua sobrevivncia e cessam a expresso das protenas Rag, impedido posterior rearranjo de quaisquer genes de Ig. Nesta fase, no h proliferao ou diferenciao perante o contacto com antignios, dado que uma reaco intensa com antignios na medula ssea significaria demasiada reactividade com antignios self, e portanto iria induzir ou edio do receptor (veremos melhor mais frente) ou morte celular. Pelo contrrio, se os linfcitos nesta fase forem pouco reactivos com antignios self, migram para o bao onde vo completar a sua maturao.

LINFCITO B MADURO
Quando falamos de linfcitos B maduros, consideramos diferentes subpopulaes, com diferenas na sua origem, diferenciao e mesmo nos locais anatmicos de maturao. Assim, distinguimos: Linfcitos B foliculares (FOB) Linfcitos B-1 (B1-B) Linfcitos de Zona Marginal (MZB)

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LINFCITOS B FOLICULARES A maioria dos percursores de linfcitos B do origem a linfcitos maduros deste tipo os quais expressam no s uma cadeia pesada como outra cadeia pesada , sendo esta a sua particularidade. Expressam igualmente duas cadeias leves, sejam ou , e cada uma delas se associa a uma das duas cadeias pesadas. O resultado a expresso no s de IgM (contendo a cadeia pesada ), como tambm de um IgD (que contm a cadeia pesada ). Esta transcrio de dois receptores diferentes provm do splicing alternativo de um mesmo exo VDJ (como mostra a figura abaixo).

Estes dois receptores de membrana tm a mesma especificidade a um antignio reconhecem o mesmo, portanto. No se sabe ao certo os processos de sinalizao que levam expresso tanto do IgM como do IgD. Mas sabe-se que a sua presena fundamental para permitir ao linfcito B maduro entrar em circulao e adquirir competncia funcional o que leva ideia de que o IgD o principal receptor de activao do linfcito B. No entanto, no surgiram evidncias que distingam o IgM do IgD a nvel funcional. Os linfcitos B foliculares so, tambm, designados por linfcitos B recirculantes, j que migram de um rgo linfide para outro, residindo em pequenos nichos conhecidos como folculos de linfcitos B. A sobrevivncia destas clulas nestes nichos permitida em parte por citocinas da famlia do TNF, designadas por BAFF ou BlyS. As clulas B maduras naive respondem a antignios, e caso no reajam activamente a um antignio alguns meses aps a maturao, acabam por morrer. LINFCITOS B-1 Estes linfcitos B so particulares, na medida em que os seus progenitores tm origem no fgado fetal, e no na medula ssea. A sua constituio e funo esto mais bem definidas nos roedores, onde a maioria destas clulas expressam CD5 e parecem formar populaes auto-suficientes no peritoneu e nas mucosas. 42

Estes linfcitos desenvolvem-se mais cedo que os linfcitos B comuns e no apresentam um grau muito elevado de rearranjo e diversidade na juno, j que a TdT no expressa no fgado fetal. Tal como os linfcitos de zona marginal (abordados posteriormente), os linfcitos B-1 secretam anticorpos IgM que reagem com polissacardeos e lpidos microbianos. Secretam ainda, nas mucosas, anticorpos IgA. Assim sendo, estes linfcitos so importantes na rpida produo de anticorpos contra microrganismos em determinados locais anatmicos e tecidos. No Homem, estes linfcitos foram descritos, mas no expressam CD5. Este, por sua vez, expresso por linfcitos em transio e algumas populaes de linfcitos B activos.

LINFCITOS B DE ZONA MARGINAL Os linfcitos de zona marginar (MZB) expressam, por sua vez, um receptor IgM e o co-receptor CD21. No Homem, estes linfcitos podem ser encontrados no bao e ndulos linfticos. Respondem muito rapidamente presena de microrganismos circulantes atravs da produo de anticorpos IgM. Alm disso, so capazes de mediar respostas dependentes de linfcitos T.

SELECO DE LINFCITOS B
Alguns dos processos de seleco de linfcitos B tm vindo a ser discutidos at aqui. O primeiro de todos trata-se, precisamente, da seleco positiva dos linfcitos cujo rearranjo gentico foi bem-sucedido e que expressaram devidamente o receptor Ig. Destes so emitidos sinais tnicos BCR no sentido de manter mecanismos de sobrevivncia da clula e de parar a expresso de protenas Rag, cessando definitivamente o rearranjo gentico. Os linfcitos B imaturos que reconhecem antignios self, por outro lado, podem tornarse perigosos (dado o risco de desenvolvimento de doenas auto-imunes). Estes linfcitos, no entanto, no sofrem imediatamente morte celular: antes disso, so induzidos a alterar a sua especificidade, por um processo designado edio do receptor. Neste processo, o reconhecimento do antignio leva reactivao dos genes Rag e a novos rearranjos VJ e expresso de uma nova cadeia leve Ig (normalmente, corresponde cadeia leve ). Isto permite clula expressar um novo receptor, no sensvel ao antignio self que desencadeou esta alterao. Por outro lado, se a edio do receptor falhar, induzida a apoptose da clula. Este processo tambm designado por seleco negativa. Esta induo feita pelos prprios antignios self, que so abundantes na medula ssea. 43

Assim sendo, e em ambos os processos, os antignios self so eles prprios responsveis pela tolerncia generalizada que os linfcitos B maduros apresentam para eles. Aps a expresso de IgM e IgD (no caso dos linfcitos B foliculares que correspondem maioria da resposta imunitria humoral), o reconhecimento de um antignio leva proliferao e diferenciao, no sentido de induzir a resposta adequada no ocorrem, nesta fase, novos processos de seleco (edio ou apoptose), pois esta j foi garantida em fases anteriores.

DESENVOLVIMENTO DE LINFCITOS T
De seguida, vamos aprofundar o processo de desenvolvimento e maturao de linfcitos T, especificamente. Como j foi referido, o timo o rgo onde se d a maior parte do desenvolvimento dos percursores de linfcitos T. No timo, estes percursores passam a designar-se como timcitos. Como sabemos, o timo vai involuindo com a idade: isto traduz-se num decrscimo de maturao de linfcitos na idade adulta. No entanto, possvel aos indivduos adultos imunocomprometidos recuperar a funo imunitria atravs do transplante de medula ssea, o que nos leva a crer que ainda ocorre alguma maturao linfocitria no timo. O timo oferece as condies necessrias seja para o transporte entre das diferentes zonas deste rgo, para a sua proliferao, ou para o prprio desenvolvimento dos linfcitos T. Este possui clulas dendrticas, macrfagos e clulas epiteliais que formam redes de prolongamentos citoplasmticos, pelas quais os linfcitos T imaturos passam e recebem estmulos essenciais maturao. Entre eles, destacamos a produo de MHCs (Major Histocompatibility Complex), que sabemos serem essenciais na apresentao de antignios ao receptor TCR. Neste caso, so importantes no pela apresentao de antignios por si s, mas pelo facto de essa apresentao precoce no timo ser necessria aos processos de seleco (como veremos mais adiante). Alm destas, as clulas estromais do timo produzem citocinas e quimiocinas, responsveis respectivamente pela proliferao de linfcitos e pela transio do crtex para a medula que estes devem realizar no sentido de completar o desenvolvimento. Dentro das citocinas mais importantes, tem-se a IL-7 (que j foi referida anteriormente). Dentro das quimiocinas, considera-se importante o papel da CCL25, que se liga ao receptor CCR9 que os progenitores linfocitrios apresentam, permitindo a migrao destes para o timo. J as CCL19 e CCL21, reconhecidas pelo receptor CCR7, so importantes na transio do crtex para a medula tmica. O desenvolvimento dos linfcitos T considera-se dividido em vrias fases, conforme a expresso dos diferentes componentes que os caracterizam: ou seja, a expresso do TCR e, se for aplicvel, de CD4 ou CD8. De acordo com este critrio, destacamos cinco etapas: 44

Linfcito pr-T (duplo-negativo) Linfcito pr-T (duplo-negativo) Linfcito T duplo-positivo Linfcito T imaturo Linfcito T maduro

LINFCITO PR-T (DUPLO NEGATIVO)

Os linfcitos pr-T so os mais imaturos, estando localizados no crtex tmico, imediatamente provenientes da medula ssea. So designados como duplonegativos, uma vez que no expressam CD4 nem CD8. Da mesma forma, no expressam qualquer tipo de receptor TCR, co-receptor CD3 ou cadeias (estruturas normalmente presentes num linfcito T maduro, como veremos mais frente). As primeiras protenas a ser expressas nesta fase so as Rag1 e Rag2, no sentido de avanar com o rearranjo dos genes codificantes do TCR. Como j referimos, este rearranjo inicia-se pela cadeia do receptor.

LINFCITO PR-T (DUPLO NEGATIVO)

No final da fase pr-T, teremos a expresso da cadeia TCR , pelo que se considera que estamos perante um receptor pr-TCR dando incio a uma nova etapa no desenvolvimento de um linfcito T, o linfcito pr-T. Note-se que este ainda se considera duplo-negativo, pelas mesmas razes que referimos anteriormente (no apresenta CD4 ou CD8). A constituir o complexo pr-TCR esto tambm cadeias CD3,

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cadeias , protena Lck (lymphocyte-specific protein tyrosine kinase) e uma protena pr-T. Nesta fase, o pr-TCR tem funes anlogas ao pr-BCR no desenvolvimento dos linfcitos B. Assim sendo, a formao do complexo pr-TCR importante para mediar sinais essenciais sobrevivncia dos linfcitos T, proliferao destes, ao incio da recombinao do locus da cadeia do TCR e a transio da fase de duplo-negativo para duplo-positivo. Ir, ainda, promover excluso allica no sentido de fechar o locus da cadeia TCR do cromossoma que no sofreu rearranjo, para que no sejam produzidas duas cadeias .

LINFCITO T DUPLO-POSITIVO
Esta fase caracteriza-se pela expresso, simultnea, de CD4 e CD8, pelo que se afirma que estes linfcitos so duplo-positivos (CD4+/CD8+). De seguida, ocorre ainda o rearranjo do locus codificante da cadeia do TCR, resultando num linfcito T que expressa CD4, CD8, CD3, cadeias , Lck e um receptor TCR , ou seja, um receptor TCR completo. Para o rearranjo e expresso da cadeia do TCR, so expressas novamente protenas Rag. Ao contrrio do que acontece na expresso da cadeia , no h excluso allica no caso das cadeias . Logo, um mesmo receptor TCR pode expressar duas cadeias , acontecendo em 30% dos linfcitos T maduros. Tal como seria de esperar, a notranscrio bem-sucedida de uma cadeia leva apoptose da clula. Note-se ainda que o rearranjo e expresso do TCR leva deleo do locus que codifica o TCR impedindo, portanto, que aquele linfcito se desenvolva num linfcito T (um dos diferentes linfcitos T maduros, como veremos mais frente). Assim, um linfcito que expresse a cadeia , ou por outras palavras, um complexo TCR , est comprometido linhagem de linfcitos T CD4+ ou CD8+. E, tal como ocorre com os linfcitos B, a expresso de protenas Rag termina a este ponto no havendo hiptese de outro rearranjo gentico.

LINFCITO T IMATURO
Nesta fase, que ocorre na transio do crtex para a medula tmica, cessada a produo de um dos dois co-receptores que tm vindo a ser expressos pelo linfcito na fase anterior: ou expresso apenas CD4, ou apenas o CD8 denominam-se single-positive. Este passo fundamental no desenvolvimento futuro de linfcitos T maduros CD4+ e CD8+. Os processos que levam expresso de um dos co-receptores e ao cessar da expresso do outro no esto muito bem estudados; surgem, no entanto, algumas teorias, que iremos abordar mais frente.

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LINFCITO T MADURO
Os linfcitos, logo que se tornam positivos apenas para CD4 ou para CD8, completam a sua maturao a nvel fenotpico. Estruturalmente, esto completos. Esta maturao acompanhada de uma maturao a nvel funcional, e portanto logo que os linfcitos T se tornam single-positive, abandonam o timo para os rgos linfticos perifricos e tornam-se linfcitos T maduros naive. Nesta fase, resta aos linfcitos aguardar por activao. Dentro dos linfcitos T maduros, encontramos vrias subpopulaes. Temos vindo a descrever o desenvolvimento de linfcitos T CD4+ ou CD8+ (os mais comuns e com papel mais preponderante na imunidade celular), mas outros existem e apresentam diferenas ao nvel da sua diferenciao, maturao e funo. Assim sendo, consideram-se: Linfcitos T CD4+ Linfcitos T CD8+ Linfcitos T Linfcitos T NK

LINFCITOS T CD4+ OU CD8+ O desenvolvimento destes linfcitos decorre, sobretudo, da forma que foi descrita at aqui. Tm a particularidade de serem restritos a MHCs, na medida em que necessitam que esta molcula lhes apresente o antignio no conseguindo reconhec-lo por si s. Esta molcula de MHC no participa apenas na sua funo 47

imunitria: tambm parte dos fenmenos de seleco, como j vimos antes (vamos aprofundar, ainda, estes processos de seleco). Os linfcitos desta linhagem, consoante so positivos para CD4 ou CD8, tm funes diferentes. Os CD4+, designados como helpers, produzem citocinas em resposta a estmulos antignicos e expressam molculas efectoras, importantes resposta imunitria geral (como por exemplo o CD40 ligando). Isto importante, por exemplo, na mediao da resposta imunitria de linfcitos B, clulas dendrticas e macrfagos. J os CD8+ adquirem a capacidade de produzir molculas que matam outras clulas. So, por isso, designadas por clulas T citotxicas. LINFCITOS T Todos os linfcitos duplo-negativos possuem, no seu DNA, locus codificantes de cadeias e . Em 90% dos casos, recombinada e expressa em primeiro lugar uma cadeia , comprometendo esses linfcitos linhagem de T . Como j foi dito, aps a expresso da cadeia eliminado o locus codificante da cadeia . No entanto, em 10% dos linfcitos, ocorre em primeiro lugar a expresso de uma cadeia , o que compromete esses linfcitos linhagem de T . Estes linfcitos T tm menos diversidade que os , e pensa-se que correspondero a uma resposta imunitria precoce deteco de microrganismos mais comuns nas barreiras epiteliais.

LINFCITOS T NK Estes linfcitos no so restritos a MHC, e expressam TCRs restritos a CD1 (molcula estruturalmente semelhante a uma molcula de MHC classe I) e um marcador de superfcie encontrado nas clulas NK (da o nome destes linfcitos T. Ateno: no confundir os 2 tipos de clulas! As clulas NK pertencem imunidade inata). Assim sendo, estas clulas reconhecem antignios lipdicos apresentados por molculas CD1. Estes antignios lipdicos podem derivar de micrbios endocitados ou podem ser antignios self. No crtex do timo, linfcitos T duplo-positivos cujos TCR reconhecam molculas CD1 so induzidos a diferenciarem-se neste subtipo de linfcito T. Estas clulas so capazes de secretar citocinas, participar na defesa contra microrganismos e regular outras respostas imunes.

SELECO DE LINFCITOS T RESTRITOS AO MHC

Os processos de seleco para os linfcitos CD4+ e CD8+ so, em parte, semelhantes aos de seleco para os linfcitos B, e alguns deles foram j mencionados. No entanto, outros so relativamente mais complexos, e alguns deles ainda esto por explicar. Veremos os exemplos mais importantes e as teorias que tentam abordar esta temtica. 48

Antes de mais, importante ter presente que a seleco de linfcitos T ocorre no timo, atravs da interaco com molculas de MHC que nele so produzidas. O objectivo desta seleco obter linfcitos T capazes de interagir com molculas de MHC self, que apresentem antignios estranhos ao organismo. Isto atingido, sobretudo, por dois mtodos. O primeiro passa por promover a ligao do TCR do linfcito a um MHC self, que apresente um antignio self produzido no timo. Aos linfcitos cujo TCR se liga com pouca reactividade ao MHC, permitida a sua sobrevivncia e proliferao. Este processo designa-se de seleco positiva. Os linfcitos cujos TCRs no se ligam de todo ao MHC, acabam por morrer ( death by neglect). Em segundo lugar, tem-se em conta a fora da ligao entre o antignio self e o TCR. Aos linfcitos cuja ligao com um antignio self muito intensa, induzida a apoptose estes linfcitos, como fcil perceber, so perigosos, uma vez que podem induzir doenas auto-imunes. Aos linfcitos cujos TCRs no reconhecem de todo antignios self, ou a ligao fraca, permitida a sobrevivncia. Este tipo de seleco designa-se por seleco negativa, e permite a tolerncia a antignios self caracterstica dos linfcitos T. Esta tolerncia, desenvolvida no timo, designa-se como tolerncia central. Este fenmeno pode ocorre tanto na fase de linfcito T duplo-positivo como na fase single-positive que imediatamente se segue, sempre na medula do timo. Na medula, existe uma protena, o AIRE (autoimmune regulator), capaz de produzir uma srie de pptidos especficos a alguns tecidos que podem ser reconhecidos pelo TCR e que facilitam este processo de seleco negativa. Curiosamente, existe um outro destino para clulas capazes de reconhecer antignios self que no a apoptose: podem diferenciar-se em clulas T reguladoras, que previnem reaces auto-imunes. No se sabe ao certo o que leva a um destino ou a outro, mas sugeriu-se que depende da fora da interaco com um antignio self (se ultrapassar um determinado nvel, induzida a apoptose). Para alm desta seleco fundamental, outra consequncia resulta da mesma interaco com MHCs precoce no timo, mais precisamente, do processo de seleco positiva: cada linfcito diferenciado num de dois subtipos, CD4+ ou CD8+. Inicialmente, os linfcitos imaturos que passam por este processo so duplo-positivos; no final, apenas vo apresentar um destes co-receptores. A molcula de MHC que se liga a um linfcito CD4+ no igual molcula de MHC que se liga a um CD8+. Existem duas classes de molculas de MHC: classe I e classe II. A primeira, classe I, est associada aos linfcitos T CD8+ e apresenta antignios provenientes do interior de qualquer clula no organismo. Os MHC classe II esto associados a linfcitos T CD4+ e apresentam antignios extracelulares que so capturados por clulas apresentadoras de antignios: apenas estas clulas expressam MCH classe II.

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Tendo isto em conta, aps o processo de seleco positiva, fica definido se aquele linfcito ser CD4+ ou CD8+. Se for ligado com sucesso a um MHC classe II, ser CD4+; por outro lado, se ligar a um MHC classe I, ser CD8+.

Dois Modelos Explicativos

No entanto, o que decide a qual dos MHCs se deve ligar um TCR no est bem explicado. Surgiram dois modelos. O primeiro, probabilstico, afirma que se trata de um processo aleatrio: um MHC liga-se ao TCR de um linfcito, se for o MHC correcto sobrevive, e caso contrrio acaba por morrer. Haveria, portanto, uma probabilidade de 50% de um MHC se ligar ao receptor TCR errado (um que estaria destinado a ser outro tipo de linfcito). Outro modelo, instrutivo, defende que a ligao de um MHC a um TCR est dependente da fora ou durao de sinais emitidos pelo MHC. Para compreender isto, preciso ter em conta que, naturalmente, existem mais CD4 que CD8 expressos na membrana de um linfcito T duplo-positivo. Assim sendo, e em tom de exemplo, um MHC classe II emitiria um sinal com fora x para o TCR. Uma vez que o MHC II interage fortemente com CD4 e com a Lck, e que existem muitos CD4 na membrana do linfcito, esse sinal seria forte. O linfcito iria interpretar esse sinal forte no sentido de induzir a expresso de CD4 (activando factores de transcrio como o ThPok) e parar a produo de CD8, tornando-se CD4+. Pelo contrrio, um MHC I emitiria um mesmo sinal para o TCR, e esse sinal seria mais fraco que o anterior, j que h menos CD8 na membrana do linfcito e o CD8 interage pouco com a Lck. Um linfcito destinado a tornar-se CD8+ iria interpretar esse sinal fraco no sentido de parar a produo de CD4 e produzir apenas CD8 (activando factores de transcrio como o Runx3). Este modelo , no geral, mais aceite que o descrito anteriormente.

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T5: Activao de Linfcitos T

Data terica de 7 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 9 Captulos do Arosa: 8 Slides da aula: sim [T Cell Activation, Prof. Bruno Silva-Santos] Elaborado por: Rui Carvalho

ACTIVAO DE LINFCITOS T
VISO GERAL
A activao inicial dos linfcitos T ocorre nos gnglios linfticos (rgos linfides secundrios), onde os linfcitos T nave circulam e encontram clulas dendrticas maduras.

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Estas clulas dendrticas, apresentadoras de antignios, migraro para os gnglios linfticos aps encontrarem os antignios nos seus tecidos de origem. Por exemplo, na pele, os antignios so detectados pelas clulas de Langerhans e, caso o antignio se encontre na circulao sangunea, detectado por clulas dendrticas do bao. As clulas T nave e as clulas dendrticas maduras (que reconheceram um antignio no seu tecido) vo encontrar-se nestes rgos linfides secundrios, pois so ambas atradas para l devido a quimiocinas produzidas nos gnglios linfticos. A activao vai consistir no reconhecimento pelas clulas T nave do antignio apresentado pelas clulas dendrticas, processo que provocar alteraes que permitiro que os linfcitos se tornem clulas efectoras, ou de clulas de memria especficas para um dado antignio que lhes foi apresentado e, portanto, com capacidade de migrao e de realizarem a sua funo. No fundo, o objectivo da activao dos linfcitos T gerar, a partir de um pool reduzido de clulas T nave, um grande nmero de clulas efectoras com capacidade de eliminar um dado antignio e uma populao de clulas de memria que permanecem em circulao durante longos perodos de tempo e que tm a capacidade de rapidamente responder a esse antignio caso esse seja reintroduzido no sistema. A activao vai levar a proliferao celular expanso clonal dos linfcitos T, resultante de mitoses sucessivas, mediada principalmente por uma combinao de sinais dos receptores, co-estimuladores e ainda factores de crescimento autcrinos (produzidos pelos prprios linfcitos), tal como a InterLeucina 2 (IL2). A diferenciao em clulas efectoras praticamente simultnea e envolve a aquisio dos mecanismos que iro permitir a estas clulas cumprir a sua funo.

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Aps a eliminao do antignio, ocorrer apoptose de um grande nmero de clulas: contraco.

Quando estas clulas reencontram em circulao o antignio para o qual so especficas ocorre uma outra activao que culminar com a eliminao do antignio. No fim, restaro as clulas de memria. Para o desenvolvimento destas, h dois modelos de explicao: um linear (em que as clulas de memria seriam as clulas efectoras sobreviventes); e um ramificado (em que estas seriam um estado alternativo da diferenciao das clulas nave); isto devido a fenmenos de transcrio diferentes. Abordar-se- agora a sinalizao que leva activao dos linfcitos T.

SINALIZAO PARA A ATIVAO DOS LINFCITOS T

Para a proliferao e diferenciao dos linfcitos T necessrio: Reconhecimento do antignio Co-estimulao Citocinas (como a IL-2)

RECONHECIMENTO DO ANTIGNIO- sinal 1

O reconhecimento do antignio o primeiro sinal para a activao dos linfcitos T. Este reconhecimento deve-se apresentao do antignio pelas clulas dendrticas maduras (que so APCs Antigen Presenting Cells). Esta apresentao feita pelas molculas do MHC, que um complexo proteico Major Histocompatibility Complex. O MHC vai apresentar superfcie da clula dendrtica pores peptdicas do antignio. Existem duas classes de MHC: MHC I e MHC II. O MHC classe I apresenta pptidos que se encontram presentes no interior da clula, no citosol, enquanto que o classe II apresenta pptidos que resultaram de protenas endocitadas ou da digesto de microrganismos fagocitados. Isto ser importante, pois cada classe de MHC apresentar antignios a linfcitos T nave diferentes: MHC I apresenta antignios a linfcitos T CD8+ e o MHC II a CD4+, que tero respostas diferentes na eliminao posterior do antignio.

O pptido apresentado pelo MHC ser reconhecido pelo complexo TCR/CD3 (TCR: T Cell Receptor).

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Aos linfcitos T CD4+ sero, ento, apresentados pptidos que podem ser provenientes, por exemplo de bactrias fagocitadas (b). Para os linfcitos T CD8+, os antignios apresentados pelas APCs derivam de protenas presentes no interior das clulas (a) que l se encontram porque estas foram infectadas por um vrus ou porque fagocitaram uma clula infectada ou tumoral, processando-a e seleccionando o antignio, apresentando-o no MHC I (fenmeno a que se chama cross presentation ou apresentao cruzada (c)).

(a) Apresentao de antignios a linfcitos T CD8+ pelo MHC I (b) Apresentao de antignios a linfcitos T CD4+ pelo MHC II (c) Apresentao cruzada a linfcitos T CD8+

CO-ESTIMULAO sinal 2
Vimos ento que o sinal de activao primrio dos linfcitos T CD8+ a ligao do complexo TCR/CD3 com as molculas de MHC I com o antignio sinal 1 que confere especificidade resposta do linfcito T. No entanto, d-se ainda co-estimulao atravs de sinais acessrios sinal 2 , entre os quais se destacam os sinais transmitidos pelos co-receptores (por exemplo, CD28, CD27, CD40L) que se ligam a co-estimuladores presentes na membrana das clulas apresentadoras de antignios (por exemplo, glicoprotenas da famlia B7). Dos co-receptores, o mais estudado o CD28, cujo mecanismo de transduo de sinal (sinal 2), desencadeado aquando da ligao a molculas da famlia B7 (CD80 e CD86), amplifica a mensagem transduzida pelo sinal 1, aumentando a transcrio gentica. Esta co-estimulao essencial para a activao dos linfcitos T.

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Co-receptores e Co-estimuladores:

de notar ainda a influncia das clulas CD4+ diferenciadas (helpers) na activao dos linfcitos citotxicos. Estas clulas iro 1) secretar citocinas promotoras da transcrio (como a IL-2) e, 2) expressar CD40L, que reconhecido pelo CD40 das clulas apresentadoras de antignios, induzindo nestas clulas alteraes que as tornaro mais eficazes na activao dos linfcitos T CD8; induzem, nomeadamente, uma maior expresso de protenas da famlia B7 e uma maior secreo de citocinas promotoras de diferenciao. Licensing via CD40

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RESPOSTAS FUNCIONAIS DOS LINFCITOS T ACTIVAO

DIFERENCIAO DOS LINFCITOS T CD4+
CLULAS HELPER: TH1, TH2 e TH17 As clulas TH1, TH2 e TH17 diferenciadas desenvolvem-se a partir de linfcitos T CD4+ nave dependendo da resposta a citocinas produzidas pelas APCs ou por outras clulas imunitrias e presentes em fases iniciais da diferenciao. Estas citocinas sero reconhecidas por receptores presentes na membrana das clulas CD4+ e induziro diferenciao consoante a citocina correspondente. Cada subtipo celular ter um papel diferente na resposta imunitria:

DIFERENCIAO DOS LINFCITOS T CD8+

CLULAS T CITOTXICAS A diferenciao de Linfcitos T CD8+ em Linfcitos T Citotxicos (CTLs Cytotoxic T Cells) envolve a aquisio dos mecanismos que iro permitir a estas clulas cumprir a sua funo: target cell killing. Assim, ocorre o desenvolvimento de grnulos citoplasmticos contendo as enzimas granzima e perforina ( necessrio possuir as duas!).

CRIAO DE CLULAS DE MEMRIA

Algumas clulas T activadas diferenciam-se em clulas de memria de sobrevivncia prolongada. A sua principal funo constituir uma reserva celular especfica, que, em caso de nova infeco pelo mesmo agente, tem uma aco bastante mais rpida. A sobrevivncia destas clulas est dependente de IL-7. (Ver T7: Imunidade Celular Mecanismos Efectores da Imunidade Mediada por Clulas ) 56

T6 I: Imunidade Humoral Activao de Linfcitos B e Produo de Anticorpos

Data terica de 13 de Outubro de 2011
Captulo do Abbas: 11 Slides das aulas: no Elaborado por: Joo Pedro Soares

INTRODUO
Imunidade humoral mediada pela secreo de anticorpos produzidos pelos linfcitos B. Dois grandes tipos de antignios podem provocar uma resposta imunolgica antignios multivalentes 1 de origem microbiana que actuam directamente no receptor dos linfcitos B (BCR) e antignios proteicos apresentados por linfcitos T-helper. Neste ltimo caso, os anticorpos produzidos ligam-se com maior afinidade ao antignio em causa, do que sem a ajuda de linfcitos T, da que os anticorpos contra protenas antignicas sejam os melhores mediadores da imunidade humoral. Neste captulo so descritos os acontecimentos moleculares e celulares da resposta humoral, em particular os estmulos que induzem a proliferao e diferenciao de linfcitos B e como esses estmulos influenciam o tipo de anticorpo produzido.

GENERALIDADES HUMORAL

DA

RESPOSTA

Como j sabido, linfcitos B maduros so desenvolvidos na medula ssea, da qual partem para colonizar tecido linfide, maioritariamente o bao, onde lhes so apresentados antignios, atravs das IgM e IgD de membrana. Isto culmina no desenvolvimento de linfcitos B de memria e plasmcitos, estes ltimos os produtores de anticorpos.

Antignios com vrios eptopos semelhantes

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Depois do reconhecimento antignico, ao longo da resposta imunitria, (numa semana um nico linfcito B pode dar origem a 5000 semelhantes) existem mecanismos que a orientam para a maior eficcia, como o caso da produo de anticorpos que no IgM e IgD (troca da cadeia pesada e, portanto, troca do isotipo) e o caso da maturao da afinidade, em que gradualmente o(s) linfcito(s) que produz(em) anticorpos com mais afinidade dominam a resposta imunitria.

(Ilustrao 1)

Ilustrao 1 Fases da resposta humoral imune.

O tipo e a quantidade de anticorpos produzidos variam de acordo o tipo de antignio em causa, se h envolvimento de linfcitos T, o historial de exposio do indivduo e o local anatmico em que a activao ocorre.

Respostas T-dependentes (nos centros germinativos.)

A descendncia de linfcitos B activados constituir ento quer plasmcitos produtores de anticorpos quer linfcitos B de memria, ambas com um longo tempo de vida. Os plasmcitos, que migram para a medula ssea, produzem continuamente durante anos anticorpos que proporcionam uma resposta imediata. A resposta humoral a protenas antignicas requer que estas sejam especificamente reconhecidas e internalizadas pelos linfcitos B e que um fragmento da protena seja apresentado a linfcitos T-helper CD4+, clulas estas que depois activam os mesmos linfcitos B. Por esta razo, podem classificar-se as protenas como antignios timo-dependentes ou T-dependentes. A troca de isotipo das Ig (troca da cadeia pesada) resulta de uma estimulao Tdependente, nomeadamente atravs do ligando CD40 (apenas presente na

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membrana do linfcito T activado) e das citocinas tambm produzidas pelos linfcitos T. Tambm a maturao da afinidade dependente do CD40L, envolve a mutao somtica de genes Ig V rearranjados em linfcitos B activados, tendo por consequncia a seleco positiva dos linfcitos B com alta afinidade para o antignio em causa.

Respostas T-independentes
As respostas humorais a antignios no-proteicos, como polissacardeos, alguns lpidos e cidos nucleicos, ou seja polmeros compostos de numerosas unidades qumicas repetitivas (so geralmente multivalentes), no requerem linfcitos T-helper e por isso no induzem memria imunolgica. J os ltimos so capazes de montar uma resposta rapidamente, mediante encontro com o antignio. O linfcito B activado dar origem a uma ou outra espcie mediante sinais dos seus receptores, incluindo os das citocinas e os que reconhecem o antignio, que se traduzem pela produo de factores de transcrio que determinam ento o tipo de descendncia (cell fate decisions). Linfcitos B da zona marginal do bao e outros tecidos linfides reconhecem antignios multivalentes e esto, portanto, associados a respostas Tindependentes. Clulas B B-1 tambm esto bastante associadas a respostas TI, mas j em mucosas e no peritoneu.

