Resveratrol, ejemplo claro de eficiencia de las tecnologas de DNA recombinante.

Hoy, las ciencias siguen revolucionando cada concepto para llevarlo a un nivel superior, y el avance a la par de nuevas tecnologas evidencia el esfuerzo de una sociedad que busca ser ms productiva. La biotecnologa se presenta como una alternativa de gran importancia en muchos campos de produccin, usando organismos vivos para incrementar la cantidad de mercancas elaboradas y la eficiencia de los procesos, por ejemplo, en la industria se da una mayor elaboracin de compuestos qumicos y produccin de alimentos; en medicina farmacutica la obtencin de vitaminas, insulinas, antibiticos, entre otros. Lo que se traduce muchas veces en preparados de mejor calidad o productos nuevos. Son ejemplos claros de estos procesos la produccin de cerveza, vino, queso y yogurt, los cuales implican el uso de bacterias o levaduras con el fin de convertir una materia prima como la leche o jugo de uvas, en un producto de fermentacin ms apetecible como el yogurt o el vino. Estos tambin son un claro ejemplo de alimentos que han acompaado al hombre desde hace muchos siglos atrs y que hoy superan los estndares de produccin trescientas y cuatrocientas veces ms que las que se venan obteniendo desde hace medio siglo hacia atrs. Y son procedimientos que van desde las tcnicas de la biotecnologa "tradicional", largamente establecidas y ampliamente conocidas y utilizadas (fermentacin de alimentos, control biolgico), hasta la biotecnologa moderna, basada en la utilizacin de las nuevas tcnicas del DNA recombinante (llamadas de ingeniera gentica), claves que han permitido incrementar los niveles de produccin de forma revolucionaria. Cuando en 1928 Frederick Griffith, en el conocido Experimento Griffith, not que bacterias responsables de la neumona (Streptococcus pneumoniae) tomaban informacin gentica de otras (factor transformante), de tal manera que modificaban su fenotipo (transformacin) (1), Y al transcurrir el tiempo se dio el descubrimiento del DNA como portador de la informacin gentica de los individuos. La tecnologa del ADN recombinante ha facilitado el

aprovechamiento de la posibilidad natural de utilizar fragmentos de esa informacin que pueda introducirse a otros organ ismos con tal de manipularlos y usarlos de acuerdo a las necesidades que la industria tenga.

En los ltimos aos, un compuesto que aun continua en estudios pero que es bastante producido por los beneficios que supone a la salud humana es el Resveratrol (C14H12O3; 3,5,4 trihidroxi-trans-estilbeno). Este compuesto

polifenolico es producido por algunas plantas en respuesta al estrs ambiental e infecciones. Y tambin es un componente de las plantas vinferas, por el cual se le atribuye el efecto cardioprotector al vino tinto. Adems, el Resveratrol es estudiado por su relacin con la prevencin o retraso de cncer e incluso la erradicacin de la gastritis y ulceras ocasionadas por Helicobacter pylori. Figurando como un elixir que probablemente mantenga sano el corazn, evite o retrase el cncer, controle la diabetes tipo 2, erradique el efecto de un agente causal de gastritis, entre otros efectos, significa un producto muy apetecido y que industrialmente se ha desarrollado a partir del uso de cepas recombinadas de Escherichia coli y Saccharomyces cerevisiae. Esto tambin ha fomentado estudios que revelan las diferencias netas de produccin del Resveratrol entre cepas nativas y cepas recombinadas.

El instituto de Bio-ciencias moleculares de la universidad Goethe de Frankfurt, Alemania, defini un importante incremento en la produccin de Resveratrol por cepas recombinadas usadas industrialmente frente al empleo de cepas nativas en un medio enriquecido, Tobias Sydor,2010. Para tener una idea ms clara, lo primero a tener en cuenta es que el Resveratrol es un polialcohol que se sintetiza por la ruta fenilpropanoide, contando con un precursor que es el pcumarato el cual es convertido en p-cumaroil-coenzima A (CoA) por la enzima 4-cumaroil-CoA ligasa (4CL1). En los siguientes pasos la Estilbeno sintetasa (STS), adhiere tres unidades de acetato derivadas del malonil-CoA a la molcula, resultando el Resveratrol. El estudio de la produccin se hizo en E. coli y S. cerevisiae debido a que ambas poseen las enzimas STS y 4CL1 necesarias para metabolizar el sustrato p-cumarato.

El gen que codifica para las protenas que componen la enzima 4CL1 fue tomado de Arabidopsis thaliana y fue amplificada por PCR desde el ADN cromosmico (ADNc) de este tipo de uva, y el gen de STS fue tomado del ADNc de Vitis vinfera. Luego, estos fragmentos fueron clonados en plasmidos de 2-bases con genes marcadores. Los plsmidos fueron introducidos en S. cerevisiae por transformacin con acetato de litio. Y se aislaron las clulas transformadas que fueron sembradas en agar SD enriquecidos con leucina y uracilo. Estas cepas fueron suplementadas con 5mM de p-cumarato, y cada 24 horas se tomaba una colonia, se mezclaba con 1 ml de acetona, y se

centrifugaba a 13.000 rpm, el sobrenadante fue analizado por cromatografa liquida de alta presin (HPLC). Se realizaron los mismos procedimientos para la cepa recombinada y para la cepa nativa, en. Los resultados en las medidas fueron muy superiores. La cepa nativa, que fue tratada en agar enriquecido produjo 262 mg/L, mientras que la cepa recombinada produjo 391 mg/L.

Es evidente que el incremento en la produccin resulto de la manipulacin gentica que sufri el microorganismo, y a su vez demuestra lo importante que resulta para el mercado invertir en las tecnologas de ADN recombinante y as satisfacer los deseos de productividad que la sociedad requiera.

Bibliografa

(1)Curtis H., invitacin a la biologa, Ed. Medica Panamericana, 2006, 6ta edicin. 768 p. c.8. pg. 133.

T. Sydor, S. Schaffer, E. Boles. Considerable increase in Resveratrol production by recombinantIndustrial Yeast Strains with Use of Rich Medium. APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, May 2010, p. 3361 3363.