CAPTULO 1

1. EL PROBLEMA DE LA RESISTENCIA A LOS FUNGICIDAS.

En la actividad agrcola el mbito de la Sanidad Vegetal es un factor determinante a tener en cuenta en la planificacin de cualquier cultivo. La gran variabilidad gentica y la rpida velocidad de adaptacin a los cambios en los microorganismos, los ms difciles de enfrentar por el an convertido en los enemigos

ombre en defensa de las plantas ongos, la situacin no se

cultivadas. En el caso particular de los

puede considerar estable, la evolucin de mecanismos de resistencia a fungicidas a sido tangible desde ace ms de veinticinco a!os y a"n no a sido efica#mente comprendida ni controlada $%&. La

necesidad de profundi#ar los conocimientos que permitan acortar la brec a que imposibilita el control efica# de este problema, se convierte

claramente en una necesidad imperante, demandando as esfuer#os tecnolgicos adecuados para satisfacerla.

1.1.

Antecedentes y Situaci n Actua!. 'esde ace ms de ()) a!os el ombre a utili#ado una

variedad de compuestos qumicos para proteger a las plantas cultivadas del ataque de los microorganismos fitopatgenos $*,%&. 'esde aquellos tiempos qumica agrcola asta oy, el desarrollo de la

a e+perimentado notables avances, sobre

todo en el campo de los compuestos fungicidas, estos avances no an sido resultado de la casualidad o de la investigacin

pura, sino que an sido la respuesta al ms rpido desarrollo evolutivo de los microorganismos fitopatgenos, de forma que, el largo camino que separa a los antiguamente usados compuestos c"pricos protectantes, de las modernas

estrobirulinas, a sido en gran parte tra#ado por la necesidad de respuesta ante un enemigo ms bil en el arte de adaptarse a condiciones adversas $%&.

El desarrollo de nuevos compuestos fungicidas se intensific despus de la Segunda -uerra .undial con la industriali#acin de la agricultura y sus consecuentes problemas fitosanitarios.

0ctualmente e+isten en el mercado de los fungicidas cerca de *1/ compuestos diferentes $%&. El mercado de estos

compuestos en con2unto represent a nivel mundial en *331 un volumen de %.4 billones de dlares considerando "nicamente las ventas al consumidor final $%&. El mismo a!o el Ecuador import (*.1 millones de dlares en fungicidas, en el ())1, la importacin de fungicidas en el Ecuador represent /).1 millones de dlares $(5&, la misma fuente indica que el incremento en el consumo de fungicidas y bactericidas durante la dcada de *33) asta el ())) fue de cerca del 1*/6,

representado un aumento de (%)57m en el consumo.

Estas estadsticas permiten imaginar una disminucin en la sensibilidad de los ongos fitopatgenos a los compuestos

fungicidas, ya que considerando el incremento normal en la superficie cultivada nacional, los procesos inflacionarios y los ocasionales incrementos en la presin de infeccin de enfermedades en campo, a"n queda una brec a que denota un incremento en el nivel de uso de estos productos, posiblemente debido a su prdida de eficacia.

En la mayora de los casos, el nivel de eficacia de los fungicidas se mantiene todava en niveles bastante aceptables $83)6& y la relacin costo9beneficio que el productor recibe por el uso de estos compuestos es generalmente de *:1 $%&. 0 pesar de lo antes mencionado, y considerando la naturale#a de los ongos fitopatgenos, los riesgos son a"n altos. En algunos casos de resistencia probada a ciertos fungicidas, la eficacia de uso de diversas familias de compuestos fungicidas a motivado al

descarte de algunas molculas dentro de los programas de mane2o fitosanitario, como en el caso del control de la enfermedad del .o o -ris de la vid, causada por Botrytis cinerea, o, de la enfermedad de la Sigato;a <egra del =anano causada por Mycosphaerella fijiensis, en donde los programas de mane2o dependen mayoritariamente de la alternancia de dos o tres grupos de compuestos $%&.

La fragilidad

de este equilibrio y el elevado nivel de

dependencia de tan pocas alternativas para el control de los ongos fitopatgenos se an manifestado en ms de una La tabla * a

ocasin causando graves per2uicios econmicos. muestra un resumen

istrico de los casos en que se

presentado resistencia probada a un determinado compuesto o grupo de compuestos fungicidas. TABLA 1 OCURRENCIA DE RESISTENCIA PROBADA A FUNGICIDAS EN "ARIOS CULTI"OS A#$ %a&'$(.) Fun*icida $ C!ase de Fun*icida >rgano9 merc"ricos =en#imida#oles (9amino9 pirimidinas A#$s de Us$ C$+e'cia!1 %) ( ( En,e'+edad ?aya y .anc a foliar de los cereales Varias .ilde@ polvoriento del pepino y de la cebada 7i#n tardo de la papa y .ilde@ lanoso de la vid .o o -ris de la vid .ilde@ polvoriento del pepino y de la cebada A*ente causa!

