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Qum. Nova vol.28 no.1 So Paulo Jan./Feb.

2005
http://dx.doi.org/10.1590/S0100-40422005000100021

DIVULGAO

Cncer e agentes antineoplsicos ciclo-celular especficos e ciclo-celular no especficos que interagem com o DNA: uma introduo

Cancer and cell cicle-specific and cell cicle nonspecific anticancer DNA-interactive agents: an introduction

Vera Lcia de AlmeidaI; Andrei LeitoI; Luisa del Carmen Barrett ReinaI; Carlos Alberto MontanariI; Claudio Luis DonniciI, *; Mriam Teresa Paz LopesII
I

Departamento de Qumica, Instituto de Cincias Exatas, Universidade Federal de Minas Gerais, CP 702, 31270-901 Belo Horizonte - MG II Departamento de Farmacologia, Instituto de Cincias Biolgicas, Universidade Federal de Minas Gerais, CP 702, 31270-901 Belo Horizonte - MG

ABSTRACT The chemotherapy agents against cancer may be classified as "cell cyclespecific" or "cell cycle-nonspecific". Nevertheless, several of them have their biological activity related to any kind of action on DNA such as: antimetabolic agents (DNA synthesis inhibition), inherently reactive agents (DNA alkylating electrophilic traps for macromolecular nucleophiles from DNA through inter-strand cross-linking ISC - alkylation) and intercalating agents (drug-DNA interactions inherent to the binding made due to the agent penetration in to the minor groove of the double helix). The earliest and perhaps most extensively studied and most heavily employed clinical anticancer agents in use today are the DNA inter-strand cross-linking agents. Keywords: anticancer agents; cycle-(non-)specific agents; DNA inter-strand crosslinking (ISC agents).

CNCER: DEFINIES E ESTATSTICAS


O cncer uma das doenas que mais causam temor na sociedade, por ter se tornado um estigma de mortalidade e dor. Na verdade, a palavra cncer de origem latina (cancer) significando "caranguejo"1 deve ter sido empregada em analogia ao modo de crescimento infiltrante, que pode ser comparado s pernas do crustceo, que as introduz na areia ou lama para se fixar e dificultar sua remoo. Atualmente, a definio cientfica de cncer refere-se ao termo neoplasia, especificamente aos tumores malignos2, como sendo uma doena caracterizada pelo crescimento descontrolado de clulas transformadas. Existem quase 200 tipos que correspondem aos vrios sistemas de clulas do corpo, os quais se diferenciam pela capacidade de invadir tecidos e rgos, vizinhos ou distantes. Estatisticamente, em pesquisa realizada pela Organizao Mundial da Sade, o cncer a terceira causa de bitos no mundo com 12%, matando cerca de 6,0 milhes de pessoas por ano. Atualmente, a segunda causa de mortes por doena no Brasil, estimando-se em 2002, 337.535 casos novos e 122.600 bitos1,2 (Figura 1).

Os fatores de risco de cncer podem ser encontrados no meio ambiente ou podem ser hereditrios2,3. A maioria dos casos (cerca de 80%) est relacionada ao meio ambiente, onde encontramos um grande nmero de fatores de risco. Entende-se por ambiente, o meio em geral (gua, terra e ar), o ambiente ocupacional (quando insalubre), o ambiente social e cultural (estilo e hbitos de vida) e o ambiente de consumo (alimentos, medicamentos). As mudanas provocadas no meio ambiente

pelo prprio homem, os hbitos e estilos de vida adotados pelas pessoas podem determinar os diferentes tipos de cncer1. Entretanto, no nosso pas, uma representao espao-geogrfica (Figura 2) das taxas brutas de incidncia para mulheres e homens (100.000 de cada) estimadas para o ano 2002 segundo a regio mostra que difcil estabelecer uma correlao ambiental que explique as maiores incidncias de neoplasia. Como entender bioquimicamente a neoplasia e a sua proliferao? As alteraes que geram as neoplasias podem ocorrer em genes especiais denominados protooncogenes, que a princpio so inativos em clulas normais. Quando ativados, os protooncogenes transformam-se em oncogenes, responsveis pela malignizao (transformao) das clulas normais (Figura 3)3. Estas clulas diferentes so, ento, denominadas cancerosas, ou melhor, tumorais.

Essas clulas alteradas passam ento a se comportar de forma anormal, multiplicando-se de maneira descontrolada. Com a constante multiplicao celular, h a necessidade de que novos vasos sangneos sejam formados para que haja a nutrio destas clulas, em um processo denominado angiognese. A manuteno e o acmulo de massa dessas clulas formam os tumores malignos e elas tambm podem adquirir a capacidade de se desprenderem do tumor e de migrarem, invadindo inicialmente os tecidos vizinhos, podendo chegar ao interior de um vaso sangneo ou linftico e, atravs destes, disseminarem-se, chegando a rgos distantes do local onde o tumor se iniciou, formando as metstases2,3. As clulas cancerosas so, geralmente, menos especializadas nas suas funes que as suas correspondentes normais. Conforme as clulas cancerosas vo substituindo as normais, os tecidos invadidos vo perdendo suas funes2,3; assim por exemplo, a invaso neoplsica dos pulmes gera alteraes respiratrias; com isto h a disfuno orgnica que pode levar falncia do rgo ou, em casos mais graves, leva morte do paciente. Cabe ressaltar que, na verdade, oncologia mdica a especialidade na medicina que foca o tratamento sistemtico do paciente com cncer com quimioterapia e outros tipos de tratamento3.

