CULTIVOS BACTERIANOS 1.

COMPOSICIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Agua: los microorganismos requieren cierto grado de humedad por ello como todo ser vivo necesitan de este liquido para efectuar el intercambio de nutrientes, eliminar desechos, as como realizar sus reacciones metablicas, por ello es indispensable cierto grado de humedad ambiental Peptonas: constituyen una fuente de nitrgeno. De carbono y azufre. Gl !"os: fuente de energa y carbono. El mas utilizado es la glucosa, asi como la fructuosa, sacarosa y lactosa, almidn. E#t$a to "e a$ne: es un concentrado de productos hidrosolubles de la carne de composicin indefinida pero rico en xantina e hipoxantina, glucogeno, acido lactico, grasas, vitamina y oligoelementos. !uede ser" corazn, musculos, hgado bovino o cerebro. E#t$a to "e le%a"u$a: aporta nitrgeno y sustancias que son factores de crecimiento. Sue$o o sang$e "e a&allo o a$ne$o' %!ta(!nas: constituyen elementos importantes para las bacterias exigentes en factores nutritivos. Clo$u$o s)"! o: importante para equilibrar la presion osmotica del medio. Agentes sol!"!*! antes: se incorporan a los medios liquidos para preparar medios solidos. El agar es obtenido a partir de algas ro#as como $elidium corneum. Es insoluble en agua fria y soluble en agua caliente, funde entre %& y 1&& '( y se mantiene en este estado enfriando hasta )*'(. por deba#o de esa temperatura, solidifica dando lugar a a un gel muy transparente y resistenete a la hidrolisis bacteriana. Agentes sele t!%os:sustancias quimicas" colorantes como el cristal violeta, antimicrobianos sales biliares, telurio de potasio, etc. +gregados al medio para transformarlo en medio selectivo. S!ste(as a(o$t!gua"o$es: sales como fosfatos incosporados a los medios de cultivos para mantener un p, permitiendo convenciencia de los microorganismos en el mismo. In"! a"o$es "e p+: se incorporan a los medios de culttivo para dar prueba visual de las variaciones del p, se toma en cuenta que la mayoria de microorganismos se desarrollan me#or en medios con p, neutro hay algunos que requieren medios mas o menos acidos.

-. CLASI,ICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Segn su esta"o *-s! o L-.u!"os: permiten evaluar al tipo de crecimiento, que ser. caracterstico del microorganismo. /e puede en ellos estudiar las curvas de crecimiento bacteriano. Sol!"o: son los mismos medios lquidos a los que se a0ade una sustancia gelificante. como el agar en polvo que se disuelve por ebullicin y al enfriarse se convierte el medio liquido en solido, con una consistencia como la #alea. En el lugar donde se deposita una bacteria, su multiplicacin se traduce en la formacin de una masa, macroscpicamente visible denominada colonia, que es un clon procedente de una misma bacteria. Se(!s)l!"o: contienen peque0as cantidades de agar se pueden emplear para estudiar diferentes comportamientos de la bacteria, tales como su movilidad, o para realizar determinadas pruebas bioqumicas.

Segn su Co(pos! !)n De*!n!"o: se conoce su composicin exacta, se utiliza cuando ya se conocen los microorganismos que se van a cultivar. Co(ple/o: no se conoce su composicin, pueden tener sangre, leche, extracto de levadura o carne1 se utiliza cuando no se conocen a los microorganismos o no se conocen sus requerimientos nutricionales. M-n!(o: es un medio definido que proporciona solo los nutrientes necesarios. Segn su ut!l!"a" 0 sele !)n No sele t!%os en$!.ue !"os: permiten el crecimiento de la mayor parte de g2rmenes que no necesitan unas condiciones exigentes. E#m" +gar sangre, chocolate, 3ueller4,inton, 5ioglicolato. Espe !al!1a"os: para detectar g2rmenes especficos, que pueden ser exigentes o que se presentan mezclados con muchos otros

