Recombinant bovine Somatotropin (rbST): Development, production, applications, health impact, detection and prospects. Literature review.

Hormona Somatotropina bovina recombinante (rBST): Desarrollo, produccin, aplicaciones, impacto en la salud, deteccin y perspectivas. Revisin bibliogrfica.
Walter Andrs Pez Reyes*, Jos Danilo Pedraza Hernndez**, Diana Carolina Reyes Gmez*** Ivn Felipe Marn Rivas****1 Biotecnologa para no Biotecnlogos _________________________________________________________________________ ABSTRACT Growth hormone or somatotropin (ST) is a protein hormone produced in acidophilic cells of the anterior pituitary (Prado et al 2003), Towards the beginning of the decade of the 80 bovine somatotropin is synthesized by DNA Technology recombinant (rBGH), this is administered to cows by injection and works by producing in the mammary gland synthesis increased milk (Bauman 1992; Bauman and Vernon 1993). Currently, Monsanto is the only company in which markets recombinant bovine somatotropin, under the trade name POSILAC (sterile sometribove zinc suspension) ( Registered trademark of Monsanto Company) (Center for Veterinary Medicine, November 5, 1993). This protein hormone has been widely studied because it produces responses in animals, both in milk production, for which indicated an increase to 33% (Col Lanna 995) in the change of its components (fat, protein) and somatic cell turnover, however has been a growing controversy, due to the prohibition of the use of this hormone in the European Union in 2001 justifiable for animal welfare, since then, the bovine somatotropin hormone submitted relevance in scientific research, so in this article, we review literature about the production technique, the

Estudiante de Ing. Sistemas. Universidad Nacional de Colombia, sede Bogot. wapaezr@unal.edu.co ** Estudiante de Ing. Qumica. Universidad nacional de Colombia, sede Bogot. jdpedraza@unal.edu.co *** Estudiante de Zootecnia. Universidad nacional de Colombia, sede Bogot. dcreyesg@unal.edu.co. ****Estudiante de Ing. Industrial, Universidad Nacional de Colombia, sede Bogot ifmarinr@unal.edu.co

benefits of their use, their effects on human and animal health, screening forms, and prospects.

Key words: Bovine Somatotropin, Recombinant DNA, Detection techniques, Antibodies.

RESUMEN La hormona del crecimiento o Somatotropina (ST) es una hormona proteica producida en las clulas acidfilas de la pituitaria anterior (Prado y col 2003), Hacia el inicio de la dcada de los aos 80 se sintetiz la Somatotropina bovina por medio de tecnologa con ADN recombinante (rBST), este es administrado a la vaca por inyeccin y funciona produciendo en la glndula mamaria un aumento de la sntesis lctea (Bauman 1992; Bauman y Vernon 1993). Actualmente, Monsanto es la nica empresa del mercado que comercializa la Somatotropina bovina recombinante, bajo el nombre comercial POSILAC (sterile sometribove zinc suspension)( Registered trademark of Monsanto Company) (Center for Veterinary Medicine, November 5, 1993 ). Esta hormona protenica ha sido ampliamente estudiada, debido a las respuestas que produce en los animales, tanto en la produccin de leche, para la cual se ha sealado un incremento de hasta 33% (Lanna y Col 995), en el cambio de sus componentes (grasa, protena) y en la renovacin de las clulas somticas, sin embargo ha producido una polmica creciente, debido a la prohibicin de la utilizacin de esta hormona en la Unin

Europea en el 2001 justificada por el bienestar animal, desde ese entonces, la hormona Somatotropina bovina ha presentado relevancia en las investigaciones cientficas, por lo tanto en el presente artculo, queremos revisar publicaciones acerca de la tcnica de produccin, los beneficios de su utilizacin, sus efectos en la salud animal y humana, sus formas de deteccin, y las perspectivas.

Palabras clave: Somatotropina bovina, ADN recombinante, Tcnicas de deteccin, Anticuerpos.

