ATLAS de HISTOLOG IA VEGETAL y ANIMAL

CITOLOG IA 6 - Peroxisomas, mitocondrias y cloroplastos

Pilar Molist Manuel A. Pombal Manuel Meg as Depto. de Biolog a Funcional y Ciencias de la Salud Facultad de Biolog a Universidad de Vigo
(Versi on: Mayo 2011)

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1.

INTRODUCCION

En este apartado vamos a agrupar a tres org anulos que no tienen demasiadas cosas en com un: peroxisomas, mitocondrias y cloroplastos. Sin embargo, los tres incorporan prote nas que han sido traducidas en el citosol, que se desplazan por difusi on y son incorporadas gracias a la existencia de p eptidos se nal espec cos en sus secuencias y a receptores que las reconocen localizados en sus membranas. Estos org anulos est an fuera de la ruta vesicular, es decir, no se comunican entre ellos ni con otros org anulos mediante el env o o recepci on de ves culas. Los peroxisomas son org anulos rodeados por una unidad de membrana que poseen una alta actividad metab olica relacionada con procesos se oxidaci on. Las mitocondrias y los cloroplastos son org anulos rodeados por una doble unidad de membrana y son las principales centrales energ eticas de las c elulas eucariotas. Las mitocondrias realizan la fosforilaci on oxidativa para la producci on de ATP, adem as de llevar a cabo ciertos procesos metab olicos. Los cloroplastos, que forman parte de un grupo de org anulos denominados plastos, se encuentran en las c elulas vegetales y realizan la fotos ntesis, proceso mediante el cual se consigue transformar la energ a de la radiaci on electromagn etica de la luz en la energ a de enlaces qu micos. En los siguientes apartados vamos a ver estos tres org anulos.

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PEROXISOMAS

Los peroxisomas son org anulos delimitados por una membrana, que a veces presentan inclusiones cristalinas en su interior debido a la gran cantidad de enzimas que llegan a contener. Deben su nombre a que las primeras enzimas que se descubrieron en su interior fueron las peroxidasas. Pero pueden existir m as de 50 enzimas diferentes localizadas en el interior del org anulo. Los tipos de enzimas presentes pueden variar dependiendo del tipo celular y del estado siol ogico de la c elula. Las rutas metab olicas principales que llevan a cabo son la -oxidaci on de los acidos grasos y la eliminaci on del per oxido de hidr ogeno (H2 O2 ). Son un centro de alta utilizaci on de ox geno y por tanto de procesos oxidativos. Dos enzimas son t picas de este org anulo: la catalasa y la urato oxidasa. Las reacciones de oxidaci on siguen el patr on siguiente: RH2 +O2 = R + H2 O2 . El per oxido de hidr ogeno es una mol ecula altamente reactiva y por tanto muy t oxica. La catalasa permite su inactivaci on mediante la siguiente reacci on: H2 O2 + R-H2 = R + 2H2 O. En las plantas y en los hongos la -oxidaci on se lleva a cabo exclusivamente en los peroxisomas, mientras que en las c elulas animales tambi en se realiza en las mitocondrias. En las plantas, los peroxisomas tambi en oxidan productos residuales de la jaci on de CO2 . A este proceso se le denomina fotorrespiraci on porque usa ox geno y libera CO2 . En las semillas, sin embargo, su funci on es la de almacenar sustancias de reserva y durante la germinaci on transformar an los acidos grasos en az ucares. A estos peroxisomas se les llama glioxisomas, que tambi en aparecen en las c elulas de los hongos lamentosos. Es interesante rese nar que cuando comienza la fotos ntesis, tras la aparici on de las primeras hojas, los glioxisomas se transforman en peroxisomas de las hojas. En los tripanosomas, par asitos causantes de la malaria, existen unos peroxisomas especializados en llevar a cabo glucolisis y se denominas glucosomas. En conjunto, a los diferentes tipos o especializaciones de los peroxisomas se les llama microcuerpos. La biog enesis o formaci on de nuevos peroxisomas en una c elula ha sido hist oricamente controvertida. Im agenes tempranas de microscop a electr onica indicaban su formaci on a partir del ret culo endoplasm atico. Esto era dif cil reconciliarlo con la s ntesis citos olica de sus prote nas, lo que llev o a la idea de que eran org anulos aut onomos como las mitocondrias y los cloroplastos. Pero ciertos experimentos demostraron que algunas c elulas que carec an completamente de peroxisomas pueden volver a regenerarlos. Algunas im agenes de microscop a electr onica muestran un 4

