FACULTAD DE INGENIERIA PROGRAMA DE INGENIERIA AGRONOMICA ACTIVIDAD ENZIMATICA Por: PAOLA BIBIANA PEDRAZA CABALLERO ACTIVIDAD: EXPERIMENTAL INTRODUCCION

Las clulas poseen compuestos qumicos que controlan las reacciones que ocurren en su interior. La sustancia que controla la velocidad a la que ocurre una reaccin qumica sin que la clula sufra dao alguno ni se destruya se conoce como catalizador. Las enzimas son sustancias (protenas) que actan como catalizadores en las clulas y hacen posibles las, reacciones que ocurren en las clulas disminuyendo la cantidad de energa de activacin que se necesita. Las enzimas tambin controlan la velocidad a la que ocurre la reaccin para que la energa se libere a una temperatura que no haga dao al organismo. Las miles de reacciones que constituyen el metabolismo de los seres vivos estn bajo control de miles de enzimas. Diferentes enzimas controlan diferentes reacciones. La sustancia sobre la cual acta una enzima se llama Sustrato: Al ocurrir una reaccin el sustrato se convierte en uno o ms productos nuevos. Las enzimas no se consumen en las reacciones y se pueden volver a utilizar. Sin embargo una enzima particular acta solo sobre un sustrato especfico, as que una enzima solo puede controlar un tipo de reaccin especfica. Una enzima recibe el nombre del sustrato sobre el cual acta; Ej. Anhidrasa carbnica, la cual acta en la conversin del CO2 en HCO3. Como nota, a una parte del nombre del sustrato sobre el cual acta la enzima se le aade el sufijo asa. Corno las enzimas son protenas; los factores que afectan la estructura de la protena, tambin afectan la funcin o actividad de las enzimas. La temperatura, el pH y la concentracin son algunos de los factores que influyen en la actividad de las enzimas. OBJETIVOS Identificar en una reaccin las enzimas y su respectivo sustrato Observar la actividad de algunas enzimas en tejidos animales y vegetales Demostrar el efecto de la temperatura, el pH y la concentracin sobre la actividad de una enzima. Demostrar la forma en que una enzima es especfica para cierto sustrato.

MATERIALES Y REACTIVOS Laboratorio Beakers, tubos de ensayo pequeo, bao Mara, gradilla, vidrio de reloj, pinzas para tubos de ensayo cuchilla o bistur, papel absorbente, estufa, termmetro, probetas, pipetas, cinta para rotular. Reactivos y Soluciones: 100 ml de solucin de perxido de hidrogeno al 6%, agua destilada, agua en bolsa, hielo, acido actico, hidrxido de sodio, solucin salina (suero fisiolgico), solucin de almidn y saliva. Biolgico: 200 gramos de hgado fresco licuado en poco agua (este procedimiento deben realizarlo en casa) METODOLOGA Se utiliz tubos de ensayos grandes. Las muestras de la solucin de perxido de hidrogeno se deben tener por separado en tubos de ensayos antes de agregar la muestra del extracto de hgado en los respectivos tubos de ensayos. Esto con el fin de que las soluciones de perxido sean agregadas al mismo tiempo en cada uno de los tubos que contengan la muestra. Accin de la invertasa 1. Se rotul y prepar cuatro tubos de ensayos de la siguiente forma:
Nmero del tubo 1 2 3 4 Mililitros de extracto de hgado 0 1 2 4

Una vez realizado el procedimiento, se agit bien los tubos, luego se agreg al mismo tiempo, 2 ml de perxido de hidrogeno en cada uno de los tubos. 2. Se rotul y prepar cinco tubos de ensayos de la siguiente forma:
Nmero del tubo 1 2 3 4 5 Mililitros de extracto de hgado 1 1 1 1 1

Luego se agit cada uno de los tubos, se agreg al mismo tiempo las siguientes cantidades de perxido de hidrogeno:

Nmero del tubo 1 2 3 4 5

Mililitros de Perxido de hidrogeno 0 ml 1 ml 2 ml 4 ml 6 ml

3. Se rotul y prepar tres tubos de ensayos de la siguiente forma:

Nmero del tubo 1 2 3 Mililitros de extracto de hgado 2 2 2 Temperatura C Baos con hielo Temperatura ambiente Agua hirviendo

Se esper a que el material que estaba dentro de los tubos tuviera la misma temperatura que la de los respectivos baos; luego se agit y procedi a agregar al mismo tiempo 2 ml de perxido de hidrogeno a cada uno de los tubos. 4. Se rotul y prepar tres tubos de ensayos de la siguiente forma:
Nmero del tubo 1 2 3 Mililitros de extracto de hgado 2 2 2 pH Acido actico 5 gotas Solucin salina (suero fisiolgico) Hidrxido de sodio 5 gotas

