E. A. P. DE NUTRCN "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" TESS para optar el ttulo profesional de Licenciada en Nutricin AUTORA Katherine Curi Quinto ASESORA Rosa Oriondo Gates LIMA - PER 2006 . . 1 AGRADECIMIENTOS . 3 I RESUMEN . 5 II. INTRODUCCIN . 7 III MARCO TERICO . . 11 3.1) HISTORIA: . . 11 3.2) LA LOMBRIZ (Eisenia foetida) . 13 3.2.1) CIasificacin Taxonmica y PrincipaIes Caractersticas de Ia Lombriz (Eisenia foetida) . . 13 3.2.2) Caractersticas MorfoIgicas ms ResaItantes . 14 3.2.3) Importancia de Ia Lombriz (Eisenia foetida) . . 18 3.3) DEFINICIN DE CARNE Y HARINA DE LOMBRIZ (Eisenia foetida). . . 19 3.3.1) Factores que afectan Ia Cantidad y CaIidad de Ia Harina de Lombriz: . . 20 3.3.2) Situacin deI Consumo de Lombrices en Ia AIimentacin Humana: . . 20 3.4) ASPECTOS NUTRICIONALES DE LA HARINA DE LOMBRIZ (Eisenia foetida) . 21 3.4.1) Determinacin de Ia CaIidad Proteica . . 21 3.4.2) AnIisis NutricionaI de Ia Harina de Lombriz (Eisenia foetida) . . 24 IV.- MATERIALES Y MTODOS . . 29 4.1. TIPO DE ESTUDIO: . . 29 4.2. LUGAR DE ESTUDIO: . 29 4.3. ELABORACIN DE LA HARINA DE LOMBRIZ (Eisenia foetida): . 29 4.3. ANLISIS QUMICOS DE LA HARINA DE LOMBRIZ (Eisenia foetida) . 35 4.4. ENSAYOS BIOLGICOS . 36 4.4.1) Determinacin de Ia Razn Proteinica Neta (NPR) y eI ndice de Eficiencia Proteica (PER): . . 38 4.4.2) Determinacin de Ia DigestibiIidad Verdadera (D v ) y VaIor BioIgico Verdadero (VB V ): . . 39 4.4.3) Determinacin de Ia UtiIizacin Proteinica Neta (NPU): . 43 4.5 ANLISIS DE DATOS . 47 V. RESULTADOS . 49 VI. DISCUSIN . 57 VII. CONCLUSIONES . 61 VIII. RECOMENDACIONES . . 63 IX. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS . 65 A mis padres por haberme dado la vida, por su compaa, comprensin y sus sabios consejos, que me ayudaron a disfrutar y aprender de todas las experiencias vividas. A ellos con mucho cario y a Dios por permitirme tenerlos a mi lado y realizarme como profesional. "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 1 "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 2 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" AGRADECIMIENTOS - A la Unidad de Investigacin de la Facultad de Medicina de la UNMSM, por haber financiado la realizacin de esta tesis. - A la Q.F. Rosa Oriondo, Docente de la Facultad de Medicina de la UNMSM, por el asesoramiento brindado. - Al Dr. Guido Ayala y a la Mg. Sc. Ivonne Bernui, docentes de la facultad de Medicina de la UNMSM, por las orientaciones brindadas. - Al Dr. Carlos Herrera, docente de la Facultad de Ciencias de la Universidad de la Santsima Concepcin Chile, por la informacin proporcionada incondicionalmente y por su gentil atencin. - A la Mg. Teresa Arbaiza, responsable del laboratorio de Bioqumica, Nutricin y Alimentacin Animal de la Facultad de Veterinaria de la UNMSM, por el apoyo brindado. - Al personal del Laboratorio de Evaluacin Nutricional de los Alimentos de la UNALM y al responsable del Laboratorio de Evaluacin Biolgica, Sr. Mauro Ayala, por sus enseanzas y las facilidades brindadas. - A la Asociacin de Ecologistas Kausasunchis, presidido por el Ing. Fortunato Curi, por la orientacin y apoyo brindado en la elaboracin de la harina de lombriz. - A los miembros del jurado calificador de la presente tesis, presidida por la Lic. Sissy Espinoza, por sus acertados consejos y orientaciones. - A mi compaera Karen Cueva Rodrguez con quin iniciamos la idea de desarrollar el presente trabajo, en esta rea poco comn en el campo de la nutricin. AGRADECIMIENTOS "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 3 "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 4 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" I RESUMEN El presente trabajo tuvo como objetivo determinar la calidad de la protena de la harina de lombriz (Eisenia foetida), mediante ensayos biolgicos en ratas. Para lo cual se elabor harina de lombriz y se realiz el anlisis proximal de la misma mediante mtodos de la AOAC 1990. Se utilizaron 12 ratas albinas raza Holtzman en crecimiento para los ensayos de ndice de eficiencia proteinica (PER), razn protenica neta (NPR), digestibilidad verdadera (D V ) y valor biolgico verdadero (VB V ), y 24 para la utilizacin proteica neta (NPU). Los resultados de PER, NPR, D V, VB V y NPU fueron comparados con datos de casena. Para el anlisis estadstico se utiliz la prueba T para muestras emparejadas con un nivel de significancia del 95% - Excel 2000. En la elaboracin de la harina de lombriz se obtuvo un rendimiento de 11.5% cuya composicin qumica en base seca fue de: 68.20% de protena, 7.50% de grasa, 15.82% de carbohidratos y 8.48% de ceniza. En los ensayos biolgicos de NPR, D V y VB V se encontr diferencia significativa a favor de la casena, mientras que en los ensayos biolgicos de PER y NPU la diferencia no fue significativa, por lo cual se concluy que la calidad biolgica de la protena de la harina de lombriz no se iguala a la casena; pero, supera en calidad a otras protenas de origen animal como la carne de bovino, sus vsceras, carne de vacuno, sus vsceras y el corazn de pollo, y productos de origen vegetal como el maz, las lentejas y frijoles. Palabras claves: Lombriz (Eisenia foetida), ensayos biolgicos, calidad proteica, harina de lombriz. I RESUMEN "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 5 "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 6 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" II. INTRODUCCIN La desnutricin crnica en nios menores de 5 aos es uno de los problemas de salud pblica que sigue afectando a los pases subdesarrollados y en vas de desarrollo, como es el caso del Per. Segn el nstituto Nacional de Estadstica e nformtica (NE 2006), la prevalencia de la desnutricin crnica en nios menores de 5 aos a nivel nacional es de 24.1% del cual el 39% se ubica en las zonas rurales. 1 Siendo uno de los factores causantes la ingesta inadecuada de nutrientes. 2 A esta situacin se suma el acelerado crecimiento poblacional y la consecuente escasez de recursos e insuficiente abastecimiento de nutrientes, indispensables para satisfacer las necesidades de esta poblacin en constante crecimiento. En este contexto, uno de los nutrientes considerados crticos, debido a su importancia y alto costo, son las protenas, que proporcionan al organismo los aminocidos esenciales e indispensables para el crecimiento, mantencin y reparacin de tejidos, as como para la sntesis tisular, formacin de hormonas, enzimas, jugos digestivos, anticuerpos y otros constituyentes orgnicos. 3 El cumplimiento de dichas funciones depende de la cantidad y calidad de la protena alimentaria ingerida. Las de mejor biodisponibilidad son las protenas de alto valor biolgico, que corresponden a fuentes animales, pues contienen todos los aminocidos esenciales en una proporcin adecuada con los requerimientos de aminocidos y presentan una digestibilidad del 100%; como es el caso del huevo y la leche. 4 II. INTRODUCCIN "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 7 Las recomendaciones de protenas de los organismos internacionales (FAO/WHO/UNU/1985) corresponden a protenas de alto valor biolgico cuyo consumo, debido a los bajos recursos de los pobladores de algunas regiones de nuestro pas, es deficiente; por ello, son reemplazadas por otras de bajo valor biolgico, como es el caso de las protenas de origen vegetal, cuya utilizacin por el organismo se encuentra disminuida porque contienen uno o ms aminocidos limitantes. 3 Al respecto, en el segundo informe nacional sobre Seguridad Alimentaria, presentado en octubre del ao 2002, se ha reportado que en el Per se ha logrado cubrir los requerimientos proteicos mnimos, con una tendencia general creciente cuyo principal aprovisionamiento proviene de protenas de origen vegetal (principalmente granos) y en los ltimos aos se ha dado un ligero incremento de las protenas de origen animal (principalmente carnes y huevos) 5 .Sin embargo, esta situacin no nos ubica en una posicin estable, ya que la cobertura de este nutriente se ha dado con protenas de bajo valor biolgico; adems, tales niveles apenas superan el requerimiento mnimo. Por otro lado, las cifras presentadas en dicho informe slo representan un promedio para el total de la poblacin, sin tomar en cuenta lo que se ha consumido individualmente, ello implica que pueda haber un problema de desigual distribucin de alimentos, que impide llegar a todos por igual. Por lo tanto si se considera que en promedio se ha superado los niveles de requerimiento terico, lo ms probable es que existan grupos de poblacin que no lleguen a estos niveles, los mismos que mantienen latente los problemas de desnutricin en nuestro pas. Esta problemtica es muy notoria en regiones pobres de nuestro pas, y de manera especial en aquellas poblaciones afectadas por la pobreza extrema, donde el acceso a las protenas de alto valor biolgico es escaso. En este contexto y orientados a mejorar el aporte nutricional de protenas de alto valor biolgico en las zonas de bajos recursos econmicos, se supo de una fuente no convencional de protena de origen animal, conocida como Lombriz Roja de California (Eisenia foetida) cuya crianza permite obtener carne de alto valor nutritivo. Al respecto, la carne de lombriz ha sido utilizada en la alimentacin animal y humana debido a su alto contenido de protenas (60-80%), buena proporcin de aminocidos, presencia de cidos grasos esenciales y micronutrientes como el hierro y el calcio. Adems, la lombriz Roja puede utilizarse para transformar desechos orgnicos, que comnmente tenemos almacenados como fuente de contaminacin, en un excelente fertilizante ecolgico y bactericida con mltiples beneficios en el campo de la agricultura y medio ambiente. 6 En relacin al consumo humano de la lombriz, se ha reportado que su carne se ha incorporado como un complemento nutricional en pases orientales tales como: Japn, Filipinas, Taiwn, frica y China. 6 Por otro lado, se ha reportado que en Amrica Latina, la harina de lombriz es un componente importante en la dieta de pobladores nativos del Alto Orinoco de Venezuela; y, en el Amazonas se ha reportado que al menos 32 comunidades usan animales terrestres invertebrados como fuente alimenticia no slo rica en protenas, sino tambin en grasas y micronutrientes. 7 Por otro lado, se ha realizado un estudio con el objetivo de comparar el efecto de la "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 8 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" harina de lombriz y la casena sobre la recuperacin nutricional de ratas albinas desnutridas. Resultando que no hubo diferencias significativas entre el uso de ambas fuentes de protena. 8 En trabajos de investigacin realizados en Chile sobre la obtencin, composicin qumica, valor nutricional y calidad bacteriolgica de la harina de lombriz, se report un alto contenido de protena de buena calidad, con un valor de NPR de 3,86 1,46 y de digestibilidad aparente de 91,66%. 9 En otro estudio titulado: " NutritionaI and ToxicoIogicaI EvaIuation on Rats of Eearthworm ( Eisenia foetida ) MeaI as Protein Source for AnimaI Feed 10 se concluy que la harina de lombriz representa una fuente de protena de alto valor biolgico por los ndices de NPR y PER, donde no se encontr diferencia significativa al ser comparada con la casena. As tambin; se report la deficiencia relativa de triptfano y no se encontr efecto negativo del uso de la harina de lombriz en la salud de las ratas, que fueron evaluadas hasta su cuarta generacin. Con respecto al contenido de aminocidos en la harina de lombriz, se public un trabajo de investigacin en el que se utiliz el mtodo analtico por cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC), en el que se concluy que la harina de lombriz se caracteriza por un contenido de aminocidos esenciales tales como: fenilalanina, leusina, isoleucina, metionina, lisina y valina, mayor del 3%, por lo que se le consider como una posible solucin de bajo costo, frente a los problemas nutricionales y ecolgicos de algunos pases en vas de desarrollo. 11 En el Per, se ha realizado un estudio con el objetivo de determinar la factibilidad tecnolgica de producir harina de lombriz (Eisenia foetida) para el consumo humano. En este se concluy que se puede obtener harina de lombriz con caractersticas bromatolgicas, microbiolgicas y nutricionales adecuadas. 