Determinacin de la Eficiencia de Microencapsulacin de Aceite Esencial de Organo (Origanum vulgare) en -Ciclodextrina Matos Chamorro, Alfredo1; Quispe Condori, Socrates1;

Mas Chuquizuta, Kevin Joel2 Resumen El objetivo de este trabajo fue determinar la eficiencia de microencapsulacin (MEF) del aceite esencial de organo (Origanum vulgare) en -ciclodextrina, mediante el mtodo fsico de secado por liofilizacin, para alcanzar dicho objetivo se prepar una solucin de agua etanol en relacin 1:2, luego se procedi a la microencapsulacin de tres concentraciones diferentes de aceite esencial (1, 2 y 3 ml) en tres cantidades diferentes de -Ciclodextrina (4, 8 y 12 g), siguiendo un diseo estadstico factorial simple. Los resultados muestran que la mejor regin para el microencapsulamiento (81 %) se encuentra comprendida en un rango de 8 a 12 g de -Ciclodextrina y de 2 a 3 ml de aceite esencial, llegando a la conclusin que la cantidad de -Ciclodextrina es directamente proporcional al porcentaje de microencapsulacin de aceite esencial y es a la vez (-Ciclodextrina) uno de los factores mas importantes en el clculo de la MEF. Palabras Clave: Aceite esencial, microencapsulacion, -Ciclodextrina. Determination of the Microencapsulation of essential oils of oregano (Origanum vulgare) in -Cyclodextrin Abstrac The aim of this study was to determine the microencapsulation efficiency (MEF) of essential oil of oregano (Origanum vulgare) in -cyclodextrin, by the physical method of freeze-drying, to achieve this aim was prepared ethanol-water solution on 1:2, then proceeded to the microencapsulation three different concentrations of essential oil (1, 2 and 3 ml) in three different amounts of -Cyclodextrin (4, 8 and 12 g) following a simple factorial statistical design. The results show that the best region for microencapsulation (82 % for 12 d of -Ciclodextrina) are contained within a range of 8 to 12 g of -Cyclodextrin and 2 to 3 ml of essential oil, concluding that the amount of -Cyclodextrin is directly proportional the percentage of microencapsulation of essential oil quantity and one of the most important factors in the calculation of the MEF is the -Cyclodextrin. Keywords: Essential oil, microencapsulation, -Cyclodextrin. Introduccin Los aceites esenciales son compuestos obtenidos de vegetales, estn constituidos por mezclas complejas de hidrocarburos, compuestos oxigenados y residuos no voltiles (Martnez y otros 2003). El uso que recibe este producto es amplio y variado (Vzquez y otros 2001); no obstante el descubrimiento de su capacidad antimicrobiana ha permitido que sea usado como una alternativa en la conservacin de alimentos (Garca y otros 2006).
1