proceso continuado de estructuras que se van formando desde el ret culo endoplasm atico como son lamelas, ret culo preperoxisomal y peroxisoma maduro (lamelas y ret culo peroxisomal son compartimentos intermedios entre el ret culo y el peroxisoma), lo cual demuestra que los peroxisomas se pueden formas a partir del ret culo endoplasm atico. Sin embargo, una vez que el peroxisoma est a aislado incorpora las prote nas a partir de aquellas sintetizadas en los ribosomas citos olicos. Estas prote nas tienen una secuencia se nal que es reconocida por receptores localizados en la membrana del peroxisoma. Las enzimas que van dirigidas al interior del org anulo son translocadas a trav es de la membrana. Todas las prote nas incorporadas a los peroxisomas muestran los mismos p eptidos se nal: PTS1 o PTS2 (peroxisome target sequence). Los peroxisomas, a pesar de que pueden formarse desde el ret culo, tienen la capacidad de dividirse mediante su crecimiento y estrangulamiento. Esto ocurre fundamentalmente durante la divisi on celular. El proceso es llevado a cabo por el citoesqueleto y por prote nas motoras, ayudados por puntos de anclaje a ciertos lugares de la c elula.

3.

MITOCONDRIAS

Las mitocondrias son org anulos que aparecen en pr acticamente todas las c elulas eucariotas. Una excepci on son los arqueozoos, eucariotas que no poseen mitocondrias, probablemente porque las perdieron durante la evoluci on. Est an formadas por una membrana externa, una membrana interna con muchos pliegues denominados crestas mitocondriales, un espacio intermembranoso y un espacio interno delimitado por la membrana interna denominado matriz mitocondrial. La morfolog a de las mitocondrias es muy cambiante y puede variar desde largas estructuras ramicadas a peque nos elipsoides. Se pueden dividir y fusionar entre s con facilidad, con la consiguiente mezcla de sus ADNs. Si se fusionan dos c elulas que tienen mitocondrias diferentes la poblaci on de mitocondrias es homog enea en 8 horas. Este proceso de fusi on y si on es complejo puesto que han de hacerlo las dos membranas de forma correcta. Las mitocondrias tienen una extraordinaria motilidad dentro de la c elula y suelen localizarse donde existe m as demanda de energ a. La membrana mitocondrial externa es altamente permeable y contiene muchas copias de una prote na de transporte denominada porina, la cual forma canales acuosos a trav es de la bicapa lip dica. As , esta membrana se convierte en una especie de tamiz que es permeable a todas las mol eculas menores de 5000 daltons, incluyendo prote nas peque nas. Por el contrario la membrana mitocondrial interna es impermeable al paso de iones y peque nas mol eculas, por tanto la matriz mitocondrial s olo contiene aquellas mol eculas que puedan ser transportadas selectivamente por esta membrana. As , su contenido es altamente diferenciado del citosol. En la matriz mitocondrial se encuentra el ADN, los ribosomas y los enzimas para llevar a cabo procesos metab olicos como la -oxidaci on. El ADN mitocondrial se encuentra en lugares denominados nucleoides y cada nucleoide puede tener m as de una mol ecula de ADN. Una mitocondria puede tener varios nucleoides. El ADN mitocondrial suele tener unos 16500 pares de bases con unos 37 genes que codican para 13 prote nas componentes de la cadena respiratoria, 2 ARNr y ARNt sucientes para la s ntesis de prote nas. Las funciones m as importantes de las mitocondrias son la producci on de ATP, que es el combustible de la mayor a de los procesos celulares, realizar el metabolismo de los acidos grasos por un proceso denominado -oxidaci on, actuar como almac en de calcio y otras funciones. Recientemente se han relacionado a las mitocondrias con la apoptosis, el c ancer, el envejecimiento, o con enfermedades como el Parkinson o la 6