 Usuales o &2s! os: contienen las sustancias nutritivas mnimas para el crecimiento de las bacterias metablicamente no exigentes, pero tambi2n son utilizados como base para preparar otros medios como los enriquecidos, selectivos, etc. En$!.ue !"os: adem.s del componente b.sico, contienen sustancias imprescindibles para el desarrollo de microorganismos en requerimientos nutritivos que no crecen en medios usuales. D!*e$en !ales: incorporan elementos que facilitan la diferenciacin de las colonias generalmente por variaciones de color de las colonias, consecuencia de la manifestacin de algunas propiedades bioqumicas de estos microorganismos. +s por e#emplo, el agar4sangre diferencia a las bacterias que producen hemolisis de las que no la producen, y el agar 3ac (on6ey, que en composicin incorporan lactosa y un indicador de p, que es ro#o neutro, detecta las bacterias que fermentan ese az7car. Sele t!%os: se usa cuando en una mezcla bacteriana interesa aislar especficamente un solo tipo de bacteria que esta en escasa cantidad, este medio permite el crecimiento de esa bacteria e inhibe el crecimiento del resto de bacterias existentes en la muestra, usualmente son solidos y contienen sustancias inhibidoras. De onse$%a !)n: sirven para mantener viables a los microrganismos que en ellos se colocan durante mucho tiempo en condiciones de ba#a temperatura1 suelen llevar leche o glicerol, entre otros componentes. /in embargo, la me#or forma de conservar los microrganismos es recurriendo a la liofilizacin. De !"ent!*! a !)n: se utiliza para detectar diferentes productos catablicos microbianos. De a!sla(!ento: deben ser nutricionalmente adecuados para bacterias que se desea aislar, usuales para bacterias no exigentes y enriquecidos para las exigentes. Segn la apa !"a" "e ut!l!1a !)n "e O#!geno Ae$o&!os: 8a mayora de los medios de cultivo permiten que las bacterias usen oxigeno atmosf2rico. El medio de transporte para estudio de bacterias aerobias es el /tuart o +mies, que esta constituido por agar, un buffer y agua. El oxigeno disminuye en funcin del crecimiento de los microorganismos, para evitar la disminucin se utiliza dos recursos" 4 +gitacin 4 +dicin de aire u 9- est2ril mediante burbu#eo. Anae$o&!os: !ermiten el crecimiento de bacterias anaerobias estrictas o de otras que lo utilizan en menor proporcin, uno de los medios mas usados es el 5ioglicolato de /odio que contiene sustancias reductoras.

:. COMPOSICIN DEL AGAR SANGRE' AGAR C+OCOLATE 3 TIOGLICOLATO Aga$ sang$e 8os laboratorios utilizan muchos tipos de cultivo de agar sangre, estos medios contienen dos componentes fundamentales" 1; <n medio basal -; /angre /e pueden a0adir vaios suplementos mas para ampliar el numero de g2rmenes que se pueden cultivar en estos medios de cultivo 5iene como ob#etivo la recuperacion de bacterias y hongos. Aga$ 4o olate Es un agara modificado. /uando se a0ade sangre o hemoglobina al me dio de base calentando, se vuelve marron. Este medio permite el crecimiento de la mayor parte de las bacterias, inlcuyendo algunas qye no crecen en agar sangre. 5iene como ob#etivo recuperacion de bacterias, incluidas ,aemophilus y =eisseria gonorrhoeae Me"!o "e t!ogl! olato

Es un medio de cultivo de enriquecimiento empleado para recuperar cantidades peque0as de bacterias aerobias y anaerobias. /e emplean diversos compuestos, la mayor parte incluyen la casena, glucosa, extracto de levadura, cistena y tioglicolato sdico. El suplemento de hemina y vitamina > me#ora la recuperacin de las bacterias anaerobias. 3edio de enriquecimiento para las bacterias anaerobias.

). CARACTER5STICAS MOR,OLGICAS DE LAS COLONIAS BACTERIANAS 8a morfologa de las colonias es una de las caractersticas b.sicas de las bacterias y es indispensable su estudio para comenzar correctamente una identificacin preliminar. 8as caractersticas morfolgicas m.s importantes de una colonia bacteriana aislada sobre un medio de cultivo slido son" Ta(a6o 8a mayora de las bacterias de una misma especie presentan colonia de un mismo tama0o y esto nos permite hacer una posible identificacin preliminar. Esto esta relacionando con el medio de cultivo en el que se ha desarrollado. !or e#emplo en +gar sangre, las colonias de Estreptococo, son relativamente peque0as y pueden medir de 1 a - mm de diametro, la >leisiella mide - a ) mm /in embargo el tama0o de las colonias puede variar en funcion de" El medio de cultivo solido donde se realiza la siembra El tipo de microorganismos que esta conformando la colonia por e#emplo si es un microorganisos con la capacidad de moverse formara colonias extendidad y planas no asi los microorgaanismos que no presentan esta caracteristica El tama0o de las colonias bacterianas podemos expresarlo en las siguientes categoras" 4 !eque0as o puntiformes" 1 mm de di.metro o menor 4 3edianas" hasta ) mm de di.metro

4 $randes" mayores de ) mm de di.metro El tama0o de las colonias debe ser considerado y medido en la parte final de la zona de aislamiento, que es donde presentan su m.ximo tama0o. =o deben valorarse m.s que colonias bien aisladas.

,o$(a Depende de algunos elementos b.sicos como" el orde !erif2rico, la elevacion que hace que la colonia bacteriana adquiera diversas formas

Segn las espe !es:

?ED9=D+ A@8+3E=59/+

@??E$<8+?

?@B9@DE @??E$<8+?

(@?(<8+?

