UNIDAD I

AGUA Y MINERALES
El agua constituye el principal producto final del metabolismo oxidativo
de los alimentos, sirve como reactante y como producto en muchas
reacciones metablicas.
La homeostasia, es el mantenimiento de la composicin del ambiente
interno que es esencial para la salud, incluye considerar la distribucin del
agua en el cuerpo as como el mantenimiento de un ! y concentraciones
de electrolitos adecuados"
#$ES%RU&%URA M'LE&ULAR DEL AGUA
El agua es una molcula tetradrica ligeramente asimtrica.
El constituye el ()* del organismo y es el sol+ente uni+ersal
Su estructura tridimencional es un tetrahedro irregular con el oxigeno
en el centro.
La molcula de agua est formada por dos tomos de H unidos a un
tomo de O por medio de dos enlaces co+alentes. La disposicin
tetradrica de los orbitales sp3 del oxgeno determina un ,ngulo entre los
enlaces H-O-H Aproximadamente de #)-./01 adems el oxgeno es ms
electronegativo que el hidrgeno y atrae con ms fuerza a los electrones de
cada enlace.
El resultado es que la molcula de agua aunque tiene una carga total neutra
(igual nmero de protones que de electrones ), presenta una distribucin
asim2trica de sus electrones, lo que la convierte en una molcula polar,
alrededor del oxgeno se concentra una densidad de carga negativa ,
mientras que los ncleos de hidrgeno quedan desnudos, desprovistos
parcialmente de sus electrones y manifiestan, por tanto, una densidad de
carga positiva.
As se establecen interacciones dipolo$dipolo entre las propias
molculas de agua, formndose enlaces o puentes de hidrgeno, la carga
parcial negativa del oxgeno de una molcula ejerce atraccin electrosttica
1
sobre las cargas parciales positivas de los tomos de hidrgeno de otras
molculas adyacentes.

PUENTES DE HIDROGENO
Es una interaccin electrost,tica entre un hidrogeno de un dipolo
h3drico 4 el par de electrones no compartidos de otro dipolo h3drico"
El agua la podemos encontrar en tres estados:
Slido L35uido Gas
Forma y volumen propio.
ncompresible.
Difusin extremadamente
lenta de las partculas.
Adopta la forma del
recipiente que los
contiene.
Volumen propio
incompresible.
Difusin lenta de las
partculas
Sin forma ni
volumen propio.
Compresibles.
Se expanden.
PROPIEDADES DEL AGUA
El papel primordial del agua en el metabolismo de los seres vivos se debe
sus propiedades fsicas y qumicas, derivadas de la estructura molecular.
Propiedades fsicoqumicas
1. Accin disolvente
2. Elevada fuerza de cohesin
3. Elevada fuerza de adhesin
4. Gran calor especfico
5. Elevado calor de vaporizacin
6. Liquido inodoro, incoloro e insaboro.
7. Densidad mxima 4cc a 100C se produce su ebullicin.
8. Se descompone por encima de los 1000C
2
9. Se solidifica a 0C en forma de hielo.
6$&'N%ENID' Y DIS%RI7U&I'N DEL AGUA &'R'RAL
Nuestro cuerpo est constituido por mltiples sustancias (agua, grasa,
hueso, msculo, etc.) pero, de todas ellas, el agua es el componente
mayoritario. El agua constituye ms de la mitad 8/)$(/*9 del peso del
cuerpo y en su mayor parte (80%) se encuentra en los te:idos
metablicamente acti+os" Por tanto, su cantidad depende de la
composicin corporal y, en consecuencia, de la edad y del sexo0 disminu4e
con la edad 4 es menor en las mu:eres"
CONTENDO DE AGUA CORPORAL (% del peso corporal total)
Recien nacido 80%
Hombre normal 60%
Mujer normal 55%
Hombre obeso 55%
Mujer obesa 50%
Ancianos 50%
Compartimientos de Agua/ Distribucin de Lquidos en el Cuerpo
ntracelular:
El agua intracelular es aquella que se encuentra dentro de la clula.
Extracelular:
Es el agua que se encuentra fuera de la membrana celular.
ntracelular Hombre 45%
Mujer 40%
Extracelular Hombre 15%
Mujer 15%
ntravascular Hombre 5%
Mujer 5%
ntersticial Hombre 10%
Mujer 10%
3
3-EQUILIBRIO HDRICO
El e5uilibrio h3drico es la relacin entra el aporte 4 la eliminacin
corporal del agua ba:o condiciones normales"
REGULACN DEL EQULBRO HDRCO (AGUA)
Hay un equilibrio hdrico en el organismo, si se conserva un balance
entre el ingreso y la excrecin, siempre que haya libre aporte de agua. Dicho
balance lo controla las sensaciones de sed 4 los ri;ones. Por ejemplo,
cuando aumentan las prdidas de agua por sudoracin excesiva o diarreas,
la saliva de la boca absorbe agua, dejando una sensacin de sequedad en la
boca, lo cual estimula la ingestin de agua. Adems, los ri;ones conser+an
el agua secretando menos orina; este mecanismo renal es regulado por la
hormona +asopresina o antidiur2tica 8AD!9 que estimula la resorcin de
agua en los tbulos renales.
RELACN ENTRE EL APORTE Y LA ELMNACON DEL AGUA.
Las fuentes de ingreso del agua al cuerpo y las vas de su eliminacin
se discutir a continuacin.
ngreso - Fuentes de Agua para el Cuerpo
El agua en lquidos: como la leche, las sopas y las bebidas.
El agua misma: Esta debera compensar cualquier diferencia entre la
absorcin y la eliminacin.
El agua en forma de alimentos slidos: Hortalizas y fruta, por ejemplo,
tienen un alto contenido de agua.
El agua producida durante el metabolismo: Al quemar u oxidar en las
clulas los hidratos de carbono, grasas y protenas.
Excresin - Vas para Perder Agua Normalmente
Por la piel0 En forma de transpiracin (sudoracin) sensible (que se
puede ver el sudor) y prdida insensible (o invisible).
A travs de los pulmones: en forma de vapor de agua en el aire
expirado.
Por medio de los ri;ones: en forma de orina.
Por los intestinos: en las heces fecales.
4
EFECTOS DE LA DEFCENCA Y EXCESO DE AGUA EN EL CUERPO
De<iciencia
La deficiencia de agua puede ser causado por muchas razones, tales como
vomitar en exceso, diarrea o sudoracin excesiva. sta ltima causa es la
ms comun y ocurre frecuentemente al llevar a cabo actividades fsicas
vigorosas cuando la temperatura ambiental esta alta. El efecto principal es la
deshidratacin (prdida de los lquidos del cuerpo). Alrededor de un cuarto
de lquido se pierde por cada dos libras de peso que se rebaje.
E=ceso
Si de alguna forma el agua que se ingiera en el cuerpo no se puede eliminar
(como en el caso de algunos individuos que padecen de hipertensin), los
siguientes efectos pueden ocurrir:
Aumenta el +olumen de sangre en el cuerpo"
5
Aumenta la presin arterial"
Se e=perimentan dolores de cabe>a.
Aparecen reas en el cuerpo con edema (acumulacin de lquidos en
los tejidos corporales).
ELE&%R'LI%'S"
Los electrolitos son la <orma inica de un metal 5ue se encuentra en
solucin acuosa, y son sustancias 5ue tienen la capacidad de conducir
la corriente el2ctrica" En los organismos vivos se encuentran los electrolitos
en un balance llamado electroltico. Los electrolitos tienen un gran uso en
medicina. Es una solucin o sustancia disuelta que consta de varios
qumicos que pueden llevar cargas elctricas. Los electrolitos estn
presentes en la sangre como ,cidos1 bases 4 sales 8como sodio1 calcio1
potasio1 cloro1 magnesio 4 bicarbonato9 y se pueden medir mediante
estudios de laboratorio en suero.
-$ ?AL'RES N'RMALES DE ELE&%R'LI%'S EN L'S LI@UID'S
&'R'RALES
'smosis0 Fenmeno natural en el cual el agua pasa a tra+2s de una
membrana semi$permeable, desde una solucin menos concentrada a una
6
solucin m,s concentrada"
resin 'smtica0 presin que se desarrolla en una solucin salina,
dependiente de la diferencia de concentracin de iones presentes a ambos
lados de la membrana, es el <enmeno resultante de la di<erencia de la
concentracin de sales a tra+2s de una membrana semi$permeable. Esta
presin osmtica debe ser compensada antes de poder
producir permeado en el sistema.
EFECTO DE LAS SOLUCONES SOTONCAS, HPERTONCAS E
HPOTONCAS.
Homeostasis y el equilibrio hdrico
Existe equilibrio hdrico o equilibrio respecto al agua, cuando las
soluciones citoplasmticas y los fluidos extracelulares que rodean las clulas
son soluciones isotnicas1 es decir, tienen la misma concentracin.El
desequilibrio hdrico provoca sed.
Es importante el equilibrio hdrico para el mantenimiento de la presin
arterial normal, para el funcionamiento del corazn y el equilibrio total del
organismo.
SOLUCONES SOTONCAS.
S'LU&IAN IS'%'NI&A: Tiene concentracin similar a la del plasma.
En esta la clula no sufre modificaciones. En estas soluciones las molculas
de agua se mueven hacia adentro y hacia afuera de la clula por la igualdad
de concentracin en ambos lados de la membrana celular"
7
SOLUCONES HPERTONCAS.
S'LU&IAN !IER%'NI&A: La clula se contrae deshidrata por que
su entorno es mayor en cuanto a sales, por lo que la clula tratara de
mantener el equilibrio; sacando agua para poder disminuir la concentracin
extracelular. El agua se sale de la clula por smosis y la c2lula se encoge"
SOLUCN HPOTONCA.
S'LI&I'N !I'%'NI&A0 De:a pasar agua para disminuir la
concentracin interna de la clula. La c2lula se hincha expande por que el
agua entra en la clula por smosis.
/$ ANBLISIS DEL E@UILI7RI' !IDR'ELE&%R'LI%I&' EN LA
DES!IDRA%A&I'N IS'%'NI&A1 !IER%'NI&A E !IS'%'NI&A
DES!IDRA%A&I'N0 Es la perdida e=cesi+a de agua en el organismo,
acarrea eventualmente deficiencia de sal.
El peligro de la deshidratacin reside en la eventual formacin de
acidosis 4 la acumulacin de productos de desecho en el organismo"
Las prdidas contracciones de volumen (mal llamadas
deshidratacin) pueden ser de tres tipos:
8
a) &ontraccin Isotnica0 Ocurre cuando se pierden electrolitos 4 agua
e=tracelular en proporciones iguales, como por el tracto gastrointestinal,
en donde adems si la prdida es de liquido cido por el estmago, esta
prdida puede conducir a alcalosis metablica; la prdida de bilis, liquido
pancretico y liquido por diarrea, a una alcalosis metablica.
b9 &ontraccin !ipertnica0 Ocurre cuando existen p2rdida de agua
superiores a la de Na1 como en la insolacin, adipsia prolongada, diabetes,
sudoracin excesiva y en la diuresis osmtica; por la tanto, la prdida externa
de sodio y agua disminuye el volumen extracelular y en compensacin, se
redistribuye de intra a extracelular.
c9 &ontraccin !ipotnica0 Se produce cuando la p2rdida de Na es
superior a la de agua1 como en la insuficiencia renal crnica o en la
insuficiencia corticosuprarrenal, y el tratamiento consistir en reponer el
sodio perdido en solucin salina al 0.9%, solucin de Ringer o si adems
existe acidosis con Hartman o en caso de desnutricin asociada, Ringer
glucosa como aporte calrico.
($ RIN&IALES MA&R'MINERALES
Los minerales1 junto con el agua, son los componentes inorg,nicos
de la alimentacin, es decir, aquellos que se encuentran en la naturaleza
sin <ormar parte de los seres +i+os" Son necesarios para la elaboracin de
los tejidos y para sintetizar las hormonas. Colaboran en la mayor parte de las
reacciones qumicas en las que intervienen las enzimas. ntervienen en la
transmisin del impulso nervioso a los msculos y actan como reguladores
del balance hdrico del organismo, entre otras muchas funciones. Se puede
decir que los minerales intervienen en todas las fases del funcionamiento del
cuerpo humano. Los minerales se pueden dividir en tres grupos:
macrominerales (se miden en gramos y son: sodio, potasio, calcio, fsforo,
magnesio y cloro), microeminerales (se miden en miligramos y son: cromo,
cobalto, cobre, yodo, hierro, magnesio, molibdeno, selenio y zinc).
S'DI'"$ Es un mineral que se encuentra en el organismo en forma
inica, en su mayor parte en el lquido extracelular. Tambin hay una
pequea parte en el interior de la clula y el resto unido a los componentes
inorgnicos del hueso. Junto con el potasio 4 el cloro, el sodio es uno de
los electrolitos mas abundantes en el organismo. Regula el balance
hdrico del organismo e interviene en la transmisin del impulso nervioso a
los msculos (bomba de sodio) Se encuentra principalmente en la sal1 pero
esta presente en muchos alimentos como las aceitunas1 las conser+as1 los
embutidos1 los 5uesos1 el :amn1 los pescados1 etc. El consumo excesivo
de sal se ha relacionado con el desarrollo de la hipertensin. Su dficit
produce calambres, normalmente relacionados con la prdida de sodio por el
sudor, por diarrea, por vmitos o por tomar diurticos. La &antidad Diaria
Recomendada (C.D.R.) es de )1/ gramos para un adulto en caso de
9
actividad fsica moderada. Si la persona trabaja en ambientes muy calurosos
y suda mucho debe incrementar esta cantidad recomendada.
'%ASI'"$ El potasio es un mineral que se encuentra en el
organismo en forma inica y, junto con el sodio 4 el cloro, son los
electrolitos mas abundantes en el organismo. El 97% del potasio se
encuentra intracelularmente y el 3% restante en forma extracelular. Acta
como regulador del balance hdrico del organismo y participa en la
contraccin del mCsculo cardiaco. Esta relacionado con el equilibrio cido
base. Aproximadamente el 90% del potasio ingerido es absorbido en el
intestino delgado y se elimina a travs de la orina. Se encuentra
principalmente en la <ruta1 en la +erdura <resca 4 en las patatas y, en
menores cantidades, en las legumbres 4 en los <rutos secos. Su dficit se
puede producir como consecuencia de efectuar dietas muy estrictas en
caloras, de vmitos, de diarreas, de una transpiracin excesiva, del uso
indiscriminado de diurticos y como consecuencia de quemaduras. Se
manifiesta con debilidad muscular, nauseas, vmitos e irritabilidad. Por el
contrario, la poca ingestin de lquidos o un fallo renal, puede producir
excesos de potasio en la sangre. La &antidad Diaria Recomendada (C.D.R.)
es de /)) miligramos" El consumo excesivo de caf, t, alcohol y azcar
aumenta su prdida a travs de la orina.
&AL&I'"$ El calcio es el mineral mas abundante del cuerpo
humano1 representando del #1/* al 6* del peso corporal y el cuarto
componente del cuerpo despus del agua, de las protenas y de las grasas.
Se encuentra en los huesos1 en los dientes1 en la sangre1 en los l35uidos
intersticiales 4 en las c2lulas" El calcio de los huesos y de los dientes
desempea una funcin plstica y de sost2n, y el calcio plasmtico una
funcin reguladora: participa en la coagulacin1 en la permeabilidad de las
membranas, como regulador ner+ioso 4 neuromuscular1 favoreciendo la
absorcin y la secrecin intestinal y la liberacin de hormonas. El calcio esta
vinculado tambin al fsforo, ya que la falta o exceso de uno de ellos puede
afectar a la absorcin del otro. Las fuentes de calcio mas importantes son la
leche 4 los productos l,cteos, pero tambin son ricos en este metal la
mayora de los +egetales 4 las aguas duras" La falta de calcio en la dieta
provoca retraso del crecimiento y deformaciones seas. Tambin se
manifiesta con una osteoporosis que produce debilidad de los huesos y
fracturas frecuentes. La Cantidad Diaria Recomendada (C.D.R.) es de unos
D)) miligramos para el adulto 4 de unos #/)) miligramos en el
embara>o, en la lactancia 4 en la +e:e>"
EASE'R'"$ Es el elemento qumico que interviene en la
minerali>acin de los huesos 4 de los dientes. nterviene en la
transmisin de los impulsos ner+iosos, en la contraccin muscular y en el
metabolismo de los a>ucares1 las grasas 4 las prote3nas. Es necesario
tambin para la formacin de los huesos y de los dientes, as como del tejido
muscular. La mayor parte del fsforo del cuerpo se encuentra unida al
10
calcio. Se encuentra en mayor cantidad en el 5ueso1 en la 4ema de hue+o1
en los <rutos secos1 en las legumbres 4 en algunos pescados. Esta
presente, en los organismos de los seres vivos, en forma de sales minerales
llamadas fosfatos. La Cantidad Diaria Recomendada (C.D.R.) es similar a la
del calcio, es decir, unos D)) miligramos para el adulto 4 unos #/))
miligramos en el embara>o1 en la lactancia 4 en la +e:e>"
CLORO.- El cloro es un mineral que se encuentra en el organismo en
forma inica y, junto con el sodio 4 el potasio1 son los electrolitos mas
abundantes en el organismo" Favorece el e5uilibrio ,cido$base y ayuda al
hgado en su labor de desinto=icacin. nterviene en la regulacin del
balance h3drico del organismo. Cualquier dieta mixta cubre las necesidades
de cloro ya que se encuentra en muchos alimentos como en la sal comCn1
en las algas1 en las aceitunas 4 en el agua 5ue bebemos entre otros. La
Cantidad Diaria Recomendada (C.D.R.) no esta determinada todava.
MAGNESO.- El magnesio es el 5uinto mineral por su abundancia
en el organismo y es imprescindible para la correcta asimilacin del calcio
4 de la +itamina &" Es necesario para acti+ar numerosas en>imas 4 las
+itaminas del grupo 7. nterviene en la s3ntesis de las prote3nas, en la
e=citabilidad de los mCsculos 4 en la liberacin de energ3a. Equilibra el
sistema nervioso central 8accin sedante9 Aumenta la secrecin de la bilis
e interviene en la secrecin 4 en la accin de la insulina" Se encuentra en
el cacao1 en la so:a1 en los <rutos secos1 en la a+ena1 en el ma3> 4 en
algunas +erduras. La carencia de magnesio es muy comn, sobre todo en
ancianos y en las mujeres durante el periodo menstrual. Tambin
contribuyen a ello la ciruga, los diurticos, el alcohol, las enfermedades
renales, etc. La Cantidad Diaria Recomendada (&"D"R"9 es de F))$-))
miligramos"
G$ RIN&IALES MI&R'MINERALES
CROMO.- Mineral que aparece en el organismo en cantidades muy
pequeas. Participa en el transporte de prote3nas e interviene en el
metabolismo del a>Ccar1 me:orando la diabetes. Se encuentra en las
carnes1 en los aceites +egetales1 en la le+adura de cer+e>a1 en la
cebolla1 en la lechuga1 en las patatas1 en los berros 4 en los cereales
integrales. Su dficit se produce, generalmente, por desnutricin o estrs y
produce una menor tolerancia a la glucosa, neuropata perifrica, balance de
hidrgeno negativo y adelgazamiento. Es muy raro que aparezcan
intoxicaciones por cromo, ya que su presencia en los alimentos es muy
reducida. La Cantidad Diaria Recomendada (&"D"R"9 es de 6)) a -))
microgramos"
COBALTO.- El cobalto es un mineral que contribuye a la formacin de
los glbulos ro:os ya que constituye el nCcleo met,lico de la +itamina
7#6 necesaria en la eritropoyesis. Cualquier dieta mixta cubre las
11
necesidades de cobalto, ya que se encuentra en las carnes1 en los
pescados 1 en los productos l,cteos1 en las lente:as1 en las cebollas1 en
los higos1 etc" Su dficit se relaciona con la carencia de vitamina B12 y
produce anemia, problemas neurolgicos y falta de crecimiento. La Cantidad
Diaria Recomendada (C.D.R.) no est todava determinada.
COBRE.- Es un mineral presente en el organismo en el plasma, unido
a la globulina Ceruloplasmina. El cobre es necesario para con+ertir el hierro
almacenado en el organismo en hemoglobina y para asimilar correctamente
el hierro de los alimentos. Participa en la asimilacin de la +itamina & y
forma parte de las oxigenasas, enzimas encargadas de transformar el
oxgeno molecular en agua y perxido de hidrgeno. Es fundamental para el
desarrollo de huesos1 tendones1 te:ido conecti+o 4 sistema +ascular. Se
encuentra en el cacao, en los cereales integrales1 en las legumbres1 en
los <rutos secos1 en las carnes1 en las <rutas1 en los +egetales 4 en la
pimienta. El dficit de cobre es poco frecuente y puede producir anemia,
desmineralizacin sea, anorexia y facilidad para las infecciones, entre otras.
En nios alimentados exclusivamente con leche se pueden dar casos de
anemia que responden al tratamiento con cobre. Hay una enfermedad
gentica, la enfermedad de Wilson, que se caracteriza por un aumento de los
depsitos de cobre en el hgado y en el cerebro. En intoxicaciones aparecen
sntomas hemolticos y lesiones cerebrales y hepticas. La Cantidad Diaria
Recomendada (&"D"R"9 es de #1F$#1/ miligramos"
Y'D'"$ Es un mineral imprescindible para la produccin de
hormonas tiroideas. Tambin interviene en el crecimiento mental y fsico,
en el funcionamiento de los tejidos nerviosos y musculares y en el
metabolismo de otros nutrientes. Esta presente, en mayor cantidad, en los
pescados 4 en los mariscos1 en la sal marina1 en las algas 4 en los
+egetales culti+ados en tierras 5ue sean ricas en 4odo. El dficit de yodo
da lugar al bocio, en el que la glndula tiroides aumenta de tamao. Una
forma de prevenir la posible carencia de yodo es aadrselo a la sal de las
comidas (en el comercio se vende como sal yodada) La Cantidad Diaria
Recomendada (&"D"R"9 es de #6) a #/) microgramos"
!IERR'"$ El hierro es un componente inorgnico de la alimentacin
que desempea un papel importante en el organismo. Este mineral es
necesario para la produccin de hemoglobina 4 de glbulos ro:os y forma
parte de algunas enzimas que intervienen en el metabolismo celular. Los
alimentos mas ricos en hierro son: la carne1 el h3gado1 los me:illones1 los
hue+os1 las legumbres1 los <rutos secos 4 los cereales. Para mejorar la
absorcin del hierro, es bueno consumir al tiempo alimentos que contengan
vitamina C. Por el contrario, hay otros que son inhibidores de su absorcin,
como lo son el caf, el te, la clara de huevo y el salvado de trigo. Su dficit
provoca la anemia ferropnica, una mala sntesis de las protenas,
deficiencia inmunitaria, menor respuesta al estrs y alteraciones de la
conducta. La Cantidad Diaria Recomendada (&"D"R"9 es de #) a #/
miligramos1 aunque estas cantidades dependen de la edad y de las
12
necesidades de cada etapa de la vida, siendo necesario un mayor aporte
durante el embarazo y la lactancia, pudiendo llegar hasta los 40 mg./da.
MANGANES'"$ El manganeso es un mineral que se encuentra en el
organismo participando en la asimilacin de las +itaminas &1 7# 4 !" Esta
relacionado con la <ormacin de los huesos, con el desarrollo de los
te:idos y con la coagulacin de la sangre. Tambin activa los enzimas que
intervienen en la sntesis de las grasas. Se encuentra en el pescado1 en los
cereales integrales1 en las legumbres1 en la 4ema de hue+o 4 en las
+erduras de ho:as +erdes" Su dficit puede provocar crecimiento lento de
las uas y del cabello, mala formacin de los huesos y disminucin de la
tolerancia a la glucosa. La Cantidad Diaria Recomendada (&"D"R"9 es de 6$H
miligramos"
MOLBDENO.- Es un mineral que ayuda a pre+enir la anemia y la
caries" El molibdeno es un componente esencial de una coenzima
denominada pterina, necesaria para la acti+idad de otras en>imas muy
importantes para el organismo, como son: sulfito oxidasa, aldehido oxidasa y
xantina oxidasa. Se encuentra en el germen de trigo1 en las legumbres1 en
los cereales integrales 4 en los +egetales de ho:a +erde oscura. La
Cantidad Diaria Recomendada (&"D"R"9 es de 6/) microgramos"
SELENO.- El selenio es un mineral presente en el organismo en
pequesimas cantidades. Tiene propiedades desinto=icantes. Es un
potente antioxidante (evita la oxidacin de los cidos grasos poliinsaturados
en las membranas celulares) por lo que ayuda a pre+enir el en+e:ecimiento
de los te:idos. Por el mismo motivo, se le asocia a la prevencin de ciertos
tipos de cncer. rotege de en<ermedades cardio+asculares 4 estimula el
sistema inmunolgico" Se encuentra en el germen 4 en el sal+ado de
trigo1 en las cebollas1 en el a:o1 en el tomate1 en el br2col 4 en la
le+adura de cer+e>a" La Cantidad Diaria Recomendada (&"D"R"9 es de //$
G) microgramos"
ZNC.- El zinc es un mineral presente en el organismo formando parte
del hueso 4 de numerosas en>imas, entre ellas, la anhidarasa carbnica1
la carbo=ipeptidasa 4 las deshidrogenasas" nterviene en procesos
metablicos como la produccin de lin<ocitos1 la s3ntesis de prote3nas 4
la <ormacin de insulina. Se encuentra en los crust,ceos1 en la le+adura
de cer+e>a1 en el germen de trigo1 en las carnes1 en los hue+os1 en los
5uesos 4 en las legumbres secas" Su dficit produce un retraso del
crecimiento y un retraso del desarrollo de los rganos genitales. Tambin
puede producir anemia, retraso en la cicatrizacin de las heridas y prdida
del apetito. La Cantidad Diaria Recomendada (&"D"R"9 es de #6$#/
miligramos, aumentando en mujeres embarazadas y en lactantes. Los
niveles de zinc en el organismo se suelen ver disminuidos por el consumo de
tabaco, de caf y de alcohol en exceso.
13
14
15
D$ DIS'&IA&IAN DEL AGUA" &'N&E%' DE !
El agua tiene una ligera capacidad de ioni>arse. Toda vez que el agua
puede actuar como ,cido o como base, su ionizacin puede representarse
como una transferencia de protones para formar un ion hidronio (H3O
+
) y u
in hidroxilo (OH
-
) :
H2O + H2O H3O
+
+ OH
-
En tanto que los iones se recombinan constantemente para formar molculas
de agua y viceversa, no es posible definir el momento en que un hidrgeno o
u oxgeno individual presentan como iones o como molculas de agua.. Sin
embargo no es necesario tomar en consideracin los iones o las molculas
individuales. Dado que un gramo de agua tiene 3.46 x 10
22
molculas, es
posible describir estadsticamente la ionizacin del agua.
La probabilidad de que un tomo de hidrgeno, exista en el agua pura como
ion hidrgeno es de aproximadamente 1.8 x 10
-9
; sin embargo aunque esta
cantidad sea muy pequea, la caracterstica del agua de presentar estos
iones es muy importante para las propiedades del agua.
La <rmula para la disociacin del agua0

I!J I'!J
K L
I!6'J
Los trminos entre corchetes representan las concentraciones molares de los
iones hidrgeno, iones hidroxilo y las molculas sin disociar del agua,
mientras que K es el termino correspondiente a la constante de disociacin.
Como 1 mol de agua pesa 18gr, un litro de agua tiene 1000 / 18 = 55.56 mol.
La concentracin molar de iones H ( o de iones OH) en el agua se calcula de
multiplicar la probabilidad por la concentracin molar del agua, y el resultado
es 1 x 10
-7
mol/l, y as se calcula la K del agua:
[10
-7
] [10
-7
]
K = = 1.8 x 10
-16
55.56
Como la disociacin no afecta de manera significativa la gran concentracin
de agua molecular, es conveniente considerarla bsicamente como
constante.. Esta constante puede incorporarse a la K, para obtener una
nueva constante denominada Kw o el producto inico del agua:
Kw = [H] [OH] = 1 x 10
-14
El trmino p! fue introducido por Sorensen, quin lo defini como el
logaritmo negati+o de la concentracin del in hidrgeno"
p! L $ log I!J
16
La escala de pH es el nmero que determina la concentracin de iones
hidrgeno en una solucin, siendo ste el nmero del logaritmo decimal del
reciproco de la concentracin de iones hidrgeno. La escala va de 0 a 14.
Siendo el pH de las llamadas soluciones ,cidas de #1 61 F1 - 1/ 1( y el pH de
las soluciones alcalinas de D1 H1 #)1 ##1 #61 #F1 #-1 mientras una solucin
neutra +ale G. Mientras m,s alto es el valor del pH, la solucin es ms
alcalina y mientras menor es el pH ser una solucin m,s ,cida"
H$ &'M'R%AMIEN%' DE B&ID'S Y 7ASES DM7ILES1 E&UA&IAN DE
!ENDERS'N$!ASSEL7A&!1 &'M'R%AMIEN%' DE L'S
AM'R%IGUAD'RES DE !
Las definiciones ms generales de cidos y bases son las siguientes:
ara LeNis, un ,cido es un aceptor de pares electrnicos potencial;
mientras que una base es una sustancia 5ue puede actuar como dadora
de pares electrnicos"
Tambin est el concepto de 7ronsted 4 LoNr4, el cual dice que un ,cido
es una sustancia dador de protones y una base es una sustancia aceptor
de protones"
Una reaccin cido-bsica comprende siempre un par cido-bsico
conjugado, constituido por un dador de protones y un aceptor. Cada base
conjugada tiene una afinidad caracterstica para su protn; los que tienen
una a<inidad ele+ada por el protn son ,cidos d2biles y slo se disocian
17
Escala de pH
pH
10
20
30
40
50
60
70
74
80
90
!H
"
# e$ E%&l
01
001
0001
00001
000001
0000001
00000001
0000000040
0000000010
0000000001
ligeramente; los que muestran una a<inidad pe5ue;a son ,cidos <uertes 4
pierden iones ! con <acilidad"
La tendencia de cualquier cido a disociarse viene de su constante de
disociacin.

