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Xiomara Yez Rueda, Omar Giovanny Prez, Hernando Meza Actividad larvicida del aceite esencial foliar de Eucaliptus globulus contra Aedes aegypti Linnaeus Bistua: Revista de la Facultad de Ciencias Bsicas, vol. 8, nm. 1, enero-junio, 2010 Universidad de Pamplona Colombia
Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=90315226009

Bistua: Revista de la Facultad de Ciencias Bsicas, ISSN (Versin impresa): 0120-4211 revistabistua@unipamplona.edu.co Universidad de Pamplona Colombia

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Revista Bistua Facultad de Ciencias Basicas Universidad de Pamplona Pamplona-Colombia Vol 8 (1),2010:71-77

Actividad larvicida del aceite esencial foliar de Eucaliptus globulus contra Aedes aegypti Linnaeus Larvicidal activity of essential oil isolated from Colombian Eucalyptus globulus against Aedes aegypti Linnaeus
Xiomara Yez Rueda1, Omar Giovanny Prez2 ,Hernando Meza 1
1

Grupo de Investigacin en Productos Verdes (GPV), Universidad de Pamplona, Pamplona, Norte de Santander, Colombia. Correo electrnico: ipv@unipamplona.edu.co 2 Grupo de Investigacin en Parasitologa y Enfermedades Tropicales (GIEPATRI), Universidad de Pamplona, Pamplona, Norte de Santander, Colombia.

RESUMEN
La actividad larvicida del aceite esencial (AE) de las hojas secas de Eucaliptus globulus cultivado en la regin de Chincota, Norte de Santander (Colombia), contra la cepa de referencia Rockefeller del mosquito Aedes aegypti Linnaeus fue evaluada a nivel de laboratorio, teniendo en cuenta la metodologa de la OMS. El AE fue obtenido por Hidrodestilacin asistida por radiacin de Microondas (HDMO) y sus componentes mayoritarios fueron analizados por Cromatografa de Gases de Alta Resolucin (GCAR). Las larvas de cuarto estadio de A. aegypti resultaron susceptibles frente al AE en concentraciones de 100 ppm con una mortalidad del 100%. El anlisis estadstico Probit-log de los bioensayos permiti determinar el valor de la dosis diagnstica en 0.0348% (348 ppm). La susceptibilidad de las larvas fue asociada con los componentes voltiles mayoritarios el 1,8-Cineol o Eucaliptol y el Pineno presentes en concentraciones del 82.38% y 8.69% respectivamente, seguidos de otros componentes como Bourboneno, Limoneno y Nerol, los cuales se supone poseen un efecto sinrgico. El AE de E. globulus se propone como una herramienta alternativa, ecolgicamente compatible, en la estrategia de lucha integrada que se lleva a cabo en nuestra regin tropical, para controlar este importante vector del dengue y la fiebre amarilla. PALABRAS CLAVES: Eucaliptus globulus, Larvicida, Aedes aegypti, eucaliptol, pineno, limoneno. *Para citar este articulo: Yez Rueda X, Giovanny Prez O, Meza H . Actividad larvicida del aceite
esencial foliar de Eucaliptus globulus contra Aedes aegypti Linnaeus. Bistua 2010;8(1):71:77

+Autor para el envio de correspondencia y la solicitud de separatas: Grupo de Investigacin en Productos Verdes (GPV), Universidad de Pamplona, Pamplona, Norte de Santander, Colombia. Correo electrnico: ipv@unipamplona.edu.co

ABSTRACT
The aim of this work was to study the larvicidal activity of E. globulus essential oil against Aedes aegypti larvae. The essential oil was obtained by vapor extraction and their chemical composition was determined by gas chromatography coupled to mass spectroscopy. Bioassays were run with the essential oil pure and diluted. The results obtained showed that essential oil have larvicidal action, causing an almost instantaneous mortality. Eucaliptol, -Pinene, Limonene, Buorbuneno y Nerol were identified as the active principle responsible for the larvicidal action of E. globulus

essential oil, causing 100% larval mortality at the lowest tested concentration of 100ppm. These results suggest that the essential oil of E. globulus is promising as larvicide against A. aegypti and could be useful in the search of newer, more selective, and biodegradable larvicidal natural compounds to be used in official combat programs and at home.

