Prctica nmero 2

PROPIEDADES DE LOS AMINOCIDOS Y LAS PROTEINAS

Dylan Xavier Mendieta Bentez. 3er Semestre

Bioqumica

PROPIEDADES DE LOS AMINOCIDOS Y LAS PROTEINAS

Las protenas son compuestos a base de carbono, hidrgeno, oxgeno, nitrgeno y generalmente azufre y fsforo; Todas las enzimas, algunas hormonas y muchos componentes estructurales importantes de la clula son protenas. Las protenas son macromolculas que presentan pesos moleculares entre 5000 y muchos millones de Dalton. Todas las protenas estn compuestas por componentes ms simples llamados aminocidos unidos mediante enlace peptdico. En base a su composicin cada una de estas molculas muestran variaciones en sus propiedades biolgicas, fsicas y qumicas debido a la secuencia especfica de aminocidos, que se conoce como

estructura primaria. La protena refleja las propiedades de los aminocidos que la componen, y por lo tanto muestra propiedades caractersticas. En la naturaleza existen 200 tipos de aminocidos, de los cuales slo 21 forman parte de las protenas en general. Las plantas pueden sintetizar todos los aminocidos a partir de sustancias simples, los aminocidos que los animales no pueden sintetizar y que deben obtener en su alimentacin se llaman aminocidos esenciales, se consideran como esenciales 10 aminocidos: Fenilalanina, Triptfano, Lisina, Valina, Treonina, Metionina, Leucina, Isoleucina, Arginina e Histidina: estos dos ltimos son esenciales durante la infancia. Existen varios mtodos para la identificacin y cuantificacin de las protenas, pero la mayora tiene como principio alguna reaccin qumica caracterstica de los grupos R de los diferentes aminocidos. Los aminocidos son compuestos slidos; incoloros; cristalizables; de elevado punto de fusin (habitualmente por encima de los 200 C); solubles en agua; con actividad ptica y con un comportamiento anftero. La actividad ptica se manifiesta por la capacidad de desviar el plano de luz polarizada que atraviesa una disolucin de aminocidos, y es debida a la asimetra del carbono , ya que se halla unido (excepto en la glicina) a cuatro radicales diferentes. Esta propiedad hace clasificar a los aminocidos en Dextrogiros (+) si desvian el plano de luz polarizada hacia la derecha, y Levgiros (-) si lo desvian hacia la izquierda.
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El comportamiento anftero se refiere a que, en disolucin acuosa, los aminocidos son capaces de ionizarse, dependiendo del pH, como un cido (cuando el pH es bsico), como una base (cuando el pH es cido) o como un cido y una base a la vez (cuando el pH es neutro). En este ltimo caso adoptan un estado dipolar inico conocido como zwitterin.

Fig. 1. Proceso de un aminocido.

El pH en el cual un aminocido tiende a adoptar una forma dipolar neutra (igual nmero de cargas positivas que negativas) se denomina Punto Isoelctrico. Protenas. Dentro de las protenas podemos decir que son constituyentes qumicos fundamentales e imprescindibles en la materia viva porque: a) son los "instrumentos moleculares" mediante los cuales se expresa la informacin gentica; es decir, las protenas ejecutan las rdenes dictadas por los cidos nucleicos. b) son sustancias "plsticas" para los seres vivos, es decir, materiales de construccin y reparacin de sus propias estructuras celulares. Slo excepcionalmente sirven como fuente de energa. c) muchas tienen "actividad biolgica" (transporte, regulacin, defensa, reserva, etc...). Esta caracterstica diferencia a las protenas de otros principios inmediatos como glcidos y lpidos que se encuentran en las clulas como simples sustancias inertes.

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Fig.2. Diagrama funciones enzimticas y el ADN.

