ESCUELA POLITCNICA DEL EJRCITO DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA INGENIERA EN BIOTECNOLOGA INMUNOLOGA Integrantes: Alejandro Olmedo, Andrea Vaca

Fecha: 12 09 2013

Informe de Laboratorio N1

Prctica 1 TEMA: Clulas del linaje inmunolgico, inmunidad natural

OBJETIVO Diferenciar el sistema de defensa del organismo humano, desde su origen hasta el foco de infeccin o el encuentro con el antgeno FUNDAMENTOS Los leucocitos son clulas que circulan por la sangre con la funcin de combatir infecciones o cuerpos extraos. Son parte de las defensas inmunitarias del organismo, pero en ocasiones pueden afectar los tejidos normales de cuerpo. Existen dos grupos, los granulocitos, dentro de ellos los neutrfilos, basfilos y eosinfilos; y granulocitos as como los monocitos y linfocitos. Los neutrfilos defienden el organismo contra bacterias y otros microorganismos. Se les puede denominar neutrfilos en banda o segmentados, dependiendo de si presentan o no divisines de su ncleo en 3 a 5 lbulos. Si el ncleo es mayor, se habla de neutrfilos hipersegmentados. Los basfilos poseen grnulos de heparina e histamina, mediadores de la inflamacin. Actan en estados de hipersensibilidad retardada. La liberacin masiva del contenido de unos grnulos puede causar choque anafilctico, mortal si no es controlado. Los eosinfilos poseen una actividad fagoctica: Se comen los agentes extraos. Sus grnulos tienen sustancias que degradan lo fagoctado sobre todo las larvas de parsitos. Adems, inician y regulan las reacciones alrgicas. Los monocitos poseen una actividad fagoctica bactericida. Ante estmulos qumicos pueden seguir a los neutrfilos. Pueden fijarse a tejido de bazo, hgado y pulmn, dando lugar a macrfagos que forman el sistema retculo-endotelial encargado de remover material extrao circulante en sangre. Los linfocitos B constituyen la minora del pool linfocitario circulante 10-20%. Maduros, pasan de la mdula sea a la sangre y se dirigen hacia los rganos linfticos perifricos para ubicarse en los folculos linfoides. Bajo estimulo antignico, se activan y proliferan formando el centro germinal en el interior del folculo linfoide. Pueden seguir un proceso de estimulacin hasta

transformarse en inmunoglobulinas.

inmunoblastos.

estos

en clulas

plasmticas

secretoras

de

Pueden tambin regresan del estado quiescente de pequeo linfocitos B con memoria inmunolgica, para pasar a formar parte del manto o corona. Los linfocitos T forman una poblacin mayoritaria. Entre el adulto normal oscila entre 65% y 75% con variaciones segn la edad. Ejercen sus efectos mediante la liberacin de protenas solubles, citocinas, encargadas de la trasmisin de seales a otras clulas, o bien mediante interacciones directas con otras clulas. MUESTRA Sangre venosa con anticoagulante EDTA (tubo morado) Material Agujas Jeringas Torundas Torniquetes Alcohol Microscopio ptico MTODO 1. Mezclar la sangre durante tres minutos 2. Realizar un frotis sanguneo 3. Poner una gota de sangre sobre un portaobjetos y con otro portaobjetos limpio, se deslizar la gota sin hacer presin, pero informe 4. Dejar secar y cubrir con el reactivo de Tincin de Wrigth por diez minutos 5. Enjuagar el portaobjetos 6. Leer en el microscopio de bajo objetivos de 10X, 40 X y 100X 7. Identificar las clulas y anotar los resultados RESULTADOS Y DISCUSIN La sangre es un fluido ue contiene una serie de c lulas en mu diferente proporcin. ada una de estas c lulas posee una misin especfica fundamental. Son los gl ulos ro os eritrocitos o emates los gl ulos lancos leucocitos las pla uetas trom ocitos (Belmonte, 2007). Un frotis de sangre perifrica se utiliza frecuentemente para clasificar e identificar las condiciones que afectan a uno o ms tipos de clulas sanguneas. Hay muchas enfermedades, trastornos y deficiencias que pueden afectar el nmero y tipo de clulas sanguneas producidas, su funcin y su esperanza de vida (Newland. 2007). Para reconocer e identificar las clulas y examinar fcilmente la morfologa es necesario teir el frotis, la tincin Wright-Giemsa es la ms utilizada la cual contiene eosina y azul de metileno. La eosina tie los componentes cidos de rojo y el azul de metileno tie de azul los componentes cidos (Carr y Rodak, 2010). Segn Carr y Rodak (2010) en un recuento normal de leucocitos con el lente de 100x segn la forma de los ncleos se pueden encontrar neutrfilos con un ncleo que tiene dos lbulos Portaobjeto Tincin de Wrigth Aceite de inmersin Papel para microscopio