Podemos distinguir a resposta humoral em primria e secundria. A primria resulta da activao de linfcitos B naive, ou seja, no estimulados, enquanto que a secundria resultado da expanso clonal de linfcitos B de 59

Ilustrao 4 Respostas primria e secundria.

memria. Assim de esperar que uma resposta secundria se d de forma mais clere, com uma produo elevada de anticorpos. De seguida, ser abordado: A interaco do antignio com os linfcitos B; o papel dos linfcitos T-helper, no s na apresentao protenas antignicas, mas tambm nos mecanismos de troca de isotipo e maturao da afinidade; a resposta T-dependente

RECONHECIMENTO DE ANTIGNIOS E ACTIVAO DOS LINFCITOS B

INTRODUO
Para iniciar respostas que envolvem anticorpos, os antignios tm que ser capturados e transportados para reas dos rgos linfides. Os antignios 60

desencadeiam ento os processos que levam activao de linfcitos B, em conjunto com outros sinais gerados pela imunidade inata.

CAPTURA DE ANTIGNIOS E APRESENTAO AOS LINFCITOS B

Os linfcitos B residem e circulam pelos folculos dos rgos linfides perifricos em busca de um antignio que os active. A entrada nos folculos (os linfcitos B passam a chamar-se foliculares ou recirculantes) guiada pela quimiocina CXCL13 segregada pelas clulas dendrticas e pelas clulas do estroma do folculo. CXCL13 liga-se ento ao receptor de quimiocina (CXCR5) nos linfcitos B, o que atrai essas clulas para o folculos. A mesma quimiocina tambm importante para atrair clulas T activadas para o folculo. No entanto, a vida dos linfcitos B naive foliculares limitada enquanto no encontram o seu antignio. Assim, a sua sobrevivncia depende de sinais derivados do seu receptor (BCR), assim como de estmulos recebidos de uma citocina da famlia do factor de necrose tumoral (TNF) denominada BAFF (factor de activao da cula B da famlia TNF), a qual proporciona sinais de maturao e sobrevivncia atravs do receptor de BAFF.O BAFF e um ligante relacionado APRIL podem tambm activar dois outros receptores, TACI e BCMA, que participam de estdios mais avanados de activao e diferenciao. Estas citocinas so produzidas principalmente por clulas mielides no folculo e medula ssea.

Nos rgos linfides perifricos, os antignios, que chegam pelo sangue ou linfa, so quase sempre capturados pelas clulas dendrticas e liga-se aos receptores antignicos dos linfcitos B. As clulas dendrticas podem internalizar e processar o antignio mas podem, tambm, aproveitar o antignio para a superfcie da clula, onde ele fica disponvel, de forma intacta, para os linfcitos B especficos para o antignio.

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ACTIVAO DE LINFCITOS B POR ANTIGNIOS E OUTROS SINAIS

A activao dos linfcitos B especficos para o antignio inicia-se pela ligao do antignio s molculas de Ig da membrana, as quais, em conjunto com as cadeias Ig e Ig associadas, constituem o complexo do receptor de antignico das clulas B maduras. O receptor antignico do linfcito B desempenha dois papeis essenciais na sua activao. Primeiramente, o agrupamento dos receptores induzidos pelo antignio permite sinais bioqumicos para as clulas B que iniciam o processo de activao. Em segundo lugar, o receptor liga-se ao antignio e internaliza atravs de vesculas endocticas, no caso de protenas estas so processadas a pptidos que so na superfcie para reconhecimento pelos linfcitos Th. Apesar do reconhecimento antignico poder activar a resposta linfcitria B, usualmente insuficiente para estimular uma proliferao e diferenciao adequadas. Para uma induo total, outros estmulos cooperam com o BCR, o que inclui protenas do complemento e, no caso de antignios proteicos, linfcitos Th. Como se v na imagem ao lado, a activao do linfcito B facilitada pelo co-receptor CR2 ou CD21, que reconhece fragmentos do complemento ligados ao antignio ou que fazem parte de complexos imunes que contm o antignio. A activao do complemento tipicamente vista com micrbios, que activam este sistema na ausncia de anticorpos (ver cap. 4 e 12). Um desses fragmentos que se liga ao microrganismo, o C3d, reconhecido pelo receptor do complemento CR2, o que refora a sinalizao BCR. Os linfcitos B humanos tambm expressam variados receptores Toll-like (TCRs), capazes de reconhecer o j conhecido PAMP, que tambm existentes em clulas dendrticas, contribuem para activao de linfcitos Th e para produo de citocinas, APRIL e BAFF, que induzem respostas linfocitrias B T-independentes.

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RESPOSTAS FUNCIONAIS DOS LINFCITOS B AO ANTIGNICO

RECONHECIMENTO

Diferentes antignios na ligao cruzada do BCR provocam diferentes tipos de eventos celulares: antignios multivalentes provocam proliferao e diferenciao, e antignios proteicos preparam as clulas B para interaces subsequentes com linfcitos Th. Clulas em repouso entram em fase G, o que provoca aumento do tamanho da clula e dos ribossomas, da quantidade de RNA citoplasmtico. Protenas antiapoptticas so produzidas (especialmente Bcl-2), o que aumenta a sobrevivncia das clulas. Estas podem agora proliferar e produzir anticorpos. Aumenta a produo de MHC classe II e B7 coestimuladores, e por isso que os linfcitos B antignio-activados so melhores activadores dos Th que os B naive. Aumenta a expresso de receptores de citocinas T-derivadas, o que aumenta a sensibilidade a linfcitos Th. A importncia da sinalizao BCR varia com a natureza do antignio, a maioria dos antignios T-independentes, como os polissacardeos, por terem mltiplos eptopos semelhantes, ligam-se cruzadamente a receptores antignicos, o que inicia a resposta, independentemente dos linfcitos T. J a maioria das protenas possuem apenas uma cpia de cada eptopo por molcula, portanto, elas no podem simultaneamente ligar-se cruzadamente a mltiplas Ig, o que limita muito a sua sinalizao BCR. De facto, nestas repostas (Tdependentes), as Ig tornam-se no importantes para a sinalizao, mas para a ligao para consequente internalizao, para posterior apresentao do antignio aos linfcitos Th, sendo estes os estimuladores a proliferao e diferenciao neste caso. Depois de linfcitos B especficos reconhecerem os antignios, os passos subsequentes na reposta humoral so muito diferentes quando comparamos respostas T-dependentes com T-independentes.

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RESPOSTAS COM ANTICORPOS T-DEPENDENTES A ANTIGNIOS PROTEICOS

SEQUNCIA DE EVENTOS DURANTE RESPOSTAS COM ANTICORPOS T-DEPENDENTES

1. O antignio capturado por clulas dendrticas (CDs) e apresentado aos linfcitos Th atravs do MHC classe II ; as CDs passam a produzir ligandos B7, tambm estimuladores 2. Os linfcitos Th so activados e induzidos a expressar protenas, como o caso de CD40L e receptores de citocinas que, como j vimos, permitem a migrao em direco ao folculo , atravs do gradiente citocintico . 3. Os linfcitos B so ento activados pelo antignio, que est na sua forma solvel ou mostrado por CDs. 4. Os linfcitos B processam e apresentam o antignio, alteram o seu perfil de receptores de superfcie para quimiocinas e migram em direco zona de clulas T do rgo linfide. 5. Linfcitos B e Th activados interagem no interface T-B e as clulas B so activadas por CD40L e citocinas. 6. Pequenos focos de linfcitos B extrafoliculares formam-se nas zonas de clulas T, onde ocorre alguma mudana de isotipo e secreo de Imunoglobulinas. 7. Os linfcitos B activados migram de volta para dentro do folculo. Formam-se centros germinativos dentro dos folculos e so esses os locais de extensa mudana do isotipo e mutao somtica que selecciona as clulas, levando a maturao da afinidade e gerao de linfcitos B de memria e plasmcitos que migram para a medula ssea, onde produziro durante anos anticorpos.

ACTIVAO INICIAL E MIGRAO DE LINFCITOS Th e B

A frequncia de linfcitos B naive ou T para um dado eptopo de 1 em 105 at 1 em 106 linfcitos, e necessrio que os linfcitos B e T se encontrem e fisicamente interactuem para gerar fortes respostas de anticorpos.

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Linfcitos Th que tenham sido activados proliferam, expressam CD40L e segregam citocinas, tambm alteram o perfil de receptores de quimiocina, regulando negativamente o receptor de quimiocina CCR7 e aumentando a expresso de CXCR5, e como resultado deixam a zona de linfcitos T e migram em direco ao folculo. CXCL13, o ligante para CXCR5, segregado por clulas dendrticas foliculares e outras clulas do estroma folicular e contribui para a migrao de linfcitos T CD4+ activadas para o folculo. Este tipo de antignios, como sabemos, no provoca sinais fortes o suficiente para induzir proliferao e diferenciao dos linfcitos B de forma satisfatria, mas ainda assim a sua ligao ao BCR resulta em reduzida expresso do receptor CXCR5 e expresso aumentada de CCR7, que caracterstica de linfcitos T. Como resultado, os linfcitos B activados migram em direco zona dos linfcitos T, levados pelo gradiente de CCL19 e CCL21, ligandos do mesmo CCR7. A ltima imagem resume bem esta seco.

EFEITO HAPTENO-TRANSPORTADOR

Os princpios delineados para a colaborao entre linfcitos T linfcitos B proporcionam a base para compreender o efeito hapteno-carregador. Haptenos, como o dinitrofenol, so pequenos compostos qumicos que podem ser ligados por anticorpos especficos, mas no so por si s imunognicos. Se entretanto os haptenos estiverem conjugados com protenas de transporte, este conjunto j sim capaz de induzir uma resposta de anticorpos especficos para os haptenos. Primeiro, tais respostas requerem tanto linfcitos B especficos para o hapteno, assim como Th especficos para a protena transportadora. Os linfcitos B especficos para o hapteno ligam-se ao antignio atravs de um determinante no hapteno, endocitam o conjugado hapteno-protena transportadora e apresentam peptdeos desta protena (exclusivamente no MHC classe II) a linfcitos Th. Facilmente se entende a base deste efeito: os dois tipos de linfcitos cooperam reconhecendo eptopos para o mesmo antignio (se o considerarmos o conjugado). Este efeito a base para o desenvolvimento de vacinas conjugadas, como veremos mais frente.

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PAPEL DO LIGANDO DE CD40 (CD40L); INTERACO DE CD40 EM ACTIVAO T-DEPENDENTE DE LINFCITOS B

Como j vimos linfcitos Th activados expressam ligando de CD40 que se liga ao seu receptor, CD40 (membro da superfamlia dos receptores de TNF), existente em linfcitos B antignio-estimulados, e essa interaco estimula a proliferao da clula B e a diferenciao inicial, bem como a formao de um centro germinativo. Da ligao do CD40L, decorre a alterao conformacional do CD40, o que induz associao de protenas do citosol chamadas TRAF (TNF receptor-associated factors) com o domnio citoplasmtico de CD40. As TRAF recrutadas ao CD40 iniciam cascatas enzimticas que levam activao de factores de transcrio, incluindo NF-B e AP-1, que colectivamente estimulam proliferao e sntese e segregao aumentadas deIg. Factores de transcrio CD40-induzidos so tambm importantes para a formao do centro germinativo e para a sntese de AID (activation-induced deaminase), crucial para mutao somtica e troca de isotipo. Mutaes no gene do CD40L resultam no sndrome de hiper-IgM ligado ao X, que se caracteriza por defeitos na produo de anticorpos, na troca de isotipo, na maturao da afinidade e criao de linfcitos B de memria.

ACTIVAO DE LINFCITOS B EXTRAFOLICULAR

Depois da interaco inicial dos linfcitos B com os Th na fronteira entre o folculo e a zona dos linfcitos T, uma subsequente activao de linfcitos B pode ocorrer em duas localizaes diferentes uma fora dos folculos e outra nos folculos, nos centros germinativos. Assim como os locais, as respostas dos linfcitos B sero tambm diferentes. Nos focos extrafoliculares a activao geralmente efectuada logo no princpio da resposta imune; nos centros germinativos, nos quais actuam linfcitos T helper foliculares, a activao ocorrer dias mais tarde. Como a hipermutao dos genes Ig (que compreende a maturao da afinidade), mas em muito menor extenso que no centros germinativos.

A REACO DOS LINFCITOS B NO CENTRO GERMINATIVO E A FUNO DOS LINFCITOS TH FOLICULARES

Os eventos mais caractersticos da resposta T-dependente, que incluem maturao da afinidade, a troca de isotipo, a produo de linfcitos B de memria e plasmcitos de longa vida, ocorrem primariamente nos centros germinais dos folculos linfides. Alguns linfcitos T que migram para estabelecer contacto com os linfcitos B, diferenciam-se em linfcitos T foliculares (Thf) que apresentam nveis elevados do receptor de quimiocina CXCR5, e so ento levados para os folculos linfides em busca do seu ligando. 66

Estes linfcitos Th so foliculares porque representam a grande maioria de linfcitos T CD4+ nos folculos e tm um papel fundamental na reaco do centro germinativo. Ao mesmo tempo alguns linfcitos B activados migram de volta para o folculo para comear a proliferar rapidamente, formando uma espcie de mancha na zona central do folculo que no mais que o centro germinativo. Cada centro germinativo contm clulas geradas a partir de um clone (ou poucos clones) de linfcito B especfico para um certo antignio. A zona mais escura do centro germinativo constituda por linfcitos B com uma altssima taxa de proliferao. Tambm chamados de centroblastos, estas clulas duplicam a cada 6 a 12 horas, da que semanalmente tenhamos cerca de 5000 novos clones. Esta progenia constituda por pequenas clulas, os centrocitos. Os linfcitos B dos centros germinais expresso um repressor de seleco e diferenciao transcrio conhecido por Bcl-6 (B cell lymphoma gene 6), cujo papel se falar mais tarde quando abordarmos a regulao do destino (cell fate) dos linfcitos B. Os mecanismos que levam transformao dos linfcitos T CD4+ em linfcitos Thf e activao dos linfcitos B pelos Thf ainda no so totalmente conhecidos, mas, do que j se conhece, participam variadas molculas. Como retratado, o co-estimulador ICOS essencial para a reaco do centro germinativo, e a sua ligao com o seu ligando (presente nos linfcitos B) promove a diferenciao em linfcitos Thf. A formao do centro germinativo ento marcantemente dependente desta clula, nomeadamente pelas interaces CD40, como se verifica pela imagem. O ligando CD40, presente nos linfcitos T, essencial para a proliferao dos B, assim como para a troca de isotipo e maturao da afinidade.

TROCA DE ISOTIPO
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Como reposta interaco CD40 e s citocinas, alguma da progenia dos linfcitos B, que produzem IgM e IgD, atravessam pelo processo de troca de isotipo, levando produo de cadeias pesadas de diferentes classes, como , e . Esta capacidade dos linfcitos B poderem produzir anticorpos com isotipos diferentes confere uma plasticidade marcvel em respostas humorais imunes, pelo que os anticorpos tm diferentes funes efectoras e agentes-alvo. Deste modo, a resposta a diferentes tipos de microrganismos regulada pelos tipos de citocinas produzidas pelos linfcitos T, que so activados por aqueles, como fica resumido na ilustrao em baixo.

TROCA DE ISOTIPO: DIFERENTES ANTICORPOS PARA DIFERENTES SITUAES

No caso de bactrias com cpsulas ricas em polissacardeos, a resposta humoral (T-independente) consiste basicamente em anticorpos IgM, que se ligam bactria, activam o sistema do complemento e induzem fagocitose por opsonizao; existe pouca ou nenhuma troca de isotipo para IgG. J a resposta a outras bactrias e muitos vrus, envolve a produo de IgG, que impede a colonizao de clulas-hospedeiras e promove fagocitose. Estes agentes patognicos activam linfcitos Th do tipo TH1, que produzem a citocina IFN- . Em ratos, esta citocina o maior indutor de troca para IgG opsonizantes, mas ainda no clara a sua funo em humanos. A resposta a parasitas maiores, como as tnias, feita maioritariamente por IgE, que participa na eliminao destes parasitas por parte dos mastcitos e eosinfilos. Estes

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parasitas activam os linfcitos Th do tipo TH2, que produzem IL-4, a citocina que induz troca para IgE. Especificamente, clulas em mucosas trocam para IgA, que o anticorpo mais eficientemente transportado pelo epitlio para secrees da mucosa, o que nos defende contra micrbios que tentam penetrar o epitlio. A troca para IgA feita pelo TGF- (transforming growth factor) e tambm por citocinas da famlia TNF, BAFF e APRIL. Como estas citocinas no so s produzidas por linfcitos T, na ausncia destes a troca de isotipo pode ainda assim ocorrer.

Papel da AID na Troca de Isotipo

A interaco CD40 induz a AID (activation-induced deaminase) que crucial para a troca de isotipo e mutao somtica. Nos casos em que h produo deficiente de CD40, do seu ligando ou de AID a resposta com anticorpos dominada pelas IgM, havendo troca de isotipo e maturao da afinidade limitadas. O mecanismo molecular de troca de isotipo o processo em que o exo rearranjado VDJ, que codifica um domnio V da cadeia pesada das Ig, recombina com uma regio do C do gene, pelo que o DNA presente no intervalo entre o exo e aquela regio eliminado. A AID a enzima chave para a troca de isotipo, e a sua funo remover o grupos amina de resduos de citosina em moldes de DNA unifilamentares, o que converte resduos de citosina em uracilo. Isto s possvel aquando da actuao da enzima RNA polimerase que vai envolver apenas uma cadeia de DNA, deixando uma ala aberta de DNA unifilamentar denominada R-loop. nesse local que um grande nmero de resduos C convertido para U pela AID. A enzima uracil N-glicolase remove os resduos de U, deixando esses locais livres de bases azotas, o que reconhecido pela enzima endonuclease Ape 1, que cliva esses locais livres que contribuem para quebras nas duas cadeias, resultando na eliminao do DNA e na unio das duas regies afectadas, fazendo a clula uso de maquinaria de reparao. A ilustrao ao lado resume o pargrafo anterior. 69

MATURAO DA AFINIDADE

Como j foi explicado, a maturao da afinidade um processo que leva aumentada afinidade dos anticorpos para um determinado antignio, essencialmente ao longo da resposta T-dependente e resultado da mutao somtica dos genes das Ig mais a seleco positiva que se segue dos linfcitos B que produzem os anticorpos com a maior afinidade. Ocorre numa maior extenso nos centros germinativos. O facto de essencialmente envolver linfcitos Th deve-se s interaces CD40, que so necessrias para induzir AID e proliferao de linfcitos B. H que realar trs caractersticas destacveis das hipermutaes: As mutaes ocorrem em regies V, maioritariamente em regies de ligao determinantes na complementaridade com o antignio; H muito mais mutaes em anticorpos IgG que em IgM. A presena de mutaes est relacionada com a afinidade crescente dos anticorpos para o antignio que induziu a resposta. No centro germinativo, os linfcitos B so estimulados por IL-21 produzida pelos linfcitos Thf que induz a apoptose, a no ser que sejam salvas por uma ligao a um antignio com afinidade. Com pequenas concentraes de antignio, os linfcitos com mais afinidade ligam-se preferencialmente, o que os privilegia selectivamente. Isto est relacionado com muitos mecanismos, nomeadamente: Reconhecimento antignico est relacionado com a produo de protenas anti-apoptticas (famlia das Bcl-2). Linfcitos com maior afinidade endocitam preferencialmente antignios e interagem com os linfcitos Thf, que activam a interaco CD40. As clulas T expressam o ligando Fas que se liga ao seu receptor nas clulas B, criando um sinal apopttico. Linfcitos B com maior afinidade, que melhor reconhecem o antignio, produzem Fasinibidores, criando mais presso selectiva sobre os linfcitos com baixa afinidade. Como bvio, este processo de seleco extremamente ineficiente: milhares de clulas tm de morrer para privilegiar um grupo de clulas que combater a infeco com a mxima eficcia e por isso que os centros germinais so locais de extrema actividade apopttica. O outro lado da moeda destes mecanismos o risco das hipermutaes ocorrerem em locus genticos onde no seria suposto, como em oncogenes ou tendo como resultado anticorpos extremamente auto-reactivos. devido a isto que ocorrem lifomas malignos e doenas provocadas por auto-imunidade. 70

DIFERENCIAO DOS LINFCITOS B EM PLASMCITOS

Os plasmcitos encontram-se terminalmente no desenvolvimento linfocitrio B e so gerados depois de sinais dos BCR, CD40, TLRs e outros receptores, que incluem os das citocinas. H dois tipos de plasmcitos - os de respostas T-independentes e os de respostas T-dependentes. Migrando para medula ssea, estas clulas so mantidas por citocinas da famlia BAFF, que se liga ao receptor do plasmcito BCMA, permitindo com que estas sobrevivam por longos perodos produzindo anticorpos, durante anos, muitas vezes durante toda a vida do indivduo. Para se tornar num plasmcito, o linfcito B passa por vrias processos a clula aumenta de tamanho drasticamente, aumentando tambm a relao citoplasma/ncleo. O retculo endoplasmtico torna-se proeminente. O tipo de imunoglobulinas tambm sofre uma alterao, simples, mas fundamental as imunoglobulinas tm de passar de membranares sua forma secretada, o que resultado da alterao da poro terminal da cadeia pesada, esta poro responsvel pela ancoragem membrana).

DIFERENCIAO DOS LINFCITOS B EM LINFCITOS B DE MEMRIA E RESPOSTAS SECUNDRIAS

Alguns dos linfcitos B antignio-activados emergem dos centros germinativos com a capacidade de sobreviver por longos perodos (porque expressam elevados nveis da protena anti-apopttica Blc-2), montando rpidas respostas subsequentemente a uma apresentao antignica; estas clulas so linfcitos B de memria. Algumas destas clulas permanecem no rgo linfide onde foram geradas, outras entram em circulao, patrulhando entre o sangue e os rgos linfides. A produo de grandes quantidades de anticorpos de alta afinidade muito acelerada depois de uma exposio secundria, e deve-se aos linfcitos B de memria. Este desenvolvimento de memria levado a cabo por respostas T-dependentes. til na criao de Vacinas Conjugadas: Devido aos casos de bactrias com cpsulas constitudas por polisacardos, em que os linfcitos T no actuam, criaram-se vacinas que se baseiam no j falado efeito hapteno-transportador, em que a vacina contm protenas com a capacidade de se ligarem cpsula, podendo deste modo activar uma resposta T-dependente, significando mais rapidez e eficcia no combate ao antignio, permitindo a formao linfcitos B de memria para uma eventual infeco secundria.

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PAPEL DOS FACTORES DE TRANSCRIO NO DESTINO DOS LINFCITOS B ACTIVADOS ( CELL FATE )

semelhana do que acontece com o controlo do cell fate dos linfcitos T, o dos linfcitos B controlado em grande medida pela expresso de vrios activadores e repressores da transcrio de DNA Nos centros germinativos de linfcitos B, os sinais provocados por CD-40 e o receptor de IL- 21 reduzem a expresso de um repressor da transcrio, Bcl-6, que antagoniza outro repressor, Blimp-1, o qual necessrio para a transformao em plasmcitos. Isto permite que os linfcitos B, aquando da intensa proliferao nos centros germinativos no se transformem em plasmcitos numa fase e precoce da resposta. J os linfcitos B dos focus extrafoliculares expressam baixos nveis de Blc-6, a causa da existncia de plasmcitos de curta vida. Os dois passos chave para o desenvolvimento de um plasmcito so a perda de expresso do factor de transcrio, Pax-5 (que necessrio para a manuteno do linfcito B madura), e a represso de Bcl-6. Durante a diferenciao, o activador datranscrio IRF4 e o repressor Blimp-1 so induzidos; estes juntos promovem a expresso e o splicing de XBP-1, um factor de transcrio que desempenha um papel fundamental na resposta s protenas sem conformao, resultado de uma sntese proteica massiva. XBP-1 protege ento os plasmcitos de consequncias negativas. Sendo ainda uma matria incerta, parece que baixos nveis de IRF4 esto associados a linfcitos B de memria, por sua vez, altos nveis esto associados a diferenciao em plasmcitos.

RESPOSTAS COM ANTICORPOS A ANTIGNIOS T-INDEPENDENTES

Muitos antignios no proteicos, como os polissacardeos e lpidos estimulam produo de anticorpos na ausncia de linfcitos Th.

TIPO DE LINFCITOS T-INDEPENDENTES

QUE

RESPONDEM

ANTIGNIOS

As famlias B1 e da zona marginal dos linfcitos B so especialmente importantes no que toca a respostas T-independentes, ao contrrio das T-dependentes onde os linfcito B folicular a famlia maioritria. So os linfcitos da zona marginal que respondem a polissacardeos antignicos depois de activados, estes linfcitos do origem a plasmcitos de vida curta que produzem maioritariamente IgM (h quem lhes chame linfcitos B de memria IgM,

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so clulas memory-like, na verdade). Os linfcitos B B-1 representam outra linhagem que responde a antignios no peritoneu e nas mucosas. As respostas T-independentes podem ser iniciadas no bao, medula ssea, cavidade peritoneal e mucosas. Macrfagos localizados na zona marginal dos folculos do bao so particularmente eficientes a fagocitar polissacardeos. Os antignios podem persistir por longos perodos superfcie de macrfagos da zona marginal, onde so reconhecidos por linfcitos B especficos.

MECANISMOS DAS RESPOSTAS T-INDEPENDENTES

Os antignios T-independentes, ou seja, polissacardeos, glicolpidos, lpidos e cidos nucleicos, induzem produo especfica de anticorpos, mesmo em animais aos quais se fez knock-out de linfcitos T. Estes antignios no podem ser incorporados em molculas de MHC e, portanto, no podem ser reconhecidos pelos linfcitos Th CD4+. Por serem multivalentes estes anticorpos activam o BCR de tal forma (mecanismos de ligao cruzada) que a assistncia de linfcitos T dispensada. Como tambm j vimos, os polissacardeos activam o sistema do complemento, gerando C3d, que se liga ao antignio e reconhecido pelo CR2 dos linfcitos B, amplificando ainda mais o sinal. Tambm temos as TLRs, receptores que reconhecem padres moleculares especficos de antignios (PAMPs), que facilitam ainda mais a resposta T-independente. Apesar de se associar a troca de isotipo a respostas T-dependentes, alguns antignios T-independentes tm tambm a capacidade de gerar troca de isotipo, obviamente em muito menor escala. As citocinas produzidas em clulas que no linfcitos T podem estimular troca de isotipo como j foi descrito, BAFF e APRIL produzidos em clulas de origem mielide podem induzir sntese de AID atravs do receptor TACI, da famlia dos receptores BAFF. As citocinas produzidas nas mucosas por clulas no linfides, como a TGF-, ajudam a mediar a troca das IgA, o que contribui para a secreo de anticorpos IgA dirigidos a antignios no proteicos.

FUNES DAS RESPOSTAS T-INDEPENDENTES

A importncia funcional dos antignios T-independentes que muito material que compe a parede das bactrias pertence a esta categoria e a defesa humoral a maior defesa do hospedeiro contra as infeces por tais bactrias encapsuladas. Antignios T-independentes contribuem para produo de anticorpos naturais, que esto presentes em circulao em indivduos normais e aparentemente so produzidos sem exposio prvia observvel a patognicos. A maioria destes anticorpos naturais so anti-oses de baixa afinidade. Os anticorpos ligados aos grupos sanguneos (A e B) so o exemplo mais comum destes anticorpos. importante referir que as respostas T-independentes tambm podem estar 73

associadas a exposies secundrias a antignios de oses, uma vez que se observam reaces imunes tpicas de imunidade de memria (com troca de isotipo e maturao da afinidade muito limitadas), atravs dos j referidos linfcitos B de memria IgM, clulas memory-like.

FEEDBACK DOS ANTICORPOS: REGULAO DE RESPOSTAS IMUNES POR RECEPTORES Fc

O feedback dos anticorpos o mecanismo pelo qual respostas da imunidade humoral so ajustadas quando h j uma quantidade suficiente de anticorpo em circulao e complexos solveis anticorpo/antignio esto presentes. A Ig de membrana dos linfcitos B e o receptor destes para as porces Fc das IgG (FcRIIB), esto aglomerados por complexos anticorpo/antignio. Isto activa uma cascata de sinalizao inibitria que interrompe a activao do linfcito B.

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T6 II: Imunidade Humoral Mecanismos Efectores da Imunidade Humoral

Data terica de 13 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 12 Captulos do Arosa: 7.7 Slides aulas: sim Elaborado por: Margarida Nunes

INTRODUO
Imunidade humoral mediada pela secreo de anticorpos, e a sua funo a defesa contra micrbios extracelulares e toxinas microbianas. Esta imunidade contrasta com a imunidade mediada por clulas (linfcitos T), que erradica micrbios que infectam e vivem dentro das clulas. Os microganismos-alvo deste tipo de imunidade so bactrias extracelulares, fungos e micrbios intracelulares obrigatrios, como os vrus. Estes ltimos so alvo dos anticorpos antes de infectarem as clulas ou aps serem libertados por estas. Muitas das vacinas induzem a produo destes anticorpos mas, apesar disso, a actividade dos anticorpos nem sempre benfica: nas alergias e algumas doenas auto-imunes alguns anticorpos medeiam leses aos tecidos. Neste captulo sero discutidos os mecanismos efectores usados pelos anticorpos para eliminar antignios.

GENERALIDADES DA IMUNIDADE HUMORAL

CARACTERSTICAS IMPORTANTES DA DEFESA HUMORAL
A funo principal dos anticorpos neutralizar e eliminar microorganismos e toxinas microbianas, utilizando vrios mecanismos, como fagcitos e protenas do complemento

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Os anticorpos so produzidos pelos plasmcitos nos rgos linfides e na medula ssea, mas efectuam as suas funes em locais distantes da sua produo, pois entram em circulao. Os anticorpos produzidos em tecidos linfides associados a mucosas, so transportados, pelas barreiras epiteliais, at ao lmen desses rgos (p.e. intestinos e vias areas, protegendo dos micrbios ingeridos e inalados). Os anticorpos so ainda transportados activamente atravs da placenta, para a circulao do feto. Estas caractersticas complementam a incapacidade dos linfcitos T de, tanto atravessar barreiras epiteliais, como atravessar a placenta.

Muitas das funes dos anticorpos so mediadas pela cadeia pesada da regio constante das Ig, e cadeias pesadas das Ig diferentes vo ter funes diferentes. (Funes resumidas na Tabela 1). O sistema humoral especializado de tal modo que a exposio a diferentes micrbios estimula as clulas B a fazer a troca de classe de isotipo, para o isotipo que mais eficaz seja a combater esse mesmo micrbio.
Tabela 1 - Funes dos isotipos dos Anticorpos

Isotipo IgM IgA IgE IgD

IgG

Funes Especficas desse Isotipo Opsonizao de antignios para fagocitose, por macrfagos e neutrfilos, atravs da ligao aos seus receptores Fc Neutralizao: nica funo independente da regio constante das Ig Activao da via clssica de complemento Citotoxicidade mediada por clulas dependente de anticorpos, mediada por clulas NK Imunidade Neonatal: transferncia de anticorpos maternos pela placenta Feedback Negativo sobre a activao dos linfcitos B Activao da via clssica de complemento Receptores de antignios dos linfcitos B nave * Imunidade das mucosas: secreo de IgA para o lmen dos tractos GI e respiratrios Activao do complemento por via da lectina/via alternativa Desgranulao dos mastcitos (reaces de imediata), atravs da ligao aos seus receptores Fc. Receptor de antignios dos linfcitos B nave * hipersensibilidade

*estas funes so mediadas por anticorpos de membrana e no anticorpos livres.

Apesar de muitas funes dependerem da cadeia pesada das Ig, todas estas funes so desencadeadas pela ligao de antignios s zonas variveis. A ligao de um anticorpo a um antignio compacta a regio Fc dos anticorpos e esta compactao das molculas dos anticorpos leva activao do sistema de complemento e permite a ligao da regio Fc aos receptores Fc dos fagcitos. Assim est assegurada a activao de vrios mecanismos efectores, mas apenas quando necessrio, e no quando os anticorpos circulam numa forma livre de antignio.