12 Frente al inters justificado del uso de la lombriz como una fuente no convencional de protenas de buena calidad y el limitado nmero de investigaciones, en relacin a la calidad proteica, realizadas en el Per, se justifica la importancia de la realizacin del presente trabajo, ya que considero que este producto no slo es importante por su valor nutricional sino por sus beneficios adicionales como son la produccin de abono orgnico y la generacin de ingresos econmicos, razones que la convierten en un producto generador de bienestar nutricional, ecolgico y econmico. Por tales motivos, se realiz el presente trabajo cuyo objetivo fue determinar biolgicamente la calidad de la protena de la harina de lombriz (Eisenia foetida) mediante la aplicacin de los ensayos biolgicos de razn protenica neta (NPR), digestibilidad verdadera (D V ), valor biolgico verdadero (VB V ) y utilizacin protenica neta (NPU). Adems, se determin el ndice de eficiencia proteica (PER) con el fin de compararlo con otros trabajos de investigacin en los que consideraron el PER como indicador principal de calidad proteica. Las principales limitaciones en la realizacin del presente trabajo fueron la poca informacin e investigaciones en nuestro pas con respecto al valor nutricional de la harina de lombriz y el acceso restringido a las publicaciones cientficas extranjeras. II. INTRODUCCIN "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 9 "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 10 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" III MARCO TERICO 3.1) HISTORIA: Los principales hitos que se han reportado sobre el conocimiento y uso de las lombrices, datan desde los tiempos de Aristteles (384 322 a J.C.), quien defini a las lombrices como "ntestinos de la Tierra, apareciendo en notas asiticas, indias y europeas. En el ao 1881 el naturalista y fisilogo ingles Charles Darwin (1809-1882) plasm su experiencia de 40 aos de estudio y trabajo con las lombrices en el libro titulado "La Obtencin de Tierra Vegetal por Accin de las Lombrices, en el que se exponen estudios profundos sobre la crianza, habitad, sistema de recoleccin de lombrices, as como el rol ecolgico de estos invertebrados en la naturaleza. 13, 14 En 1920, se reportaron datos que sostienen apariciones de la lombriz como alimento humano; en este mismo ao se trajeron las lombrices de Europa, empezando su uso en las labores agrcolas de Argentina, a travs del suizo Albert Roch; quien desarroll tcnicas eficaces para la crianza y reproduccin de las mismas. Ya en el ao 1936 se inici la crianza de lombrices como tcnica, con el Dr. Tomas Barret, quien despus de 10 aos de estudio public su libro "Harnessing the Earthworm ("Utilizacin de la lombriz de tierra) destacando, que toda ciudad puede tener en el campo un criadero de lombrices alimentados con desperdicios de cocina, los cuales produciran gran cantidad de III MARCO TERICO "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 11 excelente abono. 13,14 A partir de los aos 50, se report que en California se empezaron usar un tipo de lombriz denominada Lombriz Roja de California o Eisenia foetida, la cual ofreca mayores ventajas para la crianza. En 1984 se inici la exportacin de lombrices californianas a cargo del argentino Kim Gagliardi, reconocido como el precursor de la lombricultura comercial. En la segunda mitad del ao 1980 se da la mayor expansin del uso de las lombrices en Sudamrica (Chile, Ecuador, Per, Colombia, Argentina y Brasil). Mientras que en Espaa, talia, Australia, ndia, EU y Canad se mantena y extenda su uso, as como el inters por el estudio de estos anlidos. 6, 13 En el caso del Per, se report que se exhibi por primera vez la crianza de las lombrices en la Feria nternacional del Pacfico, realizada en la ciudad de Lima en noviembre de 1986. nstalndose posteriormente criaderos en Chancay (Lima) y Ucayali (Pucallpa). Poco despus se extendi la crianza en todo el pas. Actualmente se ha difundido la tcnica en Huancayo, Tarapoto, Cerro de Pasco (Palca y Huariaca), Piura, Cusco, Arequipa, Huaraz, Tacna y Lima. Siendo el comportamiento de las lombrices diferente en cada zona; dependiendo del clima, la altitud, alimentacin, as como la tecnologa de produccin. Ya en 1991, se inform que existan 35 criadores de lombrices establecidos en el Per, que conducan criaderos de entre 210 y 400 lechos (de 30m 2 c/u). As mismo en esta poca, se report que en Chile existan 4,000 criadores establecidos con plantas de 800 lechos c/u en promedio, dedicados tambin a la produccin de lombriz. 13 Se report tambin, que la actividad comercial de la exportacin de lombrices californianas no fue fructfera debido a la escasa demanda en el mercado, por lo que su uso se redujo a aquellas destinadas a la agricultura orgnica, cra de ranas y peces. Sin embargo dicha situacin cambi en el ao 1993 cuando a travs del diario Clarn de Chile se comenz a promover el uso de las lombrices californianas como una propuesta ecolgica, que permitira a las personas deshacerse de sus desechos orgnicos (diferentes estircoles, desechos de hogares, desperdicios de aserraderos, etc.) y obtener un producto til para la crianza de plantas. Esta idea cambi la visin de la lombricultura con un fin comercial, en un mercado no identificado con el producto, y se empez a entregar miles de lombrices californianas a establecimientos rurales, escuelas, crceles y municipios deseosos de participar en el mejoramiento de su entorno. 13 Actualmente, se puede encontrar un listado de lombricultores en distintos pases del mundo, as como informacin relacionada con la lombricultura que ha sido publicada en distintas paginas web, en tesis, en documentales y otros documentos, donde se resalta su gran importancia en el campo ecolgico, agrcola y medicinal, mientras que en el campo nutricional, se menciona a la carne de lombriz por su alto valor proteico y contenido de aminocidos, por lo que stas han sido estudiadas y utilizadas en la preparacin de alimentos balanceados para animales monogstricos 10 . As mismo se han publicado noticias de utilizacin de las lombrices para preparaciones culinarias 6 entre ellos pat, hamburguesas, entre otros. En un proyecto presentado en la Feria Escolar de Ciencia y Tecnologa auspiciada por el Ministerio de Educacin y el Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa del Per, "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 12 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" alumnas del colegio Beln de Osma y Pardo del Dpto. de Apurimac en colaboracin con la Estacin Ecolgica San Jernimo propusieron la elaboracin de harina de lombriz, denominndola Sistema Nutricional Complejo y Equilibrado con el objetivo de incluirlo en la alimentacin balanceada de nios de escasos recursos econmicos, as tambin se han presentado cpsulas de harina de lombriz recomendadas como suplementos proteicos para humanos. En el Per se ha presentado un trabajo de investigacin sobre la obtencin y caracterizacin de harina de lombriz para consumo humano 12 . Durante la realizacin del presente trabajo de investigacin, se ubicaron centros de lombricultura en el departamento de Lima, en Lurn y en la Universidad Nacional Agraria la Molina, tambin se criaban lombrices en el C.E. Esther Cceres del Rmac y el CE Emilia Bonifati, as mismo se visit un pequeo grupo de agricultores en la comunidad campesina de Manchay Alto que posean pequeos pozos de crianza de lombrices, y en el departamento del Cusco, se visit el centro de lombricultura de la Universidad Nacional San Antonio Abad, donde se usan a las lombrices para alimentacin de truchas y ranas, as como para la produccin de abono orgnico. 3.2) LA LOMBRIZ (Eisenia foetida) A nivel mundial, existen 3000 especies de lombriz de tierra, que han sido divididas de acuerdo a sus caractersticas en dos grupos: lombrices silvestres o comunes y las lombrices domesticadas. Dentro del segundo grupo, destaca la Lombriz (Eisenia foetida) o comnmente conocida como lombriz roja de California; cuyo nombre hace alusin a la Universidad Agrcola de California, debido a que all aparecieron los primeros criaderos intensivos de dichas lombrices. 14, 15 3.2.1) CIasificacin Taxonmica y PrincipaIes Caractersticas de Ia Lombriz (Eisenia foetida) La Lombriz (Eisenia fotida), pertenece al reino animal, phylum annelida y familia Lumbricidae, como se muestra en el cuadro N 1. Cuadro N 1. CIasificacin Taxonmica de Ia Lombriz (Eisenia foetida) Reino AnimaI Phylum Annelida Clase Oligochaeta Familia Lumbricidae Gnero Eisenia Especie Eisenia foetida Fuente: Curi F. (2003). 13 III MARCO TERICO "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 13 El uso de las lombrices (Eisenia foetida), es extendido a nivel mundial; debido a las ventajas que stas ofrecen en relacin a otras especies comunes, como son: el mayor promedio de vida (16 aos), la mayor frecuencia de apareamiento (cada 7 das a partir del tercer mes de nacidas), la mayor tasa de reproduccin y la mejor adaptacin al cautiverio. Adems su carne tiene mejores caractersticas que la carne de la lombriz comn y son las que mejores resultados ofrecen a la lombricultura. Cuadro N 2. La lombricultura es una biotecnologa, que consiste en la utilizacin de la lombriz como herramienta para el reciclaje de materia orgnica y la obtencin de humus (abono orgnico de buena calidad) y biomasa de lombrices, de las cuales; se puede obtener carne o harina con alto contenido proteico. 6 La carne o harina de lombriz (Eisenia foetida) ha sido considerada una fuente de protena no convencional de bajo costo, debido a: la facilidad de crianza, la alta fecundidad y la longevidad de las lombrices, lo que les permite una alta tasa poblacional y una excelente dinmica poblacional de importancia en la fabricacin del humus y biomasa de lombrices. As mismo, su bajo costo se debe a que las lombrices son saprfagas, ya que son capaces de alimentarse y metabolizar desechos biodegradables de todo tipo, desde detritus orgnico hasta coprolitos animales. Cuadro N 2. PrincipaIes Caractersticas de Ia Lombriz (Eisenia foetida) comparada con Ia Lumbricus terrestris Caractersticas Eisenia foetida Lumbricus terrestris Promedio de vida 16 aos 4 aos Frecuencia de Apareamiento 7 das 45 das N Nacidos 2-21 1-4 Lomb/ao a partir de una 1500 200 Cautividad Fcil Muy Difcil Longitud 6-8cm 12-20cm Carne Suculenta Blanda Humedad 82.5% 45% Permanencia No huye Huye Fuente: Ferrruzi C. (1984) 6 3.2.2) Caractersticas MorfoIgicas ms ResaItantes Morfologa Externa: La lombriz es un gusano cilndrico, alargado, ligeramente aplanado en la parte ventral y cnica en la parte anterior. Anatmicamente la caracterstica central de la lombriz (Eisenia foetida), como de todo el phylum anlido, es la divisin del cuerpo en segmentos o anillos. "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 14 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" Tanto los rganos como la pared corporal adquieren la forma de segmentos separados en tabiques transversales. En varios segmentos se repiten rganos corporales como musculatura, nervios e incluso rganos de excrecin y gnadas, el nico sistema no afectado es el digestivo, ya que se extiende atravesando cada uno de los segmentos. 