Preparacion de Medios de Cultivo

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERIA E.A.
P AGROINDUSTRIAL
PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVOS.
CURSO GRUPO DOCENTE CDIGO INTEGRANTES
: MICROBIOLOGA GENERAL : B : Blgo.Mblgo. Eterio Alva Muoz : 0201212035 : Muoz rojas Andrea Gisela
CICLO:
IV
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERA AGROINDUSTRIAL
NUEVO CHIMBOTE - PER
PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
I.
INTRODUCCION
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones fsicas ptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiologa por lo que un control en su fabricacin, preparacin, conservacin y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos. En los laboratorios de microbiologa se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo que pueden ser preparados en forma lquida o en forma slida. Usualmente para preparar un medio slido, se parte de un medio lquido al que se le aade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la slicagel. Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes en: Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la adicin de minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes, ni las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos. Medios definidos o sintticos: son los medios que tienen una composicin qumica definida cualitativa y cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos de investigacin.
De acuerdo al uso del medio de cultivo, stos se clasifican en: Medios de enriquecimiento: son medios lquidos que favorecen el crecimiento de un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el nmero de microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o ms sustancias inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepcin de los que se quieren cultivar.
Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser medios slidos y estn diseados para el aislamiento de microorganismos especficos. Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen ningn tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar caractersticas fisiolgicas de los microorganismos.
Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de sus constituyentes bsicos, o por simple rehidratacin de productos asequibles comercialmente (medios de cultivo deshidratados). Generalmente se prefiere el uso de los medios de cultivo deshidratados porque, adems de simplificar el trabajo, con ellos se tiene mayor probabilidad de obtener resultados reproducibles. Para su preparacin se deben tener en cuenta los siguientes aspectos: Prepararlos slo a partir de productos que provengan de fabricantes o proveedores que suministren productos de calidad. Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiolgica y fisicoqumica adecuada. Utilizar materiales de vidrio bien lavado y enjuagado con agua destilada o desmineralizada. Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilizacin. Nunca se deben exceder las condiciones sealadas por el fabricante.
II.
OBJETIVOS Al finalizar el trabajo prctico el estudiante estar en capacidad de: Conocer los medios de cultivo. Preparar adecuadamente medios de cultivo a partir de sus ingredientes y manejar adecuadamente la autoclave. OBJETIVOS GENERALES Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el desarrollo de los microorganismos in vitro. Manejar los instrumentos de uso rutinario, a la vez que imprescindibles, en el laboratorio de microbiologa
OBJETIVOS ESPECIFICOS Preparar medios de uso general en el laboratorio.
Conocer los nutrientes en cada medio preparado y su funcin que ejerce cada uno. Identificar colonias bacterianas en forma macroscpica. Conocer los materiales que utilizan en la preparacin de medios de cultivo. Conocer el modo de accin de la autoclave y su funcionamiento.
III.
FUNDAMENTO
La preparacin adecuada de un medio de cultivo nos permite disponer de los nutrientes y condiciones necesarias para favorecer el crecimiento de los microorganismos en el laboratorio. Las bacterias en la naturaleza, segn sus necesidades nutricionales, ocupan distintos nichos ecolgicos que satisfacen las mismas. En el laboratorio, para conseguir que una determinada especie bacteriana se desarrolle adecuadamente es necesario proporcionarle un ambiente artificial que las satisfaga igualmente. Esto se consigue mediante el uso de los llamados medios de cultivo Un medio de cultivo es cualquier sustancia lquida o slida que puede utilizarse en el laboratorio para que crezcan los microorganismos. Cualquiera que sea el medio debe incluir todo lo necesario para el crecimiento, lo cual vara segn el organismo que se quiere cultivar, pero que comprende: agua, compuestos nitrogenados, una fuente de energa y otros factores de crecimiento. Los requerimientos nutricionales de las bacterias varan desde los sencillos compuestos inorgnicos de las auttrofas hasta las complicadas vitaminas y factores de crecimiento de algunas hetertrofas. Algunos medios, como por ejemplo el agar nutritivo son capaces de soportar el crecimiento de muchas bacterias.
IV.
MATERIALES
4.1.
4.1.2. 4.1.3.
MATERIAL Material de vidrio Baln de fondo plano Bureta Equipo
Balanza Autoclave Cocina elctrica
4.1.4
Otros Algodn Pabilo Gasa Tijera Papel
4.1.
Reactivos para: Agar comn, Caldo comn y Agar Sabouraud. INGREDIENTES Glucosa Agua Destilada
Pectona
NaCl
Extracto de Carne
Agar
V.