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Ilustrao 2 - Funes Efectoras dos anticorpos

NEUTRALIZAO DE MICRBIOS E TOXINAS MICROBIANAS

Os anticorpos contra microrganismos ou suas toxinas bloqueiam a ligao destes a receptores celulares. Deste modo, os anticorpos inibem/neutralizam a infecciosidade dos microorganismos (Ilustrao 3). Muitos microrganismos entram nas clulas do hospedeiro, ligando-se por molculas da sua superfcie s protenas ou lpidos da membrana do hospedeiro (Influenza usa hemaglutinina; Gram-negativos usam pili). Anticorpos que se ligam a estas estruturas interferem com a capacidade dos microrganismos interagirem com receptores celulares. O mesmo acontece com as toxinas (p.e. tetnica, diftrica, ). Este impedimento ocorre pelo efeito estrico (quando os tomos de uma molculas so comprimidos, havendo gasto de energia pela repulso das nuvens electrnicas e, consequentemente, a molcula perde a sua reactividade).

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A neutralizao mediada por anticorpos requer apenas a Ilustrao 3 - Neutralizao de micrbios e toxinas pelos ligao das regies ligantes ao antignio por parte dos anticorpos anticorpos. Por isso, tal neutralizao pode ser mediada por anticorpos de qualquer isotipo, em circulao e secrees mucosas, desde que estes alta afinidade para estes antignios. Anticorpos sem a regio Fc conseguem realizar neutralizao na mesma. Os anticorpos neutralizantes no sangue so maioritariamente IgG; nos rgos com mucosas, so maioritariamente do tipo IgA. Muitas vacinas profilticas trabalham por estimulao da produo de anticorpos neutralizantes de alta afinidade. Porm, os microorganismos desenvolveram mecanismos de evaso a estes anticorpos, mutando os genes que codificam antignios de superfcie.

OPSONIZAO MEDIADA ANTICORPOS E FAGOCITOSE

INTRODUO

POR

Anticorpos do isotipo IgG cobrem (opsonizam) microrganismos e promovem a sua fagocitose, ao se ligarem aos receptores Fc dos fagcitos. Depois de ingeridos, vo ser mortos e degradados. A opsonizao no obrigatria, pois estes fagcitos tm receptores que se ligam directamente aos microrganismos, constituindo a imunidade inata, porm menos eficaz. Fagcitos mononucleares e neutrfilos expressam receptores para as pores Fc dos anticorpos IgG, que se ligam, especificamente, a partculas opsonizadas. Os microrganismos podem ainda ser opsonizados por um produto da activao do complemento, o C3b, que so fagocitados ao se ligarem ao receptor para o C3b (como veremos adiante). O processo de revestimento dos micrbios com partculas que facilitam a fagocitose chama-se opsonizao. Essas partculas (anticorpos e protenas de complemento) tomam o nome de opsoninas.

RECEPTORES Fc LEUCOCITRIOS
Os leuccitos expressam receptores Fc que se ligam regio constante dos anticorpos. Eles entregam sinais que estimulam as actividades microbicidas dos leuccitos e induzem a inflamao. Os receptores Fc para a cadeia pesada de cada Ig so expressos em vrias populaes leucocitrias. Existem vrios tipos de receptores Fc (FcRn - neonatal expresso na placenta, endotlio, epitlio intestinal; poly-Ig; Fc da IgE), mas o mais

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importante neste tema a fagocitose de partculas opsonizadas so os receptores para a cadeia pesada das IgG: receptores Fc (FcR). Existem vrios tipos de Fc, com diferentes afinidades para as cadeias pesadas de IgG de subclasses diferentes, e que so expressos em clulas diferentes. A maioria dos receptores Fc resultam numa activao celular quando activados (excepto o FcRII, que um receptor inibitrio). Todos os FcR contm uma cadeia que reconhece os ligandos do IgG, a cadeia . Diferenas de afinidades para cada FcR esto relacionadas com diferenas na cadeia . A cadeia est associada a uma ou mais cadeias polipeptdicas envolvidas na transduo de sinal, excepto no receptor FcRII, em que a cauda citoplasmtica da cadeia que medeia as funes do receptor FcRII. H vrios receptores Fc foram classificados em 3 grupos, baseados nas afinidades para com as cadeias pesadas das diferentes subclasses de IgG:

FcRI (CD64) (Ilustrao 4)

Principal receptor dos fagcitos. Expresso nos macrfagos, neutrfilos, eosinfilos Alta afinidade para IgG1 e IgG3 Funo: Fagocitose / activao dos fagcitos A sua cadeia est associada a um homodmero () de uma protena de sinalizao, chamada a cadeia FcR . Estas contem um ITAM (do ingls immunoreceptor tyrosine-based activation motif), que acopla o clustering (agrupamento) dos receptores s protenas tirosina-cinases. Activao requer clustering dos receptores na membrana, o que mediado por IgG ligadas a antignios. Transcrio do gene deste receptor estimulada pelo IFN- (interfero gama). Este estimula ainda a produo da classe dos Ilustrao 4 anticorpos que ligam melhor aos Fc.

Receptor FcRI

Fc RII (CD32) (Ilustrao 5)

Expresso nos macrfagos, neutrfilos, eosinfilos Baixa afinidade para IgG1 e IgG3 3 subtipos humanos: A, B e C. Tm domnios extracelulares e especificidade de ligandos semelhantes. Diferem nas caudas citoplasmticas, distribuio celular e funo. Fc RIIA : expresso nos neutrfilos, fagcitos mononucleares e plaquetas. Participa na fagocitose de partculas opsonizadas. Caudas citoplasmtica contem ITAMs e, se ocorrer clustering por partculas/clulas opsonizadas por

Ilustrao 5 - Receptor 79 FcRII

IgG1 ou IgG3, activa os fagcitos (processo ineficiente). Fc RIIB : um receptor inibitrio, pois em vez de um ITAM tem um ITIM (immunoreceptor tyrosine-based inibition motif). expresso nos linfcitos B e o nico receptor Fc em clulas B. Fc RIIC : expresso nos fagcitos mononucleares, neutrfilos e clulas NK. Cauda citoplasmtica igual de Fc RIIA.

FcRIII (CD16)(Ilustrao 6)
Baixa Afinidade para as IgG, sendo que a poro extracelular semelhante FcRII, em estrutura, afinidade e especificidade para s IgG. 2 isoformas: Fc RIIIA expressa nas NK. Associa-se a dmeros intracelulares que podem ser , ou . Fc RIIIB est associada a uma protena GPI (glicofosfatidilinositol), expresso nos neutrfilos. No medeia fagocitose nem activa neutrfilos. Funo = ?.

Ilustrao 6 - Receptor FcRIII

PAPEL DOS RECEPTORES FAGCITOS ( Ilustrao 7 )

FcNA

FAGOCITOSE

ACTIVAO

DE

Ilustrao 7 - Opsonizao e fagocitose mediada por anticorpos

A fagocitose de partculas revestidas por IgG mediada pela ligao das pores Fc das opsinas (IgG) aos receptores Fc dos fagcitos. H ento internalizao da partcula nos fagcitos e a sua activao. As vesculas de endocitose fundem com os lisossomas, originando fagolisossomas, onde as partculas so destrudas.

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A activao requer ligao cruzada dos FcRs por vrias IgG adjacentes, que, ao actuar na cadeia , origina uma transduo de sinal que culmina na produo de IP3 e DAG e na mobilizao de clcio. Nessa altura, haver transcrio gnica de citocinas, mediadores inflamatrios e enzimas microbicidas, tal como a oxidase fagoctica, que origina espcies reactivas de oxignio para o burst oxidativo no fagolisossoma, ou a sintase de xido ntrico indutvel (iNOS) que, ao produzir NO, tambm contribui para a morte dos patognios. Se no houver fagocitose (agente demasiado grande), sero secretadas enzimas hidrolticas ou intermedirios das espcies reactivas de oxignio para o exterior, o que pode lesar os tecidos (importante nas doenas de hipersensibilidade).

SINALIZAO INIBITRIA DO RECEPTOR FcRIIB

o nico com um ITIM na cauda citoplsmica, e encontra-se nos linfcitos B. activado pelo complexo Anticorpo-Antignio, o que leva fosforilao do ITIM, desencadeando a activao da inositol fosfatase, e subsequente inibio das vias activadoras dependentes do ITAM. Ao ter um papel activo na regulao da reactividade das clulas B, utilizado para controlar algumas doenas auto-imunes: so administrados IgG via IV, que induzem este receptor a enviar sinais inibitrios aos linfcitos B, o que reduz a produo de (auto-)anticorpos.

CITOTOXICIDADE (ADCC)

CELULAR

DEPENDENTE

DE

ANTICORPOS

As clulas NK e outros leuccitos ligam-se a clulas revestidas por anticorpos atravs dos receptores Fc e destroem estas clulas, num processo chamado citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC) (Ilustrao 8). No caso das NK, usado o receptor FcRIIIA para se ligarem s clulas opsonizadas por anticorpos. Este receptor no se liga aos IgG circulantes, por isso, ADCC ocorre apenas quando a clula-alvo est revestida por anticorpos.

Ilustrao 8 - ADCC

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Quando o receptor activa a clula, so produzidas citocinas, tais como o IFN-, e a clula levada desgranulao, mediando morte dos micrbios. Este um importante mecanismo para a eliminao de clulas indesejveis, tais como clulas tumorais derivadas dos linfcitos B, atravs da administrao de anticorpos anti-CD20 (especficos para linfcitos B) ficam marcadas para a citotoxicidade.

CLEARANCE DE HELMINTOS2 MEDIADA POR ANTICORPOS

Mastcitos e eosinfilos funcionam com alguns anticorpos para mediar a expulso e morte de alguns parasitas helmnticos (Ilustrao 9). Helmintos (vermes parasitas) so demasiado grandes para serem ingeridos pelos fagcitos, e os seus integumentos so relativamente resistentes aos produtos microbicidas dos neutrfilos e macrfagos. No entanto, podem ser mortos por uma toxina catinica (protena), a protena major dos grnulos dos eosinfilos.
Ilustrao 9 - Helminto

As IgE, IgG e IgA revestem os helmintos, e ligam-se aos receptores Fc dos eosinfilos, FcRI (receptores de alta afinidade), desencadeando a sua desgranulao, e libertando esta protena e outros contedos dos grnulos. Para alm destes, o complexo IgE-helminto vai iniciar a desgranulao local dos mastcitos, atravs do receptor Fc de alta afinidade destes. As quimocinas e citocinas libertadas vo ter um efeito local (broncoconstrio e aumento da motilidade, contribuindo para a expulso dos vermes da via respiratria ou tracto GI) e um efeito quimiotxico (essas mesmas quimio/citocinas vo atrair mais eosinfilos e desencadear a sua desgranulao).

SISTEMA COMPLEMENTO
INTRODUO
um dos mecanismos principais da imunidade humoral e tambm da imunidade inata. Consiste em protenas sricas ou de superfcie, que interagem umas com as

No sei se a traduo de Helmint fica Helminto ou Helminta, pois j vi das duas maneiras.

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outras ou com outras molculas do sistema imunitrio, de forma altamente regulada e originam produtos que eliminam micrbios. Estas protenas esto, normalmente, inactivas; so activadas apenas sob condies particulares.

CARACTERSTICAS DA ACTIVAO DO SISTEMA DE COM PLEMENTO

activado por micrbios e por anticorpos ligados a micrbios ou outros antignios. Activao do complemento envolve a protelise sequencial de protenas para gerar complexos enzimticos com actividade proteoltica. s protenas que adquirem actividade proteoltica pela aco de outras proteases chamam-se zimognios. Este processo permite uma tremenda amplificao, pois cada enzima activada gera mltiplas outras enzimas activadas. Os produtos da activao do complemento ligam-se covalentemente s superfcies microbianas ou aos anticorpos ligados a estas. Elas circulam inactivas ou temporariamente activas, ficando activas e estveis apenas quando ligam aos microorganismos. Activao do complemento inibida por protenas reguladoras que esto presentes em clulas do hospedeiro normais e ausentes nos micrbios. Assim, os efeitos lesivos sobre as clulas do prprio so minimizados. Como os microorganismos no tm estas protenas, o complemento activa-se apenas na superfcie destes.

VIAS DE ACTIVAO DO COMPLEMENTO

Como j foi falado, h 3 principais vias de activao do complemento: clssica (na presena de anticorpos, raros vrus e micoplasmas), alternativa (na ausncia de anticorpos, alguns vrus, enzimas proteolticas) e da lectina (lectina une-se aos resduos de manose dos micrbios). Apesar de as vias diferirem no modo como se iniciam, todas elas geram complexos enzimticos capazes de clivar a protena de complemento mais abundante, C3. As vias alternativa e da lectina pertencem aos mecanismos efectores da imunidade inata; a via clssica um mecanismo major da imunidade adaptativa humoral. O evento central na activao do complemento a protelise da protena de complemento C3, originando, entre outros, C3b, que vai ligar superfcie dos micrbios ou aos anticorpos ligados aos antignios. A activao do complemento depende da gerao de dois complexos proteolticos: a convertase C3 (cliva C3 em dois fragmentos: um menor C3a; e um maior C3b) e a convertase C5 (origina C5a e C5b). O C3b fica covalentemente ligado superfcie microbiana ou aos anticorpos do local de activao do complemento.

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Esta activao promove a fagocitose porque os fagcitos (neutrfilos e macrfagos) expressam receptores de C3b, e os pptidos resultantes da protelise de C3 estimulam a inflamao. O complexo enzimtico C5 apenas se junta aps a gerao de C3b; esta contribui para a inflamao e para a formao de poros nas membranas dos alvos microbianos. Depois da formao do complexo C5, as trs vias de activao so iguais.

VIA ALTERNATIVA ( Ilustrao 10 )

Consiste na protelise do C3 e uma ligao estvel do seu produto C3b s superfcies microbianas, sem auxlio dos anticorpos. A protena C3 contem uma ligao tioestrica reactiva no seu interior. Quando a protena clivada, essa ligao fica exposta originando o domnio tioestrico. Tendo em conta que C3 est contantemente e lentamente a ser clivada no plasma, este domnio reactivo fica passvel de se ligar a protenas da superfcie celular, incluindo as dos micrbios. Se essa ligao no se formar, C3b mantm-se na fase fluida e o domnio tioestrico rapidamente hidrolizado, tornando a protena inactiva. Se de facto a protena se ligar a um microorganismo, o factor B vai-se Ilustrao 10 - Via de activao do complemento: ligar ao C3b, tornando a ligao ao Alternativa micrbio mais estvel. O factor B , por sua vez, clivado pelo factor D, uma protease do plasma, originandoum pequeno fragmento, Ba, e um fragmento maior, Bb, sendo este ltimo o que se mantem ligado ao C3b. O complexo C3bBb a via alternativa convertase C3, e pode clivar mais molculas C3, funcionando como amplificao (pode amplificar activao de complemento iniciada por qualquer uma das vias!). Se o complexo C3bBb se ligar a uma clula do prprio, protenas reguladoras negativas terminam essa reaco, degradando o complexo (estas protenas reguladoras no existem nos micrbios, facilitando a sua eliminao). Para alm disso, h uma protena reguladora positiva, a properdina que se liga e estabiliza o complexo C3bBb. Esta ligao s ocorre nas clulas microbianas.

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Algumas da C3b formadas vo se ligar ao complexo C3bBb, que funciona como a convertase C5 da via alternativa, que cliva o C5, iniciando as etapas terminais da activao do complemento.

VIA CLSSICA (Ilustrao 11) A via clssica iniciada pela ligao da protena de complemento C1 ao domnio CH2 da IgG ou ao domnio CH3 da IgM das Igs ligadas a antignios. C1 um complexo proteico constitudo pelas subunidades C1q, C1r e C1s. (Ilustrao

12)
A C1q tem a funo de reconhecimento e liga-se s regies Fc das cadeias pesadas. Cada regio Fc das Igs tem apenas um local de ligao ao C1q, mas cada C1q tem de se ligar a pelo menos duas Ig para se activar. Este fenmeno explica porque que os anticorpos ligados aos antignios, e no os anticorpos livres, conseguem iniciar a via de activao clssica: vrias IgG tm de se aproximar (cluster) antes de C1q se poder ligar, e as IgG s se aproximam quando esto ligadas a um antignio.

Ilustrao 11 - Via de activao do complemento: Clssica

A IgM enquanto Ig livre por causa da sua conformao planar no se liga s C1q. A ligao das IgM a um antignio induz uma mudana conformacional que expe o local de ligao C1q, na regio Fc da Ig, permitindo ento a ligao. Como a IgM pentamrica, uma s IgM pode-se ligar a 2 molculas C1q, sendo, por isso, muito mais eficiente que as IgG. 85

Ilustrao 12 - Complexo Proteico C1

C1r e C1s so proteases; C1r activada quando C1q se liga regio Fc das IgG ou das IgM, e vai clivar e activar a C1s. Esta, por sua vez vai clivar a prxima protena da cascata, a C4, para gerar C4b que, sendo homloga ao C3b, tambm se liga ao complexo Ag-Ac (antignio-anticorpo) por uma ligao tioestrica. Esta anexao ao complexo assegura que a activao de complemento s ocorre na superfcie de um microorganismo. A prxima protena a ser activada, C2, forma um complexo com o C4b e clivado (tambm) pela protease C1s, originando C2b (importncia desconhecida) e um fragmento maior, C2a, que fica fisicamente associado com o C4b na superfcie celular. O complexo C4b2a resultante a convertase C3 da via clssica, tendo a capacidade de clivar C3. O componente C4b tem como funo a ligao desta enzima ao C3 e o componente C2a tem como funo a protelise. Aqui, o C2 homlogo ao factor B da via alternativa. Algumas molculas C3b vo se ligar a este complexo, formando um novo complexo: C4b2a3b, que a convertase C5 da via clssica.

VIA DA LECTINA

(Ilustrao 13)

semelhante via clssica, diferindo apenas no incio. desencadeada na ausncia de anticorpos, reconhecendo padres repetitivos e/ou ausncia do cido silico, havendo ligao de polissacridos microbianos a lectinas circulantes, tais como as MBL (mannose-binding lectin) esta apresenta uma notvel semelhana com C1q, ou ficolinas. Estas lectinas solveis so protenas tipocolagnio que se assemelham C1q. Sendo do tipo-colagnio, tm domnios que ajudam na assembleia de estruturas oligomricas: MBL liga-se aos resduos de manose dos polissacridos e as ficolinas ligam-se a glicanos que contenham Nacetilglucosaminas. Seguidamente, ambas se ligam a MASPs (MBL-associated serine proteases), que so homlogas C1r e C1s, servindo funo semelhante: clivagem de C4 e C2, sendo a MASP2 a que responsvel pela clivagem. Eventos subsequentes so idnticos aos da via clssica.

LTIMAS FASES COMPLEMENTO

DA

ACTIVAO

DO

As convertases C5 originadas por qualquer uma das vias 86

Ilustrao 13 - Via de activao do complemento: da Lectina

iniciam a activao de componentes do complemento que culminam na formao do complexo de ataque membrana (MAC)(Ilustrao 14).

Ilustrao 14 - Formao do complexo MAC

A convertase C5 cliva o C5 num fragmento pequeno C5a, que libertado, e um fragmento maior C5b, que permanece ligado s protenas de complemento na superfcie celular. As restantes protenas de complemento, C6, C7, C8 e C9 so protenas sem funo enzimtica. Logo aps a clivagem do C5, o C5b tem a capacidade transitria de ligar s prximas protenas: C6 e C7. O complexo C5b,6,7 hidrofbico e, por isso, insere-se na membrana bilipdica, constituindo um receptor de alta afinidade para a C8 (complexo C5b-8). A formao de um MAC completo terminada com a juno da ltima protena do complemento, C9, a esse complexo. C9 homloga s perforinas das clulas T citotxicas e das clulas NK, formando poros na membrana que destabilizam o controlo osmtico da clula, provocando a sua lise.

RECEPTORES PARA AS PROTENAS DO COMPLEMENTO

Muitas das funes do complemento advm da ligao dos fragmentos do complemento a receptores de membrana expressos em vrias clulas. Os que esto melhor descritos so os receptores de C3, existindo, porm, receptores para os tais fragmentos menores libertados: C3a, C4a e C5a, que estimulam a inflamao.

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RECEPTOR DE COMPLEMENTO TIPO 1 (CR1 OU CD35)

Funo principal: promover a fagocitose de partculas revestidas por C3b ou C4b; eliminar imunocomplexos da circulao. Tem alta afinidade para C3b e C4b. Expresso em clulas originadas na medula (eritrcitos, neutrfilos, moncitos, macrfagos, eosinfilos, linfcitos T e B) e ainda em clulas foliculares dendrticas dos orgos linfides. Fagcitos usam este receptor para ligar e internalizar partculas opsonizadas por C3b e C4b. Pode desencadear funes microbicidas, especialmente quando o receptor Fc est simultaneamente ocupado por partculas revestidas por anticorpos. Eritrcitos transportam imunocomplexos ligados ao C3b e C4b para o fgado e para o bao, onde so removidos da superfcie do eritrcito por fagcitos.

RECEPTOR DE COMPLEMENTO TIPO 2 (CR2 OU CD21)

Funo: estimula a resposta humoral ao melhorar a activao das clulas B por antignios; promove o aprisionamento de complexos Ag-Ac nos centros germinais. Liga os produtos da clivagem do C3b: C3d, C3dg e iC3b (i de inactivo), originados pela protelise por parte do factor I Nas clulas B: forma um complexo com o CD19 e com o CD81 (ou TAPA-1 = target of antiproliferative antibody 1). A funo do complexo melhorar a resposta dos linfcitos B aos antignios. Nas clulas dendrticas foliculares serve para aprisionar os complexos revestidos por iC3b e C3dg nos centros germinativos. o receptor para o vrus Epstein-Barr.

RECEPTOR DE COMPLEMENTO TIPO 3 (CR3 OU Mac-1 OU CD11bCD18)

Funo: uma integrina que funciona como receptor para o fragmento iC3b (que vem da protelise do C3b). Expresso em neutrfilos, fagcitos mononucleares, mastcitos e clulas NK Promove a fagocitose de micrbios opsonizados com iC3b. Pode reconhecer directamente bactrias para a fagocitose. Liga-se s ICAM-1 (protenas de adeso ao endotlio), facilitando uma ligao estvel dos leuccitos ao endotlio, mesmo sem activao do complemento, para o recrutamento de leuccitos para o local de infeco.

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RECEPTOR DE CD11c/CD18)

COMPLEMENTO

TIPO

(CR4

OU

p150,95

OU

Semelhante ao Mac-1 (ver acima).

RECEPTOR DE COMPLEMENTO PARA A FAMLIA DAS IMUNOGLOBULINAS (CRIg)

Expresso nas clulas de Kupffer Liga-se aos fragmentos do complemento C3b e iC3b. Funo: eliminao de bactrias opsonizadas.

REGULAO DA ACTIVAO DO COMPLEMENTO

Activao e estabilidade das protenas de complemento tm uma regulao fina para prevenir activao do complemento contra clulas do hospedeiro e para limitar a durao dessa activao, mesmo contra clulas microbianas. As protenas circulantes e de membrana responsveis por esta regulao formam a famlia RCA (reguladores da actividade do complemento). O controlo da activao essencial porque: (1) existe uma activao constante mnima, que no pode prosseguir para no danificar as clulas do prprio; (2) mesmo que o complemento esteja activado e a actuar sobre micrbios, deve ser controlado para que os produtos de degradao no difundam para as clulas adjacentes.
Ilustrao 15 - Aco de C1 INH

Ento o que permite direccionar o sistema complemento para os micrbios e evitar a sua activao contra clulas do prprio? A actividade proteoltica de C1r e C1s inibida por uma protena plasmtica chamada inibidor de C1 (C1 INH) (Ilustrao 15). Essa protena mimetiza a aco dos substratos dessas proteases, e os produtos da sua protelise ficam ligados covalentemente s proteases, levando dissociao do complexo C1r2-C1s2 do C1q 89

(impede a via de activao clssica e impede a acumulao de cada vez mais complexo C1r2-C1s2 activo). A deficincia de C1 INH leva ao edema hereditrio angioneurtico (autossmica dominante). Nesta doena h acumulao de fluido na pele e mucosas e, como os nveis de C1 INH esto baixos, no h controlo suficiente sobre a activao do C1 pelos imunocomplexos, havendo ainda protelise excessiva de C4 e C2. Para alm disso, existe um fragmento de C2, a C2 cinina, e bradiquinina, que medeiam a formao de edema nestes pacientes. A montagem dos complexos das convertase C3 e convertase C5 inibida pela ligao de protenas reguladoras a C3b e C4b nas superfcies celulares (Ilustrao 16). Quando o C3b se liga na superfcie de clulas normais, pode-se ligar a vrias protenas de membrana: MCP ou CD46 (membrane cofactor protein), CR1 (receptor de complemento tipo 1), DAF (decay-accelerating factor) e protena plasmtica factor H (inibe apekas a ligao Ilustrao 16 - Inibio da formao das Convertases do Bb ao C3b, e por isso regula C3 a via alternativa e no a via clssica). A C4b tambm se liga DAF e ao CR1, e ainda C4BP (C4 binding protein). Ao se ligarem a C3b ou C4b, estas protenas esto a inibir, por competio, a ligao dos outros componentes da convertase C3 (tais como o Bb via alternativa; C2b via clssica). Todas estas protenas so produzidas pelas clulas do hospedeiro e no pelos micrbios, por isso o complemento actua apenas nos micrbios. As superfcies celulares ricas em cido silico favorecem a ligao da protena reguladora factor H. Como os micrbios no tm tanto cido silico na membrana, a aco do complemento no vai ser prevenida nesta pelo factor H. A DAF uma protena ligada a um glicofosfatidilinositol, expressa no endotlio. Deficincias na produo desta enzima causam a doena hemoglobinria nocturna paroxismal, situao em que ocorre hemlise por ataque do complemento aos eritrcitos. O C3b (ou C4b) que de facto se consegue unir a clulas do prprio vai ser degradado por uma protease srica, o factor I, que se activa apenas na presena de protenas reguladoras (existentes apenas nas clulas do hospedeiro) e, por isso, funcionam como co-factores do factor I.

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 o factor I que, pela degradao do C3b, origina o iC3b, C3d e o C3dg no participam na activao do complemento mas so reconhecidos por receptores de fagcitos e linfcitos B. (Ilustrao 17)

Ilustrao 17 - Clivagem do C3b mediada pelo factor I

A formao do MAC inibida por uma protena de membrana: CD59 (Ilustrao 18). Esta incorpora-se nos MACs que esto a ser acoplados, logo aps a insero do complexo C5b-8 e assim o C9 no consegue terminar o processo de formao do MAC. O CD59 est presente nas clulas do hospedeiro, mas no nos microorganismos. Se ordenarmos por ordem de importncia, as protenas inibidoras do complemento, teremos algo como: CD59>DAF>MCP (o que pode estar com a sua abundncia na superfcie celular). Ilustrao 18 - Regulao da formao do MAC Se a activao das vias do complemento forem excessivas (como o caso de algumas doenas imunolgicas), vai haver supresso da actividade das protenas reguladoras, pois no so suficientes.

FUNES DO COMPLEMENTO
OPSONIZAO E FAGOCITOSE ( Ilustrao 19 )

Micrbios sobre os quais o complemento foi activado via clssica ou via alternativa vo estar revestidos de C3b, iC3b ou C4b e vo ser fagocitados pela ligao destes a 91

Ilustrao 19 - Funes do complemento: Opsononizao e Fagocitose

receptores de superfcie especficos dos macrfagos e neutrfilos. O C3b e o C4b ligam-se ao CR1 e o iC3b liga-se ao CR3 (Mac-1) e ao CR4. Por si s, o receptor CR-1 no consegue desencadear uma induo eficiente dos fagcitos; a induo melhora se os micrbios estiverem revestidos de IgG ligados aos receptores Fc ou se existir IFN- (induz activao dos macrfagos). A fagocitose mediada pelo complemento (que pertence ao sistema imunitrio inato e ao humoral) importante no caso de bactrias com cpsulas ricas em polissacridos, como o pneumococcus ou o meningococcus. Aps opsonizao, estas bactrias so fagocitadas no bao (em caso de esplenectomia, aumenta a probabilidade de septicmia pneumo/meningoccica).

ESTIMULAO DAS RESPOSTAS INFLAMATRIAS (Ilustrao 20)

Ilustrao 20 - Funes do complemento: Estimulao das respostas inflamatrias

Os fragmentos proteolticos do complemento C5a, C4a e C3a induzem inflamao aguda ao activarem os mastcitos e neutrfilos. Os trs pptidos estimulam a desgranulao dos mastcitos, em que h libertao de mediadores vasoactivos como a histamina, sendo por isso chamados de anafilatoxinas. Nos neutrfilos, C5a estimula a motilidade, firma a adeso das clulas ao endotlio e estimula o burst oxidativo. Pode ainda actuar directamente no endotlio, para aumentar a permeabilidade vascular e melhorar a adeso dos neutrfilos ao endotlio. Nos mastcitos, C5a o mediador de desgranulao dos mastcitos mais importante. C5a liga-se ao seu receptor (acoplado a uma protena G) existente nos neutrfilos, 92

eosinfilos, basfilos, moncitos, macrfagos, mastcitos, endotlio, clulas de msculo liso, epitlios e astrcitos. Tem ainda a funo estimuladora da produo de PGE2 e leucotrienos. O Ba e Bb gerados na via alternativa tambm tm efeitos biolgicos: quimitaxia de neutrfilos e activador de macrfagos (respectivamente).

CITLISE MEDIADA PELO COMPLEMENTO ( Ilustrao 21 )

mediada pelo MAC. Alguns microorganismos tm a membrana celular muito espessa e o MAC no faz grande efeito. apenas eficaz em bactrias como a Neisseria que tm a membrana muito fina.

Ilustrao 21- Funo do complemento: Citlise

OUTRAS FUNES

SOLUBILIZAO DOS IMUNOCOMPLEXOS E A SUA CLEARANCE PELOS FAGCITOS

Os imunocomplexos que se formam em circulao, quando h uma resposta dos anticorpos a um antignio, podem acumular e depositar nos vasos sanguneos, levando a uma reaco inflamatria que danificam os tecidos. Quando os imunocomplexos revestidos por C3b se ligam aos receptores CR1 dos eritrcitos, vo para o fgado e bao para serem fagocitados. ACTIVAO DOS LINFCITOS B PELA LIGAO DE C3d AO CR2 DESSAS CLULAS

C3d um produto da clivagem do C3b, e ambos ligados a um antignio resulta na activao do complemento. Assim, os linfcitos B ligam-se ao antignio pelos seus receptores Ig e ao mesmo tempo ligam-se ao C3d pelo seu receptor CR2 (co-receptor) DESTRUIO CELULAR NAS DOENAS AUTOIMUNES

Apesar de no ser uma funo fisiolgica, as doenas associadas com a produo de autoanticorpos e a destruio relacionada com estas doenas so resultantes da lise e fagocitose dependente do complemento. 93

DEFICINCIAS DO COMPLEMENTO
NOS COMPONENTES DA VIA CLSSICA

Podem afectar C1q, C1r, C4, C2 (a mais comum) e C3. 50% das deficincias de C2 e C4 originam lpus eritematoso, porque h falha da eliminao dos imunocomplexos. Estas deficincias no esto associadas a susceptibilidade aumentada a infeces. Pode haver auto-imunidade, por falta dos sinais do complemento que induzem tolerncia nos linfcitos B. Deficincias no C3 esto associados a infeces piognicas.

NOS COMPONENTES DA VIA ALTERNATIVA

Deficincias nos componentes desta via incluem a properdina e o factor D, resultando numa susceptibilidade s infeces aumentada. Produo de um componente patolgico: factor C3 nefrtic, que actua como um anticorpo contra a convertase C3.

NOS COMPONENTES TERMINAIS DA ACTIVAO DO COMPLEMENTO

Incluem C5, C6, C7, C8 e C9. Relacionado com susceptibilidade a infeces por Neisseria meningitidis e Neisseria gonorrhoeae.