PROCESSO DE CARCINOGNESE: ESTGIOS E CLASSIFICAES


O processo de carcinognese2-4, ou seja, de formao de cncer, em geral d-se lentamente, podendo levar vrios anos para que uma clula cancerosa origine um tumor detectvel. Esse processo passa por vrios estgios antes de chegar ao tumor: - Estgio de iniciao: o primeiro estgio da carcinognese. Nele as clulas sofrem o efeito de um agente carcinognico (agente oncoiniciador) que provoca modificaes em alguns de seus genes. Nesta fase as clulas encontram-se geneticamente alteradas, porm ainda no possvel se detectar um tumor clinicamente. Exemplos de substncias qumicas carcingenas: sulfato de dimetila, metilnitrossuria, cloreto de vinila, aflatoxinas, dimetilnitrosoamina e benzopireno. - Estgio de promoo: As clulas geneticamente alteradas sofrem o efeito dos agentes cancergenos classificados como oncopromotores. A clula iniciada transformada em clula maligna, de forma lenta e gradual. Para que ocorra essa transformao, necessrio um longo e continuado contato com o agente cancergeno promotor. A suspenso do contato muitas vezes interrompe o processo nesse estgio. - Estgio de progresso: o terceiro e ltimo estgio e caracteriza-se pela multiplicao descontrolada, sendo um processo irreversvel. O cncer j est instalado, evoluindo at o surgimento das primeiras manifestaes clnicas da doena. Os fatores que promovem a iniciao ou progresso da carcinognese so chamados de carcingenos3. O fumo por exemplo, um agente carcingeno completo, pois possui componentes que atuam nos trs estgios da carcinognese. O cncer classificado de acordo com o tipo de clula normal que o originou, e no de acordo com os tecidos para os quais se espalhou. Isso o que pode se chamar de classificao primria2-4. Pelo que se sabe sobre classificao primria do cncer, quase todos os tipos podem ser colocados em um dos seguintes grupos, onde o sufixo oma significa literalmente tumor: 1) Carcinomas: So os tipos mais comuns de cncer, originando-se de clulas que revestem o corpo, incluindo a pele (ectodermais) e uma srie de revestimentos internos (endodermais), como os da boca, garganta, brnquios, esfago, estmago, intestino, bexiga, tero e ovrios, e os revestimentos dos dutos mamrios, prstata e pncreas5. H tambm os carcinosarcomas, tumores geralmente de alta malignidade, derivados de dois tipos de tecidos embrionrios e os teratomas, derivados de trs tipos de tecidos embrionrios 2. 2) Sarcomas: Originam-se de tecidos de suporte em vez dos de revestimento, tais como ossos, tecido gorduroso, msculo e tecido fibroso de reforo, encontrados na maior parte do corpo. 3) Linfomas: Originam-se de clulas conhecidas como linfcitos, encontradas em todo o organismo, particularmente em glndulas linfticas e sangue. Os linfomas so divididos em Hodgkin e no-Hodgkin, de acordo com o tipo de clula afetada. 4) Leucemia: Este cncer origina-se de clulas da medula ssea que produzem as clulas sangneas brancas. Na leucemia ocorre uma concentrao muito elevada

de glbulos brancos (de cerca de 7,5.10 3/mm3 para 105-106/mm3)6 causando problemas nos quais as clulas anormais no funcionam apropriadamente, alm de restringirem o espao da medula ssea para que novas clulas sejam produzidas. 5) Mielomas: Malignidades nas clulas plasmticas da medula ssea que produzem os anticorpos. 6) Tumores das clulas germinativas: Desenvolvem-se a partir de clulas dos testculos e/ou dos ovrios, responsveis pela produo de esperma e vulos. 7) Melanomas: Originam-se das clulas da pele que produzem pigmento, os melancitos. 8) Gliomas: Originam-se a partir de clulas do tecido de suporte cerebral ou da medula espinhal. Raramente ocorre metstase. 9) Neuroblastomas: Tumor geralmente peditrico (8 milhes de crianas at 15 anos de idade por ano; 80% dos casos com at 4 anos de idade) derivado de clulas malignas embrionrias advindas de clulas neuronais primordiais, desde gnglios simpticos at medula adrenal e outros pontos3.

TIPOS DE TRATAMENTO QUIMIOTERAPIA


Existem trs tipos principais de tratamento para o cncer: cirurgia, radioterapia e quimioterapia4,5. Mais recentemente tem-se usado a terapia de fotorradiao com derivados hematoporfirnicos (HTP)6 e a imunoterapia7, sendo que o objetivo de cada um destes tratamentos erradicar o cncer, normalmente por meio da terapia combinada, onde associado mais que um tipo de tratamento. A tcnica cirrgica pode levar remoo de tumores com eficcia, se no houver metstase; no caso da leucemia por exemplo, costuma ser necessrio o uso de outros tipos conjuntos de terapia5, incluindo o transplante de medula. A radioterapia (geralmente raios gama, radioistopos como cobalto-60, raios-X e at prtons e msons pi negativos) usada comumente em conjunto com a cirurgia, com incremento da eficincia do tratamento. Mesmo isoladamente, a radioterapia pode diminuir tumores grandes, diminuir a recorrncia e a chance de metstase, sendo uma metodologia antineoplsica muito usada; entretanto, mesmo que sejam usados os sensitizadores (que diminuem os efeitos colaterais) o tratamento por radiao sujeito a severas limitaes5. A tcnica antineoplsica de fotorradiao6,7 um importante avano, pois permite a localizao e a destruio com maior seletividade pelo uso de radiao especfica com fluorescncia ( de 620-640 nm), para deteco e destruio de tumores com uso de fibras ticas. Contudo, pelo acmulo de porfirinas em rgos normais ainda no se obtm uso clnico interno, s em tumores superficiais. Atualmente, o tratamento antineoplsico tem usado o estmulo das prprias defesas do corpo pela imunoterapia, com o interferon , interleucina-2 e mesmo o BCG (Bacillus Calmette Gudes) mas, apesar de promissora, a imunoterapia ainda uma tcnica antineoplsica adjuvante, usada especialmente para destruir as clulas cancerosas residuais aps interveno cirrgica ou outro tratamento6. Com esses mtodos de tratamento citados, um tero dos pacientes consegue ser curado atravs de medidas locais (cirurgia ou radioterapia), que so eficazes

