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UNIVERSIDAD DE GUANAJUATO DIVISION DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS DEPARTAMENTO DE BIOLOGA

MANUAL DE PRCTICAS DE BIOLOGA CELULAR

Rosa Mara Garca Nie o J!a"a L#$e% Go&"e% M'r"a Sa(a"ero L#$e%

INDICE

Prctica 1. Manejo, cuidado y uso del microscopio ...... 3 Prctica 2. !ser"aci#n de c$lulas eucari#ticas.. %

Prctica 3. Desnaturali&aci#n de prote'nas... 12 Prctica (. Permea!ilidad celular .... .1) Prctica *. + ,idaci#n i-ual a "eje&. .... 2/ Prctica ). !tenci#n de DN0 . 23

Prctica 1. Mitosis.. 2* Prctica 2. Cromatina se,ual 3 en c$lulas de la mucosa !ucal de 4umano 3/ 5i!lio-ra6'a .. 32

P70C8IC0 No.1 M0NE9 , C:ID0D ; :< DE= MIC7 <C PI

!jeti"o> 0plicar los principios te#ricos y lo-rar utili&ar correctamente el microscopio para el anlisis de las estructuras celulares ?ue participan en los procesos !iol#-icos. @undamento El desarrollo del microscopio, 4ace ms de 3// aAos, mostr# ?ue la "ida no est limitada a lo ?ue se "e por o!ser"aci#n directa. 0?uel in"ento permiti# descu!rir ni"eles de complejidad insospec4ados en los or-anismos "i"os. Mediante el microscopio aparec'a un mundo nue"o ?ue los cient'6icos de la $poca no sa!'an c#mo interpretar. =os primeros, construidos en el si-lo 3BII, ten'an una sola lente. 0ntoni "an =eeuCen4oeD, un "endedor de telas 4oland$s, 6ue uno de los primeros 6a!ricantes de microscopios. <u instrumento era !ien simple> una sola lente montada en una placa de metal con tornillos para mo"er lo ?ue se ?uisiera "er y en6ocar la ima-en. 5ajo su lente, Ban =eeuCen4oeD o!ser"# todo lo ?ue pasa!a por sus manos> pol"o de diamante, lana de cordero, pelo 4umano, pepita de naranja, e,cremento de rana, "ino, restos de piel, restos de 4ueso, etc$tera. Cientos de pe?ueAos seres "i"os totalmente desconocidos por los cient'6icos de la $poca aparec'an con su microscopio. Durante */ aAos, =eeuCen4oeD pu!lic# re-ularmente el resultado de sus minuciosas o!ser"aciones en la 7oyal <ociety !ritnica. 0l mismo tiempo, en In-laterra, 7o!ert EooDe, tam!i$n descri!'a las mara"illas ?ue aparec'an a tra"$s de la lu& del microscopio. En su li!ro Micrographia, ?ue constituy# una de las primeras pu!licaciones so!re el tema, EooDe incluy# descripciones y di!ujos detallados de di"ersas o!ser"aciones microsc#picas y telesc#picas. <i !ien EooDe descri!i# c#mo el corc4o y otros tejidos "e-etales esta!an 6ormados por pe?ueAas ca"idades separadas por paredes, a las ?ue llam# c$lulas, su tra!ajo 6ue s#lo descripti"o ya ?ue no es!o&# teor'a al-una. =as primeras lentes pod'an producir un aumento de 4asta 2// "eces, pero ten'an "arias limitaciones. =os microscopios distorsiona!an la 6orma y el color de los o!jetos y la mayor'a de los cient'6icos "e'a estos instrumentos como ju-uetes y no como al-o Ftil para su tra!ajo. =amenta!lemente, la ciencia no lo-r# a"an&ar demasiado con estas o!ser"aciones, ya ?ue los primeros microscopistas no ten'an nin-una preocupaci#n ms ?ue el placer de descu!rir cosas nue"as y no intentaron dar una e,plicaci#n te#rica a lo ?ue "e'an. 8anto es as' ?ue las o!ser"aciones de =eeuCen4oeD y EooDe pasaron casi inad"ertidas por los cient'6icos de la $poca. Esto se de!e so!re todo a dos ra&ones> =eeuCen4oeD no ten'a educaci#n 6ormal y EooDe era s#lo un empleado de 7oyal <ociety, y no miem!ro de ella. 0dems, en el si-lo 3BII aFn se "alora!an ms la o!ser"aci#n y la e,perimentaci#n, ideas ?ue se continua!a desde de la Edad Media.