NAS PROTENAS REGULATRIAS DO COMPLEMENTO

Deficincia do factor I: o C3 plasmtico esgotado como resultado da formao de uma convertase C3 de fase fluida. Aumenta a susceptibilidade a infeces piognicas. Deficincia do factor H: raro. H uma activao excessiva da via alternativa, consumo de C3 e glomerulonefrite causada pela m eliminao de imunocomplexos circulantes. Sem o factor H, o complexo C3bBb mantm-se activo levando ao consumo excessivo de C3.

NOS RECEPTORES DO COMPLEMENTO

Incluem falta de CR3 e CR4 ambas raras. Causam a doena deficincia da adeso leucocitria.

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EFEITOS PATOLGICOS DE UM SISTEMA DE COMPLEMENTO NORMAL

Efeitos lesivos das infeces esto muitas vezes relacionados com a aco do complemento, mesmo em pessoas saudveis (para alm da infeco); exemplos: trombose intravascular, isqumia dos tecidos. Processo da trombose (em caso de transplantes de rgos vascularizados): criam-se anticorpos anti-endoteliais, onde se formam imunocomplexos. Para alm disse, o MAC danifica as clulas endoteliais, o que leva coagulao. Vasculite e Glomerulonefrite: derivam da deposio de imunocomplexos nas paredes dos vasos e nos glomrulos renais. Esses imunocomplexos activam o complemento que danifica o endotlio e os glomrulos.

EVASO DOS MICRBIOS AO SISTEMA COMPLEMENTO

Como? PAREDES CELULARES
So muito espessas, impedindo a ligao do MAC, entre outros. Exemplos: Gram + e alguns fungos. O lpido A dos Gram tambm confere resistncia. As paredes sofrem constantes mutaes, com grande diversidade de eptopos

RECRUTA DE PROTENAS COMPLEMENTO

DO

HOSPEDEIRO

REGULADORAS

DO

Alguns desenvolvem vias de sntese especiais para o cido silico, que inibe a via alternativa de activao do complemento pela recruta do factor H, que desacopla o C3b do Bb. Exemplos: E.coli K1, meningococcus. Outros capturam o cido silico das clulas do hospedeiro: localizam-no e enzimaticamente transferem-no para a sua superfcie. Exemplos: Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus Podem possuir factores de inibio do factor H, como o caso do GP41 do HIV, que se liga covalentemente ao factor H. Outros recrutam as prprias protenas reguladoras: o factor H, para as suas paredes celulares. Exemplos: S.pyogenes, Borrelia burdorferi, N.meningitidis, C.albicans...; a DAF e o CD59, recrutadas pelo HIV.

PRODUO DE PROTENAS QUE MIMETIZAM PROTENAS REGULADORAS DO COMPLEMENTO

E.coli produz C1qBP (binding protein), que inibe a formao do complexo C1q-C1rC1s. S.aureus produs SCIN (inibidor do complemento estafiloccico) que se liga e inibe as convertases C3 da via clssica e da via alternativa. Herpes simplex: produz glicoprotena C-1 que destabiliza a convertase da via alternativa (previne a ligao de C3b properdina) Pseudomonas produz elastase que inactiva C3a e C5a 95

BLOQUEIO DA MICROBIANOS

INFLAMAO

PELOS

PRODUTOS

DOS

GENES

S.aureus sintetiza CHIPS (chemokine inhibitory protein of staphylococcus) que um antagonista da anafilotoxina C5a.

IMUNIDADE NEONATAL
Os fetos mamferos esto protegidos das infeces por anticorpos produzidos pela me, que atravessam a placenta (IgG) e entram em circulao fetal, e por anticorpos ingeridos com o leite materno (IgA e IgG), que atravessam o epitlio intestinal dos recm-nascidos, num processo chamado Transcitose. Como os recm-nascidos no tm a capacidade de responder eficazmente contra os micrbios, utilizam a imunidade passiva como defesa, que se baseia na neutralizao dos organismos patognicos. Para as IgA serem transportados para o leite, necessitam do receptor polimrico Ig, que secretado juntamente com 2 IgA. Para as IgG serem transportadas pela placenta e pelo intestino do recm-nascido, precisam do receptor Fc especfico para as IgG: FcRn (neonatal Fc receptor. Este assemelha-se ao MHC I estruturalmente. Nos adultos tem como funo proteger as IgG do catabolismo. Exemplo clnico da aula terica: Me com Doena de Graves, onde h anticorpos anti-TSHR; estes so transferidos pela placenta, e o beb quando nasce tem a mesma doena. Como a causa no intrnseca, a doena curada atravs da realizao de plasmafrese no beb.

96Ilustrao 22 - Slide da aula terica: esquema resumo do sistema de complemento

T7: Imunidade Celular Mecanismos Efectores da Imunidade Mediada por Clulas

Data da terica: 14 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 10 Slides aulas: sim Elaborado por: Joana Miranda

MECANISMOS EFECTORES DA IMUNIDADE CELULAR

Ao contrrio da imunidade humoral, a imunidade celular actua nos agentes invasores intracelulares, contra os quais os anticorpos no conseguem actuar. Esta imunidade celular pode ser transferida para outro indivduo no imunizado, atravs da transferncia de clulas T, e no pela transfuso de anticorpos. Defeitos neste tipo de imunidade resultam num aumento da susceptibilidade a infeces por vrus e por bactrias intracelulares, tal como por algumas bactrias e fungos extracelulares que so fagocitados. As respostas mediadas por clulas T so tambm importantes na rejeio de enxertos, imunidade anti-tumoral, e doenas inflamatrias auto-imunes (immune-mediated inflammatory diseases).

TIPOS DE RESPOSTAS IMUNES MEDIADAS POR CLULAS

Diferentes populaes de clulas T evoluram para combater diferentes tipos de patognios infecciosos, e por isso, a imunidade mediada por clulas consiste num exemplo excelente de especializao da imunidade adaptativa. Existem vrios princpios gerais importantes para estas respostas imunitrias: Clulas T efectoras CD4+ ligam o reconhecimento especfico de microrganismos ao recrutamento e activao de outros leuccitos para a destruio destes agentes infecciosos. Cada tipo de leuccito est especialmente adaptado para destruir certas categorias de microrganismos, por isso, a natureza dos leuccitos recrutados e activados, tem de ser determinada pela subcategoria de clula T CD4+ efectora que induzida na resposta imune, o que depende do microrganismo invasor. Em geral, clulas TH1 activam macrfagos, clulas TH2 recrutam e activam eosinfilos, e as respostas por clulas TH17 so dominadas por neutrfilos (e um nmero varivel de macrfagos).

97

 Esta cooperao entre linfcitos T e outros leuccitos ilustra um elo importante entre as imunidades adaptativa e inata: atravs da secreo de citocinas, as clulas T estimulam e focam a actividade de clulas efectoras da imunidade inata (como os fagcitos), convertendo assim estas clulas em agentes da imunidade adaptativa. Resposta a microrganismos fagocitados que vivem dentro dos fagossomas de macrfagos, mediada por clulas TH1, que reconhecem antignios microbianos e activam os macrfagos para destrurem os agentes fagocitados. Resposta a microrganismos extracelulares, incluindo variados fungos e bactrias, mediada por clulas TH17, que recrutam neutrfilos e alguns moncitos, para fagocitarem e destrurem os microrganismos. Resposta a parasitas helmnticos (helminthic parasites) mediada por clulas TH2, atravs da produo de anticorpos imunoglobulina E (IgE) e da activao de eosinfilos e mastcitos para eliminarem os vermes parasitas (helminths). A resposta imune adaptativa a microrganismos que infectam e conseguem replicar-se no citoplasma de diversos tipos celulares, incluindo clulas no fagocticas, mediada por linfcitos T citotxicos (CTLs) CD8+, que matam clulas infectadas e eliminam os reservatrios de infeco. Isto porque se as clulas infectadas no tm funo microbicida intrnseca, a infeco apenas pode ser eliminada pela destruio destas mesmas clulas. Este tambm um mecanismo para eliminao de microrganismos que so ingeridos por clulas fagocticas, mas que conseguem libertar-se dos fagossomas mantendo-se no citosol. Respostas imunes mediadas por clulas consistem no desenvolvimento de clulas T efectoras a partir de clulas nave em orgos linfides perifricos, migrao destas clulas T efectoras e de outros leuccitos para os locais de infeco, e activao de leuccitos mediada por citocinas para destruio de microrganismos, ou eliminao directa da clula infectada.

MIGRAO DE LINFCITOS T EFECTORES PARA LOCAIS DE INFECO

A diferenciao de clulas T nave em clulas T efectoras est associada a uma mudana na expresso de receptores de quimiocinas e molculas de adeso, que determina o comportamento migratrio destas clulas. A expresso de molculas envolvidas no alojamento das clulas T nave dentro de ndulos linfticos, que inclui selectina-L e CCR7, diminui pouco aps a activao destas clulas induzida por um antignio, e a expresso do receptor de esfingosina 1-fosfato (S1PR1) aumenta. Como resultado, as clulas efectoras que se desenvolvem j no so obrigadas a permanecer no ndulo, e so atradas a entrar na circulao sangunea ou nos vasos linfticos eferentes. 98

Ao contrrio das clulas T nave, as clulas T efectoras expressam receptores de quimiocinas e molculas de adeso que se ligam a quimiocinas e a molculas de adeso endoteliais, induzidas por citocinas como IL-1 e TNF (tumor necrosis factor), e que so produzidas em locais de infeco. Ou seja, aps entrarem em circulao, as clulas T efectoras alojam-se preferencialmente em locais de infeco. Cada uma das categorias TH1, TH2 e TH17 de clulas T CD4+ tem um fentipo de alojamento distinto, que as direcciona a migrar para diferentes locais de infeco. QUIMIOCINAS QUE ATRAEM T HELPERS Por exemplo, durante a diferenciao de precursores nave, as clulas TH1 desenvolvem a capacidade de produzir ligandos funcionais para selectina-E e selectina-P, enquanto que as clulas TH2 expressam nveis baixos deste ligandos. Outro exemplo refere-se aos receptores CXCR3 e CCR5, que se ligam a quimiocinas elaboradas nos tecidos durante respostas imunes inatas, e que so expressos em nveis elevados por clulas TH1, mas no por clulas TH2. Por isso, as clulas TH1 tendem a ser mais abundantes em locais de infeco onde os agentes infecciosos desencadeiam uma resposta imunitria inata forte. Em geral, as CTLs migram de forma semelhante s clulas TH1. Em contraste, as clulas TH2 expressam os receptores de quimiocinas CCR3, CCR4, e CCR8, que reconhecem quimiocinas expressas em nveis muito altos em locais de infeco por parasitas helmnticos e em reaces alrgicas, particularmente em mucosas, e por isso as clulas T H2 tendem a migrar para estes tecidos. As clulas TH17 expressam CCR6, ao qual se liga a quimiocina CCL20, produzida por vrias clulas dos tecidos e tambm por macrfagos durante muitas infeces fngicas e bacterianas, por isso, a migrao de clulas T H17 para locais inflamatrios dependente da expresso de CCR6. Aps a entrada de clulas T efectoras nos locais de infeco, e aps estas serem novamente activadas pelo antignio, estas produzem mais citocinas e quimiocinas, e estimulam uma maior migrao leucocitria. Esta inflamao tardia por vezes chamada de Inflamao Imunitria (Immune Inflammation), para indicar o papel dos linfcitos T no processo. A migrao de clulas T controlada por molculas de adeso e quimiocinas, resulta no recrutamento inespecfico destas clulas (pois no considera a especificidade do antignio), assegurando que o mximo possvel de clulas T anteriormente activadas tenham a oportunidade de localizar microrganismos infecciosos, e erradicar a infeco. At algumas clulas T de memria migram para os tecidos perifricos no-linfticos. Uma vez nos tecidos, as clulas T encontram antignios microbianos apresentados por macrfagos e outras clulas apresentadoras de antignios (APCs), e ao reconhecerem especificamente algum antignio recebem sinais, atravs dos seus receptores de antignios, que aumentam a afinidade das integrinas para os seus ligandos. Duas destas integrinas, VLA-4 e VLA-5, ligam-se a fibronectina de matrizes extracelulares, e uma terceira molcula de adeso, CD44, que expressada em 99

clulas T efectoras e de memria, liga-se a cido hialurnico (hyaluronan). Como resultado, as clulas T (efectoras e de memria) especficas para aquele antignio so preferencialmente retidas no local extravascular onde ele est presente, e as clulas T no especficas que migraram para aquele local podem morrer no tecido, ou regressar circulao.

FUNES EFECTORAS DE CLULAS T HELPER CD4+

As clulas T efectoras da linhagem CD4+ desempenham a sua funo produzindo citocinas e outras molculas de superfcie, que vo activar outras clulas para eliminarem microrganismos. As funes das clulas T efectoras CD4+ na imunidade celular podem ser divididas em diferentes passos:

Ilustrao 23 Sequncia de eventos nas reaces de clulas T CD4+ efectoras

Recrutamento de outros leuccitos - Este recrutamento de neutrfilos, moncitos e eosinfilos para o local de resposta mediado por quimiocinas produzidas pelas prprias clulas T, ou por outras clulas em resposta as citocinas produzidas pelas clulas T. Diferentes tipos de clulas efectoras CD4+ recrutam diferentes tipos de leuccitos, como foi mencionado anteriormente. 100

 Activao dos leuccitos recrutados Os mecanismos pelos quais as clulas T CD4+ activam outros leuccitos envolvem a expresso da protena de superfcie ligando CD40 (CD40L) e a secreo de citocinas, ambas pelas clulas T. A via mediada por CD40L mais definida para a activao de macrfagos por clulas TH1, e ser descrita mais a frente neste contexto. Amplificao da resposta Tal como em todas as respostas imunes adaptativas, existem vrios loops de feedback positivo (como um crculo vicioso) que servem para amplificar a resposta; por exemplo as citocinas produzidas pelas clulas T activam os macrfagos a produzir citocinas, sendo que estas por sua vez actuam sobre as clulas T aumentando a sua resposta. Inibio da resposta As clulas T efectoras no tm uma vida muito longa, morrem logo aps terem completado a sua funo, e quando o antignio eliminado os estmulos para propagar a resposta so perdidos, e esta diminui com o tempo. Mecanismos de controlo especiais podem tambm limitar as respostas efectoras, sendo um exemplo destes mecanismos a IL-10, cuja funo principal inibir a contnua diferenciao linfocitria em T H1 e a activao de macrfagos, e que produzida tanto pelas clulas T H1 como pelos macrfagos activados. Mecanismos inibitrios adicionais, como outras citocinas anti-inflamatrias e receptores que inibem a activao de clulas T, podem estar envolvidos no controlo das respostas mediadas por clulas T. As clulas T CD4+ tambm participam indirectamente na defesa do hospedeiro ajudando linfcitos B a produzir anticorpos de alta afinidade contra microrganismos extracelulares, e promovendo o desenvolvimento de CTLs funcionais que combatem microrganismos intracelulares. Em seguida desenvolvem-se as funes das trs categorias principais de clulas T CD4+ efectoras na imunidade celular.

FUNES DAS CLULAS T H 1

A principal funo das clulas TH1 activar macrfagos para ingerir e destruir microrganismos; Mas para compreender a activao dos macrfagos necessrio perceber a aco do interfero- (IFN-), a citocina responsvel pela maior parte das funes especializadas desta linhagem de clulas T. CITOCINAS PRODUZIDAS PELAS CLULAS TH1 Interfero- (IFN-) a principal citocina para activao de macrfagos e desempenha funes cruciais na imunidade contra microrganismos intracelulares, por isso, indivduos que herdam mutaes raras inactivadoras do receptor IFN- so mais susceptveis a este tipo de infeces. Este interfero apresenta alguma actividade antiviral apesar de no ser uma citocina antiviral potente, e produzido no s pelas clulas TH1 CD4+ mas tambm pelas clulas NK e T CD8+. Na aco deste interfero intervm as cinases JAK1 e JAK2 que levam fosforilao e dimerizao de STAT1, que estimula a transcrio de vrios genes. As principais funes do IFN- so:

101

Activar macrfagos para que estes eliminem microrganismos fagocitados. O IFN- produzido pelas celular TH1 alia-se ao ligando CD40, tambm expresso pelas clulas T, para activar numerosas vias de sinalizao e factores de transcrio, que estimulam a expresso de vrias espcies de oxignio e azoto reactivas e de enzimas nos fagolisossomas dos macrfagos. Estas substncias so responsveis pela funo microbicida dos macrfagos activados, e so elas que destroem os microrganismos ingeridos.

Actuar sobre clulas B para promover a produo de subclasses de IgG, e inibir istipos dependentes de IL-4, como a IgE. Estas subclasses de IgG ligam-se aos receptores Fc nos fagcitos e activam o complemento, e ambos estes mecanismos promovem a fagocitose dos microrganismos opsonizados. Promover a diferenciao de clulas CD4+ em clulas TH1 e inibir a diferenciao em clulas TH2 e TH17, com o objectivo de amplificar a resposta por TH1. Estimular a expresso de diferentes protenas que contribuem para melhorar a apresentao de antignios associados ao MHC e iniciar e amplificar a resposta imune por clulas T. Estas protenas incluem: molculas do MHC, protenas envolvidas no processamento de antignios, componentes do proteassoma, HLA-DM, e co-estimuladores B7 em APCs.

Outras citocinas produzidas por clulas TH1 so: TNF, e IL-10 (que inibidora de clulas dendrticas e macrfagos, e por isso suprime a activao de clulas TH1, exemplo de um loop de feedback negativo). ACTIVAO DE MACRFAGOS MEDIADA POR CLULAS TH1 E ELIMINAO DE MICROORGANISMOS FAGOCITADOS Em qualquer local de infeco, como parte da resposta imunitria inata, so recrutados moncitos, desde a corrente sangunea at aos tecidos, por quimiocinas produzidas por macrfagos e outras clulas residentes. Estes moncitos transformamse em macrfagos, fazem a sua primeira fagocitose, e se o microrganismo tiver evoludo para resistir eliminao por macrfagos, ele sobrevive no interior dos fagossomas. Nestas clulas infectadas os pptidos microbianos so processados, e apresentados como pptidos associados a molculas MHC classe II. Ao mesmo tempo, clulas TH1 efectoras so geradas numa resposta imunitria adaptativa nos tecidos linfides secundrios, e so recrutadas ao local de infeco onde reconhecem pptidos antignicos (os mesmos que iniciaram a resposta imunitria) apresentados pelos macrfagos que contm o microrganismo. Os macrfagos so expostos a sinais das clulas TH1 efectoras, que os activam para eliminarem os microrganismos ingeridos.

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Esta activao consiste numa expresso aumentada de vrias protenas que conferem aos macrfagos activados a capacidade de desempenhar funes especializadas, como por exemplo aces microbicidas mais eficientes. A activao de macrfagos feita no s por aco do IFN-, mas tambm por sinais mediados por contacto, baseados em interaces CD40L-CD40. Quando as clulas TH1 so estimuladas por um antignio, estas expressam CD40L na sua superfcie e produzem IFN-. As aces de IFN- nos macrfagos so sinrgicas com as aces do ligando CD40, e em conjunto so estmulos potentes para a activao de macrfagos. A necessidade de interaces de contacto entre a molcula de superfcie CD40, presente nos macrfagos, e o seu ligando, presente nas clulas T, assegura que os macrfagos que apresentam antignios s clulas T so os mais eficientemente activados por estas clulas. Os mesmos princpios se aplicam activao de linfcitos B pelas clulas T, pois as clulas T helper estimulam a proliferao e diferenciao dos linfcitos B, por sinais mediados por CD40 e citocinas. Os macrfagos activados eliminam os microrganismos fagocitados principalmente pela aco de espcies reactivas de oxignio, azoto, e enzimas lisossomais, potentes agentes microbicidas produzidos dentro de lisossomas de macrfagos, que digerem os microrganismos aps a fuso do fagossoma com o lisossoma. Estas substncias txicas podem tambm ser libertadas em tecidos adjacentes, onde podem eliminar microrganismos extracelulares, e causar dano a tecido saudvel devido sua falta de especificidade. Esta via de activao de macrfagos intitulada de via clssica para ser distinguvel da via de activao alternativa, descrita mais frente. Os macrfagos activados esto envolvidos em vrias outras reaces de defesa do hospedeiro. Eles estimulam a inflamao atravs da secreo de citocinas, principalmente TNF e IL-1, e mediadores lipdicos como as prostaglandinas, os leucotrienos e factor de activao plaquetria (PAF). Esta aco colectiva leva ao recrutamento de mais leuccitos, o que melhora a capacidade de destruir agentes infecciosos. Os macrfagos activados ampliam a resposta imunitria mediada por clulas ao tornarem-se APCs mais eficientes devido aos maiores nveis de molculas envolvidas no processamento de antignios e maior expresso de molculas MHC classe II na sua superfcie, mas tambm pela produo de citocinas (como a IL-2) que estimulam a diferenciao de linfcitos T em clulas T efectoras.

FUNES DAS CLULAS T H 2

As clulas TH2 estimulam as reaces mediadas por IgE e por eosinfilos, com o objectivo de eliminar infeces por parasitas helmnticos. Estes parasitas so demasiado grandes para serem fagocitados por neutrfilos e macrfagos, e podem ser mais resistentes s aces microbicidas destes fagcitos do que a maioria das bactrias e vrus, por isso so necessrios mecanismos especiais para eliminar estas infeces.

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CITOCINAS PRODUZIDAS PELAS CLULAS TH2 Interleucina-4 (IL-4) Esta interleucina desempenha funes tanto de citocina indutora como efectora, e o principal estmulo para produo de anticorpos IgE e para o desenvolvimento da linhagem TH2 a partir de clulas T CD4+ nave. tambm produzida em mastcitos activados. Os seus mecanismos incluem a via JAK-STAT (JAK3 ou JAK4 e STAT6) e uma via que envolve IRS (insulin response substrate) chamada IRS-2. IL-4 pode tambm ligar-se ao receptor da IL-13, devido s suas semelhanas estruturais. As funes da IL-4 so: Estimular o desenvolvimento de clulas TH2 e desempenhar funo de um factor de crescimento autcrino para as clulas TH2 diferenciadas. Estimular em clulas B a mudana de classe Ig da cadeia pesada para o istipo IgE Os anticorpos IgE desempenham papis na defesa mediada por eosinfilos contra infeces helmnticas (e algumas infeces por artrpodes), e so tambm os principais mediadores em reaces alrgicas. Contribuir para uma via de activao de macrfagos alternativa Esta activao descrita mais frente. Estimular os movimentos peristlticos no tracto gastrointestinal Contribui para a eliminao de microrganismos em superfcies epiteliais. Estimular o recrutamento de leuccitos Recrutamento principalmente de eosinfilos, promovendo a expresso de molculas de adeso no endotlio, e a secreo de quimiocinas que se ligam os receptores presentes nos eosinfilos.

Interleucina-13 (IL-13) Esta interleucina estrutural e funcionalmente semelhante IL-4 e tambm desempenha um papel crucial na defesa contra parasitas e em reaces alrgicas. produzida principalmente pela linhagem TH2, mas tambm por basfilos, eosinfilos e clulas NKT. O receptor de IL-13 permite a ligao tanto de IL-13 como de IL-4 com grande afinidade, possibilitando a partilha dos efeitos biolgicos de IL-13 com IL-4. O receptor expressado por uma grande variedade de clulas, incluindo clulas B, clulas dendrticas, eosinfilos, basfilos, fibroblastos, etc, mas as clulas T no expressam este receptor. A sinalizao de IL-13R semelhante de IL-4R. A IL-13, ao contrrio da IL-4, no est envolvida na diferenciao da linhagem TH2. A interleucina-13 apresenta: Aces em comum com a IL-4 Induzir activao de macrfagos pela via alternativa (que contribui para fibrose e para reparao de tecidos); estimular clulas B a alterarem para o istipo IgE e alguns IgG; recrutar leuccitos; estimular os movimentos peristlticos do tracto gastrointestinal.

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Aces exclusivas Induzir a produo de muco nas clulas epiteliais das vias areas.

Interleucina-5 (IL-5) uma citocina activadora de eosinfilos, e serve como elo de ligao principal entre activao de clulas T e a inflamao rica neste tipo de leuccitos. produzida por clulas TH2 e mastcitos, e a principal via de sinalizao induzida por IL-5 envolve JAK2 e STAT3. As aces de IL-5 so: Estimular o crescimento e diferenciao de eosinfilos, e activlos Os eosinfilos expressam receptores Fc especficos para IgE e alguns IgG e por isso so capazes de se ligar a microrganismos, como os parasitas, que so opsonizados por estes anticorpos, e elimin-los. Estimular a produo de anticorpos IgA

PAPIS DESEMPENHADOS PELAS CLULAS TH2 NA DEFESA DO HOSPEDEIRO Esta linhagem desempenha a sua funo atravs de vrios mecanismos: Reaces mediadas por IgE e eosinfilos A IL-4 estimula a produo de anticorpos IgE especficos para parasitas, que os opsonizam e promovem a ligao dos eosinfilos. A IL-5 activa os eosinfilos e estas clulas libertam os seus contedos granulares, que so capazes de destruir at os tegumentos mais resistentes dos parasitas. Activao de mastcitos Estes podem ser activados por parasitas opsonizados por IgE e outros antignios que se ligam a IgE, resultando na sua digesto pelo contedo granular dos mastcitos. Estes leuccitos produzem TNF, quimiocinas e mediadores lipdicos que induzem inflamao local e que ajudam a destruir parasitas. Imunidade de barreira As citocinas produzidas pelas clulas TH2 esto envolvidas no bloqueio da entrada e tambm na promoo da expulso de microrganismos nas mucosas, por isso desempenham um papel importante na defesa do hospedeiro, intitulado de imunidade de barreira (barrier immunity), por ser evidente nas barreiras com o ambiente externo. Activao alternativa de macrfagos - A resposta dos macrfagos s citocinas
Ilustrao 24 Activao clssica e alternativa de macrfagos

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produzidas por clulas TH2 tem sido chamada de via alternativa de activao de macrfagos, distinguindo-se da activao induzida por IFN-. Os macrfagos activados por citocinas TH2 induzem a formao de tecido fibroso atravs da secreo de factores de crescimento que estimulam a proliferao de fibroblastos, sntese de colagnio, e formao de novos vasos sanguneos (ou angiognese), contribuindo para a renovao dos tecidos e para a fibrose em cenrios de infeces parasitrias crnicas e doenas alrgicas. Estes macrfagos iniciam a reparao dos tecidos depois de diversos tipos de danos que podem no envolver agentes infecciosos ou respostas imunes; Nestas situaes, as citocinas activadoras como a IL-4, podem ser produzidas por eosinfilos e outros tipos celulares nos tecidos. IL-4 e IL-13 suprimem a activao clssica de macrfagos, e interferem com as respostas imunes mediadas por TH1 contra microrganismos intracelulares, em parte porque IL-4 estimula a produo de citocinas como a IL-10 e TGF-, que inibem o desenvolvimento e a funo das clulas TH1.

FUNES DAS CLULAS T H 17

As clulas TH17 produzem citocinas que recrutam principalmente neutrfilos, para locais de infeco. Pelo facto dos neutrfilos serem um mecanismo de defesa principal contra bactrias e fungos extracelulares, as clulas TH17 desempenham um papel importante na defesa contra estes microrganismos. CITOCINAS PRODUZIDAS POR CLULAS TH17 As clulas TH17 produzem vrias citocinas, sendo a principal a IL-17, mediadora da maioria das aces inflamatrias destas clulas. Interleucina-17 (IL-17) A IL-17 uma citocina fora do vulgar porque nem ela nem o seu receptor so homlogos a nenhum outro par citocina-receptor conhecido. A famlia IL-17 inclui seis outras protenas estruturalmente relacionadas, das quais IL-17A e IL-17F so as mais semelhantes e principalmente produzidas por clulas TH17, enquanto que outros membros da famlia so produzidos por diversas linhagens celulares. As actividades imunolgicas parecem ser mediadas primariamente pela IL-17A. A IL-17 um elo importante entre a imunidade celular e o sistema imune inato, especialmente a sua componente inflamatria. As principais funes da IL-17 so: Induzir respostas inflamatrias ricas em neutrfilos IL-17 estimula a produo de quimiocinas e outras citocinas (como TNF) que recrutam neutrfilos e, a uma menor escala, moncitos para o local de activao de clulas T. Esta interleucina tambm melhora a gerao de neutrfilos aumentando a produo de G-CSF e a expresso dos seus receptores.

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Estimular a produo de substncias antimicrobianas Como por exemplo defensinas, em diversos tipos celulares.

Interleucina-22 (IL-22) Pertence famlia de citocinas IL-10 e produzida por clulas T activadas (particularmente clulas TH17), e clulas NK. As aces desta interleucina parecem contraditrias: alguns estudos indicam que contribui para a inflamao e para as leses dos tecidos, mas a maioria dos dados sugere que produzida em tecidos epiteliais, especialmente na pele e no TGI, e tem como funo manter a integridade epitelial, promovendo a funo de barreira do epitlio e estimulando as aces reparadoras. Interleucina-22 (IL-21) - produzida por clulas T CD4+ activadas, e apresenta vrios efeitos em clulas B, T e NK. O receptor de IL-21 activa a via de sinalizao JAK-STAT, onde STAT3 tem um papel importante. Esta interleucina promove a proliferao e funo efectora de clulas T CD8+ e de clulas NK, e tambm a diferenciao de clulas TH17, providenciando uma via autcrina para amplificar as respostas por esta linhagem. PAPIS DESEMPENHADOS PELAS CLULAS TH17 NA DEFESA DO HOSPEDEIRO A principal funo efectora destas clulas induzir a inflamao com neutrfilos, que serve para destruir bactrias e fungos extracelulares. Apesar de estas clulas intervirem na patognese de muitas doenas inflamatrias como a psorase, a artrite reumatide e a esclerose mltipla, as suas aces so teis na manuteno da funo dos epitlios, principalmente devido s aces da IL-22.

FUNES DAS CLULAS T H 9

Este tipo de clulas efectoras ainda muito pouco conhecido. Combate parasitas helmintas (de grandes dimenses), atravs da secreo de IL-9 e da activao de mastcitos.

