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TPICOS EM MICOLOGIA CLNICA

CURSO DE FARMCIA - OPO

ANLISES CLNICAS

PROFa BERENICE PAGANI NAPPI PROF. JAIRO IVO DOS SANTOS

NOME:

2012-2

NDICE ASSUNTO:

PGINA

IMPORTNCIA MDICA DOS FUNGOS.................................................................... 03

MORFOLOGIA DOS FUNGOS EM VIDA PARASITRIA E SAPROFTICA................... DERMATOFITOSES..................................................................................................................... PITIRASE VERSICOLOR.......................................................................................................... ERITRASMA.................................................................................................................................. TINHA NEGRA (TINEA NIGRA)............................................................................................... PIEDRAS......................................................................................................................................... TRICOMICOSE NODULAR AXILAR....................................................................................... CANDIDASES............................................................................................................................... MICOSES CAUSADAS POR FUNGOS OPORTUNISTAS...................................................... ESPOROTRICOSE........................................................................................................................ CROMOMICOSE (CROMOBLASTOMICOSE)...................................................................... MICETOMAS................................................................................................................................. CRIPTOCOCOSE.......................................................................................................................... PARACOCCIDIOIDOMICOSE (BLASTOMICOSE SUL-AMERICANA)........................... HISTOPLASMOSE........................................................................................................................ PROCEDIMENTOS LABORATORIAIS UTILIZADOS EM MICOLOGIA CLNICA...... COLHEITA DE MATERIAL BIOLGICO............................................................................... EXAME DIRETO........................................................................................................................... CULTIVO (SEMEADURA)........................................................................................................... MICROCULTIVO (CULTIVO EM LMINA)........................................................................... PRESERVAO E MANUTENO DE CULTURAS DE FUNGOS......................................... BIOSEGURANA NO LABORATRIO DE MICOLOGIA CLNICA................................ SOLUES E MEIOS DE CULTURA UTILIZADOS EM MICOLOGIA CLNICA.......... PROVAS ADICIONAIS E COMPLEMENTARES NA IDENTIFICAO DE FUNGOS... TESTE DE PERFURAO DE PELOS IN VITRO................................................................... MEIO PARA IDENTIFICAO DE ESPCIES DO GNERO Trichophyton...................... TESTE DA UREASE...................................................................................................................... MEIO PARA PROVA DE ASSIMILAO DE ACARES.................................................. MEIO BASE PARA FERMENTAO DE ACARES......................................................... CARACTERSTICAS DAS PRINCIPAIS ESPCIES DE LEVEDURAS.............................. INDUO DE TUBO GERMINATIVO..................................................................................... INDUO DE CLAMIDOSPORO TERMINAL....................................................................... TESTES UTILIZADOS NA IDENTIFICAO DE ACTINOMICETOS.............................. PESQUISA DE FUNGOS ANEMFILOS NO AR.................................................................... MORFOLOGIA DE DERMATFITOS..................................................................................... MORFOLOGIA DE FUNGOS PATOGNICOS E ANEMFILOS....................................... GLOSSRIO................................................................................................................................... REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS......................................................................................... MICROMORFOLOGIA DE VIDA PARASITRIA DOS FUNGOS...................................... MICROMORFOLOGIA DE VIDA SAPROFTICA DOS FUNGOS......................................

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IMPORTNCIA MDICA DOS FUNGOS

INTRODUO GERAL Micologia clnica o ramo da microbiologia mdica que estuda os fungos causadores de infeces (micoses) nos seres humanos. Por tradio, actinomicetos (bactrias filamentosas) patognicos, e certas algas tambm so estudadas dentro da rea de micologia. O que so fungos? Fungos so seres vivos com organizao celular e DNA delimitado por dupla membrana, sendo, portanto, eucariticos. So organismos micro ou macroscpicos, geralmente com quitina na sua parede celular. Apresentam clulas com mais de 1 m de dimetro. So aerbicos e microaerfilos, geralmente necessitando de fontes orgnicas (C e N) para sua sobrevivncia. No meio ambiente podem ser saprbios ou patognicos dependendo das condies e substrato em que se encontram. Os fungos pertencem ao Reino Fungi, que compreende cerca de 200.000 espcies. Destas, cerca de 150 a 200 espcies causam infeces nos seres humanos e animais. O conhecimento bsico de aspectos como morfologia, fisiologia, reproduo, nutrio, atividade bioqumica, metablitos, virulncia, e estrutura antignica, de interesse em Anlises Clnicas porque auxiliam no diagnstico laboratorial das infeces, alergias e intoxicaes por fungos, pois: 1) Os fungos so agentes de processos infecciosos (micoses) de quadros benignos e assintomticos ou graves e evolutivos; 2) So agentes de hipersensibilidade tardia; 3) Agentes de micetismo - ingesto e intoxicao por fungos macroscpicos toxgenos (cogumelos); 4) So agentes de micotoxicoses - ingesto contnua e prolongada de alimentos embolorados que contenham fungos produtores de micotoxinas. Os fungos podem ser classificados quanto a aspectos filogenticos e pertencem ao Reino Fungi (MYCOTA) sendo que os de interesse mdico esto agrupados na diviso AMASTIGOMYCOTA com as seguintes subdivises: Zygomycotina, Ascomycotina, Basidiomycotina, Deuteromycotina (Fungi Imperfecti). Dentre estas subdivises destacam-se algumas classes de maior interesse em Micologia Clnica: Classe Zygomycetes: Mucor sp, Rhizopus sp. Classe Ascomycetes: Saccharomyces cerevisiae, Piedraia hortae, Pseudallescheria boydii.

Classe Deuteromycetes: Ordem Hyphomycetes a mais importante; Cryptococcus neoformans, Malassezia furfur, Aspergillus fumigatus e Penicillium. Na Micologia Mdica e Clnica a classificao dos fungos est relacionada localizao da micose no organismo humano e dividem-se em: Micoses Superficiais, Cutneas e Cutneo-mucosas, Profundas e Sistmicas.

ASPECTOS IMPORTANTES NA CLASSIFICAO E IDENTIFICAO DOS FUNGOS 1) NUTRIO E FISIOLOGIA Os fungos so microrganismos heterotrficos com grande parte deles aerbios obrigatrios embora possam crescer lentamente em atmosfera reduzida de oxignio. No realizam fotossntese e a nutrio feita por absoro produzindo ento enzimas que hidrolisam uma grande variedade de substratos para torn-los assimilveis. Para seu desenvolvimento e manuteno exigem fonte de carbono e nitrognio. O carbono tem a funo de construo do material plstico ou energtico. Os carboidratos mais utilizados para este fim so a glicose, sacarose, maltose, amido e celulose. Elementos como ferro, zinco, mangans, cobre, molibdnio e clcio so exigidos em pequenas quantidades. Certos fungos requerem fatores de crescimento que no conseguem sintetizar como vitaminas (tiamina, biotina, riboflavina, cido pantotnico). Como fonte de nitrognio algumas espcies utilizam sais de amnio ou nitratos (nitrognio orgnico) e outras exigem substratos nitrogenados como as peptonas do meio de cultura. Os fungos podem acumular como substncias de reserva carboidratos e lipdeos em seu miclio. A gua fundamental para o crescimento fngico podendo ser captada da atmosfera ou do meio nutritivo, embora certos fungos sobrevivam em ambientes desidratados onde ento produzem certos tipos de elementos reprodutivos para situaes desfavorveis ou podem entrar em vida latente. Portanto, o grau de umidade do meio um fator determinante em todo o ciclo de vida dos fungos. Existem fungos chamados halfilos que crescem em ambientes com grande quantidade de sal e aqueles que toleram meios com grandes quantidades de acar. A temperatura de crescimento abrange uma larga faixa, porm os fungos de importncia mdica so mesfilos (20 a 30 C). O pH mais favorvel ao crescimento fngico est entre 5 e 7, embora a maioria dos fungos tolere amplas variaes de pH. O tempo de crescimento dos fungos mais lento que o das bactrias e suas culturas precisam em mdia de 7 a 15 dias de incubao. Muitas espcies exigem luz para seu desenvolvimento. Entretanto, encontram-se outras que podem ser inibidas ou mesmo indiferentes presena de luminosidade. Os fungos podem elaborar vrios metablitos dentre os quais antibiticos (penicilina), e micotoxinas (aflatoxinas) com ampla aplicao biotecnolgica e farmacutica. 2) ATIVIDADE BIOQUMICA Em condies aerbias a via glicoltica responsvel por 30% da gliclise enquanto que em condies de anaerobiose usada uma via alternativa (Embden-Meyerhof). Estas atividades esto relacionadas com a identificao de espcies de leveduras onde o fungo utiliza C ou N como fonte de nutrientes por via aerbia (assimilao) e/ou anaerbia (fermentativa) utilizando acares. 3) REPRODUO E CRESCIMENTO A classificao dos fungos baseia-se nas caractersticas dos rgos reprodutivos da fase sexuada e caractersticas morfolgicas da fase assexuada e miclio. Os fungos, em geral os filamentosos, podem se reproduzir em ciclos sexuais, assexuais e com menor freqncia o ciclo parassexual. As leveduras so geralmente unicelulares e se reproduzem por brotamento ou gemulaco, podendo a reproduo ser assexuada ou sexuada. A reproduo se faz por meio de rgos de frutificao como esporos, condios, gametas. Entretanto a maioria dos fungos potencialmente capaz de obter crescimento em partes de seu miclio (conjunto de hifas) que forma o corpo do fungo e atravs do desenvolvimento a partir de um fragmento ou da ponta da hifa.
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Reproduo assexuada (Fase Anamorfa ou Imperfeita) Os rgos de frutificao so formados por diferenciao da hifa atravs de clulas reprodutivas especializadas e no sexuadas como condios, blastocondios e artrocondios. Este mtodo de reproduo o mais freqente e mais importante para a multiplicao e manuteno das espcies, assim como sua disseminao, ocorrendo em condies imprprias ao seu desenvolvimento. Os chamados fungos Imperfeitos se utilizam muito deste tipo de reproduo. Reproduo sexuada (Fase Teleomorfa ou Perfeita) Envolve a unio de dois ncleos compatveis. um tipo de reproduo espordica que atravs de recombinao gentica serve para aperfeioamento (variabilidade) das espcies, melhor adaptao ao meio, especializao contnua, ocorrendo em condies favorveis sendo importante para a diversidade das espcies. Ocorre nos chamados fungos perfeitos. Muitos fungos possuem as duas fases reprodutivas podendo ser obtidas em laboratrio, outros, contudo, necessitam de mais estudos para esclarecer o tipo de reproduo. Ciclo Parassexual Este ciclo semelhante ao sexual s que em pontos no definidos da hifa ou em certo momento do ciclo de vida do fungo. Ocorre em certas espcies de fungos ou em certo momento do seu ciclo vital. importante para a evoluo de determinados fungos.

MORFOLOGIA DOS FUNGOS EM VIDA PARASITRIA E SAPROFTICA

A classificao e identificao dos fungos de interesse mdico baseiam-se principalmente em caractersticas morfolgicas tanto em vida parasitria nos organismos vivos quanto em vida saproftica em meios apropriados de cultivo ou no meio ambiente. Em vida parasitria os fungos patognicos so encontrados nas leses como elementos microscpicos na forma filamentosa ou leveduriforme. Ao serem cultivados, os fungos podem ser reconhecidos por sua macro e/ou micromorfologia. Macromorfologicamente so divididos em fungos filamentosos (bolores) e leveduras. Na micromorfologia possuem vrios componentes celulares semelhantes clula humana alm de alguns mais especficos como septos, hifas, rizides, etc. A estrutura elementar que auxilia a identificao o miclio (conjunto de hifas) vegetativo/reprodutivo com funes especficas de absoro de nutrientes, fixao, manuteno, crescimento e reproduo do fungo no substrato. Nos fungos filamentosos o miclio pluricelular, septado ou cenoctico (sem ou com raros septos), hialino ou demcio, enquanto que nos fungos leveduriformes o miclio unicelular. As caractersticas apresentadas em vida de cultivo tais como cor, textura, topografia e pigmento reverso, alm das estruturas das hifas, miclio, rgos reprodutivos baseados nas observaes macro e micromorfolgicas so importantes na determinao do gnero e/ou espcie patognica. A seguir, um resumo dos aspectos morfolgicos dos fungos patognicos: I. MORFOLOGIA DE VIDA PARASITRIA a que o fungo apresenta nos tecidos de um hospedeiro infectado. I.1. Pele e unhas. Nestes tecidos os fungos podem apresentar-se como: I.1.a. Hifas ou filamentos micelianos. I.1.b. artrocondios ou artrosporos. I.1.c. blastocondios, blastosporos, leveduras ou elementos leveduriformes. I.1.c. Pseudo-hifas. I.2. Pelos e cabelos. Neste caso os fungos esporos (elementos arredondados) de localizao: I.2.a. Endothrix: interna. I.2.b. Ectothrix: externa. I.2.c. Ndulos (piedras): externa. se apresentam como hifas, artrocondios ou

I.3. Secrees, lquidos, leses granulomatosas, leses supuradas. I.3.a. Hifas ou filamentos micelianos. I.3.b. Blastocondios ou blastosporos: brotamento simples, mltiplos ou encapsulados. I.3.c. Pseudo-hifas.