Universidad Peruana Unin. alfredom@upeu.edu.pe, socratesq@gmail.com 2 E.A.P. de ingeniera de alimentos, Universidad peruana Unin : maschkj@gmail.com
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Estudios realizados por Albado y otros (2001), demuestran que el aceite esencial de organo tiene actividad contra las bacterias gram negativas como: Escherichia coli, Salmonella tiphymurium, Salmonella cholerae suis y Vibrio cholerae; esta misma caracterstica presenta con bacterias gram positivas tales como Staphylococcus aureus y Bacillus cereus, adems de algunos tipos de hongos del genero Aspergillus y Penicillium (Daferera y otros 2000), esto es confirmado por Matos y otros (2010) quienes en un estudio del poder antimicrobiano del aceite esencial de organo, llegaron a demostrar que este, tenia un efecto inhibitorio en el crecimiento de mohos y levaduras aisladas de la cascara de tomate.
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Sin embargo, para la aplicacin como conservantes, los aceites esenciales generalmente son disueltos en diversos solventes, tales como tween (Polioxietilen Sorbitano Monooletano) 20, 80 (Barrera y Garca 2008); etanol (Paredes y otros 2007); agua y en algunos casos son aplicados en forma directa (Albado y otros 2001). No obstante, la utilizacin de estos mtodos de aplicacin demandan abundante gasto de agente antimicrobiano, ya que al no tener una barrera de proteccin, est (agente antimicrobiano) se disipa fcilmente en el ambiente, generando la necesidad de una nueva aplicacin de la solucin antifngica, lo que a su vez se traduce en costos elevados de conservacin, la aplicacin de barreras que controlen la liberacin gradual del aceite esencial (Bhandari y otros 1998; Szente y Szejtli 2003) puede ser una nueva alternativa de aplicacin, obteniendo una mayor durabilidad del agente antimicrobiano en el tiempo. La microencapsulacin, es una tcnica que se ha aplicado para preservar y proteger numerosos ingredientes. Puede considerarse como una forma especial de empacar materiales slidos, lquidos y gaseosos en miniatura (Lpez 2010). La microencapsulacin tiene diversas aplicaciones, en algunos casos, el propsito es asegurar la retencin de los sustratos encapsulados y protegerlos de la reaccin con otros compuestos presentes en el alimento y en otros casos, el propsito es la liberacin gradual del compuesto encapsulado o atrapado (Leyva y otros 2004). Yez y otros (2002), mencionan que para la microencapsulacin existen diferentes tipos de matriz o sistema pared, dentro de las cuales tenemos: Gomas (arbiga, agar, alginato de sodio, cerragenina), carbohidratos (almidn, dextranos, sacarosa), celulosas (carboximetil-celulosa), lpidos (ceras, parafinas, acido esterico), protenas (gluten, casena, grenetina) y materias inorgnicas (sulfato de calcio, silicatos). Las ciclodextrinas son oligosacridos cclicos formados por procesos de degradacin del almidn, qumicamente estn formadas por 6, 7 u 8 unidades de glucosa las cuales se encuentran unidas por enlaces 1-4, las cuales reciben un nombre especifico (Tabla 1) de acuerdo al numero de unidades de glucosa que la conforman (Calvo 2010).
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Tabla 1 - Caractersticas y especificaciones de Ciclodextrinas unidades de glucosa (n) 6 7 8 Dimetro interno/ Altura (nanmetros ) 0.57 0.78 0.95 0.78 0.78 0.78

Nomenclatura -Ciclodextrina -Ciclodextrina -Ciclodextrina

Fuente: (Calvo 2010).

No obstante, en los procesos de encapsulacin la -Ciclodextrina (-CD) ha tenido una especial atencin. Fsicamente la -CD tiene forma de cono truncado (Figura 1), donde la cavidad interna es relativamente hidrofbica (Wong 1998).

Figura 1- Estructura de la molcula de Ciclodextrina (Paginton, citado por Wong 1998) En esta cavidad es posible hacer la inclusin de los constituyentes voltiles de los aceites esenciales, que tambin son hidrofbicos, formndose un complejo molecular por interacciones hidrofbicas (Szente y Szejtli 2004). Al formarse el complejo (microcpsula) (Figura 2) la -CD ofrece proteccin a los compuestos incluidos los cuales pueden ser liberados controlando la humedad del ambiente, esto es posible debido a que el exterior de la -CD es hidroflico, esta singular caracterstica hace que las molculas de agua interacten con el exterior del complejo debilitando la unin del complejo y liberando a los componentes voltiles hacia la atmsfera (Ayala y otros 2007).
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Tabla 2- Condiciones de encapsulamiento Niveles Factores -1 Aceite esencial (ml) -Ciclodextrina (g) 1 4 0 2 8 1 3 12