[H
+
] [A
-
]
K =
[HA]
La interrelacin puede establecerse de modo convencional con la ecuacin
he Henderson-Hasselbach:
pH = pK + log [A
-
] / [HA]
Donde:
[A
-
] = forma base del amortiguador (meq/L)
[HA] = forma cida del amortiguador (meq/L)
El pK de un grupo cido corresponde al pH al cual las variantes protonada y
no protonada se presentan con iguales concentraciones.
La ecuacin de Henderson-Hasselbach como ya se dijo describe el
comportamiento de cidos dbiles y tambin de amortiguadores
18
Amortiguacin
Principios de amortiguacin
-Amortiguador es una me>cla de un ,cido d2bil con su base con:ugada
8o +ice+ersa9"
-Una solucin amortiguada resiste cambios de p! dr,sticos"
-Los lquidos del cuerpo contienen gran variedad de amortiguadores que
representan una primera defensa importante contra los cambios de pH.
El amortiguamiento produce la liberacin 4 captacin de electrones"
Los mecanismos homeostticos que conservan el pH celular incluyen
amortiguadores fisiolgicos.
Las soluciones de cidos y bases dbiles y sus bases conjugadas
amortiguan con mayor eficiencia en el intervalo de pH equivalente a la pK
+
- 2
unidades de pH.
#)$ ! DE L'S LO@UID'S IN%RA Y EP%RA&ELULARES
PH DE ALGUNOS LQUDOS CORPORALES
Jugo gstrico 1.2-3
Cl. Prosttica 4
Cl. Muscular 6.1
Saliva 6.4-6.9
Hepatocito 6.9
Sangre 7.4
Lquido intersticial 7.4
Jugo pancretico 7.8-8
Osteoblastos 8
19
##$RIN&IALES SIS%EMAS AM'R%IGUAD'RES DEL ! EN L'S
LO@UID'S &'R'RALES
Los principales sistemas amortiguadores del organismo son !'F $
!F'-1 hemoglobina Q hemoglobinato1 rote3nas$ proteinatos, pero los
m,s abundantes son !&'F$ !6&'F.. Todos aceptan y liberan protones
cuando hay cambios drsticos en el pH de nuestro cuerpo por ejemplo:
H
+
+ HCO3 H2CO3 CO2 + H2O
Amortiguadores del LC
Los fosfatos orgnicos del LC incluyen ATP, ADP, AMP, glucosa-1-fosfato y
2,3-difosfoglicerato (pK = 6.0 a 7.5).
Las protenas intracelulares sirven como amortiguadores por su abundante
contenido de grupos COOH/COO
-
o NH
3
/NH
2
.
El amortiguador intracelular m,s signi<icati+o es la hemoglobina (pK de
la oxihemoglobina = 6.7 y de la desoxihemoglobina 7.9).
Amortiguadores del LEC
Amortiguador HCO
3
/CO
2
Se utiliza como la primera lnea de defensa cuando el cuerpo pierde o gana
H
+
.
Caractersticas:
a) la concentracin de la forma HCO
3
es alta (24 meq/L).
b) el pK es 6.1, bastante prximo al pH del LEC.
c) el CO
2
es voltil y se puede espirar por los pulmones.
20
#6$ ME&ANISM'S DE REGULA&IAN DEL ! SANGUONE'
Los sistemas de amortiguadores y los mecanismos reguladores tienen la
misma finalidad: controlar el pH.
Bsicamente hay dos mecanismos de regulacin que son el respiratorio o el
metablico, que son compensados el uno al otro en las diversas situaciones
del pH, respectivamente se dan en los pulmones y el rin con respecto al
bicarbonato y cido carbnico.
#F$ AR%I&IA&IAN DE LA !EM'GL'7INA EN EL %RANS'R%E DE
&'6 Y EN LA REGULA&IAN DEL ! SANGUONE'
La hemoglobina es una prote3na que est presente en los eritrocitos y tiene
dos funciones muy importantes:
#9 transporta el '6 desde el aparato respiratorio hasta los te:idos
peri<2ricos
69 transporta &'6 Y los protones desde los te:idos peri<2ricos hasta
los pulmones para la e=crecin subsecuente en ellos
La hemoglobina enlaza cuatro molculas de oxgeno por tetrmero, es decir
4 por hem de cada subunidad, La facilidad del enlace de O depende de la
misma presencia de O2 en el mismo tetrmero, por lo tanto se dice que la
hemoglobina tiene una cintica de enlace cooperativa.
21
'a$e() de la ca*+a ,c-da d-a*-a
0
20
40
60
80
100
1 6 11 16 21 26 31 36 41 46
!'RAS
*

D
E

R
E
S

U
E
S
%
A
EC
C
PULMONAR
RENAL
La oxigenacin de la hemoglobina en los pulmones, se acompaa pues, de
la expulsin y espiracin subsecuente del CO2. Conforme ste se absorbe en
la sangre, la anhidrasa carbnica en los eritrocitos cataliza la formacin de
cido carbnico. El cido carbnico se disocia rpidamente en un protn y
bicarbonato. Para evitar la acidez de la sangre, un sistema amortiguador
debe aceptar este exceso de protones. La hemoglobina enlaza dos protones
por cada cuatro molculas de oxgeno liberadas y as amortigua el pH de la
sangre.
En los pulmones el proceso se invierte, es decir el oxgeno se enlaza a la
hemoglobina desoxigenada, los protones se liberan y se combinan con el
bicarbonato para formar cido carbnico. Con ayuda de la anhidrasa
carbnica, el cido carbnico forma CO2, el cual se exhala.
#-$ %RAS%'RN'S DEL E@UILI7RI' B&ID'$7BSI&'
Hay principalmente 4 tipos de trastornos del equilibrio cido bsico:
Acidosis respiratoia Alcalosis respiratoria
Acidosis metablica Alcalosis metablica
Acidosis respiratoria . Aqu existe un aumento del &'61 posiblemente por
un problema respiratorio, lo que va a tener consecuencias en un aumento
en la fraccin cida del sistema amortiguador por que se va a generar ms
,cido carbnico"
El p! ser, menor de G"-1 +a a haber secrecin de iones !1 el ri;n +a a
retener !&'F para tratar de compensar"
Algunas patologas que las presentan son: mistenia grave, enfisema,
poliomielitis o una sobredosis de sicotrpicos, asma y neumona.
Alcalosis respiratoria" Aqu hay probablemente una hiper+entilacin, lo
que aumenta la e=crecin de &'6 y causa que haya disminucin de la
<raccin ,cida1 por lo tanto se generar, una alcalosis"
El p! ser, ma4or de G"-1 el !&'F +a a disminuir un poco1 disminu4en
los iones !1 poco &'61 el ri;n trata de compensar
Algunas patologas que las presentan son: ingestin de estimulantes
respiratorios, tumores vecinos al centro respiratorio, histeria, hiperventilacin.
Acidosis metablica" Aqu hay un aumento de produccin de ,cidos no
+ol,tiles en el organismo1 hay una aumento de la fraccin cida en el
sistema, el pH disminuye.. !a4 menos !&'F1 aumentan los iones !1 la
compensacin +a a ser pulmonar1 5ue +a a tratar de aumentar la
e=crecin de &'6"
Algunas patologas que las presentan son: cetoacidosis diabtica,
insuficiencia renal, diarreas, sobredosis de salicilicatos, enfermedades
renales o diarrea.
Alcalosis metablica" Resulta cuando se tienen grandes cantidades de
,lcali o bien se pierden ,cidos en e=ceso1 lo 5ue +a a ocasionar 5ue 5ue
22
ha4a aumento en hcoF 4 en el p! del cuerpo. La compensacin va a ser
pulmonar disminu4endo la e=crecin de &'6"
Algunas patologas que las presentan son:aspiracin gstrica, vmitos
frecuentes, sobredosis de bicarbonato de sodio, uso de diurticos
eliminadores de potasio, prdida del HCl.
23
BBLOGRAFA:
Punto 8
Bioquimica de Harper 15 ed. Manual moderno. pag. 22, 23, 24
Bioquimica de Laguna. Pag. 178, 179, 180.
Curso de fisiologia renal. Fabiola Len-Velarde.
Punto 9
Bioquimica de Lenhinger 3 ed. Pag. 49 y 50.
Bioquimica de Harper 14 ed. Pag. 23, 24, 25, 26.
Curso de fisiologia renal. Fabiola Len-Velarde.
Punto 10
Bioquimica de Lenhinger 3 ed. Pag. 48.
Punto 11
Curso de fisiologia renal. Fabiola Len-Velarde.
Bioquimica de Harper 14 ed. Pag. 26, 27.
Punto 12
Curso de fisiologia renal. Fabiola Len-Velarde.
Punto 13
Curso de fisiologia renal. Fabiola Len-Velarde.
Bioquimica de Harper 14 ed. Pag. 75, 79, 80.
Punto 14
Curso de fisiologia renal. Fabiola Len-Velarde.
Seminario de correlacin de Bioquimica clinica equilibrio cido-bsico
departamento de Bioquimica facultad de medicina UJED.
Ma. sabel Sols Ayala


24
UNDAD ll
AMIN'A&ID'S Y M%ID'S
AMNOACDOS
Los aminocidos son compuestos orgnicos importantes y necesarios para el
buen funcionamiento de nuestro organismo. Dentro de sus funciones, esta la
de servir como las unidades o monmeros a partir de los cuales se
constituyen las cadenas polipeptdicas de protenas.
Las clases de aminocidos, el orden en el cual se renen entre s, y sus
interrelaciones espaciales establecen las estructuras tridimensionales y las
propiedades biolgicas de las protenas sencillas.
Los aminocidos son los determinantes principales de la estructura y funcin
de las protenas complejas que contienen , adems de los aminocidos , el
grupo hem, carbohidratos, lpidos, cidos nucleicos, entre otros.
Por otro lado en la naturaleza existen mas de 300 aminocidos diferentes,
sin embargo un subconjunto de 20 constituyen las unidades monomricas a
partir de las cuales se constituyen, como ya se haba mencionado, los
esqueletos polipeptdicas de las protenas.
De esta manera es importante mencionar la clasificacin y composicin de
los aminocidos , as como su importancia biolgica en el organismo,
propiedades, entre otras importantes caractersticas de los aminocidos que
mencionaremos conforme se valla desarrollando el tema.
25
#$ GRU'S EUN&I'NALES Y E@UILI7RI' R'%RNI&' DE L'S L$
ALEA$ AMIN'A&ID'S
Los aminocidos estn constituidos por grupos funcionales, un grupo
amino
( -- NH ), y un grupo carboxilo ( -- COOH ).
En un alfa- aminocido, ambos grupos estn adheridos al mismo tomo de
carbono, denominado carbono alfa, ligado a el se encuentra un grupo
variable, el grupo R. Es en dichos grupos R donde las molculas de los 20
alfa-aminocidos se diferencian unas de otras.
Por ejemplo en la glicina, el grupo R se compone de un nico tomo de
hidrgeno. En otros aminocidos el grupo R es mas complejo, conteniendo
carbono e hidrogeno, as como oxigeno, nitrgeno y azufre.
La formula general estructural de los 20 alfa- aminocidos, llamados tambin
aminocidos corrientes es la siguiente:
H
R C COOH
NH
Los tomos del carbono alfa de todos los aminocidos, excepto la glicina, se
hallan unidos a cuatro grupos qumicos diferentes, siendo esta la
caracterstica de un tomo de carbono asimtrico y un centro quiral.
Los ismeros de la molcula alrededor del centro quiral pueden
representarse slo mediante dos modelos tridimensionales.
26
Los dos ismeros se diferencian en la direccin en la que hacen girar el
plano de luz polarizada, estos pares de ismeros reciben el nombre de
enantioformos.
Un compuesto que hace girar el plano de la luz polarizada en la direccin
de las agu:as del relo: es de=trgiro 8S91 en oposicin al compuesto1
le+giro 8$9"
6$ &LASIEI&A&IAN DE L'S L$ALEA$ AMIN'B&ID'S
Los amino,cidos son las unidades
estructurales b,sicas de las prote3nas. Un
aminocido (libre, sin polimeri>ar) siempre
tiene:
- Un grupo amino -N!6
- Un grupo carboxilo -&''!
- Un hidrgeno -!
- Una cadena lateral -R
Estos cuatro elementos estn unidos entre s
a travs de un carbono central, conocido como
carbono
Puesto que estos cuatro elementos son diferentes (excepto en el caso de la
glicina), los aminocidos son estereismeros. Slo encontramos L$
amino,cidos en las prote3nas"
En solucin acuosa a PH neutro, los grupos amino y carboxilo estn
ionizados. La molcula se comporta como un dipolo.
27
TPOS DE AMNOCDOS
Los aminocidos se distinguen unos de otros por la cadena lateral R. Aunque
existen muchos ms, slo hay 20 aminocidos codificables para la sntesis
de protenas. De una cadena lateral a otra hay una serie de diferencias
qumicas (ej. carga), estructurales, de tamao, etc.
Habitualmente se a
28
rupan como sigue:
Aminocidos alifticos
Son hidrofbicos y por ello tienen tendencia a situarse en el interior de las
protenas globulares cuando estn en solucin acuosa.
- Glicina (Gly; G): es el ms simple de todos, el nico que no tiene actividad
ptica (no es estereoismero). Su cadena lateral es un tomo de hidrgeno.
- Alanina (Ala; A): tiene un grupo metilo como cadena lateral.
- Valina (Val; V): tiene una cadena lateral algo mayor y ramificada. Por ello es
ms hidrofbico.
- Leucina (Leu; L): muy similar a la valina, pero con un grupo metilo ms.
29
- soleucina (le; ): similar a la leucina, pero con diferente orientacin de los
tomos de la cadena lateral. Tiene dos centros de asimetra.
- Prolina (Pro; P): diferente al resto de los aminocidos en que la cadena
lateral, adems de estar unida al carbono alfa, tambin lo est al grupo
amino. Aunque aliftico, no es tan hidrofbico como los dems.

Aminocidos aromticos
Poseen un anillo aromtico en la cadena lateral. Debido a ello, son altamente
hidrofbicos.
- Fenilalanina (Phe; F): contiene un anillo bencnico unido al carbono alfa a
travs de un grupo metilo.
- Tirosina (Tyr; Y): posee un grupo hidroxilo al final, lo que le hace ser menos
hidrofbico y le da carcter reactivo.
30
- Triptfano (Trp; W): tiene un anillo indol unido entre el metilo y el anillo
bencnico. Es muy hidrofbico.

Aminocidos que contienen azufre
- Cistena (Cys; C): contiene un grupo sulfihidrilo (-SH). Es extremadamente
reactivo y puede formar puentes de hidrgeno. Adems, puede formar
puentes disulfuro (S-S; enlace covalente)
La unin de dos cistenas
mediante puente disulfuro se llama cistina.
- Metionina (Met; M): se trata de un aminocido muy especial, puesto que
comienza con l el proceso de transcripcin de protenas. Tiene una cadena
altamente hidrofbica. El azufre es relativamente poco reactivo.

Aminocidos hidroflicos
Los hay de carcter cido, neutro y bsico.
31
Aminocidos cidos: son altamente polares y cargados negativamente a PH
fisiolgico.
- cido asprtico (Asp; D): tambin conocido como aspartato, ya que a PH
fisiolgico est disociado y cargado negativamente.

- cido glutmico (Glu; E): anlogamente, se le conoce tambin como
glutamato.


Aminocidos bsicos: contienen cadenas laterales cargadas positivamente a
PH fisiolgico.
- Lisina (Lys; K): tiene una de las cadenas ms largas de todos los
aminocidos. Aunque pudiera parecer una cadena carbonada hidrofbica es
muy polar debido a la presencia de un grupo amino terminal.

- Arginina (Arg; R): tiene la ms larga de las cadenas laterales. Debido al
grupo guanidino unido a la cadena lateral, pose un pKa alto y est cargada
positivamente a PH fisiolgico.
32

- Histidina (His; H): tiene un anillo imidazlico que a menudo se sita en el
centro activo de los enzimas y ayuda a crear o destruir enlaces. Es posible
ello porque puede existir en dos formas, cargada positivamente o neutra.

Aminocidos neutros: no estn cargados a PH fisiolgico. sin embrago, todos
tienen grupos polares en sus cadenas laterales, que pueden formar puentes
de hidrgeno.
- Serina (Ser; S): El grupo OH lo hace altamente reactivo. Es polar y forma
puentes de hidrgeno.

- Treonina (Thr; T): altamente reactivo e hidroflico. Tiene dos centros de
asimetra, al igual que isoleucina.


- Asparagina (Asn; N): es la versin amida derivada del cido asprtico.
33

- Glutamina (Gln; Q): es la versin amida derivada del cido glutmico.

CLASFCACN DE ACUERDO A CARACTERSTCAS DE
CRUPOS R
- HDROXLADOS (OH) - AZUFRADOS ( SH ) - ALFTCOS
- Serina - Cistena - Glicina - Leucina
- Treonina - Metionina - Alanina - soleucina
- Tirosina - Valina
- BSCOS - CDOS - MNOCDOS
- Histidina - A. Glutmico
- Prolina - Arginina - A. Asprtico
- Lisina
- AROMTCOS
- Histamina
- Fenilalanina
- Triptfano
- Tirosina
- Prolina
34
ESENCALDAD EN LA DETA
Hasta el momento han sido identificados 20 aminocidos necesarios para el
crecimiento y metabolismo humanos. De esos 20, once para nios y doce
para adultos se consideran no esenciales, pues son aquellos que nuestro
organismo puede sintetizar o formar y por lo tanto no es imprescindible
obtenerlos de los alimentos. Los 8-9 restantes se denominan aminocidos
esenciales debido a que el cuerpo humano no los sintetiza y, por lo tanto,
debe ser parte esencial de nuestra alimentacin diaria. La ausencia de uno
de estos aminocidos esenciales impide la formacin de la protena que lo
contiene y por lo tanto el tejido que la requiere no puede ser mantenido.
Aminocidos no esenciales: Alanina, arginina, asparagina, acido asprtico,
cistenina, cido glutmico, glicina, prolina, serina, tirosina, histidina (en
adultos).
Aminocidos esenciales: isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina,
treonina, triptofano, valina, histidina (en nios).
Las denominadas protenas completas - es decir, que contienen todos los
aminocidos esenciales- en general se encuentran en alimentos tales como
carnes, huevos, lcteos y derivados. Es interesante destacar que las
protenas de los vegetales y los cereales son incompletas, o sea, no aportan
todos los aminocidos esenciales. Este concepto es muy importante para las
personas vegetarianas.La mayora de las personas necesitan ingerir del 10%
al 15% de su consumo calrico total en protenas; esto viene a ser
aproximadamente 0,75 gramos por kilogramo de peso corporal al da. De
esta forma, un hombre de 70 kilos y una mujer de 55 kilos necesitan de 50 a
60 gramos y de 40 a 50 gramos al da, respectivamente. Las protenas
requeridas pueden obtenerse fcilmente con dos o tres raciones de
alimentos ricos en protena animal o con cuatro raciones de alimentos con
protena vegetal variados, como cereales integrales, verduras, legumbres,
frutos secos y semillas.
CLASFCACN DE ACUERDO AL REQUERMENTO EN EL
ORGANSMO
ESENCALES
( No son sintetizados por el
organismo)
NO ESENCALES
( El organismo es capaz de
sintetizarlos )
- Histamina (en la lactancia) - Glicina
- Leucina - Tirosina
- soleucina - A. Glutmico
- Fenilalanina - A. Asprtico
- Valina - Asparagina
- Lisina - Serina
- Metionina - Cistena
- Arginina (en la lactancia) - Alanina
- Triptfano - Prolina
- Treonina - Glutamina
35
F$ R'IEDADES DE L'S AMIN'B&ID'S
PROPEDADES CDO-BSCAS DE LOS AMNOCDOS.
Considerando las especies inicas corrientes de los aminocidos:
Los aa cristalizados poseen un punto de fusin o de descomposicin
relativamente elevado, generalmente por encima de 200c.
Los aa se encuentran y cristalizan a partir de las disoluciones acuosas
neutras en forma de iones dipolares, llamadas tambin iones hbridos en
lugar de hacerlo en forma de molculas no disociadas.
Cuando se disuelve en el agua un ion hbrido cristalizado, como la alanina,
puede actuar como cido o como base.
Las sustancias que poseen ests propiedades son anfteras y se llaman
anfoltos.
La alanina se considera como un cido dibsico cuando se halla en su
forma totalmente protonizada; puede ceder protones durante su valoracin
completa con una base.
Ninguno de los aminocido monoamino- monocarboxlicos posee capacidad
de tamponamiento significativo en la zona de pH fisiolgico, es decir, entre
pH 6-8. Muestran capacidad de tamponamiento en las zonas prximas de
sus valores de pKa. Solamente existe un aminocido con capacidad de
tamponamiento entre pH 6-8 se trata de HSTAMNA.
El formaldehdo en exceso se combina fcilmente co0n los grupos amino
libre (es decir no protonizados) de los aminocidos y origina metilol
derivados. Esta reaccin provoca que un aminocido isoelctrico pierda un
protn del grupo amonio del ion hbrido.
El protn as liberado puede valorarse directamente con NaOH hasta el
punto final de la fenoftalena pH 8. Este sistema de valoracin de
aminocidos o de mezclas de aminocidos en presencia de exceso se
formaldehdo (valoracin con formol) se utiliza para seguir la formacin de
aminocidos libres durante la hidrlisis de las protenas por enzimas
proteolticas.
ESTEREOQUMCA DE LOS AMNOCDOS
Tres aminocidos: tirosina, triptfano y fenilalanina absorben luz
significativamente en el espectro ultravioleta. Puesto que muchas protenas
contienen restos de tirosina, las medidas de absorcin de la luz a 280nm en
un espectrofotmetro constituyen el medio conveniente de determinar el
contenido en protena de una disolucin.
Todos los aminocidos absorben en el ultravioleta lejano (menor que
220nm).
El triptfano, la tirosina y la fenilalanina tienen ms capacidad de absorcin
(280nm); la capacidad normal de absorcin es de 220nm.
36
CLASFCACN DE
ACUERDO
A SU SOLUBLDAD
No Polares
Hidrofbicos
Polares
Hidroflicos
- Alanina - Prolina - Glicina - Tirosina
- Valina - Triptfano - Serina - Asparagina
- Leusina - Fenilalanina - Treonina - Glutamina
- soleusina - Cistena
- Con metanol o etanol se hacen
solubles.
( + ) ( - )
- Histidina - A. Glutminco
- Arginina - A. Asprtico
- Lisina
REACCONES QUMCAS DE LOS AMNOCDOS
Corresponden a las de sus grupos funcionales, es decir:
A) Reacciones de grupos Carboxilo.- conducentes a la formacin de
amidas, steres y haluros de acilo.
La esterificacin de los aminocidos con etanol o con alcohol bencilo, se
utiliza para proteger el grupo carboxilo de los aminocidos en la sntesis
qumica de los pptido.
Reduccin de un medio anhidro con el potente reductor brohidruro de litio
para obtener el correspondiente alcohol primario.
B) Reacciones con grupos Amino
El grupo alfa-amino de los aminocidos puede asilarse por tratamiento con
anhdridos o haluros de cidos. Un reactivo utilizado es el
CLOROCARBONATO DE BENCLO que rinde el correspondiente
benciloxicarbonilo derivado del aminocido designado frecuentemente como
crbobenzoxiderivado.
La Reaccin amino ms caracterstica es: la reaccin Ninhidrina para valorar
los aminocidos cuantitativamente, por calefaccin de un alfa-aminocido
con dos molculas de ninhidrina da un producto intensamente coloreado
(prpura), con todos los aminocidos y pptidos que poseen grupos alfa-
amino libres, mientras que la prolina y la hidroxiprolina, en los que el grupo
alfa-amino se halla sustituido, rinden derivados algo diferentes que poseen
un color amarillo algo caracterstico.

C)Reacciones de los grupos R
Son reacciones coloreadas cualitativas tpicas de las funciones presentes en
sus grupos R, tales como el grupo tiol de la cistena, el grupo hidroxilo
fenlico de la tirosina y el grupo guanidinio de la arginina.
37
- Una reaccin importante y caracterstica del grupo tilo ocurre con metales
pesados tales como Hg y Ag con los que forma mercptidos.
- La cistina forma oxidasa de la cistina, tiene un grupo disulfuro que acta
como enlace covalente transversal entre cadenas polipeptdicas o entre dos
puntos de la misma cadena. Los enlace disulfuro transversales pueden
escindirse por la accin de agentes reductores como el mercaptoetanol que
rinde dos molculas de cistena, que puede ser oxidada tambin mediante el
cido perfrmico y origina dos molculas de cido cistico.
ESPECTROS DE ABSORCN
Los tres aminocidos tirosina, triptfano, y fenilalanina absorven luz
significativamente en el espectro ultravioleta. Puesto que muchas protenas
contienen restos de tirosina, las medidas de absorcin de la luz a 280nm es
un espectrofotmetro constituyen un medio conveniente de determinar el
contenido en protena de una disolucin.
Todos los aminocidos absorben en el ultravioleta lejano ( menor de 220nm).
REACCN CON NNHDRNA Y FLUORESCAMNA
Ninhidrina.
La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) reacciona con los aminocidos en
medio cido (pH entre 3 y 4) y en caliente produciendo amoniaco, dixido de
carbono y un complejo de color prpura azulado. Todos los aminocidos
primarios forman el mismo complejo tras su reaccin con ninhidrina,
haciendo este agente inapropiado para la precolumna de derivatizacin. La
mayora de columnas de HPLC de intercambio catinico utilizadas para el
anlisis de aminocidos con postcolumna basada en la ninhidrina todava
emplean resinas de sulfonato de poliestireno/divinilbenceno.
Los primeros sistemas automticos para el anlisis de aminocidos descritos
en 1958 basados en la separacin de aminocidos por cromatografa de
intercambio catinico y posterior reaccin con ninhidrina, permanecen hoy
da como la metodologa ms fiable para el anlisis de aminocidos en
pptidos y protenas. Analizadores comerciales basados en esa metodologa
estn disponibles en compaas como Beckman y Pharmacia. A altas
temperaturas ( 100C), todos los aminocidos primarios reaccionan con
dos molculas de ninhidrina para formar un cromforo (prpura de
Ruthermann) con mxima absorcin a 570 nm.
En la cuantificacin de los aminocidos individuales puede utilizarse el
coeficiente de absorcin molar del compuesto coloreado, aunque su valor
vara de un aminocido a otro y debe determinarse para las condiciones
particulares del anlisis. Sin embargo, se debe escoger un valor de
referencia para utilizarlo en la cuantificacin de los aminocidos totales de
una mezcla.
La reaccin coloreada de la ninhidrina se utiliza en trabajos analticos, as
como en la visualizacin de las bandas de los aminocidos despus de su
separacin por electroforesis o por cromatografa. El reactivo que se utiliza
en estas circunstancias se prepara generalmente disuelto en etanol; cuando
38
se aade 2,4-6colidina, las diferencias de color entre cada mancha ayudan a
la identificacin de los distintos aminocidos
Fluorescamina.
La fluorescamina fue tambin introducida como una posible alternativa a la
ninhidrina en postcolumnas de derivatizacin. Todas las aminas primarias
reaccionan con la fluorescamina en medio bsico (pH 9-11) dando un
producto fluorescente con un incremento en sensibilidad de deteccin mayor
que la ninhidrina, aunque la fluorescamina por si misma no tiene
fluorescencia. El producto fluorescente es inestable en disolucin acuosa y el
reactivo debe prepararse en acetona. Las aminas secundarias no
reaccionan, a menos que se conviertan previamente en aminas primarias, lo
que puede hacerse con N-clorosuccinimida, hipoclorito o cloramina-T.
Aunque el reactivo tiene inters por su rpida velocidad de reaccin con los
aminocidos a temperatura ambiente, la reaccin no es tan sensible como la
de la ninhidrina.
39
PROPEDADES CDO-BSCAS DE LOS AMNOCDOS
El conocimiento de las propiedades cido~bsicas de los aminocidos es
sumamente importante en la comprensin y el anlisis de las propiedades de
las protenas.
Por otra parte, todo el arte de la separacin, la identificacin y la valoracin
cuantitativa de los diferentes aminocidos, que son etapas necesarias en la
determinacin de la composicin de los aminocidos y de la secuencia de las
protenas, se basa en su conducta cido~base.
Consideremos, en primer lugar, las especies inicas corrientes de los
aminocidos. Los aminocidos cristalizados poseen puntos de fusin o de
descomposicin relativamente elevados; generalmente por encima de los
200 C son mucho ms solubles en el agua que en los disolventes no
polares.
Tales propiedades son, precisamente, las que deben esperarse si el retculo
de las molculas de los aminocidos en estado cristalino est estabilizado
por fuerzas electrostticas de atraccin entre grupos con cargas opuestas,
como ocurre en el elevado punto de fusin de la red cristalina de las sales,
como el cloruro sdico.
Si los aminocidos cristalizasen en una forma no inica, quedaran
estabilizados por las fuerzas de van der Waals, mucho ms dbiles, y
tendran puntos de fusin bajos.
Los aminocidos se encuentran y cristalizan a partir de las disoluciones
acuosas neutras en forma de iones dipolares llamados tambin iones
hbridos, en lugar de hacerlo en forma de molculas no disociadas.
40
Cuando se disuelve en el agua un ion hbrido cristalizado, como la alanina,
puede actuar o bien como cido, (dador de protones) o como base (aceptor
de protones):
Como cido: H3nNCH(CH3)C00- H+ +
H2NCH(CH)3,COO-
Como base: H+ + H3NCH(CH3)COO- H3NCH(CH3)COOH
Las sustancias que poseen esta propiedad son anfteras (del griego amphi:
ambos) y se llaman anflitos locucin abreviada de electrolitos
anfteros.
El comportamiento cido-base de los anfolitos se formula sencillamente en
trminos de la teora de cidos y bases de Brnsted-Lowry.
Un alfa-aminocido sencillo, monoamino y monocarboxlico, por ejemplo la
alanina, es considerado como un cido dibsico cuando se halla en su forma
totalmente protonizada; puede ceder dos protones durante su valoracin
completa
con una base.
** Formas no ionizadas y de ion hbrido de los aminocidos
41
-$ &'M'R%AMIEN%' DE L'S AMIN'B&ID'S EN S'LU&IAN A
DIS%IN%'S ?AL'RES DE !
Dependiendo del pH los aminocidos pueden tener carga neta positiva,
negativa o cero.
Los aminocidos portan por lo menos dos grupos cidos dbiles ionizables,
un COOH y un NH3. En solucin dos formas de estos grupos, uno con carga
y otra sin carga, existen en equilibrio protnico:
R COOH R COO + H
R NH3 R NH2 + H

El RCOOH y el RNH3 representan los miembros protonados acidicos en
estos equilibrios el RCOO y el RNH3 son cidos dbiles el RCOOH es un
cido con mayor fuerza que el RNH3.

Al pH del plasma sanguneo o al liquido intracelular (7.4 y 7.1
respectivamente), los grupos carboxilos existen casi enteramente como iones
carboxilato RCOO.
A estos valores de pH, la mayor parte de los grupos amino estn
predominantemente en la forma asociada (protonina), R- NH3.

En un pH suficientemente bajo para ionizar al grupo carboxilo, el grupo
amino, el cido mas dbil tambin se protonaria.
Si el pH se eleva gradualmente el protn del cido carboxlico se perdera
mucho antes que el RNH3.
A cualquier pH suficientemente alto para que predomine la base conjugada
sin carga del grupo amino, un grupo carboxilo estar presente como ion
carboxilato
( R COO ).
A un pH isoelctrico (p) un aminocido tiene carga neta de cero. El pH
isoelctrico es el pH que esta en medio de los valores de pk de ambos lados
de la especie isoelctrica:
P = (PK 1 + PK2)/ 2
Donde pk es el pk de los grupos disociables de un aminocido.
El grupo alfa-carboxilo de los cidos monoamino-monocarboxlicos es un
cido ms fuerte que el grupo carboxilo de los cidos alifticos comparables,
tales como el cido actico (pK' = 4,76). El incremento de la fuerza cida de
este grupo est originado por la presencia del grupo alfa-amonio, que atrae
42
electrones, y por su carga positiva que produce un efecto de campo intenso,
incrementando de este modo la tendencia del hidrgeno carboxlico a
disociarse como un protn.
El grupo alfa-amino de los cidos monoamino-monocarboxlicos es un cido
ms fuerte (o una base ms dbil), que el grupo amino de las aminas
alifticas comparables.
Todos los aminocidos monoamino-monocarboxlicos que poseen grupos R
sin carga tienen valores casi idnticos de pK', y tambin lo son los valores
de pK'2,
Ninguno de los aminocidos monoamino-monocarboxlicos posee capacidad
de tamponamiento significativa en la zona de pH fisiolgico, es decir, entre
pH 6,0 y 8,0. Muestran capacidad de tamponamiento en las zonas prximas
a sus valores de pK', es decir, en las zonas de pH 1,3 a 3,3 y de pH 8,6 a
10,6. Solamente existe un aminocido con capacidad de tamponamiento
significativa entre pH 6 a 8; se trata de la histidina.
El grupo beta-carboxilo del cido asprtico y el gamma-carboxilo del cido
glutmico, aunque se hallan totalmente ionizados a pH 7,0, poseen valores
de pK' considerablemente ms elevados que los correspondientes valores de
pK' de los grupos alfa-carboxilos, y ms aproximadamente iguales a los de
los cidos carboxlicos sencillos, tales como el cido actico.
El grupo tiol o sulfhidrilo (-SH) de la cistena y el grupo p-hidrox de la tirosina
son cidos muy dbiles. A pH 7,0 el primero de ellos est ionizado alrededor
de un
8%, y el segundo un 0,01%.
El grupo E-amino de la lisina y el grupo guanidinio de la arginina son
fuertemente bsicos; slo pierden sus protones a valores de pH muy
elevados. A pH 7.0 estos aminocidos poseen carga positiva neta.
Las curvas de valoracin de los aminocidos con grupos R que se ionizan
son mas complejas, puesto que son una combinacin de curva
correspondiente a la disociacin del grupo R y las curvas de valoracin de
los grupos alfaamino y alfa-carboxilo.
** Curvas de valoracin del cido glutmico, de la lisina y de la histidina. El
pk' del grupo R se designa momo pK'R.
43
/$ ENLA&E E%IDI&'

El enlace peptdico es el nico enlace covalente existente entre aminocidos.
La formacin del enlace peptdico involucra la eliminacin de 1 mol de agua
entre el grupo alfa- amino de un aminocido y el grupo alfa carboxilo de un
segundo aminocido.


