Estudio de Bioequivalencia

Universidad Nacional Autnoma de Mxico
Facultad de Qumica
Laboratorio de Biofarmacia
Guin 2: Biodisponibilidad relativa de dos productos

farmacuticos slidos conteniendo cido acetilsaliclico
Estudio de Biodisponibilidad relativa en voluntarios sanos
Guin 2: Biodisponibilidad relativa de dos productos farmacuticos slidos conteniendo cido acetilsaliclico
INTRODUCCIN Existen dos conceptos muy importantes en el mbito farmacutico: biodisponibilidad y bioequivalencia, estos conceptos hacen referencia a estudios con los cuales se puede garantizar la intercambiabilidad de productos farmacuticos. La biodisponibilidad se define como la cantidad y velocidad con la que el principio activo contenido en la forma farmacutica alcanza la circulacin sistmica, la nica va de administracin que se considera alcanza el 100% de biodisponibilidad es la intravenosa, cualquier otra va se considera que no lo alcanza, por dos situaciones que es la absorcin incompleta del frmaco y el efecto de primer paso. La biodisponibilidad est muy relacionada con la absorcin de las substancias y es representada por dos aspectos, la intensidad de la absorcin medida como rea bajo la curva en una grfica de concentracin plasmtica vs tiempo, o como cantidad acumulada excretada a tiempo infinito para el caso de datos urinarios cuando un frmaco es excretado en su mayora. El otro aspecto es la velocidad de absorcin, utilizando la concentracin plasmtica mxima alcanzada, y el tiempo requerido para obtener esta concentracin. Existen 2 concepciones acerca de la biodisponibilidad: a) Biodisponibilidad absoluta. b) Biodisponibilidad relativa: Este tipo de estudio es cuando se lleva a cabo la comparacin por medio del clculo de F, y que los resultados comparados provienen de administraciones distintas a la intravascular o que los medicamentos comparados no sean equivalentes farmacuticos. Bioequivalencia es el estudio de biodisponibilidad realizado a dos especialidades medicinales que son equivalentes farmacuticos, y a este estudio se le aplican estadsticas rigurosas. Cuando dos medicamentos aprueban el estudio de bioequivalencia, se dice que son bioequivalentes cuando presentan parmetros de rea Bajo la Curva (ABC), Cmax y Tmax estadticamente iguales, con un intervalo de confianza comprendidos entre 80- 125%. Equivalente farmacutico son dos especialidades farmacuticas que contienen la misma cantidad de principio activo, se encuentran en la misma forma farmacutica, son destinadas a administrarse por la misma va y cumplen con estndares de calidad idnticos o comparables. Pero el hecho de que sean equivalentes farmacuticos no implica que sean equivalentes teraputicos. Un producto famacutico innovador es aquel que tiene o tuvo la patente en el mercado, mientras que un genrico es aquel que contiene el mismo principio activo en la misma forma de dosificacin que uno que ya esta presente en el mercado. El cido acetilsaliclico es un frmaco que tiene propiedades analgsicas, antipirriticas y antiinflamatorias, en 1899 Bayer registro el cido acetilsaliclico como Aspirina y para el siguiente ao confeccion el primer producto comprimido para este frmaco. Laboratorio de Biofarmacia 2013-1
El mecanismo de accin que explica su efecto terapetico, depende de la capacidad que tiene como inhibidor no selectivo de las ciclooxigensas de tipo 1 y 2. Al bloquear estas enzimas, inhibe la sntesis de prostaglandinas y tromboxanos. Se absorbe en el tubo digestivo y las concentraciones mximas son registradas a las 2 horas despus de la administracin. Se distribuye ampliamente, incluido leche materna, atraviesa rpidamente la barrera placentaria y lentamente la barrera hematoenceflica. Presenta un tiempo de vida media de 15 a 30 minutos, biotransformandose en cido saliclico. El cido saliclico es el metabolito activo del cido acetilsaliclico, presentando el mismo mecanismo teraputico, sin embargo las propiedades farmacocinticas son distintas, presenta una alta unin a protenas plasmticas, el tiempo de vida medias va desde 3h hasta 20h dependiendo de la dosis administrada y se excreta en orina desde 5% hasta un 85% dependiendo del pH urinario, puesto que su pKa es de 3.5 y sufre reabsorcin en el tbulo distal. MARCO NORMATIVO En Mxico, a travs de la Secretara de salud, se establece la NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-177-SSA11998, que establece las pruebas y procedimientos para demostrar que un medicamento es intercambiable y los requisitos a que deben sujetarse los terceros autorizados que realicen las pruebas Que con fecha 18 de noviembre de 1998, en cumplimiento de lo previsto en el artculo 46 fraccin I de la Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin, la Direccin General de Insumos para la Salud present al Comit Consultivo Nacional de Normalizacin de Regulacin y Fomento Sanitario, el anteproyecto de la presente Norma Oficial Mexicana. Que con fecha 26 de enero de 1998, en cumplimiento del acuerdo del Comit y de lo previsto en el artculo 47 fraccin I de la Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin, se public en el Diario Oficial de la Federacin el proyecto de la presente Norma Oficial Mexicana, a efecto de que dentro de los siguientes sesenta das naturales posteriores a dicha publicacin, los interesados presentaran sus comentarios al Comit Consultivo Nacional de Normalizacin de Regulacin y Fomento Sanitario. Que las respuestas a los comentarios recibidos por el mencionado Comit, fueron publicadas previamente a la expedicin de esta Norma en el Diario Oficial de la Federacin, en los trminos del artculo 47 fraccin III de la Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin. Que en atencin a las anteriores consideraciones, contando con la aprobacin del Comit Consultivo Nacional de Normalizacin de Regulacin y Fomento Sanitario, se expide la siguiente: Norma Oficial Mexicana NOM177-SSA1-1998, Que establece las pruebas y procedimientos para demostrar que un medicamento es intercambiable. Requisitos a que deben sujetarse los terceros autorizados que realicen las pruebas Laboratorio de Biofarmacia 2013-1
Esta Norma Oficial Mexicana establece los criterios y requisitos que deben observarse en la realizacin de las pruebas para demostrar la intercambiabilidad de los medicamentos genricos, as como los requisitos a que se debern sujetar los establecimientos que lleven a cabo dichas pruebas. Es de observancia obligatoria en el territorio nacional para todos los establecimientos que realicen las pruebas para demostrar la intercambiabilidad de medicamentos.
Apartado 6. Criterios y requisitos generales para las pruebas
Todos los pasos involucrados en los mtodos de anlisis para realizar las pruebas de intercambiabilidad deben describirse en PNO. Deben utilizarse como medicamento de referencia el indicado por la Secretara a travs del rea competente, el cual debe estar comercialmente disponible y vigente. El perfil de disolucin o el estudio de bioequivalencia del medicamento de prueba se debe realizar con un lote estndar de produccin o bien con un lote escalado, que asegure que no se modifica significativamente la reproducibilidad de los perfiles de disolucin, cuando lotes subsecuentes del medicamento se elaboren de acuerdo con la NOM-059-SSA1-1993, y que cuente con un certificado de aprobacin conforme a la FEUM vigente. Cuando en sta no aparezca la informacin, puede recurrirse a farmacopeas de otros pases cuyos procedimientos de anlisis se realicen conforme a especificaciones de organismos especializados u otra bibliografa cientfica reconocida internacionalmente. En caso de realizarse la prueba de bioequivalencia se deben realizar perfiles de disolucin, ambas pruebas deben llevarse a cabo con los mismos lotes del producto de prueba y el de referencia. Adems de la comparacin de los perfiles de disolucin o del estudio de bioequivalencia, se deben realizar las pruebas de valoracin y uniformidad de dosis expresada como uniformidad de contenido. Las conclusiones de la prueba de intercambiabilidad son vlidas para todos los lotes subsecuentes del medicamento de prueba que se elaboren de acuerdo con la NOM-059-SSA1-1993, que incluyan la validacin del proceso de produccin. En caso de que el proceso de produccin, equipo, calidad de los componentes y criterios de aceptacin se modifiquen significativamente, o bien, haya algn cambio significativo en la formulacin, es necesario realizar nuevamente la prueba. Laboratorio de Biofarmacia 2013-1 Deben llevarse registros de recepcin, uso, destino y balance de los medicamentos de prueba y de referencia. Los medicamentos de prueba y de referencia deben tener al menos un ao de vigencia antes de su fecha de caducidad al momento de realizar el estudio.Deben almacenarse de acuerdo con las indicaciones de la etiqueta, desde su recepcin hasta dos aos posteriores a la conclusin del estudio, o hasta el vencimiento de la fecha de caducidad, lo que ocurra primero y en cantidad suficiente para realizar tres veces el estudio. Deben cumplir con los criterios de uniformidad de contenido descritos en el mtodo general de anlisis de uniformidad de dosis MGA 0299 de la FEUM. Se deben utilizar sustancias de referencia trazables con patrones de referencia de reconocimiento nacional o internacional. Los instrumentos de medicin deben estar calibrados.
Apartado 8. Criterios y requisitos para realizar pruebas de bioequivalencia en humanos Los estudios deben realizarse con base en lo dispuesto en la Ley General de Salud, en el Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Investigacin para la Salud, las Buenas Prcticas Clnicas y dems disposiciones aplicables. Cada protocolo de un estudio clnico, debe cumplir con lo sealado en la Ley General de Salud y en el Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Investigacin para la Salud. Debe ser revisado y aprobado por el coordinador general o investigador principal, ser sometido a los comits de tica y de investigacin de la institucin responsable del estudio. Los voluntarios seleccionados deben ser personas clnicamente sanas y que no presenten sensibilidad al frmaco bajo estudio. Cuando est bien documentada la existencia de diferencias farmacocinticas entre sexos, debe incluirse a voluntarios de un solo sexo. Deben tener edades entre 18 y 55 aos, con un peso 10% del ideal, deben ser sanos, lo que se determina por medio de la historia clnica y pruebas de laboratorio y gabinete. Los sujetos no deben tener antecedentes de drogadiccin o de abuso de alcohol, caf, tabaco o bebidas de cola, ni estar bajo la administracin de medicamentos concomitantes. Los voluntarios deben firmar una carta de aceptacin para participar en el estudio, carta de consentimiento informado y dems requisitos que establezca el Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Investigacin para la Salud. En todos los casos es necesario contar con una descripcin detallada de las caractersticas de los voluntarios. El nmero de voluntarios debe calcularse por mtodos estadsticos adecuados. El diseo experimental bsico debe responder la pregunta de si existe bioequivalencia entre dos
medicamentos. El estudio debe realizarse mediante un diseo cruzado. Cuando esto no sea posible, pueden elegirse otros diseos, cuyo empleo debe justificarse en el protocolo. La asignacin de voluntarios deber hacerse de acuerdo con una tabla de aleatorizacin. El tamao de la muestra se debe basar en consideraciones estadsticas y debe ser capaz de proveer un indicador confiable de los parmetros farmacocinticos relevantes (Cmx, ABC y Ae ) y su variacin. El tamao de la muestra debe satisfacer los requerimientos respecto del error de tipo I ( ), error tipo II ( ) y una diferencia mnima a detectar, con relacin a la biodisponibilidad promedio entre el medicamento de prueba y el medicamento de referencia ( ). Los medicamentos se deben administrar por va oral con 250 ml de agua. En caso de requerirse un volumen diferente, debe justificarse cientficamente y ser homogneo para medicamentos con el mismo frmaco. El sistema de recoleccin de las muestras y las precauciones que deben tomarse durante el proceso deben establecerse en el protocolo. El muestreo debe realizarse por un periodo que permita cubrir por lo menos el 80% del rea bajo la curva de concentracin plasmtica (como mnimo 4 vidas medias, en el caso de sangre o 7 vidas medias en el caso de orina). El horario de la obtencin de muestras debe disearse de tal manera que se puedan caracterizar los parmetros farmacocinticos, particularmente ABC y Cmx, definiendo el tiempo de tolerancia. Laboratorio de Biofarmacia 2013-1