KEY WORDS: Eucalyptus globulus, larvicidal activity, Aedes aegypti, Eucalyptol, -Pinene, Limonene.

INTRODUCCIN
La utilizacin de productos naturales como los aceites esenciales (AE) se ha incrementado en los ltimos tiempos, en las reas alimenticia, farmacutica y cosmtica, como agentes conservantes, antioxidantes, microbicidas e industriales en general. Colombia a pesar de su gran biodiversidad es un importador a gran escala de los AE [3]. Muchas especies vegetales poseen gran actividad biolgica, no slo contra los insectos, sino tambin contra otros organismos como caros, roedores, nematodos, bacterias, virus y hongos [9]. La familia Myrtaceae est compuesta aproximadamente por 133 gneros y unas 3900 especies, las cuales se distribuyen en su mayora en las regiones tropicales y subtropicales de Australia y Suramrica. El gnero Eucaliptus abarca unas 300 variedades [16]. Es uno de los rboles de ms rpido crecimiento en el mundo y alcanza a veces una altura de 100 m. Debido a que su enorme sistema de races absorbe vastas cantidades de agua, se ha plantado en reas pantanosas infestadas de malaria para secar el suelo y purificar el aire. Tiene hojas altamente aromticas de color verde-azul en forma de corazn cuando son jvenes, y, largas y lanceoladas en su madurez. Cerca de 50 especies proveen un aceite valioso, con un aroma refrescante, penetrante y estimulante con reminiscencias medicinales [2]. El componente clave de las hojas de eucalipto es un aceite voltil conocido como Eucaliptol (1,8-Cineol) encontrado con la ms alta proporcin (70% como mnimo) [4]. Especies de la familia Myrtaceae han demostrado accin larvicida de su aceite esencial foliar contra A. aegypti agente transmisor del dengue clsico (DC), dengue hemorrgico y la fiebre amarilla [1]. Se ha demostrado que un extracto de aceite de eucalipto resulta eficaz en la proteccin contra distintos tipos de picaduras de insectos [8]. Como la mayora de las especies del gnero Eucaliptus, las principales investigaciones de esta planta han sido dirigidas al estudio del AE de sus hojas, en la que tambin se observa la presencia de compuestos polifenlicos, una -dicetona antioxidante de cadena larga [12] y terpenoides aromticos conocidos como los euglobales [4, 7]. De acuerdo con las reconocidas propiedades del Eucaliptol, se especula si este componente mayoritario, podra ser directamente responsable de la mortalidad de las larvas de A. aegypti o por el contrario requiere de la participacin de los otros componentes minoritarios. Muchos de estos componentes menores tienen propiedades irritantes y son removidos por redestilacin del aceite [7, 14]. El aumento de la resistencia al insecticida Abate (Temefs), considerado como el elemento clave en los programas de control qumico del vector ha propiciado la aparicin de nuevas epidemias de dengue y dengue hemorrgico en reas tropicales, obligando a revisar la informacin sobre la situacin de cra y desarrollo de A. aegypti, para retomar iniciativas globales de control [11]. En este trabajo, se ha evaluado el AE obtenido de las hojas secas de E. globulus, cultivado en la regin de Chincota (Norte de Santander), cuyos componentes qumicos mayoritarios se consideran responsables frente a la susceptibilidad de las larvas de A. aegypti del cuarto estadio (cepa Rockefeller). Los resultados obtenidos son promisorios para desarrollar nuevos agentes antivectoriales de aceptacin ecolgica como estrategia de lucha integrada contra el principal vector del dengue y la fiebre amarilla.

MATERIALES Y MTODOS
Obtencin del Aceite Esencial (AE) Las hojas de E. globulus fueron recolectadas en la vereda Iscal, del municipio de Chincota, Norte de Santander (Fotografa 1). El municipio de Chincota se encuentra ubicado en el valle que forma al bifurcarse poco antes de Pamplona, la Cordillera Oriental, a 7 37 Latitud Norte y 7236 Longitud Oeste, del Meridiano de Greenwich, tiene una extensin territorial de 166.50 Km2 y una altitud promedio de 1175 msnm (metros sobre el nivel del mar). Se encuentra en los pisos trmicos de templado a fro, con temperaturas que oscilan entre los 12C y los 22C [http://www.chinacota.com]. La especie fue clasificada por el botnico Luis Roberto Snchez, director del Herbario Regional Catatumbo-Sarare, de la Universidad de Pamplona. Las hojas se separaron manualmente de los tallos y se secaron al aire y a la sombra por 15 das. El AE fue extrado a partir de 300 gramos de material mediante el mtodo de Hidrodestilacin asistida por Microondas (HDMO), para lo cual se utiliz un microondas marca Samsumg, por 40 minutos y potencia del 70%. El rendimiento de AE se midi como ml de AE por 100g de hojas secas.