**aminocidos unidos por un enlace peptdico.
El enlace peptdico posee carcter parcial de doble enlace C N , supone
una clara restriccin para la forma de la molcula, siendo posible la rotacin
libre solo alrededor de los enlaces C R, C NH3 y C COO. Cuando
un estructura polipetidica presenta esta flexibilidad mxima se dice que tiene
una conformacin aleatoria, siendo esta la forma tridimensional de la
molcula.
Por otro lado , existen otras propiedades caractersticas de los polipptidos
en las cuales tienden a estabilizar la molcula de un a forma mas rgida,
mediante:
Enlaces de hidrogeno
nteracciones inicas
nteracciones hidrofbicas
44
PPTDOS
La polimerizacin de los L-alfa- aminocidos mediante enlaces peptdicos,
constituye el marco estructural para las protenas, formando de esta manera
los pptidos.
Los ppticos son de gran inters biomdico ya que muchas hormonas
importantes son pptidos, y pueden emplearse para corregir los estados de
deficiencia correspondientes, por ejemplo, la administracin de insulina a
pacientes con diabetes mellitus.
Del mismo modo ciertos antibiticos son pptidos como por ejemplo la
valinomicina y gramicidina A, as como algunos antitumorales como la
bleomicina.
Por otro lado con el avance de la tecnologa se pueden sintetizar otros
ppticos, tambin disponibles en la naturaleza solo en cantidades pequeas
para utilizarlos en vacunas.
ESTRUCTURA DE LOS PPTDOS
Los pptidos sencillos que contienen dos, tres , cuatro o mas restos
aminocidos es decir, los dipptidos, tripptidos, tetrapptidos, etc. que se
hallan unidos covalentemente, proceden de la hidrlisis parcial de cadenas
polipeptdicas de las protenas mucho mas largas.
Los pptidos se forman tambin en el tracto gastrointestinal durante la
digestin de las protenas por las proteasas, enzimas que hidrolizan los
enlaces peptidicos. Los pptidos se designan a partir de sus restos
aminocidos componentes en la secuencia que comienza con el resto
aminoterminal (N-terminal).
45
Estructura de un pentapptido. Los pptidos se designan comenzando por el
resto N-terminal.
Los pptidos pueden considerarse como amidas sustituidas. A semejanza
del grupo amida, el enlace peptdico muestra un elevado grado de
estabilizacin por resonancia. El enlace simple C N del enlace peptdico
posee alrededor del 40% de carcter de enlace doble y el enlace doble C = O
posee cerca de 40% de carcter de enlace simple.
Este hecho determina dos consecuencias importantes:
1) el grupo imino (-NH-) del enlace peptdico no posee tendencia
significativa a ionizarse o a captar protones en el intervalo de pH entre 0 y
14.2
2) el enlace C N del enlace peptdico es relativamente rgido y no puede
girar libremente, propiedad que es de suprema importancia con respecto
a la conformacin tridimensional de las cadenas polipeptdicas.
PROPEDADES ACDO-BASE DE LOS PPTDOS
Los pptidos poseen habitualmente puntos de fusin elevados, lo cual indica
que cristalizan de las disoluciones neutras en forma de retculo inico, como
iones dipolares igual que los aminocidos.
El comportamiento cido-base de los pptidos viene determinado por el
grupo alfa-amino libre del resto N-terminal, por el grupo alfa-carboxilo libre
del resto carboxil-terminal (C-terminal) y por los grupos R de los restos
situados en posiciones intermedias que pueden ionizarse. En las cadena
polipeptdicas largas los grupos R que se ionizan sobrepasan en gran
nmero a los grupos ionizables de los restos terminales.
Los valores de pk' de los grupos R en los pptidos cortos se aproximan
mucho a los que exhiben los correspondientes alfa-aminocidos libres.
Las curvas de valoracin cido-base de los pptidos cortos son muy
semejantes a las de los alfa-aminocidos libres.
Las especies inicas predominantes en las diferentes etapas de las curvas
de valoracin son comparables a las de los aminocidos libres. Los pptidos
poseen tambin un pH isoelctrico que puede calcularse a partir de sus
valores de pK'.

46
($ M%ID'S DE A&%I?IDAD 7I'L'GI&A
Las clulas animales, vegetales y bacterianas contienen diversos
polipptidos de peso molecular bajo (3 a 100 residuos de animocidos) que
tienen actividad fisiolgica importante. Algunos incluyendo la mayora de las
hormonas polipeptdicas de los mamferos, contienen solo enlaces peptdicos
formados entre los grupos alfa-amino y alfa-carboxilo, de los L-alfa-
aminocidos de las protenas, en los polipptidos tambin pueden existir
aminocidos o derivados de aminocidos protenicos adicionales.
GLUTATON
Hallado en todas las clulas de los animales superiores, contiene un resto de
cido glutmico unido mediante un enlace peptdico poco frecuente en el que
interviene su grupo d-carboxilo en lugar de su grupo d-carboxilo.
En el cual el glutamato amino terminal esta enlazado a la cisteina por un
enlace alfa no peptdico, es requerido por varias enzimas. El glutatin y la
enzima glutatin reductasa participan en la formacin de los puentes
disulfuro correctos de numerosas hormonas protenicas y polipeptdicas as
como tambin en el metabolismo de los xenobiticos.
Acta como componente de un sistema de transporte aminocido como
activador de determinadas enzimas y como protector de los lpidos contra la
oxidacin, se sintetiza en dos etapas a partir de L-glutamato, L-cisteina y
glicina. Por cada enlace peptdico formado una molcula de ATP resulta
degradada a ADP y fosfato:
Glutamato + cisterna + ATP--------- -glutamilcisteina + ADP + Pi
-glutamilcisteina + glicina + ATP------------ Glutatin + ADP + Pi
ANTBOTCOS POLPEPTDCOS
Elaborados por hongos, contienen aminocidos D y L, as como otros no
presentes en las protenas. Ejemplo: la valinomicina, tirocidina y la
gramidicina S, polipptidos cclicos que contienen D-fenilalanina y el
aminocido no proteico ornitina.
HORMONA LBERADORA DE TROTROPNA (TRH)
El glutamato amino terminal experimenta ciclizacin a cido piroglutamico y
el carboxilo del propio carboxilo terminal se amida.
Un polipptido de mamfero puede contener ms de un pptido con actividad
fisiolgica potente. Dentro de la estructura primaria de la beta-lipotropina
(hormona hipofisiaria que estimula la liberacin de cidos grasos del tejido
47
adiposo) hay secuencias de aminocidos que son comunes a otras
hormonas polipeptdicas con actividades biolgicas diversas.
OXTOCNA
En 1953 V. du Vigneaud y sus colaboradores, lograron la sntesis de las
hormonas de la pituitaria posterior oxitocina y vasopresina que contienen 9
restos aminocidos.
Los impulsos neurales que resultan de la estimulacin de los pezones son el
estimulo primario para la liberacin de oxitocina, la distensin vaginal y
uterina son los estmulos secundarios.
La prolactina PRL se libera por muchos de los estmulos que liberan
oxitocina y se ha propuesto un fragmento de la oxitocina como el factor
liberador de la prolactina.
El estrgeno estimula la produccin de oxitocina y de neurofisina y la
progesterona la inhibe.
Se desconoce el mecanismo de accin de la oxitocina, causa contraccin del
msculo liso uterino y por eso se emplea en cantidades farmacolgicas para
inducir el parto humano.
En los animales, las hembras preadas en las que se ha destruido la va
hipotlamo-hipfisis, no necesariamente tiene problemas para parir.
La funcin fisiolgica ms probable de la oxitocina es estimular la contraccin
de las clulas mioepiteliales que rodean a los alvolos mamarios. Esto facilita
el movimiento de la leche en el sistema de conductos alveolares y permite la
expulsin de la leche.
Los receptores de membrana para la oxitocina se localizan tanto en el tejido
uterino como en el mamario. Estos receptores aumentan en nmero por la
presencia de estrgenos y disminuyen por la progesterona. La elevacin de
los estrgenos, con la cada de progesterona, que se produce
inmediatamente antes del parto, es una explicacin probable para el
comienzo de secrecin Lctea antes del nacimiento.
La oxiticina y la neurofisina son producidas en el ovario, en donde la
oxitocina puede inhibir la esteroidognesis.
Los grupos qumicos importantes para la accin de la oxitocina son el amino
primario de la cisterna, amino terminal, el fenlico de la tirosina, los tres
grupos carboxiamdicos de asparagina, glutamina y glicinamida y el enlace
disulfuro (S-S). Mediante la supresin de estos grupos se han producido
numerosos anlogos de la oxitocina.
48
Ej. La eliminacin del grupo amino primario libre del residuo de cisterna
central produce desamino oxitocina, la cual tiene una actividad antidiurtica 4
a 5 veces superior ala oxitocina.
ANGOTENSNA
La renina (enzima producida en las clulas yuxtaglomerulares de la arteriola
aferente renal) acta sobre el sustrato angiotensinogeno (alfa globulina
sintetizada en el hgado) para producir el decapeptido angiotensina .
La sntesis de angiotensinogeno se potencia por glucocorticoides y
estrgenos.

La hipertensin vinculada a estas hormonas puede deberse en parte al
incremento de la concentracin de angiotensinogeno plasmtico.
La enzima convertidora de angiotensina, una glucoproteina encontrada en
pulmn, clulas endoteliales y plasma, elimina 2 aminocidos del extremo
carboxiterminal del decapeptido angiotensina para formar angiotensina en
un paso que se considera no limitante de la velocidad.
Varios nonapptidos anlogos ala angiotensina inhiben a la enzima
convertidota y se utilizan para tratar la hipertensin dependiente de renina.
Estos tambin se conocen como inhibidores ACE (enzima convertidota de
angiotensina). La enzima convertidota tambin degrada la bradicinina, un
vasodilatador potente, por tanto esta enzima aumenta la presin arterial por
dos vas distintas.
La angiotensina incrementa la presin arterial al causar vaso constriccin
de las arteriolas y es la sustancia vaso activa ms potente conocida. nhibe la
liberacin de renina de las clulas yuxtaglomerulares y es un estimulador
potente de la produccin de aldosterona.
Aunque la angiotensina estimula directamente a la suprarrenal, no tiene
efecto sobre la produccin de cortisol. En algunas especies la angiotensina
, se convierte en heptapeptido des Asp , Angiotensina , estimulador
igualmente potente de la produccin de aldosterona.
En humanos la concentracin plasmtica de angiotensina es 4 veces
mayor que la angiotensina , asi la mayor parte de los efectos los ejerce el
octapptido. Las angiotensinas y se inactivan con rapidez por las
angiotensinasas.
La angiotensina se une a receptores especficos de las clulas
glomerulares.
La interaccin de la hormona con el receptor no activa a la adenilil ciclasa y
al parecer el CAMP no media la accin de esta hormona.
49
Las acciones de la angiotensina , que consisten en estimular la conversin
del colesterol a pregnenolona y de la corticosterona a 18-
hidroxicorticosterona y aldosterona, pueden comprender cambios en la
concentracin del calcio intracelular y de los metabolitos de fosfolpidos.
50
G$ %E&NI&AS DE SEARA&I'N DE AMIN'A&ID'S Y E%ID'S
CROMATOGRAFAS
Los mtodos cromatogrficos pueden aplicarse no solamente a la
separacin, identificacin y anlisis cuantitativo de mezclas de aminocidos,
sino tambin de ppticos, protenas, nucletidos, cidos nucleicos, lpidos e
hidratos de carbono.
En todas las separaciones cromatografas, las molculas son separadas
dentro de una fase estacionaria y una mvil. La separacin depende de la
tendencia de las molculas en la mezcla para asociarse con mayor fuerza a
una o a otra fase.
CROMATOGRAFA EN PAPEL
Para este tipo de cromatografa, se coloca una gota de solucin que
contenga uno o mas aminocidos a unos 5cm del borde de una tira de papel
filtro, la tira se coloca en un vaso cerrado donde su extremo entra en
contacto con un solvente generalmente un alcohol de bajo peso molecular en
solucin saturada con agua que contiene un cido o una base. Despus de
la migracin del solvente sobre el papel, se seca la tira, se trata con
ninhidrina en acetona y se calienta un poco, entonces las posiciones de los
aminocidos aparecen como puntos de color prpura.
Los aminocidos con grandes cadenas laterales no polares emigran ms que
los que tienen cadenas laterales ms cortas no polares o cadenas laterales
polares. Esto refleja la mayor solubilidad relativa de las molculas polares en
la fase estacionaria hidrfila y de las molculas no polares en solventes
orgnicos.
Para una serie no polar (Gli, Ala, Val, Leu) a mayor longitud de la cadena
lateral no polar se incrementa su carcter no polar, lo cual incrementa su
movilidad.
La relacin entre la distancia recorrida por una aminocido con la distancia
que viaja el solvente, medidas ambas desde el sitio marcado para la
aplicacin de la mezcla de aminocidos, se designa como valor Rf (movilidad
relativa con el solvente) de ese aminocido.
Rf = Distancia corrida por la muestra
Distancia solvente
Los valores Rf para un aminocido dado varan de acuerdo con las
condiciones experimentales, por ejemplo segn el solvente usado. Aunque
es posible identificar tentativamente un aminocido solo por su valor Rf, es
51
preferible hacer la cromatografa estndar de aminocidos conocidos de
manera simultnea con la mezcla desconocida. Luego la movilidad puede
expresarse en relacin a la de un estndar.
Las movilidades expresadas como relativas a un estndar varan menos que
los valores Rf de un experimento a otro.
CROMATOGRAFA EN CAPA FNA
Hay dos tipos distintos en cromatografa en capa fina.
-Cromatografa en capa fina por particin. CCFP
-Cromatografa en capa fina de Absorcin CCFA
En la CCFP, la resolucin implica particin de los elementos de una mezcla
entre 2 fases liquidas, una estacionaria y otra mvil de polaridad diferente,
conforma la fase mvil pasa sobre la estacionaria. La separacin se produce
por la diferencia de solubilidad de los componentes en las fases estacionaria
y mvil.
En la CCFP normal, la fase estacionaria es el componente ms polar. El
solvente contiene ambos elementos: polares y dbilmente no polares, agua,
un alcohol de 4 o 5 carbonos un cido dbil como cido actico o una base
dbil como amoniaco.
Conforme se desplaza, el solvente cambia de composicin debido a los
electos mas polares que acompaan a los grupos OH polares de la celulosa.
Por tanto el solvente que avanza paulatinamente se convierte en ms no
polar.
Los componentes no polares de una mezcla, se desplazan ms lejos que los
componentes polares de mismo tamao. Ej. El glutamato y lisina se retardan,
la leucina y la valina migran junto con el solvente.
La CCFP en "fase de reversa tanto las polaridades de las fases como las
movilidades de los componentes de la mezcla se revierten respecto a la
CCFP normal. La fase mvil suministra la fase polar, la fase estacionaria por
lo comn celulosa cubierta con un liquido no polar como el aceite de silicn,
suministra la fase mas no polar.
En contraste con la CCFP normal, los componentes polares migran con el
solvente y se retraza el desplazamiento de los menos polares.
En la CCFA, la separacin se basa en un principio totalmente diferente. La
resolucin implica absorber los componentes de la mezcla en gel de slice
que se calienta para expulsar toda el agua fija. La fase mocil, una mezcla
simple o binaria de solventes orgnicos, desplaza los compuestos
absorbidos compitiendo por los sitios de unin sobre el gel de slice. Primero
52
de desplazan los componentes unidos con menor firmeza y as se logra la
resolucin.
CROMATOGRAFA DE NTERCAMBO NCO
El anlisis de los residuos de aminocidos despus de la hidrlisis de un
pptido, por lo general involucra a la cromatografa de intercambio inico. La
separacin, identificacin y cuantificacin completas requieren menos de 3
horas. El procedimiento de Moore y Stein utiliza una columna corta y una
larga las cuales contienen la forma ionizada Na de una resina de poliestireno
sulfatada. Cuando el cido hidrolizado a pH 2 se aplica a las columnas de los
aminocidos se unen mediante el intercambio de catines con el catin Na.
Las columnas se eluyen despus con citrato de sodio bajo condiciones
predeterminadas de pH y temperatura.
El material eludo se hace reaccionar con la solucin de ninhidrina y las
densidades de coloracin se miden en un colormetro de flujo. Los datos
aparecen en un tubo de rayos catdicos con integracin relacionada con
computadora.
D$ DE%ERMINA&IAN DE LA ES%RU&%URA RIMARIA DE UN M%ID'
Dado que numerosas protenas estn constituidas por mas de una cadena
polipeptdica ligada por fuerzas no covalentes o por puentes disulfuro, es
posible que el primer paso sea disociar y separar las cadenas polipeptdicas
individuales. Los agentes desnaturalizantes como la urea o el clorhidrato de
guanidina destruyen los puentes hidrogeno y disocian polipptidos unidos de
modo no covalente. Por su parte los agentes oxidantes y reductores rompen
los puentes disulfuro. Entonces los polipptidos son separados por
cromatografa.
La estructura primaria es el esqueleto covalente de las cadenas
polipeptdicas, incluida la secuencia de restos de aminocidos.
Los pptidos sencillos que contienen dos, tres, cuatro o ms restos de
aminocidos (dipptidos, tripptidos, etc) se hallan unidos covalente mente,
proceden de la hidrlisis parcial de cadenas polipeptdicas de las protenas
mucho mas largas.
El enlace peptdico es el nico enlace existente entre los aminocidos que
constituyen el esqueleto de la estructura lineal de las protenas. Existe otro
enlace covalente entre los aminocidos, el enlace disulfuro de la cistina, que
acta en algunas protenas como enlace transversal entre dos cadenas
polipeptdicas separadas o entre curvaturas de una misma cadena.
53
Bibliografa
Bioqumica de Lehninger, 2 Edicin
Pags. 61, 62, 89-100, 121, 292, 726-728, 805-808, 817-820.
Bioqumica de Harper.
Pags. 35-40, 44, 45, 647-649.
David J. Holme y Hazel Peck, Bioqumica Analtica, Longman Group Limited,
1983.
Hans-Dieter Belitz y Werner Grosch, Qumica de los Alimentos, Springer-
Verlag GmbH & Co., 4 edicin
www. Altavista. Com. Aminocidos.
www.medigraphic.com
54
UNIDAD III
R'%EINAS
#"$ DEEINI&IAN Y &'M'SI&IAN DE LAS R'%EONAS
DEFNCN
Las protenas son las molculas orgnicas ms abundantes en las clulas;
constituyen ms del 50 % de su peso seco.
Cada protena tiene funciones diferentes dentro de la clula. Adems la
mayor parte de la informacin gentica transmitida por las protenas.
Las protenas son verdaderas macromolculas que alcanzan dimensiones de
las micelas en el estado coloidal. La estructura de tamao micelar con cargas
elctricas en su superficie les confiere propiedades de absorcin.
Las macromolculas protenicas en ocasiones estn compuestas por una
sola cadena polipeptdica; en tal caso reciben el nombre de monomricas.
Cuando la protena esta formada por varias cadenas polipeptdicas que
pueden o no ser idnticas entre s, reciben el nombre de oligomricas.
Existen 20 -aminocidos, como sillares para la formacin de protenas,
enlazados por uniones cabeza-cola, llamadas : Enlace Polipeptdico.
COMPOSCN DE LAS PROTENAS
Todas las protenas contienen:
Carbono
Hidrgeno
Nitrgeno
Oxgeno
Y otros elementos tales como:
Azufre
Hierro
Fsforo
Cinc
55
6"$ NI?ELES DE ES%RU&%URA R'%EI&A Y ENLA&ES @UE L'S
ES%A7ILITAN 8UEN%E DE !IDRAGEN'1 ENLA&E DISULEUR'1
A%RA&&IAN ELE&%R'S%B%I&A1 A%RA&&IAN !IDR'EA7I&A1
EUERTAS DE ?AN DER UAALS9
ESTRUCTURA PRMARA
La estructura primaria es la secuencia de aminocidos de la protena. Nos
indica qu aminocidos componen la cadena polipeptdica y el orden en que
dichos aminocidos se encuentran. La funcin de una protena depende de
su secuencia y de la forma que sta adopte.
Caractersticas.-
Secuencia de aminocidos
Enlace peptdico
Estructura lineal
Semirrgida
Ala - Val Leu le Trp Fen Asp Glu Lis Gli - Fen
ESTRUCTURA SECUNDARA
La estructura secundaria es la disposicin de la secuencia de aminocidos
en el espacio. Los aminocidos., a medida que van siendo enlazados
durante la sntesis de protenas y gracias a la capacidad de giro de sus
enlaces, adquieren una disposicin espacial estable, la estructura
secundaria.
Caractersticas.-
Relaciones geomtricas entre el conjunto de tomos
Se establecen uniones covalentes
nteracciones electrostticas
Puentes salinos
Fuerzas de Van Der Waals
Plegamientos de Hlices alfa y laminas beta
Existen dos tipos de estructura secundaria:
La (alfa)-hlice
La conformacin beta
56
La (alfa)-hlice
Esta estructura se forma al enrollarse helicoidalmente sobre s misma la
estructura primaria. Se debe a la formacin de enlaces de hidrgeno entre el
-C=O de un aminocido y el -NH- del cuarto aminocido que le sigue, se
estabiliza la forma espiralada debido a los enlaces de hidrgeno, de la
cadena principal del polipptido, se considera a la hlice alfa como una
estructura en forma de bastn, donde la cadena principal espiralada
representa la parte principal del bastn, mientras que las cadenas laterales
se orientan hacia fuera.
Caractersticas.-
Estn formadas por aminocidos qirales.
Se encuentran limitadas por factores estricos y
por las uniones que las estabilizan.
Contienen de 4 a 50 residuos, en un promedio de
doce.
Los grupos R se dirigen hacia fuera.
Parmetros.-
Posee 3.6 residuos de un giro a otro, en una
distancia de .54 nm.
La distancia entre los
residuos es de .15 nm.
La conformacin beta
En esta disposicin los aminocidos. no forman una hlice sino una cadena
en forma de zigzag, denominada disposicin en lmina plegada.
Caractersticas de la lamina beta.-
Los carbones alfa y sus grupos R alternan en un plano ligeramente arriba y
debajo de la cadena principal del polipptido.
Los polipptidos se alinean a lo largo y estn estabilizados por puentes de
hidrgeno que se forman entre los hidrgenos de los pptidos nitrogenados y
los de los carbonilos oxigenados de iras adyacentes.
57

mplican tramos de 5 a 10 aminocidos de diferentes regiones de estructuras
primarias
Se encuentra casi totalmente extendida.
Pueden ser paralelas o antiparalelas, determinado segn la direccin de la
cadena polipeptdica.
Puede estar conformada por dos a quince cordones y son comunes donde
hay laminas mixtas.
Son caractersticas de las protenas globulares.
Hoja plegada beta antiparalela,
los grupos R estn arriba y abajo
del plano de la hoja y los puentes
de hidrgeno estn agrupados
por pares y estabilizan la
conformacin de la hoja beta.
ESTRUCTURA TERCARA
La estructura terciaria informa sobre la disposicin de la estructura
secundaria de un polipptido al plegarse sobre s misma originando una
conformacin globular.
En definitiva, es la estructura primaria la que determina cul ser la
secundaria y por tanto la terciaria.
Esta conformacin globular facilita la solubilidad en agua y as realizar
funciones de transporte, enzimticas , hormonales, etc.
Esta conformacin globular se mantiene estable gracias a la existencia de
enlaces entre los radicales R de los aminocidos. Aparecen varios tipos de
enlaces:
58


El puente disulfuro entre los radicales de aminocidos que tiene azufre, los
puentes de hidrgeno, los puentes elctricos y las interacciones hidrfobas.
Estructura terciaria de una protena
globular, constituida por 4 beta alfa
beta consecutivas en los dos sentidos
estructurales primarios y terciario.
La estructura terciaria se organiza en
unidades relativamente independientes
pero estructuralmente conectadas llamadas dominios, los cuales actan
como unin con ligandos especficos, estos ltimos pueden estar en contacto
con residuos de ms de un dominio.
ESTRUCTURA CUATERNARA
Esta estructura informa de la unin, mediante enlaces dbiles ( no
covalentes) de varias cadenas polipeptdicas con estructura terciaria, para
formar un complejo proteico. Cada una de estas cadenas polipeptdicas
recibe el nombre de protmero.
El nmero de protmeros vara desde dos como en la hexoquinasa, cuatro
como en la hemoglobina, o muchos como la cpsida del virus de la
poliomielitis, que consta de 60 unidades proteicas.
En base a su numero de protomeros, se clasifican en bimricas o
tetramricas, tambin pueden ser homodimeras o heteroligomericas, las
cuales se caracterizan por protomeros iguales o diferentes con las mismas
funciones.
59
PUENTES DE HDRGENO
Se produce cuando tomos hidrgenos con positividad relativa son atrados
por tomos con negatividad relativa. La interaccin de un tomo H unido a
un tomo electronegativo como el nitrgeno, oxigeno y azufre.
La formacin de un enlace hidrgeno no implica el intercambio de
electrones, ni que se comparten pares electrones. Se establece entre los
tomos que forman uniones peptdicas.
Los enlaces hidrgeno son dbiles, a menudo se forman muchos enlaces
hidrgeno dentro de una molcula o entre molculas distintas y, as, la fuerza
conjunta de los enlaces de hidrgeno es capaz de estabilizar la estructura de
molculas como protenas y cidos nucleicos.
Los enlaces hidrgeno se rompen con mayor facilidad que en los enlaces
covalentes, ya que su fuerza es menor, mas cuando aumenta la temperatura
ENLACES DSULFURO
Cuando en la estructura primaria de un polipptido existe mas ce una
CSTENA, es posible que se formen uniones disulfuro (por oxidacin de
grupos SH) entre diferentes segmentos de una misma cadena polipeptdica
o entre diferentes segmentos de una cadena polipeptdica, dependiendo
donde se encuentran colocadas las cisteinas.


S S
ATRACCN ELECTROSTTCA
Tambin denominado enlaces iongenos, se producen cuando un ion o un
grupo de iones son atrados por un ion o grupo de iones con carga opuesta.
Entre las cadenas laterales de los aminocidos, se requiere que las cadenas
con cargas opuestas se dispongan en el espacio de tal manera, que estas
atraerse. As, el ambiente altamente inico del medio intracelular bastara
para separar las cargas opuestas que se encuentran interactuando en la
protena. El medio intracelular cuyo solvente principal es el agua, posee una
constante dielctrica muy alta.
60

FUERZAS DE VAN DER WAALS
Pueden ser de atraccin o de repulsin y se debe a que se crean
desequilibrios transitorios y aleatorios cuando se comparten los electrones de
un enlace covalente. Un tomo es atrado hacia otro, porque la distribucin
asimtrica de sus nubes electrnicas produce la aparicin de polos en cada
tomo, y estos tomos se atraen al interactuar el polo negativo de unos con
el polo positivo de otros. La distancia de separacin entre dos tomos en
que la atraccin es mxima, se llama distancia de Van Der Waals. Solo se
establece cuando los tomos quedan situados en cierta disposicin en el
espacio que permite la interaccin entre ellos.
La atraccin de Van Der Waals con distancia optima entre dos tomos es
dbil, de todos modos estabiliza la conformacin de la molcula .
Hlice alfa, donde se muestran las uniones de
Van Der Waals, en donde casi no hay
espacio libre en el interior de la clula
61


