UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL

INSTITUTO DE QUMICA











VANESSA AGUIAR SANTESTEVAN








Caracterizao de fraes de petrleo
brasileiro por cromatografia gasosa


















Porto Alegre, 2008


UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL
INSTITUTO DE QUMICA








VANESSA AGUIAR SANTESTEVAN





Caracterizao de fraes de petrleo
brasileiro por cromatografia gasosa







Trabalho de concluso apresentado
junto atividade de ensino Trabalho
de Concluso de Curso - QUI do
Curso de Qumica, como requisito
parcial para a obteno do grau de
Bacharel em Qumica


Prof. Dr. Elina Bastos Caramo
Orientador

Dr. Ana Maria Geller
Mestranda Liliane D. Gruber
Co-orientadores






Porto Alegre, 2008


AGRADEO:


- A minha orientadora Prof. Dr. Elina Bastos Caramo, pela orientao,
apoio, sugestes e aprendizado;

- A co-orientao da Ana Maria Geller e Liliane D. Gruber, por todo
apoio, incentivo, ensinamentos, pela fora nos momentos difceis e
principalmente pela amizade;

- Ao Ncleo GCGC da Central Analtica (CA102) do Instituto de Qumica
da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, em especial J anana
Heberle Bortoluzzi pela colaborao e cromatogramas de GCGC;

- Aos colegas do laboratrio de Qumica Analtica Ambiental e
Oleoqumica (E-202) do Instituto de Qumica da Universidade Federal do
Rio Grande do Sul;

- E um agradecimento especial, aos meus pais, Vitor e Luiza, minha irm
Naiara, ao Roberto e amigos, por todo incentivo, apoio emocional e
moral dado durante o tempo da Graduao.





















PRODUO CIENTFICA GERADA POR ESTE TRABALHO:



SANTESTEVAN V. A.; CARAMO E. B, GRUBER L. D. A.; GELLER A. M.;
Caracterizao de fraes de petrleo brasileiro por cromatografia gasosa,
trabalho apresentado no XX Salo de Iniciao Cientfica (SIC), Porto
Alegre, RS, 23 de Outubro de 2008.

SANTESTAVAN V. A.; GRUBER L. D. A.; MORAES S. A; GELLER A. M.;
BORTOLUZZI J . H; DAMASCENO F. C.; MACHADO M. E.; ZINI C. A.;
CARAMO E. B.; Desenvolvimento de metodologia para o fracionamento de
amostras pesadas do petrleo brasileiro via HPLC para a caracterizao de
cidos naftnicos por cromatografia gasosa trabalho apresentado do 12
Congresso Latino-Americano de Cromatografia e Tcnicas Relacionadas
(COLACRO XII), Florianpolis, SC, realizado de 28 a 30 de Outubro de
2008.

GRUBER L. D. A.; MORAES S. A.; SANTESTAVAN V. A.; GELLER A. M.;
BORTOLUZZI J . H.; DAMASCENO F. C.; MACHADO M. E.; ZINI C. A.; E
CARAMO E. C.; Caracterizao de cidos naftnicos em fraes pesadas
de petrleo via cromatografia gasosa bidimensional abrangente, trabalho
apresentado do 12 Congresso Latino-Americano de Cromatografia e
Tcnicas Relacionadas (COLACRO XII), Florianpolis, SC, realizado de 28
a 30 de Outubro de 2008.


















SUMRIO

Pg.
SUMRIO............................................................................................... I
NDICE DE FIGURAS............................................................................ II
NDICE DE TABELAS............................................................................ IV
OBJ ETIVOS GERAIS............................................................................. 1
OBJ ETIVOS ESPECFICOS.................................................................. 1
RESUMO................................................................................................ 2
1. PETRLEO...................................................................................... 3
1.1 Histria do Petrleo.......................................................................... 4
1.2 Caracterizao do Petrleo.............................................................. 5
1.3 Refino do Petrleo............................................................................ 8

2. TCNICAS ANALTICAS.................................................................. 11
2.1 Cromatografia................................................................................... 11
2.2 Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (HPLC)............................ 11
2.3 Cromatografia Gasosa (GC)............................................................. 12
2.3.1 Cromatografia Gasosa Acoplada Espectrometria de Massas
(GC/MS)......................................................................................... 12
3.3.2 Cromatografia Bidimensional Abrangente (GCGC)..................... 14
3.3.2.1 Detector por Ionizao em Chama (FID).................................... 15

3. EXPERIMENTAL.............................................................................. 17
3.1 Solventes e Reagentes.................................................................... 17
3.2 Limpeza da Vidraria.......................................................................... 17
3.3 Amostra............................................................................................ 17
3.4 Fracionamento por Cromatografia Lquida de Alta Eficincia.......... 18
3.5 Anlise Cromatogrfica.................................................................... 19
3.5.1 Cromatografia Gasosa Monodimensional acoplada
Espectrometria de Massas............................................................ 19
3.5.2 Cromatografia Gasosa Bidimensional Abrangente com Detector
por Ionizao em Chama............................................................. 19

4. RESULTADOS E DISCUSSO........................................................ 21
4.1 Anlise das amostras....................................................................... 21
4.2 Reutilizao da fase estacionria.................................................... 29

5. CONCLUSO................................................................................... 31
5.1 Quanto ao fracionamento................................................................. 31
5.2 Quanto ao perfil cromatogrfico....................................................... 31
5.3 Quanto reutilizao da fase estacionria...................................... 31