FUNES EFECTORAS CITOTXICOS CD8+

DE

LINFCITOS

O desenvolvimento das respostas por CTL CD8+ a uma infeco processa-se por passos semelhantes aos descritos para as respostas por clulas T CD4+, incluindo a estimulao mediada por antignios de clulas T CD8+ nave nos orgos linfides, a expanso clonal, a diferenciao e a migrao de CTLs diferenciadas para os tecidos. Os linfcitos T citotxicos CD8+ eliminam microrganismos intracelulares principalmente matando clulas infectadas, e produzem IFN- contribuindo para activao de macrfagos e para reaces de hipersensibilidade.
Ilustrao 25 Passos da lise de uma clula-alvo mediada por CTLs

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MECANISMOS DA CITOTOXICIDADE MEDIADA POR CTL

As CTLs eliminam alvos que expressam o mesmo antignio que desencadeou a proliferao e diferenciao de clulas T CD8+ nave das quais derivaram, e no matam clulas adjacentes no infectadas que no expressam o antignio. Esta especificidade funcional das CTL efectoras deve-se criao de uma sinapse imunolgica que formada no local de contacto entre a CTL e a clula-alvo que expressa o antignio, sendo que as molculas envolvidas na eliminao do alvo so libertadas nessa sinapse e no podem difundir-se para clulas vizinhas. Este processo consiste em trs passos: reconhecimento de antignio, administrao do golpe letal nas clulas-alvo, e libertao das CTLs, e cada um destes passos controlado por interaces moleculares especficas. RECONHECIMENTO DE ANTIGNIOS E ACTIVAO DE CTLS Para serem convenientemente reconhecidas pelas CTLs, as clulas-alvo tm de expressar molculas MHC classe I ligadas por um complexo a um pptido (servindo esse complexo como ligando para o receptor das clulas T e para o coreceptor CD8) e molcula de adeso intercelular 1 (ICAM-1). As CTLs e os seus alvos formam conjugados intimamente relacionados, onde se d uma sinapse imunolgica caracterizada por um anel de aposio entre as duas membranas celulares, e um espao fechado dentro desse anel. Esta interaco resulta no incio de sinais bioqumicos que activam a CTL, e que so basicamente os mesmos envolvidos na activao de clulas T helper. As citocinas e os co-estimuladores providenciados por clulas dendrticas, necessrios para a diferenciao de clulas T CD8+ nave em CTLs, no so necessrios para desencadear a funo efectora das CTLs. Por isso, logo que as clulas T CD8+ especficas para um antignio se tenham diferenciado em CTLs completamente funcionais, estas podem matar qualquer clula nucleada que apresente esse mesmo antignio. Para alm do receptor de clulas T, as CTLs CD8+ expressam receptores que so tambm expressados por clulas NK, e que contribuem tanto para a regulao como para a activao das CTLs. Alguns destes receptores pertencem famlia dos KIR (killer immunoglobulin receptor) e reconhecem molculas MHC classe I em clulasalvo, mas no so especficos para nenhum pptido do complexo MHC especfico. Estes KIRs fazem a transduo de sinais inibitrios que podem ter como funo impedir as CTLs de matarem clulas normais. As CTLs tambm exprimem o receptor NKG2D, que reconhece as molculas MIC-A, MIC-B e ULBP, semelhantes s MHC classe I. Este receptor pode ter como funo entregar sinais que actuam em conjunto com o reconhecimento TCR (receptor de clulas T) de antignio, para melhorar a induo de morte celular em clulas-alvo. MORTE DE CLULAS-ALVO POR ACO DE CTLs Alguns minutos aps o reconhecimento de antignio pelo receptor de uma CTL numa clula-alvo, esta sofre mudanas que induzem a sua morte por apoptose. A morte da clulas-alvo ocorre dentro de 2 a 6 horas e procede mesmo que a CTL se separe desta. O principal mecanismo utilizado para a eliminao destas clulas a libertao

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de protenas citotxicas, armazenadas em grnulos citoplasmticos (lisossomas secretrios) dentro das CTLs. A activao de uma CTL leva a uma reorganizao do seu citoesqueleto, nomeadamente dos centros de organizao dos microtbulos que se dirigem para a rea do citoplasma perto do contacto com a clula-alvo. Os grnulos citoplasmticos das CTLs so transportados atravs de microtbulos e concentram-se na regio da sinapse, onde se d a fuso entre a membrana dos grnulos e a membrana plasmtica da CTL no domnio secretrio. Disto resulta a exocitose dos contedos granulares da CTL para o anel sinptico, entre as membranas plasmticas desta clula e da clula-alvo. Os grnulos das CTLs (e tambm das clulas NK) contm protenas citotxicas, incluindo granzimas (A, B e C) e perforina, e tambm serglicina que estabelece um complexo contendo os outros dois tipos de protenas. A perforina uma molcula alteradora de membrana plasmtica que pensa-se facilitar a entrada das granzimas no citosol da clula-alvo, e uma vez no citosol, as granzimas clivam vrios substratos (por exemplo caspases) e iniciam a morte por apoptose da clula-alvo. Os grnulos das CTLs (e das clulas NK) tambm podem conter uma protena chamada granulisina, que altera a permeabilidade das membranas de clulas-alvo e de microrganismos, e cuja importncia para a morte celular induzida por CTLs ainda no foi estabelecida. As CTLs tambm apresentam um mecanismo independente de grnulos, que mediado por interaces entre molculas membranares das CTLs e das clulas-alvo. Durante a activao das CTLs estas expressam ligando Fas (FasL), protena membranar que se liga ao death receptor Fas presente em muitos tipos celulares, e que, semelhana da reaco aos grnulos, resulta na activao de caspases e na apoptose das clulas-alvo. Algumas clulas T CD4+ tambm so capazes de matar clulas infectadas, mas sendo que estas clulas T apresentam pouca concentrao de perforina e de granzimas, pensa-se que o FasL seja mais importante nesta actividade. Aps o golpe letal administrado pela CTL, esta liberta-se da clula-alvo, normalmente antes da morte celular. As prprias CTLs no so danificadas durante o processo, talvez porque a exocitose direccionada dos grnulos leva a que estes actuem preferencialmente nas clulas-alvo, longe das CTLs. Para alm disso os grnulos das CTLs contm uma enzima proteoltica chamada catepsina B, que administrada superfcie da CTL onde degrada molculas errantes de perforina que podem atacar a membrana da prpria.

PAPIS DESEMPENHADOS PELAS CTLs NA DEFESA DO HOSPEDEIRO

Situaes nas quais as clulas no conseguem destruir os microrganismos que as infectam: em infeces por vrus que sobrevivem e se replicam em clulas que so incapazes de destruir microrganismos (exemplo do vrus da hepatite em clulas hepticas); ou no caso de os microrganismos escaparem das vesculas fagocticas e sobreviverem no citoplasma da clula infectada (este caso vlido at em fagcitos, pois a sua aco microbicida limitada s vesculas fagocticas para no danificar a prpria clula). Estas infeces apenas podem ser eliminadas pela destruio das clulas, e por isso a activao de caspases pelas granzimas e pelo

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FasL, importante, apesar de no distinguir entre substrato microbiano ou do hospedeiro. A expanso massiva de clulas T CD8+ que se segue a uma infeco faculta uma grande quantidade de CTLs para combater estas infeces. Defeitos no desenvolvimento e actividade de CTLs resultam numa susceptibilidade aumentada a infeces virais e algumas infeces bacterianas, e tambm reactivao de infeces virais latentes (por exemplo o vrus Epstein-Barr) que so mantidas normalmente controladas por CTLs especficas para o vrus. A destruio por CTLs de clulas infectadas uma das causas de danos em tecidos nalgumas doenas, por exemplo: durante infeces por vrus da hepatite B e C, as clulas hepticas infectadas so destrudas por CTLs do hospedeiro (e tambm por clulas NK), e no pelos vrus.

FUNES DE OUTRAS CATEGORIAS DE CLULAS T

A maioria das clulas T no organismo so clulas helper CD4+ e CTLs CD8+, mas, para alm destas, existem populaes mais pequenas de clulas T que apresentam propriedades distintas e, provavelmente, desempenham funes especializadas na defesa do hospedeiro. As populaes mais bem estudadas so as de clulas T e T NK, e estas apresentam caractersticas em comum que as distinguem das clulas CD4+ e CD8+: Reconhecem uma vasta variedade de antignios, muitos dos quais no so pptidos, e no so dispostos por molculas MHC classe I e classe II em APCs; Muitos dos seus receptores de antignios tm diversidade limitada, sugerindo que ambos os tipos celulares evoluram para reconhecer um grupo restrito de microrganismos (e devido a esta propriedade diz-se que estas clulas T encontram-se no limite entre a imunidade inata e adaptativa); Ambos os tipos celulares so abundantes em tecidos epiteliais, como por exemplo no TGI.

CLULAS T ( T CELLS)
Estas clulas apresentam como receptores de antignio de clulas T (TCR) heterodmeros, formados pelas cadeias e , homlogas s cadeias e dos TCR presentes nas clulas CD8+ e CD4+. Estes TCRs especficos so o que distingue esta linhagem celular. O heterodmero associa-se s protenas CD3 e da mesma forma que o heterodmero , e a sinalizao induzida pelo TCR a semelhante induzida por TCR . Diferentes populaes de clulas T podem desenvolver-se em alturas distintas da ontogenia, contento diferentes regies variveis (V) e residindo em diferentes tecidos. As clulas T encontradas em orgos linfides expressam TCRs mais diversificados do que as clulas T epiteliais, e apesar do potencial de diversidade terico dos TCR ser ainda maior que a diversidade dos TCR , observa-se a expresso de um nmero restrito de regies V e , e existe pouca ou nenhuma diversidade juncional. 110

A variedade limitada de TCRs em muitos tecidos sugere que os ligandos para estes receptores podem ser invariveis e conservados. As clulas T no reconhecem antignios peptdicos associados ao MHC e no so restritas ao reconhecimento por esse complexo. Algumas linhagens clonais de clulas T reconhecem pequenas molculas fosforiladas, e at lpidos que so encontrados frequentemente em micobactrias e outros microrganismos, e que podem ser apresentados de forma no clssica por molculas semelhantes s MHC classe I. Outras clulas T reconhecem antignios protecos ou no-protecos que no necessitam processamento por nenhum tipo de APC para a sua apresentao, e muitas reaces por clulas T so desencadeadas por protenas de choque trmico (heat-shock proteins) microbianas. Uma das possveis justificaes para a especificidade das clulas T , que talvez a sua funo no organismo seja reconhecer antignios frequentemente encontrados nas fronteiras epiteliais entre o hospedeiro e o ambiente externo. Um grande nmero de actividades biolgicas foi atribudo s clulas T , incluindo a secreo de citocinas e a morte de clulas infectadas, mas a funo destas clulas permanece incompreendida.

CLULAS T NATURAL KI LLERS (NKT CELLS)

Uma pequena populao de clulas T expressa marcadores que so encontrados em clulas NK, como CD56, e por isso estas clulas so chamadas NKT. As cadeias do TCR expressadas pelas clulas NKT tm uma diversidade limitada, e estas clulas so caracterizadas por uma regio V codificada por um segmento de gene V24-J18 rearranjado, com pouca ou nenhuma diversidade juncional. Devido a esta diversidade limitada, estas clulas so tambm chamadas de clulas NKT invariveis (iNKT). Todos os TCRs de clulas NKT reconhecem lpidos ligados a molculas semelhantes s MHC classe I, chamadas CD1. As clulas NKT e outras clulas T especficas para antignios lipdicos so capazes de produzir rapidamente citocinas como IL-4 e IFN- aps activao, e podem ajudar as clulas B da zona marginal a produzir anticorpos contra estes antignios. As clulas NKT podem mediar respostas imunes inatas contra alguns patognios (como micobactrias), e as clulas iNKT podem at regular primariamente as respostas imunes adaptativas atravs da secreo de citocinas. No entanto, o papel desempenhado por estas clulas no sistema imunitrio e na patgenese de certas doenas ainda permanece pouco claro.

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T8: Apresentao de Antignios pelo MHC

Data terica de 17 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 6 Slides aulas: sim Elaborado por: Marta Bento

MHC E APRESENTAO DE ANTIGNIOS AOS LINFCITOS T

Linfcito T

Funo: erradicar infeces de micrbios intracelulares e activao de outras clulas imunitrias.

FUNES E INTERACES COM O SISTEMA IMUNITRIO:

Indentificao especfica de um antignio. Facilitado pelas APC (Clulas Apresentadoras de Antignio), nomeadamente as clulas dendrticas que migram para os rgos linfides secundrios onde esto alojados os linfcitos T imaturos. Interaco com clulas do prprio infectadas (CD8+) ou com outras clulas do sistema imunitrio (CD4+) por intermdio de molculas do Complexo Major de Histocompatibilidade expressas na superfcie das clulas. As clulas T CD4+ participam na formao de anticorpos efectivos. As clulas T CD8+ eliminam clulas infectadas. A segregao de antignios para ser apresentados a populaes de clulas T diferentes efectuada pelas molculas MHC.

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PROPRIEDADES LINFCITOS T

DOS

ANTIGNIOS

RECONHECIDOS

PELOS

Propriedades dos antignios reconhecidos pelos linfcitos T

Pptidos de sequncia curta. Razo: s os pptidos se ligam ao MHC

Antignios de sequncia linear Razo: perde-se a conformao na gerao de MHC antignio

Antignios associados ao MHC

CD4+ liga-se a antignio-MHC classe II. Origem extracelular. CD8+ liga-se a antignio-MHC classe I. Origem citoslica.

CAPTURA DE ANTIGNIOS E FUNES DAS CLULAS APRESENTADORAS DE ANTIGNIO

A apresentao de antignios aos linfcitos T CD4+ por outras clulas (APCs) um passo crtico na induo de resposta

PROPRIEDADES DAS APC

Tipos de APCs : Clulas Dendrticas ( activam clulas T imaturas); Macrfagos e Linfcitos B (APCs principalmente nas T CD4+ previamente activadas). Expressam MHC de classe II e co-estimuladores (segundos sinais). Libertam citocinas. Os macrfagos e clulas dendrticas expressam receptores Toll-like aumentando a expresso de MHC II, co-estimuladores, citocinas e quimioreceptores (para migrao) na presena de micrbios. As APCs tambm recebem sinais dos linfcitos Tque melhoram a sua funo. Ex: CD40 e IFN- expressos por LynT.

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PAPEL DAS CLULAS DENDRTICAS NA CAPTURA E APRESENTAO DE ANTIGNIOS

Porta de Entrada

Transporte por vasos linfticos na forma livre e associada s clulas dendrticas ou transporte nos vasos sanguneos na forma livre. Acumulao de antignios nos gnglios linfticos e no bao onde so apresentados ou capturados para apresentao.

MORFOLOGIA E POPULAES DE CLULAS DENDRTICAS

Identificadas pelas suas projeces

membranares. Diferenciam-se a partir de precursores da linhagem fagoctica mononuc lear

Duas populaes predominantes: Clulas Dendrticas Convencionais Clulas Dendrticas Plasmocitides

Tambm chamadas de clulas dendrticas mielides Mais numerosas Activao Clssica Uma das suas populao corresponde clulas de Langerhans (epiteliais)

Morfologicamente semelhantes aos plasmcitos Adquirem a forma e funo das DC quando activadas Encontram-se no sangue e orgos linfides So apresentadoras e segregam interferes do tipo I em infeco viral

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Acredita-se que as clulas dendrticas imaturas possam estar a apresentar antignios do self s clulas T reactivas ao self de forma a estimular a sua inactivao ou morte.

CAPTURA E TRANSPORTE DE ABTIGNIOS PELAS CLULAS DENDRTICAS

DC imaturas expressam lectinas do tipo C que se ligam aos microrganismos; os receptores Toll-like activam as DC. Ingesto dos microrganismos por endocitose mediada por receptores, micro e macropinocitose. As DC expressam quimioreceptor CCR7 que se liga a CCL19 e CCL21 dos gnglios linfticos migrao.

No entanto, alguns dos antignios alcanam os gnglios e o bao na sua forma livre sendo a capturados pelas clulas dendrticas residentes ou linfcitos B.

APRESENTAO DE ANTIGNIOS PELAS CLULAS DENDRTICAS

As APCs so capazes, como todas as clulas nucleadas, de induzir activao dos linfcitos T CD8+. So, no entanto, mais eficientes que as restantes. E como j sabemos, so igualmente apresentadoras das clulas CD4+.

FUNES DE OUTRAS CLULAS APRESENTADORAS DE ANTIGNIOS

Macrfagos: os moncitos tm a capacidade de migrar para qualquer local e diferenciar-se em macrfagos, apresentar aos linfcitos T CD4+ , que por sua vez activam os macrfagos para actividade microbicida. Linfcitos B: apresentam s T CD4+, que por sua vez estimulam a produo de anticorpos pelas clulas B. Todas as clulas nucleadas: apresentam a T CD8+ CTLs (populao de linfcitos T). 115

Clulas do endotlio vascular: expressam MHC II, muitas vezes em resposta a INF- , mas com pouca eficincia.

NOTA: Sabe-se que as clulas T activadas expressam tambm MHC II, no entanto, no se conhece a sua funo.

COMPLEXO MAJOR DE HISTOCOMPATIBILIDADE (MHC)

DESCOBERTA DO MHC Enxertos em animais no-idnticos Rejeio Enxertos em animais idnticos Aceitao Causa Gentica

Criaram ratinhos geneticamente idnticos excepto na sua capacidade de rejeio de enxertos. Resultado: mostraram que uma nica regio gentica responsvel por esta rejeio locus major de histocompatibilidade.

No entanto, este locus no continha um nico gene passando a denominarse Complexo Major de Histocompatibilidade. Nos ratinhos referido como H-2.

O MHC HUMANO (HLA)

denominado HLA porque cientistas descobriram que pacientes transplantados contm anticorpos contra protenas dos dadores as Human Leukocyte Antigens (HLA). Hoje sabe-se que todos os mamferos partilham estruturas homlogas aos HLA.

GENES RESPONSVEIS PELA RESPOSTA IMUNITRIA

No entanto, no fazia sentido conservar evolutivamente genes que tinham como nica funo rejeitar tecidos. Descobriram ento que eles eram tambm responsveis pela resposta imunitria (Ir) e, assim, j fazia sentido conserv-los.

GENES MHC O locus MHC contm genes polimorficos MHC classe I e II e outros no polimorficos.
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 Estes genes so expressos em co-dominncia. So os genes mais polimrficos do genoma humano. Determinam a especificidade na ligao do pptido, ou seja, numa populao h sempre indivduos que conseguem resistir a uma determinada infeco impossibilitando a aniquilao de uma espcie inteira.

LOCI DO MHC NOS HUMANOS [E RATINHOS]

Localiza-se no cromossoma 6. CLASSES DE HLA:

HLA classe I HLA classe II

Genes HLA-A, HLA-B e HLA-C Genes HLA-DP, HLA-DQ e HLA-DR

Nos HLA de classe II cada molcula de MHC composta por um polipptido e um . Cada loci de HLA-DP, HLA-DQ e HLA-DR tem genes A e B que codificam as cadeias e . Nomenclatura leva em considerao os polimorfismos. Ex: HLA-A*0201 do Serogrupo 01 do subtipo HLA-A2.

RATINHOS

MHC classe I MHC classe II

H-2K, H-2D e H-2L

I-A, I-E

Cada alelo chamado de haplotipo (ex: HLA-A2). Indivduos heterozigticos tm dois haplotipos.

EXPRESSO DE MOLCULAS DE MHC

Padro de restrio das MHC. MHC I CD8+; MHC II CD4+ Aumenta a expresso de MHC na presena de citocinas: MHC I

+ +

INF-, INF- e INF- ( resposta do S. I. Inato a infeco vrica) INF- ( produzido por NK na resposta do S. I. Inato ) 117

MHC II

A expresso de MHC aumenta devido ao aumento da taxa de transcrio provocado pelas citocinas ligao de factores de transcrio activados pelas citocinas. Ex: INF- estimula a sntese da protena CIITA que activa o complexo de transcrio para MHC II

MOLCULAS DE MHC PROPRIEDADES GERAIS:

As molculas de MHC consistem numa fenda ou sulco que aloja o pptido, domnios Ig-like transmembranares e cistoplasmticos As MHC tm resduos polimrficos (regies variveis) que se localizam no sulco que aloja o pptido. Resulta numa ligao preferencial a antignios com maior afinidade.

MOLCULAS MHC CLASSE I

Os domnios Ig-like tm locais de ligao para CD4 e CD8.

Consiste em duas cadeias ligadas no-covalentemente: uma cadeia e uma subunidade 2-microglobulina. A cadeia constituda por trs segmentos, os domnios 1, 2 e 3 Os segmentos 1 e 2 so polimrficose formam o sulco esto prximos e por isso s conseguem acomodar pequenos pptidos O segmento 3 o local de ligao de CD8 A estabilidade estrutural entre a cadeia e a 2-microglobulina mantida pela presena do pptido e vice-versa.

118

 Indivduos heterozigticos expressam 6 tipos de MHC I em cada clula ( todos temos genes HLA-A, B e C, logo ser heterozigtico para todos estes genes implica a expresso de duas cadeias por cada gene 6)

MOLCULAS MHC CLASSE II

Consiste em duas cadeias ligadas no-covalentemente: uma cadeia e uma cadeia .

Os segmentos 1 e 1 so polimrficos e formam o sulco que aloja o pptido. Os segmentos 2 e 2 so no-polimrficos. 2 o local de ligao para CD4 Para as molculas de MHC II tambm necessria a presena do pptido para a estrutura ser estvel. Cada indivduo herda genes HLA-DPA1, HLA-DPB1, HLA-DRA1, HLADRB1, HLA-DQA1, HLA-DQB2 de cada progenitor e podem ainda ter duplicados de HLA-DR3, 4 ou 5. Ou seja, herda-se de 6 a 8 genes de MHC II.

LIGAO DE PPTIDOS S MOLCULAS DE MHC

CARACTERSTICAS DA INTERACO PPTIDO-MHC Os MHC tm uma fraca especificidade para os pptidos comparando com os receptores dos linfcitos, ou seja, podem ligar-se a um largo espectro de pptidos. Cada molcula de MHC liga-se a um pptido de cada vez. Pptidos de cadeia curta favorecem esta interaco (permite acomodarem-se no sulco). 119

As molculas de MHC adquirem o pptido durante a sua biossntese. As molculas de MHC I adquirem os pptidos a partir de protenas citoslicas e as MHC II a partir de protenas em vesculas intracelulares. A taxa de dissociao do pptido ao MHC muito baixa maximizando a hiptese de ligao a um receptor de linfcitos T. A taxa de dissociao do pptido ao MHC muito baixa maximizando a hiptese de ligao a um receptor de linfcitos T. Os MHC no discriminam entre protenas do self e antignios. As clulas T tm essa capacidade.

BASE ESTRUTURAL DA LIGAO PPTIDO-MHC

A ligao nocovalente. No MHC I a associao do pptido implica a presena de um N-terminal positivo e um C-terminal negativo.

Os sulcos muitas vezes apresentam pockets que se ligam preferencialmente a determinados aminocidos, os resduos ncora.

A clulas T tambm reconhecem e interagem com os resduos polimrficos do MHC.

PROCESSAMENTO DE PROTENAS ANTIGNICAS

VIA DO MHC I PARA PROCESSAMENTO E APRESENTAO DE PROTENAS CITOSLICAS

1. As protenas apresentadas pelo MHC I so sintetizadas no interior da clula (podem ter origem em vrus e microrganismos intracelulares). Tambm pode ocorrer ruptura dos fagossomas e essas protenas podem ser apresentadas pelo MHC I. 2. O maior mecanismo de gerao de pptidos a protelise executada pelo proteassoma. Em clulas expostas a INF- so produzidas subunidades do

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proteassoma que favorecem a apresentao dos pptidos. Algumas protenas no requerem esta protelise, so degradadas por protenas citoslicas. 3. As protenas geradas no citosol so translocadas pela TAP (transportador associado ao processamento de antignios) para o RE e as sintetizadas esto disponveis no retculo endoplasmtico para ligao ao MHC I. As TAP localizam-se na membrana do RE e esto associadas a protenas tapasina que preparam o MHC I para receber o pptido. 4. Construo dos complexos MHC I-pptido no RE. A sntese do MHC I depende de chaperones calnexina e calreticulina. Estas protenas juntamente com a TAP, tapasina, oxireductase ERP57 e MHC I formam um complexo que recebe o pptido. 5. Os complexos estabilizados passam pelo complexo de Golgi e so transportados por vesculas para a superfcie celular e apresentados s T CD8+.

VIA DO MHC II PARA PROTENAS VESICULARES

PROCESSAMENTO

APRESENTAO

DE

1. A maior parte destas protenas tem uma origem extracelular e so internalizadas em endossomas nos APCs. As clulas dendrticas e macrfagos expressam receptores que reconhecem estruturas comuns a muitos microrganismos. Os macrfagos expressam receptores Fc que ligam pores Fc dos anticorpos e receptores para a protena C3b do complemento. Os receptores de linfcitos B reconhecem com grande especificidade e internalizam antignios. 2. Os endossomas fundem-se com lisossomas. Alguns destes lisossomas contm produtos j da prpria clula (ou de virus que a infectam) que sero mais tarde apresentados pelos MHC II, este mecanismo permite a activao de TCD4+ em infeces virais. 121

3. Existe digesto proteoltica nas vesculas para formar os pptidos. 4. Os pptidos formados ligam-se aos MHC II que se encontram nos endossomas tardios (tambm chamados de MIIC nos linfcitos B e macrfagos) 5. Biossntese e transporte dos MHC II para os endossomas. So sintetizadas no RE e transportadas pela protena Ii que ocupa o sulco da MHC II. A sua sntese est dependente de chaperones como a calnexina e estabilizado pela Ii. Os MHC II so transportados em vesculas at aos endossomas. 6. Nos endossomas as MHC II dissociam-se de Ii por aco da enzimas; permanece uma protena CLIP no sulco que removida pela molcula HLA-DM. Os pptidos ligam-se ento ao MHC II. 7. Os complexos estabilizados so apresentados na superfcie da clula aos T CD4+.

Apresentao Cruzada Extracelulares CD8+

Clulas Dendrticas que capturam clulas tumorais ou infectadas com vrus que so apresentadas a T CD8+. Envolve a fuso do fagossoma com o RE.

SIGNIFICADO FISIOLGICO DA APRESENTAO ASSOCIADA A MHC

NATUREZA DA RESPOSTA CELULAR DAS CLULA T

MHC I CD8+.

MHC II( macrfago) CD4+.

MHC II (linfcito B) CD4+.

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Antignios Imunodominantes

Antignios que produzem respostas dos linfcitos T mais eficientes so aqueles cujos eptopos possuem grande afinidade para o MHC e para os quais o indivduo j est imunizado (clulas T especficas).

APRESENTAO DE ANTIGNIOS NO-PROTEICOS A POPULAES DE CLULAS T

NKT Reconhecem lpidos e glicolpidos em receptores CD1 (do tipo MHC I).

Reconhecem lpidos, protenas, molculas fosforiladas e aminas alquil. No se sabe se existe um sistema de apresentao associado a estas clulas.

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T9: Imunodeficincias Primrias

Data terica de 21 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 20 Slides aulas: sim Elaborado por: Tatiana Oksentyuk

A integridade do sistema imunolgico essencial no mecanismo de defesa do organismo contra agente infeccioso e seus produtos txicos. Deficincia num ou mais que um componente do sistema imunolgico pode induzir doenas graves, que podem ser fatais as imunodeficincias, e que podem ser classificadas em dois grandes tipos: Doenas primrias ou congnitas, que so causadas pelos defeitos genticos, que resultam em aumento de susceptibilidade infeco. Manifestam-se frequentemente na infncia e/ou adolescncia, embora possam ser detectadas clinicamente mais tarde, j na idade adulta. Doenas adquiridas ou secundrias no so herdadas, so consequncia de desnutrio, cancro, tratamento imunossupressor ou infeco das clulas do sistema imunolgico, principalmente com o vrus da imunodeficincia humana (HIV), o agente etiolgico da sndrome da imunodeficincia adquirida (SIDA). Este captulo descreve os principais tipos de imunodeficincias congnitas e adquiridas, com nfase na sua patogenia e nos componentes do sistema imunolgico que esto envolvidas nestes processos. O HIV/SIDA abordado noutro captulo.

CARACTERSTICAS GERAIS DA IMUNODEFICINCIA

1- A principal consequncia da imunodeficincia um aumento da susceptibilidade infeco. A natureza da infeco num paciente em particular depende em grande parte de componente do sistema imunolgico que est com defeito (Tabela 1). Imunidade humoral deficiente normalmente resulta em aumento da susceptibilidade infeco por bactrias encapsuladas e purulentas e alguns vrus, enquanto os defeitos na imunidade mediada por clulas levam infeco por vrus e outros micrbios intracelulares. As deficincias combinadas (humoral + mediada por clulas) tornam os pacientes susceptveis infeco por todas as classes de microrganismos (maioritariamente oportunistas).

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2- Pacientes com imunodeficincias tambm so susceptveis a certos tipos de cancro. Muitas destas patologias parecem ser causadas por vrus oncolgicos, como vrus Epstein-Barr. O aumento da incidncia de cancro mais frequentemente visto em imunodeficincias de clulas T, porque as clulas T desempenham um papel importante na vigilncia contra vrus oncolgicos e os tumores que causam. 3- Paradoxalmente, certas imunodeficincias esto associadas com um aumento da incidncia de auto-imunidade. O mecanismo subjacente a esta associao no conhecido.

4- Imunodeficincia pode resultar de defeitos nos linfcitos em desenvolvimento/activao ou de defeitos nos mecanismos efectores da imunidade inata e adaptativa. Imunodeficincias so clinicamente e patologicamente heterogneas, em parte porque diferentes doenas envolvem diferentes componentes do sistema imunolgico do sistema.

5- As imunodeficincias congnitas podem englobar ainda defeitos nos componentes do sistema imunolgico inato.

IMUNODEFICINCIAS CONGNITAS (PRIMRIAS)

Em diferentes imunodeficincias congnitas, o causador da anormalidade pode estar em componentes do sistema inato, em diferentes estgios de desenvolvimento de linfcitos ou nas respostas de linfcitos maduros para estimulao AG. Anormalidades hereditrias relacionadas com imunidade inata (mais comuns) afectam o complemento ou fagcitos. Anormalidade no desenvolvimento linfocitrio pode ser causada por mutaes em genes que codificam uma variedade de molculas, incluindo enzimas, protenas de transporte, e factores de transcrio.

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Anormalidades no desenvolvimento de linfcitos B e na produo de anticorpos deficientes so diagnosticados por nveis reduzidos de imunoglobulinas sricas (Ig) e de clulas B na circulao ou tecidos linfides, clulas plasmticas ausentes nos tecidos, anticorpos defeituosos, respostas vacinao. Anormalidades na maturao dos linfcitos T e funcionamento da imunidade mediada por clulas deficientes tambm pode resultar na produo de anticorpos reduzida. Imunodeficincias primrias de clulas T so diagnosticadas por: reduo do nmero de clulas T no sangue perifrico, resposta fraca de proliferao de linfcitos T de sangue perante activadores policlonais tais como fitohemaglutinina, de hipersensibilidade cutnea tardia (DTH) perante reaces aos AG microbianos, como Candida. As Imunodeficincias primrias so ento causadas por mutaes hereditrias nos genes de codificao de componentes do sistema imune inato ou em genes necessrios para o desenvolvimento de linfcitos e activao.

DEFEITOS NA IMUNIDADE INATA

Imunidade inata constitui a primeira linha de defesa contra organismos infecciosos. Dois mediadores importantes da imunidade inata so fagcitos e complemento, ambos participantes nas fases efectoras de imunidade adaptativa. Portanto, distrbios congnitos de fagcitos e do sistema complemento resultam em infeces recorrentes. Deficincias foram descritas na cascata clssica e alternativa do sistema complemento, bem como em via da lectina. Eles geralmente apresentam-se com infeces bacterianas recorrentes, principalmente por bactrias encapsuladas e tambm espcies de Neisseria, e muitas vezes tambm contribuem para a susceptibilidade a doenas auto-imunes, particularmente sistmica lupus eritematoso. Exemplos de distrbios congnitos do fagcito (Tabela 20-2) e defeitos hereditrios nas vias Toll-like receptor (TLR) e IL-12/IFN-. Defeitos de fagcitos em geral resultam em infeces da pele, abcessos orais, estomatite e tracto respiratrio causadas pelas bactrias ou fungos (Aspergillus e Candida). Defeitos na sinalizao TLR e na sinalizao interfero tipo I pode contribuir para infeces recorrentes piognicas, bem como infeces virais graves. Defeitos de IL-12 e IFN- so ligados susceptibilidade aos patognicos intracelulares, em particular infeces por micobactrias.

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DEFEITO MICROBICIDA DA ACTIVIDADE FAGOCTICA: DOENA GRANULOMATOSA CRNICA

A Doena granulomatosa crnica (CGD) causada por mutaes em componentes da oxidase de fagcitos (phox) do complexo enzimtico. uma doena rara, estimada para afectar cerca de 1 em 1 milho de indivduos nos Estados Unidos. Cerca de dois teros dos casos mostram um padro recessivo ligado ao X, e o restante autossmico recessivo. Forma mais comum da doena ligada ao X causada por uma mutao no gene que codifica gene 91 kD subunidade , citocromo b558, uma protena de membrana integral tambm conhecida como phox-91. Mutaes noutros componentes do complexo phox contribuem para variante autossmica recessiva da CGD. Defeito na produo de oxignio reactivo resulta numa falha de destruio os micrbios fagocitados. A doena caracterizada por infeces recorrentes com bactrias e fungos catalase positivos, geralmente desde a infncia. Os casos mais problemticos de CGD so precisamente por infeces com organismos que produzem catalase, que destri perxido de hidrognio microbicida, proveniente por sua vez do superxido de oxignio residual reactivo das clulas hospedeiras. As infeces no so controladas por fagcitos, por isso elas estimulam respostas imunes mediadas por clulas - activao de macrfagos mediada por clulas T e formao de granulomas compostos por macrfagos activos. Estes tentam limitar ou eliminar os micrbios, apesar do defeito na produo de espcies reactivas de oxignio. Esta aparncia histolgica a base para o nome da doena, que frequentemente fatal, mesmo com antibioticoterapia agressiva. A citocina interferon- (IFN-) aumenta a transcrio do gene que codifica phox-91 e tambm estimula outros componentes do complexo da enzima oxidase de fagcitos. Portanto, IFN- estimula a produo de superxido por neutrfilos normais, 127

bem como por neutrfilos CGD, especialmente nos casos em que a codificao da parte do gene phox-91 est intacta, mas a sua transcrio reduzida. IFN- terapia muito utilizada para o tratamento de X-linked CGD.