Luego se agit cada uno de los tubos y se agreg al mismo instante 2 ml de perxido de hidrogeno en cada uno de ellos, 5. Se rotul y prepar cuatro tubos de ensayos de la siguiente forma:
Nmero del tubo 1 2 3 4 Material 1 ml de Extracto de hgado 1 ml de saliva 1 ml de Extracto de hgado 1 ml de saliva

Luego se agit cada uno de los tubos; a los dos primeros se le agreg 2 ml de perxido de hidrogeno, A los tubos 3 y 4 se le agreg 2 ml de solucin de almidn agitndolos durante 3 minutos y luego se le agregue 3 gotas de lugol en cada uno de ellos. RESULTADOS DISCUSIN Accin de la invertasa 1. Rotule y prepare cuatro tubos de ensayos de la siguiente forma:

PREPARACIN

IMAGEN

DESCRIPCIN

Tubo 1 con 0 ml de Extracto de Hgado

No ocurri nada debido que slo se le agreg extracto de hgado, ya que es prueba.

Tubo 2 con 1 ml de Extracto de Hgado

Debido a que la cantidad de sustrato era mayor que la de la enzima en el tubo de ensayo luego de la reaccin se pudo observar una concentracin de enzima menor que la de perxido de hidrogeno (sustrato), la desnaturalizacin se llev a cabo pero no por completo.

Tubo 3 con 2 ml de Extracto de Hgado

Como producto final de la reaccin enzimtica en el tubo, qued igual concentracin de sustrato que de extracto de hgado, como de esperarse, puesto que las cantidades agregadas de cada uno eran las mismas.

Tubo 1 con 4 ml de Extracto de Hgado

Aqu la concentracin de hgado fue mayor ya que la cantidad inicial fue de 4ml, el doble que la de sustrato, a causa de esto el sustrato no fue suficiente para llevar a cabo la reaccin completa.

Cabe mencionar que al finalizar las reacciones en los tubos de ensayo quedaron como productos finales algunas partculas coloidales, en distintas cantidades. Cmo afecta la cantidad de enzima su actividad enzimtica? Al agregar los 2 ml de H2O2 a cada tubo de ensayo que contena diferentes cantidades de extracto de hgado, se observ que esta reaccin produjo un burbujeo y erupcin hasta el punto de salirse del recipiente (para el caso del tubo 2, 3 y 4), tambin se observ que al final hubo una desnaturalizacin del extracto del hgado con la diferencia que en cada tubo haba diversas concentraciones de

volumen de esa desnaturalizacin, lgicamente por la cantidad que se encontraba de ese extracto. De igual forma se encontr un lquido de color amarillo muy claro que estaba arriba de la desnaturalizacin producida.
2. Rotule y prepare cinco tubos de ensayos de la siguiente forma DESCRIPCIN PREPARACIN IMAGEN En esta nuestra no sucedi nada, no hubo desnaturalizacin debido a que no se agreg TUBO 1 perxido de hidrogeno.

Con 1ml de Extracto de Hgado y 0 ml de Perxido de Hidrogeno

TUBO 2 Con 1ml de Extracto de Hgado y 1 ml de Perxido de Hidrogeno

Se produjo una espuma que no alcanzo a salir del tubo al agregar el perxido de hidrogeno. Hubo desnaturalizacin enzimtica. El tubo qued dividido en tres capas en la parte superior espuma, en el medio una franja de agua aproximadamente de centmetro y en la inferior una pequea concentracin de hgado. La espuma que se produjo en esta muestra sali del tubo pero no llego a la mesa. Al igual que en el tubo anterior hubo desnaturalizacin enzimtica y se observaron las tres capas mencionadas anteriormente con la diferencia que la capa de agua fue mayor aproximadamente de 1 cm.

TUBO 3 Con 1ml de Extracto de Hgado y 2 ml de Perxido de Hidrogeno

TUBO 4 Con 1ml de Extracto de Hgado y 4 ml de Perxido de Hidrogeno

La espuma adems de salir del tubo de ensayo lleg hasta la mesa, asimismo en las tres capas del tubo se observaron pequeos cogulos de hgado precipitado antes de la capa de espuma. Hubo desnaturalizacin.

TUBO 5 Con 1ml de Extracto de Hgado y 6 ml de Perxido de Hidrogeno

Hubo desnaturalizacin. La cantidad de espuma que sali del tubo fue mayor, erupcionando todo su contenido y esta alcanz a llegar a la mesa. Se presentaron las tres capas.

Cmo afecta la cantidad de sustrato la actividad enzimtica? Al aumentar la concentracin de sustrato la enzima se saturar por lo que en un grfico donde en las abscisas pones la concentracin y en las ordenadas la velocidad obtendrs una hiprbola que en un momento ser una lnea horizontal y paralela a la abscisa. Esto es porque la velocidad se vuelve constante ya que aunque agreguemos sustrato las enzimas tienen todos sus centros activos ocupados.
3. Rotule y prepare tres tubos de ensayos de la siguiente forma:

PREPARACIN

IMAGEN

TUBO 1 con 2 ml de extracto de Hgado En Baos con hielo

DESCRIPCIN La velocidad de la reaccin fue relativamente rpida. Se produjo espuma. Se observa una capa solida en el fondo, seguida por agua y espuma. La espuma sali del tubo llegando hasta el borde del tubo.

TUBO 2 con 2 ml de extracto de Hgado en Temperatura ambiente

Este tubo a temperatura ambiente fue de reaccin un poco menos rpido que la primera. La espuma llego aproximadamente hasta 2 cm antes del borde del tubo, en el fondo se observa una capa solida en forma de cogulos, seguida de agua y espuma. Se desnaturalizo. Fue la reaccin ms lenta. Se observa poca espuma. La parte inferior se solidifico de forma irregular observndose un color caf. Se presento desnaturalizacin y el perxido de hidrogeno qued encima del extracto de hgado.

TUBO 3 con 2 ml de extracto de Hgado en Agua hirviendo

Cmo afecta la temperatura la velocidad de una reaccin enzimtica?

La temperatura afecta a todas las reacciones enzimtica. Cuanto menor es la temperatura mayor es la velocidad de reaccin. La velocidad de la reaccin

aumenta debido a que hay ms molculas con la energa suficiente para entrar en el estado de transicin. Las velocidades de las reacciones catalizadas por enzimas aumentan tambin al incrementarse la temperatura. Sin embargo, las enzimas son protenas que se desnaturalizan a temperaturas elevadas.
4. Rotule y prepare tres tubos de ensayos de la siguiente forma

PREPARACIN Tubo 1 con 2 ml de Extracto de Hgado y Acido actico 5 gotas y

IMAGEN

DESCRIPCIN Su contenido se espes al agregarle el cido actico y al agregarle el perxido de hidrgeno erupcion casi todo su contenido dejando solo un poquito al fondo del tubo.

Tuvo 2 con 2 ml de Extracto de Hgado y Solucin salina (suero fisiolgico)

Su contenido se diluy al agregarle la Solucin salina y al agregarle el perxido de hidrogeno erupcion todo su contenido por fuera del tubo.

Tubo 3 con 2 ml de Extracto de Hgado y Hidrxido de sodio 5 gotas

Cambio de a color Vinotinto y su contenido se solidific al agregarle hidrxido de sodio. Despus de agregarle perxido de hidrogeno su contenido erupcion pero quedando la mayora de su contenido y su contenido an permaneca slido.

Cabe mencionar que en las 3 preparaciones la temperatura se elev considerablemente despus de agregarle el perxido de hidrogeno. Cmo afecta el pH la velocidad de una reaccin enzimtica? Cada enzima tiene una temperatura ptima a la que actan con mxima eficacia. Debido a que las enzimas son protenas, los valores de la temperatura ptima dependen del pH y de la fuerza inica. Si la temperatura se incrementa mas all de su temperatura optima, la actividad enzimtica desciende bruscamente. La temperatura optima de una enzima normalmente esta cerca del organismo del que procede. Por ejemplo, la temperatura ptima de la mayora de las enzimas del ser humano est prxima a los 37 grados.

5. Rotule y prepare cuatro tubos de ensayos de la siguiente forma:

PREPARACIN Tubo 1 con 1 ml de Extracto de hgado

IMAGEN

DESCRIPCIN La reaccin se produjo casi instantneamente dndose una reduccin significativa del sustrato (hgado), botando espuma pero sin salirse del tubo.

Tubo 2 con 1 ml de saliva

Todo lo contrario sucedi con la saliva. La reaccin se dio ms lentamente quedando la saliva arriba y el perxido de hidrogeno abajo.

Tubo 3 con 1 ml de Extracto de hgado

Al agregarle solucin de almidn cambio su tonalidad. La solucin se torn ms fluida con una variacin de color ms claro. El lugol qued arriba de un color caf.

Tubo 4 con 1 ml de saliva

Aument la viscosidad. Se pigment con un color oscuro (negro) en ciertas zonas del tubo de ensayo.

Cmo es la reaccin en el tubo que contiene saliva y se le adiciona H2O2? Cmo es, la reaccin en el tubo que contiene extracto de hgado y se le adiciona almidn? Porqu.

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS 1. Para los procedimientos realizados identifique la enzima y los respectivos sustratos. 2. Cmo explicara usted el burbujeo que se produce al aplicar perxido de hidrogeno (H2O2) a una herida; Cul es el propsito de este procedimiento? 3. Realice una breve descripcin de la forma en que se puede inhibir la actividad de una enzima. 4. Est usted de acuerdo con la interaccin enzima - sustrato es anloga a lo de una cerradura y su llave. Explique su respuesta 5. Desde el punto de vista enzimtico como una fiebre alta puede afectar su actividad?. Explique 6. A que se debe que una enzima actu mejor a un determinado pH y sea inactiva a otro explique?