II. MORFOLOGIA DE VIDA SAPROFTICA a morfologia que o fungo apresenta na natureza ou em meios nutritivos artificiais (meios de cultura). Miclio: o conjunto de hifas e/ou blastocondios do fungo. As hifas em sua forma filamentosa usual podem, em algumas ocasies, sofrer modificaes estruturais e morfolgicas e dar origem aos conidiforos, que produzem os condios, que so elementos de propagao assexuada.

II.1. MACROMORFOLOGIA DE COLNIA o estudo macroscpico dos caracteres morfolgicos da colnia do fungo. Os caracteres analisados so: II.1.a. Topografia da colnia: plana, elevada, umbeliforme, cerebriforme. II.1.b. textura: algodoada, aveludada, granulosa, pulverulenta, membranosa, cremosa, gomosa. II.1.c. Cor da colnia. II.1.d. Produo de pigmentos. II.1.e. Miclio areo e profundo.

II.2. MICROMORFOLOGIA DA COLNIA o estudo microscpico dos caracteres morfolgicos de fragmentos da colnia ou microcultivo em lmina aps colorao com lactofenol azul-algodo. Os principais elementos morfolgicos dos fungos, de importncia na identificao dos gneros e espcies so: hifas septadas, hifas no-septadas, artrosporos, gavinhas, candelabros fvicos, pseudohifas, acldios, blastocondios, macro e microcondios, clamidosporos, didimosporos, ascos e ascosporos, esporngios e esporangiosporos. VARIAES MORFOLGICAS Os fungos patognicos podem apresentar dois tipos de variaes morfolgicas: Dimorfismo: uma variao reversvel que consiste na passagem da fase leveduriforme para a fase filamentosa e vice-versa, e est na dependncia de fatores como temperatura e oferta de nutrientes. Pleomorfismo: Consiste numa variao irreversvel, que geralmente ocorrem aps passagens sucessivas em meio de cultura, nos quais perdem suas caractersticas morfolgicas usuais, dificultando a sua identificao.

DERMATOFITOSES (TINHAS)
DEFINIO So micoses causadas por fungos conhecidos como dermatfitos, adaptados infeco superficial de tecidos queratinizados como unhas, pelos e cabelos, e estrato crneo da pele. PRINCIPAIS GNEROS E ESPCIES 1. Epidermophyton: Epidermophyton floccosum 2. Microsporum: Microsporum canis Microsporum gypseum 2. Trichophyton: Trichophyton rubrum Trichophyton mentagrophytes Trichophyton tonsurans Trichophyton violaceum Trichophyton schoenleinii

TRANSMISSO A transmisso se d por contato com escamas de pele ou pelos parasitados, ou ainda areia ou terra contendo elementos fngicos viveis. De acordo com os locais onde so encontrados, os dermatfitos podem ser classificados em: 1. Dermatfitos geoflicos: encontrados no solo. A transmisso via solo - ser humano. Ex: M. gypseum. 2. Dermatfitos zooflicos: parasitam animais. A transmisso via animais - ser humano. mentagrophytes. 3. Dermatfitos antropoflicos: encontrados exclusivamente no transmisso inter-humana. Ex: E. floccosum, T. rubrum, T. violaceum, T. schoenleinii. MANIFESTAES CLNICAS As dermatofitoses so classificadas de acordo com o local anatmico afetado, de acordo com a seguinte nomenclatura: Tinea + local afetado (em latim). Assim, as formas clnicas mais comuns so: 1. Tinea capitis: Couro cabeludo. Podem ser de dois tipos: 1.a.Tinha tonsurante. Caracteriza-se por placas tonsurantes no couro cabeludo, podendo haver processos inflamatrios de intensidade varivel. So causados principalmente pelo M. canis, T. tonsurans e T. violaceum. 1.b. Tinha favosa. Tambm conhecida por favo, causada pelo T. schoenleinii, e caracteriza-se por uma foliculite de curso crnico. Na leso encontrado o esctulo, que uma crosta constituda por hifas, condios, clulas e exsudato inflamatrio. A perda de cabelo permanente. 2. Tinea pedis (p-de-atleta): Ps. desencadeada pelo uso de calados anti-higinicos, sudao, umidade, acometendo freqentadores de piscinas, soldados, estudantes e atletas. As leses so caracterizadas pela formao de vesculas, fissuras nos espaos interdigitais, esfoliaes pruriginosas, edemaciadas ou dolorosas. So causadas principalmente pelo T. rubrum, T. mentagrophytes e E. floccosum. 3. Tinea unguium (onicomicose, unheiro): Unhas. Caracteriza-se por leses destrutivas e esfarinhadas das unhas, iniciando-se pelas bordas livres, de cor branco-amarelada. Em geral ocorre formao de hiperceratose do leito ungueal, porm os tecidos periungueais raramente so afetados. So causadas principalmente pelo T. rubrum, T. mentagrophytes e E. floccosum. 4. Tinea corporis: Dermatofitoses da pele glabra. As leses se manifestam sob a forma de eritema ou manchas ppuloescamosas, placas eritematosas, isoladas ou confluentes, descamativas, pruriginosas e de curso prolongado. As principais espcies envolvidas so T. rubrum, M. canis e E. floccosum. 5. Tinea cruris: Virilha e ndegas. causada principalmente pelo T. rubrum, T. mentagrophytes e E. floccosum.
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Ex: M. canis, T.

ser

humano.

6. Tinea barbae ou Tinea faciei: Face. causada principalmente por T. mentagrophytes e T. verrucosum. 7. Tinea manuum: Mos. causada principalmente pelo T. rubrum, T. mentagrophytes. 8. Tinea imbricata: Corpo. restrita a alguns grupos indgenas, sendo causada exclusivamente pelo Trichophyton concentricum. Alm destas formas clnicas, as dermatofitoses esto associadas ao desencadeamento de reaes imunolgicas aos produtos do fungo, sendo o processo conhecido como mcides ou dermatoftides. DIAGNSTICO LABORATORIAL 1. Exame microscpico direto. O material (pele, unha, pelos e cabelos) deve ser examinado ao microscpio aps clarificao com potassa (10-40%). Resultado negativo expresso como ausncia de elementos fngicos no material examinado. Resultado positivo expresso como presena de filamentos micelianos ou hifas no material examinado. Em caso de pelos e cabelos infectados, o resultado expresso como micose do tipo Ectothrix ou Endothrix. 2. Cultivo. O material biolgico deve ser semeado em gar Sabouraud seletivo. A incubao feita 25o C ou temperatura ambiente. Acompanhamento por at quatro semanas, avaliando-se as caractersticas macro e micromorfolgicas, e identificando-se o gnero ou espcie. 3. Testes adicionais. Devem ser realizados quando no se consegue identificar as colnias que crescem no meio de cultura. Podem ser utilizados os seguintes testes: prova de urease, teste de perfurao de pelo in vitro, provas nutricionais (inositol, tiamina, cido nicotnico) e crescimento em meios de arroz.

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PITIRASE VERSICOLOR
DEFINIO uma infeco crnica da camada crnea da pele, caracterizada por leses descamativas hipo ou hipercrmicas. SINONMIA Tinea versicolor, micose de praia, pano, etc. AGENTE CAUSAL Espcies do gnero Malassezia. Este gnero atualmente compreende sete espcies: M. furfur, M. sympodialis, M. pachydermatis, M. globosa, M. obtusa, M. restricta, M. slooffiae. DISTRIBUIO GEOGRFICA E PREVALNCIA freqente nos dois sexos, com predominncia em adultos jovens. Pode acometer outras faixas etrias. TRANSMISSO um fungo antropoflico, sendo que o ser humano a nica fonte de contaminao, pelo contato inter-humano, ou atravs de fmites como toalhas, vesturio, etc. FATORES PREDISPONENTES Deficincias vitamnicas, desnutrio, tuberculose, diabetes mellitus, corticoterapia prolongada, sudorese, gravidez, etc. MANIFESTAES CLNICAS A Pitirase versicolor apresenta-se como mculas, finamente descamativas e geralmente assintomticas, cuja colorao varia do marfim ao castanho-escuro. As escamas geralmente tm o aspecto farinceo, da serem denominadas escamas furfurceas. Em peles pigmentadas as reas lesionadas podem se tornar acrmicas devido diminuio do pigmento melnico da epiderme. As leses predominam na parte superior do trax, face e antebraos. Porm, outras regies do corpo podem ser afetadas. Outras patologias associadas Malassezia sp.: malassezioses, foliculite pitirosprica, dermatite seborreca, dermatitite atpica, etc. DIAGNSTICO LABORATORIAL 1. Exame direto: exame microscpico das escamas raspadas, aps clarificao com potassa. O material tambm pode ser colhido com fita adesiva, a qual posteriormente montada em lmina e examinada ao microscpio. Em casos positivos geralmente so observados elementos leveduriformes agrupados e hifas curtas e tortuosas, que compe a morfologia parasitria deste fungo. Resultado a ser expresso: Malassezia sp. 2. Cultivo. No feito rotineiramente. Para o isolamento e crescimento deste fungo essencial a presena de lipdios (leo de oliva) no meio. O fungo cresce entre 4-10 dias 37oC. Inicialmente so colnias de cor creme, brilhantes, elevadas e que posteriormente se tornam foscas, secas e beges. Para a diferenciao das espcies so necessrios critrios morfofisiolgicos adicionais. Todas as espcies deste gnero so lipoflicas e a maioria (com exceo de M. pachydermatis) lipodependente.

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ERITRASMA
DEFINIO uma infeco bacteriana, cujas leses so morfologicamente semelhantes quelas observadas em micoses superficiais. AGENTE CAUSAL Corynebacterium minutissimum (Nocardia minutssima) PREVALNCIA Ocorre principalmente em pases quentes e acomete principalmente indivduos adultos do sexo masculino, sendo raro em mulheres e crianas. TRANSMISSO Inter-humana ou atravs de fmites (vesturio). FATORES PREDISPONENTES Macerao de pele, sudao, umidade, etc. MANIFESTAES CLNICAS Tem localizao perigenital e axilar. Apresenta-se como leses eritematosas ou acastanhadas, com os bordos bastante definidos, praticamente assintomtico. A localizao interpodigital tambm tem sido descrita. DIAGNSTICO LABORATORIAL 1. Exame direto. Obteno das escamas da leso por raspagem. Suspenso das mesmas em uma gota de soro humano e feitura de esfregaos e colorao pelo Gram. Evidenciao de filamentos finos, agrupados em feixes retilneos ou torcidos, pouco ramificados, sob a forma cocide (1 m de dimetro) ou bacilar (5-25 m), gram-positivos. 2. Cultivo. No feito rotineiramente. Quando feito, utilizado gar-sangue ou meio para cultivo celular enriquecido com 20% de soro fetal bovino.

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TINHA NEGRA (TINEA NIGRA)

DEFINIO Micose superficial que se localiza preferencialmente na camada crnea da palma das mos, sob a forma de pequenas leses papulosas, de colorao preta, que podem confluir formando pequenas placas ou manchas fuliginosas. AGENTE CAUSAL Hortaea werneckii (Phaeoannelomyces werneckii,Exophiala werneckii). PREVALNCIA Distribuio praticamente universal, sendo mais prevalente em regies tropicais e subtropicais. TRANSMISSO saprfita de vida livre encontrado em beira dos mares tropicais e subtropicais, solo, areia do mar, ar e plantas. O fungo pode ser veiculado para o organismo atravs de pequenos traumas. MANIFESTAES CLNICAS Leses maculo-papulosas, sem tendncia cura espontnea, castanhas ou negras, podendo confluir formando placas ou manchas. DIAGNSTICO LABORATORIAL Exame direto: colheita das escamas das leses suspeitas, clarificao com potassa e exame microscpico. Na leso apresenta-se como filamentos micelianos curtos e de parede espessa, de colorao pardo-escura, com a presena de clamidsporos e elementos leveduriformes. Cultivo: Cultiva-se em gar Sabouraud com ou sem inibidores. Macromorfologicamente as colnias apresentam-se verde-escuras, ou cinza-esverdeadas, cremosas, de superfcie lisa ou rugosa, tornando-se com o tempo negras e aveludadas. Ao exame micromorfolgico evidenciam-se elementos leveduriformes, s vezes com brotamento e com septo central (didimosporos). Filamentos micelianos acastanhados tambm podem estar presentes.