OBJETIVOS GENERALES DE LA PRCTICA: Realizar algunas reacciones coloridas especficas para la identificacin de aminocidos que constituyen a una protena. Comprender la importancia de estas reacciones para distinguir protenas. Observar el efecto de algunos agentes fisicoqumicos sobre la solubilidad de las protenas

MATERIAL:

1 Gradilla 24 Tubos de ensayo Pipetas de 1, 5 y 10 mL 3 Vasos de precipitados de 100 mL. 1 Bao Mara a ebullicin 1 Pinzas para tubo 1 Agitador de vidrio

SOLUCIONES Y REACTIVOS:

SOLUCIONES PORCENTUALES:
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Ninhidrina al 1 % en etanol al 96 % Acetato de plomo al 5 % Cloruro de bario al 5 % Cloruro de sodio al 5% Cloruro mercrico al 5 % Hidrxido de sodio al 10 % Hidroxido de sodio al 10 % Nitrito de sodio 30 % Nitrato de plata al 2 % Acido sulfanilico 0.5 %

Soluciones de aminocidos y protenas Gelatina al 5 % Peptona al 5 % Albmina al 5 % Tirosina al 1 % Triptofano al 1 % Fenilalanina al 1% Cisteina al 1 % Arginina al 1 %

Clara de huevo fresca y filtrada dil(1:4) SOLUCIONES NORMALES: cido clorhdrico 0.1 N Hidrxido de sodio 0.1 N Regulador de acetatos 0.1 M pH 4.7 Reactivo de Biuret Reactivo de Elrich Reactivo de Millon Reactivo de Hopkins Cole Reactivos: cido actico glacial. cido ntrico concentrado Hidrxido de amonio concentrado xido rojo de mercurio Nitrito de sodio
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Magnesio en polvo o granallas. TCNICAS DE IDENTIFICACIN DE PROTENAS Y AMINOCIDOS: Algunas de las reacciones de identificacin cualitativa para protenas son: REACCIN DE LA NINHIDRINA: La ninhidrina (triceto hidrinina) reacciona con los grupos amino libres, con lo cual hay una descarboxilacin, dando lugar a un compuesto prpura violeta o azul, CO2, agua y el aldehdo correspondiente. cido oxlico saturado

Fig.3. Reaccin con ninhidrina.

Es una reaccin general para compuestos con grupos amino, descubierta por Ruhemman, por lo que se usa comnmente para determinar la presencia de aminocidos y protenas. Es una reaccin con alta sensibilidad detecta una parte de alanina en 500,00 partes de agua. La prolina y la hidroxiprolina dan productos amarillos con la ninhidrina. La ninhidrina es un poderoso agente reactivo comn para visualizar las bandas de separacin de aminocidos por cromatografa o electroforesis, tambin es utilizada con fines cuantitativos para la determinacin de aminocidos reacciona con todos los aminocidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una coloracin que vara de azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado prpura de Ruhemann) se estabiliza por resonancia, la coloracin producida por la ninhidrina es independiente de la coloracin original del aminocido.
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Esta prueba es positiva tanto para protenas como para aminocidos. en aquellos casos donde no da positiva la prueba de biuret y da positiva la de ninhidrina, indica que no hay proteinas, pero si hay aminoacidos libres.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

A 1 mL de la solucin problema se le adicionan 5 gotas de la solucin de ninhidrina en etanol

El cambio de color a azul o violeta se debe a la presencia de grupos amino libres

Si es necesario calentar en bao Mara 1 o 2 minutos.

Discusin de resultados: Esta reaccin tuvo gran inters ya que dio lugar a una reaccin coloreada de los aminocidos ,ampliamente utilizada para la identificin y sobre todo para su

dedterminacin cuantitativa. La ninhidrina descarboxila y desamina el aminocido gracias a su fuerte poder oxidante.La ninhidrina reducida formada reaccin con una molecula de ninhidrina no reducida y con el amoniaco resultante de la desaminacin para formar un complejo que present coloracin violeta. De esta forma se puedo determinar

cuantitativamente los aminocidos por espectrofotometra por ejemplo, gracias al dixido de carbono que se formara. REACCIN DE MILLON El reactivo de Millon contiene una mezcla de nitritos y nitratos mercricos en cido ntrico concentrado. Debido a la presencia del grupo fenlico se produce un compuesto de color rojo. El reactivo de Millon se prepara disolviendo una parte de mercurio (Hg) en una parte de cido ntrico (HNO3). De esta forma, la presencia de cantidades relativamente altas de mercurio conduce a la formacin de Nitrato de mercurio (I) Hg2(NO3)2 el cual en un medio fuertemente cido reacciona con el grupo -OH de la tirosina produciendo una coloracin roja caracterstica.

