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PRCTICA 6 DETERMINACIN DE LAS PROPIEDADES QUMICAS DE LAS PROTENAS

I. OBJETIVOS: Al trmino de esta prctica, el alumno ser capaz de describir y demostrar de manera cualitativa las propiedades qumicas de las protenas en base a los siguientes aspectos: Solubilidad de las protenas. Las propiedades electroqumicas de las protenas. El e ecto cido!bsico en la solubilidad de las protenas. II. PRERREQUISITOS: ". Salting #n y Salting $ut. %. Agentes precipitantes de protenas. &. 'ropiedades isicoqumicas del agua. (. Ecuaci)n de *enderson!*asselbac+. III. INTRODUCCIN: Se considera a las protenas como polmeros biol)gicos de aminocidos. En las protenas e,isten %- tipos de aminocidos di erentes los cuales estn en un n.mero y secuencia determinados por el c)digo gentico. /on respecto a su tama0o, las protenas van desde un peso molecular de 1--- 2alton +asta varios millones de 2alton con una considerable variaci)n de ormas y estructuras. 'ara su estudio se consideran cuatro niveles de comple3idad estructural4 siendo la ms simple la estructura primaria y la ms comple3a la estructura cuaternaria cuya con ormaci)n depende de di erentes uerzas qumicas de atracci)n y repulsi)n que son e3ercidas sobre la estructura molecular de la protena y por lo tanto son responsables de su estabilidad. 'or convenci)n se acepta dividir a las protenas en dos grupos: protenas simples y con3ugadas, las cuales presentan di erencias en sus propiedades qumicas y sicas. Sin embargo, para los ines que se persiguen en esta prctica se les mencionara en orma general. Los actores que pueden a ectar la solubilidad de una protena son: La uerza i)nica del medio, el p*. la temperatura y la constante dielctrica del solvente. /uando +ay un cambio de cualquiera de estos

actores, la protena responde con una intensidad proporcional al cambio, esto es, que puede a ectar la estructura proteica de una manera super icial o lo +ace tan drsticamente que desnaturaliza a la protena. 'or ortuna, en nuestro organismo, la variaci)n de tales actores es mnima por lo que son imperceptibles los cambios en la protena.

IV. MATERIAL: "& tubos de ensaye de "- 5 "6- mm " pipeta de "- ml 6 pipetas de 6 ml " pipeta de 6 ml " gradilla V. METODOLOGA: En esta prctica se trata de provocar cambios de solubilidad en protenas que se encuentran en el organismo, mediante la modi icaci)n las propiedades de los solventes, para establecer una relaci)n con los e ectos que se pueden presentar en el organismo. Funda !n"# Qu$ %&#: Las protenas poseen cargas positivas y negativas dependiendo del p* de la soluci)n en la cual se encuentran4 cuando se neutralizan, se presenta precipitaci)n proteica. La adici)n de una sal a una soluci)n proteica modi ica la constante dielctrica del solvente permitiendo una mayor solubilidad de la protena. Sin embargo, cuando se a0ade e,ceso de una sal, se neutralizan las cargas de la protena y sta tiende a precipitar. Este mismo e ecto ocurre al a0adir sales metlicas cargadas electropositivamente. /on la adici)n de un cido o una base a una soluci)n proteica se alcanza un estado en que +ay el mismo n.mero de aniones que de cationes. Este e ecto, neutraliza la carga de la protena y tiende a precipitar. El p* que determina el n.mero igual de cargas de signos opuestos se denomina punto isoelctrico. E'(!)% !n"# N#. * D!"!) %na&%+n d!, (un"# I-#!,.&")%&# d! ,a &a-!$na (#) ad%&%+n d! un /&%d#. 'reparar una soluci)n de caseinato de sodio, tomando %6- mg de casena, %- mL de agua destilada y 6 mL de 7a$* "7. /uando la soluci)n sea per ecta, se agregan 6 mL de cido actico " 7. 8ezclar bien, diluir a 6- mL con agua destilada. Si la soluci)n no est su icientemente clara, se puede iltrar. 9 'reparar los siguientes tubos como se indica a continuaci)n Tu0 # * ( 1 A2ua d!-"%,ad a 4.54 A&. A&."%&# 3.3*N 3.66 A&. A&."%&# 3.* 3 A&. A&."%&# *.3N 3 Ca-!%n a"# d! S#d%# *.3