Para el presente estudio, El frmaco se debe eliminar por va renal en proporcin de cuando menos 50% en forma intacta. Se debe administrar una cantidad suficiente de agua para provocar diuresis y poder obtener un nmero suficiente de muestras de orina durante las primeras horas y de esta manera poder determinar adecuadamente las fases de absorcin y distribucin. Se recomienda una administracin de 400 ml de agua en ayuno una hora antes de iniciar el estudio y 200 ml de agua con el medicamento, seguido de 200 ml cada hora durante las siguientes cuatro horas. Hay que vaciar la vejiga antes de la administracin del medicamento y guardar una muestra de orina que servir como blanco para el anlisis. Es necesario un vaciado completo de la vejiga en cada muestra. Si esto no ocurre, la cantidad remanente del frmaco ser adicionada a la siguiente muestra lo que ocasionar datos farmacocinticos incorrectos. Para cada muestra es necesario anotar el lapso a partir del vaciado anterior y la cantidad total de orina eliminada. Si la orina no se analiza inmediatamente, hay que estabilizar una muestra (25-50 ml) de manera apropiada. Asegurar que el conservador no interfiera con el mtodo analtico. Se deben colectar y analizar todas las muestras de orina. Si una muestra se pierde, el experimento se invalida. La orina debe colectarse por un periodo de tiempo tal que se asegure que todo el frmaco intacto haya sido excretado (7 t = 99.2%, 10 t = 99.9%). Las muestras deben manejarse de acuerdo a un PNO establecido previamente. Los estudios deben ser realizados de acuerdo al Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Investigacin y con apego a las Buenas Prcticas Clnicas. En todos los estudios debe registrarse la presencia de eventos adversos asociados al uso del medicamento, as como el tipo y la magnitud de los mismos. El registro debe hacerse en las formas especiales previstas para este caso por la Secretara. Durante la realizacin del estudio debe haber vigilancia mdica de acuerdo con lo que se establezca en el protocolo y con las caractersticas del medicamento en estudio. La empresa o institucin que solicita el estudio es responsable de cerciorarse de la conformidad del investigador para realizar el estudio clnico, segn se describe en el protocolo y conforme a las Buenas Prcticas Clnicas. La biodisponibilidad debe calcularse a partir de las concentraciones plasmticas ABCo-t, ABCo- y Cmx o a partir de cantidades eliminadas de orina Aet, Ae , dAe/dt, segn sea el caso. El uso de cualquier otro parmetro deber justificarse cientficamente. Se debe especificar el mtodo de clculo de los parmetros farmacocinticos utilizados. Para el clculo de ABC0-t, utilizar la regla de los trapezoides. Debe elaborarse un informe detallado del estudio, el cual debe contener: Descripcin de los medicamentos: denominacin comn internacional (DCI), denominacin genrica, denominacin distintiva, forma farmacutica, dosis, nmero de lote, fecha de caducidad y fabricante. La documentacin completa del protocolo. Todos los datos individuales. Grficas y tablas con interpretacin. Debe incluirse la firma del responsable del estudio. Si en el estudio ha intervenido ms de una institucin, los investigadores responsables deben firmar la parte del informe que les corresponda. Laboratorio de Biofarmacia 2013-1
Se deben indicar los nombres y dems datos de los investigadores responsables, el lugar en que se ha efectuado el estudio, y el periodo en el que se llev a cabo.
Todos los resultados se deben presentar en forma clara especificando el sistema de clculo de las caractersticas empleadas (por ejemplo, ABC por regla de trapezoides) a partir de los datos reales obtenidos y deben justificarse la falta de cualquier dato. Las curvas de concentracin contra tiempo se deben trazar a escala semilogartmica y en escala aritmtica. Las curvas a trazar son log c contra t y c contra t. Se debe especificar si son individuales (comparativas medicamento de referencia y medicamento de prueba para cada voluntario) o promedio (comparativa para el promedio de los voluntarios para cada medicamento). El informe debe contener todos los datos y resultados, incluidos los voluntarios que se hayan retirado prematuramente del estudio o que hayan sido retirados, siempre con una breve descripcin del motivo. Apartado 9. Criterios y requisitos para el anlisis qumico de muestras biolgicas de una prueba de bioequivalencia Se debe realizar la validacin del mtodo analtico con el mismo tipo de matriz biolgica que aquella de las muestras biolgicas. Llevar a cabo la validacin una vez establecidas las condiciones analticas, e incluir como mnimo los siguientes parmetros: Rango Recuperacin absoluta Linealidad Precisin (repetibilidad y reproducibilidad). Exactitud Estabilidad Condiciones de almacenamiento Ciclos de congelacin-descongelacin Lmite de cuantificacin Lmite de deteccin Selectividad Tolerancia Laboratorio de Biofarmacia 2013-1
Elaborar un informe de la validacin del mtodo analtico que incluya lo indicado y que est aprobado por el responsable sanitario antes de su aplicacin. Todas las muestras de fluidos biolgicos deben considerarse potencialmente peligrosas o infecciosas y
manejarse de conformidad con la normatividad aplicable. Las muestras se deben almacenar en condiciones que aseguren su identidad e integridad, durante su periodo de estabilidad.
Se debe realizar antes del anlisis qumico de muestras biolgicas un plan de trabajo donde se indique: el responsable del anlisis, las actividades asignadas a cada persona, el orden de anlisis de las muestras, los criterios de aceptacin, rechazo y reanlisis. Se debe realizar el anlisis qumico del estudio en las mismas condiciones analticas establecidas en la validacin del mtodo analtico asegurndose de que no existan interferencias en la matriz biolgica usada como blanco de referencia. Se debe investigar que no exista interferencia con la cuantificacin del compuesto por analizar en las muestras predosis, para cada periodo del estudio. Preparar y conservar muestras control en la misma matriz biolgica, por lo menos a tres concentraciones: alta, media y baja, dentro del rango y por duplicado, que se distribuirn y analizarn a lo largo de cada corrida analtica. Analizar las muestras control bajo el mismo procedimiento y al mismo tiempo que las muestras problema. Las muestras control deben cumplir con los criterios de precisin y exactitud establecidos durante la validacin del mtodo. Las muestras biolgicas provenientes de un sujeto en sus diferentes periodos, deben analizarse bajo la misma curva patrn, en la misma corrida analtica y en el mismo instrumento. Cuando esto no sea posible, se sustentar cientficamente. Cuando se obtengan concentraciones por debajo del lmite de cuantificacin, estas concentraciones no deben incluirse en los clculos. Cuando se obtengan concentraciones por encima del rango la muestra puede diluirse con el mismo tipo de matriz biolgica. Registrar las condiciones instrumentales empleadas durante el anlisis qumico de las muestras. OBJETIVO Evaluar la biodisponibilidad relativa de un producto de prueba con respecto a un producto de referencia de cido acetil saliclico 500mg, confirmando que no exista una diferencia en es esta mayor al 20%. PROTOCOLO DEL ESTUDIO En cada uno de los equipos formados por 4 personas con todos los integrantes del grupo uno del laboratorio de biofarmacia se eligi un voluntario para el desarrollo experimental del presente estudio y cada equipo llev el manejo de resultados experimentales. Para la seleccin de los voluntarios participantes, se tom en cuenta que los individuos no padecieran reacciones alrgicas o hipersensibilidad al frmaco en estudio, ni padecieran enfermedades de tipo renal, heptico o gastrointestinal. Los datos de los voluntarios seleccionados son los siguientes: Laboratorio de Biofarmacia 2013-1
Nmero de voluntario
Nombre
Sexo
Edad (aos)
Peso (Kg) 60 71 72
Estatura (m) 1.60 1.73 1.71
1 2 3
Del Rey Pineda Snchez Flores Ceja
Masculino Masculino Masculino
24 20 22
4 5 6 7 8
Lpez V. Flores, Salgado Gutirrez Becerril
Masculino Masculino Femenino Masculino Masculino
33 20 21 20 20
96 85 51 67 55
1.68 1.78 1.54 1.72 1.70
Tabla I.- Diseo del estudio Voluntarios #Sesiones 1 1 2 A Grupo 1 3 4 5 6 B Grupo 2 7 8
A= Tratamiento del producto de referencia: Tabletas de cido aceltsaliclico 500mg Aspirina; BAYER de MxicoS.A. de C.V. Lote: X2DT8W; Caducidad: MAR/14 B= Tratamiento del producto de prueba: Tabletas de cido acetilsaliclico 500mg cido acetilsaliclico; ALPHARMA S.A. de C.V. Lote: 1206867; Caducidad: JUN/14 Dosis= 500mg
Manejo de las muestras: Una vez apuntado el volumen excretado de orina, tomar una alcuota de 10mL y colocarlo en un tubo para centrfuga, desechar el volumen sobrante y medir el pH de la muestra del tubo.Esto para cada tiempo de muestreo. NOTA 1: No deber desechar ninguna porcin de orina en cada intervalo de muestreo grande, puesto que se recolectar toda la orina de ese intervalo en un solo recipiente Guardar en el congelador los tubos recolectados, producto de cada tiempo de muestreo. NOTA 2: Las muestras tiempo 0 de todos los voluntario se recolectarn en un solo recipiente, la orina blanco de todos los voluntarios para formar un pool de orina, el que se diluir 1:3 con agua y servir para preparar la curva patrn del estudio. Cuantificacin del cido saliclico A la semana siguiente de la toma de muestras en voluntarios sanos, se deben descongelar todas las muestras a temperatura ambiente, en caso de la formacin de slidos en los tubos de muestra, es necesario centrifugar a 2500 rpm durante seis minutos y ocupar el sobrenadante para la cuantificacin del cido saliclico. En otro tubo de centrifuga colocar 1mL de muestra y con una bureta adicionar 5mL de reactivo de trinder para el desarrollo de color. Agitar la muestra en vrtex durante un minuto. Determinar
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la absorbancia utilizando una celda de cuarzo de 1cm de paso ptico a una =540nm, ajustando a cero con la muestra descrita en la nota 2 diluida 1:10 Realizar una curva patrn con salicilato de sodio a las mismas condiciones que las muestras de orina. NOTA 3: En caso de que las lecturas de absorbancia de las muestras no estn dentro del rango de absorbancias de la curva patrn, no tomarlas en cuenta para las determinaciones posteriores. Manejo de datos Calcular el coeficiente de correlacin [r], intercepto (b) y la pendiente (m) para la curva patrn Concentracin del frmaco a cada tiempo de muestreo (g/mL) calculada por la interpolacin de la curva patrn Concentracin del frmaco eliminado a cada tiempo de muestreo (Aex), expresada en mg. Cantidad acumulada excretada de frmaco (Aex acumulado-mg-) Cantidad de frmaco por excretar (Aex t - Aex) Calcular la constante de eliminacin (Ke) y la vida media (t1/2). Elaborar una tabla general de cantidad excretada a tiempo infinito para los ocho voluntarios, calcular el valor promedio, desviacin estndar y coeficiente de variacin. Figura 1.- Esquema general de trabajo
ALGORTMO DE CLCULO Cabe destacar que todos los clculos fueron realizados por el programa Microsoft Excel versin 2007
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Datos del voluntario 8 a tiempo 6h. T= 6h Volumen excretado de orina= 220mL Absorbancia= 0.502 Concentracin de frmaco eliminado a cada tiempo de muestreo Ecuacin de la recta= Abs=0.001339c + 0.0128 ( ) Cantidad de frmaco excretado a tiempo 6h ( )
Cantidad acumulada excretada de frmaco
Cantidad de frmaco por excretar
Por tanto: - m = Ke t1/2= (Ln2/Ke)
Ke= 0.502h-1 t1/2= 0.693/0.502h-1= 1.38h
1 1
Clculo de Ke y t1/2 Calcular el Ln de la cantidad de frmaco por excretar a cada tiempo de muestreo Obtener el grfico ( ) Obtener la ecuacin de los puntos que tengan una tendencia lineal en los tiempos finales Ecuacin de la recta:
RESULTADOS Y ANLISIS DE RESULTADOS Curva de calibracin Para el clculo de la concentracin de salicilatos en orina de cada una de las muestras emitidas en cada tiempo de muestreo se hizo uso de la siguiente curva patrn, solo se realiz el clculo para los datos de absorbancia que entraran en el lmite de cuantificacin de la presente curva. El producto utilizado para la construccin de dicha curva fue: Salicilato de sodio, 99.8%; Proveedro J. T. Baker; Lote: C-11652 El equipo utilizado para las determinaciones espectrofotomtricas fue: ESPECTROFOTMETRO V; DF-IN005
Tabla 1. Datos empleados para la construccin de la curva patrn utilizada para da estimacin de la concentracin de salicilatos en orina Concentracin(g/mL) Abs
Grfica 1. Curva patrn. Concentracin salicilatos en orina vs Absorbancia a 540 nm.
de
Curva patrn
0.800 Absorbancia 0.600 0.400 0.200 0.000 0 200 400 600 Concentracin (g/mL) y = 0.001339x + 0.0128 R = 0.9982
9.9 49.7 99.4 198.8 298.2 497
0.025 0.082 0.159 0.261 0.410 0.684
Voluntario 1 Tabla 2. Datos experimentales y resultados del voluntario 1