Figura 1: Las mitocondrias muestran una morfolog a diversa, desde largas y ramicadas a
cortas y no ramicadas. Ultraestructuralemente presentan la membrana externa, el espacio intermembranoso, la membrana interna, que forma las crestas mitocondriales, y la matriz, que contiene el ADN y las mol eculas que llevan a cabo el metabolismo mitocondrial.

diabetes. Adem as, el estudio comparativo del ADN mitocondrial tiene una gran utilidad en el establecimiento de genealog as y en la antropolog a, ya que los genes mitocondriales provienen directamente por l nea materna y no est an sometidas a recombinaciones g enicas debido a la reproducci on sexual. Producci on de ATP En las mitocondrias se produce la mayor parte del ATP de las c elulas eucariotas no fotosint eticas. Metabolizan el Acetil coenzima A mediante el ciclo enzim atico del acido c trico, dando como productos al CO2 y al NADH. Es el NADH el que cede electrones a una cadena de transportadores de electrones que se encuentra en la membrana interna. Estos electrones pasan de un transportador a otro llegando como u ltimo paso al O2 , resultando H2 O. Este transporte de electrones se acopla al transporte de protones desde la matriz hasta el espacio intermembranoso. Este gradiente es el que permite la s ntesis de ATP gracias a la ATP sintasa. Por unir fosfato al ADP y por usar el ox geno como aceptor nal

de electrones, a este proceso se le llama fosforilaci on oxidativa. En las bacterias aer obicas, que no poseen mitocondrias, este proceso ocurre en sus membranas celulares.

Figura 2: La producci on de energ a en las mitocondrias es un proceso de dos pasos:

creaci on de un gradiente de protones en el espacio intermembranoso, producido por la cadena de transporte de electrones, y la s ntesis de ATP por la ATP sintasa, que aprovecha dicho gradiente. Los dos procesos est an asociados a la membrana mitocondrial interna, en las crestas mitocondriales.

Las prote nas que realizan el transporte de electrones y la ATP sintasa se encuentra en las crestas mitocondriales, los pliegues de la membrana interna. Precisamente la presencia de estos pliegues es una manera de incrementar la supercie en la que se asientan las prote nas de la fosforilaci on oxidativa. En una c elula hep atica la membrana mitocondrial interna puede suponer 1/3 del total de las membranas celulares. Existen m ultiples copias tanto de prote nas transportadoras como de ATP sintasas, pudiendo llegar hasta el 80 % del peso de la membrana mitocondrial. Cadena transportadora de electrones La cadena que lleva a cabo el transporte de electrones se conoce como cadena respiratoria. Contiene unas 40 prote nas, de las cuales 15 participan directamente en el transporte de electrones. Todas estas prote nas se agrupan en tres complejos proteicos, cada uno de los cuales contiene varias prote nas. Se denominan: complejo de la NADH deshidrogenasa, complejo citocromo b-c1 y complejo de la citocromo oxidasa. Cada uno de ellos tiene 8