6 5 9 8 6 7 4 : *3

7.78 4.78 4.8 4.3 7.3 8.3 *.3 7.9 8.4

*.68 3 3 3 3 3 3 3 3

3 3.68 3.8 *.3 6.3 9.3 4.3 3 3

3 3 3 3 3 3 3 *.6 5.6

*.3 *.3 *.3 *.3 *.3 *.3 *.3 *.3 *.3

8ezclar bien , esperar &- minutos y observar los cambios que presente la solubilidad de la casena en cada tubo. :eportar el punto isoelctrico correspondiente al tubo donde se presenta la mayor precipitaci)n. /alcular el p* de cada tubo utilizando la ecuaci)n de *endersosn! *asselbac+. E'(!)% !n"# N#. * D!"!) %na&%+n d!, (un"# I-#!,.&")%&# d! ,a &a-!$na (#) ad%&%+n d! un /&%d#. Tu0# (1 S#,u0%,%dad * 6 5 9 8 6 7 4 : *3 6 7 6 8 8 8 8 6 8 6 S#,u0,! S#,u0,! S#,u0,! In-#,u0,! In-#,u0,! In-#,u0,! S#,u0,! S#,u0,! S#,u0,! S#,u0,!

/ul es el punto isoelctrico de la protena ; El punto isoelctrico <p#= de la casena es (.1. A este p*, la casena se encuentra en su punto de menos solubilidad, debido a la reducci)n de repulsiones intermoleculares, por lo que precipita.

VI. CUESTIONARIO: 6.*. D! ;u. <a&"#)!- d!(!nd! ,a -#,u0%,%dad d! una ()#"!$na !n !, a2ua. La solubilidad de una protena est influenciada por los siguientes factores: Su composicin en aminocidos (una protena rica en aminocidos polares es en general ms soluble que una rica en aminocidos hidrofbicos) Su estructura tridimensional (las protenas fibrosas son en general menos solubles que las globulares) El entorno de la propia protena. En este ltimo sentido podemos decir que los principales factores ambientales que influ!en en la solubilidad de una protena son los siguientes: la temperatura la constante diel"ctrica del medio el p# del mismo ! la fuer$a inica. 6.6. E'(,%;u! !n ".) %n#- <%-%&#;u$ %&#- !, !<!&"# ;u! ()#=#&a ,a ad%&%+n d! un /&%d# # una 0a-! <u!)"!. Las disoluciones reguladoras de p# o tampones contienen simultneamente las dos formas con%ugadas de un par cido&base de fuer$a media d"bil ! su p#

apenas cambia cuando le a'adimos cantidades moderadas de cidos !(o bases fuertes. )amos a usar el sistema del cido fosfrico como modelo:

*ara cualquier tampn su p# depender de su p+ ! de la relacin de concentraciones de las formas presentes en disolucin tal como nos indica la ecuacin de #enderson&#asselbach:

,plicada esta ecuacin al sistema del fosfato que )amos a usar ser:

,l a'adir una base fuerte (-a.#) tendr lugar la reaccin:

y el pH de la disolucin resultante ser mayor que el inicial y ser

,l a'adir un cido fuerte (#/l) tendremos:

! el p# disminu!e:

La capacidad tampn de las protenas es debida a la estructura qumica de los aminocidos0 que son mol"culas que poseen grupos carbo1ilo (cidos) ! amino (bsicos) en su estructura molecular. 6.5. E'(,%;u! &+ # a<!&"a un &a 0%# !n ,a &#n-"an"! d%!,.&")%&a d!, a2ua a ,a -#,u0%,%dad d! una ()#"!$na.