FOTOGRAFA 1. Zona de recoleccin del eucalipto, en la Vereda Iscal (Chincota). (Fuente Los Autores).

Anlisis Qumico del Aceite Esencial (AE)

La composicin qumica de los aceites se determin por la tcnica de Cromatografa de Gases de Alta Resolucin. Se tomaron 30 l del aceite esencial y se disolvieron en 1 ml de diclorometano. En cada equipo, se inyect 1 l de la muestra anterior. Se estandarizaron las variables del mtodo, como temperatura inicial y temperatura del horno. Se corrieron las muestras en las columnas HP-5 e INNOWAX, con el aceite esencial y con los patrones de hidrocarburos C-7 a C-32, para calcular los ndices de Kovts (IK). Se confirmaron los componentes mayoritarios por espectrometra de masas, de acuerdo con la base de datos NYST- 2005.

Cepa Rockefeller de A. aegypti

Se utilizaron larvas de la cepa de referencia Rockefeller considerada altamente susceptible, la cual ha sido mantenida y manipulada en el Laboratorio del Instituto de Salud de Norte de Santander, en Ccuta (Colombia) por 30 aos, sin presin de seleccin con insecticidas, por lo tanto, no ha sido expuesta, ni ha estado en contacto con otras especies, ni ambientes. Se considera una cepa de alta confiabilidad para la experimentacin con insecticidas y potenciales plaguicidas (Fotografa 2).

Bioensayos
Teniendo en cuenta la metodologa de la OMS se investig la susceptibilidad de larvas de Aedes aegypti de cuarto estadio frente al AE de E. globulus. Partiendo de una concentracin inicial de 200 ppm del AE, la cual causa el 100 % de mortalidad de las larvas, se realizaron los bioensayos preliminares utilizando 2 rplicas por cada concentracin de AE con los controles correspondientes. Las concentraciones finales probadas para E. globulus fueron de 5 ppm, 15 ppm, 25 ppm, 50 ppm, 75 ppm y 100 ppm, con las que se realizaron bioensayos que contaron con 5 rplicas por concentracin y sus respectivos controles. Los controles fueron tratados siguiendo la misma metodologa, pero utilizando acetona como solvente. Posteriormente, se aplic a los resultados el anlisis estadstico Probit-log5 (concentracin vs .mortalidad) para establecer la dosis diagnstica del AE y las Concentraciones Letales del mismo (CL50 y CL99) [15].

FOTOGRAFA 2. Larvas entre tercer y cuarto estadio de la cepa Rockefeller de Aedes aegypti. (Fuente: Los autores).