grupos qu micos que permiten el paso de protones a su trav es movidos por el transporte de electrones. El recorrido de los electrones comienza cuando un ion hidruro es cedido por el NADH. De este ion se desprenden dos electrones y un prot on. Esto se produce en el complejo de la NADH deshidrogenasa, el cual acepta los electrones. Tales electrones pasan al complejo b-c1 gracias a mol eculas intermedias. Entre el primer complejo y el segundo act ua act ua prote na ubiquinona. El paso de los electrones por el complejo NADH-deshidrogenasa y b-c1 produce la extrusi on de dos protones, uno en cada complejo, desde la matriz hasta el espacio intermembranoso. Los electrones viajan entonces hasta el complejo citocromo C que transere electrones al complejo de la citocromo oxidasa. En este tercer complejo se transporta otro prot on al espacio intermembranoso y los electrones son aceptados por el ox geno. El proceso de transferencia de electrones es como en las pilas el ectricas donde los electrones pasan de un material cargado de electrones y con poca anidad por ellos a otro que tiene una mayor anidad. Ese salto desprende energ a que se utiliza para transportar protones en contra de su gradiente de concentraci on. Los electrones en el NADH, que est an retenidos con poca fuerza, saltan al complejo NADH y as sucesivamente. Si no existiesen los complejos de la cadena respiratoria la energ a, en vez de utilizarse para bombear protones, se perder a en forma de calor. El resultado es la creaci on de un gradiente de protones, 10 veces mayor en la matriz que en el espacio intermembranoso. Adem as, se crea un espacio cargado m as negativamente en la matriz como consecuencia de la salida neta de cargas positivas respecto al espacio intermembranoso, que se vuelve m as positivo. Se crea un gradiente electroqu mico que hace que los protones tiendan a entrar de nuevo en la matriz. ATP sintasa Este enzima crea una v a hidrof lica en la membrana mitocondrial interna que permite a los protones volver a favor de gradiente electroqu mico desde el espacio intermembranoso hasta la matriz mitocondrial. Este cruce se acopla a la producci on de energ a en forma de ATP. La ATP sintasa es un enzima altamente conservada durante la evoluci on y aparece en bacterias, en los cloroplastos de las c elulas fotosint eticas y en todas las mitocondrias. Es una prote na de gran tama no formada por muchas subunidades. El mecanismo de generaci on de ATP no

est a claro pero se sabe que por cada mol ecula de ATP se deben desplazar 3 protones. Es capaz de producir m as de 100 mol eculas de ATP por segundo. Un hecho interesante es que la ATP sintasa puede realizar el proceso contrario, es decir, usar ATP para bombear protones al exterior. Esto depender a de la concentraci on de protones a un lado y otro de la membrana. Otras funciones La s ntesis de ATP no es el u nico proceso en el cual se usa el gradiente de protones. Otras mol eculas cargadas como el piruvato, el ADP y el f osforo inorg anico son bombeados a la matriz desde el citosol, mientras que otras como el ATP, que se sintetiza en la matriz, deben ser transportados al citosol. El f osforo inorg anico y el piruvato son transportados acopl andose al ujo hacia el interior de los protones. En cambio el ADP se acopla en cotransporte antiporte con el ATP.

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4.

CLOROPLASTOS

Los cloroplatos son org anulos generalmente grandes (1 a 10 micras) que est an presentes en las c elulas vegetales. Una c elula de una hoja puede tener de 20 a 100 cloroplastos, mientras que las c elulas de las algas poseen unos pocos. Su forma es variable, desde esf erica o el ptica a mucho m as compleja asemejando cintas. Forman parte de un conjunto de org anulos denominados platidios o plastos. Los plastidios poseen en su interior ADN, el cual ha conservado unos 250 genes de su ancestro bacteriano que codican para ARN ribos omico, ARN de transferencia y para ARN mensajero que se traducir an en prote nas para la divisi on y para la realizaci on de la fotos ntesis en el caso de los cloroplastos. Hay distintos tipos de plastidios: los leucoplastos no poseen clorola sino que almacenan sustancias, como es el caso de los amiloplastos que almacenan almid on, los proteinoplastos que almacenan prote nas o los elaioplastos que almacenan l pido; los cromoplatos contienen ciertos pigmentos como los carotenos o las xantolas; los cloroplastos que producen clorola y realizan la fotos ntesis. Todos derivan de los denominados proplatidios que est an presentes en las c elulas meristem aticas y dependiendo del tipo celular se convertir an en un tipo de plastidio u otro. Su diferenciaci on est a gobernada por el n ucleo de la c elula.