4 Fig. N 1. En el extremo anterior tiene un lbulo redondeado, llamado prostomio, detrs y debajo del mismo se abre la boca, rodeada por el primer anillo denominado peristomio. Carecen de ojos y el ltimo segmento del cuerpo se denomina pidigio o abertura anal. En el primer tercio, posee una protuberancia o ensanchamiento denominado clitelio o clitelium, cuya aparicin representa la madurez sexual de las lombrices y cumple importantes funciones en el proceso reproductivo. La regin ventral presenta cuatro dobles filas de cerdas o quetas por segmento, que son estructuras locomotoras y estn presentes a partir del tercer segmento y ausente en la ltima porcin del cuerpo. Finalmente las lombrices recin nacidas son de color crema y miden 1 mm. aproximadamente, a la semana miden 7mm. y su coloracin es blanca, entre los 15 y 20 das se torna rosada y miden entre 12-15mm., a los 90 das las lombrices se encuentran en la etapa de madurez y son rojizas, pueden alcanzar una longitud de 5-8 cm., su dimetro oscila entre 3-5mm., pesan aproximadamente 1g. y su cuerpo esta constituido por un total de 95-200 anillos o somitos, as mismo en esta etapa las lombrices se encuentran aptas para la reproduccin. Morfologa nterna: La lombriz tiene una pared corporal conformada, de afuera hacia adentro, por una cutcula externa que le permite el intercambio gaseoso, la permeabilidad al agua, as como; la transmisin de impulsos sensitivos. Luego se encuentra la epidermis, donde se encuentran clulas nerviosas con receptores luminosos sensitivos especializados en reaccionar al pH y a la temperatura, tambin se encuentra el sentido del tacto y rganos gustativos, que le permiten distinguir entre los diferentes sustratos alimenticios, as mismo por la epidermis la lombriz realiza la funcin de respiracin. Posteriormente se encuentran las capas fibrosas musculares (circular externa y longitudinal interna), peritoneo y finalmente se encuentran los rganos de los sistemas circulatorios (conformado por cinco pares de corazones), nervioso y muscular que se encuentran dentro del celoma. Fig. N 2. El celoma es definido como un amplio espacio lleno de lquido, que se extiende por la pared del cuerpo y envuelve al aparato digestivo de la lombriz. Este lquido III MARCO TERICO "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 15 FIGURA N 1. Morfologa Externa de la Lombriz (Eisenia foetida) Fuente: Ferruzi C.(1984) 6 celmico se junta con la sangre y transportan el alimento , los desechos y los gases respiratorios de la lombriz, tambin cumple la funcin de locomocin y es considerado como un esqueleto hidrulico contra el cual actan los msculos para cambiar la forma del cuerpo. El aparato digestivo es de forma tubular y forma una buena parte del cuerpo de la lombriz, esta conformado por la cavidad bucal, la faringe, el esfago, el buche, la molleja, el intestino y el ano. La faringe es el principal rgano de ingestin, que funciona como una bomba succionadora, cuyas paredes poseen glndulas que producen secrecin salival, que contienen sustancias mucosas y enzimas que permiten humedecer y predigerir el alimento. A continuacin sigue el esfago, de tipo tubular estrecho, que puede ser modificado a diferentes niveles para formar un estmago, un buche o una molleja. El esfago posee glndulas calcferas encargadas de neutralizar la acidez de la materia vegetal, posteriormente; y sin mayor modificacin, pasa al buche, donde el alimento puede ser almacenado temporalmente y se realiza el humedecimiento y ablandamiento preliminares. Finalmente, el intestino forma el resto del aparato digestivo, en la mitad anterior del intestino se da la secrecin y digestin, mientras que en la mitad posterior ocurre la absorcin. El aparato digestivo es de forma tubular y forma una buena parte del cuerpo de la lombriz, esta conformado por la cavidad bucal, la faringe, el esfago, el buche, la molleja, el intestino y el ano. La faringe es el principal rgano de ingestin, que funciona como una bomba succionadora, cuyas paredes poseen glndulas que producen secrecin salival, que contienen sustancias mucosas y enzimas que permiten humedecer y predigerir el alimento. A continuacin sigue el esfago, de tipo tubular estrecho, que puede ser modificado a diferentes niveles para formar un estmago, un buche o una molleja. El esfago posee glndulas calcferas encargadas de neutralizar la acidez de la materia vegetal, posteriormente y sin mayor modificacin pasa al buche en el que el "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 16 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" alimento, puede ser almacenado temporalmente y se realiza el humedecimiento y ablandamiento preliminares, finalmente el intestino forma el resto del aparato digestivo, en la mitad anterior del intestino se da la secrecin y digestin, mientras que en la mitad posterior ocurre la absorcin. FIGURA N 2. Vista Dorsal de Estructuras Internas de la Lombriz (Eisenia foetida) Fuente: Aguilera D. (2004) 14 Por otro lado, la lombriz es una especie hermafrodita incompleta que contiene los dos aparatos reproductores pero no se puede fecundar sola. El aparato reproductor masculino comprende dos pares de testculos alojados en el segmento 10 y 11 (parte anterior cerca de la boca) mientras que el aparato reproductor femenino, est formado por un par de ovarios alojados en el anillo 13 (se encuentra detrs del aparato genital masculino). 12, 14 III MARCO TERICO "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 17 3.2.3) Importancia de Ia Lombriz (Eisenia foetida) a) En la agricultura y ecologa: El uso de las lombrices permiten la transformacin de desechos orgnicos de origen animal y vegetal, en un abono orgnico de alta calidad y bajo costo que mejora el estado de los suelos, as mismo acta como hormona de crecimiento vegetal y tiene un efecto plaguicida, lo que lo convierte en un potente fertilizante natural que no deteriora el medio ambiente y a su vez disminuye los costos de produccin agrcola, por lo que es considerado un buen mtodo de reciclaje de residuos slidos 13, 14 b) En la industria farmacutica: Se han utilizado las lombrices para preparar sustancias medicinales para calmar la debilidad post parto, sntomas del reumatismo, tos crnica, diarrea y tambin se habra usado como antipirtico y antibitico. As mismo se reporta que a nivel industrial se han elaborado, antdotos y constrictores vaso sanguneos. 13, 15 En un estudio reciente en el ao 2005, se obtuvo del tejido de la lombriz (Eisenia foetida), un producto denominado Glycolipoprotein G-90, el cual exhibi una actividad antibacterial sobre las bacterias patgenas facultativas, lo cual representa un hallazgo importante que podra ser de inters en el campo de la medicina veterinaria y humana. 16 c) En la alimentacin: Debido a la alta tasa de reproduccin y longevidad de la lombriz (Eisenia foetida), su crianza permite obtener un excedente poblacional importante, que puede ser convertido en carne o harina, considerada como fuente de protena de origen animal no convencional de alta calidad. 14 La harina de lombriz ha sido utilizada en la preparacin de alimentos balanceados para animales como: aves, cuyes, conejos, peces, ranas, camarones, langostinos entre otros. 17 Cuyos resultados, han demostrado una alta tasa de conversin alimenticia, que podra significar un ahorro importante en los costos de alimentacin de animales. Al respecto, en un estudio se aliment pollos con harina de carne y harina de lombriz, por separado, durante 52 das; al final del ensayo se obtuvo que la tasa de crecimiento de los pollos alimentados con harina de lombriz fue similar a la otra harina, pero consumieron un 13% menos de alimento, lo que determin una mejor eficiencia de conversin alimenticia y no se reportaron efectos nocivos con la harina de lombriz. 18 As mismo, en el estudio de Nuez M. se report que el efecto de la harina de lombriz, de la harina de pescado y de la casena, en el crecimiento de pollos jvenes; fue similar. 17 En otro estudio, la harina de lombriz (Eisenia foetida) fue empleada como sustituto de la protena de soya en dietas para pollos de engorde, concluyendo que sta podra sustituir en un 50% dicha protena.19 En el ao 1993, se realiz un trabajo de investigacin en la Universidad Nacional de Huancayo, donde se report que es factible reemplazar la harina de pescado por la harina de lombriz en raciones de crecimiento de cuyes criollos, ya que no exista diferencia significativa entre el incremento de peso, as como la mortalidad en ambos grupos. 20 En cuanto al uso de lombriz, como un suplemento proteico en dietas para conejos en "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 18 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" crecimiento comparado con la harina de soya, se concluy; que es posible sustituir el 30% de la protena con harina de lombriz sin efecto fisiolgico adverso. 21 As mismo, se us la harina de lombriz para suplementacin de dietas para conejos de engorde, concluyendo que la harina de lombriz constituye una alternativa prctica para la alimentacin de conejos durante el engorde en condiciones tropicales. 22 En esta misma lnea, en el ao 1994 se report el trabajo realizado en la universidad nacional de la Amazona Peruana donde se concluy, que es factible la sustitucin hasta de un 100% de la harina de pescado por harina de lombriz, en la formulacin de raciones de conejos en engorde. 22 En la alimentacin de truchas arco iris, se report que la inclusin del 21% de harina de lombriz en la dieta para truchas, mejora el crecimiento de las mismas en relacin a una dieta control, as mismo no se reportaron alteraciones de carcter nutricional por lo que concluyeron, que es factible la inclusin de harina de lombriz por ser de bajo costo, altamente proteico y de elaboracin sencilla y artesanal. 23 Los buenos resultados obtenidos en relacin al uso de la harina de lombriz, en la alimentacin animal, ha llevado a considerarlo un alimento potencial para ser introducido en la alimentacin humana. Al respecto, se ha reportado en el ao 1986, que en pases con mayor adelanto tecnolgico como Japn y Taiwan, se incorpor la harina de lombriz al consumo humano, siendo muy cotizada por su alto valor biolgico. 10, 13, 15 As mismo en la Universidad Nacional de San Agustn (Arequipa-Per) en el ao 1995, se evalu el efecto de la harina de lombriz en la recuperacin nutricional de ratas albinas comparada con una dieta con casena. Donde se evidenci que el uso de la harina de lombriz, fue una buena alternativa de alimentacin para la recuperacin nutricional de ratas y se sugiri su aplicacin en seres humanos. 8 Por otro lado en la ciudad de Lima en el ao 1997, se desarroll un trabajo de investigacin titulado Obtencin y Caracterizacin de la Harina de lombriz (Eisenia foetida) para Consumo Humano. As mismo en diferentes partes del mundo, se han realizado distintos trabajos que reportan datos sobre el valor nutricional de la harina de lombriz y que corroboran su potencialidad como alimento para consumo humano. 3.3) DEFINICIN DE CARNE Y HARINA DE LOMBRIZ (Eisenia foetida). En el presente trabajo la carne de lombriz se define, en relacin a su proceso de elaboracin, como el producto obtenido despus del sacrificio, purga y lavado cuidadoso de las lombrices frescas. Mientras que la harina de lombriz se ha definido como el producto seco y molido obtenido de la carne de lombriz desecada. Comparando la harina de lombriz, con las normas referidas a la harina de pescado III MARCO TERICO "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 19 para consumo humano dadas por el grupo de supervisin de protenas FAO y UNCEF, la harina de lombriz sera definida como un producto con mayor contenido de grasa y sin limitacin de olor y sabor, pero elaborado a partir de lombriz fresca. 24 3.3.1) Factores que afectan Ia Cantidad y CaIidad de Ia Harina de Lombriz: a) La calidad del alimento de la lombriz: El alimento de la lombriz, debe estar en condiciones ptimas, para lo cual se debe controlar algunos parmetros como: la temperatura del alimento (T optima: 15- 20C), la humedad (80-90%), condiciones aerbicas, contenidos amoniacales inferiores a 0.5mg/g, contenido de sales menores a 0.5% y un pH de 5-9. Para lograr estas condiciones, el alimento debe ser sometido a una serie de procesos (compostaje), antes de ser consumido, caso contrario; las lombrices moriran o no lograran una ptima tasa de reproduccin y desarrollo. 6 As mismo, se ha indicado que el alimento de la lombriz debe ser balanceado, con un contenido de protenas del 15-17%, y con un adecuado aporte de carbohidratos, lpidos, sales minerales y fibra. Esto determinar el peso, longitud y contenidos nutricionales mximos en el menor tiempo. 10 b) Densidad poblacional por metro cuadrado: Una alta densidad de lombrices en un espacio reducido no es conveniente, porque el alimento no alcanza para satisfacer las necesidades de estos animales, obteniendo un desarrollo y reproduccin inadecuadas, por lo cual se ha recomendado que los lechos (lugares donde se cra a las lombrices) deben ser de 30-40cm de ancho y de 1-1.20m. de largo y que la densidad poblacional en estos debe ser de 5000 lombrices/ m 2 . 