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Capitulo 4
MTODOS ANALTICOS

(SETOR DE FERMENTAO)

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Produto MOSTO
Analise % ART (MTODO SOMOGYI E NELSON)

Rev.: 00 FC4M1/03

1. MATERIAL Bales volumtricos de 100, 200, 500 mL; bquer de 200 mL, banho de temperatura controlada ou forno de microondas; banho de ebulio ,basto de vidro; colormetro ou espectrofotmetro; esptula; funil de plstico ou vidro de 500 mL, de haste curta; papel de filtro de 18,5 cm de dimetro; pipetas volumtricas 5, 10, 20 mL, seringa pipetadora automtica de 1 mL; suporte para tubo de ensaio; tubos de ensaio graduveis a cada 1 mL. 2. REAGENTES Celite; oxalato de sdio; reativo de Somogyi; reativo de Nelson; padro de acar invertido a 1%; HCl 0,75N, NaOH 0,75N. 3. PREPARO DA AMOSTRA Pipetar 5 mL do caldo e transferir para balo volumtrico de 500 mL. Completar o volume com gua destilada e agitar bem. Adicionar 0,2g de oxalato de sdio e agitar. Adicionar 1,0 - 2,0g de celite. Agitar. Filtrar em papel de filtro qualitativo, desprezando os primeiros 20 mL. (at esta etapa igual ao preparo do AR do caldo, podendo usar a mesma amostra para a determinao de AR e ART) Pipetar 5 mL do filtrado e colocar em balo volumtrico de 200 mL. Adicionar 10 mL de HCl 0,75N. de 1,5 cm x 15 cm, dispensete de 10 mL

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Colocar em banho-maria a 65C por 30 minutos ou em microondas por 30 segundos (ou tempo suficiente para entrar em ebulio) na potncia mxima, usando o condensador de gases. Esfriar em gua corrente. Adicionar 10 ml de NaOH 0,75N. (pH final no mximo 8) Completar o volume com gua destilada. Agitar bem. 4. DETERMINAO. Numerar 6 tubos de ensaio e adicionar em cada tubo as seguintes solues. Tubos 1 e 2: 1 mL de gua destilada (prova em branco). Tubos 3 e 4: 1 mL do padro de acar invertido, 50 g/mL.(Diluir o padro estoque de acar invertido 1%, 10/100 mL e depois 10/200 mL). Tubos 5 e 6: 1 mL do diludo no item do preparo da amostra. Colocar os tubos em banho em ebulio e aquecer at os tubos ficarem na mesma temperatura (2 a 3 minutos). Colocar com auxlio do dispensete 1 mL do reativo de Somogyi em cada tubo, sem tir-los da ebulio e deixar durante 15 minutos. Esfriar em gua corrente. Colocar em cada tubo 1 mL do reativo de Nelson. Agitar imediatamente. Colocar em cada tubo 7 mL de gua destilada e agitar bem. Deixar 5 minutos em repouso. Fazer a leitura em colormetro (filtro 54) ou espectrofotmetro a 535 nm. 5. CLCULOS %ART = 20 (La - Lb) / (Lp - Lb) La : leitura da amostra; Lb: leitura do branco; Lp: leitura do padro

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Analise % AR (MTODO SOMOGYI E NELSON)

Rev.: 00 FC4M2/03

1. MATERIAL Bales volumtricos de 100 e 500 mL; bquer de 200 mL, banho de ebulio; basto de vidro; colormetro ou espectrofotmetro; esptula; funil de plstico ou vidro de 500 mL, de haste curta; papel de filtro de 18,5 cm de dimetro; pipetas volumtricas 5 e 50 mL, seringa pipetadora automtica de 1 mL; suporte para tubo de ensaio; tubos de ensaio graduveis a cada 1 mL. 2. REAGENTES Celite; oxalato de sdio; reativo de Somogyi; reativo de Nelson; padro de acar invertido a 1%; 3. PREPARO DA AMOSTRA Pipetar 5 mL do caldo e transferir para balo volumtrico de 500 mL. Completar o volume com gua destilada e agitar bem. Adicionar 0,2g de oxalato de sdio e agitar. Adicionar 1,0 - 2,0g de celite. Agitar. Filtrar em papel de filtro qualitativo, desprezando os primeiros 20 mL. Determinar o AR do filtrado. Obs.: Se o AR do caldo for muito alto, diluir 50 mL do filtrado a 100 mL com gua destilada e multiplicar por 2 os clculos abaixo: de 1,5 cm x 15 cm, dispensete de 10 mL

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4. DETERMINAO. Numerar 6 tubos de ensaio e adicionar em cada tubo as seguintes solues. Tubos 1 e 2: 1 mL de gua destilada (prova em branco). Tubos 3 e 4: 1 mL do padro de acar invertido, 50 g/mL.(Diluir o padro estoque de acar invertido 1%, 10/100 mL e depois 10/200 mL). Tubos 5 e 6: 1 mL do diludo no item do preparo da amostra. Colocar os tubos em banho em ebulio e aquecer at os tubos ficarem na mesma temperatura (2 a 3 minutos). Colocar com auxlio do dispensete 1 mL do reativo de Somogyi em cada tubo, sem tir-los da ebulio e deixar durante 15 minutos. Esfriar em gua corrente. Colocar em cada tubo 1 mL do reativo de Nelson. Agitar imediatamente. Colocar em cada tubo 7 mL de gua destilada e agitar bem. Deixar 5 minutos em repouso. Fazer a leitura em colormetro (filtro 54) ou espectrofotmetro a 535 nm. 5. CLCULOS. % AR = 0,5 (La - Lb) / (Lp - Lb) La = leitura da amostra; Lb = leitura do branco; Lp = leitura do padro

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Analise % ART (MTODO DE EYNON - LANE) 1. MATERIAL

Rev.: 00 FC4M3/03

Bico de bulsen; trip; tela de amianto; suporte para bureta com presilha de bureta; bureta de 50 mL (todo esse material pode ser substitudo por aparelho de titulao Redutec, comum ou conectado a um pH-metro com eletrodo de oxireduo, de especificao Pt 805 - K7 INGOLD), banho de temperatura controlada ou forno de microondas; dispensete de 10 mL com graduao; bales volumtricos de 200 e 250 mL, pipeta de 5, 10, 20 e 50 ml; erlenmeyer de 500 ml papel de filtro de 18,5 centmetros de dimetro, qualitativo; funil de 500 mL com haste curta; bquer de 250 mL; esptula. 2. REAGENTES Oxalato de sdio, celite; reativo A, reativo B; soluo de azul de metileno a 1%; padro de acar invertido a 1% de ART; HCl 0,75N e NaOH 0,75N. 3. PREPARO DA AMOSTRA. Pipetar 50 mL de caldo e diluir a 250 mL com gua destilada. Agitar bem. Colocar 0,2 g de oxalato de sdio. Agitar bem. Colocar 0,5 - 1,0 g de celite. Agitar bem. Filtrar em papel de filtro. Descartar os primeiros 20 mL. Pipetar 10 mL do filtrado em balo de 200 mL. Colocar 20 mL de soluo de HCl 0,75N, agitando, deixar em banho de temperatura controlada a 65C durante 40 minutos. Ou em forno de microondas por 1 minuto (ou o tempo necessrio para entrar em ebulio) na potncia mxima com protetor de corroso.

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Esfriar em gua corrente. Colocar 20 ml da soluo de NaOH 0,75N. (Usar 2 gotas de soluo de fenolftalena 0,1% e a soluo devera ficar levemente rseo). Completar o volume a 200 mL com gua destilada. 4. PADRONIZAO DOS REATIVOS DE EYNON E LANE. Pipetar 50 mL do padro estoque 1% e diluir a 200 mL com gua destilada. Colocar na bureta. Titular 5 mL do reativo A + 5 mL do reativo B, anotando o volume (VP). (Fazer 5 repeties e tirar a mdia). 5. DETERMINAO a) TITULAO PRVIA O objetivo saber aproximadamente o volume de padro ou amostra que gastaremos na titulao propriamente dita. Encher a bureta com a amostra preparada. Colocar em um erlenmeyer de 500 mL de capacidade, (ou no Redutec) 20 mL de gua destilada e 5 mL do reativo A, mais 5 mL do reativo B. Agitar o erlenmeyer com cuidado. Ligar o aquecimento e quando o lquido j estiver em ebulio, titular com a soluo da bureta at o aparecimento do precipitado vermelho tijolo (no agitar o erlenmeyer depois do incio da titulao). Titular at no se perceber mais a cor azul. Colocar 3 gotas da soluo de azul de metileno e titular at a viragem (desaparecimento completo da cor azul). Anotar o volume de amostra gasta na titulao. Obs.: O lquido do erlenmeyer dever sempre estar em ebulio durante a titulao.

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b) TITULAO PROPRIAMENTE DITA Encher a bureta com amostra. Colocar em erlenmeyer de 500 mL, (ou no Redutec) 20 mL de gua destilada, 5 mL do reativo A, adicionado. Colocar nessa soluo ainda fria, um volume de amostra igual a 2 mL a menos que o volume gasto na titulao prvia. Colocar para ferver. Quando a soluo entrar em ebulio, marcar o tempo e ferver exatamente 2 minutos e em seguida adicionar 3 gotas de azul de metileno. Titular at viragem (titular no mximo em 1 minuto sem agitar). Anotar o volume de amostra gasta na titulao. c) TITULAO COM ELETRODO DE OXI-REDUO Colocar amostra na bureta do aparelho Redutec com eletrodo de oxi-reduo. Colocar na cmara de ebulio do aparelho, 10 mL de soluo de Fehling, recm misturada (reativos A + B em partes iguais) ou 5 mL de A + 5 mL de B. Aps o incio da ebulio, titular at o ponto de viragem no display. Anotar o volume gasto. Obs.: O ponto de viragem : Com o aparelho de pHmetro (voltmetro) ligado no ponto de mili-volt (mV) iniciar a titulao com velocidade constante, 1 gota por segundo, e observar no display a diminuio do mV at estabilizar.(Esta grandeza vai depender de cada aparelho). 6. CLCULOS. % ART = 25 (Vp / Va) (g/100 mL) 5 mL do reativo B. Agitar o erlenmeyer a cada reativo

Vp = Volume de padro gasto na titulao. Va = Volume de amostra gasto na titulao. Obs.: Se desejarmos o resultado em g/100g devemos dividir o resultado pela densidade aparente da amostra obtida em funo do brix. (Tabela I).

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Produto MOSTO
Analise % AR (MTODO DE EYNON - LANE) 1. MATERIAL

Rev.: 00 FC4M4/03

Bico de bulsen; trip; tela de amianto; suporte para bureta com presilha de bureta; bureta de 50 mL (todo esse material pode ser substitudo por aparelho de titulao Redutec, comum ou conectado a um pH-metro com eletrodo de oxireduo, de especificao Pt 805 - K7 INGOLD); dispensete de 10 mL com graduao; bales volumtricos de 200 e 250 mL, pipeta de 50 mL; erlenmeyer de 500 mL papel de filtro de 18,5 centmetros de dimetro, qualitativo; funil de 500 mL com haste curta; bquer de 250 mL; esptula. 2. REAGENTES Oxalato de sdio, celite; reativo A, reativo B; soluo de azul de metileno a 1%; padro de acar invertido a 1% de ART. 3. PREPARO DA AMOSTRA Adicionar 200 mL de caldo em um bquer. Adicionar 0,2 g de oxalato de sdio. Agitar. Adicionar 0,5 - 1,0 g de celite. Agitar. Filtrar em papel de filtro desprezando os primeiros 20 mL. Do filtrado obtido determinar o AR. 4. PADRONIZAO DOS REATIVOS DE EYNON E LANE. Pipetar 50 mL do padro estoque 1% e diluir a 200 ml com gua destilada. Colocar na bureta.