Tiempo (h) Blanco 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 4.0 6.0 8.5 12.0 15.0 23.5 30.0 Abs Concentracin (g/mL) Volumen (mL) pH Aex (g) Aex (mg) Aex Acum (mg) Aex acum t - Aex acum Ln(Aex acum t - Aex acum)
0 0 0.033 0.188 0.154 0.102 0.147 0.067 0.091 0.645 0.126 0.19 0.171 0.029 0.066
0 15.08 130.84 105.45 66.61 100.22 40.47 58.40 472.14 84.54 132.33 118.14 12.09 39.73
110 180 250 250 310 280 230 500 100 230 420 220 480 460
6 6 6 5 5 6 6 6 6 5 6 6 6 5
0 2715.45 32710.97 26362.95 20651.23 28062.73 9309.93 29200.89 47214.33 19444.36 55581.77 25992.53 5807.31 18276.32
0 2.71 32.71 26.36 20.65 28.06 9.30 29.20 47.21 19.44 55.58 25.99 5.80 18.27
0.00 2.72 35.43 61.79 82.44 110.50 119.81 149.01 196.23 215.67 271.25 297.25 303.05 321.33
0.00 318.62 285.90 259.54 238.89 210.83 201.52 172.32 125.10 105.66 50.08 24.08 18.28 0.00
5.76 5.65 5.55 5.47 5.35 5.30 5.14 4.82 4.66 3.91 3.18 2.90
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Grfica 2. Grafica de resultados procesados del voluntario 1 por el mtodo de sigma menos
+ 5.711 Mtodo Sigma menos y = -0.1348x R = 0.9618 Ln (Aex Acum t - Aex Acum) 7.00 6.00 5.00 4.00 3.00 2.00 1.00 0.00 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 Tiempo (h)
Al observar la tabla 2 se puede ver que la primera muestra de orina, que fue tomada antes de la administracin del medicamento, posee una absorbancia de cero, lo cual comprueba que no hay presencia del frmaco. Una vez administrado el medicamento, media hora despus se inicia la excrecin del frmaco, lo cual nos habla de la alta velocidad de absorcin del mismo y de su rpida distribucin por el cuerpo, ocasionando que inicie su eliminacin rpidamente. Adems se observa que los volmenes excretados de orina fueron muy parecidos a los dems voluntarios. Esto da idea de una buena hidratacin del voluntario. Por otro lado se observa que el pH urinario es adecuado segn lo indicado en la bibliografa, encontrndose en un intervalo entre 5 y 6 durante todo el estudio. Dado que el principal metabolito del cido acetilsaliclico es el salicilato de sodio, el cual es excretado en orina junto con otros compuestos, y que su pKa es de 3.5, se tiene que al pH urinario este compuesto se encuentra ionizado y por tanto se elimina por orina y no se reabsorbe. A pesar de que con estos datos se esperara que se eliminara una gran cantidad de salicilato, se tiene que la cantidad excretada a tiempo infinito es de 321.33 mg, lo cual es menor a lo esperado porque se esperaba que se eliminara cerca del 99% ya que este frmaco se elimina principalmente por orina. Adems al ser su tiempo de vida media de eliminacin de aproximadamente 3 hrs.; despus de 30 horas han pasado alrededor de 10 tiempos de vida media y se debera asegurar la eliminacin de todo el frmaco. Esta disminucin en la cantidad excretada puede ser debida a varias cosas. La primera es que el cido saliclico que es la forma activa del AAS y la molcula que se encuentra en sangre, se une a albmina y por tanto si el voluntario presentaba una alta cantidad de albmina en sangre se inhibe la eliminacin porque este complejo no se filtra en el glomrulo del rin. Esta elevacin de albmina podra deberse a la alta cantidad de ejercicio realizada por el individuo. Una razn ms debida al metabolismo puede ser que si el voluntario presenta una alta capacidad de realizar glucuronidacin, esta va aumentar para biotransformar al cido saliclico y este metabolito no puede ser detectado por el mtodo analtico utilizado, ocasionando una cantidad determinada de salicilatos menor a la real. Por ltimo, otra causa puede ser que el frmaco no se absorbi de manera eficiente debido a la idiosincrasia del voluntario Laboratorio de Biofarmacia 2013-1
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Por ltimo al observar el tiempo de vida media obtenido por el mtodo de cantidad remanente por excretar o sigma menos, se tiene un valor de 5.14 horas, siendo este valor un poco ms alto que el reportado en la literatura y este aumento es debido a la poca cantidad cuantificada en orina. Voluntario 2 Tabla 3. Datos experimentales y resultados del voluntario 2
Tiempo (h) Blanco 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 4.0 6.0 8.5 12.0 15.0 23.5 30.0 Abs 0 0.000 0.027 0.011 0.042 0.049 0.016 0.056 0.038 0.091 0.067 0.099 0.181 0.108 0.600 0.00 10.60 NC 21.81 27.04 NC 32.26 18.82 58.40 40.48 64.38 125.62 71.10 438.54 50 200 310 330 330 330 340 290 80 230 300 480 470 150 Concentracin (g/mL) Volumen (mL) pH 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 0 2120.99 NC 7196.42 8921.58 NC 10969.38 5457.80 4672.14 9309.93 19312.92 60295.74 33415.98 65780.43 0 2.12 NC 7.20 8.92 NC 10.97 5.46 4.67 9.31 19.31 60.30 33.42 65.78 0 2.12 NC 9.32 18.24 NC 29.21 34.67 39.34 48.65 67.96 128.26 161.67 227.45 0 225.33 NC 218.14 209.21 NC 198.24 192.79 188.12 178.81 159.49 99.20 65.78 0.00 5.42 NC 5.39 5.34 NC 5.29 5.26 5.24 5.19 5.07 4.60 4.19 Aex (g) Aex (mg) Aex Acum (mg) Aex acum t Aex acum Ln(Aex acum t Aex acum)
NC=No Cuantificado; NP=No proporcionado por el equipo responsable
Mtodo Sigma menos