13 c) Periodo de Cosecha: Para fines de obtencin de un mayor rendimiento de harina de lombriz, es importante que las lombrices se encuentren en el periodo de adultez, lo cual se detecta a partir de la presencia del clitelio. 17 d) Frecuencia de la cosecha: Se ha comprobado que la lombriz ( Eisenia foetida) logra duplicar la biomasa en un periodo de 60-90 das, lo que esta sujeto al tipo de alimentos empleados y las condiciones de manejo. (Se podrn obtenerse 4-6 cosechas por ao). 17 f) Procedimientos de elaboracin de harina de lombriz: Para obtener una mayor cantidad de harina de lombriz se debe considerar que las lombrices se encuentren en estado de madurez a la hora de la seleccin, la efectividad de la purga, un correcto lavado, deshidratado y molido. As mismo se debe tener en cuenta la temperatura del deshidratado a la que la carne de lombriz ser sometida, ya que sta puede ocasionar prdidas de vitaminas, reacciones de pardeamiento e insolubilizacin marcada de las protenas que alteraran la calidad y el valor biolgico de las mismas, al respecto: una temperatura que evite la desnaturalizacin y precipitacin de las protenas debe estar bajo los 60C. 25 3.3.2) Situacin deI Consumo de Lombrices en Ia AIimentacin "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 20 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" Humana: En algunas zonas del mundo, el consumo de invertebrados es culturalmente aceptado y su consumo se justifica por su riqueza en algn tipo de nutriente o alguna propiedad que los pobladores le asignan. Al respecto Carlos Ferruzi 4 en su Manual de Lombricultura mencion: ". Aunque inicialmente la utilizacin de la Lombriz Roja para la alimentacin humana puede ocasionar cierta repugnancia, no debe olvidarse, que desde hace milenios algunas poblaciones negras del continente africano, se alimentan diariamente, con un tipo de lombrices existentes en las selvas ecuatoriales., as mismo report que la poblacin China hace ms de 2000 aos consume a las lombrices como fuente de alimentacin alternativa y como una fuente importante de protenas. Tambin Velsquez Et al 9 report, que en pases orientales como Japn, Filipinas y Taiwn, la harina de lombriz decolorada y desodorizada fue incorporada al consumo Humano. Segovia E. 11 mencion que en la actualidad se esta difundiendo el consumo de la lombriz en diversos pases de Amrica, tales como Estados Unidos, Colombia y Venezuela, a travs de concursos de gastronoma y preparaciones a base de lombrices, haciendo referencia que algunos norteamericanos disfrutan de la cocina a base de invertebrados, tal es as que en el ao 1987 en un elegante club de exploradores de Nueva York, se realizaron preparaciones a base de escarabajos, hormigas, saltamontes, grillos y lombrices de tierra. As mismo en programas televisivos, se report el uso de lombrices con verduras, usados para aumentar el grosor de panecillos, as tambin se supo de la realizacin de un proyecto tecnolgico de elaboracin de pat a base de carne de lombriz, manifestando que las lombrices al igual que la mayora de invertebrados (ostras, conchas, camarones, cangrejos, calamares, langostinos, etc.), constituyen delicias culinarias baratas, altamente nutritivas y de exquisito sabor. En el Per, mediante ferias tecnolgicas, se han presentado proyectos relacionados al uso de harina de lombriz en la elaboracin de galletas para consumo humano, as mismo; se ha realizado un trabajo de investigacin con el objetivo de obtener y caracterizar la harina de lombriz, donde concluyeron que es factible tecnolgicamente obtener harina de lombriz (Eisenia foetida), con caractersticas bromatolgicas, nutricionales y microbiolgicas aptas para consumo humano. 13 3.4) ASPECTOS NUTRICIONALES DE LA HARINA DE LOMBRIZ (Eisenia foetida) 3.4.1) Determinacin de Ia CaIidad Proteica La evaluacin de la calidad proteica se inicia con ensayos qumicos especficos que incluyen la determinacin del aminograma y el clculo del Score Qumico o computo III MARCO TERICO "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 21 qumico, seguido de los ensayos biolgicos realizados en humanos o en animales de experimentacin. 28 El uso de animales de experimentacin, como las ratas, es comn debido a que son animales de tamao adecuado, rpido crecimiento, alta fertilidad, fcil manejo, adaptabilidad a las diversas dietas y habitad, y bajo costo en relacin a los ensayos realizados en humanos. Adems los ensayos realizados en animales han logrado un alto grado de estandarizacin. La extrapolacin de los valores obtenidos en ensayos con ratas, a la de los humanos no necesariamente es vlida, aunque se reportan experimentos en los que si lo han sido, por este motivo la aplicacin de los valores en animales, con respecto a la nutricin en humanos, podra ser ms frecuentemente cualitativa que cuantitativa. 26,27 Los mtodos ms comunes para determinar la calidad de las protenas alimenticias se dividen en dos grupos: lo mtodos qumicos y los mtodos biolgicos. Mtodos Qumicos: Se basan en la determinacin de los aminocidos esenciales de la protena en estudio y su comparacin con el patrn de aminocidos esenciales del preescolar, grupo etareo que presenta los mayores requerimientos de aminocidos esenciales. 28 Dentro de los mtodos qumicos se encuentra el mtodo de cmputo qumico, conocido como puntaje qumico, nmero qumico o score qumico preconizado por Mitchell y Block (1946), este mtodo se basa en calcular el porcentaje de presencia de los aminocidos esenciales, con respecto al patrn de referencia de aminocidos esenciales del preescolar mg/g de nitrgeno (FAO/OMS/UNU 1985). El porcentaje del aminocido esencial, que est en menor proporcin indica el aminocido limitante al cual se le denomina score qumico (SQ), cuando no hay dficit de ningn aminocido esencial el SQ es 100% y equivale al de una protena ideal o de referencia: por el contrario, si una protena es carente en un aminocidos esenciales su SQ es cero. 28 El valor del score qumico, multiplicado por el valor de la digestibilidad verdadera de la protena corresponde a la determinacin del score qumico corregido por la digestibilidad de la protena, cuyas siglas en ingles son PDCAAS (protein digestibility corrected aminoacid score), este mtodo fue propuesto por la FAO y ha reemplazado al PER como la norma para calcular el porcentaje del valor diario de protena, en el rotulado de los alimentos para adultos y nios mayores de un ao de edad. Mtodos biolgicos: Utilizan criterios fisiolgicos; principalmente cambios de peso corporal o retencin de nitrogeno. Algunos se pueden desarrollar en humanos (mtodo de balance nitrogenado), pero la mayora, se llevan a cabo en animales de laboratorio. Dentro de los mtodos basados en cambios de peso corporal, se encuentra el ndice de eficiencia proteica (PER), considerado el ms simple y de uso extendido, que fue definido por Osborne, Mendel y Ferry (1919) como la relacin entre el consumo de protena y la ganancia de peso de los animales de experimentacin a un nivel ptimo de protena (9.09 10%). Este mtodo presenta algunas desventajas, tales como: los valores obtenidos son dependientes de la dosis y el resultado final se ve afectado por los "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 22 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" diversos factores que modifican la ingesta total de alimentos. As mismo; la asuncin de que la ganancia de peso es debido al incremento de protena tisular, no es siempre vlida. Adems el PER no toma en cuenta algn margen referente a la funcin de mantenimiento que cumplen las protenas. Es decir; slo consideran su eficacia en funcin de la ganancia de peso, por lo que tienen una capacidad reducida, para discriminar entre las distintas protenas. 28 , 29 Otro mtodo, basado en el cambio de peso corporal, fue introducido por Pellet, L. (1980) y es conocido como razn protenica neta (NPR), que introdujo mejoras en el mtodo de PER al considerar un grupo aproteico. El clculo del NPR considera la diferencia de pesos del grupo aproteico y del grupo experimental, en vez de solamente el peso ganado por el grupo experimental. Lo que permite tomar en cuenta el aporte de la protena, no slo para crecimiento sino para mantenimiento, as mismo los resultados obtenidos son independientes del consumo total de alimento. 30 Dentro de los mtodos basados en la retencin de nitrgeno, se encuentra el mtodo de Miller y Bender (1953) denominado Utilizacin Protenica Neta (NPU). Este mtodo, en vez de usar la ganancia de peso, mide la medida de acumulacin de nitrgeno en la carcasa, asimismo es uno de los ms precisos y simples, ya que considera el empleo neto de la protena tanto para crecimiento y mantenimiento, al introducir un grupo aproteico. As mismo, el NPU es un mtodo sensible a los cambios de utilizacin de protena debido a factores de procesamiento. 31, 29, 30 Bender y Doell, han reportado que existe una alta correlacin entre los valores de NPU y NPR, por lo que los valores de NPR pueden llevarse a una escala porcentual, y ser comparada con el NPU al ser multiplicado por 16. Este valor obtenido fue definido por los autores como PRE (protein retention efficiency). 30 Por otro lado, la utilizacin neta de la protena, est basada en una combinacin del valor biolgico y de la digestibilidad de la protena alimentaria, por lo que el mtodo abreviado matemticamente coincide con multiplicar la digestibilidad verdadera, con el valor biolgico de la protena para obtener el NPU. 31, 29 Otro de los mtodos, se denomina digestibilidad verdadera que es considerada como la segunda en importancia, en la determinacin de la calidad de la protena, despus de la determinacin del score qumico. Esto se debe a que no todas las protenas son digeridas, absorbidas y utilizadas en la misma medida, debido a diferencias inherentes a la naturaleza de las protenas alimentaras (configuracin de la protena, unin de aminocidos, etc.), presencia de componentes no proteicos con influencia en la digestin (fibra en el alimento, fitatos, oxalatos, etc.), factores antifisiolgicos o a las condiciones de elaboracin del producto. La digestibilidad verdadera mide la fraccin del nitrgeno ingerido que es absorbido, mediante la diferencia entre la ingesta de alimento y la excrecin va fecal, dando un margen para aquella porcin de las heces que no provienen de residuos alimentarios sin digerir (clulas intestinales, las bacterias, los residuos de los jugos digestivos entre otros), es decir sta considera el nitrgeno metablico fecal de origen no diettico a travs de la inclusin de un grupo de animales alimentados con dieta aproteica. El valor aproximado de digestibilidad verdadera ptima es de 90-95%). 29, 32. III MARCO TERICO "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 23 Finalmente, otro de los mtodos biolgicos utilizados en el presente trabajo, se denomina Valor Biolgico de la Protena, definido por Thomas y Mitchel (1923). Este mtodo mide la fraccin del nitrgeno absorbido, que es retenido por el organismo para el crecimiento y el mantenimiento corporal. Se toman en cuenta las prdidas por digestin, as como por metabolismo, y mide la eficiencia que tiene la protena absorbida para proveer los aminocidos necesarios para la sntesis de la protena corporal y mantenimiento. Este mtodo se basa en que las principales vas de eliminacin del nitrgeno de la dieta son las heces y la orina, por lo que se da por supuesto que todo el nitrgeno ingerido que no se recupera de estas salidas es retenido y empleado por el organismo para satisfacer sus requerimientos de aminocidos. Se ha reportado que existe una buena correlacin el SQ antes descrito y el valor biolgico (VB), cuando se utiliza una protena de referencia adecuada y cuando los valores de SQ y VB son mayores del 50%. 29, 33, 34 3.4.2) AnIisis NutricionaI de Ia Harina de Lombriz (Eisenia foetida) La harina de lombriz, ha sido considerada importante por su alto contenido de protenas y de aminocidos esenciales as como el alto contenido de cidos grasos esenciales. 