CROMATOGRAFIA EN PAPEL

CONCEPTO Cromatografa es un procedimiento fisicoqumico que permite separar los componentes a sustancias integrantes de una mezcla en movimientos por adsorcin o separacin diferencial de estos componentes sobre la superficie estacionaria o inmvil. Existen 2 clases bajo ese concepto: la de papel y la de capa fina. Comparacin entre la cromatografa del papel y la de capa fina o delgada PAPEL uestra en miligramos !a resolucin depende manc#a. $"pida desde %&min '%&#r. (uena separacin de CAPA FINA uestra en miligramos la uy r"pida desde minutos #asta + a 2 (uena separacin de sustancias

de

concentracin y el di"metro de la #oras. #idrofbicas e #idroflicas. sustancias .uede usar disolvente an#idro. circular. deben estar .uede ser flexible o rgido. aplicacin especial de agua circular ascendente) $equiere #orizontal) absorbente. *istancia a recorrer de 0'2&cm. 1umerosos adsorbentes. ,til para seguir el proceso de una reaccin o separacin de platos para seleccionar

#idrfilas) para #idrofilita se requiere /scendente raramente) #orizontal o papel especial. !os disolventes de saturados

descendente) soporte flexible.

(asta cortar el papel *istancia a recorrer de 2&'+&& cm. !imitado a papel y derivados reaccin

,til para seguir el proceso de una puede ser cuantitativo. o separacin de platos /decuado puede ser cuantitativo. disolventes para cromatografa en columna. ASPECTOS TEORICOS Y MECNICOS DE LAS CROMATOGRAFAS EN PAPEL Y CAPA DELGADA disolventes para cromatografa en

-nadecuada para la seleccin de columna.

El proceso cromatografico) empieza con la distribucin diferencial de un soluto o sustancia a absorber) entre dos fases) una de las cuales esta inmvil o estacionaria y la otra mvil. *isolvente o portaciones2 osea corresponde al paso sucedido a contracorriente de un soluto) entre numerosos embudos de separacin unidos secuencialmente a una seria de platos de destilacin que contiene el disolvente. /s la fase mvil se pone en equilibrio en una porcin de fase estacionaria donde vuelve a ponerse en equilibrio y a continuacin fluye #acia la tercera fase estacionaria y as sucesivamente alcanzando el equilibrio de reparto en cada una de ellos. 1erst resume esto en lo llamado coeficiente de reparto 3) que es el cociente de la concentracin del soluto en una fase mvil / y su concentracin en la fase estacionaria () una vez alcanzando el equilibrio a una temperatura determinada.

CARACTERSTICAS DEL PAPEL 4ormas comunes) son las marcas 5#atman en especial el numero + Existe tambi6n 7c#leid#er y 7c#8ell y ac#erey' 1agal.

!as caractersticas de transporte es gravitatoria de capilaridad) de adsorcin) de reparto e intercambio inico.

Caracter tica de alg!no papele Marca 5#atman 5#atman 5#atman 5#atman 5#atman 5#atman 5#atman 7'7 7'7 7'7 Grado + 2 % %m 9 9& 09& 0:; verde c 0:; naranja c 0:; blanco c Pe o gr"m# :< ;< +:0 +:0 ;2 ;0 :: E pe or mm &.+= &.+: &.%: &.%% &.2& &.2+ &.+ &.%2 &.22 &.+0 $if! in ; +2.0 ; ; 0 %!perficie 7uave 7uave $ugosa 7uave 7uave $ugosa uy 7uave $ugoso 7uave 7uave

!os papeles 8#atman + y % contienen ;:';;> celulosa) &.%'+.&> celulosa o &.9'&.:> de pentosanas) &.&+0'&.&%> de material soluble 6ter y &.&:'&.=> de material inorg"nico.

/lgunos papeles se pueden lavar con ?Cl para eliminar material inorg"nico que tienden a dar colas con // y alcaloides. 7e debe #acer una seleccin correcta de papel y disolvente para que sean ptimos la: a@ *ifusin molecular b@ !a difusin turbulenta c@ $esistencia a la transferencia de liquido / veces es necesario modificar la naturaleza del papel y lograr: .apel acetilado: Atil para sustancia #idrfoba .apel impregnado: Atil para sustancias moderadamente #idrfoba o #idrfila Bpuedo usar aceite de parafina) cauc#o) dimetil formida o aminos de alto peso molecular@. .apel cargado: Atil para sustancias org"nicas o inorg"nicas. .oco polares o inicas. 7e logra por dispersin de resinas poliestiremicas. -ntercambiadores de iones en la fibra celulosica. .apel de vidrio: se usa para condiciones extremas de temperatura y acidez. .apeles tratados: Atil para sustancias anfteras o con muc#os #idroxilos. SELECCIN DEL DISOLVENTE *eterminada la selectividad del sistema cromatografico. .ara la seleccin debo considerar la naturaleza qumica de la sustancia que deseo separar y la viscosidad y polaridad del disolvente.