DEFICINCIAS NA ADESO DE LEUCCITOS

As deficincias de adeso leucocitria so um grupo de hereditariedade autossmica recessiva, causadas por defeitos em leuccitos e molculas de adeso endotelial. Estas doenas so caracterizadas por uma falha de leuccitos, principalmente neutrfilos, recrutamento para locais de infeco, resultando em periodontite severa e outras infeces recorrentes que surgem desde incio da vida e da incapacidade para fazer pus. Diferentes tipos de deficincias de adeso de leuccitos so causados por mutaes em genes diferentes. Tipo 1 de deficincia de adeso dos leuccitos (LAD-1) uma desordem rara autossmica recessiva caracterizada por recorrentes infeces bacterianas e fngicas, que tambm prejudica cicatrizao de feridas. Nesses pacientes, a maioria das funes adesivas dos leuccitos so anormais. Estas funes incluem a adeso ao endotlio, agregao dos neutrfilos e quimiotaxia, fagocitose e citotoxicidade mediada por neutrfilos, natural killer (NK) e linfcitos T. Base molecular do defeito a expresso ausente ou deficiente das integrinas 2 (heterodmeros de CD18 e CD11, famlia de glicoprotenas), devido s vrias mutaes em gene CD18. A 2 integrinas incluem leuccitos, funcionalmente associados aos antignios 1 (LFA-1 ou CD11aCD18), Mac-1 (CD11bCD18), e p150, 95 (CD11cCD18). Estas protenas participam na adeso de leuccitos s outras clulas, nomeadamente s endoteliais, e na ligao de linfcitos T s clulas apresentadoras de antignios (APCs). Tipo 2 de deficincia de Aderncia Leucoctica (LAD-2) uma outra doena rara que clinicamente semelhante ao LAD-1, mas que diferente devido aos defeitos de integrina. Em contraste, LAD-2 resulta de uma ausncia de sialil Lewis X, o tetrasacrido ligante de carbohidrato nos neutrfilos e outros leuccitos que necessrio para a ligao com E-selectina e P-selectina de citocinas activadas no endotlio. Este defeito causado por uma mutao em um GDP-fucose transportador responsvel pelo transporte de fucose no Golgi, resultando em uma incapacidade de sintetizar sialil Lewis X. A ausncia de Lewis sialil X resulta em defeito de ligao de leuccitos ao endotlio, em ausncia de leuccitos "rolling", e, portanto, em recrutamento de leuccitos defeituosos aos locais de infeco. Esta anormalidade na fucosilao visto em LAD-2 tambm contribui para um fentipo de grupo sanguneo Bombay causada pela ausncia de todos os grupos sanguneos (antignios ABO), bem como atraso mental e outros defeitos de desenvolvimento. Fucose uma componente essencial do glicolipdo H que forma o antignio do ncleo em sistema ABO. Tipo 3 de deficincia de adeso dos leuccitos (LAD-3) envolve um defeito na sinalizao de dentro para fora e, assim, um defeito na quimiocinas induzidas por activao integrina que necessrio aos leuccitos para ligao firme ao endotlio. 128

Num subgrupo de pacientes, causada por mutaes no gene que codifica KINDLIN3, que uma protena que se liga cauda citoplasmtica de algumas integrinas e est envolvida na sinalizao. Aumento de sangramento tambm observado em indivduos com mutaes KINDLIN-3 por causa da disfuno integrina em plaquetas.

DEFEITOS NA IMUNIDADE ADQUIRIDA

DEFEITOS EM CLULAS NK E OUTROS LEUCCITOS: SNDROME DE CHDIAK-HIGASHI

Sndrome de Chediak-Higashi uma doena rara e autossmica recessiva caracterizada por infeces recorrentes por bactrias piognicas, albinismo culocutneo parcial e infiltrao de vrios rgos por linfcitos no-neoplsicos. Os neutrfilos, moncitos e linfcitos desses pacientes contm lisossomas gigantes. Esta doena causada por mutaes no gene que codifica a proteina Lyst reguladora do trfico lisossomal, resultando em fuso defeituosa fagossomo-lisossomal em neutrfilos e macrfagos (causando reduo da resistncia infeco), formao defeituosa de melanossomos em melancitos (causando albinismo), e anormalidades lisossomais nas clulas do sistema nervoso (causando defeitos do nervo) e plaquetas (levando a distrbios hemorrgicos). Lisossomas gigantes formam-se em neutrfilos durante a maturao destas clulas a partir de precursores mielides. Alguns destes precursores de neutrfilos morrem prematuramente, resultando em leucopnia moderada. Neutrfilos sobreviventes podem conter nveis reduzidos de enzimas lisossomais que normalmente funcionam na destruio microbiana. Essas clulas tambm esto com defeito na quimiotaxia e fagocitose, contribuindo para a sua deficiente actividade microbicida. A funo das clulas NK nesses pacientes prejudicada, provavelmente por causa de uma anormalidade nos grnulos citoplasmticos que sustentam a citotoxicidade. A gravidade do defeito em funcionalidade dos linfcitos T citotxicos (CTL) varivel entre os pacientes.

DEFEITOS EM VIAS TLR, SINALIZAO B NUCLEARFACTOR E INTERFERONS TIPO I

Os defeitos hereditrios em respostas TLR-dependente so raros e tm sido reconhecidos apenas recentemente. A sinalizao principal, proveniente da via da maioria dos TLRs, bem como do receptor de interleucina-1 (IL-1R), envolve o MyD88 r e o IRAK-4 e IRAK-1 quinases. Esta via resulta em B nuclear factor (NF-kB) induo-dependente de citocinas pr-inflamatrias. TLR 3, 7, 8 e 9 reconhecem cidos nuclicos, que so localizados em endossomas, e requerem uma protena chamada UNC93B para a sua funo.

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UNC93B uma protena de membrana do retculo endoplasmtico que interage com TLRs endossomais quando eles so sintetizados no retculo endoplasmtico e que ajuda fornecer esses TLRs aos endossomas. A protena UNC93B tambm crtica para a sinalizao do cido nucleico especfico SITL. Sinalizao TLRs endossomais resulta em sntese e secreo de interferons do tipo I. Defeitos na sinalizao TLR tendem a ter um fentipo bastante circunscrito. Infeces bacterianas invasivas graves no incio da vida, especialmente doena pneumoccica, so observadas em indivduos com mutaes em MyD88 e IRAK4. Mais tarde na vida, as infeces tendem a ser menos graves. Mutaes heterozigticas no TLR3, bem como mutaes homozigticas no UNC93B resultam em reduo de gerao de interferon tipo I e susceptibilidade a herpes simplex encephalitis. Receptores de interferon tipo I activam o factor de transcrio STAT1. Mutaes de perda de funo STAT1 (que interferem com sinalizao interferon) tambm tm sido associadas a infeces virais graves, nomeadamente herpes simplex encephalitis. Algumas deficincias imunolgicas so causadas por defeitos nas vias de sinalizao a jusante de TLRs. Mutaes pontuais do inibidor da quinase B (IKK), tambm conhecido como factor nuclear B - modulador essencial (NEMO), um componente do complexo quinase IB que necessrio para NF-kB ativao, contribuem para a condio recessiva ligada ao X conhecida como displasia ectodrmica anidrtica com imunodeficincia (EDA-ID). Neste distrbio, a diferenciao de estruturas derivadas da ectoderme anormal, e a funo imunolgica prejudicada numa srie de maneiras. Respostas a sinais de TLR, bem como os sinais CD40 so comprometidas. Estes pacientes sofrem de infeces com bactrias encapsuladas piognicas, assim como com patognicos bacterianos intracelulares, incluindo micobactrias, vrus e fungos como Pneumocystis jiroveci. Uma hereditariedade autossmica recessiva de EDA-ID tem sido descrita, em que uma mutao pontual no IB hipermrfico impede a fosforilao, ubiquitinao e degradao de IB, levando deficincia de activao do NF-kB.

DEFEITOS NO PATHWAY IL-12/IFN-

IL-12 secretada pelas clulas dendrticas e macrfagos, e sinalizao de IL12R induz a sntese de IFN- por clulas T helper, clulas T citotxicas e clulas NK . Mutaes nos genes que codificam IL-12p40, cadeia IL-12R1 e ambas as cadeias do receptor de IFN , bem como algumas mutaes em STAT1 hipomrico - todos resultam em susceptibilidade a espcies ambientais Mycobacterium (muitas vezes chamadas micobactrias atpicas), como o Mycobacterium avium, Mycobacterium kansasii e Mycobacterium fortuitum. Mutaes IKK / NEMO tambm levam a susceptibilidade intracelular de patognios, incluindo micobactrias.

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T10: Tolerncia
Data terica de 28 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 14 Slides aulas: sim Elaborado por: Filipa Pereira

TOLERNCIA IMUNOLGICA
Tolerncia imunolgica ou auto-tolerncia: ausncia de resposta imunitria agressiva a um conjunto de antignios, num sistema imunitrio imunocompetente, induzida pela exposio prvia a esse antignio. Tolerognicos Antignios Imunognicos geram imunidade tm capacidade de induzir tolerncia

CARACTERSTICAS GERAIS DA TOLERNCIA IMUNOLGICA

Indivduos normais so tolerantes aos seus antignios porque os linfcitos que reconhecem os antignios do prprio so destrudos ou inactivados ou mudam a sua especificidade. *Uma falha na auto-tolerncia reaco auto-imune doena auto-imune A tolerncia resultante do reconhecimento do antignio por linfcitos especficos e pode ser induzida pelo reconhecimento do antignio durante a vida fetal ou neonatal. A auto-tolerncia pode ser induzida em linfcitos auto-reactivos imaturos nos rgos linfides primrios (tolerncia central) ou em linfcitos maduros em locais perifricos (tolerncia perifrica). A tolerncia central ocorre porque, durante a maturao nos rgos linfides primrios, todos os linfcitos passam por um estgio em que o encontro com o antignio leva morte celular ou expresso de novos receptores a antignios ou a uma mudana nas capacidades funcionais. A tolerncia perifrica ocorre quando os linfcitos maduros que reconhecem os self antigens se tornam incapazes de responder a esses antignios, ou so induzidos a morrer por apoptose ou as clulas T maduras esto activamente suprimidas por clulas T reguladoras. A escolha entre a activao linfocitria e a tolerncia determinada pelas propriedades dos antignios, pelo estado de maturao dos linfcitos antignio-especficos, e pelos tipos de estmulos recebidos quando estes linfcitos encontram antignios prprios. 131

Alguns antignios do prprio podem ser ignorados pelo sistema imunolgico, na medida em que os linfcitos que encontram o antignio podem falhar na resposta, mas continuam viveis e funcionais. Antignios estranhos na ausncia de sinais de co-estimulao podem inibir respostas imunes pela induo de tolerncia em linfcitos especficos. A induo de tolerncia imunolgica pode ser explorada em abordagens teraputicas para prevenir uma resposta imunolgica indesejvel (ex. prevenir a rejeio de rgos, tratamento de doenas alrgicas e auto-imunes, prevenir reaces imunolgicas contra novos produtos gnicos utilizados nos protocolos de terapia genica e prevenir reaces dos pacientes com deficincia de certas protenas).

TOLERNCIA DOS LINFCITOS T

TOLERNCIA CENTRAL DAS CLULAS T
Seleco negativa: deleco Durante a maturao no timo, muitas clulas T imaturas que reconhecem o antignio do prprio so eliminadas devido a 2 factores principais: presena desse antignio no timo, ou expresso local ou chegada pelo sangue, e a afinidade dos TCR dos timcitos que reconhecem o antignio. Timcitos imaturos com receptores que tenham alta afinidade para os antignios do prprio TCR de sinalizao em clulas T imaturas leva activao de uma protena designada Bim desencadeia a via mitocondrial da apoptose.

Protenas do prprio

processadas e apresentadas em associao s molculas de MHC no timo pelas APCs

Algumas protenas que foram consideradas restritas aos tecidos perifricos so tambm expressas em clulas epiteliais tmicas sob o controle do gene regulador auto-imune (AIRE). Factor de transcrio que tem a capacidade de promover a expresso ectpica de antignios. 132

Deficincia de AIRE: o APECED (autoimmune polyendocrinopathy-candidiasis-ectodermal dystrophy) o APS-1 (autoimmune polyendocrine syndrome-type 1): causada por uma mutao no gene AIRE; caracterizada por uma leso mediada por anticorpos e linfcitos em mltiplos rgos endcrinos, incluindo as paratirides, supra-renais e ilhotas pancreticas. Desenvolvimento de clulas T reguladoras Algumas clulas T CD4+ auto-reactivas que detectam o antignio do prprio no timo no so eliminadas, em vez disso podem diferenciar-se em clulas T reguladoras. *Deficincia da protena AIRE no parece evitar o desenvolvimento de clulas T reguladoras. No se sabe o que determina a escolha entre morte celular e desenvolvimento de clulas T reguladoras.

TOLERNCIA PERIFRICA DAS CLULAS T

Tolerncia perifrica: mecanismo pelo qual as clulas T maduras que reconhecem antignios do prprio nos tecidos perifricos se tornam capazes de responder subsequentemente a esses antignios ANERGIA (Resposta no Funcional) Exposio das clulas T CD4+ a um antignio na ausncia de co-estimulao ou imunidade natural pode tornar as clulas incapazes de responder a esse antignio. O sinal 1 (reconhecimento do antignio) prolongado isoladamente pode levar anergia. A anergia resulta de alteraes bioqumicas ou genticas que reduzem a capacidade dos linfcitos em responder a antignios do prprio. Anergia Deleco Supresso das clulas T

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As clulas anrgicas mostram um bloqueio na transduo do sinal induzido pelo TCR. Devido expresso diminuda de TCR (talvez em virtude de degradao aumentada) e ao recrutamento diminudo para o complexo TCR de molculas inibidoras como tirosinas fosfatases. Reconhecimento do antignio do prprio pode activar ubiquitinas ligases celulares, as quais podem ubiquitinar protenas TCR-associadas e dirigi-las para degradao proteoltica em proteassomas ou lisossomas. O resultado final a perda destas molculas de sinalizao e activao defeituosa das clulas T. Quando as clulas T reconhecem antignios do prprio podem englobar receptores inibidores da famlia CD28, cuja funo terminar as respostas das clulas T. Os 2 receptores inibidores cujo papel fisiolgico na auto-tolerncia est mais bem estabelecido so os CTLA-4 e PD-1. o CTLA-4 compete com o CD28 pelos co-estimuladores B7, e, assim exclui o CD28 do local de reconhecimento da clula T (CTLA-4 liga-se s molculas com maior afinidade do que a CD28) e fornece sinais inibidores que anulam os sinais desencadeados pelo TCR. As APCs que apresentam antignios do prprio normalmente expressam baixos nveis de B7, sendo suficiente para envolver o receptor de alta afinidade CDLA-4. Em contraste, os micrbios que activam as APCs levam a um aumento da expresso de co-estimuladores B7 e CD28. A ACTL-4 controla principalmente a activao inicial de clulas T nos rgos linfides. o Outro receptor inibidor da famlia CD28 PD-1 que reconhece dois ligantes, designados de PD-L1 e PD-L2 (PD-L1 expresso nas APCs e em muitas outras clulas; PD-L2 principalmente nas APCs). Este reconhecimento leva inactivao das clulas T. A PD-1 mais importante para a limitao das respostas diferenciadas de clulas efectoras nos tecidos perifricos. Clulas dendrticas que so residentes nos rgos linfides e tecidos podem apresentar antignios do prprio aos linfcitos T e manter a tolerncia. As clulas dendrticas que so activadas por micrbios so as principais APCs para a iniciao de respostas das clulas T, enquanto as clulas dendrticas em repouso podem ser tolerognicas.

SUPRESSO DOS LINFCITOS AUTO-REACTIVOS PELAS CLULAS T REGULADORAS Os linfcitos T reguladores so um subconjunto de clulas T CD4+ cuja funo suprimir respostas imunes e manter a auto-tolerncia. A maioria destes linfcitos T reguladores CD4+ expressa altos nveis do receptor IL-2, mas no outros marcadores de activao de clulas T. Um factor de transcrio chamado FoxP3, um membro da famlia forkhead de factores de transcrio, essencial para o desenvolvimento e funo da maioria das clulas T reguladoras. Ratos com mutao no gene forp3 e ratos com o gene knockout desenvolveram uma doena auto-imune multisistmica associada a uma ausncia de clulas T reguladoras CD25+. 134

IPEX (desregulao imune, poliendocrinopatia, enteropatia, sndrome ligada ao cromossoma X) so doenas auto-imunes raras que atingem humanos e esto associadas com a deficincia de clulas T reguladoras e causado por mutaes no gene FOXP3.

Marcadores fenotpicos e heterogeneidade das clulas T reguladoras

Apesar de terem sido descritas numerosas populaes de clulas T com actividade supressora, o tipo de clula cujo papel regulador melhor estabelecido CD4+ FoxP3+ CD25high. Gerao e manuteno de clulas T reguladoras As clulas T reguladoras so geradas principalmente pelo reconhecimento de antignios do prprio no timo e pelo reconhecimento de antignios do prprio e estranhos em rgos linfides perifricos.

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A gerao e sobrevivncia das clulas T reguladoras est dependente das citocinas TGF- (estimula a expresso de FoxP3, o factor de transcrio que impulsiona a diferenciao da linhagem das clulas T reguladoras) e IL-2 (promove a diferenciao das clulas T no subconjunto de reguladoras e necessria para a sobrevivncia e manuteno desta populao de clulas; activa o factor de transcrio STAT5 pode aumentar a expresso de FoxP3).

Mecanismos de aco das clulas T reguladoras Produzem IL-10 e TGF- (ambos inibem as respostas imunes) Inibem a capacidade das APCs estimularem as clulas T, dependente de CTLA-4. Consumo de Il-2 menos citocina para linfcitos clulas T no se desenvolvem

TGF- (Transforming Growth Factor-B) TGF-1 uma protena sintetizada e secretada pelas clulas T reguladoras CD4+, macrfagos activados e muitos outros tipos celulares. sintetizada como um precursor inactivo que proteoliticamente clivada no complexo de Golgi e forma um homodmero que secretado de forma latente em associao com outros polipeptdeos, que devem ser removidos extracelularmente por digesto enzimtica antes da citocina poder ligar-se aos receptores e exercer os seus efeitos biolgicos. O receptor TGF-1 tem duas protenas diferentes, o TGF-RI e TGF-RII, ambos com factores de transcrio fosforilatos chamados SMADs. Funes do TGF-: Inibe a proliferao e as funes efectoras das clulas T e a activao dos macrfagos. Regula a diferenciao da funcionalidade de distintos subconjuntos de clulas T Estimula a produo de anticorpos IgA pela induo de clulas B para alterar este isotipo Promove a reparao de tecidos aps a diminuio de reaces imunes e inflamatrias locais IL-10 A IL-10 um inibidor de macrfagos activados e clulas dendrticas. O receptor da IL-10 consiste em 2 cadeias, que associam a famlia de cinases Janus JAK1 e TYK2 e activa o STAT3. Funes da IL-10: IL-10 inibe a produo de IL-12 (estmulo fundamental para a secreo de IFNY) pela activao de clulas dendrticas e macrfagos IL-10 inibe a estimulao de co-estimuladores e molculas da classe MHC-II em clulas dendrticas e macrfagos

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DELECO DE CLULAS T POR MORTE CELULAR APOPTTICA Os linfcitos T que reconhecem antignios do prprio sem inflamao ou que so repetidamente estimulados por antignios morrem por apoptose. A morte apopttica pode ser induzida por duas vias bioqumicas: Via mitocondrial (intrnseco) regulada pela famlia de protenas Bcl-2 (anti-apoptticas) e podem ser divididas em 3 grupos: -Protenas anti-apoptticas de mltiplos domnios (como Bcl-2 e Bcl-X) -Protenas pr-apoptticas de multidomnios (como Bax e Bak) -Protenas BH-3-only de domnio nico (sensores de vrios stresses). Sinalizao celular, crescimento dos factores de privao, estmulos nocivos ou leso do DNA Protenas BH3-only so induzidas ruptura da integridade mitocondrial: o Sinalizao de BCR/TCR Bim activada liga-se s protenas prapoptticas Bax e Bak no citoplasma, mudam de conformao, oligomerizam-se, translocam-se para a membrana mitocondrial externa e geram um aumento na permeabilidade mitocondrial. o Tambm podem ligar-se e inibir protenas anti-apoptticas na membrana mitocondrial externa Perda de integridade da membrana mitocondrial libertao de alguns indutores de apoptose mitocondrial como o citocromo c activao de caspases citoplasmticas, como a caspase-9 morte por apoptose Via do

receptor de morte (extrnseco) Diversos receptores de superfcie celular da famlia dos TNF podem ligar-se aos seus receptores fisiolgicos (FasL com Fas) e induzir a activao da caspase-8 que leva induo da apoptose e pode amplificar o sinal atravs de uma protena BH3-only pr-apopttica chamada Bid. 137

 As clulas T que reconhecem antignios do prprio na ausncia de coestimulao podem activar Bim, resultando em apoptose pela via mitocondrial. Estimulao repetida das clulas T resulta na co-expresso de receptores de morte e os seus ligantes, e o empenho dos receptores de morte desencadeia morte apopttica. Nas clulas T CD4+, o receptor de morte relevante chamado Fas (CD95) e o seu ligante ligante de faz (FasL). Fas um membro da famlia de receptores ao factor de necrose tumoral (TNF), e FasL homlogo citocina TNF. Quando as clulas T so repetidamente activadas, FasL expresso na superfcie celular e liga-se ao Fas de superfcie na mesma clula ou em clulas T adjacentes. Isto activa as caspases que causam apoptose das clulas. TOLERNCIA PERIFRICA EM LINFCITOS CD8+ Muito pouco se sabe sobre os mecanismos de tolerncia de clulas T CD8+ maduras, mas possvel que se reconhecerem os peptdeos associados ao MHC-II sem coestimulao, imunidade natural ou clulas T auxiliares, estas clulas podero tornar-se anrgicas. Clulas T CD25+ reguladoras podem inibir directamente a activao das clulas T CD8+. Clulas T CD8+ que so expostas a altas concentraes de antignios do prprio tambm podem sofrer morte celular apopttica. FACTORES QUE DETERMINAM O GRAU DE TOLERNCIA DOS ANTIGNIOS DO PRPRIO

TOLERNCIA DOS LINFCITOS B

Necessria para manter a a ausncia de resposta aos antignios do prprio timoindependentes, como os polissacardeos e os lpidos.

TOLERNCIA CENTRAL DAS CLULAS B

Os linfcitos B imaturos que reconhecem os antignios do prprio com alta afinidade na medula ssea so eliminados ou mudam a sua especificidade. Edio do receptor

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Se as clulas B imaturas reconhecem os antignios do prprio presentes em altas concentraes na medula ssea e especialmente se o antignio exibido de forma multivalente (p. ex., na superfcie das clulas), as clulas B respondem com a reactivao dos seus genes RAG1 e RAG2 e iniciam uma nova etapa de recombinao VJ no locus do gene da cadeia leve da imunoglobulina (Ig), adquirindo uma nova especificidade. Deleco Se a edio falhar em eliminar a auto-reactividade, as clulas B podem ser delectadas. Anergia Reconhecimento mais fraco dos antignios do prprio pode levar inactivao funcional em vez de morte celular.

TOLERNCIA PERIFRICA DAS CLULAS B

Os linfcitos B maduros, que reconhecem antignios do prprio nos tecidos perifricos na ausncia de clulas T auxiliares especficas, podem-se tornar funcionalmente sem resposta ou morrer por apoptose. Anergia e deleco As clulas B auto-reactivas necessitam de altos nveis do factor de crescimento BAFF/BLys para sobreviver e no podem competir eficientemente com as clulas B nave normais menos BAFF-dependente para a sobrevivncia nos folculos linfides. Assim, as clulas B auto-reactivas tm um tempo de vida reduzido e so rapidamente eliminadas. As Clulas B que se ligam com alta avidez a antignios do prprio na periferia tambm podem sofrer morte apopttica pela via mitocondrial independente da dependncia do factor de crescimento. Se as clulas B anrgicas encontrarem quaisquer clulas T auxiliares antignio-especficas, as clulas B podem ser destrudas por FasL nas clulas T que atraem Fas nas clulas B. Sinalizao por receptores inibitrios Receptores inibitrios: receptor inibitrio Fcy, FcyRII, a protena contendo ITIM fosfatase-associada CD22 e algumas tirosina cinases.

TOLERNCIA INDUZIDA POR ANTIGNIOS PROTEICOS ESTRANHOS

Os antignios estranhos podem ser administrados de modo que induzem preferencialmente tolerncia em vez de respostas imunolgicas: Altas doses do antignio administradas de forma sistmica, sem adjuvante, tendem a induzir tolerncia. Os adjuvantes estimulam as respostas imunolgicas naturais e a expresso dos co-estimuladores nas APCs, e na ausncia desses sinais secundrios, as clulas T que reconhecem os antignios podem tornar-se anrgicas ou morrer.

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Tolerncia oral: a administrao oral de um antignio proteico frequentemente induz acentuada supresso das respostas imunolgicas sistmicas celulares e humorais imunizao pelo mesmo antignio. Algumas infeces sistmicas (p. ex. com vrus) podem iniciar uma resposta imune, mas a resposta comprometida antes de o vrus ser eliminado, resultando num estado de infeco persistente. Exausto clonal: os clones de clulas T com o vrus especfico esto presentes mas no respondem normalmente e so incapazes de erradicar a infeco. H alguma evidncia de que a exausto clonal devida sub-regulao de receptores inibitrios tais como as PD-1 sobre as clulas T CD8+ com o vrus especfico.

Quadro resumo com os mecanismos que mantm o estado de tolerncia

*baseado de acordo com os slides das tericas

Ignorncia perigo/danger

Pauline Matzinger: no somos tolerantes nem deixamos de o ser, apenas respondemos a danger, inflamao. Zonas do organismo protegidas da aco do sistema imunitrio. Ex. locais imuno-previlegiados: placenta, globo ocular Enzima indoleamina-2,3-desoxigenase (IDO), degrada o triptofano
(presente em grandes quantidades na placenta). Os linfcitos precisam de capturar triptofano do meio para conseguir proliferar e activar-se. Esta enzima consegue sugar todo o triptofano que existe naquele ambiente e na ausncia de triptofano os linfcitos no vo conseguir activar-se naquele local. Heme oxigenase 1 (HO-1) degrada o heme e produz alguns subprodutos que tm propriedades imunosupressoras. TGF- e o ligando FAS vo actuar em diferentes componentes do Sistema Imunitrio, induzindo uma ausncia de resposta imunitria, protegendo o tecido dessa infeco. Tumores: produo elevada de TGF- no seu ambiente proliferao sem ser destrudo pelo Sistema Imunitrio

Privilgio

Estado que os linfcitos adquirem passando a ser refractrios a mais estimulao. As clulas CD4+ influenciadas por diferentes citocinas vo acabar por diferenciar-se em funes efectoras distintas que Immune deviation conduzem a diferentes caractersticas funcionais e diferentes propriedades. Produzidas no timo quando reconhecem antignios do prprio. Clulas T reguladoras Mais tarde, na periferia, so capazes de suprimir respostas imunitrias quando so activadas por esse antignio. Eliminao clonal Seleco negativa no timo. Anergia

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*Hipersensibilidade
Captulos do Abbas: 18, 19 Captulos do Arosa: 17 Slides aulas: no Elaborado por: Helena Couto

HIPERSENSIBILIDADE
Hipersensibilidade uma designao abrangente para os distrbios causados pelas respostas imunitrias. Podem dever-se, por exemplo, a um controlo inadequado, a adopo de tecidos-alvo errados ou a antignios ambientais que habitualmente seriam inofensivos. Na generalidade, so causadas por: auto-imunidade; reaces contra micrbios (se a reaco imunitria for excessiva ou o micrbio persistir, por exemplo), englobando processos de inflamao severa, deposio de complexos imunes, ligao cruzada de anticorpos destinados a um antignio non-self, reaco contra microorganismos comensais; reaces contra antignios ambientais, com produo exagerada de IgE. Em todas as reaces hipersensveis, os mecanismos responsveis pela leso tecidual sero aqueles que normalmente funcionariam na eliminao de patognios infecciosos: imunidade inata, linfcitos T, vrias outras clulas efectoras, mediadores da inflamao O problema surge quando estes mecanismos so activados ou mantidos de forma inapropriada. Este tipo de distrbios torna-se ainda mais complicado se pensarmos que o estmulo destas respostas imunitrias anormais bastante difcil de ser eliminado (antignios self, micrbios comensais, antignios ambientais). Ento, como o sistema imunitrio inclui diversos mecanismos de amplificao (feedback positivo), quando uma resposta imunitria iniciada, difcil control-la ou faz-la terminar. Por essa razo, este tipo de doenas tende a ser crnica e progressiva, representando grandes desafios na prtica clnica.

CLASSIFICAO DE REACES HIPERSENSVEIS

Com base no tipo de resposta imunitria e mecanismos efectores responsveis pelas leses celulares e teciduais, surgiu uma classificao das reaces hipersensveis em 4 grupos principais.

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HIPERSENSIBILIDADE TIPO I
Hipersensibilidade imediata. Diz respeito produo de IgE especficos para antignios ambientais e mastcitos. Tipo de hipersensibilidade mais prevalente. As alergias so as doenas prottipo deste grupo.

HIPERSENSIBILIDADE TIPO II
Causada por IgM e IgG: ao activarem o sistema complemento, recrutarem clulas inflamatrias e interferirem com funes celulares normais promovem a leso tecidual. Estes anticorpos podem ser especficos para antignios em determinado tipo de clulas ou na matriz extracelular e podem ser encontrados ligados a esses antignios ou em circulao.

HIPERSENSIBILIDADE TIPO III

Envolve os mesmos mecanismos que a anterior mas diz respeito formao e deposio de complexos imunes. Esta deposio ocorre maioritariamente nos vasos sanquneos.

HIPERSENSIBILIDADE TIPO IV
Causada por linfcitos T, que induzem a inflamao atravs da secreo de citocinas (que, por sua vez, recrutam outros leuccitos, sobretudo neutrfilos e macrfagos) ou que matam directamente clulas-alvo. Clulas T helper tambm estimulam a produo de anticorpos que lesionam os tecidos e induzem inflamao. Em algumas doenas, h envolvimento de CTLs. Este tipo de classificao, embora seja til para distinguir o tipo de resposta imunitria, no , na realidade, muito til na prtica clnica. As doenas so complexas e frequentemente envolvem uma combinao de respostas imunitrias humorais e celulares, assim como diversos mecanismos efectores ( fcil pensarmos que assim , se um nico antignio consegue estimular normalmente respostas humorais e celulares, produzindo-se vrios tipos de anticorpos e clulas T efectoras). Alm dos diversos mecanismos envolvidos, a inflamao est muitas vezes associada, pelo que, frequentemente, estas doenas so apenas agrupadas sobre a designao de doenas imunitrias inflamatrias (immune-mediated inflammatory diseases). Considerar este conjunto de doenas num s grupo tem algum valor clnico, j que muitas delas so tratadas com os mesmos ou semelhantes agentes biolgicos. As explicaes seguintes so baseadas numa diviso mais abrangente: Doenas causadas por anticorpos (tipo II, III) Doenas causadas por anticorpos contra antignios celulares ou teciduais fixos Doenas causadas por complexos imunes Doenas causadas pr linfcitos T (tipo IV) Doenas causadas por inflamao mediada por citocinas Doenas causadas por CTLs Doenas alrgicas (tipo I) 142

DOENAS CAUSADAS POR ANTICORPOS

As doenas causadas por anticorpos podem dever-se ligao a antignios fixos em clulas ou tecidos extracelulares ou formao e deposio de complexos imunes.