6. REFERNCIAS................................................................................ 33

LISTA DE FIGURAS

Pg.
Figura 1: Esquema da torre de destilao atmosfrica do petrleo,
adaptado de Szklo (2005)............................................................... 9
Figura 2: Esquema da torre de destilao a vcuo do petrleo,
adaptado de Szklo (2005)................................................................ 10
Figura 3: Esquema de um sistema quadrupolo utilizado na separao
de ons, adaptado de Fenn (1993)................................................. 13
Figura 4: Esquema de um sistema GCGC, no qual mostrado a
coluna da 1 e da 2 dimenso, injetor, modulador, detector e o
forno secundrio.............................................................................. 14
Figura 5: Esquema de um detector de ionizao de chama tpico
(Collins, 2006).................................................................................. 16
Figura 6: Esquema dos solventes utilizados no fracionamento por
HPLC e os respectivos volumes...................................................... 18
Figura 7: Cromatograma obtido por GC/MS do padro C8 a C20 (5
mg/L, em hexano destilado). Condies cromatogrficas de
acordo com a tabela 4..................................................................... 21
Figura 8: Cromatograma obtido por GC/MS do padro C21 a C40. (5
mg/L, em hexano destilado). Condies cromatogrficas de
acordo com a tabela 4..................................................................... 22
Figura 9: Espectros de massas de alcanos saturados e cicloalcanos... 22
Figura 10: Perfil cromatogrfico dos hidrocarbonetos da amostra I
obtido por GC/MS. Os compostos marcados com (*) representam
compostos cclicos presentes na amostra....................................... 23
Figura 11: Perfil cromatogrfico dos hidrocarbonetos da amostra II
obtido por GC/MS............................................................................ 23
Figura 12: Perfil cromatogrfico dos hidrocarbonetos da amostra III
obtido por GC/MS, com presena de UCM de compostos cclicos
compreendida entre os tempos de reteno de C13 a C24. Os
compostos marcados com o (*) representam compostos cclicos
presentes na amostra...................................................................... 23
Figura 13: Perfil dos hidrocarbonetos da amostra IV obtido por
GC/MS, com presena de UCM de compostos cclicos

compreendida entre os tempos de reteno de C14 a
C23.................................................................................................. 24
Figura 14: Perfil cromatogrfico dos hidrocarbonetos da amostra V
obtido por GC/MS. 24
Figura 15: Perfil cromatogrfico dos hidrocarbonetos da amostra VI
obtido por GC/MS............................................................................ 24
Figura 16: Cromatograma da amostra VI para 1 dimenso por GC-
FID (a) e diagrama de cores por GCGC-FID (b), anlises
realizadas no mesmo equipamento................................................. 26
Figura 17: Diagrama de cores obtido por GCGC-FID, referente
ampliao que compreende o tempo de reteno do C8 ao
C23.................................................................................................. 27
Figura 18: Diagrama de cores obtido por GCGC-FID, referente
ampliao que compreende o tempo de reteno do C24 ao
C35.................................................................................................. 28
Figura 19: Diagrama de cores obtido por GCGC-FID, referente
ampliao que compreende o tempo de reteno do C36 ao
C40.................................................................................................. 28
Figura 20: Cromatograma obtido por GC/MS de trs extraes
consecutivas da amostra de nmero VI. Condies
cromatogrficas de acordo com a tabela 4...................................... 29
Figura 21: Cromatograma obtido por GC/MS das lavagens com DCM,
da amostra de nmero VI................................................................ 30














LISTA DE TABELAS

Pg.
Tabela 1: Composio qumica de um petrleo tpico (Thomas, 2001).......... 6
Tabela 2: Fraes tpicas do petrleo (Thomas, 2001)................................... 7
Tabela 3: Anlise elementar do leo cru tpico (% em peso) (Thomas,
2001)...............................................................................................................

8
Tabela 4: Condies utilizadas na cromatografia gasosa monodimensional
e bidimensional abrangente............................................................................. 20






























OBJETIVOS GERAIS


Desenvolver as habilidades bsicas e a rotina de manuseio de material
no laboratrio;
Aprendizagem das tcnicas analticas HPLC, GC/MS e GCGC-FID;


OBJETIVOS ESPECFICOS

Fracionar amostras de fraes pesadas de petrleo em diferentes
classes qumicas atravs da Cromatografia Lquida de Alta Eficincia
(HPLC);
Analisar a frao de compostos saturados atravs da Cromatografia
Gasosa Monodimensional acoplada Espectrometria de Massas
(GC/MS) e Cromatografia Gasosa Bidimensional Abrangente com
Detector por Ionizao em Chama (GCGC-FID);
Identificar e caracterizar os compostos por comparao de tempo de
reteno e espectro de massas.













1
RESUMO


O petrleo uma mistura complexa de hidrocarbonetos e outras
substncias, resultantes de processos fsico-qumicos sofridos pela matria
orgnica, que se depositou juntamente com fragmentos de rochas durante a
formao de estruturas sedimentares, milhes de anos atrs. Hidrocarbonetos
parafnicos, naftnicos, aromticos e olefinas constituem essencialmente o
petrleo. Em propores menores, encontram-se compostos contendo
nitrognio, oxignio, enxofre e metais pesados.
O petrleo um combustvel fssil, sendo classificado como uma fonte
de energia no-renovvel cujas reservas esto sendo esgotadas
gradativamente. O petrleo , ao mesmo tempo, uma das mais importantes
fontes de energia e de poluio ambiental.
Inmeras so as tcnicas utilizadas na caracterizao do petrleo. Neste
trabalho utilizou-se a Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (HPLC) no
preparo das amostras e para a identificao dos compostos foi empregada a
Cromatografia Gasosa acoplada Espectrometria de Massas (GC/MS) e a
Cromatografia Gasosa Bidimensional Abrangente (GCGC).
Foram fracionadas e analisadas seis amostras de fraes pesadas de
petrleo distintas entre si pelo intervalo do ponto de ebulio. Estas amostras
foram classificadas em trs tipos, decorrentes do perfil cromatogrfico e da
presena de mistura complexa no resolvida obtidos.
A presena de hidrocarbonetos alifticos e cclicos foram identificadas
atravs da anlise do espectro de massas, sendo caractersticos os ons com
m/z 57 e 55, respectivamente. Outro resultado observado que a slica-gel,
empregada como fase estacionria pode ser reutilizada para fracionamentos de
fraes pesadas de petrleo sem efeito de memria.