ATRACCONES HDROFBCAS
En aminocidos que poseen cadenas laterales apolares existe la tendencia a
segregarse del contacto con el solvente acuoso y a formar estructuras con
caractersticas miscelares; mientras el resto de las cadenas laterales de los
aminocidos que forman la protena, aquellas que tienen caractersticas
polares quedan situadas en contacto con el solvente. De ello dependen las
zonas en que la cadena polipeptdica se dobla hacia el interior de la
molcula.
Hlice alfa donde se indican los enlaces que la estabilizan, puentes de
hidrgeno, atraccin hidrofbica, fuerzas de Van Der Waals, enlace disulfuro
y atraccin electrosttica.
62
F"$ DESNA%URALITA&IAN R'%EI&A
DESNATURALZACN
Muchas molculas proteicas slo retienen su actividad biolgica dentro de
una fluctuacin muy limitada de temperatura y de pH. La exposicin de
protenas solubles o globulares a pH extremos o a temperaturas elevadas,
les hace experimentar un cambio conocido como desnaturalizacin, el efecto
ms visible del cual, consiste en un descenso de su solubilidad. Puesto que
los enlaces qumicos covalentes del esqueleto peptdico de las protenas no
se rompen durante este tratamiento relativamente suave, se ha llegado a la
conclusin que la estructura primaria permanece intacta. La mayor parte de
las protenas globulares experimentan el proceso de desnaturalizacin
cuando se calientan por encima de 60-701C. La formacin de un cogulo
insoluble blanco cuando se hierve la clara de huevo es un ejemplo comn de
desnaturalizacin trmica.
La consecuencia ms significativa de la desnaturalizacin es que las
protenas pierden su actividad biolgica caracterstica, Por ejemplo, al
calentar los enzimas se suele perder su capacidad cataltica.
La desnaturalizacin consiste en el desplegamiento de la estructura
nativa plegada caracterstica de la cadena polipeptdica de las molculas de
las protenas globulares. Cuando la agitacin trmica provoca que la
estructura nativa plegada se desarrolle o se distienda, originando una cadena
libremente ondulada, la protena pierde su actividad biolgica. Aunque cada
tipo de protena posee una composicin fija de aminocidos, as como una
determinada secuencia, establecida durante su biosntesis, la secuencia
aminocida no confiere directamente a la protena su funcin biolgica o
actividad. Sin embargo, la secuencia aminocida determina en ltimo
extremo la actividad biolgica de la protena ya que de ella depende la
conformacin nativa o estado de plegamiento de la molcula proteica,
gracias a las interacciones recprocas entre las cadenas laterales de
aminocidos, as como entre el disolvente y solutos.
Esta conclusin es consecuencia del descubrimiento, de que la
desnaturalizacin o desplegamiento de las protenas nativas, que origina
formas enrolladas al azar, desprovistas de actividad biolgica, no es un
proceso irreversible como se crea. Se han observado muchos casos en que
una molcula desplegada recupera su forma nativa en el tubo de ensayo, en
un proceso que recibe el nombre de renaturalizacin. Si la protena
desnaturalizada fuese un enzima, puede tambin recuperar su actividad
cataltica por renaturalizacin, sin ningn cambio en la especificidad de la
reaccin catalizada. Sin embargo, la renaturalizacin de una protena
desnaturalizada no desarrolla ninguna actividad biolgica que no se hallase
63
ya presente en la protena original. Estos hechos indican, por tanto, que la
secuencia de aminocidos en la cadena polipeptdica contiene la informacin
requerida para especificar su conformacin plegada nativa, y que esta
conformacin nativa determina su actividad biolgica.
Una protena desnaturalizada presenta propiedades diferentes a cuando se
encuentra en su estado nativo como son; prdida de solubilidad, modificacin
en la capacidad de fijacin de agua, prdida de la actividad biolgica,
incremento de la susceptibilidad al ataque de proteasas, incremento de la
viscosidad intrnseca, incapacidad de cristalizar, incremento en la reactividad
qumica, cambios en la conductividad elctrica y variaciones en el espectro
de absorcin y en el punto isoelctrico.
Cabe mencionar que durante la desnaturalizacin existe un rompimiento de
las uniones no covalentes ya antes mencionadas, persistiendo solamente los
enlaces peptdicos, y por lo tanto su estructura primaria.
64
-"$MM%'D'S U%ILITAD'S EN LA URIEI&A&IAN 8RE&II%A&IAN
SALINA1 &R'MA%'GRAEOA DE EP&LUSIAN M'LE&ULAR1
&R'MA%'GRAEOA DE IN%ER&AM7I' IANI&'1 &R'MA%'GRAEOA DE
AEINIDAD1 &R'MA%'GRAEOA LI@UIDA1 ELE&%R'E'RESIS91 Y EN LA
DE%ERMINA&IAN DE LA &'M'SI&IAN 8!IDRALISIS9 DE LAS
R'%EONAS"
MTODOS DE SEPARACN DE PROTENAS.
Desde el siglo pasado las separaciones analticas se llevaban a cabo por
mtodos clsicos como son la precipitacin, destilacin y extraccin. Los
crecientes esfuerzos por conocer ms sobre la composicin y funcin de las
protenas han obligado a los cientficos a buscar tcnicas, cada vez, ms
precisas.
Actualmente las separaciones analticas se realizan fundamentalmente por
cromatografa y electroforesis.
La cromatografa comprende un conjunto importante y diverso de mtodos
que permite a los cientficos separar componentes estrechamente
relacionados en mezclas complejas, lo que en muchas ocasiones resulta
imposible por otros medios. Se pueden separar molculas en funcin de sus
cargas, tamaos y masas moleculares. Tambin a travs de la polaridad de
sus enlaces, sus potenciales redox, etc.
La cromatografa no solo permite la separacin de los componentes de una
mezcla, sino tambin su identificacin y cuantificacin. El anlisis cualitativo
est basado en la medida de parmetros cromatogrficos (tiempos y
volmenes de retencin) mientras que el anlisis cuantitativo est basado en
la medida de alturas o reas de picos cromatogrficos que se relacionan con
la concentracin. La columna cromatogrfica y la forma con la que se disea,
constituye el corazn de la separacin.
En todas las separaciones cromatogrficas la muestra se desplaza con una
fase mvil, que puede ser un gas, un lquido o un fluido supercrtico. La fase
mvil puede pasarse a travs de una fase estacionaria, con la que es
inmiscible y que se fija a una columna o a una superficie slida. Las dos
fases se eligen de forma, que los componentes de la muestra se distribuyen
de modo distinto entre la fase mvil y la fase estacionaria.
Aquellos componentes que son fuertemente retenidos, por la fase
estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase mvil; por el
contrario los componentes que se unen dbilmente a la fase estacionaria, se
mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los
componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que
pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente. Estos resultados se
recogen en forma de grficos llamados cromatogramas.
65
Los mtodos cromatogrficos se pueden clasificar segn la forma en que la
fase mvil y la fase estacionaria se pongan en contacto. As en la
cromatografa de columna, un tubo estrecho contiene la fase estacionaria a
travs de la cual se hace pasar la fase mvil por presin. En la cromatografa
en plano, la fase estacionaria se fija sobre una placa plana o a los intersticios
de un papel; en este caso la fase mvil se desplaza a travs de la fase
estacionaria por capilaridad o por gravedad.
Las tres clases de cromatografa desde un ngulo ms general son
cromatografa de lquidos, cromatografa de gases y cromatografa de fluidos
supercrticos. Como su nombre lo indica, la fase mvil en las tres tcnicas
son lquido, gas y fluido supercrtico respectivamente.
Solo la cromatografa de lquidos es la que puede llevarse acabo en columna
o sobre superficies planas, por otra parte tanto la de gas como la de fluidos
supercrticos estn restringidas a los procedimientos en columna de tal
manera que las paredes de la columna contienen la fase mvil.
La tcnica ms usada es la cromatografa lquida de alta resolucin, HPLC
por su sensibilidad, fcil adaptacin a las determinaciones cuantitativas
exactas, su idoneidad para la separacin de especies no voltiles o
termolbiles y su aplicacin a sustancias de primordial inters en la industria,
como son los aminocidos, protenas, cidos nucleicos, hidrocarburos,
carbohidratos, entre otros. Se ofrece a continuacin un esquema relativo a
este mtodo de separacin:
LOS MTODOS CROMATOGRFCOS
La cromatografa lquida la podemos diferenciar en cuatro grupos:
C. de reparto: separa los solutos basndose en la solubilidad
C. de adsorcin: se basa en la afinidad de adsorcin
C. de exclusin: separa solutos segn el peso molecular
C. de intercambio inico: separa solutos segn la carga inica
CROMATOGRAFA DE REPARTO
La cromatografa de reparto est formada por la cromatografa Lquido-
Lquido y la cromatografa unida qumicamente. Estas tcnicas se
diferencian en la forma en que se retiene la fase estacionaria sobre las
partculas del soporte relleno. En el segundo caso, como su nombre lo
indica, la fase estacionaria se une qumicamente a la superficie del
soporte.
66
En general los soportes para casi todos los rellenos de fases unidas
qumicamente se preparan con slice rgida o composiciones donde la
slice es el elemento bsico. Estos slidos estn formados por partculas
mecnicamente resistentes, porosas y uniformes.
Los rellenos de columna en la cromatografa de fase unida qumicamente se
clasifican como de fase inversa cuando el recubrimiento enlazado tiene
carcter no polar, y de fase normal cuando el recubrimiento contiene
grupos funcionales polares.
CROMATOGRAFA DE ADSORCN
La cromatografa de adsorcin o Lquido-Slido es la forma clsica de la
cromatografa de lquidos. Ha sufrido algunas transformaciones que la
han convertido en un mtodo importante de la HPLC.
Las nicas fases que se utilizan en este tipo de cromatografa son la slice y
la almina, siendo la primera la preferida.
Es adecuada para compuestos no polares probablemente con masas
moleculares inferiores a 5 000. Los mtodos de la cromatografa de
adsorcin y reparto tienden a ser complementarios, aunque en algunos
casos se superponen.
En general la cromatografa Lquido-Slido es ms adecuada para muestras
que son solubles en disolventes no polares y por ello tienen solubilidad
limitada en disoluciones acuosas que son las que se utilizan en
cromatografa de reparto en fase inversa. En este tipo de cromatografa
tambin se pueden separar compuestos con diferentes grupos
funcionales. Una caracterstica particular de este mtodo es su
capacidad para diferenciar compuestos ismeros en mezclas.
CROMATOGRAFA DE EXCLUSN
La cromatografa de exclusin, tambin llamada de filtracin en gel o
cromatografa de permeacin en gel, se basa en la diferencia de
penetracin de las molculas en los poros de la fase estacionaria debido
a que la separacin obtenida depende del tamao de la molcula. El
tiempo de elusin es proporcional al peso molecular de los mismos, por
lo que no es muy usada con los compuestos de alto peso molecular. Este
tipo de separacin por tamao difiere de las dems tcnicas de
cromatografa en que no existen interacciones fsicas o qumicas entre el
analito y la fase estacionaria. Es una tcnica reproducible, escalable y
rpida.
67
La fase fija est formada por partculas polimricas o de slice que contienen
una red uniforme de poros por los que pueden penetrar las molculas de
pequeo tamao. Las molculas de tamao grande se excluyen
totalmente y son eludas en primer lugar, mientras que las de pequeo
tamao tienen acceso a todo el volumen poroso y son las ltimas que se
eluyen; de esto se deduce que el volumen disponible para las molculas
pequeas es mayor que para las grandes. Por lo tanto las molculas se
eluyen por su tamao decreciente. En resumen los factores que
determinan la separacin de las molculas son el tamao del poro, el
tamao de la partcula y el flujo de elusin.
Los diferentes tipos de partculas usadas deben ser estables, mecnica y
qumicamente, tener bajo contenido en grupos inicos, uniformidad de
poro y tamao. Los compuestos pueden ser derivados de dextranos
(Sephadex), derivados de agarosa (Sepharosa), derivados de
acrilamidas (Biogel P) y esferas de vidrio. Hay diferentes tamaos de
partcula para un gel: a menor tamao mayor resolucin y menor gasto
en la columna.
Este tcnica se emplea en la separacin de protenas de alimentos,
determinacin de glucosa y fructosa en zumos de fruta, etc.
CROMATOGRAFA DE NTERCAMBO NCO
La cromatografa de intercambio
inico est basada en la
atraccin entre iones del
soluto y puntos cargados
que existen en la fase
estacionaria. En el caso de
intercambiadores aninicos,
grupos cargados
positivamente en la fase
estacionaria atraen aniones
del soluto. Los
intercambiadores catinicos
contienen puntos cargados
negativamente que atraen
catines del soluto.
68
Los intercambiadores inicos se clasifican en cidos o bsicos, fuertes o
dbiles. Las resinas cidas fuertes siguen ionizadas incluso en
disoluciones muy cidas, en cambio las resinas cidas dbiles se
protonan a un pH prximo a 4 y pierden su capacidad de intercambio
catinico. Los grupos muy bsicos de amonio cuaternario siguen siendo
catinicos a cualquier valor de pH. Los bsicos dbiles de amonio
terciario se desprotonan en disoluciones moderadamente bsicas y
pierden entonces su capacidad.
Las resinas de intercambio inico tienen aplicacin en estudios donde
intervienen molculas pequeas (PM=500) que pueden penetrar en los
poros pequeos de la resina. Los intercambiadores inicos de
poliestireno son tan grandes que las macromolculas muy cargadas,
como las protenas, se pueden enlazar irreversiblemente a ellos.
Los de celulosa y dextranos sirven para intercambio inico de
macromolculas. Los geles de intercambio inico se usan en el caso de
molculas grandes (protenas y cidos nucleicos). Cuando las
separaciones exigen condiciones qumicas fuertes se emplean
intercambiadores inicos inorgnicos.
Todas estas tcnicas tienen en comn la existencia de una fase estacionaria
a travs de la cual fluye una fase mvil, as como la presencia de un
mecanismo de inyeccin de la muestra y un mecanismo de deteccin de
los diferentes componentes separados.
69
LA ELECTROFORESS
La electroforesis fue desarrollada por primera vez por el qumico sueco Arne
Tiselius, merecedor del Premio Nobel en 1948 por sus trabajos
realizados en esta esfera. La electroforesis es una tcnica analtica de
separacin de fundamento cintico basada en el movimiento o migracin
de las macromolculas disueltas en un determinado medio (solucin
tampn de electroforesis), a travs de una matriz o soporte reticulado
como resultado de la accin de un campo elctrico. El comportamiento
de la molcula viene dado por su movilidad electrofortica y sta por la
carga, tamao y forma de la misma. Cuanto mayor es la relacin
carga/tamao ms rpido migra un in en el seno del campo elctrico.
Esta tcnica tiene como ventaja su capacidad de separar macromolculas de
inters en la industria biotecnolgica y qumica. Ha sido un mtodo muy
til para la separacin de protenas (enzimas, hormonas) y cidos
nucleicos (DNA y RNA) con gran resolucin.
En un sistema electrofortico pueden originarse distintos fenmenos que
afectan la separacin de las sustancias:
DFUSN
Este fenmeno es provocado por la existencia de gradientes de
concentracin que favorecen el transporte hacia las zonas de menor
concentracin de cada especie. Afecta tanto a partculas cargadas como
no cargadas. Las molculas tienden a moverse de una forma aleatoria
debido a que poseen energa cintica propia. Esto es lo que se denomina
difusin. Con un aumento de la temperatura aumentar la difusin por un
incremento de la energa cintica.
MGRACN
Es el movimiento producido por una fuerza externa que es impuesta al
medio, en este caso, el campo elctrico y su intensidad.
FLUJO TRMCO
Al pasar una corriente elctrica a travs de un sistema que origina una
resistencia dada, se produce calor. Por tanto el sistema electrofortico no
es isotrmico. En general la fase lquida se mueve hacia las zonas de
menor temperatura, lo que origina un transporte de las partculas de
inters no debido a la migracin.
FRCCN
La friccin con el solvente dificultar el movimiento (es decir, al moverse los
solutos chocarn con las molculas del solvente que estn en su
camino), lo que genera una fuerza que se opone al movimiento.
70
La suma de todos estos factores provoca que las molculas no migren de
una manera uniforme, de modo que, si las molculas son colocadas en
un cierto lugar de la solucin, los iones comenzarn a moverse formando
un frente cuya anchura aumentar con el tiempo. Para reducir esta
anchura podemos reducir el movimiento de las molculas empleando un
medio que oponga ms resistencia a dicho movimiento.
ELECTROFORESS CONVENCONAL
La electroforesis convencional ha sido utilizada durante muchos aos para
separar especies complejas de elevado peso molecular de inters
biolgico y bioqumico. Las separaciones se llevan a cabo sobre una
capa delgada y plana o placa de un gel semislido y poroso que contiene
un tampn acuoso en el interior de sus poros. Esta ser la sustancia
encargada de ofrecer resistencia al movimiento de las molculas,
controlando as su migracin uniforme.
Mediante esta tcnica se pueden separar varias muestras simultneamente.
Dichas muestras se depositan sobre el gel, se aplica un potencial de
corriente continua a travs del mismo durante un tiempo fijo. Cuando las
separaciones se han completado se interrumpe el paso de corriente y las
especies separadas se tien para visualizarse.
La electroforesis en gel es muy utilizada en la deteccin, control de pureza,
caracterizacin, cuantificacin (por comparacin con controles) as como
preparacin y purificacin (por extraccin de bandas desde el gel) de
molculas y fragmentos de DNA y RNA.
Los geles que se emplean son geles tridimensionales de polmeros
ramificados que tienen los espacios entre ramificacin rellenos de
lquido. Las redes de polmeros no solo reprimen la conveccin sino que
tambin actan como cribas que pueden retardar y hasta bloquear la
migracin de los analitos polimricos ms grandes. En cambio los iones
pequeos pueden moverse libremente a travs de la estructura porosa
del gel. De este modo la electroforesis en gel tiene dos mecanismos de
separacin: electroforesis, que separa por la relacin carga/tamao y
tamizado, que separa mayormente por tamao. Los geles ms comunes
son agarosa y poliacrilamida.
La agarosa es un polmero derivado de un polisacrido neutro, que gracias a
su poder de gelificacin y propiedades fsico-qumicas, lo han convertido
en el soporte ms comn para electroforesis en el rea de Biologa
Molecular. La poliacrilamida es un polmero formado a partir de
acrilamida y N,N metilenbisacrilamida. La concentracin de ambos
reactivos define el grado de reticulacin del gel.
71
Ambos geles tienen en comn que adquieren la misma forma y estn
prcticamente libres de cargas inicas. Esto es importante para evitar
que la disolucin tampn se desplace por el gel cuando se active el
campo elctrico.
HDRLSS
La hidrlisis de las protenas termina por fragmentarlas en a -aminocidos.
Se basa en el rompimiento dela estructura primaria de la protena por
intervencin de una molcula de agua. Existen 3 tipos de hidrlisis :
HDRLSS CDA
Se basa en la ebullicin prolongada de la protena con soluciones cida
fuertes (HCl y H2SO4). Este mtodo destruye completamente el
triptfano y parte de la serina y la treonina.
HDRLSS BSCA
Respeta los aminocidos que se destruyen por la hidrlisis anterior, pero con
gran facilidad, forma racematos. Normalmente se utiliza (NaOH e BaOH).
HDRLSS ENZMTCA
Se utilizan enzimas proteolticas cuya actividad es lenta y a menudo
incompleta, sin embargo no se produce racemizacin y no se destruyen
los aminocidos; por lo tanto es muy especfica.
72
/$ &LASIEI&A&IAN DE LAS R'%EINAS EN 7ASE A SU E'RMA1
&'M'SI&IAN Y EUN&IAN 7I'LAGI&A
Las protenas poseen veinte aminocidos, los cuales se clasifican en:
glicina, alamina, valina, leucina, isoleucina, fenil, alanina, triptfano, serina,
treonina, tirosina, prolina, hidroxiprolina, metionina, cistena, cistina, lisina,
arginina, histidina, cido asprtico y cido glutmico.
SEGN SU COMPOSCN
Pueden clasificarse en protenas "simples" y protenas "conjugadas".
Las "simples" o "holoprotenas" son aquellas que al hidrolizarse producen
nicamente aminocidos, mientras que las "conjugadas" o "heteroprotenas"
son protenas que al hidrolizarse producen tambin, adems de los
aminocidos, otros componentes orgnicos o inorgnicos. La porcin no
proteica de una protena conjugada se denomina "grupo prosttico". Las
protenas conjugadas se subclasifican de acuerdo con la naturaleza de sus
grupos prostticos.
La siguiente tabla muestra la clasificacin completa.

Conjugadas
Protenas conjugadas
Nombre Componente no proteico
Nucleoprotenas cidos nucleicos
Lipoprotenas Lpidos
Fosfoprotenas Grupos fosfato
Metaloprotenas Metales
Glucoprotenas Monosacridos

73
SEGN SU CONFORMACN
Se entiende como conformacin, la orientacin tridimensional que adquieren
los grupos caractersticos de una molcula en el espacio, en virtud de la
libertad de giro de stos sobre los ejes de sus enlaces. Existen dos clases de
protenas que difieren en sus conformaciones caractersticas: "protenas
fibrosas" y "protenas globulares".
Las protenas fibrosas
Las protenas fibrosas se constituyen por cadenas polipeptdicas alineadas
en forma paralela. Esta alineacin puede producir dos macro-estructuras
diferentes: fibras que se trenzan sobre si mismas en grupos de varios haces
formando una "macro-fibra", como en el caso del colgeno de los tendones o
la a-queratina del cabello; la segunda posibilidad es la formacin de lminas
como en el caso de las b-queratinas de las sedas naturales.
Las protenas fibrosas poseen alta resistencia al corte por lo que son los
principales soportes estructurales de los tejidos; son insolubles en agua y en
soluciones salinas diluidas y en general ms resistentes a los factores que
las desnaturalizan.
Las protenas globulares
Las protenas globulares son conformaciones de cadenas polipeptdicas que
se enrollan sobre si mismas en formas intrincadas como un "nudillo de hilo
enredado". El resultado es una macro-estructura de tipo esfrico.
La mayora de estas protenas son solubles en agua y por lo general
desempean funciones de transporte en el organismo. Las enzimas, cuyo
papel es la catlisis de las reacciones bioqumicas, son protenas globulares.
SEGN SU FUNCN
La diversidad en las funciones de las protenas en el organismo es quiz la
ms extensa que se pueda atribuir a una familia de biomolculas.
Enzimas
Son protenas cuya funcin es la "catlisis de las reacciones bioqumicas".
Algunas de estas reacciones son muy sencillas; otras requieren de la
participacin de verdaderos complejos multienzimticos. El poder cataltico
de las enzimas es extraordinario: aumentan la velocidad de una reaccin, al
menos un milln de veces. Las enzimas pertenecen al grupo de las protenas
globulares y muchas de ellas son protenas conjugadas.
74
Protenas de transporte.
Muchos iones y molculas especficas son transportados por protenas
especficas. Por ejemplo, la hemoglobina transporta el oxgeno y una porcin
del gas carbnico desde y hacia los pulmones, respectivamente. En la
membrana mitocondrial se encuentra una serie de protenas que transportan
electrones hasta el oxgeno en el proceso de respiracin aerbica.
Protenas del movimiento coordinado.
El msculo est compuesto por una variedad de protenas fibrosas. Estas
tienen la capacidad de modificar su estructura en relacin con cambios en el
ambiente electroqumico que las rodea y producir a nivel macro el efecto de
una contraccin muscular.
Protenas estructurales o de soporte.
Las protenas fibrosas como el colgeno y las a-queratinas constituyen la
estructura de muchos tejidos de soporte del organismo, como los tendones y
los huesos.
Anticuerpos
Son protenas altamente especficas que tienen la capacidad de identificar
sustancias extraas tale como los virus, las bacterias y las clulas de otros
organismos.
Proteoreceptores
Son protenas que participan activamente en el proceso de recepcin de los
impulsos nerviosos como en el caso de la "rodapsina" presente en los
bastoncillos de la retina del ojo.
Hormonas y protenas represoras
Son protenas que participan en la regulacin de procesos metablicos; las
protenas represoras son elementos importantes dentro del proceso de
transmisin de la informacin gentica en la biosntesis de otras molculas.
75
CLASFCACN DE LAS PROTENAS POR SU FUNCN BOLGCA.
Grupos, ejemplos y funcin.
Enzimas
1. HexoquinasaFosforila glucosa
2. Lactato-deshidrogenasa Deshidrogena lactato
3. Citocromo c Transfiere electrones
4. DNA~polimerasa Replica y repara DNA
Protenas de reserva
1. Ovoalbmina Protena de la clara de huevo
2. Casena Protena de la leche
3. Ferritina Reserva de hierro en el bazo
4. Gliadina Protena de la semilla de trigo
5. Ceina Protena de la semilla de maz
Protenas transportadoras
1. Hemoglobina Transporta 02 en la sangre de los vertebrados
2. HemocianinaTransporta 0, en la sangre de algunos invertebrados
3. Mioglobina Transporta 02 en el msculo
4. Seroalbmina Transporta cidos grasos en la sangre
5. ffi-Lipoprotena Transporta lpidos en la sangre
6. Globulina que liga hierro Transporta hierro en la sangre
7. Ceruloplasmina Transporta Cu en la sangre.
Protenas contrctiles
1. miosina Filamentos estacionarios en las miofibrillas
2. ActinaFilamentos mviles en las miofibrillas
3. Dinena Cilios y flagelos
Protenas protectoras en la sangre de los vertebrados
76
1. Anticuerpos Forman complejos con protenas extraas
2. Complemento Complejos con algunos sistemas antgeno-
anticuerpo
3. Fibrngeno Precursor de la fibrina en la coagulacin sangunea
4. Trombina Componente del mecanismo de coagulacin
5. Toxinas
6. Toxina de Clostridium botulinum Origina envenenamiento
bacteriano de los alimentos
7. Toxina diftrca Toxina bacteriana
8. Venenos de serpiente Enzimas que hidrolizan los
fosfoglicridos
9. RicinaProtena txica de la semilla del ricino.
Hormonas
1. nsulina Regula el metabolismo de la glucosa
2. Hormona adrenocorticotrpica Regula la sntesis de corticosteroides
3. Hormona del crecimiento Estimula el crecimiento de los huesos
Protenas estructurales
1. Protenas recubrimiento viral Cubierta alrededor del cromosoma
2. Glucoprotenas Recubrimientos celulares y paredes
3. a-Queratina Piel, plumas, uas, pezuas
4. Esclerotina Exoesqueletos de los insectos
5. Fibrina Seda de los capullos, telarafas
6. Colgeno Tejido conectivo fibroso (tendones, hueso,
cartlago)
7. Elastina Tejido conectivo elstico (ligamentos)
8. Mucoprotenas Secreciones mucosas, fluido sinovial
77
78
Bibliografa
Bioqumica de Harper, Robert K. Murray, Peter A Mayes, Daryl K. Granner y
Victor. W. Rodwell, 15 Edicin., Ed. El Manual Moderno, 2001
Lehinger Principios de Bioqumica, David L. Nelson, Michael M. Cox Ed.
Worth Publishers 3. edicin 2000 U.S.
Bioquimica tomo , Lubert Stryer, 3 Edicin, Ed. Revert, S. A., 1998
http: //www.monografias.com/trabajos13/prote/prote.shtml.
http: //www.asbcnet.org/Journal/abstracts/search/1997/0420-06a.htm
http://www.monografias.com/Biologia/index.shtml
http://depa.pquim.unam.mx/proteinas/autoev/prfun.html
http://www.ur.mx/cursos/diya/quimica/jescobed/separa.htm
http://www.arrakis.es/~lluengo/pproteinas.html
79
UNIDAD I?
ENTIMAS
#$ DEEINI&IAN Y &LASIEI&A&IAN DE ENTIMAS
CONCEPTO DE ENZMA
Las enzimas son protenas especializadas en la catlisis de las reacciones
biolgicas. Se encuentran entre las ms notables de las biomolculas
conocidas debido a su extraordinaria especificidad y a su poder cataltico,
que es mucho mayor que la de los catalizadores hechos por los hombres.
Nomenclatura
Muchas enzimas han sido designados aadiendo el sufijo asa- al nombre
del sustrato, es decir a la molcula sobre la cual la el enzima ejerce su
accin cataltica. Esta nomenclatura sin embargo, sin embargo, no siempre
ha resultado prctica, lo cual ha ocasionado que muchas enzimas que
muchas enzimas hayan recibido nombres que qumicamente son poco
informativos.
El nuevo sistema divide en las enzimas en seis clases principales, cada una
de las cuales se divide a su vez en subclases, de acuerdo con el tipo de
reaccin catalizada.
CLASFCACN DE ENZMAS
Oxidorreductasas
Catalizan diversas reacciones de oxidacin- reduccin y con frecuencia
utilizan enzimas como el dinucletido nicotinamida adenina (NAD
+
), su
derivado fosfato (NADP
+
), el dinucletido de flavina adenina o el lipoato.
Entre los nombres comunes de stas enzimas cabe citar deshidrogenasas,
oxidasas , peroxidasas y reductasas.
1.oxido-reductasas
(reacciones de xido-reduccin)
1.1 actan sobre
OH CH
1.2 actan sobre
O C =
1.3 actan sobre
= CH C
1.4 actan sobre
2
NH CH
1.5 actan sobre
NH CH
1.6 actan sobre NADH; NADPH
80
Transferasas
Catalizan la transferencia de grupos como el amino, el carboxilo, el carbonilo,
el metilo, el acilo, el glucosilo o el fosforilo. Las cinasas catalizan la
transferencia de grupos fosforilo de la adenosina trifosfato (ATP) a otros
nucletidos trifosfato.
Entre los nombres comunes estn en ste caso aminotransferasa, carnitina
acil transferasa y transcarboxilasa.
2. Transferasas (transferencia de grupos funcionales)
2.1 Grupos de un tomo de carbono
2.2 Grupos aldehdicos o acetnicos
2.3 Grupos acilos
2.4 Grupos glucosilos
2.7 Grupos fosfato
2.8 Grupos que contienen azfre
Hidrolasas
Catalizan la escisin de enlaces entre un tomo de carbono y algn otro
tomo por adicin de agua. Sus nombres comunes en ste caso los de la
esterasa, peptidasa, amilasa, fosfatasa , ureasa, pepsina tripsina y
quimotripsina.
3. Hidrolasas (reacciones de hidrlisis)
3.1 steres
3.2 Enlaces glucosidicos
3.4 Enlaces peptidicos
3.5 Otros enlaces C-N
3.6 Anhdridos de cido
Liasas
Catalizan la rotura de enlaces carbono-carbono, carbono-azufre, y ciertos
enlaces carbono-nitrogeno. Entre sus nombre encontramos la
descarboxilasa, aldolasa, citrato liasa, y deshidratasa.
4. Liasas (adicin a los dobles enlaces)
4.1
= C C
4.2
O C =
4.3
= N C
81
somerasas
Catalizan la racemizacin de ismeros pticos o geomtricos y ciertas
reacciones intramoleculares de oxido-reduccin.
Entre algunos de sus nombres encontramos: epimerasa, racemasa y mutasa.
5.somerasas (Reacciones de isomerizacin)
5.1 Racemasas
Ligasas
Catalizan la formacin de enlaces entre el carbono y el oxgeno, azfre,
nitrgeno y otros tomos.
La energa necesaria para la formacin del enlace deriva a menudo de la
hidrlisis del ATP; a ste grupo se refiere el tomo el trmino sintasa.
Algunos nombres son la tiocinasa y carboxilasa.
6. Ligasas (Formacin de enlaces con escisin de ATP)
6.1 C-O
6.2 C-S
6.3 C-N
6.4 C-C
6$ DEEINI&IAN Y &ARA&%EROS%I&AS DE !'L'ENTIMA1 A'ENTIMA1
&'EA&%'R1 &'ENTIMA1 GRU' R'S%M%I&'1 SUS%RA%'
COFACTORES ENZMTCOS
Adems del componente proteico, muchas enzimas requieren constituyentes
no proteicos para su funcin como catalizadores.
Estas sustancias accesorias reciben diversos nombres, como grupo
prosttico, cofactor o coenzima .El grupo prosttico es cualquier porcin no
aminoacdica de una protena que confiere a sta alguna propiedad especial.
Los cofactores son pequeas molculas orgnicas esenciales para la
catlisis.
Algunas enzimas requieren cofactores catinicos o aninicos inorgnicos.
El cofactor puede ser un in metlico o bien una molcula orgnica llamada
coenzima; algunas necesitan de ambos.
En tales enzimas el in metlico puede actuar como:
*centro cataltico primario
*como grupo puente para reunir el sustrato y el enzima, formando un
complejo de coordinacin.
*como agente estabilizante de la conformacin de la protena enzimtica en
su forma catalticamente activa.
82
El trmino coenzima se aplica a molculas orgnicas, derivadas a menudo
de una vitamina, y que son esenciales para la actividad de una enzima.
El complejo funcional completo de una protena y todos sus factores
accesorios necesarios reciben el nombre de holoenzima; la parte proteica,
libre de cofactores, se denomina apoenzima.
Sustrato es la sustancia sobre la cual acta la enzima.
HOLOENZMA

APOENZMA + COFACTOR (coenzima o Gpo.