TA&LA $E $I%OL'ENTE%( OR$ENA$O% POR POLARI$A$ $i ol)ente Cter petrleoB%&'=&@ ?exano (enceno Cter etlico Cloroformo /cetato etilo *icloroetano (utanol'2 /cetona Etanol etanol ?2& .iridina /c. Drg"nicos /cidez y alcalis inorg"nico !os disolventes generalmente son de 2 fases la org"nica y la acuosaBesto ultimo implica saturacin) para un buen desarrollo del cromatograma@ !a separacin) se debe en especial por la interaccin del soluto en ambos lquidos. Con tante $iel*ctrica +E, +.:: +.:: 2.2; 9.9< 0.2 =.++ +&.9 +0.0 2+.0 2= %+.2 :&.%< +2.:< 'i co idad en centipoi e #-.C %.2;& %.2;0 +.0=9 +.222 +%.092 +.99+ +.99; 9.2+& +.2;0 +.&&% +.09< +.&&& &.;<9

SISTEMA DE DISOLVENTES SEGN FAMILIA DE SUSTANCIAS Familia de ! tancia +. 7ustancia fuertemente insoluble en etanol %i tema de di ol)ente #idrfila ezcal del disolvente miscibles con BEjm. agua limitada o con solo un +&'9&>

/mino"cidos) azAcares@ valores $f o de ?2D. posiblemente con adicin de en butanol. 2. 7ustancias sales) "cidos. moderadamente !o mismo que en + adem"s de

#idrofila) mas soluble en etanol que mezclas con menor >de ?2D que en ?2D valores de $f E& en butanol y contengan disolventes pero polares) $f E+ en ?2D %.7ustancias arom"ticas como cloroformo) benceno) 6ter de petrleo) acetato de etilo. y !o mismo que el + y 2 de mezcla de

#eterocclicas valores de $f &.&0 y &.; disolventes con ?2D +:+) 2:+ e en ?2DBsi es necesario previa adicin incorporacin de variaos sales ) ?F y de "cidos) sales o amino"cidos@ alcaloides para disminuir valores de $f. 9. !pidos solubles en 6ter de petrleo a@ -gual que + Bel contenido de ?2D insoluble en ?2D.Galores de $f & en reduce los valores de $f@ al igual que ?2D a cero en butanol saturado en 2) ?2D. el 6ter de petrleo y otro #idrocarburo pueden reducir valores de $f pero por lo general forman colas. b@ ezcla el disolvente) donde el ?2D se sustituye parcial o totalmente para formar glicel) etc. c@ 7istema de fase invertida papel 0.Hcidos y bases #idrofobizado con siliconas) aceites) a@ !o mismo que + y 2 para impedir disociacin) se aIade "cido o alco#ol fuerte. b@ !o mismo que + se aIade "lcalis o "cidos para producir sal #idrofila.

VALORES DE Rf, Rx, hRf

Cromatografa unidimensional o radial el conjunto migratorio de una sustancia se describe en funcin de la relacin $f) sea el cociente de la distancia recorrida por la manc#a de la sustancia y la distancia recorrida al mismo tiempo por el disolvente. 7e considera una sustancia patrn este J$fK se llama J$xK 7i estos J$fK y J$xK se multiplica por +&&) se llama J#$fK y J#$xK respectivamente.

$f del componente C E cLa #$4 del componente C E cLa M +&& REPRODUCTIBILIDAD DEL Rf .ara poder llegar a una reproductibilidad del an"lisis debo: antener la c"mara de desarrollo con cambios de temperaturaE 0N C ezclar bien el disolvente y mantenerlo 2'% das a la ON C que se #ar" la cromatografa 7eleccionar el papel adecuado con marca y grosor. Comprobar correctamente las caractersticas del disolvente por

compuesto de referencia. Pna vez aplicada la manc#a deja que el papel se equilibre 29#r con la atmsfera de la c"mara. antener la c"mara cerrada. *ejar que el disolvente entre 2&'%&cm 7eguir instrucciones de secado y visualizacin de manc#as

minuciosamente.