1. Introduccin

Por lo tanto el objetivo del presente artculo es introducirse en el concepto de

Hace 60 aos se descubri que la STb es un poderoso estimulador de la produccin de leche en vacas lecheras lactantes, pero este conocimiento pudo no haber sido adecuadamente examinado hasta el

la

hormona

Somatotropina sus

bovina,

analizando

generalidades,

comprendiendo su importancia en la produccin animal, as como estudiando las tcnicas para la deteccin de esta, debido a su relevancia para las normas sanitarias de algunos pases.

desarrollo de la STb recombinante a travs de ingeniera gentica (Bauman, 1992). (Mario A. Tarazn Herrera, enero 22 de 2009). Esta ingeniera gentica se refiere especficamente a la tcnica de manipulacin de ADN llamada ADN recombinante que consiste esencialmente en una molcula de ADN artificial formada de manera deliberada in vitro por la unin de secuencias de ADN

2. Generalidades de la hormona

2.1.Somatotropina bovina recombinante

La

BST

puede

ser

producida

sintticamente, utilizando la tecnologa de ADN recombinado. El producto

provenientes de dos organismos de especies diferentes que normalmente no se encuentran juntos. Al introducirse este ADN recombinante en un organismo, se produce una modificacin gentica que permite la adicin de un nuevo ADN al organismo, conllevando a la modificacin de rasgos existentes o la expresin de nuevos rasgos. La produccin de una protena no presente en un organismo determinado y producidas a partir de ADN recombinante, se llaman protenas recombinantes.

resultante se llama Somatotropina bovina recombinante (rBST), hormona de

crecimiento bovino recombinada (rBGH), o la hormona de crecimiento artificial. Se administra a la vaca por inyeccin y se utiliza para aumentar la produccin de leche. Actualmente, Monsanto es la nica empresa del mercado que

comercializa la Somatotropina bovina recombinante, bajo el nombre comercial Posilac.

La hormona de crecimiento bovino (BGH) ha sido creada de manera sinttica para incrementar la produccin de leche en las vacas. El mecanismo de accin de bST implica una serie de cambios orquestados en el metabolismo de los tejidos del cuerpo para que ms nutrientes se puedan utilizar para la sntesis de la leche. (Bauman, 1992)

completa.

Es

evidente

que

existen

variaciones en la respuesta, pero son debidas al nivel de la dosis de bST, al nmero de inyecciones aplicadas, al estado de la lactancia de la vaca, condiciones de manejo, factores

ambientales y muchas otras razones. (Hernndez, 2013)

En general, la ST es un controlador La Somatotropina recombinante bovina (rbST) es un duplicado sinttico de la BGH, que es un suplemento proteico natural para las vacas. La BGH se encuentra naturalmente en la leche. homeorretico clave que regula la particin de nutrientes, y desempea un papel clave en el rendimiento de los animales y el bienestar a travs de una gama de situaciones fisiolgicas. (Bauman, 1992)

2.2. Efecto de la Somatotropina en la produccin

El aumento en la produccin de leche se observa entre 1-2 das despus de haber comenzado las inyecciones de bST y

La capacidad de la bST para aumentar la produccin de leche en vacas lecheras en lactancia es bien conocida. Inyecciones de bST a vacas de alta o mediana habilidad productiva, al principio, mitad e incluso durante lactancias avanzadas, resulta en un incremento de 2-5 kg/d en la produccin de leche, siendo dicho

contina durante todo el perodo hasta que las inyecciones sean suspendidas. Se han reportado incrementos entre el 840%, pero en uso comercial el actual incremento esperado es del 15-25% bajo buenas condiciones ambientales y de manejo; sin embargo esto puede ser grandemente afectado por diferencias entre las vacas, manejo y ambiente. (Gavidia, 2002)

aumento bastante consistente y representa entre 5 - 40% del aumento total en produccin de leche durante la lactancia