2
1. PETRLEO

Do latim petra (pedra) e oleum (leo), o petrleo no estado lquido uma
substncia viscosa, inflamvel, menos densa que a gua, com cheiro
caracterstico e cor variando entre o negro e o castanho-claro (Campos, 2005).
constitudo de uma mistura complexa de hidrocarbonetos com uma
quantidade bastante significativa de ismeros, alm de compostos contendo
nitrognio, oxignio e enxofre. A origem mista desta matriz torna difcil todas as
etapas de extrao, isolamento e caracterizao dos compostos que o
constituem (Oliveira, 2004). A natureza complexa do petrleo resultado de
mais de 1200 combinaes diferentes de hidrocarbonetos (Thomas, 2001).
As teorias sobre a origem do petrleo so controvertidas. Entre as
principais figuram a da origem estritamente inorgnica, defendida por Dmitri I.
Mendeleiev, Marcellin Berthelot e Henri Moissan, e a teoria orgnica, que
postula a participao animal e vegetal. De acordo com a primeira, o petrleo
ter-se-ia formado a partir de carburetos (de alumnio, clcio e outros
elementos), que decompostos por ao da gua (hidrlise), dariam origem a
hidrocarbonetos como metanos, alcenos, etc. Esses compostos, sob presso,
teriam sofrido polimerizao (unio de molculas idnticas para formar uma
nova molcula mais pesada) e condensao a fim de dar origem ao petrleo.
Contra essa concepo mais antiga, levanta-se a teoria orgnica, segundo a
qual a presena no petrleo de compostos nitrogenados, clorofilados, etc.
pressupe a participao de matria orgnica de origem animal e vegetal. Em
sua grande maioria, os pesquisadores modernos tendem a reconhecer como
vlida apenas a teoria orgnica, na qual destacam o papel representado pelos
microorganismos animais e vegetais que sob a ao de bactrias, formariam
uma pasta orgnica no fundo dos mares. Misturada argila e areia, essa
pasta constituiria os sedimentos marinhos que, cobertos por novas e
sucessivas camadas de lama e areia, transformar-se-iam em rochas
consolidadas, nas quais o gs e o petrleo seriam gerados e acumulados
(cepa.if.usp).
Segundo Campos (2005), o petrleo encontrado em bacias
sedimentares, isto , depresses na superfcie terrestre preenchidas por
sedimentos. As bacias petrolferas encontram-se no continente ou ao longo da
3
margem continental. A maioria das bacias petrolferas brasileiras se encontra
na plataforma continental.



1.1 Histria do Petrleo

O petrleo a riqueza natural, finita e no renovvel que modelou a
base tcnica do mundo atual e configurou o tipo de civilizao hoje existente.
No Antigo Testamento j se registra sua existncia. No sculo XVIII o
petrleo j era utilizado na indstria farmacutica. Os medicamentos serviram
como tnico cardaco e remdio para clculos renais, e seu uso externo
combatia dores, cimbras e outras molstias. (Oliveira, 2004). Entretanto, foi a
partir de meados do sculo XIX - Segunda Revoluo Industrial, que o uso do
petrleo se ampliou. No ano de 1852, a partir do carvo betuminoso e
substncias similares, o canadense Abraham Gesner obteve uma substncia
iluminante, incolor e de boa qualidade, a qual se chamou de querosene. A
funo desse leo perdurou apenas at as dcadas de 1870/80, quando
Thomas Edison conseguiu sistematizar e desenvolver o conhecimento em
energia eltrica, suplantando qualquer outra fonte de iluminao (Lima 2008;
Neto, 2007).
O marco inicial da explorao petrolfera foi a perfurao do famoso
poo do coronel Edwin Drake, na Pensilvnia (Estados Unidos), em 27 de
agosto de 1859. O interesse comercial pelo petrleo teve momentos de
reduo no final do sculo XIX, porm a partir da inveno dos motores a
gasolina e a diesel no final do sculo XX sua importncia se consolidou.
Durante todo o sculo XX, foi fator decisivo na geopoltica dos mais
importantes pases e o at os dias de hoje. As disputas por ele geraram
muitas guerras as mais conflagradas no Oriente Mdio - local do planeta onde
h mais petrleo. Ter leo ou gs em abundncia torna uma regio rica, mas
sujeita ao pesado jogo de presses, disputas e intrigas (Lima 2008).
No Brasil, o Imperador Pedro II em 1858, outorgou concesses para
explorao de carvo, turfa e folheto betuminoso a J os de Barros Pimentel e
Frederico Hamiltom Southworth nas margens do Rio Mara e Acarai (hoje
Ccia de Camamu, sul da Bahia). Em 30 de Novembro de 1864, o Imperador
4
deferiu outra concesso a Thomas Dennys Sargent, na mesma regio. (Neto,
2007). O monoplio estatal do petrleo brasileiro foi concedido durante o
Governo do Presidente Getlio Vargas em trs de outubro de 1953, com a
criao da PETROBRAS
1
, que deu partida decisiva nas pesquisas de leos
nacionais. Desde a sua criao, a PETROBRAS j descobriu petrleo nos
estados do Amazonas, Par, Maranho, Cear, Rio Grande do Norte, Alagoas,
Sergipe, Bahia, Esprito Santo, Rio de J aneiro, Paran, So Paulo e Santa
Catarina (Lima, 2008).


1.2 Caracterizao do Petrleo

Conforme Saravanabhavan e colaboradores (2007) relatam, o petrleo
bruto uma mistura complexa de produtos qumicos compostos com uma
vasta gama de polaridades e volatilidades, o que torna a sua caracterizao
qumica uma tarefa desafiadora.
Os constituintes das fraes do petrleo podem ser classificados em
dois grandes grupos:

a) hidrocarbonetos, que podem ser divididos em alcanos acclicos
(parafinas-C
n
H
2N+2
) de cadeia ramificada ou normal; alcanos cclicos
(naftenos-C
n
H
2n
); alcenos (olefinas) com cadeia normal ou cclica;
aromticos (pelo menos um anel benznico);
b) compostos contendo heterotomos, que possuem H, C, S, N, O, V, Ni ou
Fe; com frmula geral: C
n
H
2n+Z
X
a
Y
b
Z
c
, onde X, Y, Z so os
heterotomos, z representa a deficincia de hidrognio, a, b, c, so o
nmero de heterotomos.

De acordo com Oliveira (2004) os compostos contendo heterotomos
so classificados de acordo com o heterotomo presente na molcula:
compostos sulfurados, compostos nitrogenados, compostos oxigenados e
compostos contendo metais (Vandio, Nquel, Ferro entre outros).

1
A grafia original Petrobrs, acentuada na ltima slaba, foi modificada em 1994, quando foi
retirado o acento agudo para uniformizao internacional.
5
Na tabela 1 encontram-se a composio qumica de um petrleo tpico
segundo Thomas (2001):



Tabela 1: Composio qumica de um petrleo tpico (Thomas, 2001)
Compostos Quantidade em %
Parafinas normais 14
Parafinas ramificadas 16
Parafinas cclicas (naftnicas) 30
Aromticos 30
Resinas e asfaltenos 10


O petrleo normalmente separado em fraes de acordo com a faixa
de ebulio dos compostos. A tabela 2 mostra as fraes tpicas que so
obtidas do petrleo, de acordo com sua temperatura de ebulio, em C, com
sua composio aproximada e seu principal uso (Thomas, 2001).

