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PIEDRAS
DEFINIO So micoses nodulares de pelos e cabelos, no qual o fungo se localiza na parte livre e area da haste do pelo. TIPOS E AGENTES CAUSAIS: 1. Piedra negra: Piedraia hortae 2. Piedra branca: Trichosporon sp. PREVALNCIA E TRANSMISSO: A piedra negra endmica em reas tropicais da Amrica central e do Sul e da Oceania, enquanto que a piedra branca encontrada em reas subtropicais e temperadas do Mundo. Em ambos os casos a transmisso se d atravs de contatos com pessoas ou fmites, contaminados com os fungos. DIAGNSTICO LABORATORIAL E MORFOLOGIA Exame direto: Evidenciao da morfologia de vida parasitria ao microscpio, aps clarificao e esmagamento do ndulo entre lmina e lamnula. 1. Piedra negra: apresenta-se como ndulos escuros ou negros, duros, com 0,5-1,0 mm, firmemente presos haste do pelo, em nmero de 1 a 4 ndulos por fio. microscopia so observados filamentos micelianos septados e acastanhados e tambm a presena de ascos contendo ascosporos. 2. Piedra branca: ndulos ser facilmente destacveis e blastosporos. claros, dos brancos pelos. ou castanho-claro, Microscopicamente friveis e moles, podendo so observados artrosporos

Cultivo: ambos os fungos crescem facilmente em gar Sabouraud. O Trichosporon sp. inibido pelo cicloheximide. As caractersticas morfolgicas em vida saproftica so: 1. Piedraia hortae: colnias de crescimento lento, cinzas, negras ou esverdeadas, aveludadas elevadas ou planas, lisas ou cerebriformes. microscopia so observados filamentos micelianos acastanhados, septados e ramificados. 2. Trichosporon sp.: colnias de crescimento rpido, cor creme, rugosas ou cerebriformes. Ao exame microscpico observam-se artrocondios e blastocondios.

TRICOMICOSE NODULAR AXILAR

DEFINIO uma bacteriose que afeta os pelos da axila e raramente os pelos pubianos, sendo causada pelo Corynebacterium tenuis. MANIFESTAES CLNICAS: Apresenta-se na forma de ndulos de diferentes cores: amarela, vermelha e preta. Assim, podem ser denominados tricomicose flava, rubra e nigra. Ao microscpio os ndulos so constitudos por filamentos finos bacterianos, entrelaados, circundados por substncia amorfa. DIAGNSTICO LABORATORIAL Exame direto: evidenciao da morfologia bacteriana ao microscpio. Cultivo: Meio 199 (para cultivo celular) acrescido de soro fetal bovino, ou gar-sangue. A temperatura de incubao de 37O C.

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CANDIDASES
DEFINIO So infeces causadas por leveduras pertencentes ao gnero Candida, principalmente a espcie Candida albicans, e que acometem a pele, unhas, mucosas, trato intestinal e urinrio, etc. AGENTES ETIOLGICOS Candida albicans Candida tropicalis Candida pseudotropicalis Candida guillermondi Candida krusei Candida parapsilosis Candida glabrata

TRANSMISSO Endgena (a C. albicans freqentemente um simples comensal). Pode haver transmisso por contato inter-humano e fmites (roupas e toalhas). FATORES PREDISPONENTES Imunodepresso (AIDS), uso prolongado de corticosterides, gravidez, diabetes, queimaduras graves, macerao das dobras da pele, sudorese intensa e umidade constante. MANIFESTAES CLNICAS 1. candidases superficiais: 1.a. Candidase oral: ocorre formao de placas brancas na mucosa oral e cantos dos lbios (sapinho). 1.b. Candidase intertriginosa: leses eritematosas, midas, exsudativas e descamativas, localizadas nas dobras da pele como axilas, regio submamria, intergltea, perianal, espaos interdigitais, etc. 1.c. Vulvovaginite por Candida: leses pruriginosas e eritematosas com leucorria e sensao de queimadura. 1.d. Onicomicose por Candida: acometem principalmente a regio periungueal da unha, a qual se apresenta edemaciada, avermelhada e dolorosa. por presso, geralmente eliminam material purulento, rico em elementos leveduriformes. 1.e. Candidase muco-cutnea: acometimento da pele, mucosas e unha. 2. Candidase disseminada: acometimento visceral. A candidase em pacientes com AIDS ocorre em mais de 80% destes pacientes, como infeco oportunista. As formas clnicas mais freqentes so a candidase esofagiana, onicomicoses e vulvovaginites, todas de difcil tratamento.

DIAGNSTICO LABORATORIAL Exame direto: evidenciao da morfologia de vida parasitria no material biolgico. As espcies do gnero Candida apresentam-se como blastocondios arredondados ou ovalados, 3-6 x 3-9 m, que apresentam brotamento. Alguns blastocondios se alongam tornando-se pseudo-hifas. Em caso de invaso tecidual, a C. albicans pode formar tubos germinativos, que se transformam em filamentos micelianos septados. Cultivo: gar Sabouraud com ou sem inibidores e incubao temperatura ambiente. Algumas espcies de Candida so sensveis ao cicloheximide. Em gar Sabouraud as colnias so lisas, brilhantes e cremosas. micromorfologia so observados blastocondios e raras pseudo-hifas, no se diferenciando as espcies deste gnero. Em gar-fub h a
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produo pela C. albicans dos chamados clamidsporos terminais. Outras espcies de Candida no produzem estes elementos, com exceo da Candida dubliniensis. Testes complementares 1. Meios especficos para Candida sp. Mudanas da cor das colnias. Permitem a identificao de algumas espcies. 2. Induo de clamidosporos terminais em meios pobres como o gar fub gar arroz para identificao de C. albicans/C. dubliniensis. 3. Induo de tubo germinativo para identificao de C. albicans/C. dubliniensis. 4. Provas de assimilao e fermentao de acares.

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MICOSES CAUSADAS POR FUNGOS OPORTUNISTAS: Hialohifomicoses, Zigomicoses e Pneumocistose

DEFINIO Micoses oportunistas so infeces causadas por organismos fngicos que normalmente no so infectantes, os quais se aproveitam de alteraes nas condies fisiolgicas normais do hospedeiro, para se implantar e se multiplicar, causando patologias. Hialohifomicoses so micoses causadas por fungos filamentosos hialinos. CONDIES ASSOCIADAS INFECO FNGICA OPORTUNSTICA Hospedeiro imunocompetente - a capacidade do fungo depender de vrios fatores como densidade de propgulos, tempo de exposio, virulncia da cepa, nutrientes disponveis ao metabolismo do fungo, etc. As condies patolgicas associadas infeco fngica oportunistica so: Neoplasias, leucemias e linfomas; doenas auto-imunes (lpus eritematoso); uso prolongado de corticosterides e outros imunodepressores; endocrinopatias como diabetes mellitus; queimaduras extensas e outros traumatismos; desnutrio; AIDS e leucemia com neutropenia. PRINCIPAIS FUNGOS OPORTUNISTAS E RESPECTIVAS MICOSES Fungo Candida sp Histoplasma capsulatum Zygomycetes: Rhizopus sp. Mucor sp. Absidia sp. Aspergillus sp. Fusarium sp. Pneumocystis jiroveci Candidase Histoplasmose Zigomicoses Micose

Aspergilose Fusariose Pneumocistose

ZIGOMICOSES Agentes etiolgicos: Rhizopus sp., Mucor sp. e Absidia sp. Habitat: So encontrados em suspenso no ar, gua, solo e alimentos (pes velhos), frutas e batatas. Transmisso: D-se atravs da inalao de esporos, ingesto (alimentos), penetrao traumtica dos esporos (feridas). Fatores de risco: pacientes imunocomprometidos (leucemias, neutropenias, diabetes mellitus descompensada), uso de corticosterides. Manifestaes clnicas 1. Zigomicose cutnea. 2. Zigomicose pulmonar. 3. Zigomicose rinocerebral. 4. Zigomicose disseminada (fgado, corao, rins e tubo digestivo). Patogenia: tropismo vascular devido a implantao do fungo nos vasos sanguneos com formao de trombos e necrose hemorrgica.

Diagnstico laboratorial: A zigomicose uma infeco de progresso rpido e necessita de diagnstico imediato. O material biolgico representado por secreo, escarro e bipsias.
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1. Exame direto, histopatolgico e cultura. A observao da micromorfologia importante pois as hifas so noseptadas (cenocticas), largas, com ramificaes em ngulos retos (90) , muito caractersticas, que invadem as paredes dos vasos e colonizam a luz dos mesmos. 2. Cultivo: gar Sabouraud sem inibidores. Raramente crescem em hemocultivo e so termotolerantes sendo que a patogenicidade est relacionada temperatura.

ASPERGILOSE A doena varia de acordo com as extenses das leses, tempo de evoluo clnica, tipo de rgo afetado e grau de resistncia orgnica do hospedeiro. Agentes etiolgicos: Aspergillus fumigatus, A.niger, A.flavus, A.clavatus, A.nidulans, etc. Transmisso: D-se pela inalao ou ingesto de condios que existem no meio ambiente (solo, ar, vegetao, gua, alimentos). Fatores de risco associados: leucemias e linfomas transplantados renais, defeitos na funo leucocitria. Manifestaes clnicas: as doenas variam desde toxicose, alergia, colonizao at invaso tecidual. Aspergilose pulmonar: pode ser alrgica, invasiva e intracavitrio. Outras manifestaes menos freqentes incluem a forma cutnea, cerebral, orbitria, intestinal. Patogenia: o fungo pode se localizar na superfcie dos brnquios causando a bronquite catarral. Quando se encontra em cavidades pr-existentes, causadas por vrios processos patolgicos como tuberculose, abcessos, etc., vai ser denominado de bola fngica. A aspergilose invasiva do parnquima pulmonar se faz pelas hifas nos tecidos com formao de leses granulomatosas e necrticas. Diagnstico laboratorial: O material biolgico constitudo principalmente por bipsias de tecidos afetados. O escarro tanto em exame direto como em cultura no tem significado clnico porque pode significar apenas colonizao do pulmo. O exame histopatolgico e radiolgico so muitos importantes e devem estar associados ao diagnstico clnico.

FUSARIOSE Est relacionada a espcies do gnero Fusarium. So patognicas para as plantas e produzem toxinas (tricoteceno). Os fatores de risco: leucemias, linfomas. Manifestaes clnicas: ceratites (infeco da crnea), leses necrticas tegumentares e fungemia.

Diagnstico Laboratorial:
Exame micolgico direto e cultivo, complementado com estudos histopatolgicos tanto para casos de suspeita de fusariose, trichosporonose ou qualquer outra suspeita de infeco causada por fungo considerado contaminante.

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PNEUMOCISTOSE Agente etiolgico: Pneumocystis jiroveci (P. carinii). Transmisso: reativao de focos primrios ou reinfeco exgena. Fator de risco: Baixos nveis de CD4 (< de 200/mm3): AIDS uso de corticides transplantes desnutrio leucemias/linfomas. Mecanismo de agresso: Formao de exsudato e infiltrao de clulas inflamatrias (clulas plasmticas). Manifestaes clnicas: Pneumonia mais marcante: dispnia febre - tosse. Outros rgos podem ser afetados: rins - crebro - tireide - tubo digestivo - fgado - bao.

Diagnstico laboratorial:
lavado brnquico bipsias escarro. So utilizados mtodos de evidenciao direta aps colorao (Ortotoluidina, Giemsa, Prata) ou pesquisa de DNA fngico. No um fungo cultivvel.