2.3. Controversia por la utilizacin de la hormona

temen los efectos que la rbST pueda tener sobre los seres humanos, vacas y

pequeos agricultores. Otros temen que la La percepcin de los consumidores en la actualidad ha cambiado radicalmente, los posibles efectos desconocidos de algunos de los recientes avances de la venta de rbST afectar el comercio local e internacional de productos lcteos, pues no cuenta con la aceptacin de los consumidores. Sin embargo, la FDA concluy en 1985 que los productos crnicos y lcteos procedentes de ganado alimentado con rbST eran seguros para el consumo humano. Cuatro compaas transnacionales apoyan la venta de esta hormona sinttica. Estas son Monsanto, Ely Lilly Upjohn y American Cyanamid. En noviembre de 1993 la FDA aprob el producto rbST de Monsanto, Posilac, para que sea usado en A inicios de de la dcada de 80, y la produccin de leche vacuna. Hasta 1994, la rbST no fue incluida en la lista de productos lcteos hasta febrero de 1994, luego de una moratoria de 90 das expedida por el presidente Clinton. Todava existe desconfianza frente a las guas de etiquetado de los productos que contienen quieren rbST. saber Los consumidores estn

biotecnologa han provocado una cierta reaccin de rechazo ante los mismos (lvarez, 2002). En concreto, se puede citar el caso de la hormona recombinante bovina, que por otro lado abona a la consideracin moderna de las vacas como simples medios de produccin de

ganancias, tanto para los ganaderos capitalistas como para las compaas procesadoras. (Otero, 2012)

movimientos

consumidores

ambientalistas empezaron a presionar al gobierno de Estados Unidos y a la Administracin de Alimentos y

Medicamentos (FDA) para prohibir el uso de la rbST en la produccin lechera. Consecuentemente, han surgido una serie de investigaciones cientficas, estudios sociales y econmicos que corroboran las preocupaciones de los consumidores, ambientalistas y ganaderos. Estos sectores

qu

productos

contaminados con rbST. Por otro lado, a nivel local las fincas ganaderas estadounidenses pequeas no

pueden

competir

con

las

enormes

Namibia, Pakistn, Per, Rumania, Rusia, Eslovaquia, Sudfrica, Turqua, Emiratos rabes, Ucrania y Zimbabwe. (Per lactea, 2006)

haciendas lecheras si es que optan por no usar esta hormona sinttica. A pesar de que existe una sobreoferta de produccin lechera en EEUU., se decide introducir este producto, que a ms de entraar riesgos a la salud humana y del ganado, agrava el problema de sobre produccin. A nivel internacional tambin hay

3. Efectos en la salud animal y humana

La produccin elevada de rbST puede causar mastitis o infecciones a las ubres de las vacas y a su vez, puede producir leche con pus. Varios grupos de

controversia por la comercializacin y produccin de rbST. En Europa hubo una prohibicin en las importaciones de carne contaminada con la hormona del

consumidores adems se han preocupado por complicaciones mdicas inesperadas, trazas de antibiticos en la leche y en la carne y efectos por el aumento del factor de crecimiento (IGF-1), que es semejante a la insulina. Otro temor es el uso de medicamentos basados en la penicilina (bactum-lactam), que es el antibitico ms comnmente

crecimiento desde 1989. Esto sucedi simultneamente con un incidente

relacionado con carne contaminada con la hormona esteroide dietil-stilbrestrol

(DES) y la enfermedad de las vacas locas. Efectos en la salud animal y humana.

Actualmente

la

utilizacin

de

esta

para tratar la mastitis. Los consumidores tienen temor de los potenciales efectos carcingenos de

hormona est prohibida en los principales pases productores de leche, como son la UE, Canad, Australia y Nueva Zelanda, pero se encuentra autorizada en 24 pases como son Argelia, Brasil, Bulgaria, Colombia, Costa Rica, Repblica Checa, Honduras, Hungra, Jamaica, Kenia,

concentraciones ms altas de IGF-1 en la leche que lo normal. La IGF-1 estimula el crecimiento de las clulas intestinales aumentando as el riesgo de crecimiento intestinal anormal.