quando o tumor ainda no sofreu metstase por ocasio do tratamento. Todavia, nos demais casos, a neoplasia caracteriza-se pelo desenvolvimento precoce de micrometstases, indicando a necessidade de uma abordagem sistmica, que pode ser efetuada, em cerca de 60-70% dos casos3 com a quimioterapia, que ser abordada mais detalhadamente neste trabalho. Cabe ressaltar, que no se abordar neste texto os agentes antineoplsicos biorredutveis, geralmente usados para tratamento de tumores slidos, que foram tratados em reviso recentemente publicada8. O objetivo primrio da quimioterapia destruir as clulas neoplsicas, preservando as normais. Entretanto, a maioria dos agentes quimioterpicos atua de forma noespecfica, lesando tanto clulas malignas quanto normais5,7, particularmente as clulas de rpido crescimento, como as gastrointestinais, capilares e as do sistema imunolgico. Isto explica a maior parte dos efeitos colaterais da quimioterapia: nuseas, perda de cabelo e susceptibilidade maior s infeces6,8. Porm, o corpo recupera-se destes inconvenientes aps o tratamento, e o uso clnico desses frmacos exige que os benefcios sejam confrontados com a toxicidade, na procura de um ndice teraputico favorvel 4,5,7. Um fator importante para o xito da quimioterapia a precocidade no diagnstico do tumor3 (entre 109 e 1012 clulas tumorais, ou seja, tumor com tamanho inferior a 1 cm). Assim, desejvel na quimioterapia usar doses mais altas, capazes de atingir o maior nvel de morte celular possvel; considerando-se um tumor de 1 g (cerca de 109 clulas) cada ciclo de terapia mata cerca de 99% das clulas; imprescindvel repetir-se o tratamento em mltiplos ciclos para matar todas as clulas tumorais 9. Porm, em tumores maiores, por exemplo de 100 g (1011 clulas), mesmo com a eficincia do agente antineoplsico de 99,9%, ainda ter-se-iam clulas cancerosas demais para a continuidade eficiente do tratamento, o que corrobora a necessidade preemente do diagnstico neoplsico precoce. Nos casos mais favorveis, com a quimioterapia atual, pode-se obter maior expectativa de vida, tendo-se em diversos casos at cerca de 66% de pacientes livres do cncer por mais de 10 anos. No caso dramtico do linfoma de Burkitt, que mata milhares de crianas na frica, em at trs meses aps o incio da metstase, pode-se ter a cura plena de 60% dos doentes, com quimioterapia especializada. Muitos estudos esto sendo feitos para a maior eficincia da quimioterapia e a combinao de diversos agentes antineoplsicos, tendo-se conseguido resultados surpreendentes com ndices de cura de 75 a 90% em diversos tipos de cncer. Sendo assim, importante que se esteja informado sobre os aspectos qumicos e bioqumicos destes quimioterpicos e traz-se neste artigo um breve relato sobre os principais agentes antineoplsicos mais usados.

CLASSIFICAES DE QUIMIOTERPICOS ANTINEOPLSICOS


A importncia clnica dos agentes antineoplsicos induz a necessidade de estudo sistemtico, o que primeiramente deveria ser feito com o uso de classificaes qumicas, levando-se em conta os diferentes grupos funcionais presentes na estrutura das molculas dos agentes anticancergenos. Contudo, a variedade de tipos de compostos utilizados em quimioterapia oncolgica to grande, que tal classificao s pode ser feita indiretamente. Calabresi e Chabner, em texto clssico9, descreveram uma classificao conveniente dos frmacos antineoplsicos onde o critrio classificatrio baseia-se no ponto de interferncia no mecanismo de ao das diferentes etapas da sntese do DNA, transcrio e transduo (Figura 4). Entretanto, os autores consideram esta classificao arbitrria pois, por exemplo, os agentes hormonais, entre outros, no so classificveis desta forma.

De fato, existem diversos mecanismos que esto envolvidos na evoluo de uma clula normal para uma clula potencialmente maligna10, mas a maior parte deles interferem na diviso celular e, assim, o conhecimento do ciclo celular ou dos seus mecanismos importante para que haja a compreenso da etiologia do cncer7 (Figura 5a). AFigura 5b, mostra uma correlao aproximada dos ciclos metablicos com os tipos de agentes quimioterpicos antineoplsicos 3 mais comuns.

A clula que no est replicando apresenta-se na fase G0. Nesta fase, o DNA apresenta-se super-enovelado, com atividade nuclear baixa. Este estgio pode ser modificado para a fase G1, onde h a preparao da clula para a multiplicao, com a produo de constituintes celulares que sero essenciais para a nova clula que ser gerada, alm da preparao para a sntese de DNA, que ocorrer na fase S. Nas fases G1 e S existem diversos mecanismos reguladores que iro afetar a multiplicao celular. Os fatores de crescimento, como os produtos de oncogenes, ativam a multiplicao celular, enquanto que os controles de retroalimentao ("feedback") so inibidores da multiplicao celular. Estes controles so, por exemplo, genes supressores tumorais, que detm a replicao celular quando h