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ESPOROTRICOSE
DEFINIO uma micose subcutnea de natureza gomosa, na qual h a formao de ndulos subcutneos que posteriormente ulceram e supuram. AGENTE ETIOLGICO Sporothrix schenckii. EPIDEMIOLOGIA Ocorre em todo o mundo, sendo mais comum em reas temperadas e tropicais. O grupo mais afetado aquele representado por indivduos adultos do sexo masculino. Tambm freqente em determinadas profisses como jardineiros, agricultores, veterinrios, carpinteiros, mineiros, etc. TRANSMISSO O S.schenckii vive como saprfita em vegetais, detritos orgnicos, solo ou gua contaminados, bem como a boca e pelos de animais (gatos, ratos, cachorros, coelhos, eqinos, etc.). O fungo penetra geralmente por meio de traumas, embora tambm possa ser inalado ou ingerido. MANIFESTAES CLNICAS O perodo de incubao varia de trs dias a seis meses. Acomete principalmente os membros superiores, face e membros inferiores. As principais formas clnicas so: 1. Forma linfocutnea. A leso inicia-se como uma ppula, pequena lcera ou ndulo subcutneo, indolor. As leses se estendem atravs dos vasos linfticos, produzindo um cordo de ndulos subcutneos firmes e assintomticos. 2. Forma cutnea fixa ou localizada. uma leso solitria confinada ao local de inoculao. 3. Forma cutnea disseminada. Pode resultar de disseminao hematognica ou inoculao. As leses manifestam-se atravs de ppulas, ndulos subcutneos, leses gomosas, ulcero-vegetantes e verrucosas, com comprometimento geral do paciente. 4. Esporotricose sistmica. Ocorre em pacientes imunocomprometidos e resulta da disseminao hematognica. Os rgos mais afetados so os olhos, nariz, faringe, pulmes e ossos. DIAGNSTICO LABORATORIAL Material biolgico: material purulento de ndulos fechados, raspagem e escarificao ou bipsia. Exame direto: aps clarificao com potassa ou colorao pelo Gram, PAS, Giemsa e prata, e pesquisa do fungo nas leses com anticorpos fluorescentes. Nas leses so observados escassos elementos leveduriformes fusiformes, com brotamentos e em alguns casos os chamados corpos asterides. Cultivo: O S. Schenckii um fungo dimrfico e que se apresenta sob duas fases: 1. Fase filamentosa: ocorre quando o fungo cultivado em gar Sabouraud em temperatura ambiente. A colnia se apresenta com a superfcie rugosa, pregueada e membranosa, branca ou creme, geralmente desenvolvendo um pigmento marrom ou negro em parte do miclio. A micromorfologia constituda por condios piriformes arranjados tipicamente em forma de margarida. 2. Fase leveduriforme: ocorre quando o fungo cultivado em meios nutricionalmente ricos em protenas como garinfuso de crebro e corao ou gar-sangue e incubados temperatura de 370C. As colnias so cremosas, claras e de superfcie irregular. A micromorfologia constituda por elementos leveduriformes, ovalados ou fusiformes.

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CROMOMICOSE (CROMOBLASTOMICOSE)
DEFINIO uma micose cutnea ou subcutnea de curso crnico, causada por fungos demcios, e caracterizada pelo aparecimento de ndulos ou verrugas, ulceradas ou no, principalmente nos membros inferiores. AGENTES ETIOLGICOS Fonsecaea pedrosoi Phialophora verrucosa Fonsecaea compacta Cladosporium carrioni Rhinocladiella aquaspersa EPIDEMIOLOGIA A cromomicose distribui-se mundialmente, porm mais prevalente em regies tropicais. No Brasil, que detm cerca de um tero do total de casos, a maioria ocorre em indivduos do sexo masculino. TRANSMISSO Os fungos vivem em matria orgnica, vegetais em decomposio e solo. A transmisso se faz atravs de penetrao de espinhos ou farpas de madeira. MANIFESTAES CLNICAS 1. Forma verrucosa: caracteriza-se por espessamento e endurecimento da derme e epiderme decorrente de hiperceratose e hiperacantose, assemelhando-se elefantase. 2. Forma ulcero-vegetante: leses de crescimento exuberante, gomosas, exsudativas, crostosas, que muitas vezes confluem entre si. 3. Forma nodular: ocorrem na fase inicial da doena, podendo permanecer estacionria. DIAGNSTICO LABORATORIAL Exame direto: aps clarificao com potassa, do material obtido por escarificao ou bipsia, ou cortes histolgicos corados pela hematoxilina-eosina. Na leso os fungos se apresentam como elementos arredondados, 5-12 m, acastanhados, de parede espessa, e com os septos transversais e longitudinais, conhecidos como corpos esclerticos, ou clulas muriformes ou corpos fumagides. Cultivo: Em gar Sabouraud Seletivo/Simples para avaliao macromorfolgica. As espcies so muito semelhantes entre si. O exame micromorfolgico das colnias feita pelo microcultivo deve ser realizado para a identificao das espcies. Neste ensaio podem ser observados os seguintes tipos de conidiforos: 1. Tipo cladosprio: esporos de ramificaes curtas ou longas, lembrando elementos gemulantes em cadeia. 2. Tipo fialfora: esporos ovalados produzidos lateralmente ao longo de um elemento em forma de taa. 3. Tipo acroteca: esporos produzidos lateralmente ao longo de um elemento em forma de basto curto. Fonsecaea pedrosoi: encontro de todos os tipos de conidiforos. Phialophora verrucosa: predomnio dos conidiforos do tipo fialfora. Cladosporium carrioni: predomnio dos conidiforos do tipo cladosprio longo.

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MICETOMAS
DEFINIO a designao coletiva de um grupo de micoses e actinobacterioses subcutneas, causadas respectivamente por fungos e actinomicetos. Os micetomas podem ser de dois tipos: 1. Actinomicetomas: so micetomas causados por actinomicetos.. 2. Eumicetomas: so micetomas causados por fungos. As caractersticas mais marcantes do micetoma so as leses abundantes, granulomatosas e com tendncia fistulizao e presena do gro na leso e no material purulento. Gro: uma microcolnia fngica (eumicetoma) ou actinomictica (actinomicetoma). Apresenta cores variadas de acordo com o agente etiolgico e o seu tamanho varia de 0,2-1,0 mm. 1. Actinomicetomas: so responsveis por 75% de todos os casos de micetomas no Brasil. Podem ser divididos em dois grupos: 1.a. Actinomicetomas endgenos: so causados por actinomicetos anaerbios. Os agentes etiolgicos fazem parte da flora da cavidade oral e intestinal e a transmisso se faz por traumas internos. As leses supurativas e abundantes ocorrem principalmente na face, trax, pescoo e abdmen. Ocorre formao de fistulas com eliminao de pus e gros. Ex: Actinomyces israelli Arachnia propionica 1.b. Actinomicetomas exgenos: so causados por actinomicetos aerbicos, sendo encontrados no solo e ar. A transmisso corre atravs de traumatismos externos. Os membros inferiores e superiores, ombros e pulmes so os stios mais afetados. As leses so supurativas e ocorrem com presena de pus e gros. Na fase tardia pode haver acometimento e destruio dos ossos. Ex: Nocardia asteroides Nocardia brasiliensis Actinomadura madurae Actinomadura pelletieri Streptomyces somaliensis DIAGNSTICO LABORATORIAL a. Exame dos gros entre lmina e lamnula, aps clarificao com potassa. Sero evidenciadas massas de filamentos bacterianos com deposio de material eosinoflico nos bordos (fenmeno Splendore- Hoeppli). b. Esfregaos corados pelo Gram e Kynion do material purulento. c. Bipsias: exame anatomopatolgico. d. Cultivo: meio de BHI ou tioglicolato 37o C em jarra anaerbica para actinomicetos anerbicos. Meio de agar Sabouraud (sem inibidores) 25o C para actinomicetos aerbicos. Os materiais utilizados no cultivo podem ser gros, ps ou bipsias. e. Provas de decomposio da casena, tirosina, xantina, gelatina e uria para identificar espcies do gnero Nocardia e Actinomadura. 2. Eumicetomas: so causados por fungos. As principais espcies envolvidas so: Madurella mycetomatis- Madurella grisea - Exophiala jeanselmei Pseudoallescheria boydii - Acremonium sp. A transmisso sempre exgena, atravs de traumatismo.

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MANIFESTAES CLNICAS Ocorrem principalmente nos membros inferiores, sendo caracterizados por leses crnicas, abcedantes, com formao de fstulas, por onde drena material seroso e gros. Nas fases mais avanadas pode haver o comprometimento dos ossos. DIAGNSTICO LABORATORIAL O material biolgico constitudo por secreo serosa, gros e bipsias. 1. Exame microscpico dos gros entre lmina e lamnula, aps clarificao com potassa. Sero evidenciadas massas de hifas e clamidocondios. 2. Exame anatomopatolgico das bipsias. 3. Cultivo do material seroso, gros e bipsias. O meio utilizado o gar Sabouraud sem inibidores. A identificao da espcie do fungo feita pela macro e micromorfologia das colnias e micromorfologia do microcultivo.

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CRIPTOCOCOSE
DEFINIO uma micose sistmica de evoluo subaguda ou crnica que atinge rgos e sistemas principalmente pulmes e sistema nervoso central. AGENTE ETIOLGICO causada por fungos do complexo Cryptococcus neoformans, atualmente com duas espcies: Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii. O C. neoformans corresponde aos sorotipos A (variedade grubii) e D (variedade neoformans) enquanto que o C. gattii corresponde aos sorotipos B e C. EPIDEMIOLOGIA E TRANSMISSO uma micose de distribuio universal por ser infeco oportunista, acometendo com maior freqncia pacientes imunodeprimidos com doena primria. Atualmente o maior nmero de casos ocorre em pacientes com AIDS, sexo masculino, idade variando entre 30 a 40 anos. As variedades neoformans e grubii de C. neoformans so encontradas em solos com fezes de pombos e outras aves nos centros urbanos com maior freqncia; enquanto a espcie C. gattii isolada de rvores do tipo eucalipto de regies tropicais e subtropicais em locais com maior concentrao destas rvores. A transmisso se faz por inalao de leveduras capsuladas ou esporos da sua fase sexuada ou teleomrfica (Filobasidiella neoformans). MANIFESTAES CLNICAS Apresenta um quadro clnico variado, podendo a micose manifestar-se sob a forma de infeco ou doena, dependendo do estado imunolgico do paciente e de fatores associados como a virulncia da cepa, tamanho do inculo, quantidade de propgulos aspirados, etc. Formas Clnicas: 1. Pulmonar: Infeco primria da doena podendo ser localizada, assintomtica ou disseminada. 2. Meningoenceflica (neurocriptococose): forma mais grave da doena, secundria a processos pulmonares e cutneos. Manifesta-se por quadros de meningite, meningoencefalite ou criptococoma. O microrganismo desenvolvese rapidamente, resultados uma progressiva deteriorao do quadro e morte. 3. Cutnea ou cutnea - mucosa: manifestao da disseminao da doena com leses papilomatosas, pustulocrostosas, subcutnas, verrucosas e ulcerosas. 4. Mistas: comprometimento da pele, mucosas, gnglios, meninges, articulaes, ossos, pulmes, rgos genitais.

DIAGNSTICO LABORATORIAL O material biolgico de escolha para esta micose o escarro, lquor, material ganglionar, leses mucocutneas. 1. EXAME DIRETO A. A fresco: sem colorao no permite boa visualizao. B. Corado: levedura capsulada que no se cora os corantes habituais, utiliza-se ento tinta-da-china ou Nanquin. microscopia apresenta um campo escuro onde as leveduras possuem ao seu redor uma cpsula de mucopolissacardeos de natureza inerte (no reage com o corante) formando um halo claro ao redor de cada levedura. Em cortes histolgicos de bipsias a colorao utilizada o PAS e mucicarmim. Os polissacardeos da cpsula esto relacionados ao grau de virulncia das cepas.

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2. CULTIVO Em gar Sabouraud sem ciclohexemide (inibe o crescimento) a temperatura de 25C ou 37C. As colnias so viscosas, mucides, cremes. Em sua micromorfologia apresenta os elementos semelhantes queles do exame direto, podendo a cpsula ser pequena devido a sucessivos repiques ou perda da viscosidade. 3. PROVAS DE IDENTIFICAO A. Prova bioqumicas A. 1. Prova da urease: diferenciao entre leveduras do gnero Candida (-) e Cryptococcus (+) em meio gar uria de Christensen. A. 2. Provas de assimilao de carboidratos e nitrato: Assimila diferentes acares e nitrato, porm no fermenta nenhum tipo de acar. A. 3. Provas de presena de compostos fenlicos: servem para rpida identificao presuntiva do C. neoformans. Este tem a capacidade de produzir pigmento semelhante melanina em meio de cultivo contendo compostos fenlicos tais como: cido cafico, sementes de alpiste ( Guizotia abyssinica), dopamina. A capacidade de produzir colnias marrons nestes substratos indicativa da atividade da enzima fenol oxidase. A. 4. Provas de diferenciao das espcies C.gattii e C. neoformans: Baseadas na mudana de cor do meio de cultivo CGB (canavanina glicina azul de bromotimol) onde as variedades neoformans e grubii de C. neoformans no variam a cor do meio (esverdeado ou amarelado), e a espcie C.gattii torna o meio azul. B. Provas Imunolgicas: Aglutinao em ltex (para deteco do antgeno capsular), ELISA.