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Titular 5 mL do reativo A + 5 mL do reativo B, anotando o volume (VP). (Fazer 5 repeties e tirar a mdia). 5. DETERMINAO a) TITULAO PRVIA O objetivo saber aproximadamente o volume de padro ou amostra que gastaremos na titulao propriamente dita. Encher a bureta com a amostra preparada. Colocar em um erlenmeyer de 500 mL de capacidade, (ou no Redutec) 20 mL de gua destilada e 5 mL do reativo A, mais 5 mL do reativo B. Agitar o erlenmeyer com cuidado. Ligar o aquecimento e quando o lquido j estiver em ebulio, titular com a soluo da bureta at o aparecimento do precipitado vermelho tijolo (no agitar o erlenmeyer depois do incio da titulao). Titular at no se perceber mais a cor azul. Colocar 3 gotas da soluo de azul de metileno e titular at a viragem (desaparecimento completo da cor azul). Anotar o volume de amostra gasta na titulao. Obs.: O lquido do erlenmeyer dever sempre estar em ebulio durante a titulao. b) TITULAO PROPRIAMENTE DITA Encher a bureta com amostra. Colocar em erlenmeyer de 500 mL, (ou no Redutec) 20 mL de gua destilada, 5 mL do reativo A, adicionado. Colocar nessa soluo ainda fria, um volume de amostra igual a 2 mL a menos que o volume gasto na titulao prvia. Colocar para ferver. Quando a soluo entrar em ebulio, marcar o tempo e ferver exatamente 2 minutos e em seguida adicionar 3 gotas de azul de metileno. Titular at viragem (titular no mximo em 1 minuto sem agitar). Anotar o volume de amostra gasta na titulao. 5 mL do reativo B. Agitar o erlenmeyer a cada reativo

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c) TITULAO COM ELETRODO DE OXI-REDUO Colocar amostra na bureta do aparelho Redutec com eletrodo de oxi-reduo. Colocar na cmara de ebulio do aparelho, 10 mL de soluo de Fehling, recm misturada (reativos A + B em partes iguais) ou 5 mL de A + 5 mL de B. Aps o incio da ebulio, titular at o ponto de viragem no display. Anotar o volume gasto. Obs.: O ponto de viragem : Com o aparelho de pHmetro (voltmetro) ligado no ponto de mili-volt (mV) iniciar a titulao com velocidade constante, 1 gota por segundo, e observar no display a diminuio do mV at estabilizar.(Esta grandeza vai depender de cada aparelho). 6. CLCULOS % ART = 0,25 (Vp / Va) (g/100 mL)

Vp = Volume de padro gasto na titulao. Va = Volume de amostra gasto na titulao. Se desejarmos o resultado em g/100g devemos dividi-lo pela densidade aparente da amostra, obtida em funo do brix. (Tabela I)

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Produto MOSTO
Analise % IMPUREZAS

Rev.: 00 FC4M5/03

1. MATERIAL Centrifuga e tubos de centrifuga especifico com graduaes menores que os convencionais, de 10 ou 15 mL graduados. 2. DETERMINAO Homogeneizar a amostra. Pipetar 10 ou 15 mL para os tubos de centrifugas. Colocar os tubos na centrifuga, balanceados. Centrifugar por 10 minutos a 700 G ou 3000 rpm na centrifuga Excelsa Baby da Fanen. Anotar o volume de impurezas decantadas e o volume total. Obs.: Caso a quantidade de impurezas for pequena, a ponto de no dar leitura no tubo, deve se desprezar o sobrenadante, e completar o volume total novamente com mosto e centrifugar. Repetir essa operao at podermos fazer a leitura da impureza decantada. 3. CLCULOS % Impurezas = ((Vol. de impurezas decantadas)/(Somatria dos vol. usados)) x 100 Obs.: Caso tenha feito duas determinaes, usar a mdia como resultado.

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Produto MOSTO
Analise SULFITO

Rev.: 00 FC4M6/03

1. MATERIAL Micro destilador Kjeldahl; tubo de ensaio; balo volumtrico de 100 mL; espectrofotmetro ou colormetro; pipetas volumtricas de 5, 10 balana com no mnimo 1 centsimo de preciso. 2. REAGENTES - Cloreto de mercrio (HgCl2) - Cloreto de sdio (NaCl) - Bissulfito de sdio P.A. (NaHSO3) - Pararosanilina (C19 H19 N3 O) (mol 305,38g) 3. PREPARO DA AMOSTRA Pipetar 5 mL de mosto e colocar em balo volumtrico de 200 mL. Completar o volume. Agitar. Pipetar 20 mL e colocar no microdestilador kjeldahl. Colocar 10 mL de H2SO4 2N. Destilar at completar o balo, recebendo o destilado borbulhando em 20 mL de tetracloromercurato 0,1M contido em balo de 100 mL. Completar o volume com gua e agitar. - Sorbitol (C6H14O6) (mol 182,17) - cido clordrico P.A (HCl) - Formaldeido 37,4% (H2CO) e 20 mL; seringa pipetadora de 1 mL; dispensetes com regulagem para 1 mL e

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4. DETERMINAO Numerar 6 tubos de ensaio e adicionar em cada tubo as seguintes solues: Tubos 1 e 2: 5 mL de gua destilada Tubos 3 e 4: 5 mL de soluo padro de sulfito (soluo com 0,5 ppm de SO2) Tubos 5 e 6: 5 mL de amostra Adicionar a cada tubo 0,5 mL do reagente cromognico I (pararosanilina). Agitar. Adicionar a cada tubo 0,5 mL do reagente cromognico II (formaldeido). Agitar. Deixar em repouso 30 minutos. Ler em espectrofotmetro a 560 nm. 5. CLCULOS ppm SO2 no mosto = 100 (La - Lb) / (Lp - Lb) La = leitura da amostra; Lp = leitura do padro; Lb = leitura do branco.

ppm = expresso em mg SO2/l de mosto. Obs.: Para determinar a pureza do SO2, ver mtodo de sulfito em melao no capitulo 6, Mtodo FC6M6/03.

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Produto MOSTO
Analise ACIDEZ SULFRICA

Rev.: 00 FC4M7/03

1. MATERIAL Agitador magntico; cpsula magntica, para agitao; basto de plstico; bureta de 10mL; pipeta de 20 mL; proveta de 50 mL; peagmetro e bquer de 250 mL. 2. REAGENTE NaOH 0,1 N 3. DETERMINAO Titular o contedo do bquer com NaOH 0,1N padronizado, em pH-metro at pH -8,5. Anotar o volume gasto.(V) 4. CLCULOS Acidez = V NaOH 0,1N x 0,245 x fator de correo do NaOH 0,1N Obs.: A acidez expressa em g H2SO4/litro. A determinao do fator de correo igual a da acidez do melao, capitulo 3.

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Produto MOSTO
Analise NITROGNIO AMONIACAL

Rev.: 00 FC4M8/03

1. MATERIAIS Pipetas de 5, 10 e 20mL; erlenmeyer de 125mL; microdestilador Kjelbahl; bureta de 25mL; agitador magntico. 2. REAGENTES Acido brico; NaOH 45%; mistura indicadora (ver preparo de reagentes); acido sulfurico 0,01N 3. DETERMINAO Colocar 10 mL da mistura indicadora de cido brico, mais 40 mL de gua em erlenmeyer de 125 mL. Pipetar 20 mL de amostra e colocar no micro destilador Kjedahl. Adicionar 5 mL de soluo de NaOH 45%. Receber o destilado borbulhando na mistura indicadora, at dobrar o volume do erlenmeyer. Titular com soluo padronizada de H2SO4, 0,01N (ver padronizao no item preparo de reagentes). 4. CLCULO ppm de N amoniacal = 7 x (Va - Vb) x f Va = volume de H2SO4 0,01N gasto para titular a amostra. Vb = volume de H2SO4 0,01N gasto para titular o branco, gua destilada. f = Fator de correo do H2SO4 0,01N.

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Analise NITROGNIO ASSIMILAVEL

Rev.: 00 FC4M9/03

1. MATERIAIS pH-metro, bequer de 200mL, pipeta de 10, 25 e 100 mL, balo volumtrico de 200 mL, basto de vidro e bureta de 25mL. 2. REAGENTES - NaOH 1N, BaCl2 1N e formaldeido (H2CO) ajustado a pH 8,0 3. PREPARO DA AMOSTRA E DETERMINAO Pipetar 100ml de amostra e colocar em um bequer de 200mL ajustar a pH 8,0 com NaOH 1N; Adicionar 10ml de BaCl2 1N; Esperar 15 minutos, transferir para balo volumtrico de 200ml; Completar o volume, agitar e filtrar; Retirar 100ml e ajustar, novamente o pH a 8,0; Adicionar 25 ml de Formaldeido a pH 8,0 (acertado previamente); Titular com NaOH 0,1N (padronizado) at pH 8,0; Anotar o volume gasto (Vg)

4. CALCULO ppm N assimilvel = Vg x f x 28 f = fator de padronizao do NaOH 0,1N

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Analise DIGESTO NITROPERCLRICA

Rev.: 00 FC4M10/03

1.MATERIAIS Tubo de macro digesto Kjeldahl de 200 mL; pipeta de 10mL; macrodigestor Kjeldahl com capacidade para 5 tubos, equipado com termostato e resfriador (dedo frio); proveta de 10 e 100mL e bequer de 100 e 200mL. 2.REAGENTES Acido ntrico e acido perclorico. 3. PREPARO DE AMOSTRA Pipetar 10 mL de caldo ou mosto previamente filtrados e colocar em frasco de macro digestor kjeldahl, de 200 mL. Colocar 10 mL de HNO3 concentrado. Colocar no macro digestor, ligar o aquecimento at 200C e deixar evaporar at mais ou menos 1 mL. Acrescentar 25 mL de HNO3, acoplar o condensador de refluxos (ou dedo frio) e deixar digerir at o lquido clarear. Tirar o condensador de refluxo (ou Dedo Frio), secar at 1 ml e colocar mais 25 mL de HNO3 e digerir at desaparecer os fumos amarelados (a amostra deve estar bem clara). Esfriar o material e acrescentar 1 mL de HClO4 e prosseguir a digesto at a obteno incolor (Resduo branco no fundo do tubo e presena de fumos brancos). Colocar 50 mL de gua e agitar ainda quente dissolvendo o material (cuidado com o choque trmico). Passar para um o balo de 100 mL e completar o volume.

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Obs.: - Se for analisar alumnio, antes de completar o volume a 100 mL, devemos acertar o pH entre 3,8 - 4,0. - Esta metodologia tambm pode ser utilizada para caldo de cana e melao. (para melao fazer uma pr diluio de 1:5.