dano no DNA, para que ele seja reparado7. As interleucinas, dentre outras substncias, tambm afetam a replicao celular, entretanto seus mecanismos so obscuros. Outro mecanismo regulador a apoptose (morte celular programada), que provoca a morte da clula em detrimento da possibilidade da clula tornar-se alterada, podendo levar ao cncer11. Na fase G2 h a sntese de componentes para a mitose (diviso celular com manuteno do nmero de cromossomos especfico da espcie) como a produo do fuso mittico que feita na fase M. Aps a diviso do material nuclear h a citocinese (que a separao da clula me, formando as duas clulas filhas com suas organelas e demais constituintes celulares), finalizando o ciclo de replicao celular (retorna fase G0). A clula tumoral ou transformada no finaliza o ciclo de replicao celular (no retorna fase G0), assim passa da fase M para nova fase G1. Muitos frmacos eficazes contra o cncer exercem sua ao sobre as clulas que se encontram no ciclo celular, e so denominados frmacos ciclo-celular especficos (CCS) (Tabela 1). Um segundo grupo de agentes, denominados frmacos ciclocelular no especficos (CCNS), tem a capacidade de exterminar as clulas tumorais independentemente de estarem atravessando o ciclo ou de estarem em repouso no compartimento G0 (Tabela 1)5,7,9. Apesar deste trabalho tratar somente de agentes antineoplsicos que interagem com o DNA, cabe ao menos citar alguns outros tipos de agentes, como os hormonais e os produtos naturais ciclo-celular especficos. Os agentes hormonais no so citotxicos, por serem modulares de proliferao celular, e devem ser classificados parte; a ao hormonal depende de ligaes entre o hormnio e o seu receptor citoplasmtico especfico. Esta ligao provoca a sntese de RNA mensageiro que, por sua vez, direciona a sntese de novas protenas importantes para o crescimento e a multiplicao celular. A atividade antitumoral de vrios agentes hormonais depende da mesma seqncia de eventos, por vezes interferindo e bloqueando estes processos6. Por exemplo, hormnios sexuais so utilizados no tratamento do cncer das glndulas mamrias e prstata. Os hormnios sexuais esto relacionados com a estimulao, controle da proliferao e funo destes tecidos; de fato, o cncer pode ser inibido ou estimulado por alteraes apropriadas no equilbrio hormonal 8. Os produtos naturais ciclo-celular especficos so outro tipo de agente antineoplsico importante e eficiente, e que se refere a muitos frmacos usados na terapia clnica do cncer e que originalmente no so compostos sintticos. Dentre alguns produtos naturais citotxicos, usados clinicamente no tratamento de neoplasias, tm-se os alcalides vegetais (produtos naturais nitrogenados derivados biossinteticamente de aminiocidos) como: i) alcalides da vinca (vimblastina e vincristina)8 (Figura 6) ao pela inibio do fuso mittico, ligando-se s protenas microtubulares e, conseqentemente, interrompendo a diviso celular na metfase8; ii) taxol (Figura 6), ster alcalide derivado do teixo ocidental (Taxus brevifolia) e do teixo europeu (Taxus baccata), (conhecido comercialmente como Paclitaxel)8 ao tambm pela inibio do fuso mittico, dimerizao da tubulina e estabilizao dos tbulos, protegendo-os da despolimerizao, o que estabiliza resulta no bloqueio da multiplicao celular, o que resulta na perda da viabilidade celular8; iii) podofilotoxinas (ou epipodofilotoxinas)7-9, tendo-se como exemplos principais a etoposida (VP-16) e teniposida (VM-26), Figura 6, derivados semi-sintticos da podofilotoxina, extrada da raiz do podofilo (Podophyllum peltatum)7-9 ao pelo bloqueio das clulas nas fases S e G2 e inibio da enzima topoisomerase II, o que promove leso no DNA. Pode-se citar tambm o uso da enzima asparaginase (L-asparagina amino hidrolase, Elspar), particularmente em tratamento de leucemia aguda infantil 6-9, isolada de vrias bactrias, que atua pela diminuio catablica de asparagina srica, assim como dos nveis sangneos de glutamina. Nas clulas neoplsicas,

isto provoca a inibio da sntese de protenas, resultando no bloqueio da proliferao celular. Por ltimo digno de nota ressaltar o uso recente de vacinas antitumorais, ainda em fase de teste, atravs da interao antgeno-anticorpo visando a imunizao do organismo12.

Os agentes antineoplsicos mais antigos e mais usados so conhecidos como agentes alquilantes que, comprovadamente, interagem quimicamente com o DNA e no so ativos somente no processo de diviso celular. De fato, na quimioterapia so descritos muitos alvos que podem ser estudados com o intuito de se estabelecer novos frmacos antitumorais, sendo que o DNA apresenta-se como um dos alvos mais estudados13-16. As molculas com potencial atividade antitumoral citadas mais detalhadamente neste trabalho atuam no DNA (Figura 7).

a) o acar que compe o DNA (desoxirribose), o RNA (ribose) e o cido fosfrico; b) a fita dupla do DNA, mostrando as fendas menor e maior, alm das ligaes hidrognio entre os pares de base nitrogenadas Adenina (A), Timina (T), Citosina (C) e Guanina (G). O DNA tambm apresenta variaes estruturais (isoformas) dependentes do meio onde se encontra16, Figura 8a:

B-DNA: a forma fisiolgica mais encontrada, onde as interaes com as bases nitrogenadas promovem a formao da dupla hlice com rotao para a direita e das fendas menor e maior, seu dimetro de aproximadamente 20 , com espaamento entre os pares de base de 3,4 ; A-DNA: esta isoforma do DNA est presente em meio com baixa concentrao de gua, apresentando dimetro de aproximadamente 26 e espaamento entre os pares de base de 2,7 ; Z-DNA: possui a rotao da hlice para a esquerda, sendo bem diferente das outras duas isoformas. J foram detectados fragmentos de Z-DNA em alguns organismos procariotas e eucariotas.

O DNA tambm est enovelado em uma estrutura chamada super-helicoidal (Figura 8b). Macromolculas, como as histonas, servem como base para que o DNA possa estar superenovelado.

ANTINEOPLSICOS E INTERAO COM O DNA


Como mostrado na Tabela 1, os antineoplsicos17, so frmacos quase to heterogneos (quando consideradas suas caractersticas qumicas e mecanismos farmacolgicos) quanto os tumores envolvidos. De fato, diversos antitumorais muito utilizados clinicamente so substncias que apresentam mecanismo de ao ciclo-celular no-especfico e relacionado ao DNA (tipos como produtos naturais, complexos de coordenao de platina, agentes alquilantes e agentes intercalantes) mas, mesmo dentro desta subclasse tem-se grande heterogeneidade e possvel fazer uma subclassificao dos antitumorais em relao ao mecanismo de ao no DNA18: inibio da sntese de nucleotdeos: atravs do uso dos anlogos das bases nitrogenadas;

efeito direto no DNA: so os agentes alquilantes19 como as mostardas nitrogenadas, nitrossurias, complexos tipo cisplatina e outros. A bleomicina forma radicais livres que destroem o DNA, pois fragmenta as hlices, mecanismo diferente dos outros frmacos mostrados; ligantes que interagem na fenda menor do DNA 20: berenil, pentamidina e anlogos; alterando as propriedades de pareamento das bases: intercalantes21-23 como a proflavina, acridina, amsacrina; inibindo a DNA-girase: doxorrubicina7;

Assim, em uma classificao mais pormenorizada e ampla de agentes antineoplsicos que interagem com o DNA deve-se apresent-los de maneira fiel s diferenas nos mecanismos de ao, delineados a seguir8.