Ln (Aex Acum t - Aex Acum) 6.00 5.00 4.00 3.00 2.00 1.00 0.00 0.0 5.0 10.0 15.0
y = -0.0524x + 5.4957 R = 0.9355
20.0
25.0
Tiempo (h)
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Grfico 3.1 Grfica de resultados procesados del voluntario 2 por el mtodo de sigma menos para los ltimos cinco puntos de Aex acumulada vs tiempo para obtencin Ke
Grafico de excrecin
Ln (Aex Acum t - Aex Acum)
6.00 5.00 4.00 3.00 2.00 1.00 0.00 0.0 5.0 10.0 15.0
y = -0.0646x + 5.6956 R = 0.9431
20.0
25.0
Tiempo (h)
Observando la tabla 3 se tiene que este voluntario, al inicio del estudio tuvo un bajo volumen de orina, indicando quiz la falta de hidratacin antes de la administracin del medicamento. Pero despus de esto, sus volmenes fueron aumentando llegando a ser muy parecidos a los de los individuos restantes. Se observa adems que en la muestra cero no se observa seal alguna, indicando que no existen interferencias en la orina que afectaran la medicin espectrofotomtrica realizada. En cuanto al pH de la orina, este se mantuvo constante durante todo el estudio, siendo de 6. Este valor es adecuado y adems no afecta a la excrecin renal del frmaco, ya que se encuentra por arriba de su pKa. Por otro lado se observa que en los intervalos de 0.5-1 hora y de 2-2.5 horas despus del inicio del estudio se obtuvieron absorbancias no cuantificables ya que no entraban en el intervalo de la curva patrn. Esto puede ser debido a que a estos tiempos aun no se absorba todo el frmaco y por tanto la cantidad eliminada es muy pequea y dado que se estuvo hidratando al voluntario adecuadamente, puede ser que el frmaco eliminado se encontrara muy diluido en la orina. Esto se ve apoyado por el hecho de que el voluntario tuvo una excrecin mayor del analito a los tiempos de 12 -30 hrs. permitiendo pensar que al inicio no excreto una cantidad suficiente para cuantificarla. Asimismo se observa que este voluntario elimin una cantidad menor de AAS que la esperada, dado que la dosis fue de 500 mg. Lo indicado en el prrafo anterior pudo contribuir a este dato, ya que al no poder cuantificar las cantidades en dos intervalos se tiene prdidas de datos. Adems pudo contribuir la unin a protenas plasmticas que inhibe la excrecin renal del frmaco o la falta de absorcin del mismo debida al individuo. Por otro lado, al observar la grfica 3 se ve que durante los primeros seis tiempos de muestreo cuantificables se tiene una meseta que puede indicar que durante ese tiempo se estaba llevando a cabo al mismo tiempo la absorcin y la eliminacin del frmaco. Dado este comportamiento se tom la decisin de que para obtener el parmetro Ke slo se tomaron los ltimos cinco tiempos de muestreo que son en los que aparece una disminucin en la cantidad remanente por excretar, indicando la fase de excrecin. Este dato se presenta en el grfico 3.1 y es con ste con el que se calcul el tiempo de vida media del frmaco en el individuo que fue de 10.73 horas. Este dato es muy elevado dado que el esperado segn la bibliografa es de aproximadamente Laboratorio de Biofarmacia 2013-1
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3-4 horas. Esto es debido a la poca cantidad de frmaco eliminado que nos hace pensar que an se encuentra dentro del organismo y le lleva ms tiempo ser excretado. Asimismo se debe a que la mayor cantidad de frmaco fue eliminada en los ltimos tiempos de muestreo, llevndonos a que este voluntario elimina ms lentamente el frmaco y por tanto presenta una vida media mayor. Voluntario 3 Tabla 4. Datos experimentales y resultados del voluntario 3
Tiempo (h) Blanco Abs Concentracin (g/mL) Volumen (mL) pH Aex (g) Aex (mg) Aex Acum (mg) Aex acum t Aex acum Ln(Aex acum t Aex acum)
6 0 0.0 0 0.00 NP 5 0.00 0.00 0.5 0.423 306.35 15.00 5 4595.22 4.60 1.0 0.172 118.89 10.00 5 1188.95 1.19 1.5 0.045 24.05 186.00 5 4472.89 4.47 2.0 0.041 21.06 310.00 6 6528.75 6.53 2.5 0.006 NC NP 6 NC NC 3.0 0.029 12.10 340.00 5 4113.52 4.11 4.0 0.064 38.24 481.00 NP 18392.23 18.39 6.0 0.639 467.66 88.00 NP 41154.29 41.15 8.5 0.422 305.60 280.00 NP 85568.33 85.57 12.0 0.191 133.08 344.00 NP 45781.03 45.78 15.0 0.3 214.49 263.00 NP 56410.46 56.41 23.5 0.084 53.17 338.00 NP 17972.82 17.97 30.0 0.036 17.33 435.00 NP 7536.97 7.54 NC=No Cuantificado; NP=No proporcionado por el equipo responsable
0.00 4.60 5.78 10.26 16.79 NC 20.90 39.29 80.45 166.01 211.80 268.21 286.18 293.72
0.00 289.12 287.93 283.46 276.93 NC 272.82 254.42 213.27 127.70 81.92 25.51 7.54 0.00
5.67 5.66 5.65 5.62 NC 5.61 5.54 5.36 4.85 4.41 3.24 2.02
+ 6.0242 Mtodo Sigma menos y = -0.1642x R = 0.9608 7.00 6.00 5.00 4.00 3.00 2.00 1.00 0.00 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 Tiempo (h)
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Grfico 4.1 Grfica de resultados procesados del voluntario 3 por el mtodo de sigma menos para los ltimos cinco puntos de Aex acumulada vs tiempo para obtencin Ke
Grafica de excrecin
6.00 5.00 4.00 3.00 2.00 1.00 0.00 0.0 5.0 10.0 15.0
y = -0.1956x + 6.5177 R = 0.9746
20.0
25.0
Tiempo (h)
Como se aprecia en la tabla 4, el estudio realizado para este individuo refleja volmenes suficientes para las distintas determinaciones a cada tiempo, a pesar de que al inicio del estudio se observan volmenes bajos no son menores a los 10 ml por lo que resultan suficientes para la determinacin de salicilatos en orina. Posteriormente, a travs del tiempo, los volmenes de orina fueron incrementando para as llegar a ser semejantes con los volmenes de muestras emitidos por los dems voluntarios. A pesar de lo anterior, lo que realmente tiene significado clnico son las concentraciones de salicilatos contenidos en cada una de las muestras ya que el parmetro mayoritariamente utilizado es la cantidad de salicilatos excretada por muestra de orina. Es posible decir que la muestra al tiempo 0 fue tomada antes de la administracin del producto y que el paciente no consumi productos que interfirieran con la determinacin antes del inicio del estudio, debido a que la absorbancia a este tiempo fue de cero. Posteriormente se aprecia la rpida absorcin del frmaco ya que al siguiente tiempo de muestreo se obtuvo una cantidad cuantificable de metabolito en orina. Otro parmetro importante para la excrecin del metabolito buscado en este estudio es el pH urinario, debido a que los salicilatos son reabsorbidos en el tbulo distal de las nefronas. El voluntario 3 present, segn los pocos datos proporcionados de pH de sus muestras, un pH de 5-6. Sabiendo que el pH urinario normal es justo de estos valores, se aprecia que este parmetro fisiolgico no se ve alterado en este voluntario. Tomando esto en cuenta y sabiendo que a pH urinarios superiores a pKa del cido saliclico (pKa=3.0) este se encuentra ionizado, se llega a la suposicin de que no se da lugar a la reabsorcin tubular y por lo tanto todo el metabolito generado a partir del metabolismo del frmaco que lleg al volumen urinario mediante filtracin glomerular fue excretado. A pesar de lo antes dicho se aprecia una cantidad excretada ms baja de la esperada, lo que se puede decir debido a que el muestreo se realiz durante 30 horas, que equivalen a alrededor de 10 vidas medias del frmaco, con lo que se espera que se elimine ms del 99% de la dosis administrada (495 mg). Este detalle puede ser justificado si se piensa en que el cido saliclico tiende a unirse albmina en circulacin sangunea, puede eliminarse por glucuronidacin, y la idiosincrasia metablica del individuo afecta en gran media la formacin del metabolito estudiado y por ende su eliminacin, se descarta en cierta parte la probabilidad de
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que se diera una absorcin disminuida debida a la influencia de los excipientes ya que a este individuo le fue administrado el producto innovador. Es importante resaltar que a las 2.5 h de muestreo no se emiti resultado por parte del equipo de experimentacin, lo que nos orilla a suponer que se perdi esa muestra y por tanto esa cantidad de metabolito excretado. El voluntario consumi la misma cantidad de alimento que el resto de los voluntarios (con las nicas excepciones expresadas por los voluntarios 6 y 7 en sus respectivos apartados) en el intervalo de muestreo 2.5-3.0 h, lo que descarta la influencia de los alimentos consumidos en la excrecin del metabolito ya la alimentacin que influye en nuestras determinaciones es la consumida durante las primeras horas del estudio. Para la obtencin del tiempo de vida media de eliminacin se utilizaron nicamente los ltimos cinco valores de cantidad excretada acumulada debido a que presentan una mejor linealidad. El tiempo de vida media de eliminacin obtenido en base a los datos proporcionados por este sujeto es de 4.22 h, que es relativamente semejante a los emitidos por los voluntarios 1 y 4, hecho que resulta consistente debido a que estos tambin recibieron el producto innovador y que el tiempo de vida media terico es de 3-4h. Voluntario 4 Tabla 5. Datos experimentales y resultados del voluntario 4
Tiempo (h) Blanco 0.0 Abs Concentracin (g/mL) Volumen (mL) pH Aex (g) Aex (mg) Aex Acum (mg) Aex acum t Aex acum Ln(Aex acum t Aex acum)
1 8
0 6 0 0.00 110.00 6 0.00 0.00 0.5 0.13 87.53 140.00 6 12253.92 12.25 1.0 0.203 142.05 200.00 6 28409.26 28.41 1.5 0.075 46.45 250.00 6 11613.14 11.61 2.0 0.099 64.38 270.00 6 17381.63 17.38 2.5 0.108 71.10 300.00 6 21329.35 21.33 3.0 0.201 140.55 240.00 6 33732.64 33.73 4.0 0.138 93.50 570.00 6 53296.49 53.30 6.0 0.555 404.93 240.00 5 97182.97 97.18 8.5 0.39 281.70 340.00 6 95778.94 95.78 12.0 0.194 135.32 370.00 6 50070.20 50.07 15.0 0.14 95.00 270.00 6 25648.99 25.65 23.5 0.135 91.26 570.00 6 52019.42 52.02 30.0 0.067 40.48 470.00 6 19024.65 19.02 NC=No Cuantificado; NP=No proporcionado por el equipo responsable
0.00 12.25 40.66 52.28 69.66 90.99 124.72 178.02 275.20 370.98 421.05 446.70 498.72 517.74
505.49 477.08 465.47 448.08 426.75 393.02 339.73 242.54 146.76 96.69 71.04 19.02 0.00
6.23 6.17 6.14 6.10 6.06 5.97 5.83 5.49 4.99 4.57 4.26 2.95
Mtodo Sigma menos y = -0.1452x + 6.3865

