DROGAS CON ALCALOIDES DERIVADOS DE LA FENILALANINA Y TIROSINA

Domnguez Parco S., Chuco Sutta L., Espilco Villarruel G., Hualan Sandoval L.

LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA Y MEDICINA TRADICIONAL, FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA, UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS. RESUMEN: Se realiz el ensayo en la Facultad de Farmacia y Bioqumica de UNMSM en el laboratorio de Farmacognosia, el cual tuvo como objetivo la extraccin e identificacin de alcaloides
derivados de la fenilalanina y tirosina; para los cuales se utiliz alcaloides derivados de ncleo isoquinoleinicos como el cardo santo(Argemone mexicana) que contiene alcaloide de tipo papaverina. Se procedi a realizar una extraccin acida para Argemone mexicana luego se procedi a realizar las reacciones generales (Dragendorff, Bertrand, Bouchardat, Mayer, Sonnenschein, Popoff, Taninos) y particulares como Marquis, Mandelin, cido ctrico, Froehde luego se procedi a realizar la identificacin de alcaloides derivados del ncleo feniletilisoquinoleinas para ello se utiliz Colchicum autumnale las cuales se identific con reactivos particulares como cido ntrico, Anterieth, Struve y por ltimo se hizo la extraccin e identificacin de tallos de pinco-pinco (Ephedra americana) con sus respectivas reaccin generales y particulares y cromatografa en capa fina en ambos casos. Se extrajo e identifico alcaloides de tipo papaverina, morfina, colchisina y efedrina.

Palabras claves: fenilalanina, tirosina, ncleo isoquinoleinicos, papaverina.

ABSTRACT: Test conducted at the Faculty of Pharmacy and Biochemistry UNMSM in Pharmacognosy lab, which aimed at the extraction and identification of alkaloids derived from phenylalanine and tyrosine, for which core alkaloids used as the thistle isoquinoleinicos holy (Argemone mexicana) alkaloid containing papaverine type. It proceeded to an acid extraction for Argemone mexicana then proceeded to make the general reactions (Dragendorff, Bertrand, Bouchardat, Mayer, Sonnenschein, Popoff, tannins) and individuals as Marquis, Mandelin, Citric Acid, Froehde then proceeded to perform the identifying core alkaloids We used feniletilisoquinoleinas for Colchicum autumnale which are identified with particular reagents as nitric acid, Anterieth, Struve and finally made the extraction and identification of pinco-pinco stalks (Ephedra americana) with their reaction general and special TLC in both cases. Was extracted and identified type alkaloids papaverine, morphine and ephedrine colchisina. Keywords: phenylalanine, tyrosine, isoquinoleinicos nucleus, papaverine.

INTRODUCCIN
ALCALOIDES DERIVADOS FENILALANINA Y TIROSINA DE LA

Un grupo importante de alcaloides es el procedente de aminocidos aromticos, fenilalanina y tirosina. Es un grupo muy amplio en el que se encuentran compuestos dotados de actividades farmacolgicas de gran inters. (1)

Principalmente forman este grupo los alcaloides isoquinoleinicos, derivados qumicamente de la isoquinoleina si bien, habitualmente se trata de compuestos 1,2,3,4-tetrahidroisoquinoleinicos, (este esqueleto de la tetra hidroisoquinoleina se encuentra en numerosas especies vegetales con alcaloides) o an ms frecuentemente de derivados de la bencil tetra hidroisoquinoleina.(2) Los alcaloides constituidos por tetrahidroisoquinoleinas sencillas, no son muy frecuentes y carecen de inters. Mucho ms importantes son los alcaloides bencilisoquinoleinicos. Segn su formacin en el vegetal y su estructura qumica podemos subdividirlos en varios grupos entre ellos: Bencilisoquinoleinicos Aporfinicos Morfinanos Protoberberinas

Se incluyen en este grupo los alcaloides feniletilaminicos, cuyo nitrgeno no forma parte de un heterocclico y son considerados por ello, por algunos autores, como protoalcaloides y no como verdaderos alcaloides. Podemos citar entre estos ala efedrina de las sumidades de efedra, de la mescalina de peyote, con propiedades alucingenas.