QUIMIOTERPICOS ANTINEOPLSICOS CICLO-CELULAR ESPECFICOS (CCS) POR AO METABLICA BLOQUEADORA DA SNTESE DE DNA
Agentes antimetablitos O desenvolvimento de frmacos com aes sobre o metabolismo intermedirio das clulas em proliferao importante do ponto de vista clnico, pois estes agentes so muito estudados e clinicamente empregados. Embora no se tenha ainda descoberto qualquer propriedade bioqumica peculiar compartilhada por todas as clulas cancerosas, as clulas neoplsicas possuem vrias diferenas metablicas quantitativas em comparao com as clulas normais, tornando-as mais suscetveis aos diversos antimetablicos ou anlogos estruturais das bases nitrogenadas 8. Os agentes antimetablicos (Figura 9) exercem seus efeitos principalmente por bloquearem bioquimicamente a sntese do DNA e, portanto, so restritos fase S do ciclo celular5,6,8. Pode-se citar alguns exemplos de antimetablicos utilizados clinicamente no tratamento do cncer, por meio das seguintes subclasses (Figura 9): Anlogo do cido flico: Metotrexato (MXT); Antagonistas das pirimidinas: Fluorouracil (5-Fluoroouracil; 5-FU) e Floxuridina (5-Fluorodesoxiuridina; FUDR); Citarabina (citosina arabinosdeo, ara-C). Anlogos das purinas:Mercaptopurina (6-mercaptopurina; 6-MP); tioguanina (6tioguanina;TG); Pentostatina (2'-desoxicoformicina); Fosfato de fludarabina (mono fosfato de 2-fluoro-arabinofuranosiladenina; Cladribina (2-clorodesoxiadenosina).

QUIMIOTERPICOS ANTINEOPLSICOS CICLO-CELULAR NOESPECFiCOS (CCNS) QUE INTERAGEM COM O DNA POR FORMAO DE LIGAES CRUZADAS
Conforme relatado, apesar de que at agora tem-se postulado que a atividade de frmacos anticancergenos pode ser classificada somente em agentes ciclo-celular especficos (CCS) ou ciclo-celular no especficos (CCNS), observou-se mais recentemente19,24 que dentre estes ltimos, o fator mais importante para a atividade antitumoral e potencialidade para seu uso no tratamento das diferentes neoplasias, que os antitumorais mais usados e estudados so agentes que geralmente atuam como eletrfilos sobre macromolculas nucleoflicas, particularmente o DNA (Figura 7). Contudo, apesar de se admitir que estes agentes no so ciclo-celular especficos, j se observou que as clulas so mais sensveis alquilao nas fases G1 e S do ciclo celular, apresentando bloqueio em G2 3,7. Estes agentes antitumorais formam comprovadamente ligaes cruzadas ( "Cross-Link") com as fitas ou filamentos do DNA10, podendo-se observar, como ilustrado na Figura 10, os diferentes tipos de ligaes cruzadas que podem ocorrer. Todas estas ligaes produzem leses no DNA, sendo que as provocadas pelas ligaes cruzadas interfilamentares ("InterStrand Cross-link ISC") so as mais citotxicas, pois a alquilao de um nico filamento de DNA pode at ser reparada facilmente, mas as ligaes cruzadas interfilamentares, como as produzidas por agentes alquilantes bifuncionais, exigem mecanismos mais complexos de reparao, podendo at inibir sua replicao10. H diversas classes de agentes antineoplsicos que tm este tipo de mecanismo de ao10, como os antitumorais mostrados a seguir, que sero abordados em relao s possveis ligaes cruzadas interfilamentares com o DNA.

Cabe ressaltar, primeiramente, que esses agentes alquilantes so fortes reagentes eletroflicos, como esquematizado na Figura 10 e no Esquema 1, formando ligaes covalentes por reao de alquilao com centros nucleoflicos do DNA, principalmente as bases purnicas e pirimidnicas. Estudos mais especficos de reatividade mostram o isolamento e a caracterizao de adutos entre alguns agentes alquilantes e o DNA19,24, como em alguns exemplos mostrados no Esquema 1. A eficincia da ao de agentes alquilantes j foi estudada por modelagem molecular25-26e outros estudos de planejamento racional 27,28 que evidenciam a correlao entre a distncia intramolecular dos centros eletroflicos destes agentes alquilantes e a distncia dos centros nucleoflicos nucleotdicos nitrogenados. Con tudo, apesar desta correlao estrutural, a presena de outros grupos nucleoflicos como os grupos amino, sulfidrila, hidroxila em outras molculas biolgicas, tambm alquilveis, explica os efeitos txicos destes agentes. Mostardas nitrogenadas Na verdade, os agentes alquilantes so antineoplsicos pioneiros 19,24 pois, em 1942, o agente alquilante tipo mostarda nitrogenada, meclorometamina, foi utilizado com sucesso para induzir remisso tumoral transitria em um paciente portador de linfoma; este acontecimento marcou o incio da era moderna de quimioterapia do cncer. Os agentes alquilantes so, tambm, os antineoplsicos mais estudados24,29 e considerados os agentes antitumorais mais usados na atualidade. Eles so capazes de formar ligaes interfilamentares com o DNA e necessitam ser metabolizados pelas fosfamidases (enzimas microssomais hepticas), para que seus metablitos possam exercer o efeito alquilante celular 29. O principal stio de alquilao no DNA a posio N7 da guanina, porm outras bases podem ser menos extensivamente alquiladas, como a adenina nas posies N1 e N3, a citosina no N3 e a guanina no O6, assim como grupos fosfatos e protenas associadas ao DNA. Dentro desta classe tm-se os frmacos Mecloretamina (Mustargen) e Clorambucil (Leukeran), alm da ciclofosfamida (Cytoxan), a Isofosfamida e o melfalam7,9 (Alkeran).

Nitrossurias So agentes antitumorais que precisam ser biotransformados nos seus derivados alquilantes por decomposio no enzimtica7. Formam diferentes adutos de alquilao com o DNA, porm a formao da ligao cruzada interfilamentar entre a posio N1 da deoxiguanosina e N3 da deoxicitosina a responsvel pela atividade citotxica30. Tambm alquilam o RNA e inibem a auto-reparao do DNA8. As nitrossurias utilizadas clinicamente so a Carmustina (BCNU), Lomustina (CCNU) e Semustina (metil-CCNU)7-9 (Figura 12). Estes agentes antineoplsicos so altamente lipossolveis, tornando-os teis no tratamento de tumores cerebrais7,31.