R = 0.9962 7.00
6.00 5.00 4.00 3.00 2.00 1.00 0.00 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 Tiempo (h)
Como se aprecia en la tabla 5, los volmenes de las muestras emitidas por el voluntario 4 siempre fueron homogneos y en ningn momento descendieron, lo que nos indica la correcta hidratacin del sujeto durante el desarrollo experimental. Es posible decir que la muestra al tiempo 0 fue tomada antes de la administracin del producto y que el paciente no consumi productos que interfirieran con la determinacin antes del inicio del estudio, debido a que la absorbancia a este tiempo fue de cero. Posteriormente se aprecia la rpida absorcin del frmaco ya que al siguiente tiempo de muestreo se obtuvo una cantidad cuantificable de metabolito en orina. Este voluntario present en casi todas las muestras tomadas un pH de 6, por lo que se llega a la suposicin de que no se da lugar a la reabsorcin tubular y por lo tanto todo el metabolito generado a partir del metabolismo del frmaco que lleg al volumen urinario mediante filtracin glomerular fue excretado. Es importante resaltar que segn lo calculado, el individuo excreto una mayor cantidad de metabolito que la dosis de frmaco recibida. Este hecho no puede justificarse tomando en cuenta la absorbancia al tiempo cero, es decir, el individuo no consumi antes del estudio algn componente que pudiese resultar en la alteracin de las determinaciones realizadas. Sin embargo, es posible que posteriormente hubiese ingerido esta clase de alimentos, aunado a la posibilidad de que la unin a albumina del frmaco en la circulacin del individuo, la eliminacin por glucoronidacin y la idiosincrasia metablica del sujeto fueran las ptimas para la mxima excrecin del frmaco como metabolitos solubles en orina, as como que la absorcin del frmaco fue ptima debido a que el medicamento administrado fue el producto innovador. Para la obtencin del tiempo de vida media de eliminacin se utilizaron todos los puntos de cantidad excretada acumulada debido a que se observ linealidad en todos estos. El tiempo de vida media de eliminacin obtenido en base a los datos proporcionados por este sujeto es de 4.77 h, que es relativamente semejante a los emitidos por los voluntarios 1 y 3, hecho que resulta consistente debido a que estos tambin recibieron el producto innovador y que el tiempo de vida media terico es de 3-4h.
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Voluntario 5 Tabla 6. Datos experimentales y resultados del voluntario 5.

Tiempo (h) Blanco 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 4,0 6,0 8,5 12,0 15,0 23,5 30,0 Abs 0 0 -0,008 0,03 0,087 0,028 0,026 0,078 0,065 0,126 0,304 0,28 0,011 0,038 0,002 0,00 NC 12,85 55,41 11,35 9,86 48,69 38,98 84,54 217,48 199,55 NC 18,82 NC 135,00 210,00 180,00 220,00 200,00 190,00 265,00 600,00 270,00 210,00 240,00 140,00 280,00 340,00 6 6 6 6 5 6 6 6 6 6 6 6 6 6 0,00 NC 2312,17 12191,19 2270,35 1873,04 12903,66 23390,59 22825,99 45669,90 47892,46 NC 5269,60 NC 0,00 NC 2,31 12,19 2,27 1,87 12,90 23,39 22,83 45,67 47,89 NC 5,27 NC 0,00 NC 2,31 14,50 16,77 18,65 31,55 54,94 77,77 123,44 171,33 NC 176,60 NC 0,00 NC 174,29 162,10 159,83 157,95 145,05 121,66 98,83 53,16 5,27 NC 0,00 NC NC NC 5,16 5,09 5,07 5,06 4,98 4,80 4,59 3,97 1,66 NC Concentracin (g/mL) Volumen (mL) pH Aex (g) Aex (mg) Aex Acum (mg) Aex acum t - Aex acum Ln(Aex acum t - Aex acum)
Grafica 6. Grafica de resultados procesados del voluntario 5 por el mtodo de sigma menos
6 5 4 3 2 1 0 0.0
Mtodo Sigma menos
5.0 Tiempo (h)
10.0
15.0
2 0
Grfico 6.1 Grfica de resultados procesados del voluntario 5 por el mtodo de sigma menos para los ltimos tres puntos de Aex acumulada vs tiempo para obtencin Ke
Ln (Aex Acum t - Aex Acum y = -0.4996x + 7.8228 Grafica de excrecin R = 0.95 6.000 5.000 4.000 3.000 2.000 1.000 0.000 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 14.0 Tiempo (h)
Dentro de los resultados podemos observar que el voluntario 5, en la muestra blanco de orina que es tomada al tiempo cero, no se detecta ninguna seal, lo cual es bueno porque nos indica que no existe ninguna interferencia en ese momento, interferencia que pueda dar seales cruzadas con el mtodo analtico utilizado, aunque puede ser extrao ya que regularmente se observan pequeas seales en este tiempo. En la primera media hora despus de haberse tomado el medicamento de prueba, la muestra no presentan una seal de absorbancia cuantificable por la curva patrn obtenida, adems parece que no es una seal que marque el comienzo de la eliminacin por medio de excrecin urinaria. Al tiempo 15 h y tiempo 30 h tampoco tenemos concentraciones cuantificables, el tiempo 15h lo asumimos como la idiosincrasia de nuestro voluntario. El hecho de que no se presente en el tiempo 30h, podra indicar que lo absorbido se haya eliminado ya para este momento, ya que este tiempo representa alrededor de 10 vidas medias tericas del cido saliclico. Aunque tambin al observar la cantidad acumulada a tiempo infinito, que es de 176.6 mg para este voluntario y debera ser de 500 mg, podra deberse a que el frmaco como salicilato en el pH sanguneo se une a albumina, o podra ser excretada en un complejo con glucurnido (pudiendo no ser cuantificado), deberse a la formulacin del medicamento prueba o finalmente a la idiosincrasia de nuestro sujeto. Durante todo el protocolo se observa que el volumen urinario del voluntario es regular y no cambia mucho aunque los tiempos entre las tomas de muestra sean mas largas, no aumenta el volumen. El intervalo de muestreo en el que se da la mayor excrecin es de 8.5 a 12 horas. El pH urinario se muestra muy constante y dentro del intervalo normal de pH, que es de 5-6, por lo tanto esto no modifica la excrecin del frmaco. En la grfica del mtodo sigma menos, podemos observar un cambio de pendiente, entre los primeros tiempos y los ltimos tres tiempos de muestreo, debindose quizs al hecho de que mientras comenzaba la eliminacin del frmaco, haba absorcin del frmaco en el tracto gastrointestinal. Para obtener la Ke del cido saliclico, se utilizaron nicamente los ltimos tres intervalos de muestreo, y mediante est constante obtenemos un tiempo de vida media del frmaco de 1.39 h que es la mitad de lo esperado que es de aproximadamente de 3 h, aunque para obtener esta ltima intervienen muchos factores.
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Voluntario 6 Tabla 7. Datos experimentales y resultados del voluntario 6.

Tiempo (h) Blanco 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 4,0 6,0 8,5 12,0 15,0 23,5 30,0 Concentracin (g/mL) Volumen (mL) pH Aex (mg) Aex Acum (mg) Aex acum t - Aex acum 0,00 600,65 589,92 586,11 580,28 574,30 570,83 530,04 NC 500,14 286,71 118,55 10,78 0,00 6,40 6,38 6,37 6,36 6,35 6,35 6,27 NC 6,21 5,66 4,78 2,38 Ln(Aex acum t - Aex acum)
Abs 0 0 0,105 0,218 0,052 0,055 0,055 0,033 0,146 0,022 0,213 0,552 0,562 0,225 0,085
Aex (g)
0,00 68,86 153,25 29,28 31,52 31,52 15,09 99,48 NC 149,51 402,69 410,16 158,48 53,92
NP 60,00 70,00 130,00 185,00 190,00 230,00 410,00 440,00 200,00 530,00 410,00 680,00 200,00
NP 5 6 6 6 5 6 NP 7 8 7 8 8 5
0,00 4131,44 10727,41 3805,83 5830,47 5988,05 3469,75 40785,66 NC 29902,91 213424,94 168164,30 107764,00 10784,17
0,00 4,13 10,73 3,81 5,83 5,99 3,47 40,79 NC 29,90 213,42 168,16 107,76 10,78
0,00 4,13 14,86 18,66 24,50 30,48 33,95 74,74 NC 104,64 318,07 486,23 593,99 604,78
Grfico 7. Grafica de resultados procesados del voluntario 6 por el mtodo de sigma menos
Mtodo Sigma menos