<#lo a principios del si-lo 3I3, la microscopia comen&# a o6recer instrumentos adecuados para el estudio del interior de las c$lulas. 0parecieron los microscopios compuestos, ?ue en un principio ten'an dos lentes, pero, lue-o, con el a"ance de la 6oto-ra6'a, incorporaron una tercera lente para acoplarle una cmara de 6otos o 6ilmadora. En la mitad del si-lo 33, el in"ento del microscopio electr#nico constituy# un -ran aporte al estudio de la !iolo-'a celular, ya ?ue permiti# conocer la tridimensionalidad de las estructuras celulares as' como la distri!uci#n espacial de los componentes moleculares en su interior. En la d$cada de 1%3/, la microscopia electr#nica dio un salto cuantitati"o al mejorar su resoluci#n. <e lo-r# "er, por ejemplo, lo ?ue 4ay adentro del ret'culo endosplasmtico, y por otro lado, descu!rir ?ue las mitocondrias son or-anelos ?ue estn dentro del citoplasma. =a 6unci#n !sica del microscopio de lu& o de campo claro G?ue se muestra en la 6i-ura 1H, es la de o!tener im-enes con calidad y aumento y, esta 6undamentado en los principios de transmisi#n, a!sorci#n, di6racci#n y re6racci#n de la lon-itud de onda de la lu&. El aumento del o!jeto es lo-rado usando dos sistemas de lentes con6ormados por los lentes del ocular y del o!jeti"o. En este aspecto, los microscopios de campo claro estn e?uipados con cuatro o!jeti"os, con un poder de aumento de (3, 1/3 G!ajo aumentoH, (/3 Galto aumentoH y 1//3 GInmersi#nH. =os lentes del o!jeti"o estn ms cercanos al esp$cimen a o!ser"ar, produciendo la Iima-en realJ. Esta ima-en es despu$s proyectada 4acia el tu!o de los oculares, los cuales, aumentan el esp$cimen o!ser"ado por 1/3 o 123 dependiendo del ocular utili&ado, produciendo la ima-en 6inal. En el microscopio de campo claro no es posi!le lo-rar un aumento ilimitado por?ue los lentes son limitados en su aumento, por una propiedad conocida como poder de resoluci#n, ?ue se re6iere a la capacidad de un lente para mostrar dos o!jetos separados como entidades discretas. El poder de resoluci#n GdH, es e,presado con la si-uiente 6ormula dK/.)1 Ln <enM, donde al6a es la mitad del n-ulo de apertura del lente, n es el 'ndice de re6racci#n del medio circundante y es la lon-itud de onda de la lu& usada Gpara la lu& !lanca se asume un "alor de /.*3 NmH. Incrementando el 'ndice de re6racci#n del medio, ms rayos de lu& entran directamente en la lente del o!jeti"o, esto e,plica por?ue el aceite de inmersi#n se utili&a cuando se tra!aja con el o!jeti"o 1//3. El aceite tiene el mismo 'ndice de re6racci#n ?ue el "idrio y al pasar la lu& por el portao!jeto, ocurre solo una m'nima di6racci#n de la lu& y resulta una ima-en ms n'tida con mayor resoluci#n. En la microscopia de campo claro los espec'menes pueden ser 6ijados y teAidos, al respecto e,isten di6erentes t$cnicas ?ue pueden ser utili&adas para teAir 'nte-ramente las c$lulas o componentes espec'6icos de ellas tales como el nFcleo, aparato de Ool-i, etc.

Es?uema del microscopio de lu&>

Material Cu!reo!jetos Perlas de Bidrio 0ceite de Inmersi#n 0&ul tripano G/.(P en 0-uaH Cmara 4Fmeda Gcaja de petri con papel 6iltroH Microscopio de =u& Isopos de al-od#n Procedimiento 1. Colo?ue la preparaci#n teAida en el Microscopio en6o?ue la ima-en sin ajustar la iluminaci#n. Note la apariencia del esp$cimen. Despu$s ajuste el Microscopio para la iluminaci#n QR4ler y e,amine el esp$cimen nue"amente. Compare las dos im-enes. 0juste el microscopio para la iluminaci#n de QR4ler mediante los si-uientes pasos> S Encienda el microscopio Glu& amarilla de !ajo "oltajeH. S 0!ra los dia6ra-mas Gde campo y de irisH. S <u!a el condesador a su tope. S <eleccione el o!jeti"o 1/3.
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S En6o?ue con el mando macrom$trico y microm$trico usando Fnicamente el ojo derec4o. Para en6ocar con el ojo i&?uierdo, proceda a -irar el portaSocular o el ocular en6oca!le 4asta lo-rar "er n'tida la ima-en, no utilice el mando microS macro para esta 6unci#n. 0juste despu$s la distancia interpupilar. SCierre el dia6ra-ma de campo. SEa-a descender li-eramente el condensador 4asta "er n'tido el !orde del dia6ra-ma de campo. S De ser necesario, centrar el condensador con la ayuda de sus dos tornillos laterales, una "e& centrado el condensador a!rir el dia6ra-ma de campo 4asta ?ue el !orde apenas desapare&ca del campo "isual, a-re-ar el 6iltro a&ul y de ser necesario intensi6icar un poco ms la lu&. S Contrastar la ima-en con el dia6ra-ma de iris del condensador. :n !uen ajuste normalmente se lo-ra teniendo entre un )) y un 2/P de la apertura de dia6ra-ma de campo "isi!le. 2. =impie y mar?ue 3 portao!jetos o colo?ue unas pocas es6eras de "idrio en cada portao!jetos so!re de esto, pon-a el cu!reo!jeto y adicione a-ua GnK1.333/H a una de las preparaciones , aceite de inmersi#n GnK1.*1*/H al se-undo y deje al tercero seco Gn del aireK1.///H !ser"e las preparaciones al microscopio, en orden del incremento del 'ndice de re6racci#n. E,perimente con la iluminaci#n Gdia6ra-ma y condensadorH. Para tener la ima-en. Note c#mo el cam!io en el 'ndice de re6racci#n a6ecta la ima-en de las es6eras. 3. Colecte epitelio !ucal de al-uno de los compaAeros y col#?uelo en *//Tl de Cloruro de <odio al /.%P e6ectFe una o!ser"aci#n directa de la preparaci#n, o!ser"ando entre lamina y laminilla y, por otra parte, colo?ue una -ota de a&ul de tripano so!re un portao!jetos, despu$s adicione una -ota de la muestra de epitelio !ucal, colo?ue el cu!reo!jetos y e,amine las c$lulas utili&ando los di6erentes o!jeti"os. (. Compare las im-enes teAidas y sin teAir y ela!ore un di!ujo marcando los si-uientes componentes de las c$lulas ?ue 4an sido o!ser"ados> nFcleos, nucl$olo, citoplasma, inclusiones citoplasmticas y mem!rana plasmtica. *. 8omando en cuenta los lentes, ocular y los o!jeti"os utili&ados, determine el aumento de las im-enes o!ser"adas. 7esultados

Conclusi#n>

Cuestionario 1. +Cules son los sistemas ?ue componen el microscopio de lu&. Indica sus partes de cada sistema.