Triazeno Inicialmente considerado um antimetablito, o derivado triazeno Dacarbazina (DTIC) (Figura 12), funciona atravs de alquilao do DNA. A Dacarbazina exige ativao inicial pelo citocromo P-450, atravs de uma reao de N-desmetilao. Na clula alvo, a clivagem espontnea do metablito libera um componente alquilante, o diazometano9. Alquilsulfonatos So agentes alquilantes derivados dos steres alcanossulfnicos. Muitos destes compostos so ativos sobre numerosas clulas cancerosas, porm o mecanismo exato pelo qual exercem seu efeito citotxico no est totalmente elucidado 32. O frmaco Busulfan (Myleran) (Figura 13) e seus homlogos congneres so os nicos compostos dissulfonlicos que se tm mostrado capazes de formar ligaes

cruzadas interfilamentares com o DNA33. Uma subclasse interessante que deve ser citada a dos 2-cloroetil-metanossulfonatos. O [(2-cloroetil-sulfonil)-metil] metanossulfonato (clomesona) (Figura 13), apesar de apresentar atividade citotxica menor que a do Bussulfan e congneres, tem-se mostrado mais seletivo em relao ao DNA, quando comparado com as nitrossurias34.

Complexos de coordenao de platina Os antineoplsicos formados por compostos de coordenao com platina, como a cisplatina (cis-DDP, comercialmente Platinil , ou Platinol) e carboplatina (CBDCA, Paraplatin) (Figura 14), alquilam o DNA. O mecanismo de ao est relacionado com a inibio seletiva da sntese do DNA6,8,9. As propriedades citotxicas destes compostos, assim como de numerosos anlogos, tm sido atribudas sua habilidade de formar ligaes cruzadas do tipo interfilamentares como tambm intrafilamentares10. Mais recentemente, tem-se dado particular nfase capacidade da cisplatina em provocar mutaes no DNA 35 e alterar a ligao DNA-protena36,37. Os complexos de platina parecem ter efeito sinrgico com outros agentes antitumorais7.

Cisplatina Apesar de ter sido descrita h mais de 150 anos, s nos ltimos 30 anos que tem sido reconhecida como um potente agente antitumoral 38. O principal stio de ligao o N7 da guanosina, embora tambm ocorra interao covalente com a adenosina e citosina6,7,9,10. Ressalta-se que a cisplatina exerce acentuada atividade antitumoral nos cnceres genitourinrios, particularmente o testicular, ovariano e vesical; tambm usada no tratamento de carcinomas escamosos, como de cabea e pescoo, esfago e crvix, carcinoma de bexiga, tireides, endomtrio, estmago ou pncreas, de pulmo de pequenas e no-pequenas clulas, sarcomas, tumores trofoblsticos e coriocarcinoma6-9.

Carboplatina Anlogo da cisplatina, apresenta em sua molcula o grupo dicarboxilato, que mais estvel. A sua ligao com as protenas plasmticas menos irreversvel que a da cisplatina e sua excreo tambm mais rpida6,8,9. uma alternativa til para a cisplatina, uma vez que apresenta menor toxidez gastrointestinal e renal, porm com toxidez mielossupressiva7. Seu espectro de ao semelhante ao da cisplatina, excetuando-se talvez os sarcomas e os tumores trofoblsticos, para os quais parece ser menos eficaz6-9. Mais recentemente, tem-se desenvolvido complexos dimricos anlogos cisplatina mas, apesar de muito promissores, ainda esto em fase inicial de investigao39. Antibiticos naturais7-10 Antraciclinas: Representam uma importante classe de antibiticos antitumorais40. Evidncias sugerem que as antraciclinas apresentam trs mecanismos de ao. Um seria pela formao de ligaes com os grupos fosfolipdeos (carregados negativamente) da membrana celular, alterando sua fluidez, assim como o transporte de ons. Tambm promoveriam a formao do radical livre do oxignio e da semiquinona, atravs de um processo redutor enzimtico. Um outro modo de ao seria a formao de ligaes interfilamentares com o DNA, o que leva ao bloqueio da sntese do DNA e RNA e diminuio da atividade da topoisomerase II, promovendo a ruptura dos filamentos da macromolcula (DNA) 7,41. Apesar de usualmente estes antibiticos serem classificados como agentes intercalantes do DNA (que sero discutidos posteriormente neste trabalho) estudos mais recentes evidenciam que, alm da intercalao, h a formao de adutos de estrutura complexa por ligaes covalentes com o DNA 42. Os seus congneres, doxorrubicina e daunorrubicina (Figura 15) foram aprovados pela "FDA Food and Drug Administration" para uso geral7.

Mitomicina: A mitomocina C (Figura 16) um antibitico isolado de Streptomyces caespitosus. um agente alquilante biorredutor, que sofre ativao redutora metablica enzimtica5. Os metablitos formados alquilam o DNA atravs de ligaes cruzadas, similares s formadas com alcalides pirazolidnicos (que sero mostrados posteriormente), mas de maior complexidade43-45. Estes compostos

favorecem a produo de superxidos, que promovem danos de carter oxidativo no DNA46.

Dactinomicina (Actinomicina D, Coesmegen) (Figura 17): Antibitico antitumoral isolado de Streptomyces. Liga-se fortemente ao DNA, atravs de sua intercalao entre pares de bases adjacentes de guanina-citosina. Inibe todas as formas de sntese de RNA DNA-dependentes, sendo a formao de RNA ribossmico mais sensvel ao do frmaco. A replicao do DNA no to reduzida, porm a sntese de protenas bloqueada7.