En primer lugar el agua que es un disol)ente polar produce un efecto que llamamos apantallamiento ! que se debe a que cada macromol"cula inica aparece rodeada por un con%unto de 2dipolos2 de agua debilitando as la posible interaccin electrosttica entre dos macromol"culas cargadas. *ero si adems en la disolucin e1isten iones procedentes por e%emplo de sales disueltas "stos )an a interaccionar con aquellas macromol"culas inicas cu!a carga sea de signo opuesto formando lo que se conoce como atmsfera contrainica. /omo consecuencia aparece un apantallamiento an ma!or que el producido por el agua ! por lo tanto una reduccin ma!or de las interacciones de tipo electrosttico entre macromol"culas inicas. 3icho de otro modo las fuer$as de atraccin electrostticas se e1presan a tra)"s de la le! de /oulomb que nos dice que dichas fuer$as son in)ersamente proporcionales a una propiedad del medio que separa las cargas llamada constante diel"ctrica. La constante diel"ctrica del medio es ma!or cuanto ma!or sea su polaridad. El agua que es un disol)ente mu! polar tiene una constante diel"ctrica grande por lo que la fuer$a de interaccin electrosttica entre mol"culas cargadas en medio acuoso es menor que en otros disol)entes menos polares. La constante diel"ctrica ser ma!or an ! las interacciones electrostticas sern menores en un medio acuoso con una concentracin salina ele)ada. (u!-"#- (u!d!n

6.9. Qu. !- !, Sa,"%n2 %n > ;u. "%(# d! &# ()# #=!),#.

El salting in es el fenmeno por el cual la concentracin de sal aumenta la solubilidad de la protena. Este fenmeno se debe a la fuer$a de atraccin entre los iones de protenas ! de la sal. , concentraciones de sal ba%a el aumento en el logaritmo de la solubilidad de la protena es proporcional a la fuer$a inica del disol)ente . el salting in se e1plica porque al a'adir una peque'a cantidad de iones e1tra'os se aumenta el desorden molecular con ello la entropa se hace ma!or ! no habiendo )ariacin de entalpia el cambio de energa libre es negati)o ! esto supone una tendencia espontanea ha aumentar la solubilidad

6.8. Qu. !- !, Sa,"%n2 #u" > ;u. "%(# d! &# ()# #=!),#.

(u!-"#- (u!d!n

salting out. Este fenmeno se da bsicamente por la competencia por las mol"culas de agua que forman parte de la capa de sol)atacin la cual depende de la disminucin de la acti)idad del agua lo que a su )e$ disminu!e las interacciones solubili$antes entre el agua ! los grupos de la protena.

Es decir que cuando aumenta mucho la cantidad de los iones e1tra'os la interaccin protena&protena se hace ma!or que la interaccin protena&agua ba%a la mo)ilidad de las cargas proteicas ! las protenas precipitan

6.6. Qu. )!,a&%+n !'%-"! !n")! !, (un"# %-#!,.&")%&# > ,a -#,u0%,%dad d! una ()#"!$na. EL punto isoel"ctrico de un proteina se da 3ependiendo del p# del medio en que se encuentren los aminocidos pueden tener carga negati)a positi)a o compensada (igual nmero de cargas de ambos signos). *or tanto la carga de una protena )a a depender del tipo de aminocidos que la forman ! del p# del medio en que se encuentre. El punto isoel"ctrico (p4) es el p# para el cual una protena presenta carga neta compensada (igual nmero de cargas positi)as que negati)as) ! en el mismo la solubilidad de la protena es mnima. , p#5p4 la carga que presenta la protena es negati)a ! a p# 6 p4 la carga ser positi)a.

6.7. Qu. !- ,a !&ua&%+n d! 1!nd!)-#n?1a--!,0a&@ > !n ;u! &a-#- !-"/ %nd%&ad# u"%,%Aa)-!. La Ecuacin de #enderson&#asselbach permite calcular el p# de una me$cla amortiguadora conociendo su composicin. En su deduccin para un amortiguador compuesto de un cido d"bil ! una sal de su base con%ugada se considera que la concentracin de cido libre es apro1imadamente igual a la del cido total ! la concentracin del in base con%ugada coincide con la concentracin de la sal. /on ello La Ecuacin de #enderson&#asselbach e1presa que el p# de una solucin amortiguadora se calcula sumando al p+ del cido el logaritmo de la relacin concentracin de sal( concentracin de cido es decir p# 7 p+a 8 log 9sal: *ara cualquier tampn su p# depender de su p+ ! de la relacin de concentraciones de las formas presentes en disolucin tal como nos indica la ecuacin de #enderson&#asselbach: 6.4. M!n&%#n! ;u! ()#(%!dad!- <%-%&#;u$ %&a- d! ,a a,0B %na ,! (!) %"!n %n"!)a&&%#na) > ")an-(#)"a) &ua,;u%!) &# (u!-"# %n&,u>!nd# @%d)#<+0%&#- a ")a=.- d! un !d%# a&u#-#.