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PARACOCCIDIOIDOMICOSE (BLASTOMICOSE SUL-AMERICANA)

DEFINIO uma micose sistmica crnica, com um foco primrio pulmonar, e que se dissemina para a mucosa oral, nasal e vsceras, formando granulomas ulcerativos. AGENTE ETIOLGICO: Paracoccidioides brasiliensis EPIDEMIOLOGIA: A doena encontrada desde o Sul do Mxico at o Norte da Argentina. O maior nmero de casos ocorre no Brasil (80%), Colmbia e Venezuela. Os casos tendem a se concentrar ao redor de florestas midas, com chuvas abundantes, temperaturas moderadas e invernos suaves. A faixa etria mais afetada representada por adultos de 30 a 60 anos, com grande predomnio do sexo masculino. A maioria dos casos proveniente das reas rurais. TRANSMISSO O provvel mecanismo de transmisso atravs da inalao dos condios do fungo, porm sem comprovao definitiva. O perodo de incubao muito varivel (mdia de 15 anos). MANIFESTAES CLNICAS I. Doena primria benigna 1. Paracoccidioidomicose pulmonar primria II. Doena aguda e progressiva crnica 1. Doena pulmonar aguda e progressiva crnica 2. Doena disseminada com envolvimento mucocutneo, linftico e visceral. III. Paracoccidioidomicose aguda juvenil. DIAGNSTICO LABORATORIAL 1. Diagnstico micolgico: o material biolgico a ser colhido depende do tipo de leso e pode ser escarro, lavado brnquico, pus de linfonodos, raspados de leso cutnea, bipsias, etc. 1.a. Exame direto: feito aps clarificao do material biolgico com potassa. 1.b. Exame aps colorao: feito em esfregaos de escarro ou cortes histolgicos de bipsias. Os mtodos de colorao mais utilizados so a hematoxilina-eosina, Grocott (prata) e PAS. Nestes materiais o P.brasiliensis apresenta-se como elementos leveduriformes globosos de mltiplo brotamento, com 2-10 m de dimetro, podendo atingir cerca de 30 um. A parede celular dupla, espessa e bastante refringente. 1.c. Cultivo: O P. brasiliensis um fungo dimrfico, podendo apresentar-se saprofiticamente sob a fase filamentosa e leveduriforme. Fase leveduriforme (em gar-sangue ou BHI 37o C): de crescimento lento, produzindo colnias cerebriformes ou sulcadas, de cor esbranquiada. A micromorfologia constituda de elementos leveduriformes multibrotantes e hifas distorcidas. Fase filamentosa (em gar-sabouraud 25o C): colnia de crescimento lento, com aspecto aveludado ou membranoso, sulcado ou no, cor branca ou bege, com reverso amarelado ou acastanhado. Ao exame microscpico so observadas hifas septadas e clamidocondios intercalados. 2. Mtodos imunolgicos: so baseados principalmente na pesquisa de anticorpos, atravs de mtodos de imunodifuso em gel de garose (o mais utilizado), ensaio imunoenzimtico, imunofluorescncia indireta, fixao de complemento, etc. Podem tambm ser utilizados ensaios de intradermoreao com paracoccidiodina.

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HISTOPLASMOSE
DEFINIO uma micose sistmica, de acometimento predominantemente pulmonar, causado por um fungo dimrfico que tem afinidade pelo sistema fagocitrio-mononuclear. AGENTE ETIOLGICO: Histoplasma capsulatum. Esta espcie apresenta duas variedades: Histoplasma capsulatum variedade capsulatum e Histoplasma capsulatum variedade duboisii. A variedade capsulatum tem ampla distribuio geogrfica enquanto que a variedade duboisii restrita frica. HABITAT E TRANSMISSO Seus condios so encontrados em galinheiros, cavernas, stos de casas velhas ou abandonadas e outras construes. Tambm podem ser isoladas do solo. Os reservatrios animais so constitudos por morcegos, galinhas e outras aves gregrias. A transmisso se d atravs da inalao dos condios (microcondios) que se encontram em suspenso junto com a poeira. A transmisso por via oral no aceita por todos os autores. O perodo de incubao varia de 3 a 30 dias. MANIFESTAES CLNICAS 1. Formas assintomticas 2. Formas sintomticas 2.a. Histoplasmose pulmonar: 2.a.1. Histoplasmose pulmonar primria 2.a.2. Histoplasmose pulmonar crnica 2.b. Histoplasmose localizada 2.c. Histoplasmose disseminada Patogenia da histoplasmose: a leso na histoplasmose caracteriza-se por um infiltrado de macrfagos, clulas linfoplasmocitrias e eosinfilos. Esse infiltrado leva formao de um granuloma que posteriormente necrotiza e se calcifica. O sistema imunolgico celular e humoral torna-se fortemente sensibilizado com os antgenos do fungo. DIAGNSTICO LABORATORIAL 1. Evidenciao direta do fungo. Esfregaos de escarro, sangue, medula ssea e sedimento urinrio e sua colorao por giemsa. Tambm podem ser feitos cortes histolgicos de bipsias e sua colorao pelo Giemsa, prata (Grocott), PAS e hematoxilina-eosina. Nas leses se apresenta com a forma de pequenas clulas redondas ou ovais, com 1 a 5 m de dimetro, na maioria das vezes no interior dos macrfagos. 2. Cultivo: O H. capsulatum um fungo dimrfico, podendo apresentar-se saprofiticamente sob a fase filamentosa e leveduriforme. Fase leveduriforme (em gar-sangue ou BHI 37o C): Fase leveduriforme: em BHI 37o C, as colnias apresentam-se membranosas e midas ou cremosas, de cor branca ou branco-amarelada. Micromorfologicamente apresentam-se como leveduras pequenas de 1-5 m de dimetro. Fase filamentosa: cultivada em gar-sabouraud a 25o C. So algodoadas ou pulverulentas, brancas ou bege-claras, com reverso amarelo ou alaranjado. microscopia observam-se hifas, microcondios globosos de 3-5 m e macrocondios tuberculados de 8-20 m. 3. Pesquisa de anticorpos anti-H. capsulatum: 3.1. Imunodifuso em gel de agarose. 3.2. Fixao de complemento. 4. Intradermorreao com histoplasmina.

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PROCEDIMENTOS LABORATORIAIS UTILIZADOS EM MICOLOGIA CLNICA

COLHEITA DE MATERIAL BIOLGICO
PRINCIPAIS CUIDADOS NA COLHEITA DO MATERIAL BIOLGICO 1. O material dever ser preferencialmente colhido no laboratrio, em um ambiente com janelas e portas fechadas. 2. O paciente dever suspender o uso de medicao anti-fngica por pelo menos uma semana. 3. Deve-se selecionar a rea da leso para a coleta do material. 4. Colher quantidades de materiais suficientes para vrios exames diretos e semeaduras. MATERIAL NECESSRIO PARA A COLHEITA DO MATERIAL BIOLGICO Bisturi, pina de depilao e outras pinas, tesoura, cureta, esptula de unha, ala de platina, swab, agulhas e seringas descartveis, tubos de ensaio, placa de Petri, lmina e lamnulas. MATERIAIS BIOLGICOS Escamas: Nas dermatofitoses colhe-se o material na periferia da leso onde h doena ativa e as hifas so viveis para cultura. Colhe-se por raspagem com bisturi e acondiciona-se em placa de Petri. No caso de Pitirase versicolor com pouco material, colhe-se diretamente sobre uma lmina com bisturi e, no caso de haver bastante material, colhe-se por raspagem com bisturi em placa de Petri. Pelos e cabelos: Colhe-se com pina de depilao, extraindo-se o pelo pela raiz. No caso de micose do tipo nodular, corta-se o pelo junto aos ndulos com tesoura e coloca-se o material em placa de Petri. Ps , exsudatos e secrees: Dependendo do caso usa-se ala de platina ou swab. Escarro e expectorao: Colhe-se o material em frasco estril de boca larga. Peles soltas: Colher os fragmentos com pina ou corta-se com bisturi e acondiciona-se em placas de Petri. Unhas: Pode-se raspar com bisturi ou cortar com tesoura. Se a leso for subungueal com acmulo de material embaixo da unha, colhe-se com cureta ou bisturi e acondiciona-se o material em placas de Petri. Bolhas: Colhe-se a pele que envolve o lquido. Lquidos orgnicos: Puno (lquor e abcessos), aspirao de lquido pleural, sinovial, pulmonar- sedimento da centrifugao. Sangue: Coletado do catter, bolsa de sangue, do brao- hemocultivo. Urina: Parcial de urina (jato mdio), catter vesical, puno supra pbica. Secreo vaginal: Coleta com swab para o exame a fresco, esfregao, cultura.

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EXAME DIRETO Na maioria das vezes serve s para verificar se a leso mictica ou no. Coloca-se uma quantidade do material sobre uma lmina, e aps uma gota de soda ou potassa 20 ou 30%. Aguarda-se alguns minutos para haver a clarificao e examina-se ao microscpio. EMISSO DE RESULTADOS DE EXAME MICOLGICO DIRETO NEGATIVO: Ausncia de elementos fngicos no material examinado POSITIVO: depende do que for encontrado: 1) Presena de filamentos micelianos no material examinado 2) Presena de artrocondios no material examinado 3) Malassezia sp. 4) Presena de leveduras no material examinado 5) Parasitismo do tipo endothrix 6) Parasitismo do tipo ectothrix Podem ser observadas associaes de elementos fngicos supracitados, bem como outros tipos de morfologias que so menos freqentes na prtica do dia a dia.

CULTIVO (SEMEADURA) Serve para identificar o agente etiolgico da micose. A semeadura compreende a colocao do material biolgico na superfcie do gar Sabouraud (com ou sem inibidores), deixando-se temperatura ambiente ou 25 oC durante duas ou trs semanas, e examinando-se a colnia do fungo.

REPIQUE Serve para conservar as colnias por um determinado tempo. No caso de colnias de fungos que fazem parte de uma coleo de culturas (micoteca), estas devero ser repicadas em mdia a cada dois ou trs meses, e em alguns casos em menos tempo.

MICROCULTIVO (CULTIVO EM LMINA) realizado quando no se consegue identificar o agente a partir do seu crescimento no meio de cultivo. O cultivo em lmina permite demonstrar ao exame microscpico, a morfologia dos fungos, tornando possvel a visualizao correta de suas estruturas, como as caractersticas das hifas, conidiforos, condios, etc. MATERIAL NECESSRIO Cultura do fungo, placa de Petri, basto de vidro dobrado em U, papel-filtro com igual dimetro da placa de Petri, gua destilada estril, ala de platina, lmina, lamnula, pina, bisturi, meio de gar Sabouraud slido, e lactofenolazul-algodo. PREPARO DO MATERIAL 1. A amostra deve ser recente e cultivada em meio slido. 2. Forrar a placa de Petri na qual vai ser feito o microcultivo com o papel-filtro. Colocar o basto de vidro dobrado junto com a lmina. Embrulhar o papel e esterilizar em forno Pasteur 170o C durante 2 horas. 3. O meio a ser utilizado pode ser o gar Sabouraud ou qualquer outro meio. Formar uma camada de cerca de 2 mm em outra placa de Petri e cortar em blocos quadrados de 5 mm de lado.
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EXECUO 1. Retirar um bloco de gar com o lado da lmina do bisturi, colocando-a sobre a lmina da placa, de maneira assptica. 2. Retirar pequenas pores da colnia e semear em dois lados do bloco. 3. Cobrir este bloco com uma lamnula estril, com cuidado. 4. Molhar o papel com gua destilada estril. A placa funcionar como uma cmara mida. 5. Identificar a placa e acompanhar o crescimento da cultura. 6. Aps crescimento retira-se a lamnula do microcultivo colocando-a em uma nova lmina contendo lactofenol azul de algodo. Obs: Alternativamente pode-se utilizar a lmina do microcultivo (se houver crescimento) quando no for possvel a identificao pela lamnula. FUNDAMENTO DO MICROCULTIVO A cultura cresce na lmina e lamnula, aparecendo as estruturas fngicas bem separadas e intactas quando se retira o bloco do gar, permitindo o estudo detalhado de sua micromorfologia.