Digesto de amostras de mosto em Macro Digestor, com dedo Frio

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Analise FSFORO

Rev.: 00 FC4M11/03

1. MATERIAIS Pipetas de 1 e 10mL; tubo de ensaio e espectrofotometro. 2. REAGENTES Padro de fsforo com 10g/mL de P; soluo de vanadomolibdica (ver preparo de reagentes) 3. DETERMINAO Numerar 5 tubos de ensaio e adicionar : Pipetar 10 mL do extrato obtido na digesto nitroperclorica, e colocar no tubo de ensaio 1.(1 tubo, porque no temos amostra para 2) Pipetar 10 mL do padro de trabalho (10 microgramas/mL) e colocar em tubo de ensaio 2 e 3. (2 tubos) Pipetar 10 mL do branco (gua) e colocar em tubo de ensaio 4 e 5. (2 tubos) Colocar 1 mL do reativo Vanado Molibdico em cada tubo e agitar. Esperar 15 minutos e ler em espectrofotmetro a 420 nm ou colormetro em filtro 42. 4. CLCULO ppm P = 100 (La - Lb) / (Lp-Lb) La = Leitura do tubo 1. Lb = Leitura mdia dos tubos 2 e 3. Lp = Leitura mdia dos tubos 4 e 5.

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Analise POTSSIO

Rev.: 00 FC4M12/03

1. MATERIAIS Pipeta de 5mL; balo de 50mL e fotmetro de chama 1. REAGENTE Padro de potssio com 20 ppm de K. 3. DETERMINAO Pipetar 5 mL do extrato obtido na digesto nitroperclorica e adicionar em balo de 50mL, completar com gua desmineralizada. Levar essa soluo ao fotmetro depois de acertar a leitura zero com gua desmineralizada e a leitura 100 com a soluo padro de trabalho, de potssio (0,020mg de K+/mL) (20 ppm). Se a leitura da amostra for muito abaixo de 100, usar padro de 10 ppm. A leitura da amostra deve variar entre 70 e 100, caso saia desta faixa acertar o valor do padro de tal forma que se adapte a esta condio. Obs.: Antes de iniciar cada safra fazer uma curva de linearidade no fotmetro de chama, com padres de 0 a 100 de leitura, com valores intermedirios de 25, 50 e 75 de leitura. (fazer padro de 20 ppm com leitura de 100) 4. CLCULOS ppm de K+ = 20 x La La = leitura da amostra no fotmetro com calibrao de padro com 20 ppm de K+

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Analise CLCIO E MAGNSIO

Rev.: 00 FC4M13/03

1. MATERIAL Proveta de 100mL; coluna para resina (1cm dimetro x 25mL de altura); pipetas volumtrica de 5 e 20mL e graduada de 10mL; erlenmeyer de 250mL e bureta de 25mL. 2. REAGENTES EDTA 0,01M; ericromo negro T 0,5%; calcon 0,5%; Soluo de KCN tamponada; Soluo alcalina de KCN; hidrxido de amnio 4N; hidrxido de sdio 4N. 3. SEPARAO DO CLCIO E MAGNSIO EM COLUNA DE RESINA Passar 80 mL do material digerido na digesto nitroperclorica, em resina trocadora de ction (IR-120), depois passar 50 mL de gua destilada. Desprezar o eludo. Em seguida, passar 5 alquotas de 5 mL de HCl 4N, passando logo aps gua desmineralizada, recebendo o eludo em balo de 100 mL at completar o volume. Obs.: A coluna dever ter 1 cm de dimetro por 25 mL de altura. O volume de resina dever ser de 5 cm3. A resina dever ser tratada antes do uso com HCl 1:1. Trocar o cido vrias vezes, at este sair completamente lmpido e incolor.(No agitar em agitador magntico pois quebra se a resina nesta operao).

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2. DETERMINAO DE CLCIO Pipetar 20 mL de eludo (2o. eludo) da coluna e colocar em erlenmeyer de 250 mL. Adicionar 5 mL de NaOH 4N. Acrescentar 80 mL de gua desmineralizada. Colocar 7 mL da soluo de KCN alcalina (CUIDADO VENENO). Colocar 10 gotas de trietanolamina a 20%. 3 gotas de soluo de calcon a 0,5%. Titular com soluo de EDTA 0,01M at obteno da cor azul puro estvel. Anotar o volume gasto (VgCa) 3. DETERMINAO DE CLCIO + MAGNSIO Pipetar 20 mL do eludo (2 eludo) da coluna e colocar em erlenmeyer de 250 mL. Acrescentar 5 mL de hidrxido de amnia 4N. Acrescentar 80 mL de gua desmineralizada. Colocar 7 mL da soluo de KCN tamponada a pH 10 (CUIDADO VENENO). (Certifique se a soluo est em pH 10) 10 gotas de soluo de trietanolamina a 20%. 3 gotas de soluo de ericromo negro T a 0,5%. Titular com soluo de EDTA 0,01M at a obteno de cor azul puro estvel. Anotar o volume gasto (VgCa +Mg) Obs.: No caso de se ter pouco magnsio na amostra a viragem fica pouco ntida. Podemos melhorar a viragem, adicionando 5 mL de uma soluo 80 mg de Magnsio/litro, junto com a amostra a ser determinada. Do volume de EDTA 0,01M gasto nesta titulao desconta-se o volume gasto para se titular o magnsio de 5 mL dessa soluo adicionada. (Descontar 1,65 mL do volume de EDTA 0,01M gasto na titulao de Ca + Mg).

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6. CLCULOS ppm de Ca++ = 250 x Vca Vca = Volume de EDTA 0,01M gasto na titulao do clcio. ppm de Mg++ = 150 x [(Vca + mg) - Vca] Vca + mg = Volume de EDTA 0,01M, gasto na titulao para magnsio.

Obs.: 1) Antes de descartar as solues, colocar uma ponta de esptula de sulfato de ferro para evitar desprendimento de gs ciandrico. Nunca colocar direto no erlenmeyer usado nas titulaes. Usar frasco a parte. *Ver observaes no item preparo de solues. 2) Lavar toda a vidraria usada para determinao de minerais com soluo de cido muritico (comercial) 1% e depois repassar com gua desmineralizada.

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Produto MOSTO
Analise ALUMINIO

Rev.: 00 FC4M14/03

1. MATERIAIS Tubo de ensaio; pipeta graduada de 5mL, banho-Maria e espectrofotometro. 2. REAGENTES Padro de alumnio com 2mg/l; EDTA 0,0072M; tampo acetato pH-3,8 e indicador alaranjado de xilenol 0,15%. 3. DETERMINAO Pipetar para tubo de ensaio, padronizado, 2,5 mL do extrato obtido na digesto nitroperclrica (pH acertado entre 3,5 a 4,0). Utilizar tambm branco e padro de 2 ppm de alumnio.(Ver preparo de reagentes). Adicionar 3 mL do tampo acetato pH 3,8 nos tubos. Adicionar 1 mL de indicador xilenol - orange 0,15%. Deixar 1,5 hora em banho-maria a 40C. Esfriar. Adicionar 3,5 ml de EDTA 0,0072M nos tubos. Deixar a temperatura ambiente por 1 hora. Ler a 550 nm (filtro 54). 4. CLCULO ppm de alumnio = 20 (La - Lb) / (Lp - Lb) La = leitura da amostra; Lp = leitura do padro; Lb = leitura do branco.

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Produto MOSTO
Analise DEXTRANA MTODO QUANTITATIVO 1. MATERIAL

Rev.: 00 FC4M15/03

Bomba de vcuo; espectrofotmetro; cubeta de 10 mm; refratmetro; banho de ebulio (forma cilndrica); chapa aquecedora; agitador de tubos; agitador magntico; barras magnticas; balana analtica; balana de preciso (2 casas decimais); estufa eltrica de secagem; cpsulas de porcelana; funil sinterizado de 15 mL (marca Kimax de porosidade classe C ou marca Schott de porosidade n 2); kitassato; bulbo de borracha n 6; micro-pipetas de 1 mL; ponteiras plsticas de 1 mL, dispenser de bico reto de 10 mL (marca Hirschmann ou Brand); bquers de 250 mL, 150 mL e 50 mL; pipetas volumtricas de 10, 5, 2 e 1 mL; pipetas graduadas de 5 mL; bales volumtricos de 25 mL; funis de vidro de 50 mm; proveta de 50 mL; placas de petri; tubos de ensaio (180 X 15 mm); papel de filtro qualitativo e algodo. 2. REAGENTES Solues padro estoque e de trabalho de dextrana; lcool a 80 %, TCA a 10 %; NaOH 2,5 N saturado com Na2SO4 ; reativos estoque e de trabalho de cobre; doluo de lavagem de cobre; H2SO4 2 N e fenol a 5 %; 3. PREPARO DO PADRO Para preparar a soluo padro estoque de dextrana, devemos determinar a % de umidade existente no reagente da dextrana p.a.. 3.1. % de Umidade da Dextrana - Utilizar cpsulas de porcelana previamente secas (anotar o peso: peso da cpsula);

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- Transferir cerca de 0,5000 g do reagente da dextrana p.a. para uma cpsula, anotando o seu peso: Peso da cpsula + dextrana; - Secar em estufa 105C por um perodo de 4 horas; - Retirar a cpsula com a dextrana j seca e transferir para dessecador; - Aps um perodo de 20 a 30 minutos no dessecador, realizar a pesagem da cpsula: Peso da cpsula + dextrana seca; Massa mida - Massa Seca % UMIDADE = Massa mida ONDE : - Massa mida = (Peso da cpsula + dextrana) - (Peso da cpsula) - Massa Seca = (Peso da cpsula + dextrana seca) - (Peso da cpsula) - Observao : A dextrana que foi seca deve ser descartada. 3.2. Soluo Padro Estoque de Dextrana - 7,50 mg / L - Frmula : Obteno do Peso da Dextrana 0,0750 g 100 % - % Umidade da Dextrana X 100 X 100

- Exemplo de Umidade de Dextrana = 0,50 % 0,0750 g 100 % - 0,50 % Considerando este exemplo de 0,50 % de umidade da dextrana, devemos ento dissolver 0,0754 g de dextrana p.a.. (reagente na forma original e no na forma seca) em cerca de 50 mL de gua destilada, transferir quantitativamente para um balo volumtrico de 100 mL e completar o volume com gua destilada (prazo de validade de 15 dias conservao em freezer). X 100 = 0,0754 g

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3.3. Soluo Padro de Trabalho de Dextrana 0,30 mg / l - Transferir 10,0 mL da Soluo Estoque de Dextrana para um balo volumtrico de 250 mL e completar o volume com gua destilada (prazo de validade : preparo, uso e descarte). 4. DETERMINAO Filtrar previamente a amostra de mosto em algodo; Realizar a leitura de brix do mosto aps a filtrao (converter para brix em volume atravs da Tabela 1); Pipetar 10,0 mL do mosto filtrado e transferir para bquer de 150 mL que j contenha 0,20 g de celite; Adicionar 1,0 mL da Soluo de TCA a 10%; Acrescentar 40 mL de lcool etlico absoluto p.a., realizar uma rpida homogeneizao e esperar 5 minutos para reagir e decantar o material; Antes de iniciar a da filtrao, sugere-se no agitar o material, iniciando a filtrao pela parte superior (sobrenadante); Filtrar em filtro sinterizado de 15 mL, a vcuo; Lavar o precipitado que est contido no bquer de 150 mL e no funil sinterizado de 15 mL, com vrias pores de 5 mL de Soluo de lcool a 80 %. No final da filtrao evitar que o precipitado venha a secar completamente junto a base porosa do filtro sinterizado; Transferir o precipitado que ficou aderido no funil sinterizado para um balo volumtrico de 25 mL; Conforme figura abaixo (sistema de transferncia do precipitado), inverter o funil sinterizado, adicionar com uma pisceta um pouco de gua destilada na haste do funil sinterizado, acoplar o bulbo de borracha na haste do funil sinterizado e pression-lo em seguida para transferir o precipitado do funil sinterizado para o funil de vidro de 50 mm;