Figura 3: Los cloroplastos presentan forma irregular, pero est an formados invariablemente por una membrana externa, un espacio intermembranoso, una membrana interna, el estroma y los tilacoides que se disponen apilados.

Los cloroplastos est an formados por varios compartimentos. El m as externo es la envuelta, formada por dos membranas, una externa y otra interna, m as un espacio intermembranoso. Al contrario que en la mitocondria la membrana interna no posee pliegues. En el interior se encuentran los tilacoides que son sacos aplanados delimitados por una membrana y amontonados formando estructuras a modo de pilas de 11

monedas denominadas grana. Los distintos grana est an conectados entre s mediante membranas. En las membranas de los tilacoides se sit uan las prote nas y mol eculas responsables de una realizar parte de la fotos ntesis. El espacio interno del cloroplasto no ocupado por los tilacoides se denomina estroma, donde se encuentra el ADN y donde se llevan a cabo otras partes de la fotos ntesis. Fotos ntesis La principal misi on de los cloroplastos es la conversi on de la energ a electromagn etica de la luz en energ a de enlaces qu micos gracias principalmente a la clorola, a la ATP sintasa y a la ribulosa bifosfato carboxilasa/oxigenasa (RUBISCO). Estos realizan la fotos ntesis. Consta de dos partes: una fase luminosa en la que se transforma la energ a luminosa en un gradiente de protones, que se utilizar a para la s ntesis ATP y para la producci on de NADPH, y una fase oscura (no necesita directamente a la luz, pero s los productos generados en la fase luminosa de la fotos ntesis) en la que se produce la jaci on del CO2 en forma de az ucares fosfatados con tres atomos de carbono. Esta reacci on es llevada a cabo por la RUBISCO. La primera fase de la fotos ntesis ocurre en la membrana del tilacoide y la segunda en el estroma.

Figura 4: Esquema resumido de las mol eculas que participan en la fase luminosa de
la fotos ntesis. Todas est an asociadas a la membrana de los tilacoides. Los protones se bombean al interior del tilacoide, mientras que el ATP y NADPH quedan en el estroma del cloroplasto. La rotura del agua contribuye al gradiente de protones al liberar 4 protones en el interior del tilacoide.

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Brevemente podemos describir la fotos ntesis con los siguientes pasos: a) El complejo del fotosistema II rompe 2 mol eculas de agua produciendo 1 mol ecula de O2 y 4 protones. Esta reacci on libera 4 electrones que al llegar, por una serie de pasos, hasta las clorolas localizadas en este complejo, ocupan el lugar que dejan otros electrones que han sido previamente excitados por la luz y liberados desde el fotosistema II. b) Estos electrones liberados pasan a una plastoquinona que los ceder a al citocromo b6/f, el cual, con la energ a de los electrones captados, introduce 4 protones en el interior del tilacoide. c) El complejo citocromo b6/f cede entonces los electrones a una plastocianina y esta al complejo fotosistema I, que gracias a la energ a de la luz que captan sus clorolas eleva de nuevo la energ a de los electrones. Asociada a este complejo est a la ferredoxina-NADP+ reductasa, la cual convierte NADP+ en NADPH, que queda en el estroma. Los protones incorporados en el interior del tilacoide forman un gradiente y se convierten en ATP gracias a la ATP sintasa, cuyo centro catal tico est a orientado hacia el estroma. Tanto el NADPH como el ATP ser an utilizados en el ciclo de Calvin, que es una ruta metab olica en la que se produce la jaci on del CO2 por la RUBISCO para producir mol eculas de fosfoglicerato a partir ribulosa 1,5-bifosfato y de CO2 Otras funciones Adem as de la fotos ntesis, los cloroplastos realizan funciones como la s ntesis de acidos grasos, de algunos amino acidos, reducci on de nitrito a amonio, entre otras.

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