conectados y otros en forma de c o s figura 1, los neutrfilos maduros presentan ncleos lobulados en 3 o 4 partes y poseen un tamao de 10 a 12 um; linfocitos con ncleo redondo figura 2, monocitos con un ncleo irregular como en la figura 3, estos se convierten en macrfagos despus de aumentar su tamao de 5 a 10 veces; eosinfilos tienen el ncleo en forma de dos lbulos conectados, con ncleo plurilobular, tambin se podra observar en ellos
grnulos de color rojo-anaranjado ricos en histamina la cual participa en procesos de alergias; los basfilos tambin poseen histamina y otra sustancias como la heparina, sustancia quimio tctica del eosinfilo, la kalicreina, que acta como factor activador de plaquetas con un tamao de 10 a 14 um como se puede ver en la figura 4. Adems se observaron plaquetas que

son clulas diminutas de forma ovalada que carece de ncleo, stas junto con los factores de coagulacin forman cogulos para cerrar las heridas y glbulos rojos los cuales son discos bicncavos en los cuales tienen una depresin central, no posee ncleo ni organelas, estas clulas provienen de la medula sea. Su funcin principal es liberar oxigeno por los tejidos, gracias a una protena rica en hierro llamada hemoglobina, como se muestra en la figura 5 (Departamento de Ciencias Fisiolgicas. 2002).

Figura 1.Neutrfilos

Figura 2.Linfocitos

Figura 3.Monocitos

Figura 4.Eosinfilos y basfilos

Figura 5. Glbulos rojos, blancos y plaquetas

CUESTIONARIO Valores normales en sangre de adultos nios y de avanzada edad de las clulas sanguneas Valores normales: Adultos

Recuento total de leucocitos Linfocitos Monocitos Granulocitos Neutrfilos Eosinfilos Basfilos

(Chemocare. 2013) Valores normales: Nios

4 -11 k/ul 22-44% 0-7% 40-70% 0-4% 0-1%

Recuento total de leucocitos 1 ao Linfocitos Monocitos Granulocitos Neutrfilos Eosinfilos Basfilos

(Daz & Bastidas, 2004)

6-11 aos

4,0-10,5 * 1000/l 1,5-6-5 * 1000/l 0,6 * 1000/l 0,4 * 1000/l

1,5-8,5 * 1000/l 0,3 * 1000/l 0.5-1 %

1,5-8,0 * 1000/l 0,2 * 1000/l 0.5-1 %

Los valores normales de clulas sanguneas en adultos mayores a 50 aos disminuyen en comparacin a los valores normales en un adulto de mediana edad, se debe considerar tambin que los valores de estas aparte de verse afectados por la edad, tambin influyen factores como el sexo y la situacin geogrfica. Causas de trombocitopenia Este trastorno es asociado con el sangrado anormal, debido a una baja concentracin de plaquetas, respecto a los valores normales. Esta cantidad anormal de plaquetas puede estar relacionada con la produccin insuficiente de clulas en la mdula sea, mayor descomposicin de estas en el torrente sanguneo, en el bazo o en el hgado. Estos cambios estn ligados a anemia, cncer, cirrosis, deficiencia de folato o vitamina b12 o mielodisplasia. (Dr. Tango. 2012.) Cite 5 enfermedades asociadas a las clulas leucocitarias 1. Leucopenia. Disminucin de Leucocitos por debajo de 4000/L