Protstico)
Apoenzima:
-naturaleza proteica
-no dializable
-alto peso molecular
-termolbil
Cofactor:
-no proteico
-dializable
-bajo peso molecular
-termorresistente.
F$ ESE&IEI&IDAD ENTIMB%I&A" SI%I' A&%I?' &A%ALO%I&'" M'DEL'
DE LA VLLA?E Y &ERRADURAW
ESPECFCDAD ENZMTCA
Numerosos catalizadores inorgnicos (por ejemplo, el carbn vegetal o las
partculas finas de platino) muestran escasa especificidad por las sustancias
sobre las cuales ejerce su poder cataltico. As, un nmero limitado de
catalizadores seleccionados es suficiente para el desarrollo de gran parte de
trabajo de sntesis en la qumica orgnica de industrias y laboratorios. Por el
contrario, las enzimas son ms especficas. La ureasa, la enzima que
hidroliza la urea a dixido de carbono y amoniaco, posee una especificidad
casi absoluta por la urea. De igual modo, la catalasa es casi completamente
especfica en relacin con el perxido de hidrgeno al que convierte en agua
y oxgeno. La quimotripsina, una proteinasa intestinal, muestra una
especificidad algo menor por su sustrato. Prefiere escindir enlaces peptdicos
en los que un aminocido participante posea un anillo aromtico; sin
embargo, es indiferente con respecto al otro aminocido con enlace
peptdico. Adems, acta preferentemente sobre enlaces peptdicos en el
interior de una cadena aunque incluso sta condicin es relativa. Otras
enzimas proteolticas muestran distintos tipos de especificidad. La tripsina
83
hidroliza slo aquellos enlaces peptdico a los que la arginina o la lisina
aportan el grupo carboxilo.
STO ACTVO CATALTCO
La catalisis tiene lugar en el sitio activo
Una de la propiedad ms importante de las enzimas corresponde a su
capacidad para enlazar los reactantes, con un incremento en la
concentracin local de los reactantes, y por tanto en la velocidad local de la
reaccin. Las enzimas son catalizadores extremadamente eficientes y muy
selectivos. Para comprender estas propiedades distintivas de las enzimas,
primero se requiere definir el concepto de "sitio activo o "cataltico.
El gran tamao de las protenas, con respecto a los sustratos, condujo al
concepto de una regin restringida de la enzima, el "sitio activo, tenia a su
cargo la catlisis. nicialmente resultaba difcil comprender el motivo del gran
tamao de las enzimas, cuando, aparentemente, solo se requera una
porcin de su estructura para el enlace del sustrato y la catlisis.
Muchos reciduos aminoacilo contribuyen al sitio activo
Cules son las porciones de una enzima que contribuyen o forman parte del
sitio activo?. Esta pregunta se responde mejor al examinar la estructura
tridimencional de los complejos ternarios, formados por una enzima y dos
sustratos. Sin embargo, incluso en el estado cristalino, en presencia de todos
los sustratos, la catlisis tiene lugar, lo que complica la interpretacin de la
informacin. A pesar de esto, se ha demostrado la utilidad de examinar la
estructura de los denominados complejos ternarios abortivos, compuestos de
un sustrato y un producto, o de los complejos formados por el enzima, un
sustrato anlogo y un inhibidor. Estos complejos, que no pueden
transformarse, proporcionan informacin aproximada del sitio activo durante
la etapa inicial de la catlisis: el enlace del sustrato. Estos estudios muestran
que muchos residuos aminoacilo estn en contacto con los sustratos o los
coenzimas enlazados y, por tanto, constituyen parte del sitio activo.
Los sitios activos con frecuencia se localizan con hendiduras
En el caso de las enzimas formadas por una sola unidad el sitio activo con
frecuencia reside en una hendidura de la enzima. Uno de estos ejemplos
corresponde a la lisozima, una enzima presente en las lgrimas y en el moco
nasal, la cual lisa la pared celular de muchas bacterias grampositivas
transmitidas por el aire. Constituida por una cadena polipeptidica sencilla, de
129 residuos la lisozima posee una hendidura central profunda que alberga
un sitio catalico con 6 subsitios, los cuales enlazan varios sustratos. Los
residuos responsables de la ensicion del enlace, se localizan entre los sitios
D y E, cercanos a los grupos carboxilo del Asp 52 y el Glu 35. Al parecer,
este ultimo cede protones al enlace acetal del sustrato, mientras el Asp 52,
84
cargado negativamente, estabiliza desde la parte posterior al ion carbonio
resultante.
El sitio catalico de la ribonucleasa tambin se localiza en el interior de una
hendidura similar a la de la lisozima; transversales a esta se encuentran los
residuos His 12 el His 119 localizados, de acuerdo con la evidencia qumica,
en el sitio catalico.
Los sitios activos de las enzimas multimericas pueden localizarse en las
interfaces de las subunidades
En el caso de ciertas enzimas con mltiples polipptidos o subunidades, el
sitio activo reside en la interfase entre dichas subunidades. Los residuos
aminocido procedente de los dos sustratos, contribuyen al sitio activo, al
servir para enlazar los sustratos o para intervenir en la catlisis. Un ejemplo
corresponde a la enzima HMG-CoA reductasa, que es la enzima limitante de
la velocidad en la sntesis del colesterol.
MODELO DE LA LLAVE CERRADURA Y AJUSTE NDUCDO
El modelo de un sitio catalitico rigido explica muchas propiedades de las
enzimas.
El modelo de un sitio cataltico, propuesto por Mil Fischer, visualiz la
interaccin entre el sustrato y la enzima en trminos de una analoga
"cerradura y llave. Este modelo de cerradura y llave o de plantilla rgida,
sigue siendo til para la comprensin de ciertas propiedades de las enzimas,
por ejemplo, el enlace ordenado de dos o ms sustratos o la cintica de la
curva de saturacin de un sustrato sencillo.
Los sustratos inducen cambios de conformacion de la enzima
El modelo de Fischer explic la especificidad de las interacciones enzima-
sustrato, la rigidez del sitio activo de la enzima, implcita en dicho modelo,
resulto incapaz de explicar los cambios dinmicos que tienen lugar durante la
catlisis. Un modelo que considera ambos aspectos de la catlisis
enzimtica, corresponde al modelo del "ajuste inducido de Koshland. En el
modelo de Fisher, se presume que el sitio catlico esta preconfigurado para
ajustarce al sustrato. En el modelo del "ajuste inducido, el sustrato induce un
cambio en la conformacin de la enzima, de la misma manera en que la
introduccin de la mano en un guante, induce cambios en la forma del
guante. El enlace con el sustrato alinea los residuos de aminocidos u otros
grupos en la enzima, a una orientacin espacial correcta para el enlace del
sustrato, la catlisis o ambos. La enzima, a su vez, induce cambios
recprocos en los sustratos correspondientes, los cuales modifican la
orientacin y las configuraciones, hacia las de un estado de transicin y, por
tanto, dicha enzima utiliza la energa intrnseca del enlace, liberada por la
interaccin sustrato-enzima a fin de disminuir la AGF.
85
-$ ME&ANISM' DE A&&IAN DE LAS ENTIMAS "&INM%I&A ENTIMB%I&A"
E'RMA&IAN Y DEGRADA&IAN DE L'S ES%AD'S DE %RANSI&IAN
CNTCA ENZMTCA
La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por
enzimas. Estos estudios proporcionan informacin directa acerca del
mecanismo de la reaccin cataltica y de la especifidad del enzima. La
velocidad de una reaccin catalizada por un enzima puede medirse con
relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario purificar o aislar
el enzima. La medida se realiza siempre en las condiciones ptimas de pH,
temperatura, presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones
saturantes de sustrato. En estas condiciones, la velocidad de reaccin
observada es la velocidad mxima (Vmax). La velocidad puede determinarse
bien midiendo la aparicin de los productos o la desaparicin de los
reactivos.
Al seguir la velocidad de aparicin de producto (o de desaparicin del
sustrato) en funcin del tiempo se obtiene la llamada curva de avance de la
reaccin, o simplemente, la cintica de la reaccin. A medida que la reaccin
transcurre, la velocidad de acumulacin del producto va disminuyendo
porque se va consumiendo el sustrato de la reaccin (Figura de la derecha).
Para evitar esta complicacin se procede a medir la velocidad inicial de la
reaccin (v0). La velocidad inicial de la reaccin es igual a la pendiente de la
curva de avance a tiempo cero (Figura de la derecha). De esta forma, la
medida de v0 se realiza antes de que se consuma el 10% del total del
sustrato, de forma que pueda considerarse la [S] como esencialmente
constante a lo largo del experimento. Adems, en estas condiciones no es
necesario considerar la reaccin inversa, ya que la cantidad de producto
formada es tan pequea que la reaccin inversa apenas ocurre. De esta
forma se simplifican enormemente las ecuaciones de velocidad
86
Para estudiar la cintica enzimtica se mide el efecto de la concentracin
inicial de sustrato sobre la velocidad inicial de la reaccin, manteniendo la
cantidad de enzima constante. Si representamos v0 frente a [S]0 obtenemos
una grfica como la de la Figura de la derecha. Cuando [S]0 es pequea, la
velocidad inicial es directamente proporcional a la concentracin de sustrato,
y por tanto, la reaccin es de primer orden. A altas [S]0, el enzima se
encuentra saturada por el sustrato, y la velocidad ya no depende de [S] 0. En
este punto, la reaccin es de orden cero y la velocidad es mxima (Vmax).
FORMACN Y DEGRADACN DE ESTADOS DE TRANSCN
El concepto de estado de transicin es fundamental para la comprensin de
las catlisis de cualquier tipo, incluyendo la enzimatica. Por ejemplo,
considerese una reaccion de desplazamiento donde un grupo N que se
desprende, adherido en un principio a R, es desplazado por el grupo E:
E+R-L=E-R+L
En realidad este desplazamiento pasa por un estado de transicin,
E**R**L,cuya fornacion y desintegracin subsiguiente puede representarse
con dos "reacciones parciales, cada uno con un cambio caracteristico en
esnergia libre:
87
E+R-L=E**R**L
E**R**L=E-R+L
D
F
G
G

F
G
y
D
G son los cambios de energia libre que se producen en
la formacin y desintegracin del estado de transicin. El G , cambio de
energia libre relacionado con la reaccion global, es igual a la suma de las
energia libres de la formacin y degradacin del estado de transicin:

G =
F
G
+
D
G
TEORA CNTCA PARA LAS REACCONES QUMCAS
La teora cintica o de colisin:
a) Solo las molculas que se acercan una de otra a distancias para formar
enlaces, puede reaccionar.
b) Para cada reaccin qumica, hay una barrera energtica que debe
superarse para que la reaccin ocurra. Para que una colisin termine en
reaccin, las molculas reactantes deben poseer energa suficiente para
sobrepasar esta barrera energtica.
Cualquier cosa que eleve la energa cintica de las molculas reactantes,
abnata la barrera energtica para la reaccin o incremente la frecuencia de
colisin deber aumentar la velocidad de reaccin.
88
/$ EA&%'RES @UE AEE&%AN LA A&%I?IDAD ENTIMA%I&A
TEMPERATURA

ncrementa el nmero de molculas que pueden reaccionar, ya que aumenta
la energa cintica e incrementa la frecuencia de las colisiones. Este
incremento de la velocidad de reaccin no continua de manera indefinida,
dado que finalmente se alcanza una temperatura a la cual las molculas
reactantes ya no son estables.
Aunque la elevacin de la temperatura incrementa la velocidad de una
reaccin catalizada por enzimas, solo dentro de los limites de la temperatura.
Al principio la velocidad de una reaccin aumenta cuando la temperatura se
eleva, debido al incremento de las molculas reactantes. Mientras ms
tiempo se conserve una enzima a una temperatura a la cual su estructura es
apenas estable, tiene mayor probabilidad de experimentar desnaturalizacin.
El factor por el cual el proceso biolgico aumenta para un incremento de
temperatura de 10C es el coeficiente de temperatura o Q10.
89
EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTVDAD ENZMTCA
En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones
qumicas: por cada 10C de incremento, la velocidad de reaccin se
duplica. Las reacciones catalizadas por enzimas siguen esta ley
general. Sin embargo, al ser protenas, a partir de cierta temperatura,
se empiezan a desnaturalizar por el calor. La temperatura a la cual la
actividad cataltica es mxima se llama temperatura ptima (Figura de
la derecha). Por encima de esta temperatura, el aumento de velocidad
de la reaccin debido a la temperatura es contrarrestado por la prdida
de actividad cataltica debida a la desnaturalizacin trmica, y la
actividad enzimtica decrece rpidamente hasta anularse.
90
P H
Cuando se mide la actividad enzimtica a diversos PH, la actividad optima
(5.0 Y 9.0).
La forma de las curvas de PH optimo esta determinada por:
1) Desnaturalizacin de la enzima a valores de PH altos o bajos
2) Alteraciones en el estado de carga de la enzima y/o sustrato. Para la
enzima los cambios de carga pueden afectar la actividad, ya sea
combinando la estructura o la carga en un residuo que funciona para
ligar el sustrato o en la catlisis.

Una enzima cargada negativamente (Enz-) que reacciona con un sustrato
positivamente cargado (SH+).
Enz- + SH+ EnzSH

A PH bajo, la Enz- adquiere protones y pierde su carga negativa:

Enz- + H+ EnzH
A valores PH altos, SH+ se ioniza y pierde su carga positiva:
SH+ S + H+
Las enzimas pueden experimentar cambios de conformacin con las
variaciones del PH "depende del comportamiento cido-bsico de los
reactantes.
El PH modifica los grupos ionizables de la enzima o del sustrato y pueden
desnaturalizar la enzima PH optimo es un
PH caracterstico en el cual su actividad enzimtica es mxima.
91
EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTVDAD ENZMTCA
Los enzimas poseen grupos qumicos ionizables (carboxilos -COOH;
amino -NH2; tiol -SH; imidazol, etc.) en las cadenas laterales de sus
aminocidos. Segn el pH del medio, estos grupos pueden tener
carga elctrica positiva, negativa o neutra. Como la conformacin de
las protenas depende, en parte, de sus cargas elctricas, habr un
pH en el cual la conformacin ser la ms adeuada para la actividad
cataltica (Figura de la derecha). Este es el llamado pH ptimo.

La mayora de los enzimas son muy sensibles a los cambios de pH. Desviaciones de pocas dcimas
por encima o por debajo del pH ptimo pueden afectar drsticamente su actividad. As, la pepsina
gstrica tiene un pH ptimo de 2, la ureasa lo tiene a pH 7 y la arginasa lo tiene a pH 10 (Figura de la
izquierda). Como ligeros cambios del pH pueden provocar la desnaturalizacin de la protena, los seres
vivos han desarrollado sistemas ms o menos complejos para mantener estable el pH intracelular: Los
amortiguadores fisiolgicos.
CONCENTRACON DEL SUSTRATO
92
Las reacciones enzimticas son tratadas como si tuvieran un solo sustrato y
un producto nico, la mayor parte de estas reacciones tienen dos o mas
sustratos y dos productos.

Si aumenta la concentracin del sustrato mientras que todas las dems
condiciones se conservan constantes, la velocidad inicial medida, vi. ( la
velocidad medida cuando hay muy poco sustrato ha reaccionado), crece
hasta un valor mximo, Vmx, y no mas.
La velocidad crece al aumentar la concentracin del sustrato hasta el
punto donde se dice que la enzima esta "saturada con el sustrato. La
velocidad inicial medida alcanza un valor mximo y no es afectada por el
incremento ulterior en la concentracin del sustrato.
En la saturacin se ocupan los sitios activos de la enzima por lo que no hay
capacidad para unirse y transformar el sustrato, debido a altas
concentraciones de sustrato.

* A bajas concentraciones de sustrato -------- factor limitante concentracin
del sustrato
* A altas concentraciones de sustrato -------- factor limitante concentracin
de la enzima

Cuando ya no hay sustrato ---- termina la reaccin ---- cae la curva.
La velocidad de reaccin se puede medir de dos formas:
a) por la desaparicin de los reactantes.
b) Por la aparicin de los productos.
CONCENTRACON DE LA ENZMA
La velocidad inicial de una reaccin es la velocidad medida antes de que se
haya formado suficiente producto para permitir que la reaccin inversa
ocurra. Adems la velocidad inicial de una reaccin enzimtica es siempre
proporcional a la concentracin de la enzima.

La concentracin de la enzima es directamente proporcional a la velocidad
de reaccin o inicial. Factor limitante: el sustrato porque si se termina
aunque haya mucha concentracin de enzima, la curva termina por caer.
93
EFECTO DE LAS CONCENTRACONES SOBRE LA ACTVDAD
ENZMTCA
La velocidad de una reaccin enzimtica depende de la concentracin de sustrato. La
Figura de la derecha muestra la velocidad de una reaccin enzimtica a 6
concentraciones distintas de sustrato.
Adems, la presencia de los productos finales puede hacer que la reaccin sea ms
lenta, o incluso invertir su sentido (Figura inferior).
NHBDORES

Se unen a la enzima en el mismo sitio que el sustrato que es el sitio cataltico
y otros en una regin mas alegada que es el sitio alostrico. Los inhibidores
se dividen en dos: reversibles e irreversibles, los reversibles se dividen en
competitivo y no competitivo los competitivos son complejo enzima inhibidor
(E), y el no competitivo es el complejo enzima inhibidor sustrato (ES). Y los
irreversibles son venenos enzimticos, forman enlace covalente, Son
metales pesados Pb, Hg (se unen a sistemas catalticos respiratorios sin
lugar especifico). Destruye a la enzima.
NHBDORES NOCOMPETTVOS
No hay competencia entre sustrato e inhibidor, es muy escasa con sustrato y
se une a un espacio diferente en la enzima. Los inhibidores reversibles no
competitivos disminuyen la velocidad mxima alcanzable con una cantidad
dada de enzima (reducen V mx.) pero por lo general no afectan a Km.
Puesto que sustrato e inhibidor pueden combinar en diferentes sitios es
posible la formacin de complejos EnZ y EnzS. Ya que EnzS puede
94
descomponerse para formar el producto a una velocidad menor que la de
EnzS, la reaccin puede retrasarse pero no impedirse.
No hay competencia entre si
Se puede unir a la enzima en cualquier otra parte "sitio alostrico
Modifica la conformacin de la enzima aunque aumente la cantidad de
sustrato
Puede retardar la formacin del complejo y la del producto
Km no se ve afectada porque si se alcanza la de la velocidad
mxima, solo que se tardara mas
Altera la velocidad mxima.
NHBDORES COMPETTVOS
La inhibicin competitiva ocurre en el sitio de unin del sustrato
(cataltico). Puede combinarse reversiblemente con la enzima formando un
complejo enzima-inhibidor (Enz) un lugar de un complejo EnzS. Cuando el
sustrato y el inhibidor se encuentran, compiten por los mismos sitios de
unin sobre la superficie de la enzima.
La velocidad de formacin del producto, que es el valor que se mide,
depende de la concentracin de EnzS. se fija firmemente a la enzima, hay
una cantidad escasa de enzima libre (Enz) disponible para combinarse con
S para formar EnzS y finalmente
Enz + P. Asi la velocidad de reaccin ser lenta. Una concentracin igual
de un inhibidor unido con menor fuerza no har disminuir la velocidad de la
reaccin tan marcadamente. A una concentracin fija de se agrega ms S.
Esto aumenta la probabilidad de que Enz se combine con S, en lugar de
hacerlo con . La proporcin de EnzS/ Enz y la velocidad de reaccin se
incrementa. A una concentracin suficientemente elevada de S, la
concentracin relativa de Enz desaparecer. Si esto es as, la velocidad de
reaccin catalizada ser la misma que en ausencia de .
95
EFECTO DE LOS NHBDORES SOBRE LA ACTVDAD ENZMTCA
Ciertas molculas pueden inhibir la accin cataltica de un enzima: son los
inhibidores. Estos inhibidores bien pueden ocupar temporalmente el centro
activo por semejanza estructural con el sustrato original (inhibidor
competitivo) o bien alteran la conformacin espacial del enzima, impidiendo
su unin al sustrato (inhibidor no competitivo) (Figuras inferiores).
nhibidor no competitivo
nhibidor no competitivo
96

CONSTANTE DE MCHAELS-MENTEN
Modelo cintico de michaelis-menten
Los estudios sistemticos del efecto de la concentracin inical del sustrato
sobre la actividad enzimtica comenzaron a realizarse a finales del siglo XX.
Ya en 1882 se introdujo el concepto del complejo enzima-sustrato como
intermediario del proceso de catlisis enzimtica. En 1913, Leonor Michaelis
(foto de la izquierda) y Maud Menten (foto de la derecha) desarrollaron esta
teora y propusieron una ecuacin de velocidad que explica el
comportamiento cintico de los enzimas.
Para explicar la relacin oservada entre la velocidad inicial (v0) y la
concentracin inicial de sustrato ([S]0) Michaelis y Menten propusieron que
las reacciones catalizadas enzimticamente ocurren en dos etapas: En la
primera etapa se forma el complejo enzima-sustrato y en la segunda, el
complejo enzima-sustrato da lugar a la formacin del producto, liberando el
enzima libre:
En este esquema, k1, k2 y k3 son las constantes cinticas individuales de
cada proceso y tambin reciben el nombre de constantes microscpicas de
velocidad. Segn esto, podemos afirmar que:
v1 = k1 [E] [S]
v2 = k2 [ES]
v3 = k3 [ES]
Se puede distinguir entre enzima libre (E) y enzima unido al sustrato (ES), de
forma que la concentracin total de enzima, [ET], (que es constante a lo largo
de la reaccin) es:
[ET] = [E] + [ES]
Como [E] = [ET] - [ES], resulta que: v1= k1[S] [ET] - k1 [S] [ES
Este modelo cintico adopta la hiptesis del estado estacionario, segn la
cual la concentracin del complejo enzima-sustrato es pequea y constante a
lo largo de la reaccin (Figura de la derecha). Por tanto, la velocidad de
formacin del complejo enzima-sustrato (v1) es igual a la de su disociacin
(v2+ v3):
v1 = v2 + v3
Adems, como [ES] es constante, la velocidad de formacin de los productos
es constante:
97
v = v3 = k3 [ES] = constante.
Como v1=v2+v3, podemos decir que:
Despejando [ES], queda que:
Siendo
En donde la expresin (k2+k3)/k1 se ha sustitudo por KM, o constante de
Michaelis-Menten. Este enlace nos
Aporta una explicacin sobre las razones que hacen de la KM un parmetro
cintico importante
Por lo tanto, en el estado estacionario, la velocidad de formacin del
producto es:
Para cualquier reaccin enzimtica, [ET], k3 y KM son constantes. Vamos a
considerar dos casos extremos:
A concentraciones de sustrato pequeas ([S] << KM) v = (k3 [ET]/KM) [S].
Como los trminos entre parntesis son constantes, pueden englobarse en
una nueva constante, kobs, de forma que la expresin queda reducida a: v =
kobs [S], con lo cual la reaccin es un proceso cintico de primer orden.
A concentraciones de sustrato elevadas ([S] >> KM), v = k3 [ET]. La velocidad
de reaccin es independiente de la concentracin del sustrato, y por tanto, la
reaccin es un proceso cintico de orden cero. Adems, tanto k3 como [ET]
son constantes, y nos permite definir un nuevo parmetro, la velocidad
mxima de la reaccin (Vmax): Vmax = k3 [ET], que es la velocidad que se
alcanzara cuando todo el enzima disponible se encuantra unido al sustrato.
Si introducimos el parmetro Vmax en la ecuacin general de la velocidad, (la
frmula recuadrada anteriormente), obtenemos la expresin ms conocida
de la ecuacin de Michaelis-Menten
Hay enzimas que no obedecen la ecuacin de Michaelis-Menten. Se dice
que su cintica no es Michaeliana. Esto ocurre con los enzimas alostricos,
cuya grfica v frente a [S] no es una hiprbola, sino una sigmoide (Figura de
la derecha). En la cintica sigmoidea, pequeas variaciones en la [S] en una
zona crtica (cercana a la KM) se traduce en grandes variaciones en la
velocidad de reaccin.
98
Clculo de la KM y de la Vmax de un enzima
La representacin grfica de la ecuacin de Michaelis-Menten (v0 frente a
[S]0) es una hiprbola. La Vmax corresponde al valor mximo al que tiende la
curva experimental, y la KM corresponde a la concentracin de sustrato a la
cual la velocidad de la reaccin es la mitad de la Vmax.
99
Para determinar grficamente los valores de KM y Vmax es ms sencillo utilizar
la representacin doble recproca (1/v0 frente a 1/[S]0), ya que es una lnea
recta. Esta representacin doble recproca recibe el nombre de
representacin de Lineweaver-Burk (Figura de la derecha). Es una recta en
la cual:
La pendiente es KM/Vmax
La abscisa en el origen (1/v0 = 0) es -1/KM
La ordenada en el origen (1/[S]0 = 0) es 1/Vmax
De esta forma, a partir de los datos experimentales se puede calcular
grficamente, los valores de KM y Vmax de un enzima para diversos sustratos
100
($ REGULA&IAN DE LA A&%I?IDAD &A%ALO%I&A DE LAS ENTIMAS0
RE&AM7I' DE R'%EONAS" ENTIMAS AL'S%MRI&AS Y SUS
M'DULAD'RES" M'DIEI&A&IAN &'?ALEN%E DE ENTIMAS
VIN%ER&'N?ER%I7LESW" &IMAGEN'S
RECAMBO DE PROTENAS
Los procesos combinados de la sntesis y degradacin de las enzimas
constituyen el recambio enzimtico. El recambio de una protena fue
descubierto como una propiedad caracterstica de las clulas de los
mamferos, mucho tiempo antes de que se mostrara que tambin ocurra en
las bacterias.
Midiendo las velocidades de incorporacin de aminocidos marcados con
15N a la protenas y los ndices de perdida de 15N de las protenas. Las
protenas estn en un estado de "equilibrio dinmico.
ENZMAS ALOSTRCAS
Algunas enzimas no siguen la cintica enzimtica de Michaelis-Menten. Un
grupo importante de stas enzimas se haya bajo el control de molculas
llamadas efectores, que se unen a zonas de la enzima distintas de los sitios
catalticos y que influyen en la unin del sustrato al sitio cataltico. Estas
enzimas se conocen con el nombre de enzimas alostricas.
La mayora de las enzimas alostricas estn formadas por subunidades de
cadenas peptdicas idnticas o estrechamente relacionadas. La
conformacin cuaternaria resulta modificada por los correspondientes
efectores alostricos. Uno o ms de los sitios funcionales de estas enzimas
pueden ser catalticos (C) mientras que uno o ms de los sitios pueden ser
reguladores (R) y no idnticos a los puntos catalticos o activos. En la mayor
parte de los casos, los sitios R y C se encuentran en subunidades distintas;
en otras enzimas, los sitios alostricos y catalticos se localizan en la misma
subunidad.
Cuando la velocidad de reaccin de una enzima alostrica se representa en
funcin de la concentracin del sustrato, se obtiene una curva sigmoidea en
lugar de hiperblica.
Diferencia entre las cinticas enzimticas de de Michaellis Menten y
alostrica. N , curva cintica de la reaccin sin efectores alostricos.
101
Puede observarse que las curvas alostricas cambian considerablemente al
alterar la concentracin de los efectores, bien positivos o bien, negativos.
La cintica alostrica puede representarse mediante la ecuacin:
Donde n es coeficiente que representa la interaccin de los sitios de unin,
K constituye una medida de la afinidad del sustrato por la enzima.
Las enzimas alostricas:
*estn constituidas en lo general por ms de una cadena polipeptdica
*pueden contener dos centros funcionales distintos, uno cataltico y otro
regulador.
*pueden estar sujetas al control, bien positivo bien negativo de uno o ms
cofactores.
*poseen efectores que pueden ser coenzimas, sustratos o productos.
*sufren cambios en la conformacin o la cooperatividad de sus componentes
polipptidos cuando se hallan bajo el efecto de los efectores adecuados.

102
MODFCACON COVALENTE DE ENZMAS
Enzimas interconvertibles
La modulacin reversible de la actividad cataltica de las enzimas
puede producirse por la adherencia covalente de un grupo fosfato o de
nucletidos. Las enzimas que experimentan modificacin covalente con
modulacin concomitante de su actividad se denomina " enzimas
interconvertibles " .
Las enzimas interconvertibles existen en dos condiciones de actividad, una
de eficacia cataltica elevada y otra de baja eficacia. Dependiendo de la
enzima que se trate, el catalizador mas activo puede ser la fosfoenzima a lo
que no posee grupo fosfato.
CMGENOS
La activacin catalizada enzimtica de los precursores inactivos de las
enzimas para dar la forma catalticamente activa.
Se sintetizan inactivas y pasan a forma activa por modulacin covalente
irreversible.
Enzimas hidrolticas en el sistema digestivo.
nactiva enzima activa
Pepsinogeno pepsina H+ pepsina + 42 restos de
aminocidos
Tripsinogeno enteroquinasa tripsina + Hexapeptido
Quimotripsinogeno tripsina Quimotripsina + 2 Dipptidos
La pepsina .- se sintetiza en la pared del estomago ( mucosa )
Trabaja en el estomago
La tripsina y quimotripsina.- son sintetizadas por el pncreas con actividad
en el intestino.
103
G$ IS'ENTIMAS" ENTIMAS LASMB%I&AS EUN&I'NALES Y N'
EUN&I'NALES" IM'R%AN&IA &LONI&A DE LA DE%ERMINA&IAN
LASMB%I&A DE LAS ENTIMAS 8ENTIMAS DE ES&AE9
SOENZMAS
Otro tipo de regulacin de l actividad metablica tiene lugar mediante la
participacin de isoenzimas, formas mltiples de un enzima determinado que
puede presentarse en una sola especie de organismo e incluso en una sola
clula.
La lactato deshidrogenasa, uno de los primeros enzimas de sta clase es ser
intensamente estudiado e, aparece en 5 formas izosimicas.
Los 5 isozimas estn constituidos por cinco combinaciones diferentes de dos
clases de cadenas polipeptdicas, designadas por M y H.
El isozima que predomina en el msculo esqueltico posee 4 cadenas M
idnticas y que designa como
4
M
; otro, que predomina en el corazn,
posee 4 cadenas H idnticas y se designa
4
H . Los otros tres isoenzimas
tienen la composicin
H M
3 , 2 2
H M
y 3
MH
La investigacin gentica indica que las secuencias aminocidas de las dos
cadenas polipeptdicas diferentes M y H de la lactato- deshidrogenasa se
hallan codificadas por dos genes diferentes.
104
ENZMAS PLASMTCAS FUNCONALES Y NO FUNCONALES
ENZMAS PLASMTCAS FUNCONALES.- Se sintetizan en el hgado pero
siempre se presentan en la circulacin sangunea y realizan una funcin
fisiolgica en la sangre. ncluyen: protenas inmunoglobulinas, la albmina, la
pseadocolinesterasa y las proenzimas de la coagulacin sangunea.
ENZMAS PLASMTCAS NO FUNCONALES.- No realizan ninguna funcion
fisiolgica conocida, se presentan en la sangre de personas sanas en
concentraciones millones de veces menos a la de los tejidos.
Su presencia en el plasma en concentraciones por arriba de los valores
normales sugiere un incremento en la velocidad de destruccin tisular.
ncluyen las glndulas presentes en secrecin exocrinas: amilasa
pancretica, lipasa, fosfatasa alcalina biliar y fosfatasa cida prosttica y
las enzimas intracelulares verdaderas.
MPORTANCA CLNCA DE LA DE LA DETERMNACN PLASMTCA DE
ENZMAS
Por mucho tiempo, la prctica profesional mdica ha usado la cuantificacin
de ciertas enzimas plasmticas no funcionales. Esta valiosa informacin para
el diagnstico y pronostico se obtiene muchas veces con equipos
automticos.
105
D$ R'&EDIMIEN%'S &LBSI&'S ARA LA &UAN%IEI&A&IAN1
URIEI&A&IAN Y L'&ALITA&IAN IN%RA&ELULAR DE ENTIMAS
CUANTFCACN DE LAS ENZMAS
La teora fundamental de la catlisis enzimtica se basa en los estudios
clsicos de Michaelis y Menten y de Haldane .El anlisis cuantitativo de la
accin de las enzimas que ha sido desarrollado depende en gran medida de
la determinacin de las velocidades de reaccin.
Si la velocidad de reaccin inicial, definida como la velocidad observada para
una cantidad dada de enzima cuando la concentracin del producto formado
est prxima a cero, se expresa en funcin de la concentracin del sustrato.
PURFCACON DE LAS ENZMAS
El objetivo de la purificacin enzimtica es aislar una enzima especfica a
partir de un extracto celular crudo, que contiene muchos otros componentes.
Las molculas pequeas pueden eliminarse mediante dilisis o filtracin en
gel; los cidos nucleicos mediante precipitacin con el antibitico
estreptomicina; y a si sucesivamente. El problema consiste en separar la
enzima deseada de los cientos de protenas qumicamente y fsicamente
similares.
Las enzimas se obtienen a partir de fuentes naturales, o de las celulas las
cuales se expresan a partir de genes clonados.
Hoy en da, la tecnologa del DNA recombinante permite a los cientficos
reproducir protenas en clulas en las cuales dichas protenas no se
presentan normalmente. Las clulas husped tpicas corresponden a las
bacterias y a las levaduras, fciles de cultivar en grandes cantidades.
La capacidad para expresar protenas recombinantes en concentraciones
relativamente grandes, permite a los cientficos aislar enzimas cuyas escasas
concentraciones en las clulas donde se presentan de manera natural, hacen
difcil purificarlas. ncluso el modificar el DNA que codifica la protena
mediante mutagnesis puntual dirigida, los cientficos pueden adicionar,
eliminar o modificar aminocidos especficos en la enzima recombinante, con
objeto de facilitar la determinacin de sus participaciones funcionales o
estructurales. Sien embargo la purificacin de las enzimas a partir de las
fuentes naturales sigue siendo importante, con objeto de identificar la
naturaleza y funcin de las modificaciones postraduccionales que regulan la
localizacin y la eficiencia cataltica de la enzima.
Para la purificacion se utiliza cromatografia de intercambio ionico o
cromatografia con soportes de exclusion
Los procedimientos clsicos de purificacin tiles incluyen precipitacin con
diversas concentraciones salinas (por lo general sulfato de amonio o de
sodio) o solventes (acetona o etanol), a si como desnaturalizacin mediante
106
calentamiento diferencial o pH, centrifugacin diferencial, filtracin en gel y
electroforesis. Para la purificacin extensa y rpida de las protenas, tambin
han resultado extremadamente exitosas la adsorcin y la elucion selectivas
de las protenas de celulosa de intercambio anionico, dietilaminoetil celulosa
(DEAE), y en la de intercambio catinico carboximetilcelulosa (CMC).
Por ejemplo, un extracto acuoso de tejido heptico se ajusta a un pH de 7.5
en el cual la mayor parte de las protenas poseen una carga negativa neta.
Enseguida se aplica la mezcla de protenas solubles a una columna de
celulosa DEAE amortiguada a un pH de 7.5, en el cual la DEAE presenta
carga positiva. Luego, las protenas con carga negativa se enlazan a la
DEAE mediante interaccin de carga opuesta, al tiempo que las protenas sin
carga o con carga positiva fluyen directamente a lo largo de la columna. A
continuacin se eluye la columna, casi siempre mediante un gradiente, desde
una concentracin baja hasta una alta de NaCl disuelto en amortiguador con
pH de 7.5.
Toda vez que el Cl compite con las protenas por el enlace al soporte con
carga positiva, las protenas se eluyen selectivamente; primero la mas
dbilmente enlazada, y al final la enlazada con mas fuerza. La separacin de
las protenas anlogas utiliza un soporte con carga negativa, como la
carboximetilcelulosa o la fosfocelulosa, a un pH algo menor, a fin de asegurar
que las protenas posean mas carga positiva.
La separacin de las protenas tambin puede lograrse con materiales
porosos conocidos como "filtros moleculares. Cuando una mezcla de
protena fluye a travs de una columna con filtro molecular, las protenas
pequeas se distribuyen en los espacios entre las partculas y en los
espacios internos de los poros del soporte. Conforme la mezcla de protenas
de tamaos diferentes fluye a lo largo de la columna, se retarda la movilidad
de las protenas pequeas respecto a las protenas que son demasiado
grandes para ingresar a estos poros. Por tanto, las protenas grandes
emergen a la columna antes que las protenas ms pequeas. El perfil de la
elusin presenta un patrn gradual de las protenas, que va desde las ms
grandes hasta las ms pequeas. Sin embargo los filtros moleculares tienen
una capacidad limitada y por lo general se utilizan solo despus de lograr,
mediante otras tcnicas, la purificacin inicial.
La afinidad de los soportes cromatograficos reconoce regiones especificas
de las enzimas
La caracterstica sobresaliente de la cromatografa por afinidad consiste en el
aislamiento selectivo de una protena en particular, o cuando mucho, de una
cantidad pequea de protenas particulares a partir de una mezcla proteica
compleja. La tcnica utiliza un ligando inmvil que interacta de manera con
la enzima cuya purificacin se desea. Al exponer la mezcla proteica a este
ligando inmvil, las nicas protenas que se enlazan son las que interactan
fuertemente con el ligando; las protenas indeseables fluyen a lo largo de la
columna y se descartan. A continuacin, la protena deseada se eluye a
partir del ligando inmvil, por lo general una gran concentracin de sal, o
mediante la variante soluble del ligando.
107
Las purificaciones logradas mediante las tcnicas cromatogrficas por
afinidad resultan impresionantes, y a menudo superan lo que es posible
lograr mediante la aplicacin sucesiva de diversas tcnicas tpicas.
Los ligandos preferidos corresponden a los derivados de los sustratos y de
las coenzimas, o los colorantes orgnicos, los cuales actan como anlogos
de nucletidos o de coenzimas enlazados de manera covalente a un soporte
inerte. Estos ligandos se adhieren al soporte mediante una molcula
enlazadora con una longitud de 3 a 8 carbonos. Sin embargo el "enlazador
hidrfobo puede complicar la separacin, al introducir un elemento
correspondiente a la cromatografa de ligando hidrfobo. Los ejemplos de
cromatografa por afinidad exitosa incluyen la purificacin de diferentes
deshidrogenasas en soportes con afinidad por NAD. Si bien es posible el
enlace de muchas deshidrogenasas y la correspondiente elusin conjunta al
tratar la columna con NAD soluble, la utilizacin subsecuente de soportes
con afinidad de sustrato (en vez de coenzima) o la elusin con una mezcla
ternaria abortiva de un producto y un sustrato, han demostrado resultar
exitosas en muchos casos.
En la cromatografa con ligando hidrfobo se adhiere un hidrocarburo alquilo,
o un arilo, a un soporte como Sephadex. La retencin de las protenas en
estos soportes involucra interacciones hidrfobas entre la cadena alquilo y
las regiones hidrfobas de la protena. Las protenas se aplican en
soluciones que contienen una alta concentracin salina y se eluyen con
gradientes decrecientes de la misma sal.
Las proteinas de fusion recombinantes se purifican mediante cromatografia
por afinidad
Adems de proporcionar una fuente abundante de una enzima, lo cual facilita
en gran mediada la purificacin, la tecnologa del DNA recombinante puede
utilizarse para crear protenas modificadas, las cuales pueden purificarse
mediante cromatografa por afinidad. El enfoque general consiste en enlazar
al gen secuencias de nucletidos que codifican para extensiones de la
protena, generando una protena de fusin que se utiliza como ligando para
un soporte de afinidad especifica. Un sistema comn consiste en enlazar una
tira de 5 o 6 histidinas, o como opcin, el dominio para el enlace del sustrato
en la enzima glutation S- transferasa, a las terminales amino o carboxilo de
las enzimas de inters. A continuacin es posible purificar la protena de
fusin recombinante, en una columna por afinidad en la cual, para el enlace
se coloca un ion metlico divalente como el Ni (para las fusiones con
polihistidina) o glutatin (para las protenas de fusin de la glutatin S-
transferasa). A menudo las protenas de fusin incorporan, en la regin que
enlaza las dos partes de la protena de fusin, un sitio de escisin para la
proteasa muy especifica, como la trombina. Esto permite la remocin del
dominio de fusin adicionado, despus de la purificacin por afinidad.
108
LOCALZACON NTRACELULAR DE LAS ENZMAS
Las enzimas pueden presentarse en organelos especificos
El arreglo espacial y la compartimentalizacin de las enzimas, los sustratos y
los cofactores en el interior de la clula, resultan de importancia cardinal. Por
ejemplo, en las clulas hepticas, las enzimas para la gluclisis se localizan
en el citoplasma, en tanto que las enzimas para el cido ctrico se hallan en
las mitocondrias. La distribucin de las enzimas entre los organelos
subcelulares, pueden estudiarse despus del fraccionamiento de los
homogeneizados celulares, mediante centrifugacin de alta velocidad.
Con frecuencia, es posible obtener la localizacin de una enzima particular
de un tejido o en una clula mediante procedimientos histoqumicos
(histoenzimologa). Para ello, los cortes congelados de tejido delgados (2 a
10 um) se tratan con un sustrato de una enzima particular. En presencia de
la enzima se forma el producto de la reaccin catalizada por dicha enzima.
Si dicho producto es colorido e insoluble, permanece en el sitio de su
formacin y localiza a si a la enzima.
La histoenzimologa proporciona una representacin grfica y relativamente
fisiolgica de los patrones de la distribucin enzimtica.
La localizacin subcelular de los sistemas enzimticos puede resumirse de la
siguiente manera. Muchas enzimas asociadas al ncleo participan en el
mantenimiento, la renovacin y la utilizacin del aparato gentico. La
mayora de las enzimas mitocondriales guardan relacin con la produccin
de energa o con reacciones oxidativas que proporcionan la fuerza de
induccin necesaria para muchas funciones celulares.
Las enzimas asociadas a los ribosomas favorecen la biosntesis de
protenas.
Los lisosomas contienen enzimas que catalizan la destruccin hidroltica de
materiales que la clula ya no necesita.
El complejo de Golgi es un sistema de tmulos y vesculas que actan en las
clulas secretoras para reunir y expulsar de la clula protenas u otros
productos del metabolismo celular. En las clulas especializadas en la
absorcin, el complejo de Golgi, parece actuar de forma opuesta: rene el
material captado por otras clulas.
Por otro lado, las enzimas citoslicas catalizan el tipo de metabolismo de los
carbohidratos conocido como gluclisis. Las enzimas responsables de la
biosntesis de los cidos grasos son tambin citoslicas aunque, a diferencia
de las que participan en la gluclisis, ste sistema de enzimas se halla
perfectamente organizado en forma de un pptido de gran longitud que
desarrolla las siete actividades enzimticas necesarias.
Los orgnulos aislados muestran a menudo su propia arquitectura estructural
con ms detalle. As por ejemplo, las partculas mitocondriales tienen una
doble membrana. La membrana interna, la membrana externa y el espacio
entre ellas constituyen regiones, cada una de las cuales posee grupos
especficos de enzimas que desarrollan as sus funciones de manera ms
eficaz. Esta misma descripcin es aplicable a la membrana que delimita la
109
clula. O membrana plasmtica, que no es una simple barrera inerte;
contiene su propia serie caracterstica de enzimas, la mayora de las cuales
favorecen o controlan la entrada de materiales en la clula o la salida de las
sustancias de ella.