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SISTEMA DE TRANSFERNCIA DO PRECIPITADO Lavar com pequenas pores de gua destilada os precipitados que permaneceram nos funis sinterizado e de vidro, e completar o volume do balo volumtrico de 25 mL com gua destilada. Filtrar em papel de filtro qualitativo todo o material contido no balo volumtrico de 25 mL (o filtrado ser o extrato para determinar a dextrana). Observao: Se a filtrao inicial se apresentar muito difcil e demorada devido a amostra conter alto teor de dextrana. Sugere-se diluir o mosto antes da primeira filtrao vcuo. Transferir 10,0 mL do filtrado para um tubo de ensaio 180 X 15 mm; Adicionar 2,0 mL de soluo de NaOH 2,5 N saturado com Na2SO4; Adicionar 2,0 mL do reativo de trabalho de cobre; Acrescentar 0,20 g de celite; Colocar o tubo em banho de ebulio por um perodo de 5 minutos; Esfriar em temperatura ambiente; Filtrar o contedo do tubo novamente em filtro sinterizado de 15 mL, vcuo, lavar o precipitado do tubo de ensaio e do funil sinterizado com 5 ou 6 pores de 3 mL de soluo de lavagem de cobre;

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Desprezar o filtrado que encontra-se no kitassato;

Conforme figura seguir, acoplar o filtro sinterizado em um kitassato que


contenha um tubo de ensaio no seu interior, no qual o funil sinterizado ficar com sua extremidade inserida no tubo para receber o filtrado;

SISTEMA DE FILTRAO VACUO

Lavar em 3 etapas o precipitado do filtro sinterizado, em filtrao vcuo.


Primeira etapa com 2 mL de H2SO4 2 N, a segunda tambm com 2 mL H2SO4 2 N e a terceira com 2 mL de gua destilada;

Transferir o contedo do tubo de ensaio que estava dentro do kitassato para um


balo volumtrico de 25 mL e completar o volume com gua destilada;

Transferir 2,0 mL de :
extrato diludo contido no balo volumtrico de 25 mL para 3 tubos de ensaio de 180 X 15 mm; soluo padro de trabalho de dextrana a 0,30 mg / l para 3 tubos de ensaio de 180 X 15 mm; gua destilada (prova em branco) para 3 tubos de ensaio de 180 X 15 mm.

Adicionar 1,0 mL de soluo de fenol a 5% com o uso de micropipeta de 1 mL;

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Acrescentar 10,0 mL de H2SO4 p.a. com a utilizao de um dispenser de bico reto de 10 mL (Hirschmann ou Brand). Cuidado : recomenda-se no usar pipetas ou buretas. Observao : A soluo de fenol a 5 % e o H2SO4 p.a. devem ser adicionados sempre com o mesmo critrio, ou seja, com a mesma velocidade do inicio ao fim dos 10 mL e no centro do extrato contido no fundo dos tubos de ensaio. Colocar os tubos em banho de ebulio por um perodo de 2 minutos; Esfriar em temperatura ambiente; Realizar as leituras em absorbncia no espectrofotmetro, com cubeta de 10 mm em comprimento de onda de 485 nm; 5. CLCULOS A concentrao de dextrana expressada em microgramas por mL, e, em relao aos slidos da amostra de mosto. mg / l sobre slidos (ppm / brix) de dextrana no mosto = RESULTADO A RESULTADO B - Resultado A = 187,50 x La - Lb Lp - Lb - Resultado B ONDE : - La = Mdia das 3 leituras de absorbncia do extrato da amostra de mosto - Lp = Mdia das 3 leituras de absorbncia do padro de trabalho de dextrana - Lb = Mdia das 3 leituras de absorbncia da prova em branco (gua destilada). - Brix volume = A leitura de brix em peso da amostra, obtido no refratmetro, deve ser convertida em volume atravs da Tabela 1. = Brix em volume da amostra 100

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Produto VINHO BRUTO, LEVEDO TRATADO E VINHO CENTRIFUGADO


Analise %LCOOL DENSIMETRO PAAR

Rev.: 00 FC4M16/03

1. USO DO MICRODESTILADOR KJELDAHL TRADICIONAL ADAPTADO PARA LCOOL Verificar se o nvel de gua destilada na caldeira do aparelho est correto. Ligar a gua do condensador. Ligar o aparelho para aquecer a gua da caldeira (as torneiras dos aparelhos devero estar abertas). Quando a gua comear a ferver, desligar o aparelho. Agitar por alguns segundos a amostra de vinho bruto ou de levedo tratado em frasco fechado, abrindo em seguida o frasco para liberar o CO2 desprendido.(repetir essa operao 4 a 5 vezes). Pipetar 25 mL da amostra, j agitada, e colocar no aparelho (manter todas as vlvulas abertas). Lavar com um pouco de gua com uma piceta o local onde foi colocada a amostra. Acoplar um balo volumtrico de 50 mL para receber o destilado no final do condensador (o ponteiro deve entrar 2 a 3 cm no gargalo do balo volumtrico). Ligar o reostato. Quando a gua da caldeira comear a borbulhar, fechar as duas vlvulas. Acertar o reostato na posio mdia. Aps 1 minuto acertar para posio mxima. (No deixar subir espuma alm da primeira bola). Destilar at quase completar o volume do balo volumtrico. Tirar o balo volumtrico do final do condensador. Desligar o reostato e esperar at que toda amostra restante seja ejetada para o tubo de despejo. Abrir as vlvulas para que a vinhaa saia do aparelho. O destilador est pronto para receber outra amostra. Completar o volume do balo volumtrico com gua destilada usando um contagotas.

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Agitar muito bem. Bater delicadamente com as pontas dos dedos no balo para expulsar pequenas bolhas de ar que se formam aps a agitao. Ler a densidade no densmetro digital PAAR. 2. USO DO MICRODESTILADOR KJELDAHL - TECNAL Verificar se o nvel de gua destilada na caldeira do aparelho est correto. Ligar a gua do condensador. Fechar a vlvula de vcuo localizada perto do condensador. Abrir a vlvula de admisso de ar ou gua (prximo da caldeira) e a vlvula de admisso de amostra. Ligar o aparelho colocando o reostato na posio mxima (ponto 10). Quando iniciar a ebulio, abaixar o reostato at o ponto zero. Agitar por alguns segundos a amostra de vinho bruto ou de levedo tratado em um frasco fechado, abrindo em seguida a tampa para liberar o CO2 (repetir essa operao 4 a 5 vezes). Pipetar 25 mL da amostra j agitada e colocar no aparelho (manter s as vlvulas de admisso de amostra e de ar abertas). Limpar o copo de admisso de amostra com gua destilada, com uma piceta e fechar a vlvula de admisso de amostra. Acoplar um balo volumtrico de 50 mL no final do condensador de modo que o ponteiro do condensador adentre 2 a 3 cm no gargalo do balo. Ligar o reostato na posio mxima (10). Quando iniciar a ebulio da gua da caldeira, fechar a torneira de admisso de ar e abaixar o reostato para uma posio intermediria (5). Aps 1 minuto, posicionar o reostato para o ponto mximo (10).(No deixar subir espuma alm da primeira bola). Um pouco antes de completar o balo, desacoplar do condensador. Desligar o destilador, abrindo a vlvula de vcuo para o descarte da amostra j destilada. Aps o descarte, fechar a vlvula de vcuo, abrindo logo em seguida as vlvulas de ar e a vlvulas de admisso de ar e a vlvula de admisso de amostra. Completar o balo usando gua destilada, com auxlio de um conta-gotas.

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Agitar. Eliminar as bolhas pequenas que se formam batendo delicadamente com as pontas dos dedos no balo. Ler a densidade no densmetro digital PAAR. 3. LEITURA NO DENSMETRO DIGITAL ANTON PAAR 3.1. DMA - 45 e 46 Injetar com uma seringa de 2 mL a amostra destilada, no densmetro, tomandose o cuidado de lavar tanto a seringa quanto o tubo do densmetro trs vezes com a soluo a ser lida (se for adaptado um funil para fluxo contnuo, deve-se passar tambm a amostra destilada por 3 vezes antes de se fazer a leitura). Acender a luz interna e verificar se no ficou bolha no tubo de amostra. Esperar 2 a 3 minutos para a estabilizao da temperatura. Anotar a leitura da densidade. Fazer a converso da densidade lida, para concentrao alcolica da soluo em porcentagem (v/v) utilizando-se a tabela II. No caso do vinho bruto e levedo tratado, como destilamos 25 mL e recolhemos 50 mL, o resultado deve ser multiplicado por 2. EXEMPLO densidade da amostra 20C/20C......................................................................0,9940 % lcool v/v (tabela II).........................................................................................4,14% % lcool v/v na amostra......................................................................2 x 4,14 = 8,28% 3.2. DMA - 48 Injetar com uma seringa de 2 mL a amostra destilada, no densmetro tomando-se o cuidado de: Lavar tanto a seringa quanto o tubo do densmetro 3 vezes com a soluo a ser lida (Se for adaptado um funil para fluxo contnuo, deve-se passar tambm a amostra destilada por 3 vezes antes de se fazer a leitura). Acender a luz interna e verificar se no ficou bolha no tubo. Esperar at que a luz X se apague.

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Anotar a densidade obtida.(Caso o aparelho esteja equipado com um software, que transforma a densidade real em grau alcolico, basta digitar a funo F 510 e teremos o grau alcolico em volume). Caso no tenha este software, proceder como o DMA - 45 e 46. 3.3 DMA 4500 e 5000 IMPORTANTE: A leitura destes procedimentos no dispensa o treinamento oferecido pelo revendedor nem a leitura completa do manual de instrues fornecido com o equipamento. 3.3.1 Operao e Medidas: O equipamento dever estar configurado com um mtodo que mostre na tela a densidade, o grau alcolico GL (%v/v) e INPM (%w/w). Para este tipo de programao entre em contato com a assistncia tcnica ou consulte o manual de instrues do equipamento. A amostra pode ser inserida diretamente no equipamento com a seringa que o acompanha ou por uma clula de fluxo contnuo adaptada para tal. Pelo visor verifica-se a ausncia de bolhas na clula de medida. Quando a temperatura da amostra atingir 20,00 oC (equilbrio), o equipamento emite um sinal sonoro e a tela passa a piscar intermitentemente, indicando o teor alcolico da amostra. 3.3.2 Limpeza: A limpeza da clula de medida pode ser feita injetando-se vrias pores de lcool, por meio da seringa ou da clula de fluxo contnuo, e secando-a conectando-se a mangueira de ar na entrada do equipamento e ligando-se a bomba por aproximadamente 15 min. Caso o equipamento tenha sido usado para anlises de amostras aucaradas (mosto, caldo) deve-se lavar a clula com vrias pores de gua destilada antes de se adicionar lcool; caso contrrio, pode-se formar incrustaes mais difceis de serem removidas.