7.000 6.000 5.000 4.000 3.000 2.000 1.000 0.000 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 Tiempo (h)
2 2
Ln (Aex Acum t- Aex Acum)
Grfico de excrecin
6.000 5.000 4.000 3.000 2.000 1.000 0.000 0.0 5.0 10.0
y = -0.2845x + 9.0605 R = 0.9999
15.0
20.0
25.0
Tiempo (h)
En la tabla correspondiente al voluntario 6, que cabe decir que es una mujer, no presenta ninguna seal en la muestra blanco, correspondiente al tiempo cero y es la muestra tomada antes de la administracin del medicamento de prueba. Al no mostrar absorbancia alguna, nos indica que no existe seal inicial que corresponda a alguna interferencia, sin embargo es poco comn que ocurra una absorbancia cero en la muestra blanco. A partir de la muestra en el intervalo de media hora y hasta la ltima muestra, correspondiente a las 30h del estudio, muestra absorbancias, las cuales indican la eliminacin del frmaco en forma de salicilato. Los volmenes de los intervalos son suficientes para llevar a cabo el muestreo, y se observa un aumento en los volmenes, conforme avanza el tiempo, al inicio se puede atribuir que no estaba bien hidratada la persona, por eso muestra volmenes un tanto bajos, y conforme se fue hidratando mostr volmenes superiores. En los intervalos correspondientes a varias horas, el volumen de orina fue mayor, concuerda con lo esperado. En la muestra correspondiente a 6h obtenemos una absorbacia que no entra dentro de la curva patrn por lo que no se puede cuantificar, y de cierto modo este dato es ignorado, la posible razn para que la absorbancia sea tan pequea, es que la concentracin es pequea por efecto de la dilucin, porque el volumen que muestra el sujeto en esta muestra es de 440 mL. El pH del primer tiempo, el tiempo cero, no fue presentado, suponemos que fue desechada la muestra antes de tomar el pH, en los siguientes 6 tiempos de muestreo el pH obtenido se encuentra dentro del rango fisiolgico normal. En la muestra 4h tampoco tomaron el pH de su muestra, a partir del tiempo 6h hasta el de 23.5h se nota un pequeo incremento en el pH urinario, pudindose presentar por los alimentos consumidos despus del monitoreo. ste pequeo incremento puede haber repercutido un poco en la excrecin del salicilato, aumentndola al evitar que se reabsorba el salicilato en el tubulo distal. En el intervalo de 8.5 - 12 h, se da el pico de la eliminacin, es el momento en el que se excreta en mayor medida el analito cuantificado. Esto es una excrecin de 213.42 mg, que corresponde a casi la mitad de la dosis administrada, que fue de 500 mg. En este voluntario es muy interesante observar que la cantidad acumulada excretada es de 604.78 mg, lo cual no corresponde a la dosis administrada. Esto puede deberse a compuestos que se hayan excretado por orina y que tengan la posibilidad de reaccionar con el reactivo utilizado para producir una reaccin colorida y poder llevar a cabo la cuantificacin (Trinder). Estos compuestos, pueden ser algunas substancias relacionadas con algn producto consumido, que tenga como derivado algn tipo de salicilato, o grupos fenlicos capaces que reaccionar. Tambin podra deberse a alguna substancia endgena que tenga esta misma capacidad.
2 3
En la grfica del mtodo sigma menos es posible considerar un cambio de pendientes en los ltimos 3 o 4 tiempos de muestreo, esto debido a que la eliminacin del salicilato se comienza mientras aun se tiene absorcin del AAS. Por lo tanto se utilizaron los 3 ltimos tiempos de muestreo para obtener la regresin lineal, que nos proporciona la Ke y poder obtener el tiempo de vida media que es de 2.44h, que es cercana al tiempo de vida media terico bibliogrfico para el compuesto cuantificado. Voluntario 7 Tabla 8. Datos experimentales y resultados del voluntario 7. Tiempo (h) Abs Concentracin (g/mL) Volumen (mL) pH Aex (g) Aex (mg) Aex Acum (mg) Aex acum t - Ln(Aex acum t Aex acum Aex acum) 188.08 232.09 220.03 197.73 183.36 174.92 165.07 152.23 104.95 61.85 51.69 24.87 7.95 0.00 5.24 5.45 5.39 5.29 5.21 5.16 5.11 5.03 4.65 4.12 3.95 3.21 2.07
6 Blanco 0 0.0 0.027 10.60 200 5 2120.99 2.12 2.12 0.5 0.037 18.07 100 6 1807.32 1.81 1.81 1.0 0.137 92.76 130 6 12058.25 12.06 13.87 1.5 0.155 106.20 210 6 22301.72 22.30 36.17 2.0 0.093 59.90 240 6 14374.91 14.37 50.54 2.5 0.058 33.76 250 7 8439.13 8.44 58.98 3.0 0.054 30.77 320 7 9846.15 9.85 68.83 4.0 0.041 21.06 610 7 12846.90 12.85 81.67 6 0.199 139.06 340 8 47280.06 47.28 128.95 8.5 0.147 100.22 430 6 43096.34 43.10 172.05 12.0 0.038 18.82 540 7 10162.81 10.16 182.21 15.0 0.051 28.53 940 7 26817.03 26.82 209.03 23.5 0.054 30.77 550 7 16923.08 16.92 225.95 30.0 0.028 11.35 700 7 7946.23 7.95 233.90 NC=No Cuantificado; NP=No proporcionado por el equipo responsable
Grafica 8. Grafica de resultados procesados del voluntario 7 por el mtodo de sigma menos Laboratorio de Biofarmacia 2013-1
Mtodo Sigma menos

Ln (Aex Acum t - Aex Acum) 6.00 5.00 4.00 3.00 2.00 1.00 0.00 0.0 5.0 10.0 15.0
y = -0.1477x + 5.5322 R = 0.9935
20.0
25.0
Tiempo (h)
2 4
El estudio de orina realizado en el voluntario siete, hemos de analizar en primera instancia, la variacin en las lecturas de absorbancia, lo que nos lleva a una determinacin de concentraciones de salicilatos excretados diferente en cada tiempo de muestreo. Con estos primeros datos calculados, lo importante a determinar en primera instancia es la cantidad excretada, esta cantidad calculada de salicilatos excretados depende del volumen excretado de orina; observamos que en los primeros tiempos el volumen excretado es menor al de los tiempos finales, este hecho lo atribuimos a que los intervalos de muestreo cada vez son ms largos y los individuos requieren acumular el todo volumen de orina excretado a cada tiempo y as evitar prdidas de nuestro analito en cuestin. Este dato de volumen es un primer valor que provocara la variacin interindividual a los que se les administro el frmaco de prueba, atribuyndolo a que cada uno de ellos, tiene un metabolismo diferente y los individuos no se suministraron la misma cantidad de agua durante todo el estudio. Estudiando ms a detalle cada tiempo de muestreo, el voluntario 7 al tiempo 6h, excret la mayor cantidad del analito. Si comparamos este valor con los otros voluntarios a los cuales se les administr el mismo medicamento de prueba, vemos no todos al tiempo 6h excretaron la mayor cantidad de salicilatos, con ello nuevamente regresamos a lo mencionado anteriormente: el organismo de cada individuo trabaja a un ritmo diferente, tanto que el la cantidad mxima secretada como el tiempo al cual llegaron a esa determinacin no es la misma. La siguiente determinacin que podemos analizar, es la cantidad acumulada a cada tiempo para finalmente determinar la cantidad acumulada a tiempo infinito. Este valor nos dice la cantidad total de salicilatos excretados en la orina durante el estudio, dicho valor es crtico en nuestras posteriores determinaciones. Este voluntario, de los 500mg tericos que suponamos tena que haber excretado, slo excret 233.90mg, es decir que excret menos del 50% de lo esperado. La explicacin a esto se debe a distintos factores como lo es el metabolismo que sigue el AAS, este se biotransforma rpidamente en el plasma e hgado, hasta convertirse en cido saliclico. Como hemos mencionado a lo largo de este reporte, el cido saliclico (salicilatos), es lo que cuantificamos en nuestro mtodo analtico, la proporcin que esperamos encontrar en la orina del analito en cuestin disminuye, debido a que el cido saliclico se une hasta en 90% a protenas plasmticas, una proporcin del 50% se conjuga con glicina para formar el cido salicilrico, un porcentaje menor se conjuga con el cido glucurnido, mediante la glucoroniltranferasa para formar el glucurnido ter y el glucurnido ster del cido saliclico y una pequea fraccin se oxida hasta su conversin en cido gentsico*. Esto nos habla de que no todo el cido saliclico ya no est disponible para su excresin cuantificable en la orina, de esta manera concordamos que el voluntario siete s sigue un metabolismo similar a lo antes mencionado; sin embargo esta no es la nica explicacin a la reduccin de salicilatos excretados. Otro factor a incluir es el mtodo analtico y la respectiva curva patrn elaborada; la sensibilidad del mtodo pudo provocar que cantidades de salicilatos excretados no fueran detectadas por el espectrofotmetro. Al comparar las cantidades excretadas a tiempo infinito del voluntario siete con los otros voluntarios Con lo que respecta al mtodo de cuantificacin, afortunadamente no excluimos ningn dato del muestreo, ya que todos los valores de absorbancia estn dentro del rango de absorbancias de la curva patrn, este hecho no dice que durante el estudio no hubo prdidas de analto. Sin embargo, un dato importante a resaltar es a tiempo 0h, ya que el espectrofotmetro detect una cantidad cuantificable, lo que en teora no debera aparecer. Una probable explicacin a este fenmeno es que el voluntario no sigui adecuadamente los requisitos que peda el estudio e ingiri algunas sustancias que pudieran contener grupos fenlicos, logrando que el reactivo de trinder reaccionara con estos compuestos y nos arrojara una seal que si bien no fue tomada en cuenta puesto no eran salicilatos eran compuestos que interfieren con los dems resultados obtenidos. Con base a este dato sabemos que el mtodo de cuantificacin no es lo suficientemente especfico para nuestras determinaciones, atribuyndole un factor ms para la variacin en los resultados interindividuales. La excrecin renal de los salicilatos y sus metabolitos depende del pH, en la orina alcalina se elimina hasta un 85% como salicilato libre, en tanto que en orina cida solo se elimina 5%*. Esto concuerda fehacientemente
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con los datos de pH, ya que a tiempo 6h, la orina present un pH igual a 8 y es en este valor donde el voluntario siete present la mayor cantidad de orina excretada. De igual forma a un pH igual a seis la cantidad excretada aunque es menor tambin es significativa puesto que a valores de pH neuros es donde se encuentras las menores cantidades excretadas. Por otro lado el pka del cido saliclico es de 3.0, quiere decir que a los pH de la orina se encuentra ionizado, lo que permite que se encuentre en disolucin y este pueda estar localizado en la orina. Los siguientes parmetros a analizar son los calculados por medio del mtodo sigma menos. Como se observa en el grfico del voluntario 7, la tendencia de sus datos es prcticamente lineal, por lo que s de tomaron en cuenta todos los datos para el clculo de la constante de eliminacin (Ke) y por consiguiente el tiempo de vida media. Para el voluntario siete el t1/2, fue de 4.69h, en primera instancia este valor est por arriba de lo esperado que es aproximadamente de 3h y en segunda, se deben considerar siete tiempos de vidas medias para el tiempo de muestreo, para este voluntario fue insuficiente el tiempo de muestreo, ya que tena que requerir de 2.8h ms para cumplir con esta especificacin. Si comparamos este valor con los dems voluntarios de que tomaron el mismo medicamento, difiere en gran media de con los otros tiempo de vida media; esto nos dice que el voluntario siete requiere de aproximadamente tres veces ms de tiempo para poder excretar al frmaco del organismo. Ello nuevamente habla de la idiosincrasia de cada individuo y puesto que se trat de que las condiciones fueran lo ms homogneas posibles.
Voluntario 8 Tabla 9. Datos experimentales y resultados del voluntario 8. Tiempo (h) Abs Concentracin (g/mL) Volumen (mL) pH Aex (g) Aex (mg) Aex Acum (mg) Aex acum t - Ln(Aex acum t Aex acum Aex acum)
NC NC
2 6
6 Blanco 0 0.0 0.019 NC 360 7 NC NC 0.5 0.11 72.59 120 7 8710.98 8.71 8.71 1.0 0.157 107.69 150 7 16153.85 16.15 24.86 1.5 0.051 28.53 220 5 6276.33 6.28 31.14 2.0 0.11 72.59 260 7 18873.79 18.87 50.01 2.5 0.041 21.06 215 7 4528.01 4.53 54.54 3.0 0.053 30.02 320 7 9607.17 9.61 64.15 4.0 0.051 28.53 480 6 13693.80 13.69 77.84 6.0 0.502 365.35 220 7 80376.40 80.38 158.22 8.5 0.672 492.31 140 7 68923.08 68.92 227.14 12.0 0.336 241.37 240 6 57929.80 57.93 285.07 15.0 0.035 16.58 420 7 6963.41 6.96 292.04 23.5 0.021 NC 880 7 NC NC NC 30.0 0.017 NC 570 7 NC NC NC NC=No Cuantificado; NP=No proporcionado por el equipo responsable
283.33 267.17 260.90 242.02 237.49 227.89 214.19 133.82 64.89 6.96 0.00 NC NC
5.65 5.59 5.56 5.49 5.47 5.43 5.37 4.90 4.17 1.94
Grfico 9. Grafica de resultados procesados del voluntario 8 por el mtodo de sigma menos
Mtodo Sigma menos