11 En relacin a la composicin de cidos grasos, en un estudio preliminar de los niveles de cidos grasos, mediante cromatografa de gases acoplada a espectrometra de masas, se concluy qu la harina de lombriz constituye una fuente no convencional importante de cidos grasos esenciales, por lo que podra considerarse como una alternativa nutricional. 35 En relacin a la cantidad y calidad de las protenas de la Harina de Lombriz, en Chile, el ao de 1986 se realiz un trabajo referido a la obtencin, composicin qumica, valor nutricional y calidad bacteriolgica 9 , donde se report un alto contenido de protenas (71.2 % b/s). En este trabajo la evaluacin biolgica de la calidad proteica se realiz con ratas Wistar y se utiliz los ensayos de eficiencia proteica neta (PER) cuyos resultados fueron de 2.44 + 0.17 y 2.71+ 0.25, y el ensayo de razn protenica neta (NPR) cuyos valores fueron de 3,86 1,46 y 4,04 0,26, para la harina de lombriz y para la casena respectivamente y el ensayo de digestibilidad aparente que fue de 87.46% para la harina de Lombriz y 91.66% para la casena, datos que ratifican, segn el autor, su alto valor biolgico. En cuanto al anlisis microbiolgico se demostr que no haba presencia de entero bacterias patgenas. As mismo, en el ao 1993 se realiz otro trabajo experimental con el objetivo de proveer informacin sobre el valor nutricional de la harina de lombriz (Eisenia foetida), incluyendo la evaluacin toxicolgica usando ratas de laboratorio. Donde concluyeron; al igual que el anterior trabajo, que la harina de lombriz representa una fuente de protena de alto valor biolgico, por los ndices de NPR y PER, donde no se encontr diferencia significativa entre la harina de lombriz y la casena. En relacin con la composicin de aminocidos de la harina de lombriz, esta revel una deficiencia relativa de triptfano y en relacin con la evaluacin toxicolgica, no se encontr efecto negativo sobre la salud de las ratas, que fueron evaluadas hasta su cuarta generacin. 10 En otro trabajo de investigacin, realizado en La Habana Cuba, sobre la "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 24 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" composicin qumica de la lombriz ( Eisenia foetida), se report un valor de protena en base seca de 62.13%, menor al reportado por Velsquez (1986). Tambin se report que el valor de digestibilidad del nitrgeno in vitro de la lombriz fue de 92.73% 36 mayor al reportado por Gonzalvo (2001), cuya digestibilidad in Vitro fue de 88.8%. 39 Otro trabajo realizado en el mismo lugar, report un valor de PER mayor en la harina de lombriz, en comparacin con la casena. Un valor de NPU de 68.58% para la harina de lombriz y 87.88% para la casena, as mismo; el valor de digestibilidad verdadera de la harina de lombriz fue de 86.64% y 100.15% para la casena. Mientras que el valor biolgico, en el mismo orden, fue de 78.98% y 85.17% respectivamente. 37 En el Per, en el ao 1997 se realiz un trabajo de investigacin sobre la obtencin y caracterizacin de la Harina de lombriz (Eisenia foetida) para consumo humano, en el que se report un valor ms alto de protenas en base seca (73.45%b/s), un valor de PER de 3.34 para la harina de lombriz y de 2.97 para la casena, el valor de digestibilidad aparente de la harina de lombriz de 89.15% y para la casena un valor de 90.25%, diferencia significativa estadsticamente. Dicho trabajo concluy, que es factible tecnolgicamente obtener harina de lombriz, con caractersticas bromatolgicas, nutricionales y microbiolgicas aptas para consumo humano. 12 El ao 2003, el Departamento de Ciencias de los Alimentos de la Facultad de Farmacia, de la Universidad de los Andes (Venezuela), public un trabajo cuyo objetivo fue determinar el contenido de aminocidos en muestras de lombrices convertidas previamente en harina, mediante el mtodo analtico por cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC), concluyendo que la harina de lombriz se caracteriza por un contenido de aminocido esenciales representativos como fenilalanina, leusina, isoleucina, metionina, lisina y valina mayor del 3% del p/p, la cuantificacin se realiz con dos tipos de muestra (harina obtenida por liofilizacin y harina obtenida por desecado a estufa), la diferencia entre los dos fue menos del 10% para cada aminocido, excepto para la lisina y tirosina, se evidenci que en todos los casos, se obtuvo un mayor contenido con la preparacin por liofilizado, por lo que se recomienda usar este mtodo para cuantificacin. 38 En el ao 2004, en un trabajo piloto no publicado realizado en la Facultad de Medicina de la UNMSM se determin la digestibilidad in vitro de la protena de la harina de lombriz utilizando el mtodo de Nitrogeno Soluble en Pepsina donde se obtuvo una digestibilidad del 89.6%. Composicin Qumica de la Harina de Lombriz En el cuadro N 3, se muestra los datos encontrados en relacin a la composicin qumica de la harina de lombriz ( Eisenia foetida), donde se ha observado que hay mayor variabilidad de resultados en el caso del contenido proteico (Prot.) y de extracto libre de nitrogeno (ELN) que corresponde a los carbohidratos, lo cual puede estar relacionado al tipo de alimentacin de las lombrices, as como al proceso de obtencin de la harina de lombriz. Cuadro N 3. Composicin Qumica de Ia harina de Iombriz (Eisenia foetida) segn Diversos Autores III MARCO TERICO "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 25 1 Fuente: Elaboracin propia. Componentes Autores MS* Prot. % E.E. % F.C. % ELN Cenizas Garca et al 1997 95,30 63,80 8,60 2.00 16,2 9,40 Alvarez L. 1999 92.00 65,26 8,48 0.00 18,58 7,66 baez et al 1993 91,70 71,10 9,60 2,94 6,11 10,14 Segovia E. 1997 92.00 73,45 9,35 0.0 11,20 6.0 X + DS 92.75 + 1.71 68.40 + 4.61 9.01 + 0.55 1.24 + 1.48 13.02 + 5.54 8.30 +1.85 1 Composicin de Aminocidos de la Harina de Lombriz Distintos investigadores han determinado la composicin de aminocidos de la protena de la harina de lombriz por lo que en el cuadro N 4 se presenta una recopilacin de los mismos, en los cuales se observan valores distintos que se podran explicar por variaciones en la precisin de las tcnicas as como el tipo de mtodo usado. 28 (Gramos de Aminocido / 100g. de Protena) Fuente: Elaboracin propia. *Citado por Nuez M (1995) 17 ** Valores medios citados por Vieira (2004) 40 Computo Aminoacdico de la Protena de la Harina de Lombriz En el cuadro N 5, computo aminoacdico de la harina de lombriz en humanos, se observa que no hay aminocido limitante, sin embargo al usar los valores de la composicin de aminocidos presentados por Segovia E. (1997) se hall que el aminocido limitante, utilizando tanto las necesidades de preescolares y escolares, fue el triptfano, lo que coincide con la observacin hecha por bez et al (1993). Al respecto, el triptfano as como los aminocidos azufrados son lo ms sensibles a la desaparicin o prdida durante el proceso de determinacin 38 , lo cual posiblemente sea causa de estas variaciones que pondran en duda la determinacin de la calidad de la protena por mtodos qumicos como son el score qumico o el PSCAASS para lo cual se requiere una menor variabilidad entre las cifras encontradas. En el computo aminoacdico en relacin a los requerimientos de aminocidos de las ratas se observa que los aminocidos limitantes fueron la metionina + cisteina y el triptfano. Cuadro N 6 Cuadro N 5: Computo Aminoacdico de Ia Harina de Lombriz en ReIacin aI Requerimiento de Aminocidos en Humanos "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 26 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" Lisina Met + Cis Treonina Triptfano Patrn aa esenciales del preescolar (mg/g N) * 363 156 213 69 Patrn aa esenciales del escolares (mg/g N)* 275 138 175 56 Harina de lombriz Valores medios (mg/g N)** 443,75 218,75 293,75 75,00 Computo de Aminocidos (CA) para pre escolares valores medio % 122,25 140,22 137,91 108,70 Computo de Aminocidos (CA) para escolares valores medio % 161,36 158,51 167,86 133,93 Fuente: Elaboracin propia. *Olivares et al (1994) 3 **Vieira et al (2004) 40 Fuente: Elaboracin propia.*nforme de una Consulta de Expertos FAO/OMS (1989) 2 **Vieira et al (2004) ) 40 III MARCO TERICO "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 27 "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 28 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" IV.- MATERIALES Y MTODOS 4.1. TIPO DE ESTUDIO: Estudio de tipo cuantitativo, descriptivo y observacional. 4.2. LUGAR DE ESTUDIO: La elaboracin de la harina de lombriz, se llev a cabo en las instalaciones de la Asociacin de Ecologistas Kausasunchis (San Jernimo Cusco), los anlisis qumicos se desarrollaron en el laboratorio de Evaluacin Nutricional de Alimentos (LENA) de la Universidad Nacional Agraria La Molina (UNALM) y los ensayos biolgicos se realizaron en el bioterio del laboratorio de Evaluaciones Biolgicas de la UNALM. 4.3. ELABORACIN DE LA HARINA DE LOMBRIZ IV.- MATERIALES Y MTODOS "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 29 Eisenia foetida): Provisin de La Materia Prima utilizada: La Asociacin de Ecologistas Kausasunchis (San Jernimo Cusco), proporcion cuatro kilos de lombrices maduras cuya alimentacin estuvo basada en compost de estircol de cuy, ms residuos de vegetales producidos en el hogar. Procedimientos de la Elaboracin de la Harina de Lombriz (Eisenia foetida): Limpieza: La limpieza se realiz de forma manual, donde se separ las lombrices maduras del compost (alimento de las lombrices). Foto N 1. Seleccin de la materia prima: La seleccin se realiz en forma manual y visual, considerando los criterios de madurez (presencia de clitelio) de las lombrices y ausencia de heridas o fraccionamientos en las mismas. Foto N 1. Limpieza de Materia Prima Purgado: "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 30 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" El objetivo de este procedimiento fue obtener lombrices con la menor cantidad de residuos alimenticios gstricos posibles, para lo cual, se las dej por 12 horas sin alimento para que de manera natural las lombrices utilicen el alimento contenido en si aparato digestivo. Lavado: Las lombrices fueron sometidas a prolijos y sucesivos lavados con abundante agua potable fra (4 5 lavados), con el fin de quitarles todos los residuos de estircol y vegetales adheridos a las mismas, as como los mismos desechos producidos por las lombrices (heces o humus). Todo el proceso dur 3 horas. Foto N 2. Foto N 2. Lavado de la Lombriz (Eisenia foetida) Sacrificado: Se sumergi a las lombrices en un recipiente de plstico, conteniendo una solucin de ClNa al 5% que cubra toda la superficie de las lombrices, donde murieron al cabo de 10 min. Foto N 3. La muerte de las lombrices se logr a travs del shock osmtico producido por la presin osmtica a la que fueron sometidas. Al final de este proceso se observ que la lombriz desprendi un fluido orgnico de color amarillo y olor caracterstico, lo que correspondera al contenido vascular as como el lquido celmico contenido en el aparato digestivo de las lombrices. IV.- MATERIALES Y MTODOS "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 31 Lavado: Se volvi a lavar la carne de lombriz con el fin de quitarle la sal, contenido y el olor del fluido amarillento. De este proceso se obtuvo la materia prima lista para ser convertida en harina de lombriz. Foto N 5. Foto N 3. Sacrificado de la Lombriz (Eisenia foetida) Lavado: Se volvi a lavar la carne de lombriz con el fin de quitarle la sal, el contenido vascular y celmico, as como el olor del fluido amarillento desprendido. De este proceso se obtuvo la materia prima lista para ser convertida en harina de lombriz. Foto N 4. Deshidratado: Se extendi la carne de lombriz, sobre una malla de polipropileno y se la expuso a intemperie durante 17 horas a una temperatura ambiental de 18C. Se utiliz este procedimiento por ser econmico, y no se utiliz otras formas de deshidratacin con el objetivo de evitar las temperaturas altas y prevenir posibles modificaciones que afecten la calidad de la protena de la harina de lombriz. Foto N 5. "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 32 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" Foto N 4. Materia Prima Lista para el Proceso de Elaboracin de Harina de Lombriz IV.- MATERIALES Y MTODOS "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 33 Foto N 5. Deshidratado de Carne de Lombriz (Eisenia foetida) Molienda: Se realiz, en un molino elctrico de martillo del laboratorio de Evaluacin biolgica de la UNALM. Tamizado: Se realiz el tamizaje con una malla N 60 ASTM y se obtuvo un producto homogneo de color pardo con un olor caracterstico parecido al proveniente de productos marinos. Almacenamiento: La harina de lombriz, se almacen en un recipiente de plstico hermtico a una temperatura de 18C. Al cabo de 5 das se realiz los anlisis qumicos y despus de 15 das se realizaron los ensayos biolgicos. "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 34 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" FIG. 3 FLUJOGRAMA DE OBTENCION DE HARINA DE LOMBRIZ (Eisenia foetida) 4.3. ANLISIS QUMICOS DE LA HARINA DE LOMBRIZ (Eisenia foetida) Determinacin del Anlisis Proximal de la Harina de Lombriz: Los anlisis qumicos, se han realizado segn mtodos de la Association of Official Agricultural Chemists (AOAC) 1990, los que estuvieron a cargo del laboratorio de Evaluacin Nutricional de Alimentos del Departamento de Zootecnia de la UNALM. Se utiliz una muestra de 50g. de harina de lombriz, obtenida despus de la homogeneizacin de un total de 460g. de harina preparada, todas las determinaciones qumicas se realizaron por duplicado. IV.- MATERIALES Y MTODOS "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 35 A continuacin de describe brevemente cada una de las determinaciones: Humedad: (AOAC 1990, Parte 950.46 pp. 931). Para determinar la cantidad de agua que contiene la muestra se coloc 5g. de la misma en una cpsula de aluminio y se la someti a 105 C por 6 horas en una estufa al vaco con una precisin de 105+1 C. La humedad se determin por diferencia de peso y se expres en porcentaje. Cenizas Totales: (AOAC 1990, Parte 942.05 pp. 70) Las cenizas totales, representan los residuos inorgnicos de la muestra y se obtuvo colocando 2g. de la misma en un crisol de porcelana y se la someti a incineracin, en una Mufla a 600 C por 4 horas. La ceniza se obtuvo pesando la materia restante. Protena Total: (AOAC 1990, Parte 984.13 pp. 74) Se determin la cantidad de total de nitrgeno de la muestra, para lo cual se utiliz el mtodo Semi-Micro Kjeldahl, donde se us 0.3g. de muestra. Para obtener el porcentaje de protena total se multiplic el porcentaje de Nitrgeno obtenido por 6.25. Extracto Etreo: (AOAC 1990, Parte 948.16 pp. 871) Se determin el contenido total de grasa de la muestra, utilizando el mtodo de extraccin en un equipo Soxhlet, usando como solvente el hexano, para lo cual se utiliz 3g. de muestra previamente desecada. Fibra cruda: (AOAC 1990, Parte 962.09 pp. 80) Se utiliz 3g. de muestra desecada y desgrasada y se determin la fibra cruda por hidrlisis cida y alcalina, permitiendo la liberacin de compuestos solubles. El residuo fibroso es sometido a ignicin y la fibra cruda se obtuvo por diferencia entre el peso del residuo fibroso seco y el peso de la ceniza obtenida a partir de l. Extracto libre de Nitrgeno (ELN): Se calcul por diferencia de 100 menos la suma de los porcentajes de humedad, protena total, extracto etreo, fibra cruda y cenizas. 4.4. ENSAYOS BIOLGICOS Poblacin Universo: Ratas macho, raza Holtzman de 21 y 25 das. Muestra: El nmero de animales usados en los ensayos fue determinado segn recomendacin del nforme de Evaluacin Nutricional de Alimentos Proteicos (1980). 28 El tipo de muestreo tuvo dos etapas; en la primera etapa, se seleccionaron las madres al azar mientras que en la segunda etapa se seleccionaron las ratas que cumplieron con las caractersticas del estudio (peso homogneo y buen estado de salud). Para los ensayos de NPR, VB V y D V se utilizaron 12 ratas macho, raza Holtzman recin destetadas de 25 das de nacidas, provenientes de distintas madres o camadas, con un peso promedio de 56.4g. Para el ensayo de NPU se utiliz 42 ratas macho, raza Holtzman de 21 das, de las cuales se seleccionaron 24 ratas que presentaron pesos homogneos y un estado "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 36 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" adecuado de salud al da de inicio del experimento. Preparacin de las dietas: Las dietas se elaboraron en base a las recomendaciones del nforme de Evaluacin Nutricional de Alimentos Proteicos (1980). 28 Se formularon tres dietas, una dieta experimental en base a protena de la harina de lombriz, una dieta control a base de casena y una dieta aproteica. En estas dietas se consider un aporte del 10% de protenas (dieta experimental y a base de casena), 5% fibra, 5% vitaminas, 4% de minerales, y carbohidratos y grasas hasta completar el aporte calrico requerido por los animales de experimentacin (375-400kcal.) Cuadro N 7. La dieta control, se us en el ensayo biolgico de determinacin de la utilizacin proteica neta (NPU), los dems valores de casena presentados corresponden a datos de referencia tomados del registro del laboratorio de evaluaciones biolgicas de la UNALM. Luego de la preparacin de las dietas se determin su contenido de protena mediante el mtodo Semi-Micro Kjeldahl cuyos resultados se utilizaron en las ecuaciones para determinar la calidad biolgica de la protena de la harina de lombriz. Cuadro N 7. Composicin de Ias Dietas usadas en Ios Ensayos BioIgicos (g / 100g de dieta) Insumo Dieta ExperimentaI g Dieta ControI g Dieta Aproteica g Protena 10,56 10,31 0,37 Sales Minerales 4,00 4,00 4,00 Mezcla de vitaminas 5,00 5,00 5,00 Grasa Vegetal 7,35 7,74 7,22 Almidn de Maz 68,09 67,95 78,41 Fibra 5,00 5,00 5,00 Total g. 100,00 100,00 100,00 En la foto N 6 se observa la dieta: experimental y aproteica utilizada en los ensayos de evaluacin biolgica. IV.- MATERIALES Y MTODOS "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 37 Foto N 6. Dietas utilizadas en los Ensayos de NPR, DV, VBV y NPU 4.4.1) Determinacin de Ia Razn Proteinica Neta (NPR) y eI ndice de Eficiencia Proteica (PER): Procedimiento: Segn Bender y Doell (1957) reportada en el nforme de la Consulta de Expertos FAO/OMS 1989, adaptado por el Laboratorio de Evaluaciones Biolgicas de la UNALM. El ensayo dur 15 das, se utilizaron los mismos grupos de animales de experimentacin usados en el ensayo de determinacin de digestibilidad verdadera y valor biolgico verdadero (12 ratas macho raza Holtzman recin destetadas de 25 das de nacidas, provenientes de distintas madres). Se registr el peso de cada rata, as como el peso del residuo (alimento que queda en el comedero) y desperdicio del alimento suministrado (alimento que cae a la base de la jaula o queda en las ranuras de la misma), durante los 15 das de experimentacin. Foto N 7. "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 38 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" Foto N 7. Control de Peso de cada Rata Completado el periodo de experimentacin se calcul la razn protenica neta (NPR) de la protena de la harina de Lombriz (Eisenia foetida) mediante la siguiente formula 24 : NPR = (Ganancia de Peso del Animal de Prueba g + Perdida de peso promedio de los animales con dieta aproteica g) / (Protena consumida por el animal de prueba g) Los valores de NPR fueron comparados con datos referenciales de la casena, obtenida del registro de ensayos biolgicos del laboratorio de la UNALM. Se transform el valor de NPR en PRE (eficiencia de retencin proteica) 30 utilizando el mtodo sugerido por Bender y Doell (1957) con el fin de compararlo para poder ser comparado con el NPU en una escala de porcentajes. As mismo, con fines de comparacin con trabajos de investigacin previos, se determin el ndice de eficiencia proteica utilizando la siguiente ecuacin. PER: Ganancia de peso del animal experimental g. / Protena consumida g. 4.4.2) Determinacin de Ia DigestibiIidad Verdadera (D v ) y VaIor BioIgico Verdadero (VB V ): Procedimiento: Segn Thomas y Mitchel (1923), reportada en el nforme de la Consulta IV.- MATERIALES Y MTODOS "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 39 de Expertos FAO/OMS 1989, adaptado por el Laboratorio de Evaluaciones Biolgicas de la UNALM. La duracin del ensayo fue de 10 das, cuatro das de acostumbramiento a la jaula y la dieta experimental y seis das de evaluacin de la dieta experimental. Se utilizaron dos grupos de seis ratas macho raza Holtzman, recin destetadas, de 25 das de nacidas, de distintas camadas y con pesos homogneos. Las ratas fueron instaladas en jaulas metablicas individuales de aluminio, con sus respectivos comederos y bebederos. Donde se ofreci a un grupo, la dieta experimental y a otro, la dieta aproteica y agua adlibitum durante todo el periodo experimental. Foto N 8. Durante los cuatro primeros das de acostumbramiento, se registr el consumo diario de la dieta experimental y aproteica, peso diario de cada rata y el estado general fsico de las ratas. Finalizado el periodo de acostumbramiento, se procedi a acondicionar las jaulas metablicas con sus respectivos embudos colectores de heces y tubos de ensayo para la recoleccin de la orina, a estos tubos se agreg cuatro gotas de tolueno con el fin de conservar el nitrgeno urinario, as mismo; se colocaron hojas debajo de cada jaula para poder cuantificar el desperdicio de alimento que se deposite sobre las hojas. Finalmente se suministr la dieta experimental y aproteica combinada con 10mg. de carmn (colorante que sirvi como indicador para el inicio del experimento) y agua adlibitum. Foto N 8. Implementacin de las Jaulas Metablicas para los Ensayos Biolgicos de Valor "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 40 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" Biolgico y Digestibilidad Verdadera Durante los seis das de evaluacin se anot el peso de cada rata, el peso de la racin servida, el residuo y el desperdicio, y se cuantific la orina y las heces, estas ultimas fueron almacenadas con 100mg de thimol, producto usado para conservar el nitrgeno de las mismas. Foto N 9 y N 10. El primer da slo se tomaron en cuenta las heces coloreadas con el carmn y un tercio de la orina de las ratas. El resto de los das se tom en cuenta la totalidad de las heces y la orina excretada. Despus de los seis das de evaluacin, se determin la cantidad de nitrogeno en las heces y orina, mediante los mtodos de la AOAC 1990. Con los datos obtenidos se procedi a calcular la digestibilidad verdadera y el valor biolgico verdadero (D V y VB V respectivamente), segn las siguientes frmulas 24 : N = Nitrgeno ingerido por el grupo alimentado con dieta experimental. NF y NF K = Nitrgeno fecal excretado por el grupo experimental, y nitrgeno fecal metablico proveniente del grupo alimentado con dieta aproteica. NU y NU K = Nitrgeno urinario excretado por el grupo experimental y nitrgeno urinario endgeno proveniente del grupo alimentado con dieta aproteica. IV.- MATERIALES Y MTODOS "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 41 Foto N 9. Pesado de Heces Excretada por las Ratas del grupo Experimental y Aproteico "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 42 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" Foto N 10. Pesado de Orina Excretada por las Ratas del grupo Experimental y Aproteico 4.4.3) Determinacin de Ia UtiIizacin Proteinica Neta (NPU): Procedimiento: Segn Meter P, Young R. (1980), reportada en el nforme de la Consulta de Expertos FAO/OMS 1989, adaptado por el Laboratorio de Evaluaciones Biolgicas de la UNALM. La duracin del experimento fue de 17 das, siete das de acostumbramiento a la jaula y estandarizacin de pesos de cada grupo de animales y 10 das de evaluacin de las dietas experimental, aproteica y control. Se utilizaron ratas macho, raza Holtzmann de 21 das, recin destetados de seis madres diferentes y seleccionadas al azar. En el periodo de acostumbramiento se form seis grupos de siete ratas cada una, provenientes de camadas distintas. Durante estos das se control el peso de las ratas con la finalidad de que ste en el sptimo da sea homogneo. Ya con un peso similar entre los grupos de ratas, se procedi a formar seis grupos con cuatro ratas de diferentes madres, dos grupos con dieta aproteica, dos grupos con racin proteica (harina de lombriz) y dos grupos alimentados con dieta control. Estos grupos fueron acondicionados en jaulas metlicas de 30 x 25 x 20cm. con piso de malla de alambre galvanizado provisto de comederos y bebederos individuales Foto IV.- MATERIALES Y MTODOS "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 43 N 11. Foto N 11. Implementacin de las Jaulas Metlicas para el Ensayo Biolgico de Utilizacin Proteinica Neta Durante los 10 das se control el peso de los grupos y el alimento consumido, al final de este periodo y despus de tres horas de retiro del alimento, se sacrificaron a las ratas, por mtodo fsico; luego se hizo incisiones en la caja craneana, cavidad torxica y cavidad abdominal; finalmente, se puso las carcasas de las ratas sobre lunas de reloj y se las someti a desecacin en una estufa a 105C por 48 horas. Foto N 12 y 13. "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 44 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" Foto N 12. Realizacin de las Incisiones en el Crneo, Trax y Abdomen de las Ratas para ser Sometidas al desecado IV.- MATERIALES Y MTODOS "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 45 Foto N 13. Desecacin de las Carcasas en Estufa a 105 C por 48 horas Posteriormente las carcasas secas de las ratas fueron molidas y homogenizadas, y se determin el contenido de nitrgeno utilizando el anlisis de Semi-micro Kjeldahl (AOAC 1990). Foto N 14. "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 46 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" Foto N 14. Molienda de Carcasas Desecadas El ensayo se realiz a una concentracin de protena en la dieta de 10% por lo que se trat de un NPU estndar. Con los datos obtenidos, se procedi a calcular el valor de la utilizacin proteica neta segn la siguiente frmula: 28 Donde: B = Nitrgeno en carcasa del grupo alimentado con dieta experimental. B K = Nitrgeno en carcasa del grupo alimentado con dieta aproteica. N = Nitrgeno ingerido por el grupo alimentado con dieta experimental. N K = Nitrgeno ingerido por el grupo alimentado con dieta aproteica. 4.5 ANLISIS DE DATOS IV.- MATERIALES Y MTODOS "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 47 Se us el programa Microsoft EXCEL para el procesamiento de los datos, elaboracin de los cuadros, esquemas y grficos; y la estadstica descriptiva como: promedios y desviaciones estndar para la expresin de los resultados, y la prueba T de student de dos colas con un nivel de significancia del 95% para las resultados de evaluacin biolgica del grupo experimental, aproteico y el grupo control. "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 48 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" V. RESULTADOS Elaboracin de la harina de lombriz: En la elaboracin se utiliz 4 kilos de lombriz fresca, el promedio de peso individual de las lombrices en estado maduro fue de 0.38g.y el rendimiento de harina obtenido fue de 11.5% que equivale a 460g. Finalmente el resultado del proceso de elaboracin de la harina de lombriz, fue un producto homogneo de color pardo y olor caracterstico similar al percibido en los productos marinos. Anlisis Proximal de la Harina de Lombriz: La determinacin biolgica de la calidad de la protena de la harina de lombriz (Eisenia foetida), implic realizar determinaciones qumicas para conocer la composicin de la misma y elaborar las dietas para los ensayos biolgicos. Los resultados se muestran en el cuadro N 8, y destaca su alto contenido de Protenas, 68.20% b/s. Fuente: Elaboracin propia. Composicin de las Dietas: Los resultados del anlisis de protena de las dietas preparadas tal y como se sirvieron fueron: para la dieta experimental, control y aproteica de 10.63, 10.27 y 0.89 g. por ciento, respectivamente. As mismo; el contenido de nitrgeno de dichas dietas fue de 1.70, 1.64 y 0.14 g. por ciento, finalmente el contenido de materia seca de cada una de V. RESULTADOS "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 49 las dietas, en el mismo orden, fue de 92.77, 92.58 y 94.10 g. por ciento. Razn proteinica neta (NPR) El peso inicial promedio del grupo experimental fue de 56.77 1.19 g. y en el grupo alimentado con dieta aproteica, de 56.08 1.69 g. La variacin de peso entre estos grupos fue de 0.68 g. El peso final promedio del primer grupo fue de 92.58 6.51 mientras que para el grupo aproteico fue de 37.53 2.30, la dispersin de los datos de la ganancia de peso ha ido incrementndose en el grupo experimental en relacin al tiempo, mientras que en el grupo aproteico los pesos de las ratas fueron ms homogneos. En el grfico N 1. se observa los resultados obtenidos en cuanto a la evolucin de peso de las ratas del grupo experimental, donde resalta que el peso de las seis ratas fue incrementndose gradualmente durante los 15 das de duracin del ensayo biolgico. Grafico N 1. Evolucin de Peso de las Ratas del Grupo Experimental Mientras que en el grupo aproteico se observ que los pesos fueron disminuyendo hasta el ltimo da de experimentacin, como se muestra en el grfico N 2. "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 50 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" Grafico N 2. Evolucin de Peso de las Ratas del Grupo Aproteico En el cuadro N 9 se presenta los datos del consumo de protena y la ganancia de peso de los animales en los tres grupos de ensayo, resaltando que en el grupo experimental se observ una mayor ganancia de peso, as como un mayor consumo de alimentos. En el grfico N 3 se puede observar que hay una diferencia significativa entre estos parmetros medidos en el grupo experimental y el grupo alimentado con casena, lo cual se ha representado en el grfico con letras distintas. Cuadro N 9. Consumo de Protena y Ganancia de Peso Promedio en los grupos Experimental, Aproteico y el Grupo Alimentado con Casena Fuente: Elaboracin propia. *Datos tomados del Registro de Bioterio UNALM V. RESULTADOS "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 51 Grafico N 3. Ganancia de Peso y Consumo Promedio de Alimento de los Grupos Experimental, Aproteico y Alimentado con Casena Finalmente, en el cuadro N 10, se observa que el ndice de NPR de la harina de lombriz fue menor significativamente al del grupo de casena (p<0.05), mientras que el PER corregido de la harina de lombriz fue mayor a la casena, sin embargo; esta diferencia no fue significativa estadsticamente (p>0.05). Cuadro N 10. Razn Proteinica Neta e ndice de Eficiencia Proteica de Ia Harina de Lombriz (Eisenia foetida) Grupo NPR PER PER corregido Harina de Lombriz 4,13 0,17 2.71 0.24 3.11 0.27 Casena de referencia * 4.86 0.16 2.18 0.47 2.50 0.54 Fuente: Elaboracin propia. * Datos tomados del registro de Bioterio UNALM. Digestibilidad Verdadera y Valor Biolgico Verdadero (D V y VB V ) El grupo experimental present un mayor peso al iniciar el experimento, as mismo la ganancia de peso en este grupo fue mayor al del grupo aproteico y el grupo alimentado con casena. Cuadro N 11. Fuente: Elaboracin Propia. * Datos tomados del registro del Bioterio de UNALM. En el grfico N 4. se muestra el promedio de nitrgeno consumido en cada grupo, as como la cantidad de nitrgeno promedio eliminado en las heces y en la orina de las ratas. En este se observa que el consumo de nitrgeno fue mayor en el grupo experimental, as tambin la cantidad de nitrgeno eliminado en las heces y en la orina fue mayor en este grupo. "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 52 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" Grfico N 4. Comparacin del Promedio de Nitrgeno Consumido y Nitrgeno eliminado en las Heces y Orina de las ratas de los Grupos Experimental, con Casena y Aproteico Finalmente, la digestibilidad verdadera de la harina de lombriz fue 85.45 % 1.53 y de la casena de 95.16 % 3.65; mientras que el valor biolgico verdadero en el mismo orden fue 79.68 5.11 y 97.05 9.54, respectivamente. Dichas diferencias fueron significativas estadsticamente. (p<0.05) Utilizacin Protenica Neta (NPU): El peso inicial de los grupos de animales alimentados con dieta experimental, control y aproteico fue de 243.5 + 0.71g., cuya evolucin se observa en el grfico N 5. donde se resalta que en el grupo experimental, la ganancia de peso fue mayor durante los 10 das de duracin del ensayo biolgico. V. RESULTADOS "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 53 Grfico N 5. Evolucin de Peso Promedio de las Ratas del Grupo Experimental, Control y Aproteico El consumo de alimento, as como de nitrgeno fue mayor en el grupo experimental. Por otro lado, el grupo alimentado con dieta aproteica tuvo un consumo de nitrgeno de 0.04g. proveniente de protena vegetal de la maicena y la coronta de maz molida, utilizada en la preparacin de las dietas, cuyo contenido de nitrgeno fue inevitable. Cuadro N 12. Cuadro N 12. Promedio de Consumo de aIimento y Ganancia de Peso de Ias Ratas de Ios Grupos ExperimentaI, ControI y Aproteico Parmetro Grupo ExperimentaI Grupo ControI Grupo Aproteico Alimento Consumido (g) 93,40 4.38 68,58 10.13 30,97 0.83 Nitrgeno consumido (g) 1.59 0.07 1.13 0.17 0.04 0.00 Ganancia de peso 31,51 0.02 8,88 5.66 -11,18 1.52 Fuente: Elaboracin Propia. En el cuadro N 13, se observa los parmetros medidos en cada grupo de animales del ensayo del NPU. Cabe resaltar que las diferencias observadas no son estadsticamente significativas (p<0.05). Cuadro N 13. Parmetros EvaIuados en Ios Grupos ExperimentaI, ControI y Aproteico Durante eI ensayo de NPU "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 54 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" Parmetro/Grupo ExperimentaI ControI Aproteico Protena consumida (g.) 1.59 0.07 1.13 0.17 0.04 0.00 Peso Seco de Carcasa 30.93 0.95 25.20 2.69 14.63 0.71 Nitrgeno en Carcasa % 7.70 0.14 8.45 0.34 9.36 0.18 Nitrgeno en Carcasa (g.) 2.38 0.03 2.13 0.14 1.37 0.04 Contenido de agua (g.) 61.28 1.03 54.43 g. 3.15 34.95 g. 0.60 Fuente: Elaboracin Propia. Finalmente, el porcentaje de utilizacin protenica neta de la harina de lombriz fue de 66.54% 3.88 y de la casena fue de 71.23% 1.45, datos que no presentan diferencia estadsticamente significativa (p>0.05). En el cuadro N 14 se muestra el resumen de los resultados de calidad biolgica de la protena de la harina de lombriz, obtenida de acuerdo a los ensayos biolgicos realizados. Fuente: Elaboracin Propia. * Los colores distintos indican diferencia significativa (p< 0.05) V. RESULTADOS "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 55 "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 56 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" VI. DISCUSIN El rendimiento de harina obtenido fue de 11.5%, cercano al reportado por Velsquez et al (1986) y Segovia E. (1997) cuyos valores fueron de 10.62% y 13%, respectivamente. Este bajo rendimiento, se explica, principalmente, por el alto contenido de agua de las lombrices, lo cual representa el 82% de su composicin. As mismo, las caractersticas finales de la harina de lombriz obtenida, coincidieron con la descripcin reportada por Velsquez et al (1986) y Segovia E. (1997). En relacin al anlisis proximal de la harina de lombriz; se encontr un alto contenido de protenas (68.20% b/s), valor que fue mayor al reportado por Garca Et. al (1997) y lvarez L. (1999) (63.8% y 65.26% b/s respectivamente) y menor al encontrado por bez et al (1993) y Segovia E. (1997) quienes reportaron concentraciones de protena ms altas (71.20% y 73.40% respectivamente), dichas variaciones se deben principalmente a la calidad de alimento utilizado en la crianza de las lombrices. El contenido de humedad encontrado (7.63%) fue mayor al reportado por Velsquez et al (1986). En cuanto al contenido de grasa se encontr un 7.5% b/s, menor al hallado por otros autores, que fueron presentados en el cuadro N 3 y cuyo valor promedio fue de 9.10 0.5, este contenido de grasa y la presencia de cidos grasos insaturados, son responsables del olor caracterstico del producto y del riesgo de rancidez del mismo, por lo que se recomienda el uso de antioxidantes para el mantenimiento de dicha harina. 