Entre los bencilisoquinoleinicos se encuentra la papaverina, alcaloide aislado de las adormideras (papaver somniferum), aunque en la actualidad se separa por sntesis, dotado de propiedades espasmoliticas. Entre los derivados de la aporfina se puede destacar la boldina alcaloide colagogo y colertico procedente del boldo. (3) No podemos dejar de citar, entre los derivados del morfinano, la morfina. Obtenida a partir del opio y de las capsulas de adormidera es considerado el analgsico por excelencia pero inductor de dependencia fsica y psquica. En el grupo de las feniletilisoquinoleinicas citaremos ala colchisina (Colchicum autumnale), derivado tropolonico, toxico, de eleccin en tratamiento del ataque agudo de la gota.

Alcaloides isoquinolnicos Los alcaloides isoquinoleinicos y tetrahidroisoquinolnicos (THIQ) comprenden una amplia gama de compuestos ampliamente distribuidos principalmente en el reino vegetal. Cabe destacar que estas isoquinolinas tienen un sustituyentes alquilo en la posicin.

Droga: hojas de cardo santo (Argemone mexicana). Identificacin de los alcaloides derivados del ncleo isoquinoleinico a. Obtencin de la droga en polvo Se pes 2,5 g de droga (hojas) convenientemente seleccionadas, se colocaron en un mortero de porcelana y se procedi a reducir el tamao con el pistn por 15 minutos aproximadamente, hasta lograr obtener partculas pequeas. b. Extraccin de alcaloides (extraccin cida) . Se utiliz 3 g de la droga seca y pulverizada, se agreg 25 ml de HCl 10% y fue llevado a 60o C en bao mara por 30 minutos. Se agito constantemente, enfri y filtro. Se transvaso convenientemente el filtrado a pera de decantacin y alcalinizo con NaOH hasta pH 10. Se extrajo los alcaloides en forma bsica con tres porciones de cloroformo (5ml) as sucesivamente y se concentr, llevndolo a bao mara hasta sequedad. Se aadi 5 ml HCl 10 % para formar sales de alcaloides y proceder con el anlisis cualitativo. c. Reacciones generales. DRAGENDORFF (YODURO POTSICO-BISMTICO): gotas de residuo acidificado + gotas de reactivo.

La prctica tiene como objetivos: Extraer los alcaloides derivados de la fenilalanina y tirosina. Identificar los alcaloides derivados de la fenilalanina y tirosina en las especies vegetales estudiadas.

MATERIALES Y MTODO.
MATERIALES Materiales de vidrio. Solventes orgnicos. Reactivos de precipitacin. Estndar de los alcaloides. Bao mara.

METODOLOGA (4) Alcaloide tipo: Papaverina

MAYER (YODURO POTSICO MERCRICO): gotas de residuo acidificado + gotas de reactivo. BOUCHARDAT O WAGNER (YODO EN YODURO POTSICO): gotas de residuo acidificado + gotas de reactivo. BERTRAND (CIDO SILICIOTNGSTICO): gotas de residuo acidificado + gotas de reactivo. SONNENSCHEIN (CIDO FOSFOMOLIBDICO): gotas de residuo acidificado + gotas de reactivo. POPOFF: gotas de residuo acidificado + gotas de reactivo. TANINOS: gotas de residuo acidificado + gotas de reactivo. d. Reacciones particulares. MORFINANOS: Morfina: MARQUIS : mg de muestra +gotas de reactivo, tiene que dar una coloracin violeta MANDELIN : mg de muestra +gotas de reactivo, tiene que dar una coloracin marrn ACIDO NTRICO: mg de muestra +gotas de reactivo, tiene que dar una coloracin rojo intenso P-DIMETIL AMINO BENZALDEIDO : mg de muestra +gotas de reactivo, tiene que dar una coloracin violceo NAOH 10%: mg de muestra +gotas de reactivo, es soluble.

Codena: MARQUIS : mg de muestra +gotas de reactivo, tiene que dar una coloracin violeta MANDELIN: mg de muestra +gotas de reactivo, tiene que dar una coloracin marrn. HASS: mg de muestra +agua de bromo hasta color amarillo + amoniaco en exceso. hasta coloracin rosada. FROEHDE: mg de muestra + gotas de reactivo = amarillo +calor = coloracin violeta. P-DIMETIL AMINO BENZALDEIDO : mg de muestra +gotas de reactivo, tiene que dar una coloracin violceo NaOH 10%: mg de muestra +gotas de reactivo, es soluble. NUCLEO ISOQUINOLEINICO Papaverina : MARQUIS: mg de muestra +gotas de reactivo, coloracin naranja claro. MANDELIN: mg de muestra +gotas de reactivo, coloracin verde oscuro. FROEHDE: mg de muestra +gotas de reactivo, coloracin verde oscuro. H2SO4 cc: mg de muestra +gotas de reactivo coloracin violeta oscura.