110
BBLOGRAFA
Rex Montgomery, Tomas Conway y Arthur A. Spector
Bioqumica
Sexta edicin
Clasificacin de enzimas pginas 69,
Enzimas alostricas .pginas 83,84
Especificada enzimmtica pagina: 75
Lenhinger
Definicin de enzimas pginas: 189
Definicin y caractersticas de holoenzima, apoenzima, cofactor, coenzima,
grupo prosttico, sustrato.
Pginas: 190-191
soenzimas
Pginas: 250,251 y 252
Bioqumica de Harper
Clasificacin de enzimas pginas: 190
Cuantificacion de las enzimas Pg. 86
Estados de transicin Pg. 91-92
Factores que la actividad enzimtica pginas; 86, 90, 92, 93, 94, 98 y 99
Paginas de internet: www.ehu.es/biomoleculas/ENZ/ENZ2-2htm#co
Laura Adriana Rodrguez Hernndez
Diana Figueroa Quinteros
Nancy Lindsay Espinosa Rios
111
UNIDAD ?
?I%AMINAS
!IDR'S'LU7LES Y LI'S'LU7LES
QUE SON LAS VTAMNAS
Las vitaminas son compuestas esenciales para las reacciones metablicas
especficas, los tejidos humanos son incapaces de sintetizarlas a partir de
metabolitos simples.
Actan como coenzimas o como parte de enzimas responsables de favorecer
las reacciones qumicas esenciales.
l termino vitamina fue concebido en 1912 por Casimir Funk para designar
a los factores accesorios de los alimentos necesarios para la vida.
Por lo general se clasifica alas vitaminas en dos grupos con base en la
solubilidad, la cual hasta cierto punto determina su estabilidad, presencia en
los alimentos, distribucin en los lquidos corporales y la capacidad para
depositarse en los tejidos.
Vitaminas
Vitamina.- cualquiera de un grupo de compuestos orgnicos esenciales en el
metabolismo y necesarios para el crecimiento y, en general, para el buen
funcionamiento del organismo, es decir para u mantenimiento, crecimiento,
desarrollo y reproduccin. No aportan energa, puesto que no se utilizan como
combustible, pero sin ellas el organismo no es capaz de aprovecharlos
elementos constructivos y energticos suministrados por la alimentacin. Las
vitaminas participan en la formacin de hormonas, clulas sanguneas,
sustancias qumicas del sistema nervioso y material gentico. Las diversas
vitaminas no estn relacionadas qumicamente, y la mayora de ellas tiene una
accin fisiolgica distinta. Por lo general actan como catalizadores, es decir
como coenzimas, combinndose con las protenas para crear
metablicamente enzimas activas que a su vez producen importantes
reacciones qumicas en todo el cuerpo. Sin las vitaminas muchas de estas
reacciones tardaran ms en producirse o cesaran por completo.
Las 13 vitaminas identificadas se clasifican de acuerdo a su capacidad de
disolucin en grasa son las vitaminas liposolubles o en agua las vitaminas
hidrosolubles. Las vitaminas liposolubles, A, D, E y K, suelen consumirse junto
con alimentos que contienen grasa y, debido a que se pueden almacenar en la
grasa del cuerpo, no es necesario tomarlas todos los das. Las vitaminas
hidrosolubles, las ocho del grupo B(tiamina, riboflavina, niacina, piridoxina,
biotina, cido pantotnico, cido flico y cobalamina)y la vitamina C, no se
pueden almacenar y, por tanto, se deben consumir con frecuencia,
preferiblemente a diario (a excepcin de algunas vitaminas B, como veremos
despus).
Las vitaminas deben ser aportadas a travs de la alimentacin, ya que, a
excepcin de la vitamina D, no pueden ser sintetizadas por el cuerpo humano.
La carencia da origen a una amplia gama de disfunciones metablicas y de otro
tipo. Una dieta bien equilibrada contiene todas las vitaminas necesarias, y la
112
mayor parte de las personas que siguen una dieta as pueden corregir
cualquier deficiencia anterior de vitaminas. Sin embargo, las personas que
siguen dietas especiales, que sufren de trastornos intestinales que impiden la
absorcin normal de los nutrientes, o que estn embarazadas o dando de
mamar a sus hijos, pueden necesitar suplementos especiales de vitaminas
para sostener su metabolismo. Aparte de estas necesidades reales, tambin
existe la creencia popular de que los suplementos vitamnicos ofrecen remedio
para muchas enfermedades, desde resfriados hasta el cncer; pero en realidad
el cuerpo elimina rpidamente casi todos estos preparados sin absorberlos.
Adems, las vitaminas liposolubles pueden bloquear el efecto de otras
vitaminas e incluso causar intoxicacin grave si se toman en exceso.
VTAMNAS HDROSOLUBLES.
La mayora de las vitaminas hidrosolubles son componentes de los sistemas
enzimticos esenciales. Muchas de ellas participan en las reacciones que
apoyan el metabolismo energtico. Estas vitaminas normalmente no se
almacenan en el cuerpo en cantidades apreciables y se excretan en pequeas
cantidades en la orina; por lo tanto, es deseables suministrar un complemento
diario para evitar su disminucin y la interrupcin de las funciones fisiolgicas
normales.
Los miembros del complejo B tienen una funcin esencial en el proceso
metablico de las clulas vivas, tanto de plantas como de animales. Funcionan
como coenzimas o como grupos prostticos junto a las apoenzimas. Cuatro de
estas son esenciales para la derivacin de energa de la gluclisis y el ciclo del
cido tricarboxlico.
Debido a las estrechas interrelaciones entre las vitaminas B, una ingesta
inadecuada de alguna puede alterar la utilizacin de otras. Rara vez se ve en
la clnica la deficiencia discreta de una sola de las vitaminas B.
113
#$%IAMINA 87#9
La tiamina o vitamina B1, una sustancia cristalina e incolora, en la naturaleza
se encuentra en estado libre como pirofosfato de tiamina o trifosfato, tiene
funciones esenciales en la transformacin de energa y en la conduccin por
membranas y la conduccin nerviosa, as como en la sntesis de pentosas y la
forma reducida de la coenzima de la niacina.
Funcin
Funciona como una coenzima vital para la respiracin tisular. Acta como
coenzima en la oxidacin de los carbohidratos, participando en la
descarboxilacin del a-cetoglutarato para su conversin el succinil-CoA y la del
piruvato a acetil-CoA, reacciones en las que tambin interviene el cido
pantotnico como coenzima-A. La tiamina tambin participa en la sntesis de
sustancias que regulan el sistema nervioso. Esta tambin es necesaria para
metabolizar las grasas, protenas y los cidos nucleicos, se vincula
principalmente con el metabolismo de los carbohidratos.
Fuentes alimenticias
Muchos alimentos contienen tiamina, pero pocos la aportan en cantidades
importantes. Los alimentos ms ricos en tiamina son la carne de cerdo, las
vsceras (hgado, corazn y riones), la levadura de cerveza, las carnes
magras, la yema de huevo, los vegetales de hoja verde, la cascarilla de los
cereales, el germen de trigo, mas y frjol, las bayas, los frutos secos y las
legumbres. Al moler los cereales se les quita la parte del grano ms rica en
tiamina, de ah la probabilidad de que la harina blanca y el arroz blanco
refinado carezcan de esta vitamina. La prctica, bastante extendida, de
enriquecer la harina y los cereales ha eliminado en parte el riesgo de una
insuficiencia de tiamina, aunque an se presenta en alcohlicos que sufren
deficiencias en la nutricin.
Deficiencia
La insuficiencia de tiamina produce beriberi, una
enfermedad que se caracteriza por sntomas iniciales como
neuropata perifrica, fatiga y anorexia, las cuales
progresan hacia edema y degeneraciones musculares,
neurolgicas y cardiovasculares y, en casos graves, incluso
ataque al corazn y muerte.
La absorcin de la tiamina se realiza en la porcin inicial
del intestino delgado por medio de transporte activo
dependiente de Na+, en los tejidos se desintegra por
completo 1mg de tiamina cada da. Cuando la ingestin excede el
requerimiento diario el exceso aparece de manera cuantitativa en la orina como
114
tiamina intacta o como pirimidina, que surge a partir de la desintegracin de la
molcula de tiamina.
Exceso
A medida que el consumo de tiamina aumenta ms una proporcin mayor del
exceso se excreta pero puede llegar a ocasionar un efecto analgsico sobre
nervios perifricos e hipertensin vascular.
Requerimiento diario
Los requerimientos diarios de la vitamina para el adulto de 50 a 60 mg.
Edad (aos) RDA (mg)
Lactantes
0.0-0.5
0.5-1.0
0.3
0.4
Nios
1-3
4-6
0.7
0.9
Hombres
11-14
15-18
19-24
25-50
51+
1.3
1.5
1.5
1.5
1.2
Mujeres
11-14
15-18
19-24
25-50
51+
Embarazo
Lactancia
Primeros 6 meses
Segundos 6
meses
1.1
1.1
1.1
1.1
1.0
1.5
1.6
1.6
Formula

115
6$RI7'ELA?INA 8769
La riboflavina o vitamina B2, su forma biolgicamente activa de esta es como
coenzima FMN (mononucletido de flavina) y FAD (dinucletido de adenina y
flavina). La forma predominante, es como un componente esencial de la
produccin de energa va la cadena respiratoria. Pigmento fluorescente, verde-
amarillento en la leche, que se identifico en 1879.
Funcin
La riboflavina se combina con el cido fosfrico para formar parte de la
estructura de las dos coenzimas de la flavina, FMN y FAD.
Al igual que la tiamina, acta como coenzima, es decir, debe combinarse con
una porcin de otra enzima para ser efectiva en el metabolismo de los hidratos
de carbono, grasas y especialmente en el metabolismo de las protenas que
participan en el transporte de oxgeno; las cuales intervienen en reacciones
catalizadas por enzimas oxidoreductasa en el metabolismo de los nutrientes
energticos, se les encuentra como parte de algunas etapas metablicas en la
cadena respiratoria y de enzimas como la xantina oxidasa, la D-amonooxidasa
y la L-aminooxidasa. Tambin son coenzimas de las deshidrogenasas, las
cuales catalizan el primer paso de la oxidacin de varios intermediarios en el
metabolismo d la glucosa y de los cidos grasos. El FMN se requiere para la
conversin de la piridoxina fosforilada para su coenzima funciona y el FAD
para la conversin del triptfano a niacina. Tambin acta en el mantenimiento
de las membranas mucosas, tambin ayuda al crecimiento y reproduccin, y
mejora el estado de la piel, las uas y el cabello.
Fuentes alimenticias
Las mejores fuentes de riboflavina son el hgado, la leche, queso, vegetales
frondosos verdes, la carne, las espinacas, los huevos, los cereales enteros y
enriquecidos, la pasta, el pan y las setas.
Deficiencia
La insuficiencia de riboflavina puede complicarse si hay carencia de otras
vitaminas del grupo B. Esta suele presentarse cuando por varios meses la
ingesta de riboflavina es baja. Sus sntomas, fotofobia, lagrimeo, ardor y
comezn en los ojos, perdida de la agudeza visual, lesiones en la piel, en
particular cerca de los labios y la nariz, y alteraciones en la mdula sea, las
cuales en son glositis, dermatitis seborreica de la cara, queilosis y dermatitis
sobre el tronco y las extremidades, seguidas por anemia y neuropata; Suelen
ser deficitarios los bebedores o fumadores crnicos y las personas que siguen
una dieta vegetariana estricta y no toman suplementos de levadura de cerveza
o germen de trigo.
116
Exceso
Cuando se ingiere una cantidad mayor al requerimiento diario la vitamina se
excreta por la orina, aunque se ha observado que en algunas personas se
presenta prurito, parestesia y anuria.
Requerimiento diario
Se recomienda una ingesta diaria de 0.6mg/1000kcal, que es equivalente
alrededor de 1.6mg/da para varones adultos jvenes y de 1.2mg/da para
mujeres adultas jvenes.
Edad (aos) RDA (mg)
Lactantes
0.0-0.5
0.5-1.0
0.4
0.5
Nios
1-3
4-6
7-10
0.8
1.1
1.2
Hombres
11-14
15-18
19-24
25-50
51+
1.5
1.8
1.7
1.7
1.4
Mujeres
11-14
15-18
19-24
25-50
51+
Embarazo
Lactancia
Primeros 6 meses
Segundos 6
meses
1.3
1.3
1.3
1.3
1.2
1.6
1.8
1.7
117
Formula
F$NIA&INA 87F9
La nicotinamida (amida) o vitamina B3, vitamina del complejo B cuya estructura
responde a la amida del cido nicotnico o niacina, funciona como coenzima
para liberar la energa de los nutrientes. Tambin se conoce como vitamina PP.
La niacina forma parte de la estructura de dos coenzimas, el NAD (dinucletido
de adenin-nicotinamida) y su forma fosforilada el NADP. La niacina se identifico
como resultado de la bsqueda de la causa y cura de la pelagra. Es un material
cristalino blanquecino.
Funcin
Las coenzimas NAD y NADP estn presentes en todas las clulas.
El NAD interviene en el metabolismo energtico al formar parte de las enzimas
que catalizan reacciones oxidorreduccin principalmente en el sistema
microsmico para las oxidaciones biolgicas, tambin se utiliza en la sntesis
de glucgeno y el NADP es fundamental en las reacciones anablicas que
tienen que ver con la sntesis de los cidos grasos y los esteroides.
Fuentes alimenticias
Las mejores fuentes de niacina son el hgado, la carne magra, clara de huevo,
el salmn y el atn enlatados, los cereales enteros o enriquecidos (trigo y
arroz), las legumbres y los frutos secos.
118
Deficiencia