12 La presencia de fibra cruda en la harina de lombriz fue de 0.45% b/s. Al respecto, otros autores han reportado un valor mximo de 2.94% y mnimo de 0%, 21, 23 la causa VI. DISCUSIN "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 57 del contenido variado de fibra, se puede deber a la eficiencia del proceso de purga en la elaboracin de la harina de lombriz. El contenido de ceniza en la harina de lombriz fue de 8.48% b/s, menor al reportado por gnacio A. (1993) que fue de 10.14% y mayor en relacin a Segovia E. (1997) y lvarez L (1999), quienes reportaron un valor de 6% y 7.66%, dichos valores representan el contenido de minerales que posee la lombriz tales como Na, K, Fe Ca, Mg, P, Cu, Mn, Zn y otros que han sido reportados por Vielna Et al (2003). Las causas de variacin probablemente sean las mismas a las presentadas en el caso de la fibra. El contenido de carbohidratos fue de 15.37% b/s cercano al 14.94% y 16.2% obtenido por Tacn et Al (1983) citado por Nez M. (1995) y Garca Et al (1997) respectivamente, y mayor al reportado por Segovia E. (1997) e gnacio Et al (1993), 8.85% b/s y 6.11% respectivamente. En relacin a los ensayos biolgicos, las dietas fueron completas en todos sus aspectos, en especial en el aporte calrico, cuyo valor alcanzado fue de 381.2 kcal/100g. 1.4g. Lo cual se encuentra dentro del rango promedio de requerimiento calrico establecido para los animales del bioterio de la UNALM, asegurando as que la protena no se use como fuente de energa. Los datos de los ensayos biolgicos de crecimiento (PER y NPR) mostraron una ganancia de peso de aproximadamente 244.17% en el grupo experimental en relacin al obtenido por el grupo alimentado con dieta a base de la casena; dichos resultados de ganancia de peso, concuerdan con los datos obtenidos por Segovia et al. El consumo de protena en el grupo experimental fue de 200.92% ms que el grupo alimentado con casena. Este mayor consumo de alimento en el grupo experimental se podra deber a la mayor palatabilidad de la harina de lombriz, lo que concuerda con los datos presentados por Vieira M. (2004) quien report que el uso de la harina de lombriz estimula el consumo de la dieta. Los valores medios del ensayo de NPR de la harina de lombriz, as como de la casena de referencia fueron mayores a los reportados por bez et al (1993), que fue de 3.85 0.33 y 4.06 0.29 respectivamente, y se determin que existe una diferencia significativa entre el promedio de los valores obtenidos para el NPR de la harina de lombriz y la casena, siendo esta ltima mayor. El valor de PER de la protena de la harina de lombriz fue mayor al de la casena; Sin embargo, esta diferencia no fue estadsticamente significativa (p>0.05). Al respecto, Segovia E. (1997) report valores mayores para el PER de la harina de lombriz (3.34) y de la casena (2.81), obteniendo una diferencia significativa entre estos. Esta variabilidad entre resultados se debe a que el PER es un indicador poco reproducible, entre los distintos laboratorios. 28, 29 La digestibilidad verdadera (D V ) de la protena de la harina de lombriz fue menor estadsticamente (P<0.05), al de la casena (85.45 1.53 y 95.16 3.65 respectivamente). Al respecto Segovia et al (1997), report una digestibilidad verdadera mayor (90.59%), la variacin entre los valores de digestibilidad obtenidos pudo deberse a que en el presente trabajo hubo un mayor contenido de fibra cruda y carbohidratos. "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 58 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" Debido a que la determinacin de carbohidratos fue por diferencia, pareciera que parte de estos pertenecen a un tipo de fibra, que requiere de otro tipo de determinacin distinta a la usada por el mtodo de Wende y que pudiera estar causando una mayor evacuacin y por consiguiente una mayor prdida de nitrgeno por las heces, as tambin el aumento de la cantidad de heces estuvo influenciado por el mayor consumo de alimento presentado en el grupo experimental. Al mismo tiempo, la influencia de el calor a la que fue sometida la carne de lombriz del trabajo en referencia, podra haber mejorado la digestibilidad del producto, lo que no ocurri en la harina elaborada en el presente trabajo, ya que fue sometida a un desecado natural a temperatura de medio ambiente (18C ). El valor biolgico verdadero (VB V ) obtenido, tambin present una diferencia estadsticamente significativa (P<0.05) entre el grupo de casena de referencia (97.63 9.22) y el grupo experimental (79.68 5.11 %), este valor fue mayor al obtenido (78.98%) por Garca D. et al (1997); y a su vez, comparando este valor con algunos alimentos, este fue mayor que la carne de bovino y vsceras del mismo, as como de otras fuentes proteicas vegetales. En el ensayo de utilizacin proteica neta (NPU), se observ al igual que en los ensayos anteriores, una mayor ganancia de peso en el grupo experimental as como un mayor consumo de dieta. Los valores de NPU obtenidos mostraron que no hubo diferencia significativa (p>0.05) entre la protena de lombriz y la casena, que fueron de 66.67 3.76 y 71.37 0.04, respectivamente. As mismo, el valor de NPU de la protena de la harina de lombriz fue inferior al reportado por Garca Et al. (1997) que fue de 68.58%. Al comparar el NPU de la harina de lombriz con otras fuentes de protenas, se encontr que este fue mayor al NPU del corazn de pollo, carne de res, vsceras de vacuno y otras protenas de origen vegetal como el maz, el trigo, el arroz, etc. Los valores de NPU y PRE (eficiencia de retencin de protena) fueron cercanos, PRE 66.05 2.67 y NPU 66.67 3.76 respectivamente, lo cual coincide con la afirmacin de Bender y Doell (1957). Pudindose utilizar indistintamente. Una de las razones por la cual la calidad de la protena de la harina de lombriz no fue igual a la casena esta relacionada con el computo aminoacdico de la misma, el cual al ser comparada con el requerimiento de las ratas resulta ser deficiente en metionina + cistina, treonina y triptfano mientras que la casena fue deficiente slo en metionina + cisteina. Sin embargo, si se calcula el computo aminoacdico de la protena de la harina de lombriz en relacin al requerimiento de preescolares, este no presenta aminocido limitante por lo cual pareciera que el presente estudio en ratas subestima el valor biolgico de la protena si este se quiere extrapolar a humanos. En el presente trabajo se evalu la calidad proteica de la harina de lombriz utilizando slo ensayos biolgicos, lo cual pudo mejorarse si se combinaba con ensayos qumicos tales como la determinacin del aminograma, ya que; a pesar, que estos datos existen en la referencia, estos presentan mucha variacin, dicha variacin pudo ser causada por diferentes factores como son: la naturaleza y caractersticas de lo lombriz, as como el mtodo de determinacin de aminocidos utilizado, por lo cual se recomienda realizar un aminograma de harina de lombriz en nuestro pas bajo parmetros estandarizados; tanto en el mtodo de determinacin de aminocidos como en relacin a la naturaleza, crianza VI. DISCUSIN "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 59 y alimentacin de las lombrices. As mismo, consideramos que es importante incluir un grupo control para cada ensayo biolgico, y realizar determinaciones complementarias de contenido de grasa y agua en la carcasa de las ratas para aclarar la causa de la mayor ganancia de peso que se observ en el grupo de ratas alimentadas con harina de lombriz. Finalmente a pesar que la calidad de la protena de la harina de lombriz no alcanz la calidad de la protena ideal, como es la casena, sta es mejor que otras fuentes de protena de origen animal tales como la carne de bovino, sus vsceras, carne de vacuno, sus vsceras y el corazn de pollo, etc y productos de origen vegetal tales como el maz, las lentejas, frijoles, etc. Asimismo la harina de lombriz es un producto que se puede obtener a bajo costo porque su produccin no implica un gasto adicional, como es el caso de otras fuentes convencionales de protena, y adems se ha reportado que posee efectos medicinales aplicables a los seres humanos, as como tambin su importante contenido de vitaminas, minerales y cidos grasos presentes, por lo cual consideramos que el uso de esta protena es beneficiosa. "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 60 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" VII. CONCLUSIONES En base a los resultados encontrados se ha podido llegar a las siguientes conclusiones: 1. La harina de lombriz en base seca posee un elevado contenido de protenas que constituye el 68.20%, as mismo esta compuesta por 7.5% de extracto etreo, 0.45 % de fibra cruda, 8.48 % de ceniza y 15.37 % de carbohidratos. 2. La calidad biolgica de la protena de la harina de lombriz en los ensayos de crecimiento en ratas present diferencias significativas en cuanto a los resultados de NPR, a favor de la casena; mientras que el valor de PER fue mayor para la protena de harina de lombriz (aunque esta diferencia no fue estadsticamente significativa). 3. En los ensayos biolgicos de retencin de nitrgeno, se encontr diferencias significativas entre los parmetros de digestibilidad verdadera y valor biolgico verdadero a favor de la casena; mientras que en los valores de NPU no se encontr diferencia significativa en relacin a la casena. Dichos resultados se deben a que la harina de lombriz es deficiente en triptfano cuando este es comparado con los requerimientos de ratas en crecimiento. 4. A pesar que la calidad biolgica de la protena de la harina de lombriz fue menor a la casena, la harina de lombriz es una protena no convencional de mejor calidad que algunos productos de origen animal como la carne de bovino, sus vsceras, carne de vacuno, sus vsceras y el corazn de pollo, y productos de origen vegetal como el maz, las lentejas y frijoles, y que se puede obtener a bajo costo. VII. CONCLUSIONES "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 61 "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 62 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" VIII. RECOMENDACIONES 1. Realizar un estudio tecnolgico nutricional que incluya evaluaciones toxicolgicas y microbiolgicas, con el objetivo de evaluar la factibilidad de introducir este producto al consumo humano, como ya lo ha sido en otros pases donde se ha reportado se usa la harina como suplemento proteico. 2. Realizar estudios para mejorar los procesos tecnolgicos de elaboracin de productos a base de lombriz con el fin de mantener las cualidades nutricionales de la protena y de los otros nutrientes. 3. Continuar realizando investigaciones en relacin a los otros constituyentes nutricionales importantes de la harina de lombriz, como son: el contenido de minerales y cidos grasos, as como realizar investigaciones sobre sus efectos bactericidas y regenerativos reportados. 4. Debido a que hay evidencia de que el consumo de invertebrados no ha causado un efecto negativo en las personas y en los animales, se podra elaborar mezclas balanceadas a base de harina de lombriz con otros componentes que mejoren la deficiencia relativa de triptfano reportada en el presente trabajo y de este modo mejorar su calidad a un 100%. 5. Realizar estudios para mejorar y estandarizar las formas de crianza y produccin de las lombrices para obtener una mayor cantidad de lombrices con un buen contenido de protenas. 6. Promocionar el producto y la crianza de la lombrizcon mayor nfasis enlas zonas VIII. RECOMENDACIONES "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" 63 donde la actividad de sustento es la agrcola y pecuaria, ya que se vern beneficiados tanto en la parte alimentara (harina o carne de lombriz) as como en la obtencin de productos agro ecolgicos como bactericidas a base de lombriz, humus, etc. "Determinacin bioIgica de Ia caIidad proteica de Ia harina de Iombriz (Eisenia Foetida)" 64 "Programa Cybertesis PER - Derechos son del Autor" IX. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS Instituto Nacional de Estadstica e Informtica.(INEI). Encuesta Nacional Demogrfica y de Salud Familiar - Continua. Per 2005. Instituto APOYO. Revisin de la Literatura Nacional e Internacional referida a Factores Asociados a Desnutricin Crnica. Per 2001. Olivares S, Andrade M, Zacarias I. Manual de Autoinstruccin de Necesidades Nutricionales y Calidad de la Dieta. Chile: Instituto de Nutricin y Tecnologa de los Alimentos; 1994. Moreno R. Nutricin y Diettica Para Tecnlogos de Alimentos. 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