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4. PROGRAMAO DO DENSMETRO PAAR 4.1. DMA - 45 e 46 O densmetro PAAR deve ser programado para densidade da gua dH20 = 1,0000 (20/20C) e densidade do ar dAr = 0,0012 (20/20C). Os passos para se proceder a calibrao so os seguintes: a. Verificar (acertar) a temperatura do banho 20C. Usar termmetro com sensibilidade 0,05C ou menor b. Colocar gua destilada no tubo de amostra do densmetro e esperar estabilizar por 5 minutos. c. Girar o parafuso que fica do lado direito do local de programao, colocando a seta na posio T. Anotar TH2O, por exemplo 6,1084. d. Acoplar a pequena mangueira lateral do densmetro no tubo de amostra e ligar o boto pump para que o ar seja injetado no tubo de amostra. Deixar o ar ligado por 5 minutos at secar bem o tubo. Desligar o ar e esperar a estabilizao da temperatura do ar (3 minutos). Anotar o Tar com parafuso da parte superior tambm na posio T., por exemplo Tar= 4,6273. A = ((TH2O)2 - (Tar)2) / (dH2O - d ar) e B = (TH2O)2 - A x dH2O ento: A = ((6,1084)2 - (4,6273)2) / (1,0000 - 0,0012) A = 15,9197 B = (6,1084)2 - 15,9197 x 1 valores de A e B encontrados. f. Girar o parafuso da posio T para posio (densidade). g. Aps a programao a densidade do ar dever estar 0,0012 e a da gua 1,0000. 4.2. DMA - 48 O densmetro DMA - 48 da PAAR, pode ser programado automaticamente com a densidade real da gua a 20C/4C que 0,9982 ou com a densidade relativa da gua 20/20C que 1,0000. Em ambos os casos ele ser calibrado com a densidade do ar de 0,0012. Quando aferido com a densidade real (0,9982) o densmetro deve estar equipado com um software que transforma a densidade real em grau alcolico, B = 21,3928 e. Com auxlio de uma pequena chave de fenda programar o densmetro com

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automaticamente, portanto no podemos usar a tabela II quando o aparelho estiver aferido desta maneira. Os passos para se proceder a calibrao so os seguintes: a) Aferio automtica com densidade real da gua (0,9982 - 20C/4C) Acoplar a pequena mangueira de ar do densmetro no tubo de amostra e ligar o boto pump para que o ar seja injetado no tubo de amostra. Deixar o ar ligado por aproximadamente 5 minutos at secar bem o tubo. Desligar o ar e esperar que a luz X se apague. Neste momento o aparelho estar estabilizado. Digitar a funo do ar que F100, em seguida apertar ENTER. Voc ler no display 0,001204. Em seguida aperte novamente a tecla enter, e espere que a luz X se apague. Agora retire a mangueira do ar e coloque gua no tubo de amostra e espere at apagar a luz X. Em seguida digite F101 (funo da gua) e aperte a tecla enter. Voc ler no display 0,998204. Agora aperte novamente a tecla enter e espere que a luz X se apague e aperte novamente a tecla enter, e o aparelho estar calibrado e pronto para o uso. Obs.: Notar se quando no painel acender a frase dev. B a leitura no display dever ser menor do que 0,0002, caso contrrio repita a aferio. b) Aferio com densidade da gua em 1,0000, para aparelhos que no possuem o software de transformao de densidade para grau alcolico. A calibrao igual a automtica, mudando apenas as funes. Na funo do ar digite F102 e em seguida digite 0,001204 e enter duas vezes, espere apagar a luz X. Coloque gua espere apagar a luz X e digite F103 e 1,0000 e em seguida digite enter duas vezes. Espere estabilizar, apagando-se a luz X. Aperte novamente enter.

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4.3 DMA 4500 e 5000 4.3.1 Checagem de densidade (Density Check): Esta funo utilizada para se verificar a validade do ltimo ajuste realizado. Deve ser realizado, no mnimo, uma vez por semana. Selecione menu adjustment density check density check settings; Confirmar o valor de densidade: density: 0,99820 g/cm3 e desvio mximo: max. dens. dev. : 0,00010 g/cm3.

Preencha a clula de medida com gua destilada e tecle ok; Quando a temperatura da clula se estabilizar em 20,00 oC o aparelho mostra o resultado da checagem. Se aparecer OK aperte save e o aparelho est pronto para as medidas. Caso aparea NOT OK aperte save e refaa o ajuste do equipamento.

4.3.2 Ajuste do equipamento: Antes de proceder o ajuste do equipamento, deve-se proceder a limpeza da clula de medida com lcool e ar conforme descrito no item 2. Proceder o ajuste pressionando a tecla menu e selecionando os itens adjustment adjust density (air,water); Com a clula previamente limpa e seca, pressione ok e acerte a presso atmosfrica local e pressione novamente ok; Espere o ajuste com ar terminar e injete gua destilada no equipamento. Pressione novamente ok; Ao fim do ajuste com gua (estabilizao), pressione ok;

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Se o aparelho aprovar o desvio obtido no ajuste aparecer a seguinte mensagem: recomendation: SAVE. Pressione save e o ajuste est concludo. Se a mensagem for recomendation: REPEAT, pressione repeat, limpe a clula com lcool e ar (conforme item 2) e proceda o ajuste novamente. Se, aps o segundo ajuste, o desvio for igual ao obtido anteriormente, pressione save e proceda a Checagem de Densidade (Density Check) conforme descrito no tem 3.

5. LIMPEZA DO MICRODESTILADOR KJELDAHL Microdestilador kjeldahl deve ser limpo diariamente, colocando-se soluo de hidrxido de sdio 1N no aparelho destilando do mesmo modo que para o vinho. Repetir a operao at que as incrustaes sejam removidas. Para remover o hidrxido de sdio, lavar o destilador vrias vezes com gua (destilando). 6. CUIDADOS A SEREM TOMADOS NA DETERMINAO DE LCOOL PELO MTODO DO DENSMETRO DIGITAL PAAR Verificar sempre se a temperatura do banho que acompanha o densmetro PAAR DMA - 45 est 20C. O DMA - 46 e 48 no possuem banho, mas o controlador interno dever estar mantendo 20C. O densmetro PAAR dever ser colocado em ambiente de ar condicionado a uma temperatura de preferncia perto de 20C. Numa colocar a seringa diretamente em contato com o tubo de amostra do aparelho pois, ela sendo rgida, pode formar uma alavanca que poder trincar o bulbo. Aconselha-se adaptar ao aparelho um protetor como acessrio. Usar sempre uma seringa para cada tipo de amostra, isto , uma para lcool anidro, outra para lcool hidratado, etc. Aconselhamos a substituir o uso das seringas acoplando um pequeno funil no tubo de amostra do densmetro. Sempre limpar o tubo do aparelho com gua aps o uso com as amostras.

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Na entre safra no se deve desligar o aparelho. A alta umidade do ar danifica o circuito eltrico. O aparelho ficando ligado, o calor produzido mantm seco os circuitos impedindo a danificao. No caso de analisar caldo ou mosto, deve-se passar quando tivermos inicio de incrustaes no tubo de amostra, soluo sulfocrmica. O banho de gua que acompanha o DMA-45 dever conter somente gua destilada e se manter bem vedado para evitar entrada de impureza na gua o que evitar o crescimento de algas no banho e tubulaes.

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Produto VINHO BRUTO, LEVEDO TRATADO E VINHO CENTRIFUGADO


Analise %LCOOL EBULIOMETRO 1. CONSIDERAES

Rev.: 00 FC4M17/03

O mtodo do ebulimetro deve ser usado s por pequenas industrias, pois no tem grande preciso e sensibilidade. 2. CALIBRAO DO PONTO ZERO Lavar a caldeira do ebulimetro com gua destilada. Colocar 25 mL de gua destilada na caldeira (a gua no deve molhar o bulbo do termmetro). Rosquear o condensador a caldeira. No necessrio colocar gua no condensador. Acender a lamparina. Acompanhar o movimento do mercrio no tubo capilar, do termmetro, at a sua estabilizao num determinado ponto, o qual referido como ponto zero da escala. Mover a rgua graduada e ajustar o ponto zero da escala ao valor de leitura no termmetro. 3. DETERMINAO DO GRAU ALCOLICO Lavar a caldeira do ebulimetro com pequenas pores de vinho que vai ser analisado. Colocar 50 mL de vinho na caldeira. Rosquear a parte superior do aparelho que deve conter gua e o termmetro. Encher o tubo refrigerante com gua (no deixar cair gua dentro da caldeira): Acender a lamparina.

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O mercrio contido no tubo capilar move-se at estabilizar em um determinado ponto. Ler a temperatura. Fazer a leitura na rgua graduada. 4. PRECAUES COM O USO DO EBULIMETRO O ponto zero da escala deve ser calibrado ao menos uma vez ao dia. Aps cada operao, lavar a caldeira com gua para evitar incrustaes. Para eliminar incrustaes, ferver na caldeira do ebulimetro soluo de soda 20%, durante 5 minutos. Pode se tambm evitar as incrustaes destilando-se a amostra previamente e depois analisando o destilado.

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Produto VINHO BRUTO E LEVEDO TRATADO


Analise CIDEZ SULFRICA FIXA 1. MATERIAL

Rev.: 00 FC4M18/03

Agitador magntico; cpsula magntica, para agitao; basto de plstico; bureta de 10mL; pipeta de 20 mL; proveta de 50 mL; peagmetro e bquer de 250 mL. 2. REAGENTE NaOH 0,1 N 3. PREPARO DA AMOSTRA Centrifugar o vinho bruto ou levedo tratado (pode-se usar a mesma amostra utilizada para a anlise de % de levedo e guardar de forma composta em congelador). Do sobrenadante, pipetar 20 mL, colocar em erlenmeyer e adicionar 50 mL de gua destilada. Colocar em refluxo (ebulio) por 5 minutos. Esfriar e titular em peagmetro at pH 8,5 com soluo de NaOH 0,1N padronizada. Obs.: Esta anlise pode ser feita uma vez por turno, desde que se componha a amostra, de todas as dornas ou cubas, e conserve em congelador j centrifugada. Manter amostra fechada. 4. CLCULOS Acidez = Vol.NaOH 0,1N x 0,245 x fator de padronizao do NaOH 0,1N (ver acidez no melao capitulo 3, mtodo FC3M46/03). Obs.: A acidez nesse caso expressa em g H2SO4/l de amostra.

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5. CUIDADOS A SEREM TOMADOS NA DETERMINAO DE ACIDEZ a. A padronizao da soluo de NaOH 0,1N deve ser feita a cada nova soluo preparada, ou a cada 3 dias. b. O recipiente utilizado para guardar soluo de hidrxido de sdio 0,1N, deve ser adaptado a um sistema para evitar o contato com o gs carbnico do ar para no formar carbonato de sdio, que perderia o poder neutralizante, sendo necessrio uma nova padronizao.
Tubo de borracha AR com CO2 ar sem CO2 Tubo de vidro Rolha de borracha Vidro ou plstico NaOH, KOH ou BA (OH)2 4 N Rolha de borracha perfurada para passar os tubos de vidro

Presilha Borracha Ponta de vidro Para Bureta

Sistema de recipiente para guardar NaOH 0,1N sem interferncia do CO2 do ar.