La albmina es una protena. *or lo tanto est conformada por una larga cadena de aminocidos que forman una estructura comple%a tridimensional que le da sus caractersticas qumicas. La clara del hue)o est compuesta por esta protena. ;ambi"n se encuentra en abundancia en el plasma sanguneo de los humanos. La albmina es fundamental para el mantenimiento de la presin onctica necesaria para la distribucin correcta de los lquidos corporales entre el compartimento intra)ascular ! el e1tra)ascular locali$ado entre los te%idos. La albmina tiene carga el"ctrica negati)a. La membrana basal del glom"rulo renal tambi"n est cargada negati)amente lo que impide la filtracin glomerular de la albmina a la orina. La albmina tiene un amplio rango de aplicaciones qumicas ! su uso en el laboratorio de in)estigacin es mu! frecuente !a que participa en )arias funciones fisiolgicas. <uchos =its diagnsticos biofarmac"uticos ! )acunas )eterinarias dependen de la albmina como componente crtico0 de ah la importancia de aislarla del suero. La >S, es una de las protenas ms ampliamente utili$adas en la industria m"dica. Es un componente esencial en la produccin de muchas drogas terap"uticas ! pruebas diagnsticas. *uede ser)ir como una protena estandar ! un dilu!ente0 como un agente bloqueante en inmunoanlisis0 como un componente buffer para estabili$ar protenas anticuerpos ! con%ugados0 ! an como un suplemento para culti)os celulares para la produccin de anticuerpos monoclonales.

VII.DISCUSIN

La propiedad caracterstica de la casena es su ba3a solubilidad a p* (,1. El p* de la lec+e es 1,1 apro,imadamente, estando a ese p* la casena cargada negativamente y solubilizada como sal clcica. Si se a0ade cido a la lec+e, la carga negativa de la super icie de la micela se neutraliza <los grupos os ato se protonan= y la protena neutra precipita>.

VIII. CONCLUSIONES /uando el p# es ba%o los grupos ioni$ables est protonado ! la carga neta de la protena es de signo positi)o. /uando el p# es alto los grupos ioni$ables est desprotonado ! la carga neta es de signo negati)o. Entre amabas $onas habr un p# en el cual la carga neta de la protena es nula. Es el p# isoel"ctrico o punto isoel"ctrico ! es caracterstico de cada protena. La solubilidad de una protena es mnima en su punto isoel"ctrico !a que su carga neta es cero ! desaparece cualquier fuer$a de repulsin electrosttica que pudiera dificultar la formacin de agregados. El punto isoel"ctrico de la casena es de ? @ A ? B. En la forma dipolar el grupo carbo1ilo se encuentra disociado (&/..&) ! el grupo amino protonado (&-8#C) pero la carga de la mol"cula es neutra. Dn $Eitterion puede actuar como un cido o como una base cediendo o aceptando protones. La protonacin o desprotonacin de los grupo amino ! carbo1ilo depende del p#. *ara la glicina el p+a para el grupo carbo1ilo ! amino es respecti)amente F C ! G @. esto significa que a p# inferiores a F C los grupos carbo1ilo ! amino estarn protonados la carga neta de la mol"cula ser positi)a. , p# entre F C ! G @ el grupo carbo1ilo esta desprotonado ! el grupo amino protonado siendo la carga neta del aminocido cero. , p# superiores a G @ ambos grupos estarn desprotonados siendo la carga neta negati)a

IC. BIBLIOGRAFA http://webpages.ull.es/users/acasti/docencia/practicas/8.pdf http://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimica-biolmol/pdfs/07%20 !"#"$%20p%.pdf http://boo&s.google.com.pe/boo&s' id(a)t8*+mp8q,-.pg(/$77.lpg(/$77.dq(0alting1in.source(bl.ots(22i2u o"gu$.sig(pz3dcho45b0e62dll!57889uqz0.hl(es.ei(:;0w0<%)% /