Tabla 3 - Secuencia de experimentos para la determinacin de la MEF Figura 2 Encapsulamiento de aceite esencial de organo (Origanum vulgare) en Ciclodextrina (Szente y Szejtli 2003) El desarrollo del presente trabajo tiene como objetivo determinar la eficiencia de microencapsulacin del aceite esencial de organo (Origanum vulgare) en -ciclodextrina, mediante el mtodo fsico de secado por liofilizacin. Materiales y Mtodos El trabajo de investigacin se desarroll en los laboratorios de qumica y el centro de investigacin en ciencia de alimentos (CICAL), pertenecientes a la facultad de ingeniera y arquitectura de la universidad Peruana Unin (UPeU). Las materias primas usada son: el organo (Oreganum vulgare) de la ciudad de Tacna, -Ciclodextrina grado alimenticio, adquirido en la empresa Cyclodextrin Technologies Development. Extraccin del aceite esencial de organo La extraccin de aceite esencial se realizo por el mtodo de hidrodestilacin, descrito por Cerpa (citado por Matos y otros 2010), a la que se le acondiciono el equipo Schilcher (TECNAL, modelo TE 2761315, Brasil). Encapsulamiento del aceite esencial Tres concentraciones diferentes de aceite esencial fueron microencapsuladas en tres cantidades diferentes de agente encapsulante (-CD), dichas concentraciones se indican en la tabla 2. Para la determinacin de la regin de mayor porcentaje de eficiencia de microencapsulamiento se aplic un diseo factorial simple, con adicin de tres puntos centrales, tal como se indica en la tabla 3.
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Variables codificadas N de tratamientos 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 X1 -1 -1 -1 0 0 0 1 1 1 0 0 0 X2 -1 0 1 -1 0 1 -1 0 1 0 0 0

Las microcpsulas de aceite esencial se prepararon de acuerdo al mtodo de precipitacin descrito por Bhandari y otros (1998) y Ayala y otros (2007). Una porcin de -CD se disolvi en una solucin agua-etanol (1:2), manteniendo la relacin de 20 % de slidos (-CD) para cada solucin o tratamiento, la mezcla se agit a una temperatura de 60C y se adicion lentamente la solucin de aceite esencial disuelto en etanol (10 % peso/ volumen). El complejo fue almacenado en un ambiente a 4C por 24 h. Secado por liofilizacin El complejo precipitado (-CD ms aceite esencial) se separ del sobrenante y se seco por tres das haciendo uso de un equipo liofilizador (TECNAL). El secado se realiz a una presin de 256 mmhg y a una temperatura de 150 C.
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Eficiencia de la microencapsulacin (MEF) La determinacin de la eficiencia de la microencapsulacin de aceite esencial en los distintos tratamientos se realizo con la ecuacin descrita por Aragn y otros (2010). (1) Donde MEF: Porcentaje de la eficiencia del encapsulamiento Al: total aceite encapsulado (g) So: Peso del aceite de la superficie (g) Ia: Peso del aceite inicial (g) La determinacin de Aceite total (Al) se determino a travs de la ecuacin descrita por Aragn y otros (2010). (2) Donde M1: Peso de -CD mas aceite esencial (g) Diferencia entre M1 y agente encapsulante inicial (g) AF: Peso de aceite esencial microencapsulado en 1 g de muestra liofilizada (g) Extraccin del aceite no encapsulado o aceite de la superficie (So) Se pes 1 g de muestra liofilizada y se coloco en papel filtro, se procedi a un lavado con ter de petrleo, la solucin se llevo a lunas de reloj previamente pesadas se espero hasta la volatilizacin del solvente y se registro el peso final (Aragn y otros 2010). Extraccin del aceite encapsulado (AF) La determinacin del aceite encapsulado se realizo mediante el mtodo descrito por Fernndez y col (citado por Aragn y otros 2010), a la que se reemplazo la utilizacin de solucin tampn de fosfato por ter de petrleo. Se pes 1 g de muestra liofilizada y se diluy en una solucin de aguaetanol (1:2), a una temperatura de 60 C, se llevo a agitador.
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Se adiciono 10 ml de ter de petrleo, se espero hasta la separacin de fases y se pes la muestra de aceite obtenido Resultados y Discusiones Se realizaron doce tratamientos de encapsulamiento de aceite esencial de organo en Ciclodextrina, para cada tratamiento se realizo la misma metodologa antes descrita. Pasada las 24 horas de reposo, se observo la desaparicin de las gotculas de aceite en la superficie del liquido sobrenadante de los tratamientos 4, 8 y 9, esto observacin hizo suponer la encapsulacin total del aceite esencial en el medio, esta suposicin se hace debido a que Leyva y otros (2004) mencionan, que las molculas de Ciclodextrina pueden contener una o dos molculas de sustratos dentro de su cavidad formando un complejo 1:1 o 1:2 segn sea el caso, estudios como los de (Brime 2002; Moreno 2004 y Leyva y otros 2004) concuerdan en que este complejo molecular tiene una estequiometria definida donde el sustrato y el encapsulante se encuentran unidas por efectos fisicoqumicos. Secado por liofilizacin Inmediatamente despus del periodo de reposo (24 h) se procedi a la separacin del precipitado por micro filtracin y al secado de las muestras por liofilizacin. De las muestras resultantes (complejo aceite esencial ms -ciclodextrina) se separo 2 g por cada muestra, de los cuales el 50 % (1 g) se uso para la determinacin del aceite de la superficie (aceite adherido a las paredes de Ciclodextrina que no han sido encapsulados) y el otro 50 % para la determinacin del aceite microencapsulado, de estos datos se calculo la eficiencia de encapsulacin (MEF), los resultados se muestran en la figura 3. Los datos indican que la mejor regin para la eficiencia de microencapsulamiento se encuentra comprendida en un rango de 8 a 12 g de Ciclodextrina y de 2 a 3 ml de aceite esencial, donde la mayor eficiencia de microencapsulamiento se obtuvo en los tratamientos 8 y 9 los cuales mostraron eficiencias de encapsulamiento de 72 y 81 % respectivamente.