ERDMAN: mg de muestra +gotas de reactivo, coloracin rojo oscuro. CIDOS DILUIDOS (clorhdrico, sulfrico o ntrico): mg de muestra +gotas de reactivo, precipitado lechoso.

castao y violeta, al aadir exceso de hidrxido de sodio .coloracin rojo-naranja. Identificacin qumica de alcaloides feniletilaminicos los

Alcaloide tipo: efedrina Droga: suminidades floridas de tallo de pinco-pinco-ephedra americana. a. Obtencin de la droga en polvo. Se pes 2,5 g de droga (hojas) convenientemente seleccionadas, se colocaron en un mortero de porcelana y se procedi a reducir el tamao con el pistn por 15 minutos aproximadamente, hasta lograr obtener partculas pequeas. b. Extraccin de alcaloides (extraccin cida). Se utiliz 5 g de la droga seca y pulverizada, se agreg 20 ml de H2 S04 10% . Se agito constantemente y filtro. Se transvaso convenientemente el filtrado a pera de decantacin y alcalinizo con NaOH hasta pH 10. Se extrajo los alcaloides en forma bsica con 2 porciones de ter (5ml) as sucesivamente y se concentr, llevndolo a bao mara hasta sequedad. Se aadi 4 ml HCl 10 % para formar sales de alcaloides y proceder con el anlisis cualitativo. c. Reacciones generales.

e. Anlisis cromatogrfico Muestra Estndar Solventes Extracto clorofrmico Solucin de papaverina 0.1% Tolueno:acetato de etilo:dietilamina (7:2:1)

Revelador Dragendorff Identificacin qumica de alcaloides derivados de ncleo feniletilisoquinoleinas Alcaloide tipo: colchicina Droga: bulbo y semillas de colchicum autumnale. a. Reaccin particulares : CIDO NTRICO: mg de muestra +HNO3 conc. , coloracin violeta. ANTERIETH: mg de muestra + HCl 10 % + II gotas de FeCl3 + calor a ebullicin por 3 min, enfriar y agregarle un volumen igual de agua. nos da una coloracin verde. STRUVE: mg de muestra +HNO3 conc. Coloracin amarillo, rojo

DRAGENDORFF (yoduro potsicobismtico): gotas de residuo acidificado + gotas de reactivo. MAYER (yoduro potsico mercrico): gotas de residuo acidificado + gotas de reactivo. BOUCHARDAT O WAGNER (yodo en yoduro potsico): gotas de residuo acidificado + gotas de reactivo. BERTRAND (cido siliciotngstico): gotas de residuo acidificado + gotas de reactivo. SONNENSCHEIN (cido fosfomolibdico): gotas de residuo acidificado + gotas de reactivo. POPOFF: gotas de residuo acidificado + gotas de reactivo. TANINOS: gotas de residuo acidificado + gotas de reactivo.

agitar bien. La capa etrea toma color purpura y la capa acuosa color azul. e. Anlisis cromatogrfico

RESULTADOS
1) REACCIONES GENERALES: 2) REACCIONES PARTICULARES: COLCHICINA Reaccin Resultado A. Ntrico + EFEDRINA PAPAVERINA Anterieth ++ Rf del Rf del Papaverina: Struve +++ Efedrina Muestra: 0.511 EFEDRINA Muestra: Patrn:0.534 Reaccin Resultado Patrn: Sulfato cprico -

d. Reaccin particular Muestra Estndar Solventes Extracto etreo Sol. de efedrina 0.1% Tolueno:cloroformo:etanol (28,5:57:14,5)

3) ANLISIS CROMATOGRFICO:

Revelador Ninhidrina SULFATO CUPRICO: 1ml del extracto + 0,1 ml de CuSO4 10% + 1 mL de NaOH 2 % , se forma coloracin purpura rojizo. Aadir 1ml de ter y
REACCIN Dragendorff Bouchardat Mayer Popoff Bertrand Sonnenschein PAPAVERINA + ++ + +++ EFEDRINA +++ +++ ++ +++ +++ +++

MORFINIANOS MORFINA CODENA MARQUIS MANDELIN HNO3 HASS FROEHDE P-DMAB + NaOH 10% + ++ PAPAVERINA DIONINA MARQUIS Traslcido MANDELIN Pardo ligero HNO3 Naranja ligero HASS Traslcido REACCIN