*35% *34) *34*

Pyrenophora spp. Varios Sphaerotheca fuliginea Erysiphe graminis Phytophthora infestans Plasmopara vitcola Botrytis cinerea Sphaerotheca fuliginea Erysiphe graminis

*3A)

Benilamidas

*3A(

'icarbo+imidas

*3A(
*

Cn ibidores de la 'emetilacin 4 del esterol $'.CDs&

0!os de uso comercial asta la manifestacin de resistencia .odificada. =rent, E. Bungicide ?esistance in Frop Gat ogens: Ho@ can it be .anagedI. *33/.

0 nivel mundial varios organismos relacionados con el control de este problema monitorean y cuantifican el riesgo de que se

e+prese un nuevo mecanismo de resistencia a un producto comercial, as mismo, movili#an esfuer#os para entender me2or estos mecanismos y buscar nuevas armas que permitan elevar el nivel de control de la resistencia $*(&.

1.-.

Mecanis+$s de Desa''$!!$ de Resistencia a Fun*icidas. La e+presin de resistencia a un determinado agente fungicida es el resultado de modificaciones discretas en la constitucin gentica de una poblacin de ongos. =sicamente, estas

modificaciones que permiten el desarrollo de resistencia estn referidas al aumento de la frecuencia de un determinado gen o grupo de genes dentro de los individuos de una poblacin. Seg"n varios estudios, estos genes que codifican la e+presin de mecanismos de resistencia se an encontrado siempre

dentro de las poblaciones naturales, pero la posesin de dic o gen de ba2a frecuencia no representa ninguna venta2a evolutiva, asta que debido a la presin de seleccin e2ercida por la molcula de fungicida, su frecuencia aumenta en la poblacin y la convierte en resistente a dic o compuesto $%&.

?especto

al

origen

de

estos

genes

codificadores

de

mecanismos de resistencia, se puede considerar que la

principal va de manifestacin dentro de la poblacin son las mutaciones, las cuales ocurren de forma natural en todos los organismos y tambin de forma artificial. Jna ve# que el gen mutante codificador de resistencia se convierte en un gen a e+presado, este se

eredable debido las caractersticas

reproductivas de los ongos $%,**&.

7eniendo en cuenta los orgenes de los mecanismos de resistencia a los fungicidas, es importante mencionar que el ec o de que un solo gen codifique de la e+presin de todo el mecanismo de resistencia necesario para soportar la presin de seleccin e2ercida por el fungicida, genera diferencias en el patrn de comportamiento de la poblacin con respecto al caso en que varios genes son responsables de peque!os efectos aditivos que confieren la resistencia. En el primer caso, la poblacin pasa sbitamente de una condicin KsensibleL a una condicin KresistenteL, por otra parte, en el segundo caso la transicin de la poblacin de un estado KsensibleL a un estado KresistenteL es gradual, esto se debe a que la probabilidad de que se produ#ca una mutacin en un solo gen es sumamente ms alta a que se produ#can mutaciones en dos o ms genes a la ve# $%&. En el primer caso, el patrn de comportamiento de la

*)

resistencia de la poblacin se lo conoce como Patrn de esistencia !iscreta, referida a la e+presin de un gen "nico o -en Grincipal, en el segundo caso, el patrn de

comportamiento de la resistencia de la poblacin se lo conoce como Patrn de esistencia de Pasos Mltiples, referido a la

e+presin de varios genes o e+presin Golignica $%,**& $Bigura *.*&. Fon respecto a este "ltimo patrn, es necesario mencionar que aunque esta teora es ampliamente aceptada, no a sido completamente comprobada a travs de la investigacin $%&. FIGURA 1.1 PATRONES DE RESISTENCIA A FUNGICIDAS

.odificada. =rent, E. Bungicide ?esistance in Frop Gat ogens: Ho@ can it be .anagedI. *33/.