PROCEDIMIENTO DE DESARROLLO

a, $e cendente

/, A cendente

c, Cromatoca0a

d, &idimen ional

e, C!niforme

f, Radial

MTODO PARA LOCALIZAR MANCHAS a@ Qumico: ejm: cromgenos b@ 4sico: ejm: P.G c@ $adioactividad: ejm: uso de palcas fotogr"ficas Pso de contador d@ 6todos biolgicos y enzim"ticos: ejm: deteccin de antibiticos !ocalizar amilasas

CROMATOGRAFIA EN CAPA $ELGA$A O FINA

INTRODUCCION El absorvente se mezcla en aglutinante a menudo yeso) esta mezcla se suspende en ?2D y se deposita en placa de vidrio o superficie rgida met"lica o material pl"stico) al secarse la sustancia queda ad#erida a la placa de vidrio y efecto del aglutinante como capa delgada y rugosa de &.+ a &.2 mm. ADSORVENTES Y CANTIDAD DE H O !UE SE A"ADE Nom/re Rel slice R Rel slice 1 Rel slice ? Rel slice <= Rel slice . y .s Rel slice 7R9+ Rel slice * y *7 Rel slice O!C Rel slice (io'7ilo Rel slice /* Dxido de aluminio R Dxido de aluminio ? Dxido de aluminio . Dxido de aluminio * Dxido de aluminio /= Celulosa %&&y %&&= Celulosa CC9+ Celulosa . Seiselgur R Pro)eedor erc3 erc3 erc3 (a3er Relsman $eeve /ngel 5alm allinroc3olt (io TGad /p#ed 7cience erc3 erc3 erc3 Relman (io'$ad erc3 5#atman (io'$ad erc3 Ad or/ente"ag!a +g"ml, %&L=&'=0 %&L=&'=0 %&L=&'<& %&L=& *0&L+&& *7=&L+&& %&L=& %&L+0 %&B=&'<&@ %&L=& %&L90 %&L9& %&L:&';& %&L:& 2&L=0 %&L%& +0L;& %&L=& +0L;& +0L;&

Estos absorventes pueden ser usados tambi6n a nivel industrial peor en condiciones diferentes. /lgunos absorbentes contienen sustancias fluorescentes como el silicato de zinc para ser visto en el P.G.

.ara reforzar la ad#esin se usa en general yeso yLo almidn) la celulosa aglutinante. El m"s comAn es el gel de slice. .ara escoger el absorbente) puede tomar en consideracin: a@ para lipofilos) se separan sobre oxido de aluminio) gel de slice) celulosa acetilada y poliamida. b@ para #idrfilos) sobre celulosa) celulosa con combinacin de iones Sleselger y poloamida. Existe excepciones pues es regla emprica por ejemplo. .igmentos de cloroplastos que son liposolubles y se separa f"cil en gel de slice) lo mismo que celulosa y oxido de aluminio. Rel de slice) separa bien alde#idos) cetonas) alcaloides) azucares) fenoles) esteroides) terpenoides) "cidos grasos) amino"cidos. El xido de aluminio es absorbente alcalino) pero puede prepararse como alAmina neutra) "cida) sensible para ?Cl) policiclos) alcaloides) aminas) vitaminas liposolubles y algunas cetonas. El oxido de magnesio es selectivo para compuesto arom"tico) sustancia doble enlace conjugado como carotenoides) la cantidad de aglutinante es yeso de +&'+0> y el almidn en +'%> SELECCIN DE SISTEMA DE DISOLVENTE %eleccin de i tema de di ol)ente *isolventes usados en CC* de algunos componentes org"nicos. 12 E teroide 3 e terole (enceno o benceno acetato de etilo B;:+ o ::2@ gel de slice R Cloroforma T etanos B;=:9@ Baluminio@ /cetato de etilo T ciclo#exano Bmezclas diversas@ B"cido silcico aglutinado con almidn@ (enceno T isopropenol Bmezcla diversas@ Bgel de slice F 1aD? 2>@ etanol T agua B;0.0@Bcelita impreganada con vaselina@ Ciclo#exano T #eptano B+:+@ Bgel de slice T 3eiselgur R@ Ciclo#exano T acetato de etilo B;;:0@BSeiselgur =@ (enceno T cloroformo B;:+@ Bgel de slice =@ (enceno T metanol B;:+@ Bgel de slice =

#2 Terpenoide ?exano o #exano acetato de etilo B:0:+0@ B"cido silicico aglutinado con almidn@ (enceno o mezcla de benceno T 6ter de petrleo o etanol Bmezcla diversa@ alumina Cter o Cter isopropilico acetona B0:< o +;:+@ gel de silice R. /ceites escenciales (enceno cloroforma B+:+@ gel de slice R Cter de petrleo Bgel de silice R@

42 'itamina etanol T tetracloruro de carbono xileno Bmezcla diversa@) cloroforma) alAmina. Cloroforma T 6ter de petrleo BalAmina@ etamil) propanol o cloroforma Bgel de slice@ /cetona T #exano Bsat) ?2D@ B;:+@ gel de slice impregnada de parafina.