FROEHDE P-DMAB NaOH 10% H2SO4 ERDMAN CIDOS DILUDOS

Traslcido Rosado grosella Ligeramente Soluble Traslcido Amarillo claro Traslcido

DISCUSIN
En la extraccin de alcaloides derivados del ncleo isoquinolenico se trabaj con hojas de Cardo santo, realizndole una extraccin mixta para despus concretar las reacciones generales. En la droga Efedrina dio positivo en todas las reacciones y en la droga papaverina fueron 4 positivos de 6 reacciones para lo cual es eficiente. En la cromatografa de la papaverina se obtuvo Rf muestra 0.511 y Rf del estndar 0.534; para la cual segn bibliografa la papaverina presenta un Rf de 0.55. (5) En las reacciones particulares de la morfina, codena y papaverina obtuvimos un resultado negativo en todas las reacciones excepto NaOH 10%. La papaverina forma parte de los alcaloides del opio, y los de las ranunculceas. La papaverina es un alcaloide isoquinilnico, encontrado en el opio, junto con morfina, narcotina, codena, papaverina y tebana. (6) Uno de las causas es porque no se realiz una debida extraccin de morfina ya que por referencia bibliogrfica la muestra se dispersa en agua, y la mezcla se calienta

y alcaliniza con xido o hidrxido de calcio. Esto forma la sal de calcio de la morfina, la cual es soluble en la solucin acuosa; los dems alcaloides principales del opio precipitan. La solucin acuosa se filtra para separar los alcaloides precipitados, y se le aade cloruro de amonio. Esto convierte la sal de calcio de la morfina en morfina. La solucin se deja en reposo varias horas hasta que la morfina precipita; entonces se filtra y se seca la morfina impura. El precipitado seco es pardo oscuro y suele contener entre el 50 y el 70 por ciento de morfina.
(7)

CONCLUSIONES
Se extrajo alcaloides derivados de la fenilalanina y tirosina de Ephedra americana y Argemone americana. Se identific los alcaloides colchicina y papaverina en Colchicum autumnale y Argemone mexicana, respectivamente.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Alcaloides derivados de la fenilalanina y tirosina. Disponible en: http://www.slideshare.net/lizalor ena/alcaloides-8323221 2. Gabriel Jaime Arango, Alcaloides Y Compuestos Nitrogenados .Universidad De Antioquia. Medelln, 2008. Pg. 59-65.

Disponible en: [http://farmacia.udea.edu.co/~ff/ alcaloides.pdf] 3. Martin Abozagio Jara .Plantas Medicinales Del Per. Disponible en: [http://plantasaromaticasymedici nalesdeperu.blogspot.com/2011/ 03/la-una-de-gato-uncariatomentosa.html]. 4. GORRITI A, CRDOVA A, JURADO B, ORTEGA E. Manual de laboratorio de Farmacognosia II Lima, Per. 2013. Pg. 28 30. 5. ZULETA E. Perfil fotoqumico de Phlebodium pseudoaureum (Cav.) Lellinger proveniente de 5 regiones de Guatemala. Universidad de San Carlos de Guatemala. 2005. Guatemala. Disponible en:
http://biblioteca.usac.edu.gt/tesis/0 6/06_2375.pdf

6. CICAD. Qumicos utilizados en la produccin ilcita de drogas. Disponible en:

http://es.scribd.com/doc/5441602/1 4/PRIMER-PASO-EXTRACCION-YPURIFICACION-DE-LA-MORFINA-DELOPIO

7. CUARTAS Y, CASTAO E. Descripcin fitoqumica del Jazmn de noche. 2006. Colombia. Disponible en:
http://200.21.104.25/culturaydroga/ downloads/culturaydroga11(13)_10. pdf

CUESTIONARIO
1. Cules son las nuevas benciliisoquinoleinicos? aplicaciones de los alcaloides