A</@A9?3E

!<=5@A9?3E

Segn la ele%a !)n: !8+=+ <3 @8@(+D+ (9=CED+

+(<3@=+D+ !+!@8+D+

!8+=94(9=CED+

Segn el (a$gen 7&o$"e "e la olon!a8: E=5E?9 A@8+3E=59/9 9=D<8+D9

?@B9@DE

89 <8+D9

E/!@(<8+D9

Supe$*! !e

!uede variar" puede ser brillante, opaca, de aspecto esmerilado, si forma o no crculos conc2ntricos, lisa, ?ugosa, filamentosa, mucosa, seca, papilada, umbilicada. etc. Euiz.s el car.cter diferencial mas importante estribe en la separacin de las colonias lisas y rugosas. 8as primeras traducen la presencia de capsula u otros componentes superficiales. Eue le dan el aspecto compacto. /uele relacionarse con la virulencia, que se pierde cuando la bacteria sufre la variacin /4? Flisarugosa;. Dens!"a" o g$oso$ 8as colonias bacterianas pueden presentarse totalmente planas o palastadas o pueden ser elevadas a su vez presentarse en las diversas formas ya indicadas. Cons!sten !a o te#tu$a "e la (asa "e las olon!as 8as colonias pueden ser duras, viscosas, mucosas, secas, friable, cremosas, filamentosas, etc. !or la consistencia, las colonias pueden presentar tambi2n un aspecto butiroso o grasoso f.cilmente arrastrables por el asa de siembra, o puede ser fibrosa. T$anspa$en !a 0 olo$a !)n En general es frecuente alg7n t!po "e olo$ en las colonias1 esto puede ser debido a la elaboracin de alg7n tipo de pigmento, a la formacin de alguna sustancia por parte de la bacteria o la utilizacin de alg7n sustrato del medio que acidifique o basifique a este deforma que ante la presencia de indicadores de p, que est.n en el medio, cambia de color, hecho que nos ayuda a conocer a utilizacin de ese sustrato por parte de la bacteria. 8a t$anspa$en !a puede ser completa en cuyo caso se habla de colonias translucidas, semitransparentes y opacas dependiendo del tipo bacteriano y del medio de cultivo utilizado. Olo$ (iertos tipos de bacterias descomponen los sustratos que utilizan para su metabolismo desprendiendo sustancias vol.tiles que proporcionan un olor caracterstico a los cultivos puros de dichas bacterias. (omo intentar definir un olor es tan difcil solo la pr.ctica diaria permitir. un reconocimiento adecuado de esta caracterstica. !uesto que estas caractersticas aparecen en grados y combinaciones variables de unas bacterias a otras, el aspecto de las colonias es a menudo bastante caracterstico, permitiendo distinguir distintas clases de bacterias en cultivos mixtos o contaminados. Rea !)n "e +e(ol!s!s +lgunas bacterias, fundamentalmente los cocos, pueden ser capaces de hemolizar los hemates de un medio nutritivo slido como el agar sangre.

Esto es debido a la liberacin de unas sustancias denominadas hemolisinas. 8a hemlisis de los hemates adyacentes a la colonia puede ser" Rea !)n al*a +claracin parcial alrededor de las colonias caf2 verdosa. Debido a una destruccin parcial de los glbulos ro#os del agar sangre. Rea !)n &eta +parece un halo transparente en torno a las colonias debido a la lisis total de glbulos ro#os del agar sangre. Ga((a 4e(ol!s!s =o hay cambio en el medio alrededor de la colonia Fno hay lisis;.

9tros caracteres. !or ultimo no es infrecuente que la presencia de diferentes sustancias en el medio de cultivo influya en el aspecto de las colonias. !recisamente. en el analisis de estas variaciones se basan los cultivos diferenciales. 9: Ba te$!olog!a gene$al +si, en los medios con sangre, puede aparecer un halo claro en torno a la colonia por la acciGn de hemolisinas, 1& que constituye un caracter taxonGmico importante. En los medios con azucares, a los que incorpora un indicador, la fermentaciGn de aquellos altera el p, del medio y cambia la coloraciGn del indicador, modificando el de la colonia y su entorno. Este caracter permite que se produzca el aislamiento de una determinada especie que pueda hallarse en cultivo mixto. En el caso de bacterfas anaerobias, la siembra se hace en profundidad sobre medios repartidos en tubos largos y las colonias presentan aspectos muy variables Fpuntiformes. lenticulares, bi & trilobuladas. algodonosas, estrelladas. arborescentes. etc.;. *e puede, ademas, detectar la producciGn de gas por la fragmentaciGn de la masa sGlida contenida en el tubo. +lgunos de estos aspectos morfolGgicos de las colonias bacterianas se representan esquematicamente en la figuraG

B!&l!og$a*-a Dra. lanca ?eal 8pez, 8aboratorio de 3icrobiologa, Euito4Ecuador, edicin -&11, !ag"-&,-1 8@E +=+ Hos2, 3icrobiologa 9ral, primera edicin, Editorial @nteramericana de Espa0a, 1II*. !.g." :I)4:II =E$?9=@ 3arta, 3icrobiologa Estomatolgica Aundamentos y $ua !ractica, segunda edicin Editorial Elseiver, arcelona4Espa0a &&J, !.g." -J-4-J*, -I:4-IJ 4ttp:;;egg<u(4<es;*$%ale$a;(anualDeP$a t! as<p"* 4ttp:;;===<sl!"es4a$e<net;guest>e?@&Ae@;(e"!osB"eB ult!%o