2 .Leucemia mielgena. Cncer de la mdula osea, causada por el crecimiento apresurado de clulas inmaduras que originan un cierto tipo de glbulo blanco. 3. Fiebre reumtica. Enfermedad inflamatoria que puede aparecer despus de una infeccin con las bacterias estreptococos del grupo A. 4. Anemia aplsica. Se presenta cuendo el cuerpo no tiene suficientes glbulos rojos sanos. Los glbulos rojos proporcionan el oxgeno a los tejidos del cuerpo. 5. Mieloma mltiple. Es un cncer que inicia en las clulas plasmticas en la mdula sea. En el mieloma mltiple, estas clulas crecen fuera de control en la mdula sea y forman tumores en reas de hueso slido. (Dr. Tango. 2012.) Describa las estructuras de las clulas leucocitarias Neutrfilos: son globulos blancos polimorfonucleares granulados, con forma esfrica y un tamao de 12 a 15 um, su ncleo esta segmentado por 3 a 5 lbulos conectados, y su citoplasma contiene grnulos con enzimas como la lisozima, colagenasa y elastasa. Monocitos: son clulas mononucleares cuyo ncleo tiene forma arrionada, este posee un tamao de 10 a 15 um de dimetro. En su citoplasma podemos observar grnulos de lisosomas, vacuolas fagocticas y filamentos citoesquelticos. Estos se dividen en dos grupos diferenciados por las protenas de superficie. Basfilo: estos circulan en la sangre, poseen grnulos rodeados de membrana que contienen proteoglucanos cidos que se unen a pigmentos bsicos y varios mediadores inflamatorios y antimicrobianos. stos expresan receptores para IgG y IgE. Su dimetro puede variar entre 10 a 14 um con un ncleo voluminoso. Eosinfilos: poseen grnulos con protenas bsicas que se ligan a pigmentos cidos como la eosina, los grnulos del citoplasma, contienen enzimas lesivas para las paredes celulares de los parsitos e incluso para los tejidos del anfitrin. Miden de 9 a 12 um. Linfocitos: expresan receptores de antgeno distribuidos de forma clonal, los linfocitos B presentan antgenos a los linfocitos T que cooperan en los ganglios linfticos y el bazo. Poseen un dimetro de 9 a 12 um, su ncleo es esfrico y ocupa la mayor parte de la clula. (Abbas A. 2012.)

Haga la clasificacin del origen de las clulas leucocitarias

Celula madre hematopoyetic a autorrenovaci n Progenitora mieloide C. dentritica Progenitora de granulocitos y monocitos Monocito Progenitora de Progenitora de eosinfilos basfilos Eosinfilos Basfilos Megacariocito Progenitora eritroide Eritrocito C. asesina natulas (NK) Progenitora linfoide C. dendrtica

Progenitora de Progenitora de c. T c. B C. colaboradora Tk C. T citotoxica Tc C. B

Neutrfilo

Plauqetas

Macrfago

(Abbas A. 2012.) Que otras tinciones existen para observan clulas leucocitarias Set de coloracin rpida para frotis sanguneos Diff-Quik:

Solucin fijadora (Fast Green en metanol) - Evita el deterioro de la estructura celular Solucin colorante I (Eosina G en tampn fosfato) - Tie de rosa plido el citoplasma y las granulaciones acidfilas (eosinfilas) Solucin colorante II (Tiazina en tampn fosfato) - Tie de color azul-violeta oscuro los ncleos de las clulas y las granulaciones basfilas. (Bioygeo. 2008) PAS

La reaccin de PAS o del cido perydico de Schiff rompe los enlaces -C-C- presentes en los carbohidratos por la accin del cido perydico, es un poderoso agente oxidante, por tanto, libera grupos aldehdo que al combinarse con el reactivo de Schiff dan un compuesto de color rojo prpura intenso. Identifica al glucgeno en el citoplasma celular. Se la utiliza en la diferenciacin de diferentes tipos de leucemias linfoblsticas, en la eritroleucemia y en diversas mielodisplasias. Negro B de Sudn

Es una coloracin no enzimtica til en patologa mieloide. Tie los fosfolpidos y otros lpidos, colorea los grnulos azurfilos y determinados de los granulocitos y no disminuye su actividad con el tiempo. Los neutrfilos segmentados y sus precursores muestran unos grnulos gruesos en el citoplasma de color gris muy oscuro. Peroxidasa

Su fundamento es la accin oxidante de la peroxidasa sobre el substrato, bencidina, en presencia de perxido de hidrgeno, apareciendo un precipitado amarillo ocre en el lugar del citoplasma en donde se ha producido la reaccin. La mieloperoxidasa se sintetiza en el retculo endoplasmtico rugoso, y pasa a las cisternas del aparato de Golgi ubicndose esencialmente en la granulacin 1 o azurfila. Se localiza sobre todo, en los grnulos primarios de los neutrfilos y precursores, as como en los grnulos de los eosinfilos y monocitos. La mieloperoxidasa se utiliza para discriminar entre celularidad blstica mieloide y linfoide, ya que los mieloblastos muy precoces sin estigmas de diferenciacin mieloide ya pueden ser mieloperoxidasa positivos. Fosfatasa alcalina