Corea, Estados Unidos, Malasia, Mxico,

La BGH como tambin otras hormonas biotecnolgicas ha sido llamada como el crack para las vacas. Jeremy Rifkin, presidente Tendencias de la Fundacin (FET), sobre ha

permitida

en

muchos

pases,

como

Estados Unidos, Colombia y Mxico, sin embargo en la Unin Europea es

prohibida su administracin; Con motivo de controlar las cantidades inyectadas en los bovinos, se han realizado

Econmicas

conducido una campaa por varios aos contra el uso de la rbST en los productos lcteos. La Campaa Alimentos Puros tambin compaas boicote lcteas a y las principales que

investigaciones con varios mtodos de deteccin de la hormona recombinante bovina, a pesar de que el uso de esta hormona se ha regulado durante 15 aos, la deteccin y cuantificacin esta sigue siendo un problema, debido a la falta de herramientas de anlisis con el fin de cumplir con la regulacin. De hecho, actualmente no hay ningn mtodo disponible para detectar especficamente STbr en la leche o los productos lcteos (Le Breton et al, 2010), por lo tanto estudiaremos las biotecnologas expuestas en los estudios consultados con mayor precisin: 4.1 Cromatografa lquida

crnicas

apoyaban los productos rbST. El grupo tiraba la leche en todo Estados Unidos para simbolizar su oposicin a esta sustancia. Numerosos supermercados,

incluyendo Krogers, se rehusaron a comprar productos lcteos tratados con rbST debido a la oposicin firme de los consumidores. Los grupos tambin

protestaron cuando descubrieron que tres empleados de la FDA tenan relacin con Monsanto, justo en el momento del desarrollo de Posilac.

espectrometra de masas (LC/MS): 4. Tecnologas de deteccin de la hormona Somatotropina bovina recombinante Es una tcnica qumica que combina las capacidades de separacin fsica de cromatografa lquida (o HPLC) con las La administracin de la Somatotropina bovina recombinante para aumentar la produccin de leche en las vacas es capacidades de anlisis de masas de espectrometra de masas.En el estudio llamado Deteccin de la hormona bovina

recombinante en la leche y los efectos de los procesos industriales y su estabilidad realizado en Francia, esta tcnica es utilizada para detectar y cuantificar la concentracin de esta hormona en

esterilizacin

inducen

una

prdida

significativa de la hormona.

4.2 Inmunoensayo de citometra de flujo (FCIA): Esta tcnica es utilizada en el artculo llamado Monitoreo de leche para

diferentes tipos de productos lcteos (Leche cruda, leche condensada y leche en polvo) as como tambin estudiar la estabilidad de la misma a diversos procesos industriales, el protocolo de preparacin se basa en una etapa de extraccin en fase slida, seguida de precipitacin con metanol fro y digestin enzimtica, el anlisis se bas en el pptido N-terminal de tripsina (especfico para la forma recombinante de la

anticuerpos en contra de la Hormona Somatotropina recombinante bovina

usando un inmunoensayo basado en biomarcadores con micro esferas, se desarroll para diferenciar entre la leche de animales tratados con STBr y animales no tratados; Se definieron ventajas tales como que es un muestreo no invasivo, para el anlisis de leche de tanque en una finca, slo se necesitara una pequea muestra de leche para encontrar la hormona STbr, y el ahorro de tiempo en el pre tratamiento de la leche o el suero, en cuanto a la confiabilidad, es un muestreo aceptable teniendo como

hormona) y la deteccin se realiz por MS/MS-LC (+); Los resultados afirmaron que es un mtodo de excelente