2. +0 ?u$ se le llama poder de resoluci#n.

3. +Cul es el l'mite de resoluci#n del ojo 4umano, del microscopio de lu& y el microscopio electr#nico.

(. Indi?ue dos tipos de microscopia de lu& y electr#nica y sus "entajas.

P70C8IC0 No. 2 5<E7B0CIUN DE CV=:=0< E:C07IU8IC0< !jeti"o> 7eali&ar o!ser"aciones para identi6icar las caracter'sticas de las c$lulas eucari#ticas. @undamento <e denomina eucariotas a todas las c$lulas ?ue tienen su material 4ereditario 6undamental Gsu in6ormaci#n -en$ticaH encerrado dentro de una do!le mem!rana, la en"oltura nuclear, ?ue delimita un nFcleo celular. I-ualmente estas c$lulas "ienen a ser microsc#picas pero de tamaAo -rande y "ariado comparado con las otras c$lulas. =a alternati"a a la or-ani&aci#n eucari#tica de la c$lula la o6rece la llamada c$lula procariota. En estas c$lulas el material 4ereditario se encuentra dentro de di6erentes compartimientos llamados or-anelos, en el seno del citoplasma. =as c$lulas eucariotas no cuentan con un compartimiento alrededor de la mem!rana plasmtica GperiplasmaH, como el ?ue tienen las c$lulas procariotas.0 los or-anismos 6ormados por c$lulas eucariotas se les denomina eucariontes. Clulas animales Estructura de una c$lula animal t'pica> 1. Nucleolo, 2. NFcleo, 3. 7i!osoma, (. Bes'cula, *. 7et'culo endoplasmtico ru-oso, ). 0parato de Ool-i, 1. Citoes?ueleto GmicrotF!ulosH,

2. 7et'culo endoplasmtico liso, %. Mitocondria, 1/. Pero,isoma, 11. Citoplasma, 12. =isosoma. 13. Centriolo.

=as c$lulas animales componen los tejidos de los animales y se distin-uen de las c$lulas "e-etales en ?ue carecen de paredes celulares y de cloroplastos y poseen centr'olos y "acuolas ms pe?ueAas y, -eneralmente, ms a!undantes. De!ido a la carencia de pared celular r'-ida, las c$lulas animales pueden adoptar una "ariedad de 6ormas e incluso pueden 6a-ocitar otras estructuras. Clulas vegetales Estructura de una c$lula "e-etal t'pica> 1. NFcleo, 2. Nucleolo, 3. Mem!rana nuclear, (. 7et'culo endoplasmtico ru-oso, *. =eucoplasto, ). Citoplasma, 1. 0parato de Ool-i, 2. Pared celular, %. Pero,isoma,

1/. Mem!rana plasmtica, 11. Mitocondria, 12. Bacuola central, 13. Cloroplasto, 1(. Plasmodesmos, 1*. 7et'culo endoplasmtico liso, 1). Citoes?ueleto, 11. Bes'cula, 12. 7i!osomas.

=as caracter'sticas distinti"as de las c$lulas de las plantas son>

:na "acuola central -rande Gdelimitada por una mem!rana, el tonoplastoH, ?ue mantiene la 6orma de la c$lula y controla el mo"imiento de mol$culas entre citosol y sa"ia. :na pared celular compuesta de celulosa y prote'nas, y en muc4os casos, li-nina, ?ue es depositada por el protoplasto en el e,terior de la mem!rana celular. Esto contrasta con las paredes celulares de los 4on-os, ?ue estn 4ec4as de ?uitina, y la de los procariontes, ?ue estn 4ec4as de peptido-licano. =os plasmodesmos, poros de enlace en la pared celular ?ue permiten ?ue las c$lulas de la plantas se comuni?uen con las c$lulas adyacentes. Esto es di6erente a la red de 4i6as usada por los 4on-os. =os plastos, especialmente cloroplastos ?ue contienen cloro6ila, el pi-mento ?ue da a la plantas su color "erde y ?ue permite ?ue realicen la 6otos'ntesis. =os -rupos de plantas sin 6la-elos Gincluidas con'6eras y plantas con 6lorH tam!i$n carecen de los centriolos ?ue estn presentes en las c$lulas animales.

Material Microscopio Mec4ero 5istur' o tijeras de punta 6ina Pin&as yLo palillos est$riles Ce!olla Papel de 6iltro Placa de Petri Piseta Colorante G"erde de metilo o a&ul de metilenoH Portao!jetos y cu!reo!jetos Procedimento C$lulas "e-etales GEpidermis de ce!ollaH 1. <e corta la ce!olla por la mitad y se separa una de las capas de la misma. 2. Marca con el !istur' o con las tijeras una cuadr'cula de pe?ueAo tamaAo G1 cm de ladoH en la parte interna o c#nca"a de la capa. 3. <epara el 6ra-mento de epidermis con las pin&as y col#calo en el centro del portao!jetos. (. Coloca el portao!jetos en la placa de Petri, aAade unas -otas de colorante so!re la muestra y d$jalo actuar durante cinco minutos. *. =a"a con cuidado el e,ceso de colorante y s$calo con un poco de papel de 6iltro. ). 0Aade una -ota de a-ua a la muestra.

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1. Coloca el cu!re apoyndolo por un lado y dejndolo caer para ?ue no ?ueden !ur!ujas. !ser"a la preparaci#n al microscopio, utili&ando "arios o!jeti"os, reali&a un di!ujo detallado de las c$lulas e indica el aumento del mismo. C$lulas animales GEpitelio de la mucosa !ucalH 2. 7aspa sua"emente el interior del carrillo con las pin&as o con un palillo Gsiempre por la parte roma, procurando no cortarseH. Coloca la mucosa !lanca ?ue se o!tiene en el portao!jetos. %. 7eali&a una e,tensi#n G6rotisH desli&ando el !orde de un porta so!re el ?ue tiene la muestra. 1/. Calienta sua"emente con el mec4ero Gque no llegue a quemar!H la parte in6erior del porta ?ue contiene la mucosa. 11. El resto del procedimiento es id$ntico al de la epidermis de ce!olla. 7esultados Ea& es?uemas de las c$lulas ?ue o!ser"aste, indicando el aumento usado. <eAala las partes en cada tipo de c$lula y marca las di6erencias entre ellas.

Conclusi#n>

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P70C8IC0 No. 3 DE<N08:70=IW0CIUN DE P7 8EXN0< !jeti"o> Determinar el comportamiento de una prote'na -lo!ular 4idrosolu!le !ajo condiciones de desnaturali&aci#n. @undamento =as prote'nas son los materiales ?ue desempeAan un mayor nFmero de 6unciones en las c$lulas de todos los seres "i"os. Por un lado, 6orman parte de la estructura !sica de los tejidos GmFsculos, tendones, piel, uAas, etc.H ;, por otro, desempeAan 6unciones meta!#licas y re-uladoras Gasimilaci#n de nutrientes, transporte de o,'-eno y de -rasas en la san-re, inacti"aci#n de materiales t#,icos o peli-rosos, etc.H. 8am!i$n son los elementos ?ue de6inen la identidad de cada ser "i"o, ya ?ue son la !ase de la estructura del c#di-o -en$tico G0DNH y de los sistemas de reconocimiento de or-anismos e,traAos en el sistema inmunitario. <on macromol$culas or-nicas, constituidas !sicamente por car!ono GCH, 4idr#-eno GEH, o,'-eno G H y nitr#-eno GNHY aun?ue pueden contener tam!i$n a&u6re G<H y 6#s6oro GPH y, en menor proporci#n, 4ierro G@eH, co!re GCuH, ma-nesio GM-H, yodo GIH, etc... Estos elementos ?u'micos se a-rupan para 6ormar unidades estructurales llamados aminocidos. <e sa!e ?ue de los 2/ aminocidos proteicos conocidos, 2 resultan indispensa!les Go esencialesH para la "ida 4umana y 2 resultan Zsemiindispensa!lesZ. =os p$ptidos y el enlace pept'dico. =os p$ptidos estn 6ormados por la uni#n de aminocidos mediante un enlace pept'dico. Es un enlace co"alente ?ue se esta!lece entre el -rupo car!o,ilo de un aminocido y el -rupo amino del si-uiente, dando lu-ar al desprendimiento de una mol$cula de a-ua. 0s' pues, para 6ormar p$ptidos los aminocidos se "an enla&ando entre s' 6ormando cadenas de lon-itud y secuencia "aria!le. Para denominar a estas cadenas se utili&an pre6ijos con"encionales como> li-op$ptidos.S si el n [ de aminocidos es menor de 1/. Dip$ptidos.S si el n [ de aminocidos es 2. 8rip$ptidos.S si el n [ de aminocidos es 3. 8etrap$ptidos.S si el n [ de aminocidos es (. Polip$ptidos o cadenas polipept'dicas.S si el n [ de aminocidos es mayor de 1/.

Estructura de las prote'nas =a or-ani&aci#n de una prote'na "iene de6inida por cuatro ni"eles estructurales denominados> Estructura primaria =a estructura primaria es la secuencia de aminocidos de la prote'na. Nos indica ?u$ aminocidos componen la cadena polipept'dica y el orden en ?ue dic4os aminocidos se encuentran. =a 6unci#n de una prote'na depende de su secuencia y de la 6orma ?ue $sta adopte. Estructura <ecundaria. =a estructura secundaria es la disposici#n de la secuencia de aminocidos en el espacio. =os aminocidos, a medida ?ue "an siendo enla&ados durante la s'ntesis de prote'nas y -racias a la capacidad de -iro de sus enlaces, ad?uieren una disposici#n espacial esta!le, la estructura secundaria. E,isten dos tipos de estructura secundaria> =a MS4$lice =a con6ormaci#n \. Esta estructura se 6orma al enrollarse 4elicoidalmente so!re s' misma la estructura primaria. <e de!e a la 6ormaci#n de enlaces de 4idr#-eno entre el SCK de un aminocido y el SNES del cuarto aminocido ?ue le si-ue. Estructura terciaria =a estructura terciaria in6orma so!re la disposici#n de la estructura secundaria de un polip$ptido al ple-arse so!re s' misma ori-inando una con6ormaci#n -lo!ular. En definitiva, es la estructura primaria la que determina cul ser la secundaria y por tanto la terciaria. Esta con6ormaci#n -lo!ular 6acilita la solu!ilidad en a-ua y as' reali&ar 6unciones de transporte, en&imtica, 4ormonales, etc. Esta con6ormaci#n se mantiene esta!le -racias a la e,istencia de enlaces entre los radicales 7 de los aminocidos. Eay "arios tipos de enlaces> el puente disul6uro entre los radicales de aminocidos ?ue tiene a&u6re. los puentes de 4idr#-eno. los puentes el$ctricos. las interacciones 4i6r#6o!as. Estructura Cuaternaria Esta estructura in6orma de la uni#n, mediante enlaces d$!iles Gno co"alentesH de "arias cadenas polipept'dicas con estructura terciaria, para 6ormar un complejo proteico. Cada una de estas cadenas polipept'dicas reci!e el nom!re de prot#mero.

Material Clara de 4ue"o Etanol 9u-o de lim#n 0cido clor4'drico 1N Eidr#,ido de sodio 1N <al de mesa Procedimiento Colo?ue un poco de clara de 4ue"o en seis tu!os de ensaye. 0 primero a-r$-uele un poco de etanol, al se-undo un poco de ju-o de lim#n, al tercero un poco de ECl 1N, al cuarto un poco de Na E 1N, al ?uinto sal y al se,to !talo con una "arilla. 8ape los tu!os y espere media 4ora. 0 medida ?ue pase el tiempo o!ser"e lo ?ue sucede en cada tu!o. 7e-istre sus resultados. 7esultados

Conclusi#n>

Cuestionario 1. +Cules son las condiciones de desnaturali&aci#n de prote'nas para someter a una separaci#n por electro6oresis en condiciones nati"as.

2. Mencione dos m$todos de desnaturali&aci#n de prote'nas usados cotidianamente en casa.

3. <i ?uisi$ramos o!tener prote'nas de un 4omo-enado celular, +?u$ condiciones e,perimentales de!emos cuidar.

P70C8IC0 ( PE7ME05I=ID0D CE=:=07 !jeti"o> di6erencias entre di6usi#n, dilisis y #smosis. @undamento =a estructura y 6unci#n de las c$lulas depende en 6orma cr'tica de las mem!ranas, las cuales no s#lo separan el interior de la c$lula de su am!iente, sino tam!i$n de6inen los compartimentos internos de las c$lulas eucari#ticas, incluyendo el nFcleo y los or-anelos citoplsmicos. =a 6ormaci#n de las mem!ranas depende de las propiedades de los l'pidos y todas las mem!ranas celulares comparten una or-ani&aci#n estructural comFn de 6os6ol'pidos asociados a prote'nas. Estas prote'nas de mem!rana son responsa!les de muc4as 6unciones especiali&adas. =a mem!rana celular 6unciona como una !arrera semipermea!le, permitiendo el paso a muy pocas mol$culas a tra"$s de ella. =os elementos 6undamentales de todas las mem!ranas son los 6os6ol'pidos, los cuales son mol$culas an6ipticas, lo cual si-ni6ica ?ue tienen en su estructura una re-i#n 4idro6#!ica Gdos cadenas de cidos -rasosH y otra 4idro6'lica Guna ca!e&a polarH. De!ido a su poca solu!ilidad en a-ua, los 6os6ol'pidos espontaneamente 6orman !icapas en soluciones acuosas con las cadenas de cidos -rasos inmersas en el interior de la mem!rana y las ca!e&as polares e,puestas en am!os lados en contacto con el a-ua. De esta 6orma la mem!rana est estructurada por una !icapa de 6os6ol'pidos con prote'nas asociadas. @:NCI NE< DE =0 MEM570N0 P=0<M]8IC0> 1. Compartamentali&aci#n 2. Constituyen una !arrera selecti"amente permea!le. 3. 8ransporte de solutos (. 7espuestas a seAales e,ternas *. Interacci#n celular ). <itio de acti"idades !io?u'micas 1. 8ransducci#n de ener-'a Material Baso de precipitado <oluci#n de yodo <oluci#n de almid#n al 1P 5olsa de plstico Cond#n Celo6n dulce Eilo de al-od#n

Procedimiento =lene el "aso de precipitados con a-ua 4asta el 2/P de su "olumen, aAdale 1/ -otas de soluci#n de yodo y a-'telo. Colo?ue unos mililitros de soluci#n de almid#n en la !olsa de plstico, en el cond#n y en el celo6n dulce. Cierre con el 4ilo de al-od#n. <umerja los sacos con la soluci#n de yodo y espere unos 1/ minutos. !ser"e en d#nde se 6orm# el color a&ul Gadentro o a6uera de cada sacoH. 2H DEM <870CI N DE =0 P7E<IUN Material> :n 4ue"o. :n capilar, :na esptula o cuc4ara de metal. Cera 0-ua Baso de precipitado o un 6rasco. <MU8IC0>

Procedimiento> 8omar el 4ue"o y con una esptula o cuc4ara, cuidadosamente darle unos -olpecitos en el e,tremo ms anc4o, para conse-uir ?ue el cascaron se 6racture. Con los dedos ?uitar poco a poco el cascaron dejando un espacio cuadrado de 1.* cm sin romper la mem!rana. En el otro e,tremo 4acer el mismo procedimiento, pero solo ?uitar un poco de cascara. En el e,tremo a-udo, introducir con cuidado un capilar 4asta ?ue atra"iese la mem!rana. <ellar con cera el espacio entre el capilar y el cascaron. Poner el a-ua 4asta el !orde en un 6rasco, asentar el 4ue"o por el lado anc4o y con la mem!rana inte-ra, y ?ue est en contacto con el a-ua. Dejar el 4ue"o durante una 4ora y o!ser"ar cada 1* minutos el capilar.

!ser"aciones

Conclusiones

Cuestionario 1. De acuerdo al modelo del mosaico 6luido, +de ?u$ estn constituidas las mem!ranas celulares.

2. +^u$ 6actores a6ectan la 6luide& de la mem!ranas celulares.

3. E,plica por?ue se 6orma el color a&ul en el e,perimento de permea!ilidad.

(. En el e,perimento de presi#n osm#tica. +?u$ determina la direcci#n en la cual se mue"e el a-ua.

(. +Cuntos tipos de transporte se lle"an a ca!o a tra"$s de la mem!rana y cul se us# en el e,perimento.

P7]C8IC0 No. * + 3ID0CIUN IO:0= 0 BE9EW. !jeti"o> Determinar la acti"idad de pero,idasa en 6rutas y "erduras y o!ser"ar el e6ecto del calor y el pE. @undamento =os pero,isomas son "es'culas simples limitadas por mem!ranas con un dimetro de /.1 a 1./ Tm ?ue contiene un centro denso y cristalino de en&imas o,idati"as. <on or-anelos con mFltiples 6unciones y contienen ms de */ en&imas ?ue participan en acti"idades tan di"ersas como la o,idaci#n de cidos -rasos de cadena muy lar-a y la s'ntesis de plasmal#-enos. En este sitio se produce per#,ido de 4idr#-eno por acci#n de "arias en&imas pero,is#micas como la ,idasa de :rato, o,idasas de aa. El E 2 2 -enerado se de-rada rpidamente mediante la en&ima catalasa, ?ue est presente en -randes concentraciones en estos or-anelos. =a acti"idad de esta en&ima e"ita la "eje& y la muerte celular prematura. Material 0morti-uador de 6os6atos */ mM pE 1./ ECl /.1M Na E /.1M 0-ua o,i-enada al 3/P 5encidina (/ mM E,tracto de man&ana o r!ano Procedimiento Colo?ue un poco de e,tracto de man&ana en un tu!o y p#n-alo en un !aAo mar'a a 1//C durante al menos 1/ minutos. Mientras tanto, numere cinco tu!os de ensaye y a-re-ue los reacti"os en el orden esta!lecido en la ta!la si-uiente> No. tu!o 1 2 3 ( * 0morti-uador de 1/ S S S S 6os6atos -otas E,tracto de S 1/ -otas S 1/ -otas 1/ -otas man&ana o r!ano E,tracto de S S 1/ -otas S S man&ana o r!ano 4er"idos ECl _ 1M S S S 3 -otas S Na E_ 1M S S S S 3 -otas E2 2 3/P * -otas * -otas * -otas * -otas * -otas 5encidina (/ * -otas * -otas * -otas * -otas * -otas mM

_Incu!e 3/ se-undo e inicie el re"elado de la acti"idad adicionando a todos los tu!os el E2 2 y ense-uida la 5encidina. 0-ite los tu!os y o!ser"e el color desarrollado en cada tu!o durante 1/ minutos. !ser"aciones

Conclusi#n>

Cuestionario

1. E,plica la reacci#n en&imtica del e,perimento y el desarrollo del color.

2. +En ?u$ or-anelo se encuentran las pero,idasas y cual es su 6unci#n. Menciona al-unos ejemplos.

3. +Cul es el papel de la catalasa.. Escri!e la reacci#n en&imtica ?ue reali&a.

P70C8IC0 No.) 58ENCIUN DE 0DN !jeti"o> !tener DN0 de pltano

=os cidos nucleicos se encuentran en todas la c$lulas "i"as y estn com!inados en casi todos los casos con ciertas prote'nas. ^u'micamente, los cidos nucleicos Gas' llamados por?ue dan una reacci#n cida al suspenderse en a-uaH, son enormes compuestos en 6orma de cintas de -ran lon-itud, con peso molecular de millonesY en estas cintas se repite Ga inter"alos re-ularesH la misma estructura aun?ue no id$ntica, representando los enlaces o unidades de la cadena. Cada uno de los cientos de unidades ?ue componen un cido nucleico se llama nucle#tido y esta constituido de un -rupo 6os6ato y una pentosa Ga&Fcar simple con * car!onosH a la cual se 6ija una estructura or-nica c'clica llamada !ase, perteneciente a los compuestos conocidos como purina y pirimidinas G !ases pFricas y prim'dicasH. :n cido nucleico simple puede lle"ar "arios o muc4os nucle#tidos y entonces reci!e el nom!re de polinucle#tidos. Esto podr'a compararse a las unidades de aminocidos ?ue constituyen la cadena pept'dica de una prote'na. =a 4idr#lisis de cidos nucleicos por cidos o por cierta en&ima ori-ina una me&cla de "arios nucle#tidosY tal como la 4idr#lisis de las prote'nas produce una me&cla de aminocidos. El a&Fcar y -rupo 6os6ato pueden considerarse como la columna "erte!ral de los cidos nucleicosY mientras las !ases pueden ser importantes rami6icaciones laterales. @unci#n !iol#-ica de los cidos nucleicos =a 6unci#n !iol#-ica de los cidos nucleicos, espec'6icamente el DN0 es la de contener la in6ormaci#n 4ereditaria. En 1%*3 `atson y CricD resol"ieron su estructura molecular, dando comien&o a una nue"a era en la !io?u'mica y la !iolo-'a. E,isten dos clases de cidos nucleicos en todo or-anismo "i"iente> ]cido ri!onucleico o 7N0 ]cido deso,irri!onucleico o DN0 Por otra parte los "irus contienen uno solo ya sea 7N0 o DN0. tras de las 6unciones !iol#-icas de los cidos nucleicos son las de almacenamiento, replicaci#n, recom!inaci#n, y transmisi#n de la in6ormaci#n -en$tica Gson las mol$culas ?ue determinan lo ?ue es y 4ace cada una de las c$lulas "i"asH. Material :n mortero :na pro!eta 8res "asos de precipitado