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Al finalizar la reaccin, durante la cual se desprende gran cantidad de xidos de nitrgeno, el reactivo se puede diluir con dos veces su volumen en agua y deber ser decantada algunas horas despus la solucin clara sobrenadante..

Fig.4. Reaccin de Millon.

PROCEDIMIENTO:

Se calienta en bao Maria a

A 1 mL de las soluciones

ebullicin.

La aparicin de un color rojo ser una prueba positiva.

problemasREACCIN se les adiciona de 2a 5 XANTOPROTEICA gotas del reactivo de Millon

Salkowsky descubri que los aminocidos con anillo aromtico pueden nitrarse con HNO3 concentrado, dando como resultado un compuesto amarillo que en solucin

alcalina se vuelve anaranjado. Triptfano

y Tirosina reaccionan rpidamente, pero

Fenilalanina lo hace ms lento, por lo que es necesario adicionar H 2SO4 concentrado para activar el anillo.

Fig.5. Reaccin Xantoproteica.

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Cuando se trata una disolucin proteica en medio cido (ntrico concentrado) y a elevada temperatura se forman compuestos nitrofenlicos, que son de color amarillo. Esta reaccin es positiva para aminocidos aromticos activados como protenas en solucin, aunque es ms sensible cuando se encuentran perfectamente secas. Esta reaccin depende de la nitracin de los anillos bencnicos activados. La prueba resulta negativa para protenas que no contengan aminocidos aromticos activados, pero todas las protenas tienen todos los aminocidos, por tanto darn positiva a esta reaccin, formndose ms colorantes.
PROCEDIMIENTO:

A 1 mL de la solucin problema se le adiciona 1 mL de cido ntrico concentrado, calentar la mezcla y enfriar

Adicionar por estratificacin

La aparicin de un color

1 ml de Hidrxido de amonio
concentrado.

amarillo o naranja en la
interfase ser prueba positiva.

La reaccin XANTROPROTEICA es un mtodo que se puede utilizar para determinar la cantidad de protena soluble en una solucin. El espectrofotmetro se puede entonces utilizar para medir la intensidad del color que se produjo. Este test especfico es para reconocer enlaces peptdicos, por lo tanto requiere de la presencia de al menos en tetrapptido para que de positivo. Los reactivos utilizados son NaOH y SO4Cu.5H2O. Opera a travs del ion Cu2+ el que en reaccin alcalina interacciona con los iones de N-3 de los grupos amino formando un complejo color violeta. Cada tomo de Cu2+ reacciona con dos tomos de N y establece una resonancia de electrones con otros dos N formando un complejo color violeta y es as como podemos catabolizar una reaccin anastrfica de la mayor enzima llamada octatriona.

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Se obtuvo bajo forma cristalina, una sustancia extrada de las paratiroides de la vaca que tiene los siguientes caracteres: polipptido compuesto de muchos aminocidos, todava no determinados, y probablemente unidos a una protena; da las reacciones de las protenas por investigacin qumica (reaccin xantroproteica); contiene trazas de fierro y azufre; su pH es de 4.8; insoluble en las grasas y en el ter, algo soluble en el alcohol y muy soluble en el agua acidulada; es destruida por los fermentos digestivos y por esta causa no se administra por la va digestivo. Al aadir NaOH, los nitrgenos se unen mediante un enlace doble (-N=N-) formando colorantes azoicos (de color naranja). La reaccin xantoproteica es un mtodo que se puede utilizar para determinar la presencia de protenas solubles en una solucin, empleando cido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de gruposaromticos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali, se torna color amarillo oscuro. La reaccin xantoproteica se puede considerar como una sustitucin electroflica aromtica de los residuos de tirosina de las protenas por el cido ntrico dando un compuesto coloreado amarillo a pH cido. Segn las guas qumicas es una reaccin cualitativa, mas no cuantitativa. Por ende determina la presencia o no de protenas. Para cuantificar se usa otra reaccin, como la deBiuret, y se hace un anlisis espectro fotomtrico. La reaccin XANTROPROTEICA es un mtodo que se puede utilizar para determinar la cantidad de protena soluble en una solucin. El espectrofotmetro se puede entonces utilizar para medir la intensidad del color que se produjo. Este test especfico es para reconocer enlaces peptdicos, por lo tanto requiere de la presencia de al menos en tetrapptido para que de positivo. Los reactivos utilizados son NaOH y SO4Cu.5H2O. Opera a travs del ion Cu2+ el que en reaccin alcalina interacciona con los iones de N-3 de los grupos amino formando un complejo color violeta. Cada tomo de Cu2+ reacciona con dos tomos de N y establece una resonancia de electrones con otros dos N formando un complejo color violeta y es as como podemos catabolizar una reaccin anastrfica de la mayor enzima llamada octatriona.

Se obtuvo bajo forma cristalina, una sustancia extrada de las paratiroides de la vaca que tiene los siguientes caracteres: polipptido compuesto de muchos aminocidos, todava
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no determinados, y probablemente unidos a una protena; da las reacciones de las protenas por investigacin qumica (reaccin xantroproteica); contiene trazas de fierro y azufre; su pH es de 4.8; insoluble en las grasas y en el ter, algo soluble en el alcohol y muy soluble en el agua acidulada; es destruida por los fermentos digestivos y por esta causa no se administra por la va digestiva.

Reaccin de Biuret (Reaccin de Piotrowsky) El biuret se forma calentando la urea aproximadamente a 180C

Fig.6. Transporte de Urea a Biuret.

Esta es una prueba general para protenas y pptidos de cadena no menores a 3 aminocidos, esta reaccin es til para seguir un proceso de hidrlisis protenica, ya que la reaccin ser negativa cuando la hidrlisis sea completa. En soluciones fuertemente alcalinas, el sulfato de cobre puede formar un complejo del in cobre en enlaces covalentes coordinados con los grupos amino de las protenas formando un complejo de color violeta. Para formar el complejo se requieren al menos 2 grupos amino unidos mediante un enlace pptdico, por lo que la reaccin slo es positiva para pptidos o protenas y no para aminocidos solos. Los dipptidos y los aminocidos (excepto histidina, serina y treonina) no dan esta reaccin. El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de protenas, pptidos cortos y otros compuestos con dos o ms enlaces peptdicos en sustancias de composicin desconocida. Est hecho de hidrxido potsico (KOH) y sulfato cprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4H4O64H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de protenas, y vira a rosa cuando se combina con polipptidos de cadena corta. El hidrxido de potasio no participa en la reaccin, pero proporciona el medio alcalinonecesario para que tenga lugar. Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un mtodo colorimtrico que permite determinar la concentracin de protenas de una muestra mediante espectroscopia ultravioleta-visible a una
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longitud de onda de 540 nm (para detectar el ion Cu2+).

Fig. 7. Ensayo de biruet. A 1 mL de cada solucin problema, aadirle 2 mL de NaOH al 10 % y de 3 a 5 gotas del reactivo de biuret, mezclar
La formacin de un color violceo o la precipitacin de hidrxido cprico ser una prueba positiva.

Si el color de la reaccin no es inmediatamente, dejar

reposar de 10 a 15 minutos.

MTODO DE LOWRY

(NO SE REALIZAR EN LA PRCTICA)

El mtodo de Lowry se basa en la reaccin de las protenas con el reactivo de Folin-Ciocalteau dando un complejo coloreado. Este reactivo es una disolucin de

tungstato sdico y molibdato sdico en cido fosfrico y cido clorhdrico. El principal constituyente del reactivo es el cido fosfomolibdotngstico, de color amarillo, que al ser reducido por los grupos fenlicos da lugar a un complejo de color azul intenso, cuya estructura se desconoce. Esta reaccin es 100 veces ms sensible que la determinacin por el mtodo de Biuret en la cuantificacin de protenas. La intensidad del color depende de la cantidad presente en las protenas de estos aminocidos aromticos y ser proporcional a la concentracin de protenas en la disolucin. La concentracin de una disolucin problema puede calcularse interpolando el valor obtenido de absorbancia en una recta de calibracin trazada con valores conocidos de concentracin de una protena y sus respectivas absorbancias a 750 nm ajustando el aparato a cero con el blanco. Es un mtodo muy usado para la cuantificacin de protenas. El mecanismo del proceso es el siguiente:

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2+

1) El Cu , en medio alcalino, forma un complejo con los enlaces peptdicos de las protenas. Los iones Cu2+, se unen a las protenas formando complejos con los tomos de nitrgeno de los enlaces peptdicos, estos complejos Cu2+-protena tienen un color azul claro, provocan el desdoblamiento de la estructura tridimensional de la protena, exponiendo los residuos fenlicos. 2) Los grupos R de los residuos de tirosina y triptfano de las protenas, se lleva a cabo la reduccin del reactivo de Folin-Ciocalteau, por los grupos fenlicos de los residuos de tirosina presentes en la mayora de las protenas, actuando el cobre como catalizador; inicialmente es un producto inestable, que se reduce para formar un compuesto coloreado. es un mtodo colorimtrico de valoracin cuantitativa de las protenas. Bajo condiciones alcalinas el Cu++ forma un complejo con los enlaces peptdicos de las protenas y se reduce a Cu+. El Cu+ as como los grupos R de Tirosina, Triptofano y Cisteina reaccionan con el reactivo de Folin. Este reactivo reacciona primero produciendo un producto inestable que se reduce lentamente a azul de molibdeno/tungsteno esta reaccin ocurre en medio cido. Comentarios: aquellos agentes que acidifican las soluciones (por ejemplo: cidos fuertes o buffers), los quelantes de Cu (por ej. EDTA) o los reductores de Cu (por ej.: mercaptoetanol, ditiotreitol, fenoles) sern interferentes de la reaccin. Las protenas producirn distintas intensidades de color dependiendo primariamente de su contenido de Tyr y Trp.

Fig.. 8 .Reaccin de biuret.

REACTIVOS

Lowry A: Na2CO3 al 2.0 % en NaOH 0.1N

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Lowry B: CuSO4 al 2 %. Lowry C: Tartrato Sodio-potasio ( KNaC4H4O6) al 2% Reactivo de Folin-Ciocalteus: tungstato Na y molibdato sdico en PO4H3 y ClH

Se debe de preparar la solucin D al momento, en la siguiente proporcin: 30 ml Lowry A, 0.3 ml Lowry B y 0.3 ml Lowry C.
Aadir a todos los tubos 200 l de reactivo de Folin diluido en agua destilada 1/1 (vol/vol). Mezclar y esperar 30 min a temperatura ambiente.

1)

Se aaden 400 l de solucin problema

Mezclar y esperar 15 min a temperatura ambiente.

diluida (1:100).

Medir la absorbancia a 750 nm ajustando el aparato a cero con un blaco de reactivos Reaccin de Ehrlich

El cido sulfianlico diazotizado se condensa con el anillo fenlico de la tirosina e imidazol, histidina para dar complejos coloridos de color rojo cereza, y que permite detectar compuestos formados que se conocen como azo-compuestos.

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PROCEDIMIENTO:

A tubos de ensayo rotulados como: blanco y problemas. Agregue a cada tubo en el siguiente orden:

1 mL. de Nitrito de sodio, mezcle bien y deje en reposo durante 15 min. 1 mL de cido sulfanilico 0.5%

Observe. Posteriormente adicione 0.5 mL. de de NH4OH al 10%. Observe y anote los resultados.

Reaccin de Hopkins-Cole. Implica la reaccin del grupo indol del triptofano con el cido glioxlico y las protenas que lo contienen, en presencia de cido sulfrico concentrado. La positividad se reconoce por la aparicin de un anillo color violeta-rojizo. El color prpura que se produce se debe a la condensacin del anillo indol con el aldehdo. Se propone la siguiente reaccin:
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. Fig..9. Reaccin de Hopkins-Cole..

Reaccin para azufre de cistena y cistina.