DOENAS CAUSADAS POR ANTICORPOS CONTRA ANTIGNIOS CELULARES/EXTRACELULARES

Afectam especificamente as clulas ou tecidos com um determinado tipo de antignio, ou seja, geralmente no so sistmicas. Existem 3 mecanismos de aco principais:

1. OPSONIZAO CELULAR

DOENAS CARACTERSTICAS:
Antigniosalvo Anemia hemoltica auto-imune Protenas da membrana eritrocitria Protenas na membrana paquetria Mecanismos efectores Opsonizao e fagocitose dos eritrcitos; lise mediada pelo complemento Opsonizao e fagocitose de plaquetas Manifestaes clnicopatolgicas Hemlise Anemia Hemorragia

Prpura trombocitopnica auto-imune

O mesmo mecanismo responsvel pela hemlise em reaces de transfuso.

2. RECRUTAMENTO DE NEUTRFILOS E MACRFAGOS

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DOENA CARACTERSTICA Glomerulonefrite mediada por anticorpos (activao leucocitria + inflamao)

3. INTERFERNCIA COM RECEPTORES OU OUTRAS PROTENAS

Anticorpos que se liguem a receptores celulares ou outras protenas podem interferir com as suas funes normais, causando doena sem inflamao ou leso tecidual. DOENAS CARACTERSTICAS
Antigniosalvo Doena de Graves Receptor de TSH Receptores colinrgicos Mecanismos efectores Estimulao dos receptores pelos anticorpos Anticorpos impedem ligao de acetilcolina; down-regulation dos receptores Manifestaes clnicopatolgicas Hipertiroidismo Fraqueza muscular Paralisia

Mistenia gravis

Geralmente, os anticorpos causadores destas doenas so produzidos como parte de uma reaco auto-imune contra antignios nessas clulas ou tecidos. Mas, menos frequentemente, estes anticorpos podem ser produzidos contra um antignio non-self, microbial, por exemplo, e d-se uma reaco cruzada imunolgica com algum antignio self. A febre reumtica um exemplo deste mecanismo, sendo uma sequela rara de infeco por Streptococcus pyogenes os anticorpos produzidos contra a bactria ligam-se tambm a antignios presentes no corao, depositam-se e causam inflamao e leso do tecido.

DOENAS MEDIADAS POR COMPLEXOS IMUNES

Os complexos imunes que causam doena podem ser formados por anticorpos que se ligam a antignios self ou a antignios non-self. importante entender que a formao de complexos imunes no constitui um fenmeno patolgico! Os complexos antignioanticorpo formam-se durante uma resposta imunitria normal e so eliminados da circulao por macrfagos no fgado e do bao. A doena surge apenas quando estes so produzidos em quantidade excessiva, ou quando no so eliminados de forma eficiente, e se depositam nos tecidos.

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 medida que maior quantidade de anticorpos se forma, alguns deles depositam-se nos leitos vasculares. Nestes tecidos, os anticorpos presentes nestes complexos podem ento activar o complemento: A activao do complemento conduz ao recrutamento e activao de clulas inflamatrias (sobretudo neutrfilos) nos locais de deposio estes neutrfilos vo causar leso tecidual, depois de se ligarem aos complexos imunes pelos seus receptores de Fc.

Estas doenas afectam geralmente vrios tecidos e rgos, embora alguns possam ser particularmente vulnerveis, como os rins e as articulaes. As caractersticas patolgicas das doenas vo reflectir o local de deposio dos complexos e so independentes do facto de o antignio ser self ou non-self. Ento, como os complexos tm tendncia para se depositar em artrias pequenas, nos glomrulos renais ou na sinovial das articulaes, as manifestaes clnico-patolgicas so frequentemente vasculite, nefrite e artrite. O prottipo de doena sistmica causada pela deposio de complexos imunes a doena do soro. A maioria dos conhecimentos acerca deste tipo de doenas provm de modelos experimentais de doena do soro, em que animais so imunizados com uma grande quantidade de antignio estranho. Mas, nestes casos, o quadro clnico vai ser caracterstico de uma doena do soro aguda os sintomas tm curta durao e as leses so reparadas a no ser que o antignio seja injectado novamente. A quantidade de complexos que se deposita nos tecidos depende da natureza dos complexos e das caractersticas dos vasos sanguneos.

FACTORES QUE INFLUENCIAM A DEPOSIO:

Dimenso dos complexos Os complexos de pequenas dimenses tendem a depositar-se mais nos vasos do que os complexos maiores, j que estes so frequentemente eliminados por fagcitos, ao contrrios dos anteriores, que sofrem menos fagocitose. Carga elctrica dos antignios Os complexos com antignios catinicos ligam-se avidamente s membranas basais dos vasos sanguneos e dos glomrulos renais (carregadas negativamente). Estes complexos geralmente provocam leso tecidual prolongada e severa.

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 Filtrao capilar Os capilares dos glomrulos renais e das membranas sinoviais so capilares onde o plasma ultrafiltrado (para a formao de urina e lquido sinovial, respectivamente), passando pela parede capilar com uma presso hidrosttica muito elevada. Estes so locais onde a deposio se verifica frequentemente, embora esta possa ocorrer em virtualmente todo o lado. Os complexos imunes tambm se podem ligar aos receptores de Fc nos mastcitos e nos leuccitos e activar a secreo de citocinas e mediadores vasoactivos. Por sua vez, estes mediadores podem provocar ainda maior deposio ao aumentar a permeabilidade vascular e o fluxo sanguneo.
deposio de complexos imnunes complexos imunes ligam-se a receptores de Fc os mastcitos e leucitos

aumento da permeabilidade vascular e fluxo sanguneo

activao da secreo de citocinas e mediadores vasoactivos

Inflamao

Muitas doenas sistmicas imunitrias so causadas pela deposio de complexos imunes nos vasos sanguneos. Exemplos mais comuns: Lpus Sistmico Eritrematoso Vrias formas de nefrite e vasculite Glomerulonefrite ps-estrptoccica

DOENAS CAUSADAS POR CLULAS T

Os linfcitos T podem causar doena provocando inflamao ou matando directamente clulas-alvo.

DOENAS CAUSADAS CITOCINAS

POR

INFLAMAO

MEDIADAS

POR

Na inflamao mediada pelo sistema imunitrio, clulas TH1 e TH17 secretam citocinas que recrutam e activam leuccitos. A IL-17, produzida por clulas TH17, promove o recrutamento de neutrfilos. 146

O interfero- (IFN- ), produzido por clulas TH1 activa os macrfagos.

O factor de necrose tumoral (TNF) e quimocinas, produzidas por linfcitos T e por outras clulas, tambm esto envolvidos no recrutamento e activao de muitos tipos de linfcitos. As leses teciduais vo ser o resultado dos produtos dos neutrfilos e macrfagos activados (enzimas lisossomais, espcies reactivas de oxignio, xido ntrico, citocinas pr-inflamatrias).

As clulas do endotlio vascular nas zonas lesadas podem depois expressar nveis aumentados de protenas de superfcie cuja regulao depende de citocinas, por exemplo, molculas de adeso e molculas MHC II, que agrava o processo de recrutamento. A inflamao associada a doenas mediadas por clulas T geralmente crnica, mas podem verificar-se episdios de inflamao aguda j num contexto de uma inflamao crnica de fundo. Reaces inflamatrias crnicas geralmente produzem fibrose como resultado da secreo de citocinas e factores de crescimento pelos macrfagos.

ANTIGNIOS SELF OU NON-SELF?

Muitas doenas auto-imunes especficas para determinados rgos so causadas pela interaco de clulas T auto-reactivas com antignios self, causando a libertao de citocinas e inflamao.

Pensa-se que este seja o principal mecanismo por detrs da artrite reumatide, esclerose mltipla, diabetes tipo I e psorase. As reaces das clulas T contra os micrbios e outros antignios non-self tambm podem causar inflamao e leso tecidual nos locais de infeco ou de exposio ao antignio.

Bactrias intra-celulares, por exemplo Mycobacterium tuberculosis, produzem fortes respostas por clulas T e macrfagos que resultam em inflamao granulomatosa e fibrose. A inflamao e a fibrose podem causar destruio extensiva do tecido e prejuzo da funcionalidade (neste caso nos pulmes). A tuberculose um bom exemplo de uma doena infecciosa em que a leso tecidual devida sobretudo resposta imunitria do hospedeiro. 147

SENSIBILIDADE POR CONTACTO

Existe um conjunto de doenas da pele que resultam da exposio tpica a qumicos e antignios ambientais - sensibilidade por contacto. Estas devem-se a reaces inflamatrias, presumivelmente despoletadas por neoantignios formados pela ligao dos qumicos a protenas self. Na origem destas citocinas podero estar clulas CD4+ e CD8+. Como exemplo, temos reaces de sensibilidade a certas plantas. Quando este tipo de reaco se torna crnica utilizada a designao clnica de eczema.

DELAYED-TYPE HYPERSENSITITIVITY
A reaco prottipo das reaces inflamatrias mediadas por clulas T a delayedtype hypersensitivity (DTH). As citocinas responsveis pela inflamao resultam da activao de clula T sobretudo CD4+. O modelo clssico de uma reaco deste tipo, num modelo animal, envolve vrias etapas: Sensitizao o animal imunizado com antignio proteico. Em humanos esta etapa pode ocorrer atravs de infeco microbial, sensitizao por contacto com qumicos ou antignios ambientais, ou injeces intra-drmicas ou subcutneas com antignios proteicos. Elicitao Cerca de duas semanas depois, o animal exposto ao mesmo antignio, subcutaneamente. Desafio exposio posterior ao antignio; despoleta a reaco. Por exemplo, a PPD (purified protein derivative), um antignio proteico da Mycobacterium tuberculosis, despoleta uma reaco DTH, conhecida reaco da tuberculina, quando injectada em indivduos que estiveram expostos bactria. Um resultado positivo um indicador clnico muito utilizado para provar uma infeco de turberculose anterior ou presente. A resposta tpica evolui durante 24 a 48 horas. o Cerca de 4 horas depois da injeco de antignio, os neutrfilos acumulam-se em redor das vnulas ps-capilares no local de injeco. o Cerca de 12 horas depois, o local de injeco infiltrado por clulas T e moncitos provenientes do sangue, tambm em redor das vnulas adjacentes. As clulas edoteliais destas vnulas tornam-se inchadas, apresentam organelos aumentados e tornam-se mais permeveis a macromolculas do sangue. O fibriognio sai dos vasos sanguneos para os tecidos, onde convertido a fibrina. A deposio da fibrina, e a acumulao de clulas T e moncitos no espao extravascular em redor do local de injeco provocam inchao do tecido. Este torna-se fime indurao. o A indurao um factor de diagnstico de uma reaco DTH detectvel cerca de 18 horas depois da injeco do antignio e mxima cerca de 24 a 48 horas depois.

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Na prtica clnica, este tipo de reaces so importantes, pois uma perda de respostas DTH a antignios universais (por exemplo, antignios de Candida spp.) indicativa de uma funo deficiente de clulas T condio conhecida como anergia ( diferente da anergia linfcitria).

REACES DTH CRNICAS

Podem surgir quando uma infeco despoleta uma activao de macrfagos a partir de clulas TH1, mas no existe uma eliminao eficiente dos micrbios fagocitados. Nestas reaces, as clulas T activadas e os macrfagos continuam a produzir citocinas e factores de crescimento, o que amplifica as respostas dos dois tipos de clulas e modifica o tecido em redor. Forma-se um ciclo de leso tecidual e inflamao, seguidas de substituio do tecido lesado (fibrose). Se os micrbios esto localizados numa pequena rea, a reaco que se forma produz granulomas, que so ndulos de tecido inflamado. A inflamao granulomatosa uma tentativa de conter a infeco mas tambm a causa de leso tecidual significativa. Este tipo de inflamao caracterstica de alguns micrbios persistentes, como M. tuberculosis ou alguns fungos. Grande parte da dificuldade respiratria associada tuberculose ou infeces fngicas deve-se substituio do pulmo por tecido fibroso.

DOENAS CAUSADAS POR CTLS

A principal funo dos CTL (clulas T CD8+) eliminar os micrbios intracelulares, sobretudo vrus, matando as clulas infectadas. Ento, mesmo que um vrus no seja citopatognico (prejudicial para a clula), as respostas a infeces virais podem causar leso tecidual ao matar clulas infectadas. Isto acontece porque os CTL so incapazes de distinguir se o vrus ou no patognico, matando todas as clulas infectadas sem seleco. Algumas formas de hepatite viral so exemplos de infeces em que as leses so provocadas pelos CTL do hospedeiro.

Alm disso, os CTL podem contribuir para a leso tecidual em algumas doenas autoimunes causadas sobretudo por clulas T CD4+, como a diabetes tipo I. Tambm esto envolvidos em algumas formas de miocardite como resultado de infeco viral.

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TERAPUTICA
As terapias utilizadas no tratamento das doenas de hipersensibilidade podem ser divididas em alguns grupos principais.

AGENTES ANTI-INFLAMATRIOS
Foram principal recurso durante muitos anos, sobretudo corticosterides. Estes frmacos reduzem a leso tecidual, particularmente o componente inflamatrio da resposta imunitria.

ELIMINAO DE CLULAS E ANTICORPOS

Utilizam-se anticorpos monoclonais para eliminar todas as clulas linfides, s as clulas T ou s as clulas B. O anticorpo anti-CD20 (rituximab) tem vindo a mostrar bons resultados em pacientes com artrite reumatide e esclerose mltipla, eliminado apenas clulas B. A plasmaferese tambm utilizada na remoo de anticorpos e complexos imunes em circulao.

TERAPIAS ANTI-CITOCINAS
Em casos de doenas inflamatrias crnicas mediadas por clulas T, um grande nmero de citocinas envolvidas na inflamao tem sido alvo do desenvolvimento de antagonistas. O receptor TNF e anticorpos anti-TNF so exemplos particularmente importantes; estes ligam-se ao TNF, neutralizando-o. So muito bem sucedidos em pacientes com artrite reumatide, doena de Crohn e psorase. Existem inmeros ensaios na rea do desenvolvimento de antagonistas de outras citocinas pr-inflamatrias (IL-1, IL-12, IL-23, IL-6).

INIBIO DAS INTERACES CLULA-CLULA

Existem vrios agentes aprovados ou em desenvolvimento que procuram inibir a activao de clulas B e de macrfagos pelas clulas T (por exemplo, bloqueamento de co-estimuladores ou outros ligandos importantes nesta etapa). Na esclerose mltipla, so por vezes utilizados anticorpos contra integrinas, inibindo a migrao de leuccitos para os tecidos, particularmente para o SNC.

IGG INTRAVENOSA
A administrao de grandes quantidades de IgG intravenosa (IVIG) benfica em algumas doenas de hipersensibilidade. No se entende completamente como que este agente suprime a inflamao. Uma possibilidade a de que a IgG se ligue a receptores de Fc inibidores nos macrfagos e linfcitos B, atenuando a resposta inflamatria.

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Particularmente importante entre o grande nmero de estudos nesta rea foi a definio de antignios-alvo no caso da esclerose mltipla e da diabetes mellitus tipo I. Esto em desenvolvimento ensaios clnicos que envolvem a administrao de antignio (pptidos de mielina ou de insulina) numa forma que permita desligar certas respostas imunitrias especficas. O principal risco ser a possibilidade interferncia com a funo normal do sistema imunitrio, tornando os indivduos susceptveis a infeces.

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DOENAS IMUNITRIAS IMPORTANTES

DOENA CARACTERSTICAS GERAIS Doena crnica, episdios de remisso e progresso Afecta sobretudo mulheres brancas (rcio mulheres-homens 10:1) PRINCIPAIS MANIFESTAES CLNICAS Rashes Artrite Glomerulonefrite Anemia hemoltica Trombocitopenia Envolvimento do SNC PATOGNESE Factores genticos e ambientais conduzem a uma perda de tolerncia dos linfcitos T e B auto-reactivos Produo de anticorpos contra agentes nucleares (DNA, protenas nucleares, histonas), plaquetas, eritrcitos Deposio de complexos imunes DIAGNSTICO (EXS.) Presena de anticorpos antinucleares: anticorpos contra DNA de cadeia dupla nativo so especficos de LSE FACTORES DE RISCO Mutaes num grande nmero de genes (ainda em investigao) Exposio a luz UV: pensa-se que conduza a morte apopttica de clulas e libertao consequente de antignios nucleares NOVAS TERAPIAS Anticorpos antiBAFF (factor de crescimento dos linfcitos B) recentemente aprovados como tratamento

Lpus Sistmico Eritrematoso

Doena auto-imune do SNC Esclerose Mltipla Doena neurolgica mais comum em jovens adultos

Fraqueza Paralisia Sintomas oculares

(com perodos de exacerbao e remisso)

Clulas T CD4 (subpopulaes TH1 e TH12) reagem com antignios self mielnicos (provas em ratinhos; deduo/comparao com humanos) inflamao no SNC com activao de macrfagos em redor dos nervos no crebro e medula espinhal, destruio de mielina, defeitos na conduo nervosa, dficite neurolgico Desconhece-se a importncia patolgica concreta dos anticorpos contra agentes mielnicos Desconhece-se a forma como as clulas TH1 e TH17 so activadas

Diagnstico complexo, com base num conjunto de dados clnicos, laboratoriais e radiolgicos

Predisposio gentica

Terapia tem sido ao longo dos anos pouco baseada em provas cientficas; fraca compreenso Interfero-: poder alterar a resposta de citocinas Novos estudos tentam interferir na migrao leucocitria

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DOENA

CARACTERSTICAS GERAIS Doena inflamatria; envolvimento de articulaes das extremidades

PRINCIPAIS MANIFESTAES
CLNICAS

PATOGNESE Factores genticos e ambientais conduzem a uma perda de tolerncia a antignios self Patognese no compreendida inteiramente As clulas T tm um papel muito importante; possvel que tambm haja envolvimento de anticorpos na destruio articular (frequentemente encontram-se clulas B activadas e plasmcitos na sinovial de articulaes afectadas) IgM e IgG circulantes reagem com pores Fc de IgG estes anticorpos so chamados factores reumatides (podem participar na formao de complexos imunes; papel ainda no identificado por completo)

Artrite Reumatide

Inflamao da sinovial Destruio de cartilagem articular e osso Participao de respostas celulares e humorais: clulas TH1 e TH17 + CD4 , linfcitos B activados, plasmcitos, macrfagos e outras clulas inflamatrias no lquido sinovial (podem chegar a encontrar-se, em casos severos, folculos linfticos bem formados com centros germinativos) Grande quantidade de citocinas (p. ex.: IL-1, IL-8, TNF, IL-17, IFN-) na sinovial

Destruio de cartilagem, ligamentos e tendes: pensase que as citocinas recrutam leuccitos cujos produtos destroem o tecido e activam clulas residentes na sinovial a produzir enzimas proteolticas (colagenase, p. ex.) Actividade osteoclstica aumentada devido a produo de ligando RANK por clulas T activadas (o receptor RANK expresso em precursores de osteoclastos; induz a sua diferenciao e activao) Vasculite Leso pulmonar

DIAGNSTIC O (EXS.) Presena de factores reumatide s e CCP (cyclic citrullinated peptides surgem num contexto inflamatrio

FACTORES DE
RISCO

NOVAS TERAPIAS Antagonistas do TNF muito bons resultados

Existem polimorfismos genticos associados a maior predisposio da doena (em investigao)

Doena metablica multi-sistmica Diabetes Mellitus tipo I Produo insuficiente de insulina Incidncia a aumentar; estabelecimento mais comum entre os 11 e os 12 anos

Hiperglicmia Cetoacedose

Doena Inflamatria Intestinal

Complicaes crnicas: - aterosclerose progressiva nas artrias (pode conduzir a necrose isqumica dos membros e rgos internos); - obstruo microvascular (possveis danos na retina, glomrulos renais, nervos perifricos) Inflamao mediada por clulas T causa leses intestinais Doena de Crohn: inflamao crnica e destruio das paredes intestinais; frequente formao de fstulas Colite ulcerativa: as leses esto limitadas sobretudo mucosa e consistem em lceras com focos de inflamao subjacentes Novas terapias incluem anticorpos anti- TNF, IL-17, IL-12

Destruio pelo sistema imunitrio de clulas nos ilhus de Langerhans. Vrios mecanismos podero contribuir: - inflamao mediada por clulas TH1 CD4+ reactivas a antignios nos ilhus; - lise das clulas mediada por CTL; - produo local de citocinas que lesionam a clula; - anticorpos contra as clulas dos ilhus.

Anlises laboratoriai s

Grande quantidade de genes foi associada doena existe uma especial ateno para genes HLA (human leucocyte antigen)

Tentativas de induo de tolerncia a pptidos dos ilhus (como da insulina) e de formao/ administrao de clulas T reguladoras aos doentes

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DOENAS ALRGICAS
Existe um conjunto de doenas que so causadas por antignios ambientais nomicrobiais e que envolvem clulas TH2, IgE, mastcitos e eosinfilos. Como? Os antignios activam as clulas TH2 CD4+, que por sua vez ajudam as clulas B a produzir IgEs especficas para os antignios. As IgEs assim produzidas vo ligarse a mastcitos e basfilos. Quando depois se ligam ao antignio, as clulas so rapidamente activadas e libertam vrios mediadores qumicos. De um modo geral, estes mediadores vo ser responsveis por: aumento da permeabilidade vascular; vasodilatao; contraco da musculatura lisa visceral e brnquica. A esta reaco chamamos hipersensibilidade imediata (hipersensibilidade tipo I). A hipersensibilidade imediata o prottipo de distrbio mediado por clulas TH2 (tal como a DTH o prottipo de distrbio mediado por clulas TH1). Aps a resposta imediata, existe uma fase inflamatria que se desenvolve mais lentamente late-phase reaction. Esta caracteriza-se pela acumulao de neutrfilos, eosinfilos, macrfagos e clulas TH2 CD4+ cerca de 2 a 4 horas depois. Esta reaco despoletada por citocinas produzidas pelas clulas TH2 e por mastcitos, juntamente com mediadores lipdicos secretados por mastcitos. Normalmente, o termo hipersensibilidade imediata usado englobando ambas as fases. A inflamao mxima cerca de 24 horas depois. Na clnica, estas reaces so designadas como alergias, atopias ou doenas de hipersensibilidade.

Episdios repetidos destas reaces podem conduzir a doenas alrgicas crnicas, com leso tecidual e remodelao. A alergia o distrbio imunitrio mais comum entre a populao.

Os pontos-chave das doenas alrgicas so a activao de clulas TH2 e a produo de IgE.

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Os indivduos saudveis podem no exibir respostas imunitrias por clulas T a antignio ambientais comuns ou desenvolver uma resposta que no prejudicial. Os indivduos atpicos desenvolvem respostas TH2 muito fortes e produzem IgE quando expostos a substncias alergnicas. A sequncia de eventos tpica de uma reaco alrgica a seguinte: Exposio ao antignio Activao de clulas TH2 e clulas B especficas para o antignio Produo de IgE Sensitizao: Ligao do anticorpos aos receptores de Fc nos mastcitos. Os mastcitos revestidos por IgE passam a estar prontos para activao (= esto sensveis ao encontro com o antignio). Re-exposio ao antignio Activao dos mastcitos Libertao de mediadores qumicos Reaco patolgica Apesar de a resposta imediata verificada nos vasos sanguneos e na musculatura lisa e a late-phase reaction serem iniciadas pela activao de mastcitos pelas IgE, existem outros mediadores envolvidos em ambas as fases. Como os mastcitos esto presentes no tecido conjuntivo e inferiormente aos epitlios, estes tecidos sofrem mais frequentemente as reaces de hipersensibilidade imediata. Alguns casos de hipersensibilidade imediata podem ser despoletados por estmulos no-imunognicos, como o exerccio ou a exposio ao frio. Estes estmulos induzem a desgranulao dos mastcitos e a libertao de mediadores sem que existam fases de exposio a antignio ou produo de IgE. So reaces no atpicas.

Existe uma predisposio gentica forte na base do desenvolvimento de alergias, existindo genes mais susceptveis associados a este tipo de doenas. Estes genes so responsveis pela interferncia numa ou mais etapas acima mencionadas. As reaces de hipersensbilidade imediata manifestam-se de vrias formas, dependendo dos tecidos afectados. Podem observar-se rashes, congesto sinusal, constrio brnquica, dor abdominal, diarreia e choque sistmico. No choque anafiltico, a forma mais extrema destas reaces, os mediadores podem contrair as vias areas at ao ponto de asfixiao e produzir colapso cardiovascular que resulta em morte.

PRODUO DE IgE
Os indivduos atpicos produzem elevados nveis de IgE em resposta a alergnios ambientais, enquanto os indivduos saudveis geralmente produzem outros istipos, como IgM e IgG, e apenas pequenas quantidades de IgE. A regulao da sntese de IgE vai depender da tendncia que um indivduo tem para formar uma resposta TH2 aos alergnios, porque as citocinas derivadas destas clulas estimulam a alterao do istipo da cadeia pesada para IgE nas clulas B. Esta tendncia influenciada, em cada indivduo, por vrios factores: 155

genes herdados; natureza dos antignios; histria de exposio aos antignios.

Em relao natureza dos antignios envolvidos (alergnios), estes so geralmente protenas ambientais comuns e qumicos capazes de modificar protenas. No se conhece a razo pela qual alguns antignios induzem fortes respostas TH2 e reaces alrgicas enquanto outros no o fazem. Dois dados comuns importantes: - os indivduos esto expostos repetidamente a estes antignios; - os alergnios, ao contrrio dos micrbios, no estimulam respostas imunitrias inatas habituais. A activao crnica ou repetida de clula T na ausncia se imunidade inata forte pode conduzir as clulas T CD4+ para a via TH2 (as prprias clulas T produzem IL-4, a principal citocina indutora de TH2). Como as reaces de hipersensibilidade imediata dependem de clulas T CD4+, antignios independentes de clulas T (como os polissacardeos) no despoletam estas reaces, a no ser que se liguem a protenas. Alguns frmacos, como a penicilina, reagem quimicamente com resduos de aminocidos nas protenas self. Formam-se ento conjugados hapteno-transportador que estimulam as respostas TH2 e a produo de IgE. Para o desenvolvimento de uma reaco alrgica, necessria exposio repetida ao antignio, porque a mudana para o istipo IgE e a sensitizao de mastcitos por IgE tm de ocorrer antes que ocorra uma reaco hipersensvel.

PARTICIPAO DE MASTCITOS, BASFILOS E EOSINFILOS

Para alm das clulas TH2, estas tambm so clulas efectoras da hipersensibilidade imediata e das doenas alrgicas. Os trs tipos de clulas contm grnulos citoplasmticos cujo contedo o principal mediador da reaco alrgica e os trs produzem mediadores lipdicos e citocinas pr-inflamatrias. Os mastcitos so o principal tipo de clula envolvido, distinguindo-se dois grupos principais: um da mucosa do tracto gastro-intestinal e outro do tecido conjuntivo (encontrados na pele e submucosa gastro-intestinal). As funes efectoras dos mastcitos so mediadas por molculas solveis libertadas com a activao. A variedade de substncias que libertam pode incluir substncias que so libertadas no momento de activao (aminas biognicas, macromolculas dos grnulos) ou que so sintetizadas aps a activao (mediadores derivados de lpidos, citocinas).

AMINAS BIOGNICAS
A principal amina interveniente nos humanos a histamina. Estas tambm chamadas aminas vasoactivas, so armazenadas nos grnulos citoplasmticos e so compostos de baixo peso molecular com uma amina.

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A histamina tem um perodo de aco curto e, ao ligar-se aos receptores em vrios tipos de clulas, inicia cascatas de conduo de sinal, com diferentes efeitos consoante as clulas. A ligao ao endotlio provoca a contraco das clulas, aumentando o espao intercelular, com aumento da permeabilidade e da passagem de plasma para os tecidos (inchao). Tambm estimula a produo, pelo endotlio, de relaxantes da musculatura lisa vascular, como prostaciclina (PGI2) e xido ntrico, causando vasodilatao (rubor). A histamina tambm causa constrio do msculo liso intestinal e brnquico, contribuindo para o aumento do peristaltismo e broncospasmo associado ingesto ou inalao de alergnios. Os anti-histamnicos so antagonistas dos receptores de histamina H1, mas em alguns distrbios alrgicos no so eficientes. A broncoconstrio associada asma mais prolongada do que os efeitos da histamina, sugerindo a interferncia de outras substncias.

ENZIMAS DOS GRNULOS E PROTEOGLICANOS

As serina proteases, como a triptase (degrada fibrinognio; activa colagenase) e a quimase (converte angiotensina I em angiotensina II; degrada membranas basais epidrmicas), so as protenas mais abundantes nos grnulos dos mastcitos e so responsveis pela leso tecidual. Os proteoglicanos, como a heparina e o sulfato de condroitina, tambm so constituintes abundantes dos grnulos. Nos grnulos, servem como matrizes de armazenamento para as aminas biognias carregadas positivamente, as proteases e outras substncias e previnem que estas tenham acesso ao resto da clula. Depois da exocitose dos grnulos, os mediadores so libertados dos proteoglicanos a diferentes velocidades (aminas biognicas dissiociam-se muito mais rapidamente, por exemplo). Ento, em certa medida, os proteoglicanos podem controlar a cintica das reaces de hipersensibilidade imediata.

MEDIADORES LIPDICOS PROSTAGLANDINAS, LEUCOTRIENOS, PAF

A activao dos mastcitos conduz a rpida sntese de novo de substncias lipdicas com diversos efeitos nos vasos sanguneos, msculo liso brnquico e nos leuccitos. As principais substncias derivam do cido araquidnico pela via COX e LOX. A prostaciclina (PGD2), o principal derivado lipdico pela via COX, actua como um vasodilator e broncoconstritor. Tambm participa na quimiotaxia de neutrfilos e na sua acumulao em locais de inflamao. Os leucotrienos, sobretudo LTC4 e os seus produtos de degradao TLD4 e LTE4. O factor activador de plaquetas (PAF platelet-activating factor) tem aces broncoconstritoras e tambm relaxa o msculo liso vascular.

CITOCINAS
As citocinas libertadas por mastcitos activados, basfilos e clulas TH2 esto sobretudo associadas inflamao da late-phase reaction. A activao dos mastcitos vai induzir a sua transcrio e sntese, embora pequenas quantidades possam j existir na clula. TNF, IL-1, IL-4, IL-5, IL-6 so algumas das citocinas envolvidas. 157

Efeitos biolgicos dos mediadores da hipersensibilidade imediata.

ANAFILAXIA SISTMICA
Trata-se de uma reaco de hipersensibilidade imediata sistmica, caracterizada por edema em mltiplos tecidos e uma queda da presso arterial, como resultado da vasodilatao. Estes efeitos normalmente resultam da presena sistmica de um antignio introduzido por injeco, uma picada de insecto ou absoro atravs de uma superfcie epitelial (pele ou mucosa gastro-intestinal). O alergnio activa mastcitos em vrios tecidos, ocorrendo libertao de mediadores qumicos que atingem os vasos sanguneos. A diminuio do tnus vascular e a sada de plasma dos vasos sanguneos pode causar choque pela descida de presso arterial choque anafiltico, frequentemente fatal. Os efeitos cardiovasculares surgem juntamente com: constrio das vias areas superiores e inferiores; edema da laringe; hipermotilidade intestinal; secreo excessiva de muco no tracto respiratrio e leses urticrias na pele; O tratamento habitual epinefrina, revertendo os efeitos vasodilatadores e broncoconstritores. Anti-histamnicos tambm podem ajudar.