La insuficiencia de niacina o cido nicotnico produce
pelagra, cuyo primer sntoma es una erupcin (prurito)
parecida a una quemadura solar all donde la piel queda
expuesta a la luz del sol. Otros sntomas son lengua roja e
hinchada (glositis), queilosis, transtornos gastrointestinales
(diarrea y aclorhidria), pigmentacin y engrosamiento de la
piel, confusin mental, irritabilidad y, cuando se ve afectado
el sistema nervioso central, depresin y trastornos mentales.
El cuerpo tambin fabrica niacina a partir del aminocido triptfano, (como
NAD+). Se han utilizado experimentalmente sobredosis de niacina en el
tratamiento de la esquizofrenia, aunque ninguna prueba ha demostrado su
eficacia.
Exceso
En grandes cantidades reduce los niveles de colesterol en la sangre, y ha sido
muy utilizada en la prevencin y tratamiento de la arteriosclerosis, por lo que se
administran uno o dos gramos de niacina al da bajo supervisin mdica. Las
grandes dosis en periodos prolongados pueden ser perjudiciales para el hgado
y ocasiona sntomas de sudoracin, prurito y malestares gastrointestinales.
Formula
119
Requerimiento diario
El humano requiere tener una ingesta de niacina por da al menos de 13 a 18
mg. Puede ingresar en el organismo como cido nicotnico, nicotinamida o
triptfano.
Edad (aos) RDA(mg)
Lactantes
0.0-0.5
0.5-1.0
5
6
Nios
1-3
4-6
7-10
9
12
13
Hombres
11-14
15-18
19-24
25-50
51+
17
20
19
19
15
Mujeres
11-14
15-18
19-24
25-50
51+
Embarazo
Lactancia
Primeros 6meses
Segundos 6
meses
15
15
15
15
13
17
20
20
120
-$ B&ID' AN%'%MNI&' 87/9
Es una vitamina que se encuentra ampliamente distribuida en la naturaleza,
considerando que sus principales fuentes. Es un compuesto blanco, cristalino,
de sabor amargo, ms estable en solucin que en la forma en polvo, y de fcil
descomposicin por cidos, alcalinos y calor seco.
Funcin
Lleva acabo funciones metablicas celulares como coenzima-A (CoA) las
cuales consisten en relaciones de acilacin como donadora o aceptora de
grupos acetilo y acilo. Dichas reacciones tienen que ver con el metabolismo
energtico, ya que la CoA participa en la conversin de piruvato a acetil-CoA,
as como del a-cetoglutarato a succinil-CoA. La CoA interviene, adems, en la
glucognesis, en la oxidacin y sntesis de los cidos grasos, y en la sntesis
de la esfingosina, los esteroles, las hormonas esteroides, la acetilcolina y las
porfirinas.
Fuentes alimenticias
Son vsceras el hgado y rin, carne, leche, huevos, levaduras, coliflor, brcoli,
papas, col, tomates y salmn.
Deficiencia
Dada su amplia participacin en el metabolismo y su amplia distribucin en la
naturaleza del cido pantotnico, la carencia en el humano es rara, pero
experimentalmente produce transtornos cardiovasculares y gastrointestinales,
adems de fatiga, cefalalgia, alteraciones del sueo, nusea y parestesia en
las extremidades. No han sido reportados efectos adversos por la ingestin de
grandes dosis de vitamina.
Exceso
Las dosis masivas administradas al ser humano han producido nicamente
malestar intestinal leve y diarrea.
Formula
121
Requerimiento diario
La recomendacin diaria de ingesta es de 4 a 7 mg/da.
Edad(aos) RDA(mg)
Lactantes
0.0-0.5
0.5-1.0
2
3
Nios
1-3
4-6
7-10
11+
3
3-4
4-5
4-7
Adultos
Hombres y
mujeres todas las
edades
4-7
/$ IRID'PINA87(9
Constituye un complejo de tres compuestos qumicos estrechamente
relacionados entre si, piridoxina, piridoxal y piridoxina, todos los cuales poseen
actividad fisiolgica
La necesidad y funciones de vitamina B6 han sido demostradas, tanto si se
trata del adulto como del nio. As la destruccin accidental de este factor en
un compuesto lcteo artificial para la alimentacin infantil determina la aparicin
de numerosos casos de irritabilidad nerviosa y convulsiones. El
restablecimiento se produce, no obstante, gracias a la administracin de esta
vitamina, hecho que ha venido a corroborar concluyentemente la impresin de
que los sntomas observados se deben a su ausencia.
Es una vitamina hidrosoluble que forma parte de las vitaminas del complejo B.
Sus formas biolgicamente son el fosfato de piridoxal y el de piridoxina.
Euncin
La vitamina B6 desempea un papel importante en la sntesis de los
anticuerpos por medio del sistema inmunolgico, los cuales son necesarios
para combatir muchas enfermedades. Esta vitamina ayuda a mantener la
funcin normal del cerebro y acta tambin en la formacin de glbulos rojos.
Asimismo, la vitamina B6 se requiere en las reacciones qumicas necesarias
122
para digerir las protenas y por lo tanto, cuanto mayor sea el consumo de
protenas, mayor ser la necesidad de vitamina B6.
-Su forma activa, el piridoxal fosfato, acta como coenzima de las enzimas
transferasas implicadas en el metabolismo (transaminaciones) de los
aminocidos. Muchas de estas acciones estn encaminadas a la sntesis de
neurotransmisores.
Euentes alimenticias
La vitamina B6 se encuentra en los frjoles, las nueces, las legumbres, los
huevos, la carne, el pescado, los granos integrales, al igual que en los panes y
cereales enriquecidos.
Efectos secundarios
La vitamina B6 en grandes dosis puede causar trastornos neurolgicos e
insensibilidad.
La deficiencia de esta vitamina puede ocasionar lceras en la boca y la lengua,
al igual que irritabilidad, confusin y depresin.
-Anemia, depresin, convulsiones, fatiga, inflamacin de los nervios perifricos,
alteraciones de la piel
Deficiencia
Los sntomas de deficiencia, se pueden dividir en:
Efectos en la piel: En el transcurso de algunas semanas de alimentacin
con una dieta con bajo contenido de complejo B, ms dosis diarias del
antagonista de vitamina 4-desoxipiridoxina, es posible que se produzcan
lesiones cutneas parecidas a la seborrea alrededor de ojos, nariz y boca,
acompaadas de glositis y estomatitis. Las lesiones desaparecen con
rapidez luego de la administracin de piridoxina, pero no muestran
respuesta a otros miembros del complejo B.
Efectos en el sistema nervioso: Pueden sobrevenir crisis convulsivas
cuando se conserva a seres humanos bajo una dieta con deficiencia de
piridoxina, y es posible evitar esas convulsiones mediante la vitamina. La
induccin de crisis convulsivas por deficiencia de piridoxina puede depender
de una concentracin disminuida de cido g-aminobutrico; la glutamato
descarboxilasa, enzima que requiere fosfato de piridoxal, sintetiza este
neurotransmisor inhibidor del sistema nervioso central. Adems, la
deficiencia de piridoxina genera cifras disminuidas de los neurotransmisores
noradrenalina y 5-hidroxitriptamina. En algunos enfermos, una neuritis
perifrica relacionada con inflamacin de la membrana sinovial del carpo e
hipersensibilidad de la misma (sndrome del tnel carpiano), se ha atribuido
a deficiencia de piridoxina, aunque no se han confirmado afirmaciones ms
tempranas de que la piridoxina a dosis altas revierte dicho sndrome.
Eritropoesis: Aun cuando la deficiencia de piridoxina en la dieta de
seres humanos rara vez puede causar anemia, la anemia habitual con
123
capacidad de reaccin a la piridoxina al parecer no depende de aporte
inadecuado de esta vitamina, segn se juzga por estndares de lo normal.
Requerimientos diarios
Necesidades diarias: 1.8 a 2.2 mg
El requerimiento de vitamina aumenta conforme se eleva la ingesta de
protenas.
Edad (aos) RDA(mg)
Lactantes
0.0-0.5
0.5-1.0
0.3
0.6
Nios
1-3
4-6
7-10
1.0
1.1
1.4
Hombres
11-14
15-18
19-24
25-50
51+
1.7
2.0
2.0
2.0
2.0
Mujeres
11-14
15-18
19-24
25-50
51+
Embarazo
Lactancia
Primeros 6meses
Segundos 6
meses
1.4
1.5
1.6
1.6
1.6
2.2
2.1
2.1
124
Formula
($ 7I'%INA 87
D
9
La biotina es un cido monocarboxlico, estable al calor, soluble en agua y
alcohol y susceptible a la oxidacin. La flora intestinal es capaz de sintetizar
una cantidad considerable de biotina. La eliminacin fecal y urinaria, mucho
ms elevada que la ingesta diettica, indica la magnitud de sntesis por parte
de la microflora.
Funcin
- Forma parte de enzimas que actan en el metabolismo de la glucosa, cidos
grasos, aminocidos y purinas
- Es Esencial para la sntesis y degradacin de grasas y la degradacin de
ciertos aminocidos.
- Alivia dolores musculares, el eczema y la dermatitis.
-Tambin ayuda a combatir la depresin y la somnolencia.
Fuentes alimenticias
La biotina se encuentra ampliamente distribuida en los alimentos y las fuentes
adecuadas son riones, hgado, yema de huevo algunos vegetales (hongos,
coliflor, chaucha) y frutas (banana, uva, sanda y fresas), man y levadura.
Una cantidad considerable se sintetiza por bacterias intestinales y se absorbe.
Deficiencia
Se ha visto dficit de Biotina en pacientes que reciben alimentacin parenteral
total durante varios aos. Los sntomas provocan el deterioro de las funciones
metablicas descriptas, eczema, dermatitis seca y descamativa, palidez,
nuseas, vmitos, anorexia, gran fatiga y depresin.
No es habitual la deficiencia en una dieta equilibrada, aunque se incrementa el
riesgo de carencia en el caso de tratamientos de larga duracin con
antibiticos.
En seres humanos, los signos y sntomas de deficiencia incluyen dermatitis,
glositis atrfica, hiperestesia, dolor muscular, laxitud, anorexia, anemia leve y
cambios en el electrocardiograma.
125
Requerimiento diario
Una ingesta segura y adecuada de esta vitamina es de 30 a 100 g diarios.
Formula
Edad(aos) RDA(mg)
Lactantes
0.0-0.5
0.5-1.0
10
15
Nios
1-3
4-6
7-10
11+
20
25
30
30-100
Adultos
Hombres y
mujeres todas las
edades
30-100
Edad(aos) RDA(mg)
Lactantes
0.0-0.5
0.5-1.0
10
15
Nios
1-3
4-6
7-10
11+
20
25
30
30-100
Adultos
Hombres y
mujeres todas las
edades
30-100
126
G$ A&ID' E'LI&' ' E'LA%'S
El organismo transforma el cido flico a una forma biolgicamente activa
llamada cido folnico. Actan como coenzimas en el transporte de fragmentos
simples de carbono en el metabolismo de los aa. y de la sntesis de cidos
nucleicos.
El cido flico es una vitamina del complejo B que, cuando se ingiere antes y
durante las primeras semanas del embarazo, puede ayudar a prevenir ciertos
defectos de nacimiento del cerebro y la mdula espinal denominados defectos
del tubo neural.
Funcin
El cido flico trabaja junto con la vitamina B-12 y la vitamina C para ayudar al
cuerpo a digerir y utilizar las protenas y sintetizar las protenas nuevas cuando
se necesiten. Es necesario en la produccin de glbulos rojos y en la sntesis
del ADN (que controla los factores hereditarios y se utiliza para guiar la clula
en sus actividades diarias).
El cido flico tambin colabora con la funcin celular y en el crecimiento de los
tejidos. Adems, ayuda a incrementar el apetito cuando es necesario y estimula
la formacin de cidos digestivos.
Los suplementos sintticos de cido flico se pueden utilizar en el tratamiento
de trastornos asociados con su deficiencia y tambin pueden formar parte del
tratamiento recomendado para ciertos problemas menstruales y lceras en las
piernas.
Euentes alimenticias
Granos y legumbres
Frutas y jugos de ctricos
Salvado de trigo y otros granos integrales
Hortalizas de hojas verdes
Carne de ave, de cerdo, mariscos
Hgado
De<iciencia
Efectos secundarios
La deficiencia de cido flico puede causar retraso en el
crecimiento, encanecimiento del cabello, inflamacin de la
lengua (glositis), lceras bucales, lcera pptica y diarrea.
Tambin puede llevar a ciertos tipos de anemias.
Por lo general, no se presenta toxicidad con el consumo de
cantidades excesivas de cido flico, ya que ste es
hidrosoluble y el cuerpo lo excreta con regularidad. En dosis superiores a los
5,000 microgramos el cido flico puede causar naseas, prdida de apetito o
127
diarreas. Las personas que padecen de epilepsia no deben ingerir dosis
mayores a los 4,000 microgramos ya que existe la posibilidad de que pudiese
provocar un aumento en la actividad convulsiva.
Ulceras Bucales
Son lceras o lesiones abiertas en la boca causadas por diversos trastornos.
Sntomas
Dolor y molestia en la boca
Presencia de llagas abiertas en la boca
La aparicin y localizacin exacta de las lesiones vara segn la enfermedad
especfica.
Requerimientos diarios
La dosis diaria recomendada es de 400 microgramos diariamente, aunque en el
tratamiento de algunas condiciones se emplean hasta 1000 microgramos.
Edad(aos) RDA(mg)
Lactantes
0.0-0.5
0.5-1.0
25
35
Nios
1-3
4-6
7-10
50
75
100
Hombres
11-14
15-18
19-24
25-50
51+
150
200
200
200
200
Mujeres
11-14
15-18
19-24
25-50
51+
Embarazo
Lactancia
Primeros 6meses
Segundos 6
meses
150
180
180
180
180
400
280
260
128
129
Formula
D$ &'7ALAMINA 87#69
Desde que fuera descubierto que el hgado resultaba sumamente eficaz en el
tratamiento de la anemia perniciosa, los investigadores no han cesado en sus
esfuerzos por descubrir el principio activo o factor extrnseco presumiblemente
en este rgano. Al principio pareci que el cido flico era la respuesta, pero
posteriormente se revel inoperante para la remisin de algunos sntomas que
de aquella enfermedad.
Por fin en el ao de 1948 fue aislada del hgado una substancia ms activa, la
llamada vitamina B12,
Efectiva en cantidades del orden del microorganismo en el tratamiento de la
anemia perniciosa y de otros tipos de anemias macrocticas. Esta vitamina es
pues probablemente identica al factor extrnseco de Castle. Su actividad oral se
ve potenciada por el factor intrnseco normalmente presente en el jugo
gstrico, como era as mismo el caso con respecto al principio activo de los
extractos hepticos. Este factor intrnseco es esencial para la absorcin de la
vitamina B12.
Participa en el metabolismo de los carbohidratos, grasas y protenas; mejora la
formacin y regeneracin de los glbulos rojos previniendo la anemia; ayuda a
mantener sano el sistema nervioso; estimula el crecimiento de los nios;
aumenta la energa; ayuda en la absorcin del calcio y participa en la
produccin del material gentico en el interior de las clulas.
Funcin
Accin fisiolgica
-nterviene en la sntesis de ADN, ARN y protenas.
-Acta en la formacin de glbulos rojos.
-Participa en el mantenimiento de la vaina de mielina de las clulas nerviosas y
en la sntesis de neurotransmisores.
-Es necesaria para la movilizacin (oxidacin) de las grasas y para mantener la
reserva energtica de los msculos.
130
Fuentes naturales
Yema de huevo, levadura, carne de carnero, productos lcteos, salmn,
vsceras, pescado, chancho, polen y germen de trigo, algas marinas,
championes, entre otros.
De<iciencia
Reduccin de la percepcin sensorial, debilidad en brazos y piernas, y
problemas para caminar y hablar. Asimismo, olores corporales desagradables,
nerviosismo e irregularidad en la menstruacin.
-Escasez y anormalidad en la formacin de glbulos rojos (Anemia perniciosa).
-Psicosis, degeneracin nerviosa, desarreglos menstruales, lceras en la
lengua y excesiva pigmentacin en las manos (slo afecta a las personas de
color).
Anemia macrocitica (perniciosa).
La anemia es la disminucin del nmero de glbulos rojos de la sangre, que
puede ser causada por una deficiencia de vitamina B12.
Sntomas
Prdida del apetito
Diarrea
Entumecimiento y hormigueo de manos y pies
Palidez
Dificultad respiratoria
Fatiga
Debilidad
lceras en la boca y en la lengua
Confusin o cambios en el estado mental en casos severos o avanzados
131
Requerimiento diario
Los requerimientos mnimos de vitamina B
12
, son de 2 g para el adulto.
Durante la gestacin y la lactancia las necesidades aumentan en unos 2,2-2,6
g.
Edad(aos) RDA(mg)
Lactantes
0.0-0.5
0.5-1.0
0.3
0.5
Nios
1-3
4-6
7-10
0.7
1.0
1.4
Hombres
11-14
15-18
19-24
25-50
51+
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
Mujeres
11-14
15-18
19-24
25-50
51+
Embarazo
Lactancia
Primeros 6meses
Segundos 6
meses
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
2.2
2.6
2.6
132
Formula
H$ A&ID' AS&'R7I&' 8?I%AMINA &9
Es una vitamina hidrosoluble necesaria para el crecimiento y desarrollo
normales.
Es un antiescorbuto. Es un material blanco, cristalino e hidrosoluble que es
estable en forma pulverizada. Se oxida con facilidad cuando esta en solucion,
en especial al exponerse al calor. La oxidacin puede acelerarse por la
presencia de cobre o hierro y por el PH alcalino.
Funcin
La vitamina C ayuda al desarrollo de dientes y encas sanos, a la absorcin del
hierro y al mantenimiento del tejido conectivo normal, as como tambin a la
cicatrizacin de heridas. gualmente, ayuda al sistema inmunolgico del cuerpo.
Es necesario en las hidroxilaciones de la prolina y la lisina, en la degradacin
de la tirosina, en la sntesis de adrenalina a partir de tirosina, en la formacin
de cidos biliares, en la absorcin del hierro y en la sntesis de colgena.
Adems el cido ascrbico puede reaccionar con radicales libres por lo que se
vuelve un antioxidante hidrosoluble que conserva numeroso factores metlicos
en el estado reducido.
Fuentes alimenticias
La vitamina C se encuentra en el pimentn verde, frutas y jugos de ctricos, la
fresa, el tomate, el brcoli, los nabos y otras verduras, la papa blanca y el
camote o batata y el meln. La mayora de las otras frutas y hortalizas, al igual
que el pescado y la leche, contienen pequeas cantidades de vitamina C.
133
Deficiencia
Efectos secundarios
La deficiencia de vitamina C causa escorbuto, una
enfermedad muy rara en los Estados Unidos. una deficiencia
de consumo de vitamina C puede generar escorbuto. Se
encuentran casos de este ltimo entre ancianos que viven
solos, alcohlicos, drogodependientes, y otros con dietas inadecuadas, incluso
lactantes. En casos espontneos de escorbuto, por lo general hay aflojamiento
de los dientes, gingivitis y anemia, que pueden deberse a una funcin
especfica del cido ascrbico en la sntesis de hemoglobina. El cuadro del
escorbuto espontneo en la prctica clnica a menudo tambin se complica por
deficiencia de otros nutrientes.
Normalmente, no se presenta toxicidad debido a que la vitamina C es
hidrosoluble y el cuerpo la excreta regularmente. Sin embargo, estudios
recientes han mostrado que las dosis excesivas de vitamina C (muchas veces
ms de la cantidad recomendada) pueden llevar a que se presente toxicidad.
Las manifestaciones ms comunes de toxicidad por vitamina C son clculos
renales y en muy raras circunstancias anemia, causada por la interferencia con
la absorcin de la vitamina B12.
Tambin es posible que se presente diarrea, aunque sta no es un sntoma
muy comn asociado con el incremento masivo en la ingesta de esta vitamina.
Los leucocitos en adultos saludable tienen concentraciones de
aproximadamente 27 mg de cido ascrbico por 108 clulas.
Formula
134
Requerimiento diario
La ingestin adecuada se relaciona con cifras de ms de 0.5 mg/dl (28 mM).
La ingestin diaria de 5 a 10 mg proporciona una reserva corporal total de 600
a 1.000 mg de ascorbato. Cuando se consumen 60 mg/da de vitamina C (la
RDA actual para adultos), la concentracin plasmtica alcanza unos 0.8 mg/dl
(45 mM), y las reservas corporales totales son de aproximadamente 1.500 mg.
si el consumo se aumenta ms all de 200 mg/da, las reservas corporales
tienden a nivelarse a 2.500 mg, y las cifras plasmticas a 2 mg/dl (110 mM). el
umbral renal para el cido ascrbico es de alrededor de 1.5 mg/dl de plasma
(85 mM), y cuando la ingestin diaria excede de 100 mg, se excretan
cantidades cada vez mayores del cido ascrbico ingerido.
Edad (aos) RDA(mg)
Lactantes
0.0-0.5
0.5-1.0
30
35
Nios
1-3
4-6
7-10
40
45
45
Hombres
11-14
15-18
19-24
25-50
51+
50
60
60
60
60
Mujeres
11-14
15-18
19-24
25-50
51+
Embarazo
Lactancia
Primeros
6meses
Segundos 6
meses
50
60
60
60
60
70
95
90
135
RESUMEN DE INFRM!"IN DE #I$!MIN!S
Nombre RDA Fuentes Estabilidad Comentarios
Piridoxina(B6) 1.8-2.2 mg. Cerdo, vsceras
glandulares sal-
vado y germen
de cereales, le-
che, yema de
huevo harina de
avena, y
legumi-nosas.
Se sinte-tiza por
bacterias
intestinales
En el calor,
la luz y la
oxidacin.
Como una
coenzima,
ayuda En la
sntesis y
metabolismo
delos aa.
Sntesis de
cidos grasos
insaturados a
partir de cidos
grasos esen-
ciales
Folatos (cido
Folico)
400g. Verduras de
hoja
Verde, vsceras
(hgado) carnes
magra, trigo,
huevos, pesca-
dos, frijoles
secos, lentejas,
garbanzos,
esp-rrago,
brcoli, berza,
levadura. Se
sintetiza en el
tracto intestinal.
A la luz del sol
cuando se
encuentra en
solucin;
inestable el
calor en medios
cidos
Para la
biosntesis de
cidos
nucleicos.
Esencial para la
maduracin
normal de
eritrocitos.
Acta como una
coenzima: cido
tetrahidroflico
Cobalamina
(B12)
3g. Hgado, rion,
leche y
alimentos
lcteos, carne,
huevos. Los
"vegan
requieren
suplementos.
Se destruye
lentamente por
cidos,
alcalinos, luz y
oxidacin.
Participa en el
metabolismo de
fragmentos de
un solo carbono.
Esencial para la
biosntesis de
cidos nucleicos
y ncleoprote-
nas. Participa
en el
metabolismo del
tejido nervio-so.
Colabora en el
metabolismo de
folatos. Se re-
laciona con el
crecimiento.
136
?I%AMINAS LI'S'LU7LES
cido
Pantotnico
(B5)
4-7g Huevos, rin
hgado,
salmn y
levaduras,
presentes en
todas las
plantas y
alimentos de
origen animal
nestables en
cidos alcalinos,
calor y algunas
sales.
Como parte de
coenzima A,
acta en la
sntesis y
metabolismo
de muchos
compuestos
corporales
vitales.
Esencial en el
metabolismo
intermedio de
carbohidratos,
grasas y
protenas.
Biotina(B8) 30-100g Hgado,
hongos,
cacahuates,
levadura,
leche, carne,
yema de
huevo, la
mayora de
las levaduras,
pltano,
toronja,
jitomte,
sanda y
fresas.
Estable Componente
esencial de
enzimas.
Participa en la
sntesis y
metabolismo
de cidos
grasos a travs
de agregar y
eliminar CO2
hacia y desde
compuestos
activos y
eliminacin de
NH2 de los
aminocidos.
Vitamina C
(cido
ascrbico)
60g Acerola,
frutas ctricas,
jitomate,
meln,
pimiento,
hortaliza, col
cruda,
guayaba,
fresas, pia,
papas, kiwi
nestable en
calor, alcalinos y
oxidacin
excepto cidos.
Se destruye por
el
alamacenamiento
Mantienen la
substancia del
cemento
intracelular
conservando la
integridad
capilar.
Cosubstrato en
hidroxilaciones
que requieren
oxgeno
molecular.
mportante en
las respuestas
inmunolgicas,
cicatrizacin
de heridas.
137
Cada una de las vitaminas liposolubles, A, D, E y K tienen una funcin distinta
y separada la mayor parte de ellas se absorben con otros lpidos y la
absorcin eficiente
Requiere la presencia de bilis y jugo pancretico se trasportan al hgado va la
linfa como una parte de las lipoprotenas y se almacenan en diversos tejidos
corporales, aunque no todas en el mismo tejido o en la misma cantidad.
Normalmente no se excretan en la orina.
#)$ ?I%AMINA A 8RE%IN'L9
Fue la primera vitamina liposoluble que se identifico en 1913.
Vitamina A es el trmino genrico que se utiliza para describir a todos los
retinoles que tienen actividad biolgica.
La vitamina A, un alcohol cristalino amarillo claro es llamada retinol en
referencia a su funcin especfica en la retina ocular.
La vitamina A natural se presenta en la horma de esteres retinilos de cadena
larga.
Las formas metabolitamente activas de la vitamina incluyen la forma aldehdo
(retinal) y la horma cido (cido retinoico). Los carotenoides provitaminicos
amarillo-naranja-rojo, que el cuerpo convierte a vitamina A con diversos grados
de eficacia el -caroteno que es el ms activo, carotenos se conocen alrededor
de 30 paro solo tres tienen caractersticas para formar la vitamina estos son
los carotenos alfa (), beta (), gamma () el mas importante de ellos el beta.
Funcin
La vitamina a tiene funciones esenciales en la visin, el crecimiento, el
desarrollo seo, y el mantenimiento del tejido epitelial los procesos
inmunolgicos y la reproduccin normal.
Es un componente de los pigmentos y como tal es esencial para la integridad
de la fotorrecepcin en los bastones y conos de la retina.
La vitamina A es necesaria para el crecimiento y el desarrollo del esqueleto y
los tejidos blandos mediante su efecto en la sntesis de protenas y la
diferenciacin celular sea. Es necesaria para el desarrollo seo normal y para
las clulas epiteliales que forman el esmalte en el desarrollo de los dientes. La
vitamina es importante en el mantenimiento de las estructuras epiteliales
normales es necesaria en la diferenciacin de las clulas bsales dentro de las
clulas mucosas epiteliales.
Fuentes alimenticias
La vitamina A preformada se presenta nicamente en alimentos de origen
animal, o en las reas de depsito como el hgado o en relacin con las grasas
de l a leche y los huevos.
Los carotenos se encuentran en vegetales de color verde oscuro, vegetales de
hojas y vegetales de color amarillo-naranja, y en la fruta.
138
Los colores intensos en estos vegetales y frutas se relacionan con niveles ms
elevados de provitamina.
La vitamina A se encuentra en niveles teraputicos en el aceite de hgado de
bacalao y de mero.
Los carotenoides suministran la mayora de la vitamina A en el mundo. Las
zanahorias, sopas de vegetales hortalizas, espinacas, ensaladas de verduras,
jugo de naranja, papas, dulces, res estofada, mezcla de vegetales y los
melones constituyen las 10 fuentes ms importantes de provitamina A.
La vitamina A es relativamente estable al calor y la luz, sin embargo, se
destruye por oxidacin. Mejora su biodisponibilidad por la presencia de la
vitamina E y otros antioxidantes.
La coccin incrementa la biodiponibilidad de los carotenoides; sin embargo
disminuyen con la sobre coccin de manera dramtica. As mismo, se ha
mostrado que la deshidratacin reduce el caroteno en la zanahoria, el brcoli y
la espinaca.
Deficiencia
Se sabe que la deficiencia de vitamina A aumenta la
frecuencia, gravedad y mortalidad de todas las
enfermedades infecciosas.
La deficiencia de vitamina A se acompaa de queratizacin
de las membranas mucosas que revisten las vas
respiratorias, las vas digestivas y las vas urinarias, as
como de queratizacin de la piel corporal y el epitelio ocular, esto disminuye la
funcin de barrera de que tienen estas membranas para proteger al cuerpo de
contra las infecciones.
La deficiencia prolongada de vitamina A puede producir cambios de, ceguera
nocturna y ulceraciones de la cornea.
En estados de deficiencia extrema se afectan las membranas mucosas de la s
vas respiratorias de gastrointestinales y genito urinarias.
Otros sntomas de la deficiencia de la vitamina A son: perdida de apetito,
inhibicin del crecimiento, anormalidades esquelticas, queratinizacin de las
papilas gustativas y prdida del sentido del gusto.
Las deficiencias primarias de vitamina A son el resultado de dietas
inadecuadas.
Las deficiencias secundarias pueden resultar de enfermedades del hgado,
desnutricin de protenas energticas, abetalipoproteinemia o mala absorcin
por insuficiencia de cidos biliares
139
Toxicidad
Se ha informado que los niveles ms tempranos de toxicidad de la vitamina A
ocurren en personas con compromiso de la funcin heptica, por frmacos,
hepatitis, o desnutricin de protenas energticas; los nios y las embarazadas
son especialmente vulnerables.
El exceso de retinol causa cambios en las membranas biolgicas cuando la
cantidad de ingesta excede la capacidad de captacin del RBP.
La hipervitaminosis A aguda puede inducirse mediante dosis nicas de
retinol superiores a los 200 mg (660000 U) en adultos y 100mg (330000 U).

Los sntomas incluyen nausea, vomito, fatiga, desmayos, migraa y anorexia,
es posible ver abombamiento de las fontanelas en los lactantes.
La !ipervitaminosis " cr#nica que por lo general refleja el mal uso de los
suplementos, puede seguir a la ingesta repetida de vitamina A en cantidades
de cuando menos 10 veces los RDA. La respuesta del exceso crnico en una
persona es muy variable los sntomas desaparecen es semanas o meses
cuando los suplementos se suspenden.
Accutane un frmaco que se relaciona con la vitamina A que se desarrollo para
tratar el acne qustico grave es un teratgeno conocido.
La incapacidad para diagnosticar un embarazo antes de utilizarlo ha resultado
en recin nacida con defectos graves al nacimiento.
l -caroteno no es carcinognico, mutgeno o teratgeno, el jugo de
zanahoria y el jugo de tomate son ricos en -carotenos pueden consumirse en
enormes cantidades sin dao excepto para la frecuente y alarmante
caracterstica de adquisicin de un color amarillento en la piel que sigue al
deposito de los carotenos en los tejidos, que cuando se suspende el exceso de
ingesta, normalmente la piel se aclara en poco tiempo.
140
Requerimiento diario
La RDA para la vitamina A, expresados en microgramos (g) de retinol o
equivalentes de retinol (RE).
Los requerimientos en los lactantes se basan en la cantidad de retinol en la
leche humana.
Los requerimientos para los adultos se basan en los niveles que proporcionan
los niveles sanguneos adecuados y los depsitos hepticos.
El incremento de las cantidades de las mujeres durante el embarazo y la
lactancia proporcionan la cantidad suficiente para el deposito fetal y la vitamina
A en l a leche materna.
Los requerimientos mnimos para los adultos con el fin de mantener una
concentracin adecuada en la sangre y evitar los sntomas de la deficiencia
son de 500 a 600 g de retinol, o el doble con -caroteno.
REQUERMENTOS DETETCOS
RECOMENDADOS DE VTAMNA A
LACTANTES
EDAD (AOS) RDA(en g ER )
0.0-0.5 375
0.5-1.0 375
NOS
1-3 400
4-6 500
7-10 700
HOMBRES
11-14 1000
15-18 1000
19-24 1000
25-50 1000
51 + 1000
MUJERES
11-14 800
15-18 800
19-24 800
25-50 800
51 + 800
EMBARAZO 800
LACTANCA
PRMEROS SES
MESES
SEGUNDOS
SES MESES
1300
1200
141
Va por la cual la vitamina A llega a la clula.
142
Formula
143
##$?I%AMINA D 8&AL&IEER'L9"
Reconocida por McCollum como el componente del aceite de hgado de
bacalao que cura el raquitismo, hasta el descubrimiento de Deluca casi 50
aos despus de que la forma metabolicamente activa requiere sintetizarse en
el rin.
Los precursores de la vitamina D estn presentes en las fracciones del esterol
de los tejidos de animales y plantas en la forma de 7-dehidrocolesterol y el
ergosterol respectivamente, requieren radiacin ultravioleta para convertirse en
la forma provitamina ( D
3
(COLECALCFEROL) Y D
2
) y ambas
provitaminas requieren la conversin en la piel para la forma metabolicamente
activa.
La vitamina D se denomina mejor como una prohormona en lugar de vitamina
en vista que no necesita suministrarse de una fuente externa al cuerpo. Las
formas metabolicamente activas, el calcitrol y ercalcitrol se producen en el
rin y funcionan como hormonas, siendo el intestino y los huesos los rganos
blancos.
Absorcin transporte y almacenamiento
La vitamina D s ingerida absorbe
a partir de l intestino junto con los
lpidos, con ayuda de la bilis la
vitamina D de la piel se absorbe de
la piel o del intestino se une a la
protena captadora de vitamina D
plasmtica para transportarla a los
sitios de deposito en el hgado piel,
cerebro, huesos y probablemente
otros tejidos.
Metabolismo
La vitamina D (colecalciferol) se forma en la piel por la accin de los rayos
ultravioleta en la luz solar sobre el 7-dehidrocolesterol. La luz solar tambien
convierte la vitamina D a un compuesto inerte.
La vitamina D
3
se convierte en el hgado al metabolito biologicament5e activo,
25-hidroxicolecalciferol que es cinco veces ms potente que la vitamina D
3
.
La forma mas activa de la vitamina D el calcitrol o 1.25-dehidroxicolecalciferol
se produce en los riones. Aumenta la captacin de calcio y de fosfato al actuar
144
en el intestino aumentando su absorcin y en los huesos al incrementar su
movilizacin.
La hormona paratiroidea (PHT) que se libera en respuesta a la disminucin del
calcio serico parece ser el mediador que estimula la produccin del 1.25-
dehidroxicolecalciferol por el rin.
Funcin.
La vitamina D participa en la inmunidad, la reproduccin, la secrecin de
insulina y la diferenciacin de queratocitos. El calcitrol favorece la absorcin
intestinal de activa de calcio que requiere energa mediante la estimulacin de
la sntesis de la protena captadora de calcio en el borde en cepillo de la
mucosa intestinal.
La vitamina D estimula el sistema de transporte activo del fosfato en el
intestino .junto con la hormona paratiroidea, moviliza el calcio desde el hueso e
incrementa la reabsorcin tubular renal del calcio y fosfato.
Fuentes alimenticias
La vitamina D se encuentra en forma natural en los alimentos de origen animal
en la forma de colecalciferol en pequeas cantidades y muy variables en
mantequilla, crema, yema de huevo e hgado.
Las mejores fuentes alimentarias son los aceites de hgado de pescado. La
leche materna y la leche de vaca son fuentes pobres de la vitamina.
La vitamina D es notablemente estable y no se deteriora c7uando se calientan
los alimentos o se almacenan por periodos largos.
Deficiencia
La deficiencia de la vitamina D se manifiesta como raquitismo en los nios y
como osteomalacia en los adultos y en los adultos puede contribuir al
desarrollo de la osteoporosis.
RAQUTSMO.- la vitamina D es especifica para la prevencin y la curacin del
raquitismo (enfermedad relacionada con la malformacin de los huesos debido
a una mineralizacin deficiente de la matriz orgnica).
Los huesos raquticos no pueden sostener el peso y
tensin ordinaria, que resulta en un aspecto de piernas
arqueadas rodillas confluentes, trax en quilla y
protuberancia frontal del crneo.
El raquitismo rara vez se cura por completo y la estatura se
mantiene baja en estos individuos.
La incapacidad para absorber calcio debido a la deficiencia de vitamina D
disminuye el umbral renal para el fosfato resultando que
grandes cantidades de fosfato se excretan para mantener
un balance adecuado entre el calcio y el fsforo en la
sangre.
Las victimas tradicionales del raquitismo son los nios
pobres en ciudades industrializadas donde la exposicin
al sol es limitada.
145
Los nios negros estn en mayor riesgo de deficiencia de la vitamina D que los
nios blancos debido a que el pigmento de la piel evita que el 7-
dehidrocolesterol este accesible a la radiacin.
Sntomas.- los primeros sntomas visibles del raquitismo son sudor profuso
e inquietud, adems en los lactantes mientras estn dormidos mueven su
cabeza de un lado a otro y frotan su cabello.
Los nios no llegan a estar delgados o emaciados y con frecuencia los padres
no reconocen los sntomas del raquitismo sino hasta que los nios empiezan a
caminar.
Para prevenir el raquitismo en el recin nacido, es importante iniciar una
administracin apropiada de vitamina D al inicio del periodo de crecimiento y
durante el resto de este.
OSTEOMALACA.- la deficiencia de la vitamina D en la etapa adulta produce
osteomalacia, una condicin que se caracteriza por un debilitamiento excesivo
de los huesos lo cual lleva a deformidades en especial de las extremidades,
columna vertebral, el trax y la pelvis .La osteomalacia se confunde con la
osteoporosis. Los sntomas tpicos son dolor de tipo reumtico y debilidad
generalizada, se ocasionalmente en varones, con mayor frecuencia se observa
en mujeres en edad reproductiva y dieta inadecuada o en mujeres que se
visten con de ropa con poca exposicin al sol
Toxicidad
La hipervitaminosis D causa cambios patolgicos estos cambios consecuencia
de la hipercalcemia son la calcificacin excesiva sea y de los tejidos blandos
como el rin (incluyendo clculos renales), pulmones, as como la membrana
timpnica, que puede producir sordera .es frecuente la presencia del dolor de
cabeza y nauseas. Los lactantes a los que se les dan cantidades excesivas de
vitamina D pueden tener trastornos gastrointestinales, fragilidad de los huesos
retardo en el crecimiento y retardo mental.
Requerimientos diarios
Auque 2.5 g de vitamina D diarios son suficientes para prevenir el raquitismo,
niveles mas elevados se prescriben para los lactantes y durante todo el periodo
de desarrollo esqueltico con base en la cantidades que favorecen un
crecimiento optimo los nios nacen con suficiente vitamina D para que dure 9
meses despus de los cuales deben prescribirse los suplementos para
prevenir el raquitismo.
146
El aumento de los requerimientos durante el embarazo y la lactancia reflejan
las demandas del crecimiento fetal y el contenido del calcio de la leche
materna.
REQUERMENTOS DETTCOS
RECOMENDADOS DE VTAMNA D
LACTANTES
EDAD (AOS) RDA(en g
colecalciferol)
0.0-0.5 7.5
0.5-1.0 10
NOS
1-3 10
4-6 10
7-10 10
HOMBRES
11-14 10
15-18 10
19-24 10
25-50 5
51 + 5
MUJERES
11-14 10
15-18 10
19-24 10
25-50 5
51 + 5
EMBARAZO 10
LACTANCA
PRMEROS SES MESES
SEGUNDOS SES
MESES
10
10
147
Formula
#6$?I%AMINA E 8%'&'EER'L9
La vitamina E se descubri en 1922 que se aisl de aceite vegetales una
fraccin qumicamente pura se descubri en 1938 y se denomino tocoferol, que
se forma de las palabras griegas que significa to$os que significa nacimiento,
y p!ero que significa producir o dar a luz.
Metabolismo
La actividad de la vitamina E en los alimentos esta constituida por los
tocoferoles alfa, beta, gamma, delta y por los tocotrienoles. Su caracterstica
qumica ms importante es su propiedad antioxidante la vitamina e es bastante
estable al calor y los cidos e inestable a los alcalinos, luz ultravioleta, y
oxigeno. Se destruye cuado se pone en contacto con grasas rancias plomo y
hierro.
148
Debido a que son insolubles en agua no hay prdida por la extraccin en el
cocimiento; sin embargo, la congelacin y la fritura profunda en grasa
destruyen la mayora del tocoferol presente.
La absorcin de la vitamina E es relativamente ineficaz, con un rango que
varia entre un 20 y un 80 % se almacena en el hgado y en mayor grado en los
tejidos grasos.
Funcin
La vitamina E acta en los alimentos la peroxidacin de los cidos grasos
poliinsaturados (AGP) a nivel del intestino, favorece la actividad de la vitamina
A al prevenir su oxidacin en el tracto intestinal.
La capacidad de la vitamina E para evitar tal destruccin permite sugerir que a
la larga puede ser til para prevenir condiciones que se relacionan con la
destruccin de radicales libres, como son el envejecimiento, efectos de toxinas
ambientales y el desencadenamiento de algunas formas de carcinognesis.
La gran relacin que se reconoce entre la vitamina E y el selenio parece reflejar
la presencia de otros sistemas antioxidantes.
Las propiedades antioxidantes de la vitamina E pueden ser las responsables de
la curacin de una dermatitis crnica resistente de la mano.
Fuentes alimenticias
La vitamina E de distribuye ampliamente en los alimentos de uso comn los
aceites de semillas, en particular el aceite de germen de trigo, constituyen la
fuente mas rica tambin n menor cantidad se encuentran en frutas, verduras, y
en grasas animales.
El cacahuate, las aceitunas, el coco, y los aceites de pescado son fuentes
pobres de esta vitamina.
149
Deficiencia
Debido a la amplia disponibilidad diettica de la vitamina E es poco frecuente
su deficiencia se relaciona con mala absorcin o anormalidades del transporte
de lpidos.
Los recin nacidos tienen concentraciones bajas de vitamina E debido a que
hay poca transferencia a travs de la placenta. La cantidad de vitamina E en la
leche humana en apariencia es suficiente para satisfacer los requerimientos del
lactante.
La deficiencia de vitamina E se relaciona con sntomas de neuropata
perifrica.
Toxicidad
La toxicidad del complemento de vitamina E es baja inclusive a niveles
relativamente elevados sin embargo la conocida toxicidad de la vitaminas
liposolubles A y K sugieren tener cuidado con respecto a las megadosis de
vitamina E a largo plazo.
Formula
150
Requerimiento diario
El requerimiento de vitamina E depende de la cantidad de AGP consumido
debido a que esto varia considerablemente en los individuos.
REQUERMENTOS DETTCOS
RECOMENDADOS DE VTAMNA E
LACTANTES
EDAD (AOS) RDA(en mg de
alfa tocoferol)
0.0-0.5 3
0.5-1.0 4
NOS
1-3 6
4-6 7
7-10 7
HOMBRES
11-14 10
15-18 10
19-24 10
25-50 10
51 + 10
MUJERES
11-14 8
15-18 8
19-24 8
25-50 8
51 + 8
EMBARAZO 10
LACTANCA
PRMEROS SES MESES
SEGUNDOS SES
MESES
12
11
151
#F$?I%AMINA K
El factor antihemorrgico se denomino vitamina K o vitamina de la coagulacin.
La vitamina se aisl y se sintetizo en 1939.
Propiedades fsicas y qumicas
La vitamina K existe cuando menos en tres formas perteneciendo todas a un
grupo de compuestos qumicos conocidos como quinonas .las formas que se
presentan naturalmente son la vitamina K
1
(filoquinona), que se presenta en las
plantas verdes y la vitamina K
2
(menaquinona),que se forma como resultado de
la accin bacteriana en el tracto intestinal.
El compuesto sinttico liposoluble , menadiona (vitamina K
3
) esta cerca del
doble de la potencia biolgica de las vitaminas K
1
y K
2
que se presentan
naturalmente si se utiliza un peso equivalente, debido a que le falta la cadena
lateral larga de la vitamina natural el cuerpo debe aadir la cadena lateral a la
menadiona antes de que pueda funcionar como vitamina K ninguna de las
formas de la vitamina K se almacena en cantidades apreciables.
152
La vitamina K es bastante resistente al calor, no se destruye por los mtodos
de coccin ordinaria y debido a que la vitamina K es liposoluble no se pierde en
el agua de cocimiento tienden a ser inestables en presencia de alcalinos y de
luz.
Funcin
La vitamina K funciona en el hgado como un cofactor esencial para la
carboxilasa .las protena participante incluyen a la protrombina que es un factor
de la coagulacin dependiente de la vitamina (factor ) y los factores V X y
X .
Fuentes alimenticias
La vitamina K se encuentra en grandes cantidades en vegetales verdes, en
especial brcoli, repollo, nabo verde y lechuga. Otros vegetales, las frutas,
cereales, productos lcteos, huevo, y carne contienen pequeas cantidades.
Una cantidad significativa se horma por la flora bacteriana de la parte inferior
del intestino humano.
Deficiencia
La deficiencia de la vitamina K es rara, se relaciona con la mala absorcin de
lpidos o la destruccin de la flora intestinal por tratamiento antimicrobiano
continuo. Enfermedades hepticas que interfieran con la utilizacin de la
vitamina K pueden producir una deficiencia grave.
153
Toxicidad
Las dosis excesivas de vitamina K sintetica (menadiona) han producido anemia
hemoltica en animales de laboratorio y Kernicterus en el lactante.
Requerimientos diarios
Del nivel recomendado de 1g/Kg. de peso corporal, se asume que la mitad se
suministra por la sntesis intestinal y el resto por la dieta.
REQUERMENTOS DETTCOS
RECOMENDADOS DE VTAMNA K
LACTANTES
EDAD (AOS) RDA(en g )
0.0-0.5 5
0.5-1.0 10
NOS
1-3 15
4-6 20
7-10 30
HOMBRES
11-14 45
15-18 65
19-24 70
25-50 80
51 + 80
MUJERES
11-14 45
15-18 55
19-24 60
25-50 65
51 + 65
EMBARAZO 65
LACTANCA
PRMEROS SES MESES
SEGUNDOS SES
MESES
65
65
154
155
Formula
156
RESUMEN DE INFRM!"IN DE #I$!MIN!S
NOMBRE RDA FUENTES ESTABLDAD COMENTAROS
VTAMNA A
(retinol, -
caroteno)
4000 a
5000 U
Higado, rion, nata,
margarina fortificada,
yema de huevo ,
verduras de hoja amarilla
y verde oscuro ,
albaricoque, meln y
duraznos.
Estable en la luz,
calor y mtodos
habituales de
cocimiento. Se
destruye por la
oxidacin,
sequedad,
temperaturas muy
elevadas, luz
ultravioleta.
Esencial para el
crecimiento normal
el desarrollo y el
mantenimiento del
tejido epitelial. Es
esencial para la
integridad de la
visin nocturna.
Ayuda a
proporcionar el
desarrollo seo
normal e influye en
la formacin normal
de los dientes.
Acta como
antioxidante.
Toxica en grandes
cantidades.
Vitamina D
(calciferol)
400 U Alimentos radiados Estable en el calor
y la oxidacin
Es una prohormona
esencial para el
crecimiento y
desarrollo normal,
desarrllo de huesos
y dientes normales
absorcin y
metabolismo de
fsforo y calcio
.toxica en grandes
cantidades.
Vitamina E
(tocoferol y
tocotrienoles )
8-10 mg Germen de trigo, aceites
vegetales, verduras de
hojas verdes, grasa de
leche, nueces.
Estable al calor y
a los cidos se
destruye por
grasas rancias,
alcalinos, oxigeno
plomo sales de
hierro y radicacin
ultravioleta.
Fuente antioxidante
evita oxidacin de
cidos grasos
insaturados y la
vitamina A a nivel
intestinal y tejidos
corporales protege
a los eritrocitos de
la hemlisis. Acta
en la reproduccin,
mantenimiento del
tejido epitelial y la
sntesis de
prostaglandinas
Vitamina K
(filoquinona y
menaquinona )
70-140g Hgado, aceite de soya,
otros aceites vegetales,
verduras de hoja verde,
salvado de trigo. Se
sintetiza en el tracto
intestinal.
Resiste el calor, el
oxigeno, y
humedad se
destruye por
alcalinos y luz
ultravioleta.
Ayuda a la
produccin de
protrombina un
compuesto que se
requiere para la
coagulacin normal
de l sangre. Toxica
en grandes
cantidades.
BBLOGRAFA
157
Vitaminas
Casanueva, ester, et al. Nutriologa Mdica. Mxico. 2001. Ed.
Panamericano. 2 ed. Fundacin Mexicana para la salud. 719 p.
Murrary Robert K. et. Al. Bioqumica de Harper. Mxico. 1997. Ed. Manual
Moderno. 14 ed. 1021 p.
Hicks, J. J. Bioqumica. Mxico. 2000. Ed. Mac Graw-Hill interamericana.
900 p.