PRESERVAO E MANUTENO DE CULTURAS DE FUNGOS 1. Repiques sucessivos mantidos a temperatura ambiente. Os fungos podem ser mantidos na forma de coleo (micoteca ou ceprio) no laboratrio, a temperatura ambiente, com o objetivo de permitir comparaes com espcies recm-isoladas e outros estudos. Os repiques so feitos por meio da transferncia, em condies asspticas, de um fragmento de colnia para um tubo novo de cultura, que pode ser o gar-batata ou agar Sabouraud. O perodo recomendado para o repique varia de um at no mximo 6 meses, de acordo com o tipo de fungo. 2. Outros mtodos de preservao. Podem ser utilizados a gua destilada, leo mineral, liofilizao e nitrognio lquido.

BIOSEGURANA NO LABORATRIO DE MICOLOGIA CLNICA Cuidados com o material contaminado: tudo deve ser autoclavado. Cuidados com os microscpios: Aps o uso, limp-los com gaze umedecida em lcool.
o

Cuidados com a bancada: aps o uso, limp-las com gaze umedecida em lcool 70 ou lcool iodado. Durante a manipulao de qualquer tipo de fungo, em culturas ou exame direto, deve-se trabalhar sempre prximo a um bico de Bunsen aceso.

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SOLUES E MEIOS DE CULTURA UTILIZADOS EM MICOLOGIA CLNICA

1. POTASSA 20% (CLARIFICANTE) Usado para a pesquisa de fungos em raspados de pele, pelos e unhas. A potassa, em concentraes de 10 a 40%, faz com que as clulas se dilatem e clareiem, permitindo a evidenciao de hifas e esporos de fungos. KOH............................................................... H2O destilada.....qsp...................................... 2. POTASSA GLICERINADA A 20% Mesmo uso anterior, porm preservando o material KOH............................................................... Glicerina......................................................... H2O destilada.....qsp...................................... 20 g 20,0 mL 100,0 mL para ser examinado por um perodo maior. 20 g 100,0 mL

3. LACTOFENOL AZUL-ALGODO Usado principalmente como corante no estudo micromorfolgico de cultura de fungos. Fenol.............................................................. cido ltico..................................................... Glicerina......................................................... H2O destilada................................................ Azul-algodo (Azul-Poirrier)........................... 20 g 20 g 20,0 mL 20,0 mL 0,05 g

Adicione na ordem: cido lctico, glicerina, gua destilada. A seguir, acrescente o fenol e o azul-algodo, dissolvendo em banho-maria. Finalmente, filtre em papel de filtro. O Azul-algodo pode ser substitudo pelo azul de metileno

4. GAR SABOURAUD DEXTROSADO Usado para o cultivo rotineiro dos fungos, inclusive fungos contaminantes do ar. Dextrose (glicose).......................................... Peptona.......................................................... gar................................................................ H2O destilada qsp.......................................... 20,0 g 10,0 g 15,0 g 1.000,0 mL

Ferver a gua, dissolver o gar, acrescentar a peptona e depois a dextrose. Imediatamente aps a dissoluo da dextrose, distribuir em tubos. Autoclavar 120O C durante 15 minutos.

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5. GAR-SABOURAUD COM ANTIBITICOS (MEIO SELETIVO) Utiliza antibiticos para inibir o crescimento de fungos e bactrias do ar. Dextrose (glicose).......................................... Peptona.......................................................... gar................................................................ H2O destilada qsp.......................................... Cicloheximide................................................. Cloranfenicol.................................................. 20,0 g 10,0 g 15,0 g 1.000,0 mL 0,5 g 0,1 g

Dissolver 0,1 g do cloranfenicol em 10 mL de lcool etlico, 0,5 g de cicloheximide em 10 mL de acetona e misturar tudo em 1.000 mL de meio fundido. Distribuir em tubos e autoclavar 120O C durante 15 minutos. 6. GAR-BATATA Utilizado para a manuteno de culturas de dermatfitos. Infuso de batatas.......................................... Dextrose......................................................... gar................................................................ H2O destilada qsp.......................................... 500,0 g 10,0 g 15,0 g 1.000,0 mL

Para o preparo da infuso de batatas, colocar 200 g de batatas descascadas em 500 mL de gua destilada e cozinh-las durante 1 h. Filtrar em gaze e completar o volume 500 mL com gua destilada. adicionar o gar e glicose, dissolver e distribuir nos tubos. Autoclavar 120O C durante 15 minutos.

7. GAR-FUB Utilizado na induo de clamidosporo terminal de Candida albicans. Fub............................................................... gar................................................................ Tween 80....................................................... H2O destilada qsp.......................................... 40,0 g 20,0 g 10,0 mL 1.000,0 mL

Misturar o fub com 500,0 mL de gua, em banho-maria durante 1 hora. Filtrar em pano e papel filtro. Acrescentar o gar dissolvido em 500,0 mL de gua. Completar o volume para 1.000,0 mL. Acrescentar o Tween 80. Distribuir em tubos e autoclavar 120O C durante 15 minutos. 8. GAR ARROZ Utilizado na induo de clamidosporo terminal de Candida albicans. Arroz............................................................... gar................................................................ H2O destilada qsp.......................................... 20,0 g 20,0 g 1.000,0 mL

Ferver lentamente o arroz com a gua durante 45 minutos. Filtrar em gaze e completar o volume para 1000 mL. Adicionar o gar e aquecer em banho-maria at dissoluo completa. Distribuir em tubos e autoclavar a 120O C durante 15 minutos.

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9. MEIO PARA IDENTIFICAO DE Candida sp Utilizado para identificao de culturas de Candida, principalmente Candida albicans, pela mudana de cor. Extrato de levedura........................................ Glicina............................................................ Sulfito de sdio............................................... Citrato de bismuto amoniacal......................... gar................................................................ H2O destilada qsp.......................................... 1,0 g 10,0 g 3,0 g 5,0 g 13,0 g 1.000,0 mL

Dissolver os reagentes em gua fervente e distribuir em tubos estreis, porm sem autoclavar. Obs: Certas espcies de Candida possuem a capacidade de reduzir o sulfito a sulfeto, adquirindo colorao que varia do marrom claro a preta. 10. CHROMAGAR Candida Utilizado para diferenciar espcies de Candida, baseando-se nas diferentes coloraes adquiridas pelas colnias. Identifica C. albicans e C. tropicalis. comercializado na forma desidratada sob o nome de CHROMagar Candida (PROBAC). CHROMagar Candida desidratado................... H2O destilada qsp.......................................... 47,7 g 1.000,0 mL

Dissolver os reagentes em gua destilada estril fervente, e distribuir em tubos ou placas estreis, porm sem autoclavar.

11. MEIO DE LACTRIMEL Utilizado para o cultivo de colnias de fungos filamentosos e leveduras e observao de estruturas morfolgicas em microcultivo. Farinha de trigo.............................................. Leite em p (20g/200 mL de gua)................ Mel................................................................. gar................................................................ H2O destilada qsp..........................................
O

20,0 g 200,0 mL 10,0 g 20,0 g 1.000,0 mL

Autoclavar o leite separadamente a 120 C por 15 minutos. Os demais ingredientes so dissolvidos na gua e autoclavados a 120O C por 15 minutos e distribudos em tubos. 12. MEIO DE GAR NIGER (Guizotia abyssinica) Utilizado para verificao de atividade de fenoloxidase de Cryptococcus neoformans e C. gattii. Estas espcies vo apresentar colnias com tonalidade marrom. Glicose................................................................. 10,0 g Cloranfenicol......................................................... 50 mg Extrato de sementes de niger*............................... 200,0 mL gar.................................................................... 20,0 g H2O destilada ..................................................... 800,0 mL * Extrato de semente de niger: pulverizar 70 g de sementes de G. abyssinica em gral. Suspender em 350 mL de gua destilada. Autoclavar durante 10 min. Filtrar atravs de gaze e ressuspender no volume original com gua destilada.
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13. MEIO PARA QUIMIOTIPAGEM DE C. neoformans Utilizado para diferenciar a espcie C. gattii (sorotipos B e C) da espcie C. neoformans. A variedade gattii, pelo fato de possuir enzimas capazes de degradar a canavanina, que txica, permite o seu crescimento nesse meio, utiliza a glicina como fonte de nitrognio que degradada, resultando na produo de amnia, que altera o pH tornando-o alcalino. No pH alcalino o bromotimol passa de cor verde-amarelado para azul intenso. Soluo A Glicina................................................................. Sulfato de L-cavanina.......................................... Tiamina............................................................... K2HPO4............................................................... MgSO4................. ..................................................... H2O destilada qsp................................................ Ajustar o pH para 5,6. Esterilizao por filtrao. Soluo B Bromotimol azul sdico......................................... NaOH 0,1 N......................................................... H2O destilada ...................................................qsp Dissolver o bromotimol na soluo de NaOH e mL

10 g 30 mg 1 mg 1g 1g 100,0 mL

0,4 g 64,0 mL 100,0 mL seguir completar com gua destilada para o volume final de 100,0

PREPARO DE 1.000 mL de MEIO CGB Misturar 780,0 mL de gua destilada com 20,0 mL da soluo B. autoclavar 15 min. Esfriar o meio at 50-60 C e acrescentar assepticamente 100,0 mL da soluo A. distribuir em tubos ou placas estreis. OBSERVAES: -Para isolamento e identificao de leveduras tambm podem ser utilizados outros meios de cultivo: Oxoid- "Candida Medium"- isolamento de Candida de material clnico contaminado. Meios para prova de assimilao e fermentao de acares. Fungos filamentosos: meios para crescimento colonial/ meios para identificao de espcies de uma classe ou gnerogar extrato de malte, carne, sais minerais, vitaminas. -Meios que induzem mais intensamente a formao de estruturas micromorfolgicas de esporulao: gar lactrimel, fub, arroz, aveia, sais minerais, extrato de levedura, etc.

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PROVAS ADICIONAIS E COMPLEMENTARES NA IDENTIFICAO DE FUNGOS

PROVAS ADICIONAIS PARA IDENTIFICAO DE DERMATFITOS 1. Teste de perfurao de pelos in vitro. a. Em uma placa colocar vrios fragmentos (at 1,0 cm de comprimento) de cabelo humano saudvel. Esterilizar por autoclavagem. b. Adicionar na placa 20-25 mL de gua destilada estril contendo 0,15 mL de extrato de levedura estril a 10%. c. Colocar vrios fragmentos de colnias dentro da placa estril. d. Incubar a temperatura ambiente no escuro, examinando a cada semana, durante um perodo de 4 semanas ou at positivar, no microscpio entre lmina e lamnula com uma gota de lacto-fenol azul algodo. RESULTADO: T.mentagrophytes ser penetrado perpendicularmente por hifas resultando em uma perfurao em forma de cunha. O T.rubrum no consegue perfurar o pelo. MEIO PARA IDENTIFICAO DE ESPCIES DO GNERO Trichophyton MEIO BASE CASENA cido casamnico sem vitaminas (Difco)........ Fosfato monopotssico.................................. Sulfato de magnsio...................................... Dextrose......................................................... gar................................................................ H2O destilada qsp..........................................

2,5 g 1,8 g 0,1 g 40,0 g 20,0 g 1.000,0 mL

INOSITOL: 250 mg/100 mL de H2O destilada : 2% no meio base. TIAMINA: 10 mg/100 mL de H2O destilada: 2% no meio base. CIDO NICOTNICO: 100 mg/100 mL de H2O destilada: 2% no meio base HISTIDINA: 150 mg/100 mL de H2O destilada: 2% no meio base nitrato de amnio*. MEIO BASE DE NITRATO DE AMNIO Nitrato de amnio........................................... Fosfato monopotssico.................................. Sulfato de magnsio...................................... Dextrose........................................................ H2O destilada qsp.......................................... DERMATFITOS MEIO BASE INOSITOL 4 (+) (-) (-) (-) (-)

1,5 g 1,8 g 0,1 g 40,0 g 1.000,0 mL INOSITOL TIAMINA 4 (+) (-) (-) (-) (-) TIAMINA 4 (+) 4(+) 4(+) 4(+) 4(+) C. NICOTNICO (-) (-) (-) (-) 4(+) HISTIDINA (-) (-) (-) (-) (-)

T.schoenleinii 4 (+) T.violaceum 1(+) T.tonsurans 1(+) T.rubrum 4(+) T.mentagrophytes 4(+) 1 a 4(+): intensidade de crescimento (-): desconhecido

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TESTE DE UREASE
Fundamento: a urease que esteja presente no fungo vai hidrolisar a uria presente no meio, dando como produtos de degradao a amnia. Esta vai alcalinizar o meio, fazendo com que haja viragem da cor do indicador vermelho fenol. GAR- URIA DE CHRISTENSEN Peptona.......................................................... Glicose........................................................... Cloreto de sdio............................................. Fosfato de K monobsico.............................. Vermelho fenol............................................... gar............................................................... H2O destilada qsp.......................................... Uria 40% (mantido parte). Dissolver os componentes na gua destilada quente (em banho-maria). Ajustar o pH 6.8. Distribuir 4,5 mL em tubos e autoclavar. Acrescentar 0,5 mL de uria 40% ( na temperatura de 45-60oC.