Las aplicaciones de los alcaloides benciliisoquinoleinicos incluyen el uso como analgsico narctico a la codena y la morfina, como agentes antimicrobianos a la sanguinarina y berberina; y a la noscapina como medicamento antitusivo y (1) anticancergeno. La morfina se une al receptor opioide e induce efectos antinociceptivos. Sin embargo, el papel exacto de estos compuestos es una cuestin de debate aunque se han propuesto diferentes enlaces con la infeccin, la sepsis, la inflamacin, as como los principales patologas neurolgicas (enfermedad de Parkinson, la esquizofrenia). (2) 2. Mencione las aplicaciones de los alcaloides extrados de Argemone mexicana. Pertenece a la familia Papaveraceae, su nombre comn es cardo santo. Planta herbcea, de hojas divididas con los segmentos espinosos; flores blanco amarillentas, muy semejantes a las amapolas, pero la cpsula es alargada, dehiscente por la parte superior por donde se escapan las semillas, las cuales son muy pequeas, negruzcas y rugosas. Su tallo contiene un ltex lechoso amarillento. Las hojas y el tallo contienen pequea cantidad de una sustancia anloga a la morfina, esta sustancia se encuentra en mayor cantidad en las cpsulas verdes. Se utiliza como hipntico y calmante para combatir la tos. El aceite no es recomendable como purgante, pero debido a sus propiedades secantes, podra emplearse sobre la piel en vez de colodin. (3) El ltex se usa para quitar las manchas de la crnea y las flores en infusin como narctico.

Algunos anlisis ms recientes han revelado la presencia de dos alcaloides en la semilla, berberina y protopina. El aceite es secante y produce efectos emotocatrticos debido al parecer a un principio acre y voltil que fcilmente se altera con el tiempo. (4) 3. Investigue acerca de la aplicacin de extracto de semillas de opio en la respuesta inmunolgica. La administracin de opioides puede afectar el sistema inmunolgico de varias formas; sin embargo, muchas dudas rodean ese fenmeno, como por ejemplo, cul es la mejor manera de medirlas, cul es el valor de los ensayos con la proliferacin y la funcionalidad de los linfocitos y de las dems clulas inmunes; o con la evaluacin de la comunicacin entre las clulas; o con la expresin de receptores involucrados en el reconocimiento y en la presentacin de antgenos; o incluso con relacin al balance de citocinas, adems de la necesidad de entender cul es el significado biolgico de tales cambios. Por aadidura, la mayora de los estudios sobre el asunto es con los organismos no sometidos al dolor, lo que puede alterar la interpretacin de los resultados. Existen dos mecanismos diferentes de inmunomodulacin por los opioides, uno in vitro y el otro in vivo. En el primer caso, los experimentos han demostrado que la morfina y otros opioides perjudican la funcin quimiotxica y fagoctica de los neutrfilos y monocitos y reducen las respuestas efectoras de linfocitos B y T, como tambin aumentan la apoptosis de linfocitos y clulas fagocticas. Los estudios in vivo tambin ha demostrado un efecto indirecto de los opioides, especialmente de la morfina, que envuelve la reduccin de la funcin de clulas NK y de la actividad proliferativa linfoctica en respuesta a mitgenos, supresin de citocinas inflamatorias, adems de la activacin del sistema nervioso simptico que promueve elevados niveles de noradrenalina y que est relacionada con la inmunodepresin. Esos efectos parecen estar relacionados con la regulacin descendente de la protena cinasa C, a acciones mediadas por la somatostatina, a la participacin de enzimas proapoptticas y a la alteracin de la liberacin de xido ntrico. (5) 4. Qu mtodos de identificacin y cuantificacin de alcaloides se aplican a los alcaloides bencilisoquinolenicos?

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. HagelJM. Fachini PJ.Benzilisoquinoline alkaloid metabolism : a century of discovery and a brave new world .Plant Cell Physiol .mayo de 2013;54(5):647-75.disponible en : http://pcp.oxfordjournals.org/content/54/5/647.short 2. A. Laux-Biehlmann, J. Mouheiche. Endogenous morphine and its metabolites in mammals: History, synthesis, localization and perspectives. Neuroscience,13 de marzo de 2013;233:95-117 3. Propiedades de la Argemone mexicana. Disponible en: http://es.scribd.com/doc/31790581/Analisis-metabolitos-secundarios-enArgemone-mexicana-Bignonia-unguis-cati-diospyros-sinaloensis-y-Maytenusphyllanthoides-con-posible-aplicacion-e 4. MARTNEZ M. Las plantas medicinales de Mxico. Ed sexta edicin (reimpresin) 1995. Editorial Botas. Mxico D.F. 5. SANTOS J. Los opioides y el sistema inmunolgico: relevancia clnica. Brazil, 2012. Disponible en: http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S003470942012000500010&script=sci_arttext&tlng=es