**

7eniendo en cuenta el origen gentico de la resistencia, es fcil comprender que e+istan numerosos mecanismos para

e+presarla en un determinado

ongo $%,1)&. Hasta a ora,

algunos mecanismos de resistencia a determinados grupos de fungicidas an sido e+tensamente como a los el estudiados caso de y los

aceptablemente mecanismos

comprendidos, de resistencia

=en#imida#oles,

'ifenilamidas, Farbo+anilidas y fungicidas Bosforotiolados, no obstante, a"n quedan otros grupos de los que se sabe muy poco $o nada& respecto a los mecanismos mediante los cuales los ongos e+presan resistencia a ellos $%&.

Entre los principales mecanismos de resistencia se pueden considerar $%&:

a. 0lteraciones bioqumicas en el sitio de accin que reducen su sensitividad al producto. b. .odificaciones en la va metablica del producto para evitar que llegue al sitio de accin. c. 'esactivacin metablica del fungicida. d. E+crecin o e+pulsin rpida de la molcula fuera del ongo.

*(

El mecanismo de resistencia ms com"n es la modificacin bioqumica del sitio de accin del fungicida $%,1)&. Esta modificacin es generada por un cambio en la secuencia gentica codificadora de la en#ima o protena que constituye el sitio de accin en el ongo. 'e acuerdo a este criterio,

modernamente los fungicidas se an clasificado en dos grupos: fungicidas Kmulti9sitioL $e.g. Farbamatos& y fungicidas Kuni9sitioL o Ksitio9especficosL $e.g. 7ria#oles& $%&. Gor otra parte, considerando los orgenes de la resistencia es fcil comprender que los fungicidas multi9sitio son menos propensos a perder su eficacia por la aparicin de mecanismos de resistencia en comparacin con los fungicidas uni9sitio $%,/&.

'esventa2osamente, en los "ltimos a!os las compa!as fabricantes de fungicidas an desarrollado ms fungicidas uni9 sitio, e+plicando as que los fungicidas ms antiguos sean ms efectivos que los modernos en cuanto a resistencia se refiere.

0lgunos de los mecanismos de resistencia a grupos de fungicidas se encuentran resumidos en la tabla a continuacin.

*1

TABLA PRINCIPALES MECANISMOS DE RESISTENCIA A FUNGICIDAS Fun*icida $ G'u&$ Fun*icida Bungicidas >rgano .erc"ricos =en#imida#oles Easugamicina Bungicidas Bosforotiolados Benilamidas Cn ibidores de la demetilacin* Mecanis+$ de 'esistencia 'eto+ificacin mediada por ligandos 0lteracin del sitio activo $9tubulina& 0lteracin del sitio activo $ribosomas& 'eto+ificacin metablica 0lteracin del sitio activo $0?< polimerasa& Cncremento de la tasa de e+pulsin 0lteracin del sitio activo Sobreproduccin del sitio activo 0lteracin del sitio activo $succinato9ubiquinona o+idoreductasa&

Farbo+anilidas
*

<o claramente confirmado en aislamientos provenientes del campo. .odificada. =rent, E. Bungicide ?esistance in Frop Gat ogens: Ho@ can it be .anagedI. *33/.

1...

A!te'nati/as &a'a e! Mane0$ de !a Resistencia a !$s Fun*icidas. El desarrollo de resistencia a compuestos fungicidas es una consecuencia evolutiva en los ongos, por lo que la eliminacin de este fenmeno es muy poco probable, no obstante, es posible ablar de control de la resistencia, no en trminos

erradicativos, sino en trminos preventivos. Gara este efecto, en todo el mundo se an creado comits y grupos de traba2o

*%

encargados de anali#ar esta problemtica $e.g. B?0F, G.?0, -FGB& $**&.

Las medidas de prevencin de la e+presin de resistencia son concordantes en la mayora de las recomendaciones de los distintos comits, bsicamente, las recomendaciones ec as

para reducir a niveles aceptables el desarrollo de resistencia en organismos fitopatgenos se resumen en seis directrices $%&, anali#adas a continuacin.

1.1 E/ita'

e!

us$

de viene

&'$duct$s referida al

en

solitario.1 de

Esta la

recomendacin

ec o

que

probabilidad de que un compuesto fungicida sufra una reduccin en su efectividad permanentemente, depende en gran medida, de que e+istan individuos resistentes luego de su aplicacin, capaces de reproducirse y traspasar su resistencia a la siguiente generacin. 0l aplicar fungicidas en me#clas se incrementa el nivel de control por la adicin de los efectos de los dos productos, no obstante, la seleccin de los productos que participan en la me#cla debe ser adecuadamente elegida, principalmente por los riesgos de traba2ar con familias que e+ iben resistencia cru#ada, o

*/

familias

particularmente

propensas

e+presar

individualmente reduccin de su efectividad $por e2emplo, me#clas de dos fungicidas uni9sitio&. 'e cualquier forma y considerando los aspectos "ltimamente se!alados, la probabilidad de que el patgeno e+prese resistencia a un compuesto seguir siendo mayor cuando este se aplica en solitario.