6
Tabela 2: Fraes tpicas do petrleo (Thomas, 2001)
Frao
Temperatura de
ebulio (C)
Composio
aproximada
Uso

Gs residual

- C
1
-C
2
gs combustvel.

Gs liquefeito
de petrleo-
GLP

At 40 C
3
-C
4
gs combustvel
engarrafado, uso
domstico e industrial.
Gasolina 40 - 175 C
5
-C
10

combustvel de
automveis, solvente.

Querosene 175 - 235 C
11
-C
12

iluminao,
combustvel de avies
a jato.


Gasleo leve

235 - 305 C
13
-C
17
diesel, fornos.
Gasleo
pesado
305 - 400 C
18
-C
25

combustvel, matria-
prima para
lubrificantes.


Lubrificante

400 - 510 C
26
-C
38
leos lubrificantes.
Resduo Acima de 510 C
38+

asfalto, piche,
impermeabilizante.

7
A composio qumica do petrleo muito dependente da fonte.
Segundo Rudzinskie e colaboradores (2000), verificaram que na Pensilvnia e
em Michigan leos brutos so em grande parte parafnicos e contm pouco ou
nenhum asfalto. Por outro lado, no Texas e na Califrnia os leos so ricos em
naftalenos. Os leos obtidos de diferentes reservatrios de petrleo possuem
caractersticas diferentes. Eles podem variar em sua cor (pretos, castanhos e
bastante claros), na densidade, viscosidade e liberando muito, pouco ou
nenhum gs. Outros reservatrios podem produzir somente gs. Entretanto,
todos eles produzem anlises elementares semelhantes. Os valores dos
principais constituintes num tpico leo cru encontram-se na tabela 3
(Rudzinski, 2000; Thomas, 2001).

Tabela 3: Anlise elementar do leo cru tpicos (% em peso) (Thomas, 2001)

Elemento % em peso
H 11-14
C 83-87
S 0,06-8
N 0,11-1,7
O 0,1-2
Metais <0,3





1.3 Refino do Petrleo

O refino do petrleo consiste na sua separao em grupos de
componentes dentro de uma faixa de destilao. Essa separao feita
atravs de fraes (tabela 2). Porm, antes dessa separao, o leo deve
passar por um processo de dessalgao. Essa etapa necessria para
remover os sais corrosivos presentes no leo cru, assim como minimizar o teor
de umidade do leo para menos de 0,3% e o teor de sedimento para menos de
0,015%.
Aps a dessalgao o leo segue para coluna de destilao vertical
presso atmosfrica. As formas mais leves se condensam e so coletadas no
topo da torre de fracionamento atmosfrico. As fraes intermedirias
8
condensam no meio da torre, e na base da torre fica a frao mais pesada,
chamada de resduo atmosfrico (RAT). A figura 1 apresenta um esquema da
torre de destilao atmosfrica (Oliveira, 2004; Szklo, 2005).










Figura 1: Esquema da torre de destilao atmosfrica do petrleo, adaptado
de Szklo (2005).


A frao residual da unidade de destilao atmosfrica (RAT) segue
para a unidade de tratamento a vcuo, que realiza a essa destilao a presso
reduzida (0,2 a 0,7 psi ou 40 a 100 mbar). O vcuo tem como objetivo reduzir
os pontos de ebulio das fraes pesadas e permitir a separao a
temperaturas menores. So produtos dessa destilao: Gasleo Leve (GOL),
Gasleo Pesado (GOP) e Gasleo Residual (GOR) ou Resduo de Vcuo. Na
figura 2 pode ser visualizado um esquema de uma torre de destilao a vcuo
(Campos, 2005; Szklo, 2005).
9
Figura 2: Esquema da torre de destilao a vcuo do petrleo, adaptado de
Szklo (2005).





















10
2. TCNICAS ANALTICAS

2.1 Cromatografia

Segundo definio da IUPAC (1993), a cromatografia um mtodo fsico
de separao, no qual os componentes a serem separados esto distribudos
entre duas fases, uma sendo denominada fase estacionria e a outra fase
mvel.
A cromatografia est fundamentada na migrao diferencial dos analitos
entre as fases mvel e estacionria. As diferentes interaes entre as duas
fases (distribuio, excluso, partio ou adsoro seletiva) dos componentes
um processo de equilbrio dinmico, no qual os analitos podem estar retidos
em uma das fases, proporcionando a separao (Aquino Neto, 2003).


2.2 Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (HPLC)

A cromatografia lquida de alta eficincia (HPLC) uma ferramenta
importante que consegue separar misturas com compostos similares.
Apresenta como vantagens a alta velocidade, presso, desempenho,
resoluo, eficincia e detectabilidade.
A HPLC utiliza coluna recheada com material especialmente preparado
e uma fase mvel eluda sob altas presses, porm necessita que a amostra
seja solvel na fase mvel. Essa tcnica possui uma excelente capacidade
analtica, com separao de at 100 componentes em uma amostra

(Collins,
2006).
Existem alguns mtodos de separao que so considerados clssicos,
pois possuem uma grande utilizao e aplicao. Dentre esses tm-se o
mtodo SARA (Saturados, Aromticos, Resinas e Asfaltenos), o mtodo PONA
(parafinas, olefinas, naftnicos e aromticos) e o mtodo SESC (cromatografia
por eluio seqencial de solventes) (Luz, 1998).
Conforme Islas-Flores (2005) relata, a separao de amostras de leo
cru usando HPLC simples e eficaz, apresentando resultados comparveis
tcnica tradicional de cromatografia lquida em coluna aberta.
11
2.3 Cromatografia Gasosa (GC)

A cromatografia gasosa uma das tcnicas analticas mais importantes,
sobretudo porque esteve disponvel comercialmente num perodo anterior
HPLC e tambm por ser aplicada pesquisa e anlises de rotina (Braithwaite,
1999).
A GC um mtodo fsico-qumico de separao dos componentes de
uma mistura atravs de uma fase gasosa mvel por uma fase estacionria
sorvente, que pode ser lquida ou slida (Aquino Neto, 2003). Deve ser
utilizada para separar compostos que se volatilizam, ou seja, misturas cujos
compostos tenham pontos de ebulio de aproximadamente at 300C e que
sejam termicamente estveis nesta condio.
Existem dois tipos de cromatografia gasosa: a cromatografia gs-slido,
na qual a separao baseia-se em mecanismo de adsoro e a cromatografia
gs-lquido que se baseia em mecanismos de partio das substncias entre a
fase lquida e a estacionria. A cromatografia gs-lquido corresponde a cerca
de 95% do total de aplicaes (Collins, 2006).
Um dos trabalhos mais completos sobre cromatografia aplicada ao
petrleo foi realizado por Wang (1997) que publicou uma reviso com 132
referncias de aplicaes da cromatografia gasosa para caracterizao de
hidrocarbonetos em petrleo.