0-ua destilada Em!udo :n pltano. Etanol G%*PH Papel 6iltro Deter-ente Barilla de a-itaci#n. :n tu!o de ensayo <al de mesa Pipeta Pasteur 8erm#metro 0&ul de metileno Procedimiento Muele el pltano en el mortero con 3/m= de a-ua destilada 4asta ?ue ?uede una pasta 4omo-$nea. En un "aso de precipitado, a-re-a )/m= de a-ua destilada, 1/m= del deter-ente, a-'talo cuidadosamente con una "arilla por dos minutos sin 4acer espuma. 0l "aso de precipitado anterior, a-r$-ale 3/m= de la pasta del tejido, y lue-o re"uel"e con muc4o cuidado por 3 minutos. Coloca el "aso 1/ minutos en un !aAo a )/oC. Colocar el papel 6iltro en un em!udo, y 6iltra la me&cla Gpuede tardar "arios minutos. En un tu!o de ensayo a-re-a etanol 6rio G%*PH. 0 este tu!o con etanol a-re-a con la pipeta Pasteur, parte del 6iltrado del pltano, "ers un precipitado de apariencia y 6ilamentosa, este es el 0DN sFper enrollado del pltano. !ser"aciones

Conclusiones

Cuestionario 1. +Cules son los cidos nucleicos encontrados en las c$lulas.

2. +^u$ di6erencias estructurales y 6uncionales presentan entre ellos.

3. +^u$ importancia tiene el DN0 en la trasmisi#n de la in6ormaci#n -en$tica.

(. +C#mo se trasmite la in6ormaci#n -en$tica a partir de los cidos nucleicos.

P70C8IC0 1 MI8 <I< !jeti"o> !ser"ar c$lulas "e-etales en proceso de di"isi#n.

Introducci#n Mitosis es la di"isi#n nuclear ms la citocinesis, lo ?ue produce dos c$lulas 4ijas id$nticas. Este proceso se di"ide en "arias etapas consecuti"as> pro6ase, prometa6ase, meta6ase, ana6ase y telo6ase. =a inter6ase es el periodo ?ue 4ay entre una mitosis y otra. @recuentemente se incluye en discusiones so!re mitosis, aun?ue la inter6ase t$cnicamente no es parte de la mitosis, esta etapa incluye las 6ases cosecuti"as O1, < y O2 del ciclo celular. Interfase & mitosis. =a c$lula est ocupada en la acti"idad meta!#lica preparndose para la mitosis Glas pr#,imas cuatro 6ases ?ue conducen e incluyen la di"isi#n nuclearH. =os cromosomas no se disciernen claramente en el nFcleo, aun?ue una manc4a oscura llamada nucleolo, puede ser "isi!le. =a c$lula puede contener un par de centriolos Go centros de or-ani&aci#n de microtu!ulos en los "e-etalesH los cuales son sitios de or-ani&aci#n para los microtu!ulos. Profase. =a cromatina en el nFcleo comien&a a condensarse y se "uel"e "isi!le como cromosomas en el microscopio #ptico. El nFcleolo desaparece. =os centr'olos comien&an a mo"erse a polos opuestos de la c$lula y 6i!ras se e,tienden desde los centr#meros. 0l-unas 6i!ras cru&an la c$lula para 6ormar el 4uso mit#tico. Prometafase. =a mem!rana nuclear se disuel"e, marcando el comien&o de la prometa6ase. =as prote'nas de ad4ieren a los centr#meros creando los cinetocoros. =os microtF!ulos se ad4ieren a los cinetocoros y los cromosomas comien&an a mo"erse 4acia el plano central de la c$lula. Metafase. =as 6i!ras del 4uso alinean los cromosomas a lo lar-o de la parte media del 4uso acromtico. Esta l'nea es re6erida como, la placa de meta6ase. Esta or-ani&aci#n ayuda a ase-urar ?ue en la pr#,ima 6ase, cuando los cromosomas se separen, cada nue"o nFcleo reci!ir una copia de cada cromosoma. Anafase. =os pares de cromosomas se separan por la separaci#n del centr#mero, y son jalados mediante los cinetocoros 4acia lados opuestos de la c$lula. El mo"imiento es el resultado de una com!inaci#n de> el mo"imiento del cinetocoro a lo lar-o de los microtu!ulos del 4uso y la interacci#n 6'sica de los microtu!ulos polares. Telofase. =as cromtides lle-an a los polos opuestos de la c$lula, y se 6orman nue"as mem!ranas alrededor de los nFcleos 4ijos. =os cromosomas se dispersan y ya no son "isi!les !ajo el microscopio #ptico. =as 6i!ras del 4uso se dispersan, y la citocinesis o di"isi#n citoplsmica de la c$lula puede comen&ar tam!i$n durante esta etapa.

Citocinesis. En c$lulas animales, la citocinesis ocurre cuando se 6orma un anillo 6i!roso compuesto de una prote'na llamada act'na, alrededor del centro de la c$lula. Este se contrae di"idiendo la c$lula en dos c$lulas 4ijas, cada una con su nFcleo. En c$lulas "e-etales, la pared r'-ida re?uiere ?ue una placa celular sea sinteti&ada entre las dos c$lulas 4ijas. Material Ce!olla con ra'ces @rasco con a-ua Na"aja Baso de precipitados de */ m= Ootero Parrilla el$ctrica Portao!jetos Cu!reo!jetos Carm'n ac$tico Procedimiento !tenci#n de c$lulas de ce!olla en mitosis 1. Colocar la ce!olla so!re un 6rasco lleno de a-ua, de tal manera ?ue la parte in6erior del !ul!o o suela se manten-a en contacto permanente con el ni"el del 6rasco. 2. E"itar ?ue se se?ue, manteniendo el ni"el del a-ua. 3. 0 los 2 o 3 d'as, a temperatura am!iente, las ra'ces 4a!rn alcan&ado unos tres cm. de lon-itud. Ela!oraci#n de la preparaci#n microsc#pica 1. Cuando la ra'& 4a alcan&ado el tamaAo adecuado, cortar la parte ms 6ina y terminal Gmeristemo radicularH con una tijera de punta 6ina. El 6ra-mento cortado de!e tener una lon-itud de poco ms de medio cm. para 6acilitar su manipulaci#n 2. Colocar el tro&o de ra'& dentro de un "aso de precipitados de */ m= y cu!rir con unas -otas de carm'n ac$tico. 3. Calentar el "aso 4asta ?ue el colorante entra en e!ullici#n y mantener durante 1* se-undos. (. 8ranscurrido este tiempo retirar la ra'& con unas pin&as y colocar so!re el portao!jetos. *. Con un escalpelo cortar la e,tremidad de la ra'&, dejando s#lo un 6ra-mento de unos 3 o ( mm.