Plicamicina (Mitramicina, Mithracin) (Figura 17): outro antibitico natural usado no tratamento do cncer, cujo mecanismo de ao parece envolver a ligao do frmaco ao DNA atravs de um complexo antibitico-Mg2+. Esta interao interrompe a sntese de RNA dirigida pelo DNA. Bleomicina (Figura 17): Sua ao deve-se ligao do frmaco ao DNA, produzindo quebras filamentares e inibio da sua sntese. Mesmo que o efeito citotxico deste antibitico esteja relacionado formao de ligaes com o DNA, este frmaco classificado como CCS, uma vez que provoca um acmulo de clulas em G2. Alcalides pirrolizidnicos: apresentam-se como potentes antitumorais (prfrmacos), uma vez que os produtos de seu metabolismo oxidativo promovem a formao de ligaes cruzadas do tipo DNA-protena47 (Figura 18). O N-xido da Indicina possui potente atividade antitumoral. O grau de hepatoxicidade apresentado por este frmaco mnimo, quando comparado com os outros alcalides pirrolizidnicos. Isto se deve preferncia em formar ligaes cruzadas do tipo DNA-protenas, do que ligaes cruzadas interfilamentares (aps metabolismo oxidativo)10. Em geral, os alcalides pirrolizidnicos cclicos (de 12 membros) ,-insaturados so mais potentes que seus anlogos acclicos. A presena da insaturao em , tambm importante na diferena de potncia

observada. No se conhece como a presena do ciclo e a insaturao influenciam na potncia destes alcalides19,48.

Alm dos agentes antineoplsicos acima citados, existem outros frmacos utilizados no tratamento clnico dos diferentes tipos de cncer, que provavelmente atuam como agentes alquilantes, entre eles a Procarbazina (N-metil-hidrazina, MIH, Natulanar), que um derivado da metil-hidrazina, a Dacarbazina (DCIT-Home, Altretamina (Hexametilamina), Tiotepa (Trietilenotiofosforamida), Mitoxantrona (Novantrone). O Mitotano (o,p'-DDD, Lysodren) que um supressor crticosupra-renal, a Hidroxiuria (Hydrea), anlogo da uria que inibe a sntese do DNA, e os derivados do cido retinico, Etretinato e Isotretinona, so tambm utilizados como agentes antitumorais. Novos agentes antineoplsicos tm sido desenvolvidos e poderiam ser mostrados, mas ainda so muito recentes e por isto no sero aqui abordados7-10,19. Entretanto, cabe ressaltar os estudos mais recentes e promissores sobre os agentes quimioterpicos antineoplsicos intercalantes com o DNA.

QUIMIOTERPICOS ANTINEOPLSICOS CICLO-CELULAR NOESPECFiCOS (CCNS) QUE INTERAGEM COM O DNA POR INTERCALAO. LIGANTES NA FENDA MENOR. COMBILEXINAS
Neste tipo de agente antineoplsico as molculas tm como alvo principal a fenda menor do B-DNA, por um mecanismo de ao que se baseia na intercalao nos pares de base nitrogenadas CG (citosina e guanina) 49. A intercalao apresenta uma componente eletrosttica relacionada interao do tipo , existente entre os intercalantes e as bases CG, alm de complexos de transferncia de eltrons. Devido a esta caracterstica, os intercalantes so constitudos por anis aromticos fundidos, apresentando alta densidade eletrnica, Os antibiticos naturais tipo antraciclina, como a doxorrubicina e a daunorrubicina (Figura 15), como citado, tambm costumam ser classificadas como agentes intercalantes. A presena de anis aromticos fundidos constituindo o arcabouo molecular tambm permite observar outra caracterstica relacionada ao mecanismo de ao, que o espaamento das bases nitrogenadas do DNA. Os intercalantes interagem com as bases nitrogenadas CG provocando um espaamento devido ao volume molecular, formando um ngulo de aproximadamente 90 em relao ao eixo do DNA. A intercalao geralmente altera a estrutura do B-DNA, com o aumento no espaamento dos pares de base CG de 3,4 A para cerca de 7 A. descrito que o mecanismo de ao desta classe baseia-se na formao de um trmero constitudo pelo intercalante, DNA e topoisomerase II50. Este trmero seria estabilizado e interromperia a separao das bases nitrogenadas do DNA, necessria transcrio (para os ligantes na fenda menor tambm seria observada esta caracterstica). Algumas destas molculas foram descritas como ativas, tendo como alvo biolgico as topoisomerases I e II, entretanto a correlao entre a intercalao e a interao com a topoisomerase II ainda no foi definida, sendo objeto de diversos estudos recentes50. Dentre as diversas substncias com propriedade intercalante ao DNA, ressaltam-se algumas, como as antraciclinas (Figura 15), j relatadas em relao a outros possveis mecanismos de ao, e outros antibiticos como as actinomicinas (Figura 17)49 e as acridinas, como a prpria acridina no-substituda e a proflavina (Figura 19).

Ligantes na fenda menor Alguns agentes antineoplsicos interagem com os pares de bases nitrogenadas reversivelmente (por meio de contatos de van der Waals, interaes eletrostticas e, sobretudo, ligao hidrognio), geralmente atravs de conformaes tipo isohlicas e so classificados como molculas ligantes na fenda menor do B-DNA51. A caracterstica iso-hlica pode ser definida pela alterao conformacional destas molculas, para que haja a interao com os pares de base nitrogenadas que compem a hlice do B-DNA. As molculas mais representativas dessa classe so as amidinas aromticas52,53 e as lexitropsinas51 (Figura 20).

De fato, foi observado que em tal conformao iso-hlica, deve ocorrer possvel interao com os pares de bases nitrogenadas do DNA 54, descrita tambm nas estruturas cristalogrficas55-59. Os ligantes na fenda menor interagem preferencialmente com os pares de base AT (adenina e timina), pois a guanina possui um substituinte, que uma amina aromtica, voltada para o interior da fenda menor, causando impedimento estereoqumico. Diversas modificaes nas estruturas das amidinas aromticas, distamicina e netropsina foram elaboradas 51, visando alterar a seletividade aos pares de base AT (adenina e timina) para CG (citosina e guanina), aumentar o nmero de bases que iro interagir, alm de se tentar aumentar a afinidade das molculas s seqncias AT do DNA. Estudos esto sendo feitos buscando entender uma possvel interao destas molculas com a topoisomerase60.