La fosfatasa alcalina es una hidrolasa perteneciente al grupo de las fosfomonoesterasas; hidroliza monosteres del cido fosfrico, acta a un pH de 9,1 a 9,6; ligeros de pH determinan una rpida inactivacin de la enzima. La demostracin citoqumica se basa en la hidrlisis de ciertos substratos, de los cuales se liberan unos productos intermedios que combinados con una sal diazoica dan un precipitado coloreado. La actividad de la FA granuloctica se observa como un precipitado pardo negruzco ubicado en el citoplasma. Se encuentra actividad FA en algunas clulas maduras y semimaduras de la granulopoyesis neutrfila (bandas y segmentados). Existen varios grados de positividad; por tanto en un ndice de actividad de FA podemos distinguir tres tipos de reaccin: grado 0: sin actividad enzimtica. grado I: con poca actividad enzimtica en forma granular nica o actividad dbil difusa en una parte del citoplasma, especialmente en la zona perinuclear. - grado II: intensa actividad granular o actividad difusa distribuida por todo el citoplasma granuloctico. El recuento se realiza sobre 100 granulocitos asignando a cada uno un grado; y a cada grado se la asocia un valor: grado 0=0, grado I=1, grado II=2. Se suman los valores y el nmero obtenido es el ndice de FAG, que tiene un valor mnimo de 0 y mximo de 200. El ndice normal oscila entre 20 y 40. Fosfatasa cida

Es una enzima hidroltica de las fosfomonoesterasas, acta sobre los steres del cido fosfrico; su pH ptimo de actuacin est entre entre 4,7 y 5,5. Se trata de una enzima de ubicacin lisosmica. La demostracin citoqumica es la hidrlisis del substrato naftol-AS-Bifosfato, el cual libera unos productos intermedios que al unise con una sal diazoica se observa un precipitado de color rojo anaranjado en el citoplasma. El 90% de las LAL de origen T dan una reaccin + intensa de localizacin centrosmica; y las de tipo B o no-T-no-B suelen ser -.

Esterasas

Son enzimas lisosomales manifestadas en muchas clulas sanguneas en cantidades variables. Ellas hidrolizan steres orgnicos y liberan el alcohol (naftol), el cual se une a una sal diazoica y forma un azocolorante que se deposita sobre el sitio de actividad enzimtica. Se pueden encontrar distintas variedades segn el substrato empleado. Se utilizan 4 substratos: naftolAS-C-cloroacetato, naftol-AS-D-acetato, alfa-naftil-acetato, alfa-naftil-butirato, que hidrolizados en presencia de una sal diazoica obtenemos precipitado insoluble en el lugar de la reaccin. Al utilizar como substrato el naftol-AS-C-cloroacetato (CAE) se detecta una esterasa que es especfica de la granulopoyesis neutrfila en la que es + a partir del mieloblasto y se expresa en forma de un precipitado rojo anaranjado muy brillante. Se utiliza para reconocer clulas blsticas mieloides, si bien su aparicin es ms tarda que la de la mieloperoxidasa aunque iguala a sta en especificidad. (Dr. Altafulla 2003) Que poblaciones celulares se encuentran aumentadas en alergias Los individuos atpicos producen cantidades elevadas de IgE en respuesta a alrgenos ambientales, mientras que los individuos normales originan generalmente otros isotipos de Ig, como IgM y IgG, y en poca cantidad IgE. El antecuerpo IgE es responsable de la sensibilizacin de los mastocitos y proporciona el reconocimiento del antgeno en las reacciones de hipersensibilidad inmediata. (Abbas A. 2012.) Cules son las enfermedades autoinmunes y cul es su causa Las enfermedades autoinmunes son aquellas causadas por la autoinmunidad del cuerpo, esto se produce por el fallo de los mecanismos de tolerancia normales frente a lo propio, el sistema inmunolgico no es capaz de diferenciar entre tejido sano y enfermo, lo que da lugar a reacciones contra las clulas y tejidos del cuerpo. Se ha identificado ms de 80 enfermedades de este tipo, de las cuales en su mayora son hereditarias y atacan mas a mujeres que ha hombres. Como por ejemplo: Anemia hemoltica auntoinmune.- las protenas de la membrana del eritrocito son atacadas por opsonizacin, fagocitosis y lisis mediada por el complemento, esto causa hemlisis y anemia. Prpura trombocitopnica autoinmune.- las protenas de la membrana de la plaqueta son atacadas por opsonizacin y fagocitosis lo que causa hemorragias en el cuerpo. (Abbas A. 2012.) CONCLUSIONES Se pudo observar la presencia de clulas sanguneas en el frotis realizado. Algunas clulas comparten caractersticas en comn por lo que no se pudo diferenciar todas las clulas existentes en el frotis sanguneo. BIBLIOGRAFA Abbas A. 2012. Inmunologa celular y molecular. Sptima Edicin. Elsevier. Barcelona, Espaa.

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