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UNIDAD I Introduccin

TEMA 2: ENZIMAS

A principios del siglo XIX se conoca la existencia de la actividad cataltica en los procesos digestivos y en las fermentaciones producidas por levaduras, de ah la denominacin inicial de fermentos para las enzimas. Estas molculas de naturaleza proteica, aceleran reacciones qumicas y pueden ser regulables, por lo que su actividad es determinante para que ocurran reacciones qumicas en los seres vivos, es decir, el metabolismo. Para comprender las distintas vas como Giclisis, Ciclo de Krebs, Fotosntesis etc., as como la duplicacin del ADN, correccin de mutaciones y expresin gnica haremos referencia permanentemente a las enzimas. Este tema tiene como objetivo, adems de la adquisicin de conocimientos bioqumicos bsicos, introducir aspectos especficos necesarios para la comprensin de los procesos biolgicos y relacionar la composicin qumica de los seres vivos con sus funciones y su evolucin.

Secuencia de puntos a tratar 1. Caractersticas de las enzimas: eficiencia, especificidad y regulabilidad. 2. Clasificacin de las enzimas: criterio y consideraciones generales. 3. Actividad enzimtica en funcin de temperatura y pH: relacin con la estructura proteica. 3. Cintica enzimtica: Representacin grfica de una reaccin, identificacin de Vm y KM Cintica de una enzima con inhibidor competitivo y no competitivo. Representacin por el mtodo de las inversas de la cintica de una enzima sin inhibidor, con inhibidor competitivo y no competitivo. 4. Regulacin: Enzimas alostricas. Modificacin covalente. Zimgenos o Proenzimas.

ACTIVIDADES PROPUESTAS PARA EL DESARROLLO DEL TEMA ENZIMAS 1. a. Describe en no ms de 10 renglones la reaccin que aparece a continuacin. E+S k1 [ES] k3 E + P

k2 b. A la actividad de las enzimas se la puede expresar como velocidad. Cmo se puede determinar la velocidad con que acta una enzima? 2. Las caractersticas ms notables de las enzimas son la eficiencia, especificidad y regulabilidad. Explica cada una de esas propiedades. 3. a. La clasificacin internacional de las enzimas incluye seis categoras: (1) Oxidorreductasas, (2) Transferasas, (3) Hidrolasas, (4) Liasas, (5) Isomerasas y (6) Ligasas. Identifica a qu categora pertenecen las enzimas que catalizan las reacciones A y B que se representan a continuacin.

A COH CHOH CH2OP CH2OH C= O CH2OP COOH C= O + NADH.H CH3

B COOH CHOH + NAD CH3

b. El NADH.H es un cofactor de la enzima que cagtaliza la reaccin B. Explica que es y qu importancia tienen los cofactores en general (lo usamos como sinnimo de coenzima). 4. Tres enzimas diferentes tienen pH ptimos de 2, 5 y 8. A qu se debe esto? Representa grficamente, de forma manual, la actividad de esas enzimas, pero no enves la representacin como respuesta. Se analizar esta respuesta en el encuentro presencial. 5. Es comn considerar que las enzimas tienen especificidad absoluta, es decir, que reconocen un slo sustrato. Esto es vlido para algunas, y es un ejemplo de especificidad absoluta, como la estereospecificidad. (Este mecanismo se lo explica a travs del modelo llave cerradura). Otras enzimas tienen especificidad relativa. a. Qu entiendes por estereoespecificidad? b. Otras enzimas tienen especificidad relativa. Caracteriza este tipo de especificidad. 6. En 1915 Michaelis y Menten describieron la cintica de la reaccin: sacarasa sacarosa glucosa + fructosa Cuando midieron la velocidad inicial de la reaccin (vo) en condiciones experimentales de temperatura y pH constantes, y con concentracin de enzima no limitante, encontraron que la velocidad de la reaccin se incrementa hasta cierta concentracin de sustrato, por encima de la cual la velocidad se hace mxima (Vmx) y es independiente de la [S]. La cintica tpica se representa en la figura.

a. En X se representa la concentracin de sustrato y en Y la velocidad. Indica entre qu valores de concentracin de sustrato se encuentra la etapa sustrato dependiente y sustrato independiente (conocidas tambin como reaccin de orden 1 y orden 0 respectivamente). b. A partir de la grfica estima cul es el valor aproximado de la KM de esta enzima? 7. Relaciona las situaciones representadas en el cuadro con las regiones de la grfica de la pregunta 6. a.

8. A partir de la reaccin E + S vo = V.[S] / kM + [S].

k1 k2

[ES]

k3

E + P se llega a la ecuacin de Michaelis-Menten:

Donde, vo = velocidad de reaccin en un momento dado. V = velocidad mxima (para una concentracin de enzima). [S] = concentracin de sustrato. kM = k2 + k3 / k1, constante de Michaelis-Menten. Maud Menten Leonor Micahelis

a. Cmo relacionas kM y [S] en trminos de afinidad enzima-sustrato? b. Si un sustrato (S) es comn a dos enzimas (E1 y E2) que rinden los productos P1 y P2. Qu producto se acumular primero sabiendo que el kM de E1 es 0.2 mM y el de E2 es 0.5 mM? Explica por qu. 9. A partir de las representaciones de las cinticas de reacciones E+S; E+S+Inhibidor competitivo y E+S+Inhibidor no competitivo, caracteriza cada cintica en relacin a la Vm y kM. La respuesta debes explicar cmo actan estos inhibidores.

10. Otra forma de representar la cintica enzimtica es por el mtodo de las inversas, desarrollado por Lineweaver- Burk, una transformacin de la ecuacin de Michaelis-Menten. Reconoce en la representacin que aparece abajo la cintica de las reacciones E+S, E+S+Inhibidor competitivo y E+S+Inhibidor no competitivo. 1/v 1 2 3

-1/ [S]

1/[S]

11 Una enzima (succnico deshidrogenasa) cataliza la siguiente reaccin: COOH CH2 CH2 COOH succnico FAD FADH2 FAD FADH2 COOH CH HC HOOC fumrico

El agregado de alanina o palmtico al sistema E + S no afecta la actividad de la enzima. Sin embargo, cuando se agrega oxalactico o malnico al sistema se observa que la velocidad con que se transforma el succnico en fumrico disminuye. Cmo explicas la accin de estos compuestos sobre la actividad de esta enzima? Para responder analiza las frmulas de los diferentes compuestos y piensa en trminos de inhibicin. COOH C=O CH2 COOH Oxalactico 12. a. Qu entiendes por sitio alostrico y qu por modulador alostrico? b. Qu le permite a la clula este tipo de regulacin? 13. El resumen puede ayudarte a responder la importancia de los zimgenos o proenzimas. Varias protenas son sintetizadas en su forma inactiva llamada zimgeno o proenzima. A su vez la activacin del zimgeno es un proceso catalizado enzimticamente por una proteasa que hidroliza al menos un enlace peptdico de la proenzima. El tripsingeno es una proenzima bien estudiada: en el intestino delgado por accin de una peptidasa, la enteroquinasa, el tripsingeno pierde un hexapptido del extremo N terminal y se convierte en su forma activa, la tripsina: enteroquinasa tripsingeno tripsina + hexapptido COOH CH2 COOH Malnico Alanina CH3(CH2)14 COOH Palmtico COOH H2N CH CH3

Bibliografa y sitios de consulta sugeridos Bibliografa general del curso. Sitios de consulta sugeridos: http://www.fagro.edu.uy/~bioquimica/docencia/basico/enzimas.pdf http://www.arrakis.es/~lluengo/enzimas.html