La cistena y la cistina cuando se tratan en un medio de lcalis fuerte pueden formar H2S que se detecta al hacerlo reaccionar con Pb formando un precipitado negro de PbS. Este es uno de los R de las cadenas de protenas ms importantes de determinar, pues protenas ms importantes de determinar, pues el SH cumple un papel determinante en conformacin de las protenas y en su actividad biolgica. RESULTADOS Y ANLISIS DE RESULTADOS
Parte I
REACCIN CON SOLUCINES LA NINHIDRINA (A.A. libres) REACCIN DE MILLON REACCIN REACCIN XANTOPROTEI CA REACCIN DE BIURET DE EHRILCH REACCIN DE HOPKINS COLE.

GELATINA

No cambio No tiene

Rosa Positivo

Amarillo traslcido Positivo

Violeta Positivo

Naranja /transpare nte negativo

PEPTONA

Violeta Si tiene

Naranja Positivo

Amarillo traslcido Positivo

Violeta Positivo

Naranja negativo

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ALBUMINA

Violeta Si tiene

Una blanca

parte Amarillo y Positivo

Violeta Positivo

Naranjita clara/ negativa

otra roja Positivo

TIROSINA

Amarilla No tiene

Blanco Negativo No cambio Negativo Rojo Positivo

No cambio Negativo No cambio Negativo Amarillo Positivo

Incoloro Negativo Azul Negativo Azul Negativo pareja

Amarilla postivo

FENILALANINA

Violeta Si tiene

Naranja/n egativo No cambio/ negativo Rojo/Posi tivo

CISTEINA

No cambio No tiene

ARGININA

No cambio No tiene

No cambio Negativo No cambio Negativo

No cambio Negativo No cambio Negativo

Azul Negativo Azul Negativo

AGUA

No cambio No tiene

*Tabla 1

EFECTO POR SOLVENTES La mayora de las protenas presentan un mnimo de solubilidad a un pH conocido como punto isoelctrico (pI), que es el valor del pH en el cual la carga neta de la protena es cero y no migra en un campo elctrico, adems la protena presenta su mxima viscosidad. La accin de algunos solventes orgnicos como etanol (alcoholes), acetona (cetonas) y teres en una solucin acuosa de protena incrementan su tendencia a precipitar, ya que disminuyen la constante dielctrica del agua, desfavoreciendo la
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interaccin agua-protena y favoreciendo la interaccin protena--protena, ocurriendo su precipitacin.

TUBO N Clara de huevo Vol.

1 3 ---1 ---

2 3 ----1

3 3 -------

(mL) (mL) (mL) (mL) (mL)

filtrada dil (1:4) SOLVENTE: HCl 0.1 M (mL) NaOH 0.1 M (mL) REGULADOR DE ACETATOS 0.1 M pH 4.7 ( mL) DESCRIPCIN DEL EXPERIMENTO:

--(mL)

---

Se formaron burbujas en la parte superior, es decir una emulsin

Tambien se formaron burbujas pero menos que en la primera

Toda la substancia se opaco

ETANOL al 96% (mL) Observacin:

(mL)

Se formaron dos fases, la de la parte superior, organica, opaca y la inferior que es transparente

Se forman dos fase, que no son muy visibles porque una es turbulenta y la otra no, se le

Se formaron dos fases una blanca con grumos (protenas) y la otra medio amarillenta

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Bioqumica agrego fenoftaleina para distinguirlas y la organica quedo arriba

*Tabla 2.

Anlisis de resultados: La reaccin del Milln se debe a la presencia del grupo hidroxifenilo en la molcula proteica. Cualquier compuesto fenlico que no est sustituido en la posicin 3,5 como la tirosina, el fenol y el timol producen resultados positivos en esta reaccin. De estos compuestos, slo la tirosina est presente en las protenas, de manera que slo las protenas que tienen este aminocido ofrecen resultados positivos.