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NaOH NaOH ou KOH 4N

Bureta

Amostra a titular c. Se no existir os sistemas de proteo acima, devemos padronizar a NaOH 0,1N a cada 3 dias.

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Produto VINHO BRUTO, LEVEDO TRATADO E VINHO CENTRIFUGADO


Analise % DE LEVEDO (V/V) 1. MATERIAIS Tubos para centrifuga de 10 ou 15mL e centrifuga de bancada . 2. DETERMINAO Homogeneizar bem a amostra.

Rev.: 00 FC4M19/03

Pipetar 10 ou 15 mL para tubo de centrifuga graduado at 10 ou 15 mL. Centrifugar por 10 minutos a 700g ou 3000 rpm na centrfuga Excelsa BabyFanen Aps a centrifugao, anotar o volume de levedo decantado e o volume total do tubo. 3. CLCULO % Levedo = 100 (Volume de levedo decantado) / (Volume total do tubo aps centrifugar)

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Analise % AR (MTODO DE SOMOGYI E NELSON) 1. MATERIAL

Rev.: 00 FC4M20/03

Bales volumtricos de 100 e 200 mL; bquer de 200 mL; banho de ebulio; basto de vidro; colormetro ou espectrofotmetro; esptula; funil de plstico ou vidro de 500 mL, de haste curta; papel de filtro de 18,5 cm de dimetro; pipetas volumtricas 1, 5 e 10 mL; seringa pipetadora automtica de 1 mL; suporte para tubo de ensaio; tubos de ensaio graduveis a cada 1 mL. 2. REAGENTES Celite; oxalato de sdio; reativo de Somogyi; reativo de Nelson; padro de acar invertido a 1%; 3. PREPARO DA AMOSTRA Centrifugar o vinho por 10 minutos a 700g ou 3000 rpm na centrfuga Excelsa Baby-Fanen Pipetar 5 mL do sobrenadante colocando em balo volumtrico de 100 mL. Completar o volume com gua destilada. Colocar 0,2 g de oxalato de sdio e agitar. Colocar 0,5 a 1,0 g de celite ou kieselgur e agitar. Filtrar em papel de filtro qualitativo, desprezando os primeiros 10 - 20 mL. Fazer a determinao. Obs.: Se o AR estiver muito alto fazer diluio de 10/100mL ou 1/100mL. conveniente trabalhar com duas diluies e considerar aquela que der leituras mais prximas do padro. de 1,5 cm x 15 cm, dispensete de 10 mL

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4. DETERMINAO Numerar 6 tubos de ensaio e adicionar em cada tubo as seguintes solues. Tubos 1 e 2: 1 mL de gua destilada (prova em branco). Tubos 3 e 4: 1 mL do padro de acar invertido, 50 g/mL.(Diluir o padro estoque de acar invertido 1%, 10/100 mL e depois 10/200 mL). Tubos 5 e 6: 1 mL do diludo no item do preparo da amostra. Colocar os tubos em banho em ebulio e aquecer at os tubos ficarem na mesma temperatura (2 a 3 minutos). Colocar com auxlio do dispensete 1 mL do reativo de Somogyi em cada tubo, sem tir-los da ebulio e deixar durante 15 minutos. Esfriar em gua corrente. Colocar em cada tubo 1 mL do reativo de Nelson. Agitar imediatamente. Colocar em cada tubo 7 mL de gua destilada e agitar bem. Deixar 5 minutos em repouso. Fazer a leitura em colormetro (filtro 54) ou espectrofotmetro a 535 nm. 5. CLCULOS Sem diluir: % AR = 0,1 (La - Lb) / (Lp - Lb) (La- Lb) / (Lp - Lb)

Diluio 10/100: % AR = 1

Diluio 1/100: % AR = 10 (La - Lb) / (Lp - Lb) La = Leitura da amostra Lb = Leitura do branco Lp = Leitura do padro

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Analise % ART (MTODO DE SOMOGYI E NELSON) 1. MATERIAL

Rev.: 00 FC4M21/03

Bales volumtricos de 100 e 200 mL; banho de ebulio; banho Maria ou forno de microondas; basto de vidro; colormetro ou espectrofotmetro; esptula; funil de plstico ou vidro de 500 mL, de haste curta; papel de filtro de 18,5 cm de dimetro; pipetas volumtricas 10, 20 e 50 mL; seringa pipetadora automtica de 1 mL; suporte para tubo de ensaio; tubos de ensaio dispensete de 10 mL graduveis a cada 1 mL. 2. REAGENTES Celite; oxalato de sdio; reativo de Somogyi; reativo de Nelson; padro de acar invertido a 1%; HCl 0,75N, NaOH 0,75N. 3. PREPARO DA AMOSTRA Centrifugar o vinho por 10 minutos a 700g ou 3000 rpm na centrfuga Excelsa Baby-Fanen Transferir aproximadamente 50 100 mL de amostra de vinho bruto centrifugado em laboratrio para bequer de 250 mL; Adicionar 0,2g de oxalato de sdio e agitar. Adicionar 1,0 - 2,0g de celite. Agitar. Filtrar em papel de filtro qualitativo, desprezando os primeiros 10 - 20 mL; Pipetar 10 mL do filtrado e colocar em balo volumtrico de 200 mL. Adicionar 20 mL de HCl 0,75N e agitar levemente; de 1,5 cm x 15 cm,

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Colocar em banho-maria a 65C por 30 minutos ou em microondas por 30 segundos (ou tempo suficiente para entrar em ebulio) na potncia mxima, usando o condensador de gases; Esfriar em gua corrente; Adicionar 20 mL de NaOH 0,75N. (pH final no mximo 8) Completar o volume com gua destilada. Agitar bem. 4. DETERMINAO Numerar 6 tubos de ensaio e adicionar em cada tubo as seguintes solues. Tubos 1 e 2: 1 mL de gua destilada (prova em branco). Tubos 3 e 4: 1 mL do padro de acar invertido, 50 g/mL.(Diluir o padro estoque de ART 1%, 10/100 mL e depois 10/200 mL). Tubos 5 e 6: 1 mL do diludo no item do preparo da amostra. Colocar os tubos em banho de ebulio e aquecer at os tubos ficarem na mesma temperatura (2 a 3 minutos). Colocar com auxlio do dispensete 1 mL do reativo de Somogyi em cada tubo, sem tir-los da ebulio e deixar durante 15 minutos. Esfriar em gua corrente. Colocar em cada tubo 1 mL do reativo de Nelson. Agitar imediatamente. Colocar em cada tubo 7 mL de gua destilada e agitar bem. Deixar 5 minutos em repouso. Fazer a leitura em colormetro (filtro 54) ou espectrofotmetro a 535 nm. Obs.: a. Mesmo se tivermos muitas amostras devemos usar somente 2 tubos para branco e 2 tubos para banho. b. O reativo de Somogyi deve estar a 65C quando for colocado no tubo. c. O banho de reao deve ter ebulio constante, com temperatura uniforme em todos os pontos. padro desde que a reao seja feita ao mesmo tempo no

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d. e.

Os tubos de ensaio usados na reao devem ser de parede fina e espessura homognea. Devero ser padronizados anteriormente. A padronizao de escolha dos tubos consiste em quando se comprar um lote de tubos, fazer a reao usando o padro de acar e selecionar os tubos com leituras mais prximas ( 0,015 ponto).

5. CLCULO % ART = (0,1 (La - Lb)) / (Lp - Lb) La = leitura da amostra; Lb = leitura do branco; Lp = leitura do padro

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Analise pH 1. MATERIAL Peagmetro. 2. TCNICA Seguir as instrues que acompanham os aparelhos para aferi-los.

Rev.: 00 FC4M22/03

Aferir o aparelho de pH pelo menos uma vez por turno com soluo tampo pH 7,0 e pH 4 ,0. Resfriar a amostra a ser analisada at a temperatura ambiente. Colocar o eletrodo na amostra, abrindo o bulbo de vidro. Fazer a leitura do pH. (Checar se a temperatura da amostra a mesma da indicada pelo boto de temperatura do aparelho). Lavar o eletrodo com gua destilada, deixando-o imerso em bquer com soluo de KCl 3M. Obs.: No deixar o eletrodo imerso em gua pois sua vida til diminui, com a encrostao da membrana.

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Analise % GLICEROL (MTODO COLORIMTRICO) 1. MATERIAIS

Rev.: 00 FC4M23/03

Centrifuga de bancada; tubo para centrifuga de 10 ou 15mL; pipeta volumtrica de 5mL; balo volumtrico de 50 e 100mL; esptula; funil para filtragem; coluna para resina (1cm de dimetro por 25cm de altura); tubo de ensaio; dispensetes; banho com temperatura controlada e espctrofotometro. 2. REAGENTES Padro de glicerina com 0,003%; reagente para glicerol 1 e 2 (ver preparo de reagente) 3. PREPARO DA AMOSTRA Centrifugar o vinho bruto(ou levedo tratado) a 700g ou 3000 rpm na centrfuga de bancada por 10 minutos. Tomar uma poro de 5 mL de vinho centrifugado e diluir a 50 mL com gua. Agitar. Adicionar uma ponta de esptula de carvo ativo. Agitar. Deixar em repouso 5 minutos. Filtrar em papel de filtro qualitativo. Passar 5 ml do filtrado em coluna de vidro contendo 1 cm cbico de resina mista MB-1 ou MB-8 (ROHM e HAAS), recolhendo o eluido em balo de 100 mL. (Obs.: A resina deve ser desprezada aps o uso.) Continuar a lavagem da coluna com gua desmineralizada at completar o volume do balo. Obs.: Estas amostras podem ser conservadas em congelador e analisadas uma vez por dia.

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4. DETERMINAO Numerar 6 tubos de ensaio e adicionar em cada tubo as seguintes solues: Tubo 1 e 2 - 1 mL de gua destilada (prova em branco). Tubo 3 e 4 - 1 mL de padro (30 ppm) Tubo 5 e 6 - 1 mL de amostra. Colocar 2,5 mL do reagente I, com auxilio de um dispensete. Deixar 5 minutos em banho a 55C. Colocar 2,5 mL do reagente II, com auxilio de um dispensete. Deixar 5 minutos em banho a 55C. Esfriar. Ler a 420 nm ou filtro 42 (azul) em espectrofotometro ou colorimetro. 5. CLCULOS % glicerol = 0,6 (La - Lb) / (Lp - Lb) La - leitura da amostra , Lp - leitura do padro, Lb - leitura do branco (gua). % glicerol = porcentagem de glicerol no vinho em g/100ml.

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Analise % GLICEROL (MTODO ENZIMATICO) 1. MATERIAIS - Centrfuga - Banho Maria - Espectrofotmetro - Vidrarias e utenslios usuais na rotina de laboratrio 2. REAGENTES - Glicerina p.a.