PROCEDIMIENTO 1 Caldo comn Preparacin:
Peptona Cloruro de Sodio (NaCl) Extracto de Carne Agua Destilada
5 gr 5 gr 3 gr 1000 ml
(Bacteria)
Pesamos todos los productos para parte del agua destilada (50 ml) entonces:
Peptona para 50ml (agua destilada) 0.25 de Peptona 0.3g
NaCl para 50ml (agua destilada) 0.25g de NaCl 0.3
Extracto de Carne para 50 ml (agua destilada) 0.15 de Ext. De Carne 0.2g
Medimos 50 ml de agua destilada en una probeta.
Pasar aproximadamente la mitad de los 50 ml a un baln de fondo plano, donde se realizara la mezcla de lo anteriormente medido.
Vaciamos la mitad del agua destilada al baln de fondo plano
Pasamos los productos medidos al baln de fondo plano
Mezclamos
Sellar el baln de fondo plano con algodn, seda, hilo Pabilo, papel bond para evitar que entren los vapores al estar en la autoclave.
2 Agar comn (Bacteria)

Preparacin: Peptona 5 gr Cloruro de Sodio (NaCl) 5 gr Extracto de Carne 3 gr Agua Destilada 1000 ml Agar 15 gr Pesamos todos los productos para parte del agua destilada (50 ml) entonces:
Peptona para 50ml (agua destilada) 0.25 de Peptona 0.3g
NaCl para 50ml (agua destilada) 0.25g de NaCl 0.3
Extracto de Carne para 50 ml (agua destilada) 0.15 de Ext. De Carne 0.2g
Agar para 50 ml (agua destilada) 0.75 de Agar 0.8 g
Mezclamos
Vaciamos el resto de agua destilada al baln de fondo plano
Sellar el baln de fondo plano con algodn, seda, hilo Pabilo, papel bond para evitar que entren los vapores al estar en la autoclave.
3 Agar Saboraud (Hongo) Preparacin: Glucosa 40 gr Peptona 10 gr Agua Destilada 1000 ml Agar 15 gr Pesamos todos los productos para parte del agua destilada (50 ml) entonces:
Peptona para 50ml (agua destilada) 0.5 g de Peptona
Glucosa para 50ml (agua destilada) 2g de Glucosa
Agar para 50 ml (agua destilada) 0.75 de Agar 0.8 g
Mezclamos
Vaciamos el resto de agua destilada al baln de fondo plano fondo plano con algodn, seda, hilo Pabilo.
Sellar el baln de
Despus de realizado los medio de cultivos se le iba colocando el nombre y cubriendo con papel bond para evitar que se pierda o contamine el medio de cultivo.
Procedemos a calentar los tres balones de fondo plano, con la intencin de poder disolver totalmente los productos mezclados, para ello calentamos en el infernillo elctrico hasta notar la presencia de burbujas en la superficie del cultivo (no hervir).
VI.
RESULTADOS
VII.
CONCLUSIONES Al concluir la prctica se concluy en lo siguiente: Se logr conocer los diferentes medios de cultivos para sembrar microorganismos (Bacterias y Hongos). Aprendimos los pasos para elaborar un medio de cultivo, sus clculos respectivos de las cantidades necesarias para su preparacin. Se determin la importancia que tiene los medios de cultivo en una investigacin en el campo agrcola como en la medicina, industria alimentaria ya que gracias a ello se puede hacer el aislamiento de microorganismos tanto patgenos como benficos y as identificarlos para su posterior uso. Con la realizacin de la prctica de preparacin de medios para el cultivo de tejidos vegetales, se lograron los objetivos establecidos en la misma, proporcionando al alumno gran conocimiento de cmo prepararlo y cules son los nutrimentos necesarios de acuerdo a la consistencia que el medio de cultivo obtuvo. Es importante mencionar que se obtuvieron buenos resultados ya que se pudo hacer la preparacin del medio sin dificultad alguna
VIII.