2.3.1 Cromatografia Gasosa Acoplada Espectrometria de Massas
(GC/MS)

A cromatografia gasosa acoplada espectrometria de massas (GC/MS)
uma ferramenta muito utilizada para identificar centenas de componentes em
misturas orgnicas ou bioqumicas complexas (Collins, 2006).
O espectrmetro de massas usado como detector na GC, faz a
caracterizao dos compostos orgnicos atravs dos fragmentos inicos
produzidos pelo bombardeio das molculas na fase vapor com um feixe de
eltrons de energia. Este modo de ionizao denominado impacto eletrnico
(EI), cuja energia de bombardeamento pode variar de 12 a 100 eV.
12
Imediatamente aps a ionizao da amostra, as molculas ou os seus
fragmentos ionizados entram no setor de anlise do espectrmetro de massas,
onde sero separados de acordo com a razo massa/carga (m/z). O analisador
mais comumente utilizado em anlise no magntica o analisador de
quadrupolo (figura 3). A velocidade de varredura grande o suficiente para
permitir a obteno de diversos espectros de massas por pico eludo no
cromatgrafo (Braithwaaite, 1999; Silverstein, 1994).
Wang e colaboradores (1995) utilizaram a tcnica de GC/MS para
identificar e quantificar hidrocarbonetos em amostras de leo bruto, de leo
biodegradvel, amostra ambientais de derramamento de petrleo, com
diferentes concentraes, composies e natureza. Os compostos analisados
incluem alcanos normais (C8-C40), isoprenides, BTEX (benzeno, tolueno,
etilbenzeno e xilenos), alquil benzeno, HPAs (hidrocarbonetos policclicos
aromticos) e os seus homlogos alquilados, e biomarcadores triterpanos e
esteranos. O autor relata que GC/MS a tcnica mais apropriada para estudo
de intemperismo, acompanhamento das mudanas da composio qumica do
leo derramado. Aplicada tambm identificao da fonte do petrleo, para um
conhecimento detalhado da composio, uma vez que cada tipo de leo
apresenta uma distribuio diferente de componentes.




Figura 3: Esquema de um sistema quadrupolo utilizado na separao de ons,
adaptado de Fenn (1993).


13
2.3.2 Cromatografia Bidimensional Abrangente (GCGC)


Segundo Mhlen, a cromatografia gasosa bidimensional abrangente
(GCGC, Comprehensive Two-Dimensional Gas Chromatography) uma
poderosa ferramenta analtica que vem sendo aplicada em amostras
petroqumicas, devido ao fato de serem as mais complexas em Qumica
Analtica. Esta tcnica caracterizada pela utilizao seqencial de duas
colunas cromatogrficas, uma convencional e a outra de menor dimetro, de
forma que todo o efluente da primeira coluna ou uma parte representativa do
mesmo conduzido para a segunda atravs de um modulador.
O modulador tem a finalidade de focalizar e reinjetar os analitos em
bandas estreitas na segunda coluna utilizando gradientes trmicos. O processo
pode ocorrer por temperaturas elevadas, acelerando a eluio do soluto dentro
de uma banda estreita (abordagem de varredura trmica thermal sweeper),
ou atravs de sistemas criognicos, retardando a eluio dos analitos e
causando um aprisionamento on-column, ou estreitamento das bandas.
Esses so os dois moduladores mais utilizados atualmente. (Mhlen, 2006). A
figura 4 mostra uma ilustrao do sistema GCGC genrico, com duas colunas
(D1 e D2) e as opes com um ou dois fornos.

Modulador
D
M
I
1D
2D
D
M
I
D
M
I
1D
2D
Detector
Injetor
Segunda
dimenso


Primeira
dimenso
Forno secundrio

Figura 4: Esquema de um sistema GCGC, no qual mostrado a coluna da 1
e da 2 dimenso, injetor, modulador, detector e o forno secundrio.


14
Neste mbito, a GCGC apresenta inmeras vantagens, destacando-se
o aumento da informao analtica, maior capacidade de picos, alta
sensibilidade e seletividade. A estruturao nos cromatogramas por classes
qumicas, o denominado efeito telhado, facilita a observao das classes
qumicas presentes e auxilia na identificao de cada composto qumico. O
aumento na resoluo e sensibilidade, possibilita a identificao de centenas
de compostos antes no caracterizados com a cromatografia monodimensional
(1D-GC), como no caso das misturas complexas no resolvidas (UCM).


2.3.2.1 Detector por Ionizao em Chama (FID)

O detector por ionizao em chama (FID) muito usado em
cromatografia gasosa. Tal detector apresenta uma alta sensibilidade, largo
intervalo de resposta e baixo nvel de rudo, alm de resistente e fcil utilizao
(Skoog, 2002).
No detector chega o gs de arraste que se mistura com o hidrognio e
ar, produzindo uma chama. Quando compostos orgnicos, por exemplo,
pirolisam na temperatura da chama de hidrognio e ar, ocorre a formao de
ons e eltrons que podem conduzir eletricidade atravs da chama. Na figura 5
mostrado um detector de ionizao de chama (Collins, 2006).













15

Figura 5: Esquema de um detector de ionizao de chama tpico (Collins,
2006).



