Rev.: 00 FC4M24/03

- Kit enzimtico: - Triglycerides (GPO-PAP method) Merck 1.19706.0001, - Triglycerides (GPO-TRINDER method) Sigma 337-A ou - Triglycerides (SERA PAK Fast Color) Bayer 6687. 3. REATIVOS - Soluo Padro Estoque de Glicerol a 0,10 %, Soluo Padro de Trabalho de Glicerol a 0,0005 %, Soluo Enzimtica Kit enzimtico da Merck, Soluo Enzimtica Kit enzimtico da Sigma. (Ver capitulo de preparo de reagentes) 4. PROCEDIMENTO Transferir 10 mL do sobrenadante da amostra previamente centrifugada para um balo volumtrico de 200 mL e completar o volume com gua deionizada. Pipetar 2 ml do extrato contido no balo de 200 mL, transferir para um balo volumtrico de 100 mL e completar o volume com gua deionizada. Transferir 5 mL de : - Extrato diludo contido no balo de 100 mL para 2 tubos de ensaio;

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- Soluo padro de trabalho de glicerol a 0,0005 % para 2 tubos de ensaio; - gua deionizada (prova em branco) para 2 tubos de ensaio. Adicionar 2 mL de soluo enzimtica (Kit Merck ou Sigma) em cada um dos tubos de ensaio. Inverter os tubos (cuidado no agitar). Transferir os tubos para banho Maria a 37 C e mant-los durante 5 minutos. Retirar os tubos do banho e deixar resfriar em temperatura ambiente. Realizar as leituras em espectrofotmetro com cubeta de 10 mm : - 500 nm (Kit Merck) - 540 nm (Kit Sigma) 5. CLCULOS % glicerol = 0,50 x La - Lb Lp - Lb Onde : La - leitura da amostra , Lp - leitura do padro, Lb - leitura do branco (gua). % glicerol = porcentagem de glicerol no vinho em g/100ml.

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Analise % FLOCULAO

Rev.: 00 FC4M25/03

1. MATERIAIS Bureta de 100 ou 250 mL 2. DETERMINAO

Colocar o vinho bruto em uma proveta de vidro, graduada. Esperar 15 minutos e fazer a leitura. Sobrenadante
100 70

Voloume total p/ decantar Volume decantado

3. CALCULO. %Floculao =(vol. sobrenadante / vol. total colocado p/decantar) x 100 %Floculao = (30 / 100) x 100 = 30% . Ponderar pelo volume de vinho bruto.

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Analise %LCOOL DENSIMETRO PAAR

Rev.: 00 FC4M26/03

1. DESTILAO DA AMOSTRA NO MICRODESTILADOR KJELDAHL a) USO DO MICRODESTILADOR KJELDAHL TRADICIONAL ADAPTADO PARA LCOOL Verificar se o nvel de gua destilada na caldeira do aparelho est correto. Ligar a gua do condensador. Ligar o aparelho para aquecer a gua da caldeira (as torneiras dos aparelhos devero estar abertas). Quando a gua comear a ferver, desligar o aparelho. Pipetar 50 mL da amostra e colocar no aparelho (manter todas as vlvulas abertas). Lavar com um pouco de gua com uma piceta o local onde foi colocada a amostra. Acoplar um balo volumtrico de 10 mL para receber o destilado no final do condensador (o ponteiro deve entrar 2 a 3 cm no gargalo do balo volumtrico). Ligar o reostato. Quando a gua da caldeira comear a borbulhar, fechar as duas vlvulas. Acertar o reostato na posio mdia. Aps 1 minuto acertar para posio mxima. (No deixar subir espuma alm da primeira bola). Destilar at quase completar o volume do balo volumtrico. Tirar o balo volumtrico do final do condensador. Desligar o reostato e esperar at que toda amostra restante seja ejetada para o tubo de despejo. Abrir as vlvulas para que o residuo saia do aparelho. O destilador est pronto para receber outra amostra. Completar o volume do balo volumtrico com gua destilada usando um contagotas.

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Agitar muito bem. Bater delicadamente com as pontas dos dedos no balo para expulsar pequenas bolhas de ar que se formam aps a agitao. Ler a densidade no densmetro digital PAAR. b) USO DO MICRODESTILADOR KJELDAHL - TECNAL Verificar se o nvel de gua destilada na caldeira do aparelho est correto. Ligar a gua do condensador. Fechar a vlvula de vcuo localizada perto do condensador. Abrir a vlvula de admisso de ar ou gua (prximo da caldeira) e a vlvula de admisso de amostra. Ligar o aparelho colocando o reostato na posio mxima (ponto 10). Quando iniciar a ebulio, abaixar o reostato at o ponto zero. Pipetar 50mL da amostra j agitada e colocar no aparelho (manter s as vlvulas de admisso de amostra e de ar abertas). Limpar o copo de admisso de amostra com gua destilada, com uma piceta e fechar a vlvula de admisso de amostra. Acoplar um balo volumtrico de 10mL no final do condensador de modo que o ponteiro do condensador adentre 2 a 3 cm no gargalo do balo. Ligar o reostato na posio mxima (10). Quando iniciar a ebulio da gua da caldeira, fechar a torneira de admisso de ar e abaixar o reostato para uma posio intermediria (5). Aps 1 minuto, posicionar o reostato para o ponto mximo (10).(No deixar subir espuma alm da primeira bola). Um pouco antes de completar o balo, desacoplar do condensador. Desligar o destilador, abrindo a vlvula de vcuo para o descarte da amostra j destilada. Aps o descarte, fechar a vlvula de vcuo, abrindo logo em seguida as vlvulas de ar e a vlvulas de admisso de ar e a vlvula de admisso de amostra. Completar o balo usando gua destilada, com auxlio de um conta-gotas. Agitar.

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Eliminar as bolhas pequenas que se formam batendo delicadamente com as pontas dos dedos no balo. Ler a densidade no densmetro digital PAAR. 2. CALCULO Procurar a % de lcool correspondente a densidade lida na tabela II. O resultado da % de lcool achada deve ser dividido por 5. Obs.:Se o seu densmetro for o DMA-48, 4500 ou 5000 com software s usar a funo respectiva e se tem a % de lcool na soluo. Assim s dividir por 5. EXEMPLO densidade 20/20C.............................................................................................0,9999 % de lcool (v/v)20C tabela II...............................................................................0,07% % de lcool (v/v)20C na amostra inicial...............................0,07/5 =.................0,014 %

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Analise %LCOOL (MTODO IODOMTRICO - TIOSSULFATO

Rev.: 00 FC4M27/03

1. MATERIAL Bureta de 25 mL, erlenmeyer de 250 mL, pipetas volumtricas de 1, 5, 10 e 25mL, pipeta graduada de 10 mL, microdestilador e proveta graduada de 100 mL. 2. REAGENTES Soluo de Tiossulfato de Sdio 0,1N - Na2S2O3 . 5H2O Soluo de Dicromato de Potssio 0,5% - K2Cr2O7 Soluo de Iodeto de Potssio 5% - KI cido Sulfrico concentrado P.A. H2SO4 Soluo indicadora de Amido 0,5%.

3. PROCEDIMENTO Pipetar 10 mL da amostra e transferir para o microdestilador. Recolher o destilado na proveta contendo 10 mL de soluo de Dicromato de potssio 0,5% e 10 mL de cido Sulfrico concentrado, at dobrar o volume da amostra. Transferir quantitativamente para Erlenmeyer a amostra e esfriar a temperatura ambiente. Adicionar 5 mL na Soluo de Iodeto de Potssio 5%, e titular com a soluo de Tiossulfato de Sdio 0,1N, at a colorao amarela claro, adicionar 1 mL de Soluo indicadora de Amido e continuar a titulao vagarosamente, at a viragem de cor azul para incolor (azul claro transparente). Anotar o volume da Soluo de Tiossulfato de Sdio 0,1N gasto. Fazer a prova em branco (seguir o mesmo procedimento sem colocar a amostra).

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4. CLCULOS % de Etanol = 0,01456 x (V1 - V2) V1 = Volume da prova em branco e V2 = Volume da amostra Obs.: A sensibilidade desse mtodo at 0,1% de etanol na vinhaa. Se a perda for maior deve-se diluir a amostra e depois multiplicar pela diluio.

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Analise %LCOOL EBULIOMETRO

Rev.: 00 FC4M28/03

1.CONSIDERAES O mtodo do ebulimetro deve ser usado s por pequenas industrias, pois no tem grande preciso e sensibilidade. 2. CALIBRAO DO PONTO ZERO Lavar a caldeira do ebulimetro com gua destilada. Colocar 25 mL de gua destilada na caldeira (a gua no deve molhar o bulbo do termmetro). Rosquear o condensador a caldeira. No necessrio colocar gua no condensador. Acender a lamparina. Acompanhar o movimento do mercrio no tubo capilar, do termmetro, at a sua estabilizao num determinado ponto, o qual referido como ponto zero da escala. Mover a rgua graduada e ajustar o ponto zero da escala ao valor de leitura no termmetro. 3. DETERMINAO DO GRAU ALCOLICO Lavar a caldeira do ebulimetro com pequenas pores de vinho que vai ser analisado. Colocar 50 mL de vinho na caldeira. Rosquear a parte superior do aparelho que deve conter gua e o termmetro. Encher o tubo refrigerante com gua (no deixar cair gua dentro da caldeira): Acender a lamparina.

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O mercrio contido no tubo capilar move-se at estabilizar em um determinado ponto. Ler a temperatura. Fazer a leitura na rgua graduada. 4. PRECAUES COM O USO DO EBULIMETRO O ponto zero da escala deve ser calibrado ao menos uma vez ao dia. Aps cada operao, lavar a caldeira com gua para evitar incrustaes. Para eliminar incrustaes, ferver na caldeira do ebulimetro soluo de soda 20%, durante 5 minutos. Pode se tambm evitar as incrustaes destilando-se a amostra previamente e depois analisando o destilado.