Combilexinas So molculas antitumorais que possuem dois mecanismos de ao presentes em uma molcula (intercalao e ligao na fenda menor do B-DNA) separados por um grupo espaador61, Figura 21. As combilexinas foram planejadas a partir de modificaes moleculares feitas em dois ligantes na fenda menor, a netropsina e a distamicina, com a finalidade de se entender o mecanismo de interao e tambm poder alter-lo (como exemplo, tem-se lexitropsinas que interagem com pares de bases citosina e guanina)62, havendo ento a incluso do fragmento relacionado ao intercalante. Entretanto, como este intercalante no deveria estar ligado diretamente ao ligante na fenda menor, o que inviabilizaria um dos mecanismos de ao, foi planejado o uso de um grupo espaador62,63. Em sua maioria as combilexinas apresentam um mecanismo de ao predominante, onde ora o intercalante (maior afinidade pelas bases CG), ora o ligante na fenda menor (maior afinidade pelas bases AT) define a afinidade do hbrido pelo B-DNA. No bem compreendido o comportamento deste fenmeno, entretanto sabe-se que a afinidade pode estar relacionada estabilidade e s condies de interao das duas subunidades no DNA, uma vez que as interaes so bem prximas. Mais recentemente, vrios tipos de combilexinas foram estudados com modificaes em relao ao grupo espaador e ao fragmento intercalante, com resultados promissores61,64-71.

Existem na literatura alguns outros estudos de molculas complexas, como ilustrado na Figura 22, mas o nmero de molculas que pode, de fato, ser caracterizado como combilexina pequeno, devido definio de que apenas ligantes na fenda menor e agentes intercalantes podem constituir este tipo de molcula. Isto exclui outras molculas hbridas, como os conjugados ligante na fenda menor-alquilante72-74, intercalante-ligante na fenda menor e alquilante, alquilante e intercalante75, alm dos dmeros76. Os compostos cisplatina-distamicina e cisplatina-berenil so hbridos intercalantes-ligantes na fenda menor e a bisacridina , na verdade, um dmero da acridina.

CONCLUSES
A seguir so apresentadas, de uma forma geral 3-9, as aplicaes farmacolgicas dos agentes quimioterpicos antineoplsicos mais utilizados, mostrando as nominaes cientficas destes agentes e correlacionando-os com as principais aplicaes em tipos de neoplasias especficas, conforme a classificao dada inicialmente neste texto. Usos clnicos Carcinomas de mama Melfalam, ciclofosfamida, mitomicina, daunorrubicina, doxorrubicina, podofilotoxinas (etoposida e teniposida), vimblastina, vincristina, antiandrognios, antiestrognios, estrognios, metotrexato; taxol (casos avanados) Ifofosfamida, cisplatina, melfalam, clorambucil, fluorouracil, doxorrubicina, vincristina, tamoxifeno Cisplatina, carboplatina, doxorrubicina, ciclofosfamida, isofosfamida, progestina, estrognios, anti- estrognios Ciclofosfamida, fluorouracil Fluorouracil, anti-andrognio, prednosona, doxorrubicina, hidroxiuria, progestinas, estrognios, andrognios, leuprolida, amino-glutetimida Cisplatina, plicamicina, dactinomicina, podofilotoxinas, ciclofosfamida, metotrexato, vimblastina, bleomicina, doxorrubicina Cisplatina, doxorrubicina, vimblastina Cisplatina, carboplatina, mitomicina, fluorouracil Cisplatina, carboplatina, mitomicina, fluorouracil, Carmustina Cisplatina, carboplatina, mitomicina, doxorrubicina Cisplatina, carboplatina, doxorrubicina, fluorouracil, vincristina, Agente antineoplsico clinicamente usado

de ovrio endometrial de clon de prstata

de testculo de bexiga de pncreas de estmago de esfago de cabea e

gastrointestinal Mitomicina

pescoo de crvix de tireide de pulmo de garganta e boca Sarcomas Linfomas

vimblastina, bleomicina, metotrexato Cisplatina, doxorrubicina, mitomicina, vincristina, bleomicina Cisplatina, carboplatina, melfalam, bleomicina, fluorouracil Cisplatina, carboplatina, doxorrubicina, mitomicina, vincristina, vimblastina, podofilotoxinas Cisplatina e doxorrubicina Cisplatina, ciclofosfamida, doxorrubicina, dactinomicina, podofilotoxinas, metotrexato, ciclofosfamida, vincristina, vimblastina Doxorrubicina, ciclofosfamida, ifosfamida, clorambucil, vincristina, vimblastina, podofilotoxinas, pentostatina (clulas T), prednisona, citarabina, bleomicina, mecloretamina, dacarazina, carmustina Mitomicina e dacarbazina Citarabina Vincristina (casos agudos), clorambucil, metotrexato, predsinona, carmustina (aguda e crnica), doxorrubicina Tioguanina, citarabina, podofilotoxinas Vincristina, podofilotoxinas Metotrexato, vincristina, mercaptopurina, hidrxiuria Clorambucil Aspariginase Melfalam e vincristina

Melanonas Gliomas Leucemias Linfoctica Mieloblstica Linfoblstica Mieloctica Linftica Infantil Mieloma

Neuroblastoma Ciclofosfamida, dactinomicina, doxorrubicina, vimblastina

Mielomonoctica Vincristina, mercaptopurina

Estes dados demonstram que h uma ampla utilizao clnica dos agentes antineoplsicos quimioterpicos que interagem com o DNA para as diversas neoplasias, o que comprova a enorme importncia desta classe de frmacos e corrobora o grande interesse acadmico e tecnolgico no desenvolvimento de novos anlogos mais eficientes e menos txicos. Alm do mais, em vrios casos, a seletividade e eficincia destes agentes antineoplsicos tem sido aumentada por uso de mecanismos de liberao controlada ou de cito-proteo77. Contudo, apesar da ampla utilizao clnica dos agentes quimioterpicos antineoplsicos, especialmente os agentes alquilantes, que conseguem muitas vezes controlar o crescimento tumoral e at prolongar a vida dos pacientes em vrios anos, os oncologistas afirmam que a melhor ajuda para combater o cncer no o tratamento antineoplsico, mas o diagnstico precoce e, principalmente, a sua preveno.

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Recebido em 3/2/04; aceito em 19/5/04; publicado na web em 9/9/04

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