16
3. EXPERIMENTAL

3.1 Solventes e Reagentes

Todos os solventes utilizados para o fracionamento foram grau HPLC:
hexano (Grupo Qumica, Rio de J aneiro), tolueno (Grupo Qumica, Rio de
J aneiro), metanol (Grupo Qumica, Rio de J aneiro) e a mistura 95:5 (v:v) de
diclorometano (DCM) (Tedia, Faifield, USA) e metanol (Grupo Qumica, Rio de
J aneiro). O hexano (Vetec, Rio de J aneiro) utilizado para o preparo das
solues padro e no empacotamento da coluna foi destilado em coluna do tipo
vigreux 25 cm de comprimento e a uma temperatura de 69C. A slica-gel
(Merck, Darmstadt, Germany) 20GF
254
, com dimetro de partcula <55 m),
usada para o empacotamneto da coluna de HPLC foi previamente ativada por 4
horas a uma temperatura de 150C.
Duas solues padro de hidrocarbonetos saturados lineares (de 8 a 20
tomos de carbono e de 21 a 40 tomos de carbono) ambas da Sigma-Aldrich,
com concentrao de 40 mg/L de cada composto em tolueno. A partir destas
solues foram preparadas duas outras solues de trabalho na concentrao
de 5 mg/L, em hexano.


3.2 Limpeza da Vidraria

Aps a lavagem da vidraria com gua e detergente, ela foi enxaguada
com gua destilada, seguida por acetona e, finalmente por heptano. Aps essa
seqncia de solventes, a vidraria foi colocada em forno a 300C por 30
minutos. Toda vidraria foi envolvida com papel alumnio para evitar
contaminao.


3.3 Amostra

Seis amostras de fraes pesadas de petrleo (com PE variando entre
250 a 500C) fornecidas pela PETROBRAS foram fracionadas e analisadas.
17
Cerca de 0,5 g de amostra foram dissolvidas em 25 mL de DCM grau HPLC. A
soluo foi ento filtrada usando membrana de PTFE RC, com poros de 0,45
m (Minisart-RC/SRP) e mantida em frasco de vidro mbar para evitar possvel
degradao fotoltica.


3.4 Fracionamento por Cromatografia Lquida de Alta Eficincia

Uma coluna de ao inox com dimenses 250 mm x 4,6 mm d.i. foi
empacotada com aproximadamente 2 g de slica gel em quantidade suficiente
de hexano destilado possibilitando a transferncia do recheio com pipeta
Pasteur e bomba de vcuo (GE Motors, modelo: 5KC36PN435GX). O
procedimento para o fracionamento da amostra utiliza um sistema de bombas
de duplo pisto (Shimadzu LC-20AT) e vlvula injetora manual com ala de
amostragem de 20 L. Os solventes utilizados para o fracionamento foram:
hexano, tolueno, metanol e a mistura 95:5 (v:v) de DCM e metanol. O fluxo do
fracionamento foi mantido constante a 2 mL/min. Durante o fracionamento fez-
se o controle da presso. Esse controle importante para avaliar a qualidade
do fracionamento, uma vez que, se a presso aumentasse significaria que
algum entupimento havia ocorrido; ou se ela diminusse, era porque estava
acontecendo algum tipo de vazamento no sistema. Na figura 6 pode-se
observar o esquema do fracionamento.



2,0 g de slica

Hexano Tolueno DCM/MeOH MeOH
140 mL 90 +90 mL 30 mL 30 mL
0,5 g de amostra em 25 mL de DCM
Compostos Compostos Compostos Compostos
Saturados
(F1)
Aromticos
(F2)
Polares Polares
(F3) (F4)
Figura 6: Esquema dos solventes utilizados no fracionamento por HPLC e
os respectivos volumes.
18
As fraes foram secas em evaporador rotatrio (RV 05-ST IP-H Ika-
Werke) e os extratos obtidos foram transferidos para vials com capacidade de
1,5 mL e novamente levados a secura com fluxo de nitrognio. A frao
contendo os compostos saturados (F1) foi dissolvida com 300 L de hexano
destilado e encaminhada para anlise GC/MS e GCGC-FID.


3.5 Anlise Cromatogrfica

3.5.1 Cromatografia Gasosa Monodimensional acoplada
Espectrometria de Massas

As anlises cromatogrficas foram realizadas em um cromatgrafo
gasoso com detector de massas, injetor split/splitless, GC/MS Shimadzu QP-
5050A, utilizando como mtodo de ionizao o impacto eletrnico (EI) com
energia de ionizao de 70 eV. A coluna capilar utilizada ser uma OV-5 (metil
silicone com 5% de grupos fenila) com 0,25 mm de dimetro interno, 0,25 m
de espessura de filme de fase estacionria e 30 m de comprimento.


3.5.2 Cromatografia Gasosa Bidimensional Abrangente com
Detector por Ionizao em Chama

Com a finalidade de comprovar os resultados obtidos por GC/MS,
realizaram-se anlises no GCGC-FID usando-se um equipamento GCGC-
FID LECO constitudo de um GC Agilent 6890N, com injetor split/splitless, um
modulador criognico com quatro jatos (quadjet), resfriado por nitrognio
lquido e um amostrador automtico 7683B Agilent Technologies. Os
parmetros da anlise encontram-se na tabela 4.

19
Tabela 4: Condies utilizadas na cromatografia gasosa monodimensional e
bidimensional abrangente
Parmetros GC/MS GCxGC-FID
- Coluna
OV-5
(30 m X 0,25 mm X 0,10 m)
1D: DB5 (30 m x 0,25 mm x 0,25 m)
2D: DB5-17 ms (1 m x 0,18 mm x
0,18 m)
- Injetor Split/splitless Split/splitless
- Temperatura do
injetor
280 C 280 C
- Volume injetado 1 L 1 L
- Modo de injeo Splitless splitless
- Fase mvel Hlio Hlio
- Vazo da fase mvel 1 mL/min 1 mL/min
- Rampa de
temperatura do forno
35C (1 min) 10C/min
150C 5C/min 300C
(26 min)
1D: 35C (1 min) 5C/min
300C (30 min)
2D: = 10C
- Temperatura da
interface/detector
300 C 320 C













20
4. RESULTADOS E DISCUSSO

4.1 Anlise das Amostras

Inicialmente, foram injetado duas solues padro, ambas com
concentrao de 5 mg/L. A primeira soluo padro consistia dos compostos
C8 (hidrocarboneto saturado no ramificado, contendo oito carbonos em sua
estrutura) at C20, enquanto a segunda soluo do C21 at C40 . A partir dos
tempos de reteno fornecidos pelos padres e dos espectros de massas
caractersticos dos hidrocarbonetos saturados, foi possvel identificar os
compostos nas amostras.
As figuras 7 e 8 mostram os cromatogramas obtidos por GC/MS das
solues padro C8-C20 e C21-C40, respectivamente.
A figura 9 mostra o espectro de massas caracterstico de um alcano
saturado (pico predominante m/z de 57) e um cicloalcano (pico predominante
m/z de 55).