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Conclusiones
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Aceite esencial (ml)

La mejor eficiencia de microencapsulacin (72 a 81 %) se encuentra comprendida en un rango de 8 a 12 g de -Ciclodextrina y de 2 a 3 ml de aceite esencial, obteniendo una mayor eficiencia de microencapsulamiento (81 %) al mezclar 12 g Ciclodextrina con 3 ml de aceite esencial. El factor mas influyente en la eficiencia de microencapsulacin es la -Ciclodextrina, la cual es directamente proporcional al porcentaje de microencapsulacion de aceite esencial, esto significa que a mayor cantidad de -Ciclodextrina mayor la MEF. Recomendaciones Para futuros trabajos se recomienda que los tratamientos sean trabajados en condiciones homogneas, esto asegurara la obtencin de datos mas exactos. Se recomienda el estudio de la evaluacin microbiolgica y la determinacin de la liberacin de las partculas de aceite esencial en el tiempo. Agradecimientos Al Dr. Julio Paredes director de la E.A.P de ingeniera de alimentos por su ayuda en la facilitacin del uso de la laboratorios, a la Ing. Susy Beltran por facilitar la materia prima para la realizacin de este trabajo. Referencias

12

B-Ciclodextrina (gr)

80 70 60 50

Figura 3 Eficiencia de encapsulamiento de aceite esencial de organo (Origanum vulgare) en -Ciclodextrina Sin embargo, de los valores presentados en la figura 4, se deduce que la eficiencia de encapsulamiento puede aumentar si adiciona mayor cantidad de -Ciclodextrina, ya que este ultimo es el factor que tiene mayor significancia en el incremento del MEF.

B-CD(Q)

-5,58082

Aceite esencial(Q)

-3,82528

(1)B-CD(L)

3,353327

(2)Aceite esencial(L)

,2884757

p=,05

Figura 4 Diagrama de Pareto para los factores que intervienen en el calculo de la MEF No obstante Leyva y otros (2004) explican que en la formacin de complejos formados con Ciclodextrina, los grupos carboxilos del sustrato se acomodan en un ambiente hidroflico, mientras que la regin aromtica se acomoda en una regin hidrofbica, esto nos hace suponer que en las muestras trabajadas (complejo de -Ciclodextrina mas aceite esencial), existe una distribucin equitativa de las sustancias (grupo aromtico y grupo carboxlico) presentes en el sustrato (aceite esencial)

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