Ln (Aex Acum t - Aex Acum) 6.000 5.000 4.000 3.000 2.000 1.000 0.000 0.0 5.0 Tiempo (h) 10.0 15.0
y = -0.502x + 8.1039 R = 0.9641
Grfico de excrecin
Ln (Aex Acum t - Aex Acum) 6.000 5.000 4.000 3.000 2.000 1.000 0.000 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0
10.0
12.0
14.0
Tiempo (h)
Como podemos observar en la tabla de resultados respectiva al voluntario ocho, uno de los primeros factores considerados como una variacin en los resultados interindividuales son las lecturas de absorbancia; a tiempo 0h, se present una seal, en teora no debera existir pero con el mtodo analtico utilizado es inevitable tener interferencias con compuestos ingeridos previamente por el voluntario. Afortunadamente esta seal no es cuantificable ya que no entra en el rango de absorbancias que la curva patrn provee, ello quiere decir que datos posteriores no sufrirn una alteracin significativa por este tipo de cuestiones. Los ltimos dos tiempos de muestreo tambin tuvieron que ser omitidos puesto que las seales no eran lo suficientemente grandes para que se consideraran cuantificables, con base a estos datos y a la literatura*, a tiempo 30h de manera terica representa 10 veces la vida media del analito, lo que podra indicar que a estos tiempos el voluntario dej de excretar la mayor parte del frmaco. Otra posible causa pudo ser que el volumen de orina excretado fue muy grande lo que pudo ocasionar una dilucin del metabolito excretado, lo cual pudo haber contribuido a que se presentara una cantidad menor de frmaco excretado que la esperada
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El siguiente parmetro a determinar fue la cantidad excretada a cada tiempo, en la cual influye el volumen excretado de orina a cada tiempo. A los tiempos 4h y 15h, fueron a los que el voluntario excret mayores volmenes de orina y que pudieron ser tomados en cuenta para la cuantificacin; sin embargo, eso no significa que a estos tiempos se hayan excretado las mayores cantidades de salicilatos, ya que los volmenes restantes eran menores aunque los intervalos de muestreo fueran cada vez ms largos, y es en el tiempo 6h donde encontramos la mayor cantidad excretada que fue de 80.37mg, al comparar este valor con el de los otros voluntarios, nuestro voluntario excret aproximadamente el doble, comprobando as que el metabolismo vara entre cada individuo y que ello es una variante importante en los resultados obtenidos. En nuestro voluntario, a la cantidad acumulada a tiempo infinito fue de 293.04mg, este valor representa arriba del 50% de lo esperado que era de 500mg. La explicacin a esto nuevamente se debe a distintos factores ya mencionados en los voluntarios anteriores a los que se les administr el medicamento de prueba. Al comparar este valor con el de los otros voluntarios no existe relacin alguna entre ellos, al obtener una desviacin estndar alta demostrando as la idiosincrasia de cada individuo. Como ya se ha mencionado a lo largo del anlisis, la excrecin renal de los salicilatos y sus metabolitos depende del pH, en la orina alcalina se elimina hasta un 85% como salicilato libre, en tanto que en orina cida solo se elimina 5%*; que para nuestro voluntario no concuerda con lo antes reportado, ya que los pH urinario se muestra mayoritariamente de 7, en su caso la excrecin del frmaco se encuentra relativamente constante. Finalmente, para el clculo de los parmetros Ke y tiempo de vida media por el mtodo de sigma menos, por la tendencia de los puntos, observamos en el grfico 8 dos pendientes diferentes; con base a esto al considerar que nuestro objetivo es calcular la constante de eliminacin para el subsecuente clculo de vida media de excresin solo tomamos los datos finales que muestran un comportamiento lineal que en este caso fueron solamente 3. El tiempo de vida media resultante es muy similar al del voluntario cinco, sin embargo; el valor resultante fue de 1.38 para el voluntario ocho y es considerado bajo ya que la esperada era un tiempo de vida media de 3h. Un dato relevante al realizar esta comparacin es que los resultados arrojados por ambos voluntarios previos a este ltimo clculo son sumamente diferentes, pero al final muestran una tendencia similar en el los tiempos de excresin que llevaron a obtener una pendiente similar (Ke) demostrando una vez ms la idiosincrasia de cada uno de los individuos incluidos en el estudio.
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RESULTADOS GLOBALES Tabla 10. Cantidad acumulada del producto innovador Tiempo (h) 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 4 6 8.5 12 15 23.5 30 1 0 2.715 35.426 61.789 82.441 110.503 119.813 149.014 196.229 215.673 271.255 297.247 303.055 321.331 2 0 2.12098581 9.31740105 18.2389843 29.2083645 34.6661688 39.3383122 48.648245 67.961165 128.256908 161.67289 227.453323 3 0 4.59522031 5.78416729 10.2570575 16.7858103 20.8993279 39.2915609 80.4458551 166.01419 211.79522 268.205676 286.178491 293.715459 Voluntario 4 0 12.2539208 40.6631815 52.2763256 69.6579537 90.987304 124.71994 178.01643 275.199403 370.978342 421.048544 446.697535 498.716953 517.741598 Prom 0 5.421 23.069 33.410 46.781 103.581 73.660 100.247 147.803 200.328 243.015 285.102 312.406 340.060 DE 0 4.67549508 19.342 27.5550381 34.2019595 14.202 56.2639033 74.0331773 107.821533 133.592902 146.187028 130.57117 139.292945 124.832704 CV% 0 86.2415251 68.909 82.4753103 73.1110357 13.711 76.3830117 73.8507016 72.9494764 66.6869456 60.1555823 45.7980822 44.5871953 36.70899
Tabla 11. Cantidad acumulada excretada producto genrico. Tiempo (h) 5 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 4 6 8.5 12 15 23.5 30 0 2.312 14.503 16.774 18.647 31.550 54.941 77.767 123.437 171.329 NC 176.599 4.131 14.859 18.665 24.495 30.483 33.953 74.739 NC 104.642 318.066 486.231 593.995 604.779 6 0 7 2.12 1.81 13.87 36.17 50.54 58.98 68.83 81.67 128.95 172.05 182.21 209.03 225.95 233.90 Voluntario 8 Prom DE CV% 0 0 0 0 8.71097834 5.590 2.70454526 48.3797574 24.8648245 23.069 19.342 68.909 31.1411501 25.649 10.9988037 42.8813876 50.0149365 35.987 18.0378417 50.1235725 54.5429425 41.194 19.9802821 48.5031277 64.150112 50.150 20.304914 40.487971 77.8439134 72.830 12.5038361 17.1685892 158.220314 122.354 40.9295567 33.4516852 227.143391 157.348 55.0223337 34.9684748 285.073189 239.701 72.8923983 30.4097312 292.036594 329.806 141.375567 42.866239 332.889 227.583879 68.3661994 420.400 260.751302 62.0245834
2 9
Grfico 10. Curvas del producto innovador por el mtodo de sigma menos
Mtodo sigma menos

8.00 ln(Aex-Aex) 6.00 4.00 2.00 0.00 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 Tiempo (h) Series1 2 3 4
Grfico 11. Curvas del producto genrico por el mtodo de sigma menos
Mtodo sigma menos