Figura 7: Cromatograma obtido por GC/MS do padro C8 a C20 (5 mg/L, em
hexano destilado). Condies cromatogrficas de acordo com a tabela 4.

21

Figura 8: Cromatograma obtido por GC/MS do padro C21 a C40 (5 mg/L, em
hexano destilado). Condies cromatogrficas de acordo com a tabela 4.




Figura 9: Espectros de massas de alcanos saturados e cicloalcanos.


Os perfis cromatogrficos dos hidrocarbonetos analisados nas amostras
esto apresentados nas figuras 10 a 15. Todas as anlises foram realizadas de
acordo com as condies cromatogrficas apresentadas na tabela 4.
22
Figura 10: Perfil cromatogrfico dos hidrocarbonetos da amostra I obtido por
GC/MS. Os compostos marcados com o (*) representam compostos cclicos presentes na
amostra.
Figura 11: Perfil cromatogrfico dos hidrocarbonetos da amostra II obtido por
GC/MS.
Figura 12: Perfil cromatogrfico dos hidrocarbonetos da amostra III obtido por
GC/MS, com presena de UCM de compostos cclicos compreendida entre os
tempos de reteno de C13 a C24. Os compostos marcados com o (*) representam
compostos cclicos presentes na amostra.
23
Figura 13: Perfil cromatogrfico dos hidrocarbonetos da amostra IV obtido por GC/MS,
com presena de UCM de compostos cclicos compreendida entre os tempos de
reteno de C14 a C23.
Figura 14: Perfil cromatogrfico dos hidrocarbonetos da amostra V obtido por GC/MS.

Figura 15: Perfil cromatogrfico dos hidrocarbonetos da amostra IV obtido por GC/MS.



24

Observando as figuras de 10 a 15, nota-se que os perfis cromatogrficos
so distintos entre si. Analisando as figuras 10 e 11, pode-se perceber que as
amostras apresentam misturas complexas no resolvidas (UCM) semelhantes,
contendo hidrocarbonetos alifticos distribudos ao longo do cromatograma. J
nas figuras 12 e 13, percebe-se uma UCM com pice no tempo de reteno de
15 e 18 minutos, respectivamente. Nesses dois casos, alm dos compostos
alifticos, tm-se uma regio de gaussiana com grande quantidade de
compostos cclicos, identificados a partir do espectro de massas.
Em leos, o nmero de compostos no identificados conhecido como
UCM, mais de 250.000 compostos, indica uma enorme quantidade de
informaes geoqumicas no exploradas. Esse problema vem sendo superado
com o uso da cromatografia bidimensional (Ventura, 2008).
Nas amostras V e VI no h uma regio onde se perceba
exclusivamente a eluio de compostos cclicos, entretanto, percebe-se que os
componentes so hidrocarbonetos mais pesados.
Das amostras analisadas, a de nmero VI a que possui compostos
mais pesados, fato que pode ser justificado devido ao seu alto intervalo de
ponto de ebulio (450-500C). Assim, a GC/MS no foi suficiente para fazer
uma caracterizao mais detalhada de seus constituintes e foi proposto a
utilizao da cromatografia bidimensional abrangente.
Na figura, 16 tem-se a comparao da anlise cromatogrfica da
amostra VI, da dimenso (1D) e da dimenso (2D), ambas realizadas no
mesmo equipamento. As anlises foram realizadas de acordo com as
condies cromatogrficas apresentadas na tabela 4.



(b)
25

(a)
(b)
Figura 16: Cromatograma da amostra VI para 1 dimenso por GC-FID (a) e
diagrama de cores por GCGC-FID (b), anlises realizadas no mesmo
equipamento.


Observa-se nesse diagrama de cores um espao de separao maior,
onde no eixo X a separao dos compostos se d pelo PE da amostra e no
eixo Y a separao na segunda coluna, formando assim um espao
bidimensional.
Os compostos C9, C10, C14, C16, C18-C22, C28 e C37 foram
identificados na amostra pela cromatografia bidimensional abrangente. J os
compostos C36 e C39 identificados na anlise monodimensional foram falsos
positivos, uma vez que estes compostos no foram confirmados na anlise por
cromatografia bidimensional abrangente. Isto pode indicar a presena de outros
compostos que coeluriam com estes hidrocarbonetos na cromatografia
monodimensional e que so separados na GCGC de forma mais completa e
eficiente.

26
As figuras 17-19 mostram uma ampliao do diagrama de cores para
melhor visualizao da identificao dos compostos.
Nesses diagramas de cores, cada ponto preto representa um composto
sugerido pelo software aps o tratamento de dados aplicado, como menor
relao sinal rudo, rea mnima, largura do pico na primeira dimenso
e dos picos modulados. Os crculos representam a exata localizao dos
padres no diagrama de cores, estes foram criados atravs do
tratamento de dados imposto a amostra atravs da anlise dos padres
de hidrocarbonetos alifticos. Quando h um ponto dentro do crculo,
indica que pode ser um composto de interesse, ou seja, um
hidrocarboneto aliftico. No tempo de reteno do composto C16, por exemplo,
h mais de um composto o que estaria coeluindo na cromatografia
monodimensional, e fazendo uso da cromatografia bidimensional,
possvel identificar com maior preciso a presena do composto C16
nesta amostra.



Figura 17: Diagrama de cores obtido por GCGC-FID, referente ampliao
que compreende o tempo de reteno do C8 ao C23.


27

Figura 18: Diagrama de cores obtido por GCGC-FID, referente ampliao
que compreende o tempo de reteno do C24 ao C35.




Figura 19: Diagrama de cores obtido por GCGC-FID, referente ampliao
que compreende o tempo de reteno do C36 ao C40.

28
.2 Reutilizao da fase estacionria
As extraes por HPLC foram realizadas em triplicata. Para tanto, fez-se
4


ensaios com o objetivo de verificar a reutilizao da fase estacionria (slica-
gel). A figura 20 mostra o resultado cromatogrfico obtido nas anlises
realizadas por GC/MS da primeira, segunda e terceira extrao, para a amostra
VI. Percebe-se que o perfil cromatogrfico das trs extraes se manteve
semelhante, indicando que a reutilizao da fase perfeitamente possvel, o
que diminui o custo total da anlise.