En esta prueba los compuestos mercricos en medio fuertemente cido (cido ntrico del reactivo) se condensan con el grupo fenlico formando un compuesto de color rojo ladrillo rojizo. La prueba no es satisfactoria para soluciones que contienen sales inorgnicas en gran cantidad, ya que el mercurio del reactivo del Milln es precipitado y se vuelve negativo, razn por la cual este reactivo no se usa para medir albmina en orina .Debe tomarse en cuenta que en el caso de que la solucin a examinar sea muy alcalina, debe ser previamente neutralizada, ya que el lcali precipitara al ion mercurio en forma de xidos amarillos. Adems, protenas como la ovoalbmina producen un precipitado blanco que progresivamente por accin del calor se torna rojo. Se realiz el primer experimento con la reaccin de Millon, en todas las protenas dio positiva, lo que indic la presencia de un grupo hidroxifenilo en la molcula proteica excepto en la glicina debido a que este es un aminocido. Se formaron soluciones rojas debido a que los compuestos mercricos del reactivo se condensaron con el grupo fenlico de las protenas. En el segundo experimento (Biuret) tambin dio positivo para todas indicando que todas posean 2 grupos carbamino unidos directamente o a travs de un solo tomo de carbono o nitrgeno formando un complejo de coordinacin entre los iones Cu 2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos provocando el cambio de coloracin ya fuera violeta o rosado.
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Para el tercer experimento (Xanproteico), dio negativo para el aminocido ya que no es aromtico y positivo para las protenas por su grupo fenlico por la nitracin del anillo bencnico presente en los residuos de aminocidos de las protenas obtenindose nitrocompuestos de color amarillo.

Con la reaccin Xantoproteica, al calentar la cistena, la albmina y l a gelatina se pusieron color amarillo. Con la reaccin de Ehlrich se dieron 2 fases (se menciona primero la capa superior y despus la capa inferior). En el experimento de precipitacin por metales pesados se agrego cloruro de mercurio al 5% y observamos que se precipito porque cambio de color. D un color transparente a blanco con aspecto opaco espeso. En el acetato de plomo 5% si se precipito en poco mas que el nitrato de plata pero menos que el cloruro de mercurio porque tomo un tono mas bajito, que con el cloruro de mercurio. Con el nitrato de plata al 5% el cual se precipito pero no tanto como el cloruro de mercurio porque tomo un color blanco pero no tanto si no mas blanquizco- transparente. Con el cloruro de bario no se precipito, pero se aclar un poco Con el cloruro de sodio no se precipito, pero se aclar un poco El agua fue nuestra muestra patrn, blanco. En el caso del experimento efecto por solventes, en el tubo se agreg 3ml de clara de huevo, mas 2 mililitros de acido clorhdrico , y observamos que con lo primero aadido no se precipito , pero cuando agregamos etanol si se precipito y se separo en dos fases, la cual una era de color blanco y la otra mitad se formo un tono transparente. Mientras que en el tubo dos agregamos por primera estancia un mililitro de hidrxido de sodio, el cual nos dio un resultado de burbujas , pero no cambio el color de nada , pero cuando agregamos el etanol se formaron dos fases , y cuando agregamos el etanol tampoco cambio , aunque como experimentacin y para comprobar agregamos fenolftalena nos pudimos dar cuenta que si haba dos fases. En nuestro tubo tres agregamos 3mL de clara de huevo y 1 mL de acetato regulador 0.1M con un pH 4.7 y se opaco nuestra muestra , pero cuando agregamos el etanol si hubo un precipitado porque se separo nuestra muestra en dos fases una blanca y la otro como babosa transparente y amarillosa.
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Conclusiones: Se observaron algunas de las propiedades de las protenas tanto fsicas como fisicoqumicas, as como tambin las reacciones especficas para cada aminocido que las constituye. Las reacciones coloridas como por ejemplo la reaccin de milln son sirve para identificar las protenas formadas por grupos fenlicos y tambin protenas que contengan tirosina.+ Las propiedades bioqumicas dependieron fundamentalmente del peso molecular de su carga elctrica y de la conformacin que adopte la molcula, por lo cul se pueden interpretar los resultados de acuerdo a las caractersticas que se observen como por ejemplo la precipitacin o turbidez que experimente la protena en la reaccin.
Bibliografa:

Rendina, G. 1974. Tcnicas de bioqumica aplicada. Ed. Latinoamericaca. Mxico Argentina Espaa pp 5963 Stryer, L. 1993. Bioquimica 3 ed. Tomo I. Ed. Revert Barcelona Bogta Buenos Aires Mxico pp:15-70. BOHINSKI. 1991 Bioqumica. 5ed., Pearson. Mxico. Van Holde Mathews,. 2004 Bioqumica. 3 ed. Pearson. Espaa

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