CUESTIONARIO a) Glosario. Define los siguientes trminos. 1. Elemento traza
Un elemento traza es un compuesto qumico que es necesario en cantidades nfimas para el crecimiento, desarrollo y fisiologa de un organismo. Tambin puede ser referido como micronutriente. 2. Macronutrientes Los macronutrientes son aquellos nutrientes que suministran la mayor parte de la energa metablica del organismo. Los principales son glcidos, protenas, y lpidos. Otros incluyen alcohol y cidos orgnicos. Micronutrientes Son sustancias que el organismo de los seres vivos necesitan en pequeas dosis. Son indispensables para los diferentes procesos bioqumicos y metablicos de los organismos vivos y sin ellos moriran. Algunos de los ms importantes micronutrientes son el yodo, el hierro y la vitamina A. Existen otros micronutrientes como el zinc, el cido flico, el calcio y todas las vitaminas y minerales. Reactivo grado reactivo o qumicamente puro Son aquellos cuyo grado de impureza es mnimo, son utilizados en laboratorios. Peptona Son una variedad de hidrolizados protenicos derivados de casena, carne y vegetales, que en su presentacin final ofrecen una fuente efectiva de nitrgeno y carbono en otros nutrientes. En formulaciones adecuadas estimulan y promueven el crecimiento bacteriano. Cloruro de sodio El cloruro de sodio es un compuesto inico formado por un catin sodio (Na+) y un anin cloruro (Cl-), y como tal, puede reaccionar para obtener cualquiera de estos dos iones. Como cualquier otro cloruro inico soluble, precipita cloruros insolubles cuando es agregado a una solucin de una sal metlica apropiada como nitrato de plata Extracto de carne El extracto de carne es un caldo de carne muy concentrado, normalmente de vacuno. Se usa para dar sabor a carne a diversas recetas, y para elaborar consoms y sopas.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Glucosa La glucosa es un monosacrido con frmula molecular C6H12O6. Es una hexosa, es decir, contiene 6 tomos de carbono, y es una aldosa, esto es, el grupo carbonilo est en el extremo de la molcula (es un grupo aldehdo). Es una forma de azcar que se encuentra libre en las frutas y en la miel.
9.
Agar Agar o agar-agar es una gelatina vegetal de origen marino. Qumicamente el agar es un polmero de subunidades de galactosa; en realidad es una mezcla heterognea de dos clases de polisacridos: agaropectina y agarosa. El agar nutritivo es usado como medio de cultivo para el crecimiento de bacterias y hongos, pero no para virus (aunque los virus bacterifagos crecen frecuentemente en bacterias cultivadas en agar).
10. Autoclave Una autoclave es un recipiente de presin metlico de paredes gruesas con un cierre hermtico que permite trabajar a alta presin para realizar una reaccin industrial, una coccin o una esterilizacin con vapor de agua. Su construccin debe ser tal que resista la presin y temperatura desarrollada en su interior. La presin elevada permite que el agua alcance temperaturas superiores a los 100 C. La accin conjunta de la temperatura y el vapor produce la coagulacin de las protenas de los microorganismos, entre ellas las esenciales para la vida y la reproduccin de stos, cosa que lleva a su destruccin.
b) Haz un diagrama de flujo del procedimiento a seguir en esta prctica.
PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO 1. Medio puro.

Peptona cloruro de sodio. 50g Extracto de carne agua destilada.
pesar.
[Balanza analtica].
3g y1000ml
pesar.
Agar. 15g
[Balanza analtica].
aadir.
[Homogenizamos].
aadimos.
[50 ml de aguapara disolver la sustancia].
[El baln de fondo plano con algodn, seda, hilo
sellamos
Pabilo, papel bond para evitar que entren los vapores al estar en la autoclave]. [Sometemos en una cocina elctrica las mezclas de hicimos en el laboratorio].
calentamos
llevar a un autoclave.
anotar
2. Caldo comn.
Peptona y cloruro de sodio. 0.25g Extracto de carne.
pesar.
[Balanza analtica].
0.15g y1000ml
.
pesar.
[Balanza analtica].
aadir.
[Disolverlas en la cantidad].
aadimos.
sellamos
calentamos
anotar
3. Agar comn.
Peptona cloruro de sodio. 0.25g Extracto de carne agua destilada.
pesar.
[Balanza analtica].
3g y1000ml
pesar.
Agar. 0.75g
[Balanza analtica].
aadir.
[Homogenizamos].
aadimos.
sellamos
calentamos
anotar
4. Medio saboraud.
Peptona y glucosa. 0.5 y 2g Extracto de carne agua destilada.
pesar.
[Balanza analtica].
3g y1000ml
pesar.
Agar. 0.75g
[Balanza analtica].
aadir.
[Homogenizamos].
aadimos.
sellamos
calentamos
anotar
IX.
BIBLIOGRAFIA http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedra Micro/10_Preparaci%C3%B3n_de_medios_de_cultivo.pdf http://www.slideshare.net/WARAUYA20/medios-de-cultivosmetodologa-y-usos http://www.slideshare.net/Pashmina19/medios-de-cultiv0 http://yactivany.blogspot.com/2012/03/practica-n3-preparacion-demedios-para.html http://www.unavarra.es/genmic/microgral/manual%20practicas%20 micagral.pdf http://www.ecologia.unam.mx/laboratorios/evolucionmolecular/docu mentos/ClaseProcariontes/Alejandra/Pr%C3%A1ctica%204%20%20 Medios%20de%20cultivo.pdf http://es.wikipedia.org/wiki/Elementos_traza

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