1,0 g 1,0 g 5,0 g 2,0 g 12,0 mg 20,0 g 1.000,0 mL

MEIO PARA PROVA DE ASSIMILAO DE ACARES

Sulfato de amnio.......................................... 5,0 g

Fosfato de potssio monobsico..................... 1,0 g Sulfato de magnsio 7H2O............................. gar............................................................... H2O destilada qsp.......................................... 0,5 g 20,0 g 1.000,0 mL

Dissolver quente. Autoclavar. Verter em placas de Petri. Semear uma suspenso de levedura. Colocar discos de papel filtro impregnados com os diferentes acares. Ler aps 2 a 4 dias. O meio base para assimilao tambm pode ser preparado na forma de caldo em tubo, contendo acar a ser estudado, semeado e lido atravs de formao de turbidez aps alguns dias.

MEIO BASE PARA FERMENTAO DE ACARES Extrato de levedura.................................. Peptona.....................................................

Azul de bromotimol ou prpura bromocresol.................................................... H2O destilada qsp.......................................... de 0,4 g 1.000,0 mL 4,5 g 7,5 g

Dissolver quente. Distribuir 2,0 mL em tubos de ensaio contendo tubos de Durham invertidos. Autoclavar. Adicionar 1,0 mL de soluo do acar 6% previamente esterilizada por filtrao. Semear a levedura a ser estudada.

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Alternativamente existe o meio base para fermentao sem indicador: 2,5 g Extrato de levedura.................................. 2,5 g Peptona.....................................................

Acar.......................................................
H2O destilada qsp..........................................

3,0 g 100,0 Ml

Distribuir em tubos contendo tubos de Durham invertidos e autoclavar durante 15 min. A leitura da prova de fermentao feita aps uma semana de semeadura. As colnias semeadas devem estar livres de qualquer tipo de contaminao. Fermentao positiva: produo de gs no tubo de Durham e mudana de cor do indicador, indicando acidez do meio. CARACTERSTICAS DA FERMENTAO E ASSIMILAO Todo acar fermentvel tambm assimilvel Todo acar assimilvel nem sempre fermentvel Toda levedura que no fermenta a glicose no fermentar nenhum outro acar Toda levedura que fermenta a glicose tambm fermentar a frutose e a manose Nenhuma levedura pode fermentar ao mesmo tempo a maltose e a lactose

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CARACTERSTICAS DAS PRINCIPAIS ESPCIES DE LEVEDURAS

ASSIMILAO
NOME DA LEVEDURA TUBO GERMINATIVO (37O C) UREASE (25O C) GLICOSE LACTOSE MALTOSE SACAROSE GALACTOSE

FERMENTAO
GLICOSE LACTOSE MALTOSE SACAROSE GALACTOSE

C.albicans C.glabrata C.parapsilosis C.tropicalis C.krusei C.guilliermondi C.pseudotropicalis Cryptococcus neoformans Trichosporon beigelii Geotrichum candidum Rhodotorula rubra

+ -

+ + +

+ + + + + + + + + + +

+ + -

+ + + + + + +

+ + + + + + + +

+ + + + + + + + +

+ + + + + + + -

+ -

+ + -

+ + + -

+ + + + + -

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INDUO DE TUBO GERMINATIVO (para Candida albicans/C. dubliniensis) 1. Utilizar culturas jovens de 24 a 48 horas 2. Preparar uma suspenso com as colnias em um tubo contendo gua destilada estril ou salina estril. 3. Colocar duas ou trs gotas desta suspenso em outro tubo contendo 1,0 soro humano lmpido sem hemlise. 4. Incubar 37o C durante 3-4 horas. 5. Examinar ao microscpio. Obs: no lugar do soro humano podem ser utilizados soro de cavalo, gua peptonada 1% ou clara de ovo.

mL

de

INDUO DE CLAMIDOSPORO TERMINAL (para Candida albicans/C. dubliniensis) 1. Utilizar culturas jovens de 24-48 horas. 2. Distribuir gar-fub liquefeito sobre uma lmina estril mantida em placa de Petri,de maneira a formar uma pelcula sobre a lmina. Alternativamente, o gar pode ser cortado em quadrados e colocados sobre a lmina. 3. semear a levedura em finas estrias, recobrindo-se com a lamnula. 4. Incubar 25o C durante um a cinco dias, em cmara mida. 5. Observar a lmina microscopia para a evidenciao de clamidosporos terminais.

TESTES UTILIZADOS NA IDENTIFICAO DE ACTINOMICETOS MEIO BASE PARA REALIZAO DO TESTE DE DIGESTO DE CASENA Preparar separadamente os meios: Meio A Leite desnatado.............................................. H2O destilada qsp.......................................... Meio B Agar................................................................ H2O destilada qsp..........................................

10,0 g 100,0 mL

2,0 g 100,0 mL

Autoclav-los durante 15 min. Esfriar os meios a aproximadamente 45 C, mistur-los e distribuir em placas de Petri. Semear o actinomiceto no meio, e observar o clareamento do meio ao redor do crescimento bacteriano at um perodo superior a 14 dias. MEIO BASE PARA HIDRLISE DA TIROSINA, XANTINA E HIPOXANTINA MEIO BASAL Extrato de carne............................................. Peptona..........................................................

3,0 g 5,0 g 15,0 g 1.000,0 mL

Agar..........................................................
H2O destilada qsp..........................................

Dissolver o extrato de carne, peptona e o gar na gua, aquecendo-os em banho-maria. Acertar o pH para 7,0. Distribuir, em cada frasco de 250 mL, 100 mL do meio e autoclavar durante 15 min. Deixar esfriar o meio a 60-70 C e adicionar 10 mL da soluo a 4,0 g % de Tirosina, ou de Xantina ou de Hipoxantina.

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PREPARO DA SOLUO DE AMINOCIDOS Xantina...............................................0,4g Hipoxantina........................................0,4 g gua destilada...................................10 mL gua destilada....................................10 mL Tirosina.............................................0,4 g gua destilada..................................10 mL Dissolver completamente os aminocidos em gua destilada. Autoclavar durante 15 C. Cada 10 mL de meio ser adicionado a 100 mL de meio basal resfriado. Misturar bem e adicionar em placas de Petri esterilizadas. Culturas plaqueadas so incubadas a 26 C. Aps 14 dias e 21 dias, as culturas devem ser examinadas, para se observar o halo de clareamento ao redor das colnias. No caso da tirosina, observar a dissoluo de seus cristais em volta das colnias, tanto abaixo como na superfcie do meio de cultivo.

CARACTERSTICAS EM ALGUMAS ESPCIES DE ACTINOMICETOS

Espcie de actinomiceto Nocardia asteroides Nocardia brasiliensis Nocardia caviae Actinomadura madurae Actinomadura pelletieri casena + + + Xantina + + hipoxantina + tirosina + + + uria + + + -

PESQUISA DE FUNGOS ANEMFILOS NO AR FINALIDADE: Avaliao da microbiota fngica do ambiente pr-determinado para fins de controle, relacionando os fungos encontrados com possveis infeces oportunistas ou ao alrgica. MATERIAIS: Placas de Petri grandes (15 cm de dimetro) contendo gar Sabouraud dextrosado. EXECUO: 1. Expor as placas durante 15-30 min. 2. Incubar a temperatura ambiente durante 5-7 dias. 3. Escolher as colnias mais isoladas. 4. Preparar lminas com os fragmentos das colnias (lactofenol azul-algodo). 5. Descrever a macro e micromorfologia, procurando identificar o fungo.

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MORFOLOGIA DOS DERMATFITOS Epidermophyton floccosum Microsporum canis Microsporum gypseum Trichophyton mentagrophytes Trichophyton rubrum Trichophyton schoenleinii Trychophyton tonsurans Trichophyton violaceum

Epidermophyton floccosum
MACRO: tempo de crescimento: Cor: Textura. Topografia: Reverso: Contorno: .

MICRO: hifas hialinas, septadas, ausncia de microcondios, macrocondios em forma de clava, basto, taco de beisebol com uma extremidade mais arredondada, parede pouco rugosa, 3 a 4 septos, condios nicos ou em pequenos grupos.

Microsporum canis
MACRO: tempo de crescimento: Cor: Textura. Topografia: Reverso: Contorno: .

MICRO: hifas hialinas, septadas, poucos microcondios alongados, macrocondios em forma de lana (fuso), extremidades pontudas, septos largos e evidentes, parede fina e rugosa com superfcie granulosa ou lisa.

Microsporum gypseum:
MACRO: tempo de crescimento: Cor: Textura. Topografia: Reverso: Contorno: .

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MICRO: hifas hialinas, septadas, microcondios alongados que se destacam das hifas.Grande quantidade de macrocondios elipsides, com extremidades levemente arredondadas, 4 a 6 septos, parede fina, septos mais junto do que o M. canis

Trychophyton mentagrophytes
MACRO: tempo de crescimento: Cor: Textura. Topografia: Reverso: Contorno: .

MICRO: hifas hialinas, septadas, grande quantidade de microcondios redondos, isolados ou em cachos ao longo das hifas, macrocondios em forma de basto, longos, septados.Hifas hialinas em espiral podem ser observadas (gavinhas).

Trichophyton rubrum
MACRO: tempo de crescimento: Cor: Textura. Topografia: Reverso: Contorno: .

MICRO:Hifas hialinas,septadas, macrocondios longos, multiseptados, microcondios ovais ao longo das hifas ou agrupados.

Trichophyton schoenleinii
MACRO: tempo de crescimento: Cor: Textura. Topografia: Reverso: Contorno: .

MICRO: hifas ramificadas, septadas, hialinas, algumas com extremidades arredondadas, com bifurcaes semelhantes candelabros fvicos; ausncia de condios.

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Trichophyton tonsurans
MACRO: tempo de crescimento: Cor: Textura. Topografia: Reverso: Contorno: .

MICRO: hifas septadas, hialinas, ramificadas, macrocondios alongados. Grande quantidade de microcondios de tamanhos variados, com condios dilatados (forma de balo), finos, encurvados, em forma de gota, dispostos lateralmente s hifas.

Trichophyton violaceum
MACRO: tempo de crescimento: Cor: Textura. Topografia: Reverso: Contorno: .

MICRO: hifas hialinas, septadas e ramificadas. Apresenta pouca quantidade de microcondios em forma de basto e raros macrocondios alongados.

MORFOLOGIA DE FUNGOS PATOGNICOS E ANEMFILOS

Hortaea werneckii:
MACRO: tempo de crescimento: Textura: Topografia: Cor: Reverso: Contorno: Micro: hifas septadas, ramificadas, castanhas ou esverdeadas e elementos leveduriformes com 1 septo central bem ntido ( didimosporos).

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Piedraia hortae:
MACRO: tempo de crescimento Cor: Textura. Topografia: Reverso: Contorno: .

MICRO: filamentos micelianos ramificados , septados e acastanhos, podendo apresentar clamidsporos intercalares.

Cladosporium sp:
MACRO: tempo de crescimento: Textura: Topografia: Cor: Reverso: Contorno: Micro: hifas ramificadas, septadas esverdeadas com conidiforos contendo em sua extremidade condios ovas, arredondados dispostos em cadeias. Pode apresentar condios soltos sem arranjo especial.

Trichosporon sp:
MACRO: tempo de crescimento: Textura: Topografia: Cor: Reverso: Contorno: Micro: hifas hialinas, ramificadas formando artrocondios de tamanhos variados com predomnio dos mais finos e retangulares. Pode haver presena de blastocondios. A identificao final se faz utilizando a metodologia para identificao de leveduras.