52 6cido gra o Cter de petrleo T 6ter isopropilico T "cido ac6tico B<&:%&:+@ Bgel de slice R@ Cloroformo ' 6ter petrleo BalAmina@

-2 Alcaloide Cloroforma o etanol o #examo T cloroformo B%:<@ mas &.&0> dietilamina BalAmina@ (enceno T etanol B;:+@ Bgel de silice@

Cloroforma T acetona T dietilamida B%:9:+@ gel de silice

72 Fla)onoide y c!marina Cter de petrleo T acetato de etlo B2:+@ Bgel de slice R@ etanol ' ?2D B::2 o =:9@ Bpolcaprolactamo@ Oolueno T formato de etilo T "cido frmico B0:9:+@ Bgel de slice R@

M*todo de de arrollo en CCO +. *esarrollo unidimensional ascendente 2. *esarrollo #orizontal) radial o lineal %. *esarrollo mAltiple 9. *esarrollo en soporte cuneiforme 0. !ocalizacin de zonas de identificacin y documentacin. Locali8acin !as incoloras se revelan con cromgenos Oambi6n puede localizarse por la t6cnica de carbonizacin con alambre caliente) es un alambre de micron al rojo vivo que se acerca a + milimetro de altura de la placa) este carboniza material inorg"nico) presente en la placa. Compuestos fluorescentes puede detectar con P.G. anc#as radioactivas con contador geiger o auto radiografa.

$oc!mentacin: El cromatograma en capa delgada se puede tratar con vaselina lquido para #acerlo traslAcido y colocarlo en maquina fotocopiadora. !as capas delgadas de aluminio puede cubrirse de material J7oranK y colocarse en arc#ivo. pl"stico) tipo

Identificacin Con ayuda de $f de sustancia patrn las manc#as puede rasparse de la placa y eludirse con +&& T 2=& mil de un disolvente no polar an#idro) luego la solucin se deja sobre (r3 pulverizado) esto lo coloca en un microdisco y forma una pastilla para obtener un espectro en el -.$. Reacti)o delgada a2 Alco9ole : 1itrato armnico c6rico al => con ?1D % 2n: amarillo lo polialco#oles de manc#as amarillas. Dxinato de vanadio: anc#as rojizas sobre fondo negro azulado. anc#as rojizas sobre fondo cromgeno !tili8ado en cromatografa en papel y capa

Gainillina /c. 7ulfurico alco#oles superiores: *an manc#as verde azuladas. /2 Alcaloide : *isolucin de todo pletnico: anc#as azules) rojas o violetas.

$eactivos *regendorff: manc#a roja o anaranjada sobre un fondo amarillento .ermanganato de potasio: 1o definido .araformalde#ido ' "cido fosfrico: no definido c2 Amina /lizarina: /minas alif"ticas y amino alco#oles manc#as violetas sobre fondo amarillo Cl%fe ferrocianuro de potasio: /minas arom"ticas y triptamina dan manc#as azules. Gainillina T SD?: aminas y // dan manc#as de fluorescencia caracterstica.

4luroborato de p'nitrofenil diazonio /minas arom"ticas y fenatos con posicin orto y para libres dan manc#as roja o azul d2 Amino;cido : arina B2U%)9U0)< T penta oxiflavona: los amino "cidos aparecen con manc#as fluorescentes oscuras o verde amarillentas@ e2 A8!care y deri)ado /cido p'aminobenzoico: Como las pentosas dan manc#as rojas oscuras dan colores marrn oscuro. Cloruro de 2) %) 0 trifenil tetrazolio: glicosidos esteroides con grupo cetol y azucares reductores dan manc#as rojas /nisidina T "cido ft"lico: ?exosasa dan manc#as verdes) las pentosas dan colores rojo violaces las metil pentosas dan color verde amarillento las 2' desoxipentosas dan coloracin marron /ntrona anc#as amarilas) verdes o azules

1afresorcinol: !os azucares dan color verde o azul f2 6cido gra o /cetato cAprico ferrocianuro de potasio: *an manc#as rojas marrones. g2 E tere 1itroprusiato de 1a T D?1a las lactonas V)( insaturadas dan color entre rojo y violeta. ?idroxamato 4errico: colores violetas.

92

Per<ido *iclor#idrato de 1)1'dimetil p'fenilendiamina: rosa anc#as pArpuras en fondo

i2

In ecticida clorado *ifemilamina T Cl2Wn: anc#as de diversos colores

02

Cation Inorg;nico2 *ifeniltio carbazona Bditizona@: !os cationes como 1i) /g) (i) .b) Cd) y 7n dan colores rojo viol"ceo El 7n) da color rosa rojizo El ?gF2 da rosa amarillento El Cu da marrn. : ?idroxiquinolina Boxina@ los cationes como /l) Ca) (e) manc#as brillantes. Dtros cationes dan manc#as oscuras : ?idroxiquinolina T /cido Sojico *an manc#as amarillas) anaranjado y negros. arrn) verde) g) (e) 7r dan

=2

Amione Inorg;nico 2
!os amiones como NO3 , Cl 3 , BrO3 , IO3 , F 1itroso) dan manc#as

marrones