-.1 Rest'in*i' e! n2+e'$ de a&!icaci$nes de un +is+$ c$+&uest$.1 Esta recomendacin viene referida al ec o

de que al reducir la e+posicin del patgeno al compuesto fungicida en riesgo de perder efectividad, se reduce la presin de seleccin en la poblacin, al eliminar

parcialmente el estmulo seleccionador. Esto implica que las aplicaciones necesarias para alcan#ar el control comercial en un cultivo debern contener dos o tres compuestos en rotacin continua durante el ciclo productivo.

..1 Uti!i3a' !as d$sis 'ec$+endadas &$' !$s ,a4'icantes de! &'$duct$.1 ?especto a esta recomendacin a"n no se an podido esclarecer adecuadamente los efectos de utili#ar dosis incrementadas o disminuidas. Los estudios e

*5

investigaciones

an presentado resultados ambiguos, en a inducido el

algunos casos, el uso de dosis mayores

desarrollo de resistencia en determinados patgenos en ciertos cultivos y localidades, mientras que en otras ocasiones, dosis menores an generado el mismo efecto,

por lo que la recomendacin es mantenerse en un nivel neutral a2ustado a las recomendaciones del fabricante, las cuales estn basados generalmente en ensayos reali#ados ba2o condiciones locales de cada regin donde se utili#a el producto.

5.1 E/ita' !as a&!icaci$nes e''adicantes.1 Mltimamente, se an venido elaborando programas de control basados en el uso de Kumbrales de aplicacinL, donde una ve# e+presado el umbral contin"a una aplicacin con un producto de caractersticas erradicantes. El problema de esta estrategia de mane2o radica en que en ocasiones permite que las poblaciones de microorganismos se desarrollen asta

niveles en las que son ms propensas a e+presar resistencia $por lo general madure# reproductiva&. En contraste, las estrategias de control profil"cticas basadas en aplicaciones programadas de determinados productos

*4

mantienen siempre los niveles de desarrollo de las poblaciones ba2os, evitando que alcancen la madure# reproductiva y, por tanto, evitando la transmisin de la resistencia.

6.1 A&!ica' un Mane0$ Inte*'ad$ de En,e'+edades.1 El control de las enfermedades, de la misma forma que ya fue aceptado en el campo de la entomologa agrcola, no depende "nicamente de una sola estrategia de control, sino de la aplicacin racional de todas las medidas que permitan contrarrestar un efecto no deseado causado por un agente bitico, en este aspecto, es necesario refor#ar los controles qumicos tradicionales con prcticas culturales y aspectos de mane2o que permitan mantener a las poblaciones de patgenos en niveles econmicamente aceptables.

7.1 Di/e'sidad 8u9+ica de !$s In*'edientes Acti/$s.1 La investigacin clsica en la b"squeda de nuevos ingredientes activos y mecanismos de accin representar claramente una venta2a en la luc a contra los organismos fitopatgenos, al incrementar los recursos que se pueden utili#ar para e2ercer control sobre el problema. En este aspecto, no

*A

necesariamente

se

requiere la aparicin

de nuevas

molculas que e+ iban niveles de control superiores a los convencionales, sino que simplemente, presenten una adecuada efectividad dentro del promedio general sobre patotipos reconocidos como resistentes. Es ya sabido que tarde o temprano todo control produce una reaccin en el agente a controlar y que el control efectivo no depende slo de una erramienta sino de la combinacin de varias, como ya se mencion anteriormente.

Las recomendaciones descritas anteriormente resumen muy bsicamente los lineamientos de los distintos grupos de traba2o que monitorean la situacin a las de armas los microorganismos utili#adas

fitopatgenos

frente

qumicas

convencionalmente, no obstante, cada recomendacin no puede ser considerada como una estrategia aislada, sino que el con2unto de ellas ser el que permita alcan#ar el control esperado $%&. Gor otra parte, se debe mencionar que la investigacin local y regional, el intercambio de informacin y las polticas regulatorias respecto a la aplicacin de productos en los distintos pases, son necesarias al momento de establecer un sistema de control efectivo sobre la e+presin de

*3

resistencia en los $/,*(&.