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Geotrichum sp:
MACRO: tempo de crescimento: Textura: Topografia: Cor: Reverso: Contorno: Micro: hifas hialinas, ramificadas com artrocondios ramificados formando cadeias. Os artrocondios so ovais ou quadrangulares, arredondados nas extremidades.

Candida sp:
MACRO: tempo de crescimento: Textura: Topografia: Cor: Reverso: Contorno: Micro: leveduras com brotamento simples, pseudo-hifas, raramente hifas verdadeiras ( indistingvel de outras leveduras)

Candida albicans:
Macro: igual a Candida sp Micro: Presena de clamidosporos terminais (estruturas grandes, arredondadas na extremidade de hifas verdadeiras). Para produzi-las necessrio cultiv-la em meios pobres como gar-fub ou gar- arroz.

Rhodotorula sp:
MACRO: tempo de crescimento: Textura: Topografia: Cor: Reverso:
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Contorno:

Micromorfologia: leveduras com brotamento simples ( indistingvel de outras leveduras).

Aspergillus sp:
MACRO: tempo de crescimento: Cor: Textura: Topografia: Reverso: Contorno: MICRO: hifas hialinas, septadas, conidiforos longos que terminam em vescula globosa, envolta por filides e condios ovais dispostos em cadeias.

Aspergillus niger:
MACRO: tempo de crescimento: Cor: Textura: Topografia: Reverso: Contorno: MICRO: hifas escuras, septadas, conidiforos longos que terminam em vescula globosa, envolta por filides e condios grandes, ovais dispostos em cadeias que envolvem normalmente toda a vescula.

Penicillium sp:
MACRO: tempo de crescimento: Cor: Textura: Topografia: Reverso: Contorno: MICRO: hifas hialinas, septadas, conidiforos ramificados, com ramificaes secundrias (filides), que terminam em cadeias de condios ovais (semelhante a pincis, vassoura).
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Fusarium sp:
MACRO: tempo de crescimento: Cor: Textura: Topografia: Reverso : Contorno: MICRO: hifas hialinas, septadas, raros microcondios, ramificaes curtas, com muitos macrocondios fusiformes, encurvados nas duas extremidades, septados.

Scopulariopsis sp:
MACRO: tempo de crescimento: Cor: Textura: Topografia: Reverso: Contorno: MICRO: hifas hialinas, ramificadas, septadas, conidiforos curtos e ramificados, pode apresentar filides pequenas com condios nas extremidades. Os condios so ovais, grandes, podendo apresentar dupla parede formando cadeias. Normalmente forma cadeias de condios com aspecto de colar.

Rhizopus sp:
MACRO: Tempo de crescimento: Textura: Topografia: Cor: Reverso: MICRO: hifas hialinas largas, ramificadas, na maioria quase sem septos (cenocticas), esporangiforos longos e ramificados tendo abaixo das ramificaes estrututras chamadas rizoides. Na extremidade dos esporangiforos aparecem esporangios com esporangiosporos no seu interior. Quando o esporngio se rompe se observa a columela.

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Mucor sp:
MACRO: tempo de crescimento: Textura: Topografia: Cor: Reverso: Contorno: MICRO: hifas hialinas largas, ramificadas, na maioria quase sem septos (cenocticas), esporangiforos longos e ramificados terminando em columela envolvida por estrutura redonda e fechada. Esporngios com esporangisporos ou esporos no seu interior. Quando o esporngio se rompe se observa a columela. No apresenta rizoides.

Alternaria sp:
MACRO: tempo de crescimento: Cor: Textura: Topografia: Reverso: Contorno: MICRO: hifas ramificadas, septadas, escuras, com conidiforos que apresentam nas extremidades condios isolados ou formando cadeias, marrons, paredes de contorno irregular, apresentando septos irregulares( transversais e longitudinais).

Curvularia sp:
MACRO: tempo de crescimento, cor, textura, topografia, reverso, contorno: semelhante Alternaria sp. MICRO: hifas ramificadas, septadas, escuras, com conidiforos que apresentam nas suas extremidades condios escuros, isolados ou agrupados com septos s num sentido.

Scytalidium sp:
MACRO: tempo de crescimento: Cor: Textura: Topografia:
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Reverso: Contorno: .

MICRO: hifas septadas, ramificadas, acastanhadas, com cadeias de artrocondios.

Sporothrix schenckii:
Fungo dimrfico- fase filamentosa MACRO: tempo de crescimento: Cor: Textura. Topografia: Reverso: Contorno: .

MICRO: hifas finas, hialinas, septadas, conidiforos pequenos e na extremidade condios ovais dispostos em roda com aparncia de "margarida". Apresenta tambm condios espalhados ao longo das hifas.

Cryptococcus neoformans:
MACRO: tempo de crescimento: Textura: Topografia: Cor: Reverso: Contorno: Micro: leveduras capsuladas de brotamento simples. A cpsula evidenciada por corantes como a tinta-da-china.

Nocardia sp:
Bactria filamentosa (actinomiceto). MACRO: tempo de crescimento: Textura: Topografia: Cor:
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Reverso: Contorno: MICRO: filamentos finos, ramificados que se fragmentam em formas de bacilos ou cocos, Bactria gram +, parcialmente lcool cido resistentes (colorao de Kynion).

Paracoccidioides brasiliensis:
Fungo dimrfico: fase filamentososa e leveduriforme MACRO: tempo de crescimento:

Cor:

Textura.

Topografia:

Reverso:

Contorno:

MICRO: presena de filamentos micelianos finos, ramificados, septados (fase filamentosa). Leveduras multibrotantes de tamanho varivel (fase leveduriforme).

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GLOSSRIO A actinomiceto : termo aplicado a bactrias filamentosas e ramificadas,que se fragmentam ou no em elementos bacilares e cocides . Gram positivos, aerbios e anaerbios. anamorfo : termo empregado para as formas ( fases ) assexuadas dos fungos artrocondio (artrosporo) : condio formado pela modificao da hifa e depois liberado por fragmentao, lise, fisso atravs de septos espessados. asco : clulas em forma de bolsa, contendo no seu interior ascosporos. ascosporo : esporo que se forma no interior do asco. assexuada : reproduo vegetativa por mitose, fungo no apresenta gameta sendo incapaz de formar zigoto. assimilao: capacidade de utilizar C ou N como fonte de crescimento em presena de oxignio. B blastocondio :esporo assexuado que se forma por brotamento nas leveduras brotamento :reproduo assexuada de blastocondios formando em um dos pontos da clula me, salincia, originando clula nova ou broto como nas leveduras. C candelabros fvicos : formaes micelianas encontradas nos pelos fvicos. No cultivo em lminas o fungo apresenta nos pices da hifas ramificaes irregulares, mais dilatadas em algumas hifas lembrando candelabros. cenoctico : hifa desprovida de septos, o mesmo que contnuo. cerebriforme : que tem aspecto dos sulcos do crebro. clamidosporo : esporo com membrana espessa que permite resistir aos fatores externos. Pode ser intercalar ou terminal em relao a hifa ; esporo assexual. colarete: estrutura em forma de taa no pice da filide condio (esporo) : propgulo derivado de modo assexuado ou sexuado conidiforo : hifa simples ou ramificada (hifa frtil ) que d origem aos condios. corpo asteride: clula leveduriforme globosa ou oval encontradas nos cortes histolgicos rodeada por material eosinoflico radiado (reao de Splendore- Hoeppli). corpo esclertico - ( fumagide): aglomerado de clulas globosas de parede celular espessa, marrom clara, com septos . D demcio : fungo que possui pigmento (melanina) que varia do marrom a negro nos condios e conidiforos. dermatfitos : Fungos queratinoflicos, parasitas de pele e anexos. dimrfico : que apresenta duas formas morfolgicas. E ectothrix : artrocondios exgenos na bainha do pelo, sendo a cutcula destruda endothrix : artrocondios no interior do cabelo. A cutcula fica intacta. espirais : formaes filamentosas, espiraladas, encontradas entre os dermatfitos. esporngio: rgo em forma de saco, no interior do qual se formam um ou mais esporangiosporos. esporangiforo : hifa frtil do qual se formam os esporngios esporangiosporo : esporo produzido no interior do esporngio estolo: hifa na qual se pode formar novas hifas, esporangiforos, rizides. F feo-hifomicoses : doenas cutneas e sistmicas causadas por fungos demcios oportunistas de origem exgena. fermentao: capacidade do fungo em usar fotes de carbono para crescimento com compostos orgnicos servindo como doadores e receptores de eltrons. filides: pequenas clulas em forma de garrafa que do origem a esporos. filamento: Termo usado para hifa. filamentoso: composto de filamentos ou hifas de um fungo, formado por fios. fusiforme: em forma de fuso com as extremidades afiladas. G glabra: o mesmo que sem pelo, com superfcie lisa. gro: microcolnia constituda por entrelaamento miceliano e/ ou por filamentos bacterianos. H hialino: que tem aparncia de vidro, incolor, transparente. hialo-hifomicoses : infeces causadas por fungos hialinos, oportunistas, de origem exgena, pertencentes em sua maior parte a classe dos hifomicetos.
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hifa: poro do corpo vegetativo do fungo com ou sem septos. hifa area: hifas que se projetam acima da superfcie do substrato. I Imperfeito: estado assexuado ou anamorfo de desenvolvimento do fungo. L levedura : fungo predominantemente unicelular que se reproduz por brotamento. A reproduo assexuada e/ ou sexuada. M macrocondio :o maior entre dois diferentes tamanhos de condios produzidos por um fungo. microcondio : o menor entre dois condio de tamanhos diferentes produzidos por um nico fungo. P Perfeito: estado do ciclo vital do fungo que se caracteriza pela reproduo sexuada pleomorfismo ; ocorrncia de duas ou mais formas reprodutivas no ciclo de vida do organismo com reduo na esporulao e acarretando alteraes irreversveis que dificultam a identificao do fungo principalmente em vida saproftica (cultivo). pseudo-hifa: srie de blastocondios que permanecem aderidos uns aos outros, formando filamentos semelhantes hifa. Q quitina: molcula linear contendo resduos de N- acetilglicosamina. R rizides :formaes filamentosas, de certas espcies de zigomicetos, que servem de rgos de implantao ou de absoro. S saprbio: fungos que utilizam a matria orgnica morta como fonte de nutrio septado: dividido em compartimentos, provido de septos. substrato: lugar ou parte onde cresce o fungo, podendo ser natural (meio ambiente) ou artificial (meios de cultivo). T tubo germinativo: hifa inicial que se desenvolve no condio ou blastocondio. tuberculado: que tem ndulos, protuberncias da parede celular de certos condios. V vescula ; dilatao apical do conidiforo, como o Aspergillus sp. verticlio : reunio de filamentos ou esporos partindo um ponto que se irradia como o Penillium sp.

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REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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ZAITZ, C. ; RUIZ,L.R.B.;SOUZA,V. M. Atlas de Micologia. Rio de Janeiro. Editora Medsi,2 ed.,2004.

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MICROMORFOLOGIA DE VIDA PARASITRIA DOS FUNGOS

FILAMENTOS MICELIANOS RAMIFICADOS (400x)

ARTROCONDIOS (400x)

LEVEDURAS (400x)

Malassezia sp. (400X)

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Malassezia sp. (400X)

Mosaico fngico (400X)

Mosaico fngico (400X)

Parasitismo de pelo (endothrix,esq.; ectothrix, dir., 400X)

Leveduras e pseudo-hifas (Gram)

Piedra negra (ascsporos, 40X)

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MICROMORFOLOGIA DE VIDA SAPROFTICA

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Epidermophyton floccosum (400X)

Microsporum gypseum (400X)

Microsporum canis (400X)

Trichophyton mentagrophytes (400X)

Trichophyton schoenleinii (400X)

Trichophyton tonsurans (400X)

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Hortaea werneckii (400X)

Cladosporium sp. (400X)

Geotrichum sp. (400X)

Trichosporon sp. (400X)

Candida albicans Clamidosporo terminal (100X)

Sporothrix schenckii (400X)

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Alternaria sp. (400X)

Aspergillus sp. (100X)

Curvularia sp. (400X)

Fusarium sp. (100X)

Penicillium sp.(400X)

Rhizopus sp.(40X)

Mucor sp (40X)

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Scopulariopsis sp. (400X)

Scytalidium sp. (400X)

Aspergillus niger, 400 X

Histoplasma capsulatum, 400X

Cryptococcus sp (400X)

Paracoccidioides brasiliensis Fase leveduriforme (400 X)

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