Figura 20: Cromatograma obtido por GC/MS de trs extraes
Entre uma extrao e outra, eluiu-se pela coluna 50 mL de DCM, a fim
de m

consecutivas da amostra de nmero VI. Condies cromatogrficas de
acordo com a tabela 4.


re over possveis compostos que ainda estariam retidos na slica. Assim,
com o intuito de comprovar que no houve efeito de memria, foi feita a anlise
cromatogrfica deste DCM levado secura sob fluxo de nitrognio e
redissolvido a um volume de 300 L. A figura 21 mostra os cromatogramas
obtidos da anlise do DCM.

29

Figura 21: Cromatograma obtido por GC/MS das lavagens com DCM, da
amostra de nmero VI.


No cromatograma acima, pode-se observar que houve praticamente
uma linha de base, comprovando que a slica pode ser reutilizada, sem a
presena do efeito de memria.



















30
5. CONCLUSO

5.1 Quanto ao fracionamento

A tcnica HPLC mostrou-se eficiente quando comparada tcnica
tradicional de cromatografia lquida em coluna aberta em relao ao tempo de
anlise, reprodutibilidade e reduo de erros decorrentes do operador.
A hiptese de conter compostos saturados na primeira frao foi
concretizada, conforme mostraram os cromatogramas obtidos por GC/MS e
GCGC-FID, indicando que o procedimento foi realizado de maneira
satisfatria.


5.2 Quanto ao perfil cromatogrfico

O perfil cromatogrfico dependente do PE da amostra. Quanto maior o
PE, mais compostos pesados possui a amostra. E quanto mais complexa a
estrutura molecular dos compostos, mais difcil a identificao por GC/MS,
fazendo-se necessrio o uso da cromatografia bidimensional abrangente.
A cromatografia gasosa monodimensional no foi suficiente para
resolver algumas misturas complexas, percebendo-se a coeluio de
compostos como o C36 e C39 na amostra VI. A confirmao destes compostos
no foi possvel na GCGC.
A GCGC foi mais eficiente na identificao dos compostos presentes
na amostra VI, o que era esperado, em funo do maior espao de separao
e maior sensibilidade.


5.3 Quanto reutilizao da fase estacionria

A fase estacionria (slica-gel) pode ser utilizada numa seqncia de
trs extraes consecutivas, sem efeito de memria. Esse fato foi comprovado
com a semelhana do perfil cromatogrfico obtido para as trs extraes
realizadas com o mesmo recheio. A eluio de DCM entre uma extrao e
31
outra se mostrou eficiente como processo de lavagem da fase estacionria. A
anlise das lavagens da slica com DCM confirmou a ausncia de efeito de
memria.































32
6. REFERNCIAS

1. AQUINO NETO F. R.; NUNES D. S. S.; Cromatografia: princpios bsicos e
tcnicas afins. Rio de J aneiro: Editora Intercincia, 2003.
2. BRAITHWAITE A.; SMITH F. J ., Chromatographic Methods. 5 ed, Dordrecht: Ed.
Kluwer Academic, 1999.
3. CAMPOS M. C. V., Estudo dos cidos naftnicos do gasleo pesado derivado do
petrleo Marlim.. Porto Alegre: Tese de Doutorado em Cincia dos Materiais, Instituto
de Qumica, UFRGS, 2005.
4. COLLINS C. H.; BRAGA G. L.; BONATO P. S., Fundamentos de Cromatografia.
Campinas: Editora Unicamp, 2006.
5. DAROUICH T.A.; BEHAR F.; LARGEAU C.; BUDZINSKI H., Oil & Gas Science and
Technology, 60, No. 4, 681-695, 2005.
6. FENN, M. J . D.; CUSAMANO, J . A, J. of the Am. Soc. For Mass Spc. 4, 524, 1993.
7. http://www.cepa.if.usp.br/energia/energia1999/Grupo1A/origem.html, acessado em
05.08.2008.
8. ISLAS-FLORES C. A.; GONZALEZ, E. B.; GALEANA C. L., Energy & Fuels, 19,
2080-2088, 2005
9. IUPAC (Analytical Chemistry Division Commission on Analytical Nomenclature). Pure
Appl. Chem.; 1993. Disponvel em
10. http://old.iupac.org/publications/analytical_compendium/ . Acessado em 10 nov. 2008.
11. LIMA H., Petrleo no Brasil: A situao, o Modelo e a Poltica atual. Rio de J aneiro:
Ed Synergia, 2008.
12. LUZ L. P., Estudo do ultra-som como tcnica de extrao de carves e
caracterizao dos hidrocarbonetos poliaromticos. Porto Alegre: Tese de
Mestrado, Instituto de Qumica, UFRGS, 1998.
13. MHLEN C. V.; ZINI C. A.; CARAMO E. B., Quim. Nova. 29, No. 4, 765-775, 2006.
14. NETO J . B. O.; COSTA A. J . D., Rev. Bras. Econ, 61, 2007.
15. OLIVEIRA C. E. Estudos dos compostos nitrogenados em fraes do petrleo.
Porto Alegre: Tese de Doutorado em Qumica, Instituto de Qumica, UFRGS, 2004.
16. RUDZINSKI W. E.; AMINABHAVI T. M., Energy & Fuels, 14, 464-475, 2000.
17. SARAVANABHAVAN G.; HELFERTY A.; HODSON P.V.; BROWN R.S., J.
Chromatography A, 1156, 124133, 2007.
33
18. SILVESTEIN R. M.; BASSLER G. C.; MORRILL T. C., Identificao espectromtrica
de compostos orgnicos. 5 ed. Rio de J aneiro: Guanabara Koogan, 1994.
19. SKOOG D. A.; Holler F. J .; Nieman T. A., Princpios de Anlise Instrumental. 5 Ed.
So Paulo: Bookman;, 2002
20. SZKLO S. A., Fundamentos do refino do petrleo. Rio de J aneiro: Ed Intercincia,
2005.
21. THOMAS J . E., Fundamentos de engenharia de petrleo. Rio de J aneiro: Ed.
Intercincia, 2001.
22. VENTURA G. T. et al., Organic Geochemistry, 39, 846867, 2008.
23. WANG Z.; FINGAS M., Journal of Chromatography A, 712, 321-343, 1995.
24. WANG Z.; FINGAS M., Journal of Chromatography A, 774, 51-78, 1997.

































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