7.000 6.000 5.000 4.000 3.000 2.000 1.000 0.000 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 Tiempo (h) ln(Aex - Aex) 5 6 8 7
Tabla 12. Cantidad excretada a tiempo infinito Voluntario 1 2 3 4 5 6 7 8 Prom DS CV% Cant excretada a t genrico innovador 321.33 227.45 293.72 517.74 176.60 604.78 233.90 292.04 326.83 191.20 58.50
Tabla 13. Tiempo de vida media Voluntario tiempo de vida media (h) genrico innovador 1 2 3 4 5 6 7 8 Prom DS CV% 5.14 10.73 4.22 4.77 1.39 2.44 4.69 1.38 2.47 1.56 62.97
340.06 124.83 36.71
6.22 3.03 48.81
3 0
Biodisponibilidad relativa
F= 0.96
ANLISIS GENERAL Las tablas 9 y 10 nos muestran la alta variabilidad existente entre los individuos debido a la idiosincrasia de ellos, ya que podemos observar como las cantidades excretadas acumuladas del frmaco en cada individuo son muy diferentes. Esto se refleja tambin en los %CV de los promedio se estos datos, los cuales son muy altos. En el caso del producto innovador se observa que a medida que pasa el tiempo el %CV disminuye, lo cual indica que mientras ocurre el proceso de absorcin , la eliminacin tiene mayor variacin, pero que una vez absorbido el frmaco su eliminacin es un poco ms homognea entre individuos. En cambio, en el producto genrico se observa que los %CV se mantienen constantes durante casi todo el estudio y tienden a aumentar en los ltimos tiempos de muestreo. Esto se debe a que en los ltimos tiempos slo dos voluntarios presentan muestras cuantificables y estos dos tenan cantidades acumuladas muy diferentes, lo cual da idea de la gran diferencia entre los voluntarios. Por otro lado, al observar las grficas 9 y 10, observamos que los voluntarios que se administraron con el producto innovador presentan una tendencia parecida cuando se realiza el mtodo de sigma menos obtenindose valores de Ke y tiempo de vida media muy cercanos. Sin embargo esto no se aprecia en el producto genrico donde los voluntarios 5 y 8 tienen una tendencia parecida, pero el 6 y 7 son diferentes a los anteriores. Cabe mencionar que la tendencia ms diferente fue la del voluntario 6, la cual era una mujer. Esto podra indicar diferencias en la farmacocintica del AAS entre sexos, aunque al poseer un solo dato no se puede asegurar nada, adems de que esto no se encuentra reportado en la literatura. En cuanto a la cantidad excretada a tiempo infinito, en ambos productos se observa que hubo gran variabilidad, probablemente debida a la idiosincrasia de los voluntarios. An as, segn lo indicado en la tabla 11, el %CV fue mayor para el medicamento genrico. Este dato puede hablarnos de que, adems de la causa mencionada anteriormente, la formulacin del producto pudo influir en la absorcin del frmaco y por tanto alter la cantidad excretada. Es importante mencionar que anteriormente se haban hecho pruebas de calidad a ambos productos y ambos cumplan con las pruebas farmacopeicas que se le realizaron. Adems se realiz un estudio de perfiles de disolucin y en nuestro caso no haban aprobado esta determinacin, pero esto quiz fue debido a problemas en el anlisis de las muestras. Aun as, aunque hubieran aprobado dicha prueba se sabe que sus resultados no siempre correlacionan con los resultados in vivo, por lo que no puede descartarse esta posibilidad de la formulacin o el mtodo de fabricacin como un factor decisivo. Con respecto al tiempo de vida media se puede ver que en el producto genrico hay una variabilidad mayor en este parmetro y que el dato promedio se encuentra por debajo del esperado. En cambio el producto innovador posee menor variabilidad; pero aun as sigue siendo alta, y su valor promedio est por arriba del Laboratorio de Biofarmacia 2013-1
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esperado. De esta manera se vuelve a observar el efecto de la variabilidad interindividual. Es importante mencionar que el dato que se est tomando como referencia es el tiempo de vida media del acido saliclico de 3 horas, dado que el tiempo de vida media del AAS es de 15 a 30 minutos debido a que al ser absorbido y una vez en sangre se transforma rpidamente a acido saliclico, y es este compuesto el que ejerce la actividad farmacolgica. En cuanto a la metodologa seguida en este guin, conociendo el dato terico anterior, se tiene que se tomaron muestras de orina durante 10 vidas medias, lo cual es adecuado, ya que para realizar un estudio de Biodisponibilidad con datos urinarios de deben tomar muestras por al menos 7 vidas medias del frmaco. Por ltimo tenemos el parmetro de Biodisponibilidad relativa el cual nos habla de que tanto son iguales ambos productos. En este caso tenemos un valor de 0.96, lo cual nos indica que el 0.96 % del producto genrico se absorbi con respecto al de referencia, indicando que la absorcin de ambos productos es muy parecida. Sin embargo con slo este dato no es posible concluir sobre la bioequivalencia de estos productos ya que es necesario realizar mas pruebas estadsticas acerca de las diferencias entre las cantidades excretadas de ambos frmacos, as como de la velocidad de absorcin. Asimismo para un estudio de bioequivalencia se necesitara realizar un estudio cruzado balanceado y se requieren mnimo 24 voluntarios, adems de que las muestras urinarias no son las mejores y de preferencia debera realizarse con muestras plasmticas. CONCLUSIN A pesar de haber realizado slo una prueba piloto de un estudio de bioequivalencia, se logr conocer todos los parmetros que influyen en l, y las caractersticas con que debe de cumplir. Asimismo se comprob que la idiosincrasia de los individuos genera resultados muy diferentes en todos los parmetros determinados, permitiendo as ver la gran variabilidad biolgica presente en la farmacocintica de los medicamentos. De igual manera, con los datos obtenidos se observ que los productos farmacuticos empleados para hacer el estudio son muy parecidos en cuanto a su absorcin, pero se necesitaran ms pruebas estadsticas y ms voluntarios para asegurar su bioequivalencia.
BIBLIOGRAFA: *Remington; Farmacia; Editorial panamericana; 20 edicin; Argentina; 2003; pp. 1342. Laboratorio de Biofarmacia 2013-1 *Mendoza; Nicandro Patio; Farmacologa Mdica; Editorial Panamericana; Mxico; 2008; pp. 291, 292. *Cotillo; Pedro Zegarra; Atencin farmacutica. Bases farmacolgicas; Fondo editorial; 1 edicin; Lima Per; 2004. Pp. 57-61. * Laso, Mara del Carmen, (2002) Interpretacin del anlisis de orina Revista de medicina intera Vol.100 No.2 179-183, Argentina. *Fernndez de Cattaneo, Raquel (2007), Marcha toxicolgica de urgencia, para laboratorios de baja complejidad [en lnea], Biblioteca de desarrollo sostenible y salud ambiental, Organizacin Panamericana de la Salud, Washington, D.C, U.S.A. (Consulta: Sep/Octubre 26- 2012) Disponible en: http://www.bvsde.paho.org/sde/ops-sde/bvsde.shtml
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* Instituto Mexicano del Seguro Social (IMSS), Anexo 2 Carta de consentimiento informado (adultos) [En lnea], Consulta: 6/octubre/2012. Disponible en: http://www.imss.gob.mx/profesionales/cis/Documents/normatividad/institucional/cis/2810-003-002_Anexo_2.pdf *Facultad de Medicina, UNAM; CONSENTIMIENTO INFORMADO PARA PARTICIPAR EN UN ESTUDIO DE INVESTIGACIN MDICA [En lnea] Consulta: 6/octubre/2012. Disponible en: http://www.facmed.unam.mx/ci/pdfs/etica_consentimiento.pdf * NORMA Oficial Mexicana NOM-177-SSA1-1998, Que establece las pruebas y procedimientos para demostrar que un medicamento es intercambiable. Requisitos a que deben sujetarse los terceros autorizados que realicen las pruebas. Consulta: 26/octubre/2012. Disponible en: http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/177ssa18.html
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Estudio de Bioequivalencia

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Universidad Nacional Autnoma de Mxico

Guin 2: Biodisponibilidad relativa de dos productos

Estudio de Biodisponibilidad relativa en voluntarios sanos

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Estatura (m) 1.60 1.73 1.71

Del Rey Pineda Snchez Flores Ceja

Masculino Masculino Masculino

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Lpez V. Flores, Salgado Gutirrez Becerril

Masculino Masculino Femenino Masculino Masculino

1.68 1.78 1.54 1.72 1.70

Tabla I.- Diseo del estudio Voluntarios #Sesiones 1 1 2 A Grupo 1 3 4 5 6 B Grupo 2 7 8

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Cantidad acumulada excretada de frmaco

Cantidad de frmaco por excretar

Por tanto: - m = Ke t1/2= (Ln2/Ke)

Ke= 0.502h-1 t1/2= 0.693/0.502h-1= 1.38h

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Grfica 1. Curva patrn. Concentracin salicilatos en orina vs Absorbancia a 540 nm.

9.9 49.7 99.4 198.8 298.2 497

0.025 0.082 0.159 0.261 0.410 0.684

Voluntario 1 Tabla 2. Datos experimentales y resultados del voluntario 1

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Estudio de Biodisponibilidad relativa en voluntarios sanos

NC=No Cuantificado; NP=No proporcionado por el equipo responsable

Mtodo Sigma menos

y = -0.0524x + 5.4957 R = 0.9355

Laboratorio de Biofarmacia 2013-1

Estudio de Biodisponibilidad relativa en voluntarios sanos

y = -0.0646x + 5.6956 R = 0.9431

Estudio de Biodisponibilidad relativa en voluntarios sanos

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Ln (Aex Acum t - Aex Acum)

Estudio de Biodisponibilidad relativa en voluntarios sanos

y = -0.1956x + 6.5177 R = 0.9746

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Estudio de Biodisponibilidad relativa en voluntarios sanos

Laboratorio de Biofarmacia 2013-1

Estudio de Biodisponibilidad relativa en voluntarios sanos

Mtodo Sigma menos y = -0.1452x + 6.3865

Ln (Aex Acum t - Aex Acum)

Laboratorio de Biofarmacia 2013-1

Estudio de Biodisponibilidad relativa en voluntarios sanos

Voluntario 5 Tabla 6. Datos experimentales y resultados del voluntario 5.

NC=No Cuantificado; NP=No proporcionado por el equipo responsable

Ln (Aex Acum t - Aex Acum)

Mtodo Sigma menos

5.0 Tiempo (h)

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Estudio de Biodisponibilidad relativa en voluntarios sanos

Laboratorio de Biofarmacia 2013-1

Estudio de Biodisponibilidad relativa en voluntarios sanos

Voluntario 6 Tabla 7. Datos experimentales y resultados del voluntario 6.

NC=No Cuantificado; NP=No proporcionado por el equipo responsable