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Analise DETERMINAO DE MINERAIS (N, P, Ca e Mg)

Rev.: 00 FC4M29/03

1. DETERMINAO DE N, P, K, Ca E Mg USANDO DIGESTO DA AMOSTRA Proceder conforme minerais em mosto. 2. DETERMINAO DIRETA DO POTSSIO (sem digesto). 2.1. MATERIAIS Bequer de 100mL; bales de 50, 100 e 200mL; pipetas de 1 e 10mL; fotmetro de chama e filtro whatman numero 1. 2.2 REAGENTES Padres de 500, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10 e 5 ppm de K 2.3. VERIFICAO DA LINEARIDADE DO FOTMETRO DE CHAMA. Preparar padres de potssio (K) nas concentraes de 0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 e 40 ppm de K. Procedimento de aferio. Acertar a leitura 0 (Zero) do aparelho com a soluo de 0 ppm de K (gua destilada) e a leitura 40 com soluo de 40 ppm de K. Em seguida queimar as solues intermedirias e registrar as leituras. Repetir as operaes de calibrao do aparelho e as leituras trs vezes. Verificar se a linearidade obedecida, ou seja, as leituras das solues intermedirias devem ser iguais a sua concentrao em ppm de K. Acertando a leitura em 40 no aparelho com a soluo de 40 ppm, as leituras intermedirias no correspondem ao valor em ppm, repetir a operao de

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calibrao acertando o zero com a soluo de 0 ppm e 35 com soluo de 35 ppm e ler as solues de concentraes intermedirias entre 0 e 35. Verificar a linearidade da forma j descrita. Ir repetindo as calibraes, com o acerto da leitura mxima com a soluo progressivamente menos concentrada at encontrar a faixa de concentrao onde a leitura linear. Encontrada a regio de linearidade, daqui por diante, o aparelho deve ser acertado para a leitura mxima com essa soluo de concentrao mxima de K. Por exemplo: Se a regio de linearidade for de 0 a 30 ppm de K, sempre que for feita a determinao do K o aparelho deve ter sua leitura 30 acertada com soluo de leitura 30 ppm de K. 2.4. DETERMINAO. Pipetar 1,0 mL da vinhaa in natura e fria, transferir para balo volumtrico de 200 mL e completar o volume com gua destilada. Agitar bem para homogeneizar. Filtrar para bquer de 100 mL, atravs de papel de filtro Whatman No 1 ou Similar, desprezando a primeira poro do filtrado. Levar a soluo filtrada para leitura no fotmetro de chama, regulado conforme estabelecido no estudo da linearidade. 2.5. CLCULOS. % K2O na vinhaa = (L x 4,8) / 100 ou ppm K+ = L x 200

L = Leitura da amostra em fotmetro de chama

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Analise - % LCOOL - MTODO DO DENSMETRO DIGITAL PAAR

Rev.: 00 FC4M30/03

1. MATERIAL Densmetro digital ANTON PAAR 2. PROCEDIMENTO Com o auxlio de uma seringa ou se o densmetro tiver fluxo contnuo, lavar 3 vezes o bulbo de amostra com a amostra de lcool. Colocar a amostra verificando se no houve a formao de bolhas no bulbo. Esperar 3 minutos para estabilizao da temperatura da amostra. Anotar a densidade. Procurar o grau alcolico correspondente a essa densidade na tabela II. Obs.: No DMA-48 com Software s digitar F520 e ter o grau em INPM. NO DMA 4500 e 5000 o grau sai direto na tela. EXEMPLO densidade 20/20C da amostra..........................................................................0,8100 % lcool INPM (g/100g) na tabela II.....................................................................93,46

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Analise - % LCOOL - MTODO DO DENSMETRO DE IMERSO

Rev.: 00 FC4M31/03

1. MATERIAL Densmetro para massa especfica. Jogo de densmetro da srie A 50, com escala nominal em g/l (750 800; 800 850; 850 900; 900 950; 950 1.000); termmetro de preciso, em 0,5C e proveta de vidro de 500 mL. 2. PROCEDIMENTO Transferir o lcool a ser analisado para a proveta, enxaguando-a antes com a amostra. Imergir o densmetro na proveta e em seguida o termmetro, de modo que fique na mesma altura. Aguardar alguns minutos at que a coluna de mercrio do termmetro se estabilize. Fazer a leitura da massa especifica olhando no ponto de afloramento da haste graduada do densmetro, observando tangencialmente o nvel do menisco ou seja na parte inferior do mesmo. Ler a temperatura da amostra e com auxlio da tabela VII, obter o grau alcolico INPM. EXEMPLO Massa especfica................................................................................................0,7860 Temperatura..........................................................................................................25oC Massa especfica a 20C(tabela VII)..................................................................0,7906 Grau alcolico (INPM)............................................................................................99,7

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Analise ALCALINIDADE E ACIDEZ TOTAL

Rev.: 00 FC4M32/03

1. MATERIAL Microbureta de 2 mL, erlenmeyer de 250 mL. 2. REAGENTES Soluo de hidrxido de sdio, 0,02N padronizada. Soluo indicadora de alfa-naftolftaleina 0,1% em lcool etlico, 70% (v/v).(muda de cor a pH 7,5) 3. PROCEDIMENTO Pipetar para erlenmeyer 50 mL de gua destilada. Acrescentar 3 gotas de indicador alfa-naftolftaleina e neutralizar com soluo de hidrxido de sdio 0,02N padronizada. Pipetar 50 mL da amostra previamente homogeneizada para erlenmeyer, agitar e observar a cor da soluo. Considerar a permanncia da cor azul como indicativo da alcalinidade na amostra que ser considerada como positiva. Caso a cor da soluo mude para incolor, titular com hidrxido de sdio 0,02N at a viragem para azul clara. Nesse caso a alcalinidade ser negativa e a acidez dever ser calculada pela frmula abaixo. Anotar o volume gasto. graduao de 0,01 mL, pipeta volumtrica de 50 mL,

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4. CLCULOS Acidez = 1200 x N x V N = normalidade da soluo de hidrxido de sdio V = volume da soluo de hidrxido de sdio em ml, gasto na titulao Acidez = expressa em mg de cido actico/litro. Obs.: Titular em ambiente aberto com baixa concentrao de CO2.

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Analise pH NO HIDRATADO

Rev.: 00 FC4M33/03

1. MATERIAL Balana analtica, legibilidade 0,1 g; peagmetro digital ou analgico com compensao de temperatura, 0 a 100C, impedncia mnima de entrada 1013 ohm, resoluo 0,1 unidades de pH; eletrodo de vidro combinado, sistema Ag/AgCl, com duas aberturas para enchimento de eletrlito, sendo um de referncia e outro da ponte, cabo de conexo tipo universal; termmetro, 0 a 50C, diviso 0,5C; balo volumtrico, 100 a 250 mL; bquer de 150 mL e piceta de 250 mL. 2. REAGENTES Soluo aquosa de cloreto de potssio 3M (saturada com AgCl), soluo alcolica de cloreto de ltio 3M, soluo tampo pH 4,0 (20C), soluo tampo pH 7,0 (20C). 3. CALIBRAO Retirar os protetores dos orifcios e introduzir a soluo eletroltica de referncia (soluo aquosa de cloreto de potssio 3M, saturada com AgCl) no orifcio superior, e a soluo eletroltica da ponte (soluo alcolica de cloreto de ltio 3M) no orifcio inferior. Conectar o eletrodo ao peagmetro e fazer os ajustes dos pontos de pH 4,0 e 7,0 com auxlio das solues tampo pH 4,0 e 7,0 a 20C. 4. PROCEDIMENTO Encher um bquer de 150 mL com a amostra a temperatura ambiente.

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Introduzir o eletrodo at cobrir a luva de teflon com a amostra. Agitar suavemente o bquer por alguns segundos. Introduzir o termmetro na amostra e regular o boto compensador de temperatura para a mesma temperatura da amostra. Aguardar 2 minutos e fazer a leitura do pH, anotando com preciso de 0,1 unidades de pH. 5. CUIDADOS COM O ELETRODO Antes do uso, retirar os protetores de borracha dos flanges dos orifcios de entrada dos eletrodos, a fim de estabelecer o equilbrio de presso. Eventuais bolhas de ar formadas durante o enchimento devem ser eliminadas movimentando-se o eletrodo no sentido vertical. Os nveis do eletrlito dentro do eletrodo devem ser mantidos 10 mm abaixo dos orifcios correspondentes, completando-se quando necessrio. A luva de teflon deve apresentar movimento a um simples toque de dedos. Se a mesma no se movimentar porque houve cristalizao de sais da solues eletrolticas entre a luva e o eletrodo. Nesse caso, deve-se proceder a limpeza da luva com gua destilada, imprimindo com os dedos movimentos da luva at que os sais aderentes se dissolvam e sejam eliminados. Se houver cristalizao de sais provenientes das solues eletrolticas em qualquer dos flanges, limpar com gua destilada. Aps cada leitura de pH lavar o eletrodo com gua destilada com auxlio de uma piceta. Aps o uso manter o eletrodo em KCL 3M at cobrir o anel de teflon. Guardar o eletrodo sempre com os orifcios dos flanges vedados com os protetores. Renovar a soluo do eletrodo da ponte eletroltica sempre que o eletrodo ficar sem uso por mais de 30 dias. Antes da utilizao dos eletrodos novos, mante-los em soluo tampo ou KCL 3M durante aproximadamente doze horas para ativao.

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Produto LCOOL PRODUZIDO


Analise CONDUTIVIDADE

Rev.: 00 FC4M34/03

MTODO UTILIZANDO BANHO TERMOSTATIZADO 1. MATERIAL Condutivmetro, leitura digital ou analgica, faixa de medio 0 - 20.000 us/m, escalas de 0 a 20; 0 a 200 e 0 a 20.000 us/m, resoluo 0,5% em qualquer ponto da escala; os modelos com ajuste da constante so recomendados; clula de condutividade, fluxo contnuo tipo pipeta, eletrodos de platina polida, constante 10 mais ou menos 1 mL e banho termosttico, preciso 0,1C. 2. PROCEDIMENTO Circular a gua do banho termostatizado a 20C na cmara de refrigerao de clula tipo pipeta. Lavar a clula com a amostra trs ou quatro vezes. Encher novamente e aguardar dois minutos para estabilizao da amostra na temperatura do banho. Fazer a leitura condutimtrica a 20C. 3. CLCULO a. Se o condutivmetro permitir o ajuste da constante a condutividade ser: cond. (us/m) = Leitura condutimtrica a 20C b . Se o condutivmetro no permitir o ajuste da constante a condutividade ser: Condutividade (us/m) = L x K onde: L = Leitura condutimtrica a 20C (us) K = Valor real da constante da clula (m-1), conforme calibrao recomendada pelo fabricante do instrumento.

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Produto LCOOL PRODUZIDO


Analise - CONDUTIVIDADE

Rev.: 00 FC4M35/03

MTODO SEM UTILIZAO DO BANHO TERMOSTATIZADO 1. MATERIAL Condutivmetro, leitura digital ou analgico, faixa de medio 0 a 20.000 us/m, escalas de 0 a 20, 0 a 200, 0 a 2.000 e 0 a 20.000 us/m, resoluo 0,5% em qualquer ponto da escala. Os modelos com ajuste da constante so recomendados; clula de condutividade, fluxo contnuo, tipo pipeta, eletrodos de platina polida, constante de aproximadamente 10 m-1 e termmetro, escala 10 a 40C, legibilidade de 0,5% 2. PROCEDIMENTO Circular a gua de torneira na cmara de refrigerao da clula. Medir a temperatura da gua de refrigerao com auxlio do termmetro previamente conectado com o sistema de refrigerao. Lavar a clula com amostra 3 a 4 vezes. Encher novamente e aguardar 2 minutos para estabilizao da amostra na temperatura da gua de refrigerao. Fazer a leitura condutimtrica. 3. CLCULO O clculo da condutividade nas condies desse ensaio ser feito com auxlio da tabela VIII. a. Se o condutivmetro permitir ajuste da constante, a condutividade ser: Condutividade (s/m) = L x f

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onde: L = leitura condutimtrica (s/m) f = fator de correo da condutividade em funo da temperatura do ensaio. b. Se o condutivmetro no permitir o ajuste da constante a condutividade ser: Condutividade (s/m) = L x K x f onde: K = valor real da constante da cela (m-1) recomendada pelo fabricante do instrumento. Obs.: a. Recomenda-se que a medida da condutividade seja feita em temperatura de 20 mais ou menos 2C. b. Se a escala do condutivmetro for em us/cm, multiplicar a condutividade obtida por 100 para expressar o resultado final. c. Em ambos procedimentos a constante da clula deve ser conhecida a priore. d. Para a calibrao do equipamento quando a temperatura da clula diferente de 20C, deve ser reconhecido o valor da condutividade da soluo padro (KCl) na temperatura do ensaio conforme tabela IX.