Discusin de resultados y conclusiones

El rendimiento de AE obtenido para las hojas secas de E. globulus fue del 1,33%. Por Cromatografa de Gases se identificaron ms de una decena de componentes terpnicos como se muestra en el perfil cromatogrfico del AE en la Figura 1. En la Tabla 1, se observan los componentes voltiles mayoritarios analizados. El 1,8-Cineol o Eucaliptol aparece como el componente de mayor proporcin con 82.38%, seguido de Pineno con 8.69%, Bourboneno con 2.25%, Limoneno con 1.35% y Nerol con1.22%. Las pruebas realizadas con concentraciones de 100 y 75 ppm del AE de E. globulus mostraron el 100% y el 73.2% respectivamente de mortalidad de las larvas de A. aegypti, segn se observa en la Tabla 2. Con las concentraciones de 50, 25, 15 y 5 ppm el nivel de mortalidad result menor al 50%. En general, se observ que la concentracin de los aceites y la mortalidad mantienen una tendencia a la proporcionalidad, lo que indica que a medida que decrece la concentracin de AE, se observa la disminucin en el porcentaje de mortalidad de las larvas. Los resultados del anlisis estadstico Probit-log de los bioensayos para determinar la actividad larvicida del AE, se muestran en la Tabla 3 y permitieron establecer la dosis diagnstica de 348.9426 ppm (0.0348%) para el AE de E. globulus contra las larvas de A. aegypti Linn., junto con los valores de las concentraciones letales CL50= 58.566655 % y CL99= 174.47130 %. Los anteriores valores se aproximaron a los determinados para las mirtceas cubanas Eugenia melanadenia y Psidium rotundatum, las cuales tambin presentaron efecto larvicida sobre A. aegypti. Los AE de estas especies vegetales tambin poseen el 1,8-Cineol o Eucaliptol, el Limoneno y el Pineno, entre sus componentes mayoritarios. Las dosis diagnsticas para los aceites esenciales de estas 2 plantas fueron de 0,022% (220 ppm) para E. melanadenia y de 0,0164 % (164 ppm) para P. rotundatum [1]. De igual manera, los valores se acercaron a los determinados para el AE de Curcuma aromatica con alta actividad contra larvas de cuarto estadio de A. aegypti con valores de CL50 de 57.15 ppm [6] y para la canela indgena Cinnamomum osmophloeum Kaneh y otros aceites esenciales con excelente efecto inhibitorio contra larvas de cuarto estadio de variedades del mosquito Aedes, cuyos valores de CL 50 estuvieron entre 36-44 ppm, y la CL 90 fue de 79-85 ppm respectivamente [17, 18]. El presente estudio permite avanzar en la bsqueda de una alternativa natural para el control del vector causante de graves dolencias como la fiebre amarilla y del dengue en nuestra regin tropical y ofrece una referencia para futuras investigaciones en cuanto a la susceptibilidad de las poblaciones del mosquito y otras plagas similares, frente a los AE de mirtceas nativas.

GRFICA 1. Perfil cromatogrfico del aceite esencial de Eucaliptus globulus recolectado en la vereda Iscal del municipio de Chincota (Norte de Santander).

Tabla 1. Componentes voltiles mayoritarios del Aceite Esencial (AE) de Eucalyptus globulus de la vereda Iscal del municipio de Chincota (Norte de Santander).

Pico

Concentracin relativa (%) 8.69 0.46 0.45 1.35 82,38 0.25 1.22 0,38 0,36 0,25 0,54 2,25 0,57 0,41

IK Exp.a

IK Tericob

Compuestoc

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

936 979 990 1031 1037 1213 1229 1282 1342 1356 1374 1386 1396 1410

936 980 988 1031 1034 1212 1228 1282 1340 1356 1374 1384 1395 1409

Pineno Mirceno 2 -Octaneno Limoneno 1,8Cineol Dihidrocarveol Nerol -Terpineno Acetato de Terpinen-4-ol Eugenol Isobutirato de Linalol Bourboneno Trimenal Cedreno

ndice de Kovts experimental establecido por Cromatografa de Gases de Alta Resolucin (CGAR) con Detector FID, en columna HP-5.
b

Adams, Robert (2005) Identification of essential oil components by gas chromatography/mass spectroscopy. Allured Publishing Corporation: Carol Stream Illinois, USA. 469p.
c

Identificado por Cromatografa de Gases con Detector Selectivo de Masas.

Tabla 2. Concentracin del AE de Eucaliptus globulus y % de mortalidad de los individuos.

Concentracin (ppm) 100 75 50 25 15 5

Mortalidad (%) 100 73.2 36.8 29.5 11 1

TABLA 3. Anlisis Probit-log de bioensayos de laboratorio de larvas de A. aegypti expuestas a diferentes concentraciones del aceite esencial foliar de E. globulus.

CL

Nivel de confianza

Rango

2 = % 22.34171 50 = % 58.566655 90 = % 106.85560 95 = % 126.7231 98 = % 153.52640 99 = % 174.47130 Varianza de CL50 = 4.034856 05 Heterogeneidad = 27.12532 con 2 df.

.95 .95 .95 .95 .95 .95

9.6675 < CL < 51.52625 42.98471 < CL < 79.78727 64.00238 < CL < 178.59300 68.07637 < CL < 236.22680 72.39598 < CL < 326.16060 75.21402 < CL < 405.54580

Dosis diagnstica = 348.9426 ppm (0.0348%).

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