). Depositar encima de la punta de la ra'& un cu!reo!jetos y presionar con la e,tremidad plana de un lpi&. 1. 0 continuaci#n aAadir una -ota de carm'n ac$tico so!re el !orde del cu!re y presionar 4asta ?ue el colorante no impre-ne el tejido. !ser"aci#n de c$lulas mit#ticas 1. Poner la preparaci#n en el microscopio y o!ser"ar al principio con aumento moderado. <e "ern c$lulas dispersas por todo el campo de o!ser"aci#n. Eay ?ue distin-uir tres tipos de c$lulas> C$lulas de menor tamaAo, pero de -randes nFcleos teAidos de rosa. 8ienen citoplasma denso y estn dispuestas en 6ilas. <on las c$lulas meristemticas, con -ran acti"idad mit#tica. C$lulas ms -randes, alar-adas y con nFcleos ms pe?ueAos. Corresponden a c$lulas ya di6erenciadas. C$lulas o"oideas, de nFcleos pe?ueAos, pero ?ue se tiAen intensamente. <on las c$lulas de la co6ia. 2. Ele-ir la &ona de c$lulas meristemticas y o!ser"ar a mayor aumento. Con"iene esco-er una re-i#n en ?ue las c$lulas no se 4ayan teAido demasiado, y ?ue los nFcleos presentan los cromosomas de color rojoS"iolceo so!re 6ondo sin pi-mentar. 3. 7econocer c$lulas meristemticas en las distintas 6ases de la mitosis y reali&ar un di!ujo, indicando el aumento, de cada una de ellas. !ser"aciones>

Conclusiones>

Cuestionario> 1. E,plica de manera !re"e las 6ases del ciclo celular.

2. De6ine mitosis y e,plica cada una de sus etapas.

3. E,plica la di6erencia entre mitosis y meiosis.

P70C8IC0 No. 2 C7 M08IN0 <E3:0= 3 EN CE=:=0< EN CE=:=0< DE =0 M:C <0 5:C0= DE E:M0N !jeti"o> !ser"ar el corpFsculo de 5arr, correspondiente a la cromatina se,ual en c$lulas 4umanas. @undamento =a cromatina se,ual 0 se de6ine como un corpFsculo intranuclear, de 6orma planocon"e,a de /.1 a 1.2 Nm de dimetro. Est presente en la mayor'a de las c$lulas de mujeres normales. =a cromatina 3 corresponde a la condensaci#n de uno de los cromosomas 3 en la mujer. =as c$lulas ?ue contienen uno o ms -rnulos Gcromatinas 3H se dice ?ue son cromatina 3 positi"as y a?uellas ?ue no la tienen son cromatina ne-ati"as. =os corpFsculos de 5arr pueden ser teAidos con un -ran nFmero de colorantes nucleares como "ioleta de cresilo, tionina, 4emato,ilina, "erde de metilo y orce'na. Procedimiento Enjua-ue su !oca antes de iniciar la prctica. Con un a!atelen-uas realice un raspado de la mucosa oral. Colo?ue el raspado en un portao!jetos y realice un 6rotis. @ije $ste a la 6lama. 8iAa con acetoorce'na al /.*P durante * minutos. Des4idrate con soluciones de alco4ol primero al 1/, lue-o al %) y 6inalmente al 1//P, durante 3 minutos en cada una. !ser"e al microscopio. <i las c$lulas estn so!reteAidas, desteAir con alco4ol acidulado para o!tener el contraste adecuado. !ser"aciones

Cuestionario 1. +^u$ di6erencia 4ay entre el nucleolo y el corpFsculo de 5arr.

2. +^u$ si-ni6icar'a ?ue en las c$lulas de un indi"iduo 6enot'picamente masculino se encontrara un corpFsculo de 5arr.

3. +Con ?u$ estudio se podr'a corro!orar el resultado anterior.

(. Mencione dos s'ndromes en 4umano y si presentar'an corpFsculo de 5arr en las c$lulas de estos indi"iduos.

*. +0 ?u$ tipo de cromatina pertenece este corpFsculo.

5i!lio-ra6'a Qarp, O. 5iolo-'a Celular y Molecular. 2//2. McOraCSEill Interamericana. 0l!erts, 5., 5ray, D., =eCis, 9., 7a66, M., 7o!erts, Q., and `atson, 9.D. Molecular 5iolo-y o6 t4e Cell. 84ird Edition. Oarland Pu!lis4in-. Cooper, O.M. 84e Cell. 0 Molecular 0pproac4. 0<M Press, <inauer. =odis4, E., 5erD, 0., WipursDy, =.<., Matsudaira, P., 5altimore, D. and Darnell, 9.E. Molecular Cell 5iolo-y. @reeman and Company.