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ASMA
Doena inflamatria causada por repetidas reaces de hipersensibilidade imediata e late-phase no pulmo. Surge uma trade clnico-patolgica: obstruo area intermitente e reversvel (devido constrio brnquica e produo aumentada de muco espesso); inflamao brnquica crnica com eosinfilos; hipertrofia e hiperreactividade das clulas musculares lisas brnquicas a broncoconstritores. Cerca de 70% dos casos de asma esto associados a hipersensibilidade imediata mediada por IgE. Nos restantes 30%, a asma poder no estar associada a uma atopia e pode ser despoletada por estmulos no imunitrios como frmacos, frio e exerccio. Na asma atpica, o alergnio activa clulas TH22 e, ligando-se a IgEs, activa mastcitos. Os mediadores lipdicos e as citocinas produzidas pelos mastcitos e pelas clulas T recrutam eosinfilos, basfilos e mais clulas T H2. A inflamao crnica nesta doena pode continuar sem activao de mastcitos. Mastctos, basfilos e eosinfilos produzem mediadores que contraem o msculo liso nas vias areas. Os mediadores broncoconstritores mais importante so LTC4, LTE4, LTD4 e PAF. A secreo de muco aumentada resulta da aco de citocinas sobretudo IL-13, nas clulas epiteliais brnquicas.

TERAPIA
A terapia actual tem dois alvos principais: - preveno; - reverso da inflamao e relaxamento do msculo liso das vias areas. Recentemente, existe uma tendncia para uma maior utilizao de agentes antiinflamatrios como primeiro recurso de tratamento, mas existem diversas classes de frmacos para o tratamento de asma: Corticoesterides bloqueiam a produo de citocinas pr-inflamatrias. Activadores da adenilato ciclase (epinefrina e agentes B2-adrenrgicos semelhantes). A teofilina enibe enzimas fosfodiesterase (que degradam cAMP) e, assim, produz semelhante efeito. Apresenta alguns efeitos anti-inflamatrios independentes do relaxamento muscular. Inibidores de leucotrienos Anticorpos anti-IgE monoclonais Os anti-histamnicos no so particularmente teis, uma vez que a histamina tem uma fraca participao no processo. Na verdade, como muitos anti-histamnicos so tambm anticolinrgicos, estes podem agravar a obstruo area ao aumentar a secreo de muco.

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A HIPTESE HIGINICA
De uma maneira geral, a prevalncia de doenas alrgicas tem vindo a aumentar. Uma das teorias que pretende explicar este facto avana que esta reduo est relacionada com a reduo de infeces. Respostas de imunidade inata associadas maioria das infeces promovem respostas TH1 e suprimem respostas TH2. Existem diversos dados epidemiolgicos que parecem comprovar esta hiptese. Contudo, no caso da asma, infeces bacterianas e virais so um factor de predisposio ao desenvolvimento da doena ou exacerbao da doena j existente. Estima-se que 80% dos ataques de asma nas crianas seja precedido por uma infeco viral. Esta associao da asma com infeces parece contradizer a hiptese anterior esperar-se-ia que as infeces estimulassem a imunidade inata e, assim, suprimissem as respostas TH2. A compreenso actual sobre como os linfcitos T participam na asma ainda incompleta.

REACES DAS VIAS AREAS SUPERIORES, TRACTO GASTROINTESTINAL E PELE

Caractersticas gerais - tambm chamada febre do feno - provavelmente a doena alrgica mais comum - consequncia de reaces de hipersensibilidade imediata a alergnios comuns, como o ples, ps por inalao hipersensibilidade imediata a alimentos ingeridos libertao de mediadores dos mastcitos da mucosa e submucosa intestinal Manifestaes clnico-patolgicas edema da musoca infiltrao leucocitria com abundncia de eosinfilos secreo de muco tosse espirros dificuldade em respirar conjuntivite alrgica com comicho nos olhos doentes com episdios repetidos frequentes: protruses focais na musoca nasal (plipos nasais), com edema e eosinfilos peristaltismo aumentado secreo de fluido aumentada das clulas de revestimento do tracto vmito diarreia urticria choque anafiltico caso extremo Teraputica Antihistamnicos

Alergias a alimentos

Renite alrgica

Urticria - reaco aguda da pele em resposta a contacto directo com o alergnio ou aps a entrada do alergnio em circulao mediada por produtos dos mastcitos (sobretudo histamina) - pode persistir durante umas horas, provavelmente porque o antignio continua no plasma Eczema crnico - tambm dermatite atpica; poder ser causado pela late-phase reaction a um alergnio na pele - late-phase reaction cutnea envolve TNF, IL-4 e outras citocinas provavelmente das clulas Th2 e mastcitos actuam nas clulas endoteliais das vnulas para promover a inflamao (tambm utilizada a designao de eczema para sensibilidade por contacto crnica, que uma reaco DTH mediada por clulas TH1)

Urticria antihistamnicos Eczema Corticosterides (inibem sntese de citocinas)

Reaces da pele 160

IMUNOTERAPIA
O objectivo reduzir a quantidade de IgE produzida pelo doente quando exposto ao antignio. Uma das abordagens a dessensitizao, em que pequenas quantidades de antignio so administradas subcutnea e repetidamente. Os nveis de IgE especficos diminuem e os nveis de IgG normalmente aumentam, provavelmente tambm contribuindo para uma inibio na produo de IgE, ao neutralizar o antignio. Como que a dessesintizao funciona? possvel que induza tolerncia especfica nas clulas T ou altere o fentipo predominante das clulas T especficas para antignio de TH2 para TH1. No existem provas suficientemente satisfatrias para corroborar qualquer das teorias. Os efeitos benficos da dessensitizao podem ocorrer numa questo de horas, ainda antes das alteraes nos nveis de IgE. Desconhece-se a razo. Esta abordagem bem sucedida na preveno de respostas anafilticas agudas a antignios proteicos, por exemplo veneno de um insecto, ou a frmacos essenciais, como a penicilina. Anticorpos anti-IgE monoclonais so outra abordagem para a diminuio dos nveis de IgE.

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T11: Memria imunolgica, adjuvantes e vacinas

Data terica de 31 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 15 e 4 Captulos do Arosa: 13 Slides aulas: Sim Elaborado por: Joo Pedro Apolinrio

ESTRATGIAS PARA O DESENVOLVIMENTO DE VACINAS

A importncia da imunizao profiltica adquire nos nossos dias uma grande importncia, facto que pode ser mais facilmente compreendido se observamos os resultados de programas de vacinao a nvel mundial que conduziram completa ou quase completa erradicao de muitas doenas infecciosas em pases desenvolvidos estando o sucesso destas aces dependente de vrias propriedades do microrganismo. O princpio fundamental da vacinao bastante simples e consiste na administrao do agente infeccioso da doena morto, atenuado (pouco agressiva) ou ento parte de um microrganismo que no causa a doena mas que induz uma resposta imunitria que fornece proteco contra a aco do agente na sua forma mais agressiva (microrganismo patognico). O que torna as vacinas eficazes? A ausncia de estabelecimento de latncia por parte dos agentes infecciosos. A ausncia de variao antignica dos agentes A ausncia de interferncia com a resposta imunitria do hospedeiro

Um exemplo amplamente conhecido de um agente que contorna estas trs condies o HIV. Importa ainda ter em conta que as vacinas so mais eficazes quando os agentes infecciosos colonizam apenas hospedeiros humanos e no reservatrios animais. A maioria das vacinas que se encontram em utilizao actualmente possuem mecanismos de funcionamento que induzem/estimulam a imunidade humoral. Destes, os anticorpos so o nico mecanismo que previne infeces por neutralizao e eliminao dos microrganismos antes de estes se estabelecerem no hospedeiro. De entre as vrias vacinas que se encontram disponveis, as mais eficazes so as que estimulam o desenvolvimento de clulas de vida longa (produtores de anticorpos de alta afinidade) e de clulas B de memria. 162

Esta resposta mais eficazmente induzida nos centros germinativos atravs da ajuda de clulas T CD4+ produtoras de protenas especficas de antignios. Vejamos ento algumas caractersticas mais especficas da vacinao passando pelos tipos de vacinas mais importantes bem como o que estes trazem de bom e algumas das suas desvantagens.

VACINAS DE BACTRIAS E VRUS ATENUADOS OU INACTIVADOS

Vacinas compostas por microrganismos no patognicos intactos so obtidas de uma de duas formas: atravs do tratamentos desses mesmos microrganismo de forma a que j no possam voltar a causar doena (ex. a sua virulncia atenuada) ou ento matando os microrganismos mantendo contudo a sua capacidade imunognica. VANTAGENS: Os microrganismos provocam as respostas imunes inatas e adaptativas (humoral e mediada por clulas) que a forma patognica teria, constituindo a forma ideal de conferir uma imunizao protectora. DESVANTAGENS: Induzem, geralmente, uma proteco limitada So efectivas apenas durante um curto perodo de tempo Ao contrrio do que se passa com as bactrias, as vacinas virais com o agente num estado atenuado (ainda que vivo) demonstram ser mais efectivas sendo os casos da poliomielite, sarampo e febre amarela bons exemplos deste sucesso. O mtodo mais utilizado para produzir estes vrus atenuados a passagem repetida em cultura celular sendo que mais recentemente, mutantes sensveis deleco e temperatura foram criados para alcanar o mesmo objectivo. VANTAGENS: Induzem imunidade especfica de longa durao (imunizao enquanto criana confere proteco para toda a vida) DESVANTAGENS: Algumas vacinas de vrus atenuados (ex. polio) podem causar doena em hospedeiros imunocomprometidos (a alternativa so as vacinas de poliovirus inactivado)

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Uma outra desvantagem transversal quer s bactrias quer aos vrus atenuados reside na segurana do processo. Apesar destes inconvenientes existem casos de vacinas de vrus atenuados que adquirem nos nossos dias uma importncia considervel para a sade pblica como o caso da vacina do vrus influenza. Este vrus, que cresce em ovos de galinha, pode ser utilizado para a criao de dois tipos de vacinas: VACINA TRIVALENTE INACTIVADA (VRUS MORTO): flu shot administrado intramuscularmente VACINA TRIVALENTE ATENUADA (VRUS VIVO): administrao atravs de spray nasal

A enorme variabilidade deste vrus requer uma intensa actualizao da vacina em causa pelo que so seleccionadas anualmente as trs estirpes mais frequentemente encontradas na populao sendo estas incorporadas na vacina j existente.

VACINAS DE ANTIGNIOS PURIFICADOS (SUBUNIDADES)

As vacinas de subunidades so compostas por antignios purificados a partir de microrganismos ou toxinas inactivadas sendo normalmente administrados com um adjuvante. Importa por isso saber o que so os adjuvantes e para que servem. Os adjuvantes so substncias que precisam de ser administradas em conjunto com antignios proteicos purificados para induzir uma resposta imunitria mxima de clulas T dependentes, actuando por estimulao da resposta imune inata no local de exposio ao antignio. Muitos dos adjuvantes que se encontram em fase de experimentao so produtos microbianos como Mycobacteria morta e os LPS (que se ligam aos TLRs). O nico que frequentemente utilizado em vacinas humanas o alum, composto por hidrxido e fosfato de alumnio. EFEITOS PRINCIPAIS: Activao de clulas dendrticas para expressarem molculas de histocompatibilidade mais importantes (parte dos antignios que as cluas T reconhecem) Aumentam a expresso de coestimuladores e citocinas necessrias para a activao de clulas T Estimulam a migrao de clulas dendrticas para os ndulos linfticos (local onde se encontram as clulas T) Uma das importantes utilizaes deste tipo de vacinas prende-se com a preveno de doenas causadas por toxinas bacterianas uma vez que os toxoides injectados produzem uma forte resposta imunitria, atravs da produo de anticorpos, ainda que 164

estes no sejam patognicos. Duas das doenas cujas complicaes conseguiram ser controladas com estas vacinas foram a difteria e o ttano. Vacinas compostas por antignios polissacridos de bactrias so utilizadas contra pneumococcus e H. influenzae. Contudo, devido ao facto de os polissacridos serem antignios T independentes, estes tendem a provocar respostas de anticorpos de baixa afinidade e podero ser fracamente imunognicos em crianas (incapazes de montar fortes respostas de anticorpos Tcell-independentes). Como podemos ento obter respostas de anticorpos de alta afinidade? Estas respostas podem ser geradas contra antignios polissacridos at mesmo em crianas atravs do acoplamento destas molculas a protenas a fim de formar vacinas conjugadas. Estas vacinas funcionam como hapten-carrier conjugados e constituem uma aplicao prtica do princpio da cooperao entre clulas T e B. As vacinas H. influenzae, pneumococica e meningoccica utilizadas hoje em dia so vacinas conjugadas. VANTAGENS DAS VACINAS DE PROTENAS PURIFICADAS: Estimulam as clulas T helper Estimulam a respota de anticorpos DESVANTAGENS: No geram CTLs (linfcitos T citotxicos) potentes No so eficazmente reconhecidas pelas class 1-restricted CD8+ T cells

Este fraco desenvolvimento de CTL deve-se ao facto de as protenas e pptidos exgenos no conseguirem entrar eficazmente na via de apresentao de antignios da classe 1 do MHC no conseguindo assim deslocar pptidos das molculas de superfcie de classe 1. A razo para o fraco desenvolvimento de CTL que, ao contrrio das vacinas de microrganismos atenuados, as protenas (e pptidos) exgenos no so eficazes na entrada na via de apresentao de antignios da classe 1 do MHC e no consegue deslocar pptidos das molculas de superfcie de classe 1.

VACINAS DE ANTIGNIOS SINTTICOS

A meta da investigao na rea da vacinao tem sido identificar os antignios microbianos ou estirpes mais imunognicos, a fim de os sintetizar em laboratrio para posteriormente utilizar os antignios sintticos como vacinas. possvel deduzir a sequncia de protenas de antignios microbianos a partir de dados de sequncias nucleotdicas e preparar grandes quantidades de protenas atravs da tecnologia de DNA recombinante. Algumas vacinas feitas a partir de

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antignios derivados da recombinao de DNA esto neste momento em utilizao para o vrus da hepatite, vrus herpes simplex, vrus da febre afetosa, HPV e rotavrus. No caso da vacina mais amplamente utilizada contra o HPV, protenas virais recombinantes provenientes de quatro estirpes (HPV 6, 11, 16 e 18) so produzidas em leveduras e combinadas com um adjuvante. O HVP 6 e 11 so causas comuns de verrugas sendo o HPV 16 e 18 as estirpes mais frequentemente ligadas ao cancro do colo do tero. Esta vacina anti-viral tambm, portanto, uma vacina que funciona como preveno para o cancro.

VACINAS DE VRUS VIVOS ENVOLVENDO VRUS RECOMBINANTES

Outra abordagem para o desenvolvimento de uma vacina a introduo de genes que codificam antigneos microbianos em vrus no citopticos e infectar indivduos com estes vrus. Assim, o vrus serve como fonte de antigneo num indivduo inoculado. VANTAGENS: Induzem a totalidade do complemento das respostas imunes, incluindo uma forte resposta CTL DESVANTAGENS: Os vrus podem infectar clulas do hospedeiro e, apesar de no serem patognicos, produzir antignios que estimulam respostas CTL que matam as clulas infectadas do hospedeiro Segurana A inoculao destes vrus recombinantes em vrias espcies animais induziu tanto a imunidade humoral como a mediada por clulas contra o antignio produzido pelo gene estranho (e, claro, contra antignios virais da vacina tambm).

VACINAS DE DNA
Um outro mtodo de vacinao foi desenvolvido com base numa observao feita inesperadamente. Aps a inoculao de um plasmdeo contendo DNA complementar (cDNA) que codifica um antignio proteico verificou-se que este leva a uma forte e duradoura resposta, quer humoral quer mediada por clulas, ao antignio em questo. provvel que APCs (clulas apresentadoras de antignios), como as clulas dendtrticas, sejam transfectadas pelo plasmdeo e o cDNA seja transcrito e traduzido numa protena imunognica que provoca respostas especficas.

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A caracterstica nica das vacinas de DNA que estas fornecem a nica abordagem, para alm dos vrus vivos, para provocar fortes respostas de CTL devido s protenas codificadas pelo DNA serem sintetizadas no citosol de clulas transfectadas. Para alm disso, os plasmdeos bacterianos so ricos em nucletidos CpG no metilados sendo reconhecidos por um TLR (TLR9) nomeadamente ao nvel das clulas dendrticas, induzindo assim uma resposta imune inata que melhora a imunidade adaptativa. Portanto, vacinas contendo plasmdeos de DNA podem ser eficazes mesmo quando administradas sem um adjuvante. VANTAGENS: Facilidade de manipulao do cDNA de forma a que estes expressem muitos antignios Capacidade de armazenar DNA sem necessitar de regrigerao para uso no terreno Capacidade de coexpressar outras protenas que podem molhorar a resposta imune (citocinas e coestimuladores) Contudo, as vacinas de DNA no foram to eficazes como se esperava em ensaios clnicos, e os factores que determinam a eficcia destas vacinas, especialmente em humanos, no esto ainda completamente definidos.

ADJUVANTES E IMUNOMODULADORES
O incio de uma resposta imune dependente de clulas T contra antignios proteicos requer que os antignios sejam administrados com adjuvantes. A maioria dos adjuvantes induz uma resposta imune inata, com aumento de expresso de coestimuladores e produo de citocinas como a IL-12 que estimula o crescimento e diferenciao de clulas T. Bactrias mortas atravs de calor so potentes adjuvantes, sendo frequentemente utilizados em experincia em animais. Contudo, a forte inflamao local que estes adjuvantes despoletam impede a sua utilizao em humanos. Um enorme esforo est neste momento a ser dedicado ao desenvolvimento de adjuvantes seguros e efectivos para utilizar em humanos. Vrios so utilizados na prtica clnica, incluindo o gel de hidrxido de alumnio (que promove a resposta de clulas B) e formulaes lipdicas que so ingeridas por fagcitos. Uma alternativa aos adjuvantes a administrao de substncias naturais que estimulam a resposta imune de clulas T. Por exemplo, IL-12 incorporada em vacinas promove uma forte imunidade mediada por clulas. Como j foi mencionado, os plasmdeos de DNA tm actividade intrnseca como adjuvantes e possvel incorporar coestimuladores (ex. molculas B7) ou citocinas em vacinas com plasmdeos de DNA. Esta ideia apesar de interessante permanece numa fase experimental.

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IMUNIZAO PASSIVA
A imunidade protectora pode tambm ser conferida atravs de uma imunizao passiva, por exemplo, por transferncia de anticorpos especficos. Num contexto clnico, a imunizao passiva frequentemente utilizada para o tratamento rpido de doenas potencialmente fatais causadas por toxinas, como o ttano, e para proteco contra a raiva e hepatite. Outro caso bastante conhecido no qual se utiliza este tipo de imunizao nos ataques levados a cabo por cobras. Os anticorpos contra o veneno de cobra podem ser autnticos salva-vidas quando administrados aps a mordida de cobras venenosas. A imunidade passiva de curta durao devido ao facto de os hospedeiros no responderem imunizao e tambm porque a proteco dura apenas enquanto os anticorpos injectados persistem no organismo. Alm disso, a imunizao passiva no induz memria imunitria pelo que um indivduo imunizado no se encontra protegido contra uma exposio subsequente toxina ou microrganismo.

Tipo de Vacina
Bactrias vivas atenuadas ou mortas Vrus vivos em estado atenuado Vacinas de subunidades (antignicas) Vacinas conjugadas Vacinas sintticas Vectores virais Vacinas de DNA

Exemplos
Bacillus Calmette-Gurin, clera Poliomielite, raiva Toxide do ttano e difteria Haemophilus influenzae, pneumococcus Hepatite (proteinas recombinantes) Ensaios clnicos de antignios do HIV em vectores canarypox Ensaios clnicos para vrias doenas

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T12: Imunodeficincias secundrias-HIV/SIDA

Data terica de 6 de Janeiro 2012
Captulos do Abbas: 20 Slides aulas: no

Elaborado por: Manuel Matos

INTRODUO
SIDA a doena provocada pelo vrus HIV, vrus descoberto nos anos 80, caracterizada por uma acentuada imunossupresso associada a doenas oportunistas, degenerao do sistema nervoso central e tumores malignos . A distribuio da infeco por HIV bastante assimtrica, tendo um grande impacto em frica, sobretudo na frica sub-sariana, mas distribuindo-se por todo o planeta. Os nmeros continuam a ser extremamente elevados e continua a existir uma grande necessidade de preveno. Este vrus infecta principalmente clulas CD4+ Th, macrfagos e clulas dendrticas.

CARACTERSTICAS MOLECULARES BIOLGICAS DO VRUS

O HIV pertence famlia dos lentivrus dentro dos retrovrus animais, e existem dois tipos que diferem na estrutura genmica e antignica: HIV-1: Causador mais comum de SIDA HIV-2: Causa uma menor progresso da doena

ESTRUTURAS E GENES DO HIV

O HIV constitudo por: 2 cadeias de RNACamada proteicaCamada de fosfolpidos (origem na clula hospedeira mas com protenas membranares virais.

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Os genes so:

LTR- Repeties terminais longas: Presentes no princpio e fim de cada cadeia regulam a expresso gnica, a integrao no genoma hospedeiro e a replicao viral. gag- codifica protenas estruturais do ncleo env- codifica as glicoprotenas membranares gp120 e gp41 que esto associadas uma outra. pol- codifica a transcriptase reversa, integrase e enzimas proteases que participam na replicao viral tat- Necessria para alongar o tamanho dos transcritos rev- Promove a exportao nuclear de partculas do RNA viral que no foram completamente emendadas vif- Supera o efeito inibidor da enzima da clula do hospedeiro e promove a replicao viral nef- Inibe a expresso de CD4 e MHC classe I pela clula hospedeira e acentua a liberao do vrus vpr- Aumenta a replicao viral e promove a infeco dos macrfagos pelo HIV vpu- Inibe a expresso de CD4 na clula hospedeira e acentua a liberao do vrus

CICLO DE VIDA VIRAL

1. Ligao do vrus ao hospedeiro: Ligao das subunidades gp120 do envelope a molculas CD4 induz uma mudana conformacional que induz uma ligao secundria da gp 120 a um co-receptor de quiomiocina (os co-receptores de quimiocinas mais importantes so o CCR4 e o CCR5 e mais de 7 receptores de quimiocinas actuam como co-receptores para o HIV e tambm algumas protenas da famlia dos receptores ligados protena G que atravessam a membrana 7 vezes) A ligao quimiocina expe uma regio hidrofbica da gp41 chamada pptido de fuso que se insere na membrana celular o que leva fuso das membranas

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2. Quando o vrus entra na clula as enzimas dentro do complexo nucleoproteico ficam activas e inicia-se o ciclo de reproduo viral. O RNA viral , pela aco da transcriptase reversa, transcrito em cDNA e o DNA viral entra no ncleo. 3. A integrasse viral entra no ncleo e cataliza a integrao do DNA viral no DNA hospedeiro. 4. O DNA integrado chama-se provrus e pode ficar inactivo durante meses ou anos provocando uma infeco latente. 5. Devido a estmulos por parte de citocinas, antignios ou outros agentes que atingem as clulas T, moncitos e macrfagos, inicia-se a transcrio do DNA viral. Esta activao relaciona-se com os factores de transcrio NF-B e SP1da clula hospedeira e a sequencia viral LTR. 6. Inicia-se ento o processo de produo das protenas virais comeando com os genes Ver, Tat e Nef necessrios para a regulao da expresso gentica do vrus. 7. A protena Ver, pela exportao dos segmentos genticos que codificam as protenas estruturais do vrus do ncleo para o citoplasma, inicia a segunda fase de produo proteica. 8. Aps a transcrio dos vrios genes virais ocorre a montagem dos componentes virais que comea com o envolvimento de transcritos de RNA viral num complexo nucleoproteico que inclui protenas nucleares gag e enzimas pol. 9. O complexo nucleoproteico funde-se com a membrana plasmtica, capturando Env e glicoprotenas do hospedeiro.(a teterina um factor do hospedeiro que impede a libertao do vrus, no entanto a protena viral Vpu inibe este factor)

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ESPECIFICIDADE DO HIV
Existem vrios subtipo do HIV que apresentam diferente tropismo para distintos tipos de clulas (macrfagos ou clulas T CD4+). Este tropismo est relacionado com a especificidade das variantes da gp120 para os diferentes receptores de quimiocinas. Apesar de todos os tipos de HIV poderem infectar clulas T CD4+ os que infectam primariamente culturas de macrfagos de denominam-se M-trficos ou Macrofagotrficos e apresentam uma gp120 que se ligam ao receptor CCR5 (ou R5) expresso nos macrfagos. As que infectam linhagens de clulas T e no macrfagos chamam-se (T-trficos) e as suas gp120 ligam-se ao receptor CXCR4 (ou X4) expresso nas clulas T CD4+ . Alguns tipos de HIV infectam indiscriminadamente os dois tipos de clulas e chamam-se duotrficos. Apesar das variantes T-trficas serem mais virulentas foi relatado que indivduos que no apresentam o receptor R5 (das M-trficas) so resistentes a infeco pelo HIV.

PATOGNESE DA INFECO PELO HIV E SIDA

A doena causada pelo HIV comea com uma infeco aguda parcialmente controlada pelo sistema imunitrio adquirido, avanando para uma infeco crnica progressiva dos tecidos linfides perifricos. Aps a entrada do vrus podemos dividir a infeco em vrias fases: 1. Infeco aguda (inicial): caracterizada pela infeco das clulas T CD4+ de memria (que expressam CCR5) nos tecidos linfides da mucosa e a morte de vrias clulas infectadas. Uma vez que as mucosas so o principal reservatrio de clulas T aps 2 semanas de infeco a maioria destas podem ter sido destrudas. 2. Transio da fase aguda para fase crnica: Esta transio caracterizada pela disseminao do vrus, viremia e o desenvolvimento de respostas imunolgicas pelo hospedeiro. Clulas denditricas capturam o vrus e migram para os linfonodos No tecido linfide as clulas dendrticas podem passar o virus para as clulas CD4+ A replicao do vrus no tecido linfide leva a uma virmia (presena de vrus no sangue) A virmia permite que o vrus se espalhe pelo organismo e infecte clulas T auxiliares, macrfagos e clulas dendrticas nos tecidos linfides perifricos. 172

Conforme a infeco se dissemina o sistema imunolgico desenvolve respostas imunitrias humorais e celulares que reduzem a viremia e so detectveis 12 semanas aps a infeco inicial. Atinge-se uma fase crnica em que o vrus se replica e localiza-se principalmente no bao e linfonodos . Nesta fase o organismo ainda capaz de combater infeces oportunistas, compensando a perda de clulas T CD4+ mas o nmero destas vai sendo progressivamente mais reduzido. Esta fase tambm chamada de fase de latncia. Ao fim de vrios anos o nmero de clulas T diminui drsticamente e os estmulos de citocinas produzidas em resposta a infeces por outros microrganismos acentuam a reproduo do HIV e levam instalao da SIDA.

MECANISMOS DE IMUNODEFICIENCIA CAUSADA PELO HIV

O efeito que o HIV produz no sistema imunitrio, especialmente na imunidade celular, pode ser atribuido a diversos mecanismos: Efeito citolgico directo da infeco por HIV: Morte das clulas T CD4+ associada produo de vrus nas celulas infectadas por vrios motivos processo de produo do vrus e brotamento das particulas virais leva ao aumento da permeabilidade da membrana e influxo de quantidades letais de clcio, interferencia da produo viral na sntese celular de protenas e formao de sinccio (as membranas das clulas infectadas que apresentam gp120 viral fundem-se com os receptores CD4 das clulas no infectadas criando clulas gigantes multinucleadas, ou sinccio). Destruio de clulas T infectadas pelo sistema imunitrio: Tanto as defesas humorais como as defesas celulares vo provocar a destruio dos linfcitos T que apresentem protenas membranares que indiquem estar infectadas. Defeitos funcionais no sistema imunitrio de portadores de HIV exacerbam a deficiencia imunitria causada pela depleo de clulas T CD4+: Estes defeitos funcionais incluem uma reduo nas respostas das clulas T aos antignios e uma resposta humoral fraca que podem ser resultantos dos efeitos directos da infeco pelo HIV nas clulas T CD4+, como por exemplo a libertao de gp120 solvel por parte das clulas infectadas que interage com clulas no infectadas, reduzindo a resposta celular a antignios. Macrfagos, clulas denditricas e clulas denditricas foliculares so infectadas com o vrus e afectadas por este, e anormalidades nestas clulas tambm contribuem para a progresso da imunodeficiencia. Apesar dos macrfagos poderem ser infectados pelo vrus (apresentam CD4 e co-receptores CCR5) normalmente no so facilmente mortos por estes, tornando-se um reservatrio do HIV. As clulas dendrticas, como os macrfagos tambm se tornam reservatrios e o seu contacto intimo com clulas T naive contribui para a proliferao do vrus. As clulas foliculares dendriticas so reservatrios de vrus superficie (uma vez que o virus tem dificuldade em infecta-las) e por um mecanismo ainda no conhecido o HIV pode induzir a morte destas clulas, o que afecta o sistema linfide perifrico.

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MODO DE TRASMISSO:
Contacto sexual Transmisso me-filho Tramisso por inoculao sangunea (sangue-sangue)

RESPOSTA IMUNITRIA
Apesar da resposta imunitria ao vrus ser ineficaz na cura total torna-se necessrio estud-la por vrias razes: As respostas imnunitrias podem ser prejudiciais ao hospedeiro por estimular, por exemplo, a captura de vrus opsonizados (processo que facilita a fagocitose) por clulas no infectadas atravs de endocitose mediada pelo receptor Fc ou pela irradicao das clulas T CD4+ que expressam antignios virais pelos CTLs CD8+. Os anticorpos contra o HIV so marcadores de diagnstico de infeco. O desenvolvimento de vacinas eficazes na imunizao contra HIV exige o conhecimento do tipo de respostas imunitrias que tm maior probabilidade de ser protectoras. A resposta imunitria inicial caracterizada pela expanso de clulas T CD 8+ especficas para pptidos virais. Estes linfcitos T citotxicos contram a infeco na fase aguda mas acabam por ser ineficazes devido ao surgimento de mutantes do vrus. As clulas CD4+ auxiliam na formao de LTC de memria. A presena de anticorpos anti-HIV pode ser detectada 6 a 9 semanas aps a infeco inicial. Os anticorpos mais comuns encontrados so anti-gp120 e anti gp-41 mas tambm podem ser encontrados anticorpos para produtos da p24, transcriptase reversa gag e pol.

MECANISMOS DA INVASO POR HIV

Vrias caractersticas do HIV permitem que o vrus evada a resposta imunitria do hospedeiro: Elevada taxa de mutao: Devido elevada taxa de erros associada transcrio reversa geram-se numerosas mutaes no vrus que permitem evitar a deteco por anticorpos ou clulas T geradas em resposta infeco. A componente antignica mais varivel do vrus localiza-se na molcula gp120 e denomina-se V3 loop. As clulas infectadas podem evadir os LTC atravs da inibio da expresso das molculas do MHC classe I pela aco de uma protena chamada Nef

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TRATAMENTO
Consiste principalmente na administrao de vrias classes de antivirais (antiretrovirais): Nuclesidos: Inibiem a aco da transcriptase reversa, uma vez que param a transcrio (AZT, desoxiadenosina). Inibidores da transcriptase reversa no-nucleosdicos: So molculas que inibem a transcrio reversa pela ligao directa molcula e sua inactivao. Inibidores de protease viral: Bloqueiam o processamento de percursores proteicos em protenas da cpsula viral e ncleo. So utilizados juntamente com 2 diferentes inibidores da transcriptase reversa e formam um medicamento conhecido como HAART ou ART. Inibidores de entrada: Impede a entrada do vrus, tendo como alvo ou as protenas CD4 ou CCR5 da clula hospedeira ou gp41/gp120 do vrus. Inibidores da integrase.

VACINA
Ainda no existe uma vacina para o HIV devido a vrias questes que se apresentam, como por exemplo a elevada taxa de mutao viral. No entanto esto a ser testadas vrias vacinas que incuem recombinantes hibrdos com partes de sequencias virais de SIV (simian imunodeficiency virus) e HIV que foram atenuadas por delees. Uma vez que pode haver riscos envolvidos na utilizao de vrus, ainda que atenuados, outra alternativa ser a utilizao de recombinantes no HIV que sirvam de vectores para os antignios HIV . O que define, ao certo, a afinidade de cada TCR e de um linfcito a um tipo de MHC ainda est por descobrir. A verdade que, no final da seleco positiva, resta apenas um dos co-receptores que existiam inicialmente, CD4 e CD8.

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