ongos y microorganismos fitopatgenos

1.5

Desa''$!!$ de Resistencia a Fun*icidas en Mycosphaerella fijiensis. Mycosphaerella fijiensis, el agente causal de la enfermedad de la Sigato;a <egra del =anano, es un ongo ascomiceto

perteneciente al orden de los 'ot idiales. Se encuentra ampliamente diseminado en todos los pases productores de la fruta en el mundo. Bue reconocido por primera ve# en el valle de Sigato;a en la costa sur9oriental de Viti Levu en Bi2i en *351 $(1&. En *344 fue por primera ve# identificado en Latinoamrica, en Honduras $(1&, desde donde se a diseminado rpidamente en todo el subcontinente. 0ctualmente se la considera como una de las fitopatologas epifticas ms importantes $*,(%&.

El principal sntoma de la enfermedad es el necrosamiento progresivo del rea foliar, afectando consecuentemente el rendimiento y provocando maduracin prematura de la fruta $*,(%&. E+isten reportes que estiman prdidas debido a la enfermedad en el orden del /)6 de la produccin $(%&. El ongo se reproduce por va se+ual y ase+ual, produciendo

()

ascosporas y conidias respectivamente y el principal medio de diseminacin de la enfermedad es el agua y el aire $*,(%&. 0ctualmente las principales medidas de control de la

enfermedad incluyen el control qumico y cultural $(1,(%&.

7radicionalmente, el control qumico de la enfermedad se

caracteri#ado por la rotacin de dos o tres familias de fungicidas en ciclos de aplicacin peridicos. Los fungicidas sistmicos an sido ampliamente preferidos en este control $(1,(%&.

Jno de los primeros grupos utili#ados para el control de la enfermedad fue el grupo de los =en#imida#oles, as mismo, fue el primer grupo para el cual M. fijiensis e+pres resistencia probada, esto ocurri en Fosta ?ica en *33* despus de *) a!os de uso intensivo del ingrediente activo =enomil $(1&. Fomo consecuencia de la aparicin de este problema, el uso de =en#imida#oles para el control de M. fijiensis se descart de los programas de fumigacin en *33/ y en su lugar se increment el uso de Cn ibidores de la 'emetilacin

$'emet ylation Cn ibitors, !M#$s& que ya se venan usando en rotacin desde la dcada de *3A) $(1&. El ingrediente activo

(*

Gropicona#ol fue el primer '.C utili#ado para el control de la Sigato;a <egra $(1&.

Gor otra parte, desde *33( e+isten referencias acerca de la prdida de la efectividad de este ingrediente activo en el control de la enfermedad en Fosta ?ica $(1&. En *33% finalmente se detect una reduccin de la sensibilidad de M. fijiensis al Gropicona#ol en dos poblaciones del patgeno, la una con un istorial de aplicaciones de Gropicona#ol de siete a!os y la otra sin istorial de aplicacin del producto $(1&. 0 pesar de que la resistencia al producto fue e+presada, sta no present el mismo patrn de comportamiento que present la resistencia a los =en#imida#oles, por lo que su uso no fue descontinuado sino que fue complementado con programas de pronstico fitopatolgico y prcticas culturales $(1&.

Binalmente, en *334 se introdu2o en los programas de mane2o un nuevo grupo de fungicidas llamados Estrobirulinas $(1&. El desempe!o de este nuevo grupo a sido monitoreado desde

*33A para determinar la e+presin de resistencia de forma temprana $(1&. 0 pesar de su buen nivel de control de la enfermedad en el campo, en ())( se observ una reduccin de

((

la sensibilidad de M. fijiensis a las estrobirulinas, posiblemente generada por una mutacin puntual en la secuencia

codificadora de una de las protenas del Fitocromo b $(1&. El uso de Estrobirulinas, adems de los potenciales riesgos de resistencia, se encuentra tambin restringido parcialmente por el costo que representa para el productor la adquisicin del producto, el cual tiene un precio muy por encima del de otros fungicidas.

0ctualmente se considera que un me2or conocimiento del comportamiento del patgeno y de su constitucin gentica son lneas de investigacin que pueden permitir encontrar una solucin ms efectiva al problema del mane2o de la enfermedad. 0s mismo es com"nmente aceptado que el programa de mane2o de la enfermedad no se puede restringir "nicamente a la luc a qumica, sino que debe ser la adecuada combinacin de todas las erramientas disponibles, incluyendo el control

cultural y el me2oramiento gentico $%&. <o obstante, es necesario reconocer que el control qumico constituir un aporte importante a este equilibrio de fuer#as.