especificidad, sensibilidad y precisin. En cuanto al otro objetivo de determinar el comportamiento de la hormona con la transformacin de los productos lcteos, los resultados mostraron que en el caso de procesos que no implican un aumento de temperatura, tales como prdida de grasa y congelacin, la recuperacin de la hormona es buena con valores de hasta 90%. Por el contrario, en procesos tales como calentamiento, pasteurizacin o

resultado que un 67% de los animales tratados con STbr respondi

positivamente con la produccin de anticuerpos, mientras que el 94% de los animales no tratados no lo hizo, en cuanto al segundo objetivo, la conclusin fue que la pasteurizacin no obstruye

completamente la deteccin de este

biomarcador, por lo que incluso la leche procesada puede ser analizada.

la figura 1), se evaluaron las respuestas de cada uno de ellos, resultando en baja confiabilidad y gran cantidad de falsos

4.3

Mltiples

Biomarcadores

de

positivos, por lo tanto se experiment combinando biomarcadores, primero en grupos de tres y luego en grupos de dos, Como resultado se obtuvo que la

protenas: Con el mismo objetivo de los otros dos mtodos, se buscan Biomarcadores in vivo como los utilizados para detectar el doping con hormona de crecimiento en atletas, para descubrir el abuso de la Somatotropina en vacas; En el artculo Evaluacin de mltiples biomarcadores de protenas para el abuso de la Somatotropina recombinante bovina (rbST) en el ganado se desarrolla la medicin simultnea de cuatro

combinacin AO: Anticuerpos contra rbST y Osteocalcina demostr ser muy fiable y predijo correctamente el 95% de las muestras tratadas a partir de la segunda inyeccin de STbr hasta el final del perodo de tratamiento, e incluso a partir de entonces, por lo tanto esta combinacin fue recomendada a la Unin Europea, para incluirla en sus revisiones veterinarias y as poder detectar la hormona, as como tambin el abuso en pases que si permiten su utilizacin.

biomarcadores candidatos (la lista de biomarcadores completa se encuentra en la Tabla 1) para alcanzar el objetivo: el factor de crecimiento insulinico 1 (IGF1), la protena de unin 2 (IGFBP2), que se seleccionaron por su rpida respuesta y la osteocalcina y los anticuerpos

5. Conclusiones En Colombia al igual que en el resto del mundo en los ltimos aos se ha generado controversia sobre el uso de la hormona Somatotropina recombinante bovina, pero ya que la regulacin de los frmacos en el pas la dicta el Codex alimentarius, y este no establece lmites de residuos mximos para este anablico hormonal, no hay reglamentacin para sustancias de

producidos endgenamente contra rbST, elegidos por mostrar una respuesta tarda, pero de larga duracin; para evaluar la respuesta de estos 4 biomarcadores, se trabaj con un FCIA o Inmunoensayo de citometra de flujo, (el proceso completo del experimento se encuentra ilustrado en

este tipo, por lo tanto se necesita primero ms investigacin regional de los efectos de residuos de estas sustancias y segundo implementar legislacin en

organizaciones como el ICA o como el INVIMA, para controlar abusos. Actualmente los mtodos para detectar la hormona Somatotropina bovina

recombinante (rbST) son tecnificados y relativamente sencillos, pues han buscado ser similares con pruebas antidoping en atletas, adems que las tcnicas

especficas ya estn definidas gracias a estudios cientficos como los

mencionados en esta revisin; La gran desventaja es el difcil acceso a ellas en pases menos adelantados.

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6. Tablas y Figuras Figura 1. Flujo de trabajo para la preparacin del suero, el pre-tratamiento genrico del suero y la FCIA de los biomarcadores candidatos. (Ludwig et al. 2012)

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Tabla 1. Biomarcadores candidatos para el abuso de la Somatotropina y sus respuestas esperadas para un tratamiento con ST en humanos y vacas. (Ludwig et al. 2012)

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