Maham K. L. ESCOTT- STUMP. Nutricion y detioterapia de Krause.
Mxico. 2000. Mac Grawll-Hill interamericana. 10 Ed. 1274 p.
Lehninger: Principles of Biochemistry, David L. Nelson, Michael M. Cox Ed.
Wort Publishers Third Ed. 2000 U. S.
www. Zonadiet.com
www.arrakis.com
www.biologianatural.com
Eunice Rueda Medina.
Ana Cecila Sosa Estebane.
Viviana Rivas Alvarez.
158
UNIDAD?I
@UIMI&A Y ME%A7'LISM' DE NU&LE'%ID'S
El cido desoxirribonucleico y el cido ribonucleico son macromolculas
catenarias que actan en el almacenamiento y la transferencia de la
informacin gentica. Son componentes de las clulas y constituyen del 5 al
15% de su peso seco. Los cidos nucleicos estn presentes en los virus,
complejos de protenas y de cido nucleico infecciosos capaces de dirigir su
propia replica al infectar a una clula husped especfica.
Los nucletidos son las unidades monmeras de los cidos nucleicos.
#$ ES%RU&%URA GENERAL DE L'S B&ID'S NU&LEI&'S
Las unidades monmeras del DNA se denominan desoxirribonucletidos y
los del RNA se denominan ribonucletidos. Cada nucletido va a contener
tres componentes caractersticos:
1. Una base nitrogenada heterocclica derivado de la purina o pirimidina
2. Una pentosa
3. Una molcula de cido fosfrico
6$ NU&LE'%ID'S DE L'S X&ID'S NU&LEI&'S
PURNAS Y PRMDNAS
Los componentes principales del DNA son cuatro desoxirribonucletidos
diferentes; difieren entre s solo en sus bases nitrogenadas componentes de
los cuales reciben su nombre. Las cuatro bases caractersticas de las
unidades desoxirribonucletidos del DNA son los derivados purnicos
adenina y guanina y los derivados de la pirimidina son la citosina y timina.
De modo semejante son cuatro ribonucletidos diferentes los componentes
del RNA; contiene las bases purnicas adenina y guanina, y las bases
pirimidnicas citosina y uracilo. La timina que se haya presente en el DNA,
pero no es habitual en el RNA, mientras que el uracilo se haya presente en
el RNA y solo muy raras veces en el DNA.
159
Estos compuestos heterocclicos poseen un carcter aromtico. La purina
se puede considerar como un derivado de la pirimidina, esta constituida por
un anillo de pirimidina y otro de imidazol.
En forma libre estas bases se encuentran solamente en cantidades mnimas
en las clulas, generalmente como producto de la hidrlisis de enzimtica
de los cidos nucleicos.
BASES NTROGENADAS DE LOS ACDOS NUCLECOS
La estructura tridimensional precisa de las diversas purinas y pirimidinas ha
sido deducida por anlisis de difraccin de rayos X. Las pirimidinas son
molculas planares mientras que las purinas son casi planares con un
fruncido muy ligero. En la siguiente figura se mostrara las dimensiones
exactas de la adenina:
Para las funciones biolgicas de los cidos nucleicos son de crucial
importancia no solamente las dimensiones si no tambin su capacidad para
formar enlaces de hidrgeno. Los grupos funcionales que intervienen en la
formacin de enlaces de hidrgenos son los grupos aminos de la adenina y
115.
0134 $/
0133 $/
0134$/
0144$/
0132$/
0128$/
0137$/
0134$/
127.
118.
114.
126.
108.
110.
109.
0
160
la guanina y la citosina, los grupos -NH- del anillo en la posicin 1 de la
adenina y guanina y la posicin 3 de la base de la pirimidina, as como los
tomos electronegativos que estn situados en la posicin 2 de las
pirimidinas y en la posicin 6 de la guanina.
Las bases pirimidnicas y pricas libes son relativamente insolubles en
agua. Son compuestos bsicos dbiles que pueden existir en dos o ms
formas tautomeras segn su pH.
Adems de las bases corrientes existen otros derivados de la purina y
pirimidina son llamadas bases raras o menores. Ente las pirimidinas
menores encontramos la %&metilcitosina y la %&!idroxilmetilcitosina' entre las
purinas con mayor frecuencia encontramos (&metiladenina y la )&
metilguanina. La mayor parte de estas bases son derivados metlicos de las
bases principales, pero algunas contienen grupos acetilos, isopentenilo o
hidroximetilo. Las bases menores tienen importancia en los tRNA.
Todas las bases de purina y pirimidina de los cidos nucleicos tienen una
absorcin de luz ultravioleta de 250-280 nm. Esta propiedad es til para el
reconocimiento y determinacin cuantitativa no solamente de las bases
libres, sino tambin de los nulesidos y nucletidos.
PENTOSAS
Otra diferencia de composicin entre estas dos clases de cidos nucleicos,
es que los desoxirribonucletidos contienen la pentosa a la )&desoxi&*&
ribosa, esta carece de oxigeno en el C2 por eso su nombre, mientras que
los ribonucletidos contienen la *&ribosa, adoptan la forma furanosa en los
nucletidos, contiene 5 tomos de carbono y uno de oxigeno, es una
molcula inestable. La numeracin de los tomos de carbono en la ribosa y
desoxirribosa de los nucletidos esta representada por un apostrofe, por
ejemplo 3 es el C3.

ACDO FOSFORCO
De manera constante el cido fosfrico interviene en la formacin de los
cidos nucleicos, la relacin es 1:1:1 para el cido fosfrico, el azcar y la
base prica o pirimidnica. El cido esta doblemente esterificado, por una
parte para unirse con la pentosa del nucletido y por otra para eslabonarse
con otro nucletido; deja as libre un grupo ionizable ms, que da
caractersticas de los cidos nucleicos.
161
ENLACES
La pentosa esta unida a la base por un enlace &N&glucosilo establecido
entre el tomo de carbono 1 de la pentosa y el tomo de nitrgeno 9 de la
purnica. O el nitrgeno 1 de las bases pirimidnicas. El grupo fosfato de los
nucletidos se halla unido mediante un enlace ster al tomo 5 de la
pentosa.
Cuando el grupo fosfato de un nucletido se separa por hidrlisis recibe el
nombre de nucle#sido+
Por lo tanto los nucletidos son los 5-fosfatos de los nuclesidos
correspondientes.
Los ribonucletidos y desoxirribonucletidos se encuentran libres en
cantidades significativas en la clula. Sus grupos fosfricos son cidos
fuertes, a pH 7,0 los nucletidos libres pueden existir principalmente en la
forma N-O-PO3, en la que el N es el grupo nuclesido. Debido a la
presencia de una base purnica o pirimidnica, todos los nucletidos
muestran una fuerte absorcin de 250 a 280 nm, lo que resulta muy til para
el anlisis cuantitativo.
F$ NU&LE'%ID'S IM'R%AN%ES
NAD (Dinucletido de adenina y nicotinamida)
El NAD es la niacina activa. Para su sntesis se requiere la forma de niacina
el nicotinato por enzimas presentes en el citosol de la clula. En el citosol, el
nicotinato se convierte a desamido-NAD al reaccionar con el 1-pirofosfato
de 5-fosforribosilo (PRPP) y luego por adenilacin con ATP. El grupo amido
de glutamina contribuye para formar la coenzima NAD. Y esta puede
fosfolilarse a NADP.
El NAD y NADP tienen mltiples actividades como coenzimas para
deshidrogenasas que se encuentran en el citosol, por ejemplo lactato
deshidrogenasa y dentro de mitocondrias como malato deshidrogenasa.
Son componentes crticos de numerosas vas metablicas que intervienen
en la disposicin de carbohidratos lpidos y aminocidos. En general, las
deshidrogenasas ligadas a NAD catalizan reacciones oxidorreduccin en
vas oxidativas (por ejemplo, ciclo del cido ctrico actuando como coenzima
para tres de deshidrogenasa del ciclo: isocitrato deshidrogenasa, alfa-
cetoglutarato deshidrogenasa y malato deshidrogenasa.).
162
El mecanismo de oxidorreduccin comprende adicin reversible de un ion
hbrido (H) al anillo de piridina mas la generacin de ion hidrgeno libre
NAD S A!6 NAD! S ! S A
FMN (mononucletido de flavina y FAD dinucletido de flavina y adenina)
La riboflavina activa es el mononucletido de flavina y el dinucletido de
flavina y adenina. El FMN se forma por fosforilacin dependiente de ATP,
en tanto que el FAD se sintetiza por una reaccin adicional con ATP en
donde la fraccin AMP del ATP se transfiere a FMN.
Ambas actan como grupos prostticos de enzimas oxidorreductasas y se
conoces como flavoproteinas. En general los grupos prostticos se enlazan
con fuerza pero no por covalencia a sus apoproteinas. Muchas de stas
enzimas contienen metales, por ejemplo, molibdeno y hierro y a stos se les
designa metalflavoproteinas"
Estas enzimas estn muy extendidas y las representan varias
oxidorreductasas importantes en el metabolismo de los mamferos, por
ejemplo, alfa-aminocido oxidasa en la desaminacin de aminocidos,
xantina oxidasa en la degradacin de purinas, aldehdo deshidrogenasas en
la degradacin de aldehdos , glicerol-3-fosfato deshidrogenasa mitocondrial
en la transportacin de equivalentes reductores del citosol a la mitocondria,
succinato deshidrogenasa en el cido ctrico, acil-CoA deshidrogenasa y la
flavoproteina que transfiere electrones en la oxidacin de cidos grasos.
163
En su papel de coenzimas las flavoproteinas experimentan reduccin
reversible del anillo isoaloxacina para reducir las formas reducidas de FMN2
y FADH2.
EMN EAD
AMPc (3-5 monofosfato de adenosina)
Este fosfodiester formado por ATP en una reaccin catalizado por adenil
ciclasa. La actividad de la adenil ciclasa es regulada por interacciones
complejas, muchas de las cuales comprenden a receptoras para hormonas.
El cAMP participa en diversas funciones reguladoras de las clulas; por
ejemplo, la regulacin de la actividad de la protena cinasa depende del
cAMP. Como molcula reguladora relativamente pequea de cAMP. En
consecuencia su concentracin es menor que la del ATP.
164
Las concentraciones de cAMP se conservan por interacciones de adenilato
ciclasa y cAMP fosfodiesterasa que catalizan la hidrlisis de cAMP a 5-
AMP
cAM
165
-$RE&URS'RES 7I'SIN%E%I&'S DE L'S NU&LE'%ID'S
URINI&'S Y IRIMIDINI&'S
Para la biosntesis de nucleosidos en el cual el constituyente principal son sus
bases , las purinas y pirimidinas.
veremos acontinuacion la biosntesis de purinas
SNTESS DE NOVO DE LOS NUCLEOTDOS PRMDNCOS
En las clulas de los mamferos, el anillo pirimidnico se sintetiza de novo
utilizando aminocidos como dadores de carbono y nitrgeno y CO
2
como
dador de carbono.
Al igual que en la sntesis de novo de los nucletidos purnicos, los
aminocidos tambin juegan un papel importante en la sntesis de los
nucletidos pirimidnicos. A diferencia de los nucletidos purnicos, en stos se
forma primero el anillo de la base y luego se incorpora el resto de ribosa fosfato
que proviene del PRPP. Los precursores son el aspartato, carbamil fosfato y
PRPP. Las reacciones que conducen a la sntesis de los nucletidos
pirimidnicos en las clulas de mamferos son las siguientes:
#" Formacin de carbamoilfosfato
6" Adicin de aspartato
F" Cierre del anillo para formar el anillo pirimidnico
-" Oxidacin del dihidroorotato
/" Adicin de la ribosa 5-fosfato
(" Descarboxilacin del OMP
166
Como vemos, la ruta de sntesis comienza con la formacin del carbamil fosfato
que es captado por el grupo g-NH
2
de la glutamina, y la serie de reacciones
que se ven en las siguientes figuras:
Figura 12: Sntesis de oroato. Tomado de Herrera, E. (Ed).
Bioqumica.
167
Figura 13: Sntesis de los nucletidos !irimidnicos a !artir del
orotato. Tomado de Herrera, E. (Ed). Bioqumica. "Bioqumica".
Figura 1#: Sntesis de los nucletidos de citidina. Tomado de
$e%lin, T. &. "Bioqumica".
'ed-a$1e es1as *eacc-)$es se s-$1e1-2a el $3cle41-d) p-*-/-d5$-c) U'P La 6)*/ac-4$ de
$3cle41-d)s de c-1-d-$a 1-e$e l3+a* a pa*1-* del $3cle41-d) de 3*-d-$a pe*) a $-7el de
1*-6)s6a1) Es1a *eacc-4$ pa*a s3 ca1a8)l-s/) es c)/) %3eda es%3e/a1-2ada e$ la
s-+3-e$1e 6-+3*a9
168
169
BBLOGRAFA:
Bioqumica de Harper 15 Edicin
Editorial manual moderno pag. 431-436,438-441,444
Albert L. Lehninger
Bioqumica de Lehninger 2 Edicin
Ediciones Omega pag. 734-747, 750-753
Karen Elmida Ramrez Ruvalcaba
Jesus Gil Aguirre
Alejandro Rios Aguirre
170
UNIDAD?II
7I'@UIMI&A DE L'S A&ID'S NU&LEI&'S
#$ 'rgani>acin de la cromatina 4 sus di<erentes <ormas
La cromatina es el material cromosmico estrado de ncleos de clulas de
organismos eucariticos.
LA CROMATNA SE COMPONE DE MOLCULAS DE DNA MUY LARGAS, DE DOBLE TRA, Y
DE UNA MASA CAS GUAL A LAS PROTENAS BSCAS MS PEQUEAS LLAMADAS
HSTONAS, AS COMO DE UNA CANTDAD MENOR DE PROTENAS NO HSTNCAS (LA
MAYOR PARTE DE LAS CUALES SON ACDGENAS Y MS GRANDES QUE LAS
HSTONAS), Y DE UNA PEQUEA CANTDAD DE RNA. LA HLCE DNA DE DOBLE TRA EN
CADA CROMOSOMA TENE UNA LONGTUD CENTOS DE VECES MAYOR QUE EL
DMETRO DEL NCLEO CELULAR. UNA FNALDAD DE ESTAS MOLCULAS, EN
PARTCULAR LAS HSTONAS, ES CONDENSAR EL DNA. LOS ESTUDOS DE LA
CROMATNA CON MCROSCOPO ELECTRNCO MUESTRAN PARTCULAS ESFRCAS
DENSAS LLAMADAS NUCLEOSOMAS QUE TENEN APROXMADAMENTE 10 NM DE
DMETRO Y ESTN CONECTADAS POR FLAMENTOS DE DNA. LOS NUCLEOSOMAS SE
COMPONEN DE DNA ENROLLADO ALREDEDOR DE UN CONJUNTO DE MOLCULAS DE
HSTONA.
MCROGRAFA ELECTRNCA DE NUCLEOSOMAS CONECTADOS POR TRAS DE CDO
NUCLECO. (LA BARRA REPRESENTA 2.5MM.)
171
Las histonas son las protenas cromatnicas ms abundantes.
LAS HSTONAS SON UN TANTO HETEROGNEAS Y CONSSTEN EN UNA SERE DE
PROTENAS BSCAS NTMAMENTE RELACONADAS. ENTRE LAS HSTONAS, LAS
HSTONAS H1 SON LAS MENOS FUERTEMENTE UNDAS A LA CROMATNA Y SON, POR
TANTO, FCLMENTE REMOVDAS CON UNA SOLUCN SALNA, DESPUS DE LO CUAL
LA CROMATNA SE VUELVE SOLUBLE. LOS NUCLEOSOMAS ASLADOS DEL CENTRO
CONTENEN CUATRO CLASES DE HSTONAS: H2A, H2B, H3 Y H4. LAS ESTRUCTURAS
DE LAS HSTONAS LGERAMENTE RCAS EN LSNA , H2A Y H2B, PARECEN HABERSE
CONSERVADO SGNFCATVAMENTE ENTRE LAS ESPECES, EN TANTO QUE LAS
ESTRUCTURAS DE LAS HSTONAS RCAS EN ARGNNA, H3 Y H4, SE CONSERVAN
PREDOMNANTEMENTE ENTRE LAS ESPECES. ESTA CONSERVACN RGDA MPLCA
QUE LA FUNCN DE LAS HSTONAS ES DNTCA EN TODOS LOS EUCAROTES
Y QUE LA MOLCULA ENTERA EST MPLCADA COMPLETA Y ESPECFCAMENTE EN
LLEVAR A CABO ESTA FUNCN. LOS DOS TERCOS C-TERMNALES DE LAS
MOLCULAS TENEN UNA COMPOSCN ORDNARA DE AMNOCDOS, MENTRAS QUE
SUS TERCOS AMNO TERMNALES SON RCOS EN AMNOCDOS BSCOS. ESTAS
CUATRO HSTONAS DEL CENTRO ESTN SUJETAS A CNCO TPOS DE MODFCACONES
COVALENTES: ACETLACN, METLACN, FOFORLACN, ADP-RBOSLACN Y
FJACN COVALENTE (SLO H2A) A LA PROTENA NUCLEAR, UBQUTNA. ESTAS
MODFCACONES DE LAS HSTONAS ES PROBABLE QUE DESEMPEEN ALGUNA ACCN
EN LA ESTRUCTURA Y FUNCN DE LA CROMATNA, PERO EN LA ACTUALDAD SE
CONOCE POCO ACERCA DE ESTO.
LAS HSTONAS NTERACTAN ENTRE S DE MANERAS MUY ESPECFCAS. LAS H3 Y H4
SE AGREGAN PARA FORMAR UN TETRMERO QUE CONTENEN DOS MOLCULAS DE
CADA UNA DE ELLAS (H3/H4)
2
, EN TANTO QUE H2A Y H2B FORMAN DMEROS (H2A-
H2B) Y COMPLEJOS OLGOMRCOS SUPERORES ([H2A-HG2B]
N
). EN CONDCONES
FSOLGCAS, DOS DE ESTOS TETRMEROS DE HSTONA SE UNEN PARA FORMAR EL
OCTMERO DE HSTONA.
El nucleosoma es una estructura que contiene histona y DNA.
SN EMBARGO, CUANDO EL TETRMERO H3
2
-H4
2
Y LOS DMEROS H2A-H2B SE
MEZCLAN CON DNA PURFCADO DE DOBLE TRA, SE FORMA EL MSMO PATRN DE
DFRACCN DE RAYOS X QUE EL OBSERVADO EN LA CROMATNA ASLADA
RECENTEMENTE. LOS ESTUDOS DE MCROSCOPA ELECTRNCA CONFRMAN LA
EXSTENCA DE NUCLEOSOMAS RECONSTTUDOS. ADEMS, LA RECONSTTUCN E
LOS NUCLEOSOMAS A PARTR DE DNA Y DE LAS HSTONAS H2A, H2B, H3 Y H4 ES
NDEPENDENTE DEL ORGEN ORGNCO O CELULAR DE LOS DVERSOS
COMPONENTES. LA HSTONA H1 Y LAS PROTENAS NO HSTNCAS NO SON
NECESARAS PARA LA RECONSTTUCN DEL CENTRO DEL NUCLEOSOMA.
EN EL NUCLEOSOMA, EL DNA ESTA SUPERENROLLADO EN UNA HLCE HACA LA
ZQUERDA SOBRE LA SUPERFCE DE LA HSTONA EN FORMA DE DSCO, QUE ES UN
OCTMERO COMPUESTO DE UN TETRMERO CENTRAL DE H3-H4 (H3/H4)2 Y DOS
DMEROS DE H2A-H2B. LAS HSTONAS DEL CENTRO NTERACTAN CON EL DNA EN
EL NTEROR DE LA SUPERHLCE SN FORMAR PROTUBERANCAS.
172
LOS TETRMEROS H32-H42 POR S MSMOS LE PUEDEN CONFERR PROPEDADES DE
NUCLEOSOMAS AL DNA Y AS TENE UNA FUNCN CENTRAL EN LA FORMACN DEL
MSMO.
LA ADCN DE DOS DMEROS H2A-H2B ESTABLZA LA PARTCULA PRMARA Y
ENLAZA FRMEMENTE DOS MEDAS VUELTAS ADCONALES DE DNA PREVAMENTE
UNDAS EN FORMA LAXA AL (H3/H4)
2
. DE ESTE MODO, 1.75 VUELTAS DE
SUPERHLCE DE DNA ESTN ENROLLADAS ALREDEDOR DE LA SUPERFCE DEL
OCTMERO DE HSTONAS, PROTEGENDO 146 PARES DE BASES DE DNA Y
FORMANDO EL CENTRO DE NUCLEOSOMA.
MODELO PARA LA ESTRUCTURA DEL NUCLEOSOMA, EN EL CUAL EL DNA EST
ENROLLADO ALREDEDOR DE LA SUPERFCE DE UN CLNDRO PLANO DE PROTENA
CONSTANDO DE DOS DE CADA UNA DE LAS HSTONAS H2A, H2B, H3 Y H4. LOS 146
PARES DE BASES DEL DNA, QUE CONSSTEN DE 1.75 GROS DE SUPERHLCE,
ESTN EN CONTACTO CON EL OCTMERO DE HSTONA. STA PROTEGE AL DNA DE
DGESTN POR UNA NUCLEASA.
ES PROBABLE QUE EL ENSAMBLE DE LOS NUCLEOSOMAS EST MEDADO POR UNA
PROTENA NUCLEAR ANNCA, LA NUCLEOPLASMNA. LAS HSTONAS, QUE SON
FUERTEMENTE CATNCAS, PUEDEN UNRSE EN FORMA NO ESPECFCA AL DNA
FUERTEMENTE ANNCO MEDANTE LA FORMACN DE PUENTES SALNOS. ES
EVDENTEMENTE QUE TAL NTERACCN NO ESPECFCA DE LAS HSTONAS Y EL DNA
SERA NOCVA PARA LA FORMACN DE NUCLEOSOMAS Y PARA LA FUNCN DE LA
CROMATNA. LA NUCLEOPLASMNA ES UNA PROTENA ANNCA PENTAMRCA QUE
NO SE UNE AL DNA N A LA CROMATNA, PERO PUEDE NTERACTUAR DE MODO
REVERSBLE CON UN OCTMERO DE HSTONAS DE TAL MANERA QUE STAS YA NO SE
ADHEREN EN FORMA NO ESPECFCA A SUPERFCES CON CARGA NEGATVA COMO
LAS DEL DNA. AL PARECER DE ESTE MODO LA NUCLEOPLASMNA MANTENE EN EL
NCLEO UN AMBENTE NCO CONDUCENTE A LA NTERACCN ESPECFCA DE LAS
HSTONAS Y EL DNA Y AL ENSAMBLE DE LOS NUCLEOSOMAS. UNA VEZ QUE EL
NUCLEOSOMA SE FORMA, LA NUCLEOPLASMNA DEBE SER LBERADA DE LAS
173
HSTONAS. AL PARECER LOS NUCLEOSOMAS MUESTRAN PREFERENCA POR CERTAS
REGONES EN MOLCULAS ESPECFCAS DE DNA, PERO LA BASE PARA ESTA
DSTRBUCN NO ALEATORA, DENOMNADA AJUSTE DE FASE SE DESCONOCE,
AUNQUE ES PROBABLE QUE SE RELACONE CON LA FLEXBLDAD FSCA RELATVA DE
CERTAS SECUENCAS DE NUCLETDOS QUE SON CAPACES DE ACOMODARSE EN LAS
REGONES CON TORCEDURAS DENTRO DE LA SUPERHLCE.
EL SUPEREMPACAMENTO DE LOS NUCLEOSOMAS EN EL NCLEO ES EN APARENCA
DEPENDENTE DE LA NTERACCN DE LAS HSTONAS H1 CON NUCLEOSOMAS
ADYACENTES.
Estructuras de orden superior proporcionan la compactacin de la cromatina.
LA MCROSCOPA ELECTRNCA DE LA CROMATNA REVELA DOS RDENES
SUPERORES DE ESTRUCTURA, LA FBRLLA DE 10 NM Y LA FBRA DE 25 A 30 NM DE
CROMATNA, MS ALL DE AQULLA DEL PROPO NUCLEOSOMA. LA ESTRUCTURA
NUCLEOSMCA DSCODAL TENE UN DMETRO DE 10 NM Y UNA ALTURA DE 5 NM.
AL PARECER LA FBRLLA DE 10 NM CONSTA DE NUCLEOSOMAS ORDENADOS CON
SUS BORDES TOCNDOSE Y SUS CARA PLANAS PARALELAS AL EJE DE LA FBRLLA. ES
PROBABLE QUE ESTA FBRLLA DE 10 NM SE SUPERENROLLE MS CON 6 A 7
NUCLEOSOMAS POR VUELTA PARA FORMAR LA FBRA DE 30 NM DE CROMATNA.
ESTRUCTURA PROPUESTA DE LA FBRA DE CROMATNA DE 30 NM FORMADA DE
SUPERHLCES DE SES NUCLEOSOMAS DE FBRLLAS DE 10 NM. EL EJE DE LA FBRA
DE 30 NM ES PERPENDCULAR AL PLANO DE LA PGNA.
CADA VUELTA DEL SUPERENROLLAMENTO SERA RELATVAMENTE PLANA Y LAS
CARAS DE LOS NUCLEOSOMAS DE VUELTAS SUCESVAS PODRAN SER CAS
PARALELAS UNA CON OTRA. LAS HSTONAS H1 PARECEN ESTABLZAR LA FBRA DE
30 NM, PERO SU POSCN Y LA DEL DNA ESPACADOR DE LONGTUD VARABLE NO
EST CLARA. ES POSBLE QUE LOS NUCLEOSOMAS FORMEN CERTA VAREDAD DE
ESTRUCTURAS DE EMPAQUE. PARA FORMAR UN CROMOSOMA MTTCO, LA FBRA DE
30 NM DEBE REDUCRSE EN LONGTUD OTRAS 100 VECES.
174
EN LOS CROMOSOMAS NTERFSCOS, LAS FBRAS DE CROMATNA PARECEN ESTAR
ORGANZADAS EN ASAS O DOMNOS DE 30 A 100 MLLARES DE PARES DE BASES
ANCLADAS EN UN ANDAMAJE ( O MATRZ DE SOPORTE) EN EL NCLEO. EN ESTOS
DOMNOS, ALGUNAS SECUENCAS DE DNA NO ESTN LOCALZADAS AL AZAR. SE HA
SUGERDO QUE CADA DOMNO EN FORMA DE ASA DE LA CROMATNA PUEDE
CORRESPONDER A UNA FUNCN GENTCA SEPARADA, QUE CONTENE TANTO
REGONES CODFCADORAS COMO NO CODFCADORAS DEL GEN.
Algunas regiones de cromatina son "activas y otras "inactivas.
GENERALMENTE, CADA CLULA NDVDUAL DE UN METAZOARO CONTENE LA MSA
NFORMACN GENTCA EN FORMA DE LAS MSMAS SECUENCAS DEL DNA. AS, LAS
DFERENCAS ENTRE TPOS CELULARES DSTNTOS EN UN MSMO ORGANSMO DEBEN
EXPLCARSE POR LA EXPRESN DFERENCAL DE LA NFORMACN GENTCA COMN.
SE HA DEMOSTRADO QUE LA CROMATNA QUE CONTENE GENES ACTVOS (ES DECR,
CROMATNA ACTVA PARA LA TRANSCRPCN) DFERE EN VARAS FORMAS DE
AQULLA DE LAS REGONES NO ACTVAS. LA ESTRUCTURA NUCLEOSMCA DE LA
CROMATNA ACTVA PARECE ESTAR ALTERADA A AN AUSENTE EN LAS REGONES
SUMAMENTE ACTVAS. EL DNA EN LA CROMATNA ACTVA CONTENE GRANDES
REGONES (APROXMADAMENTE 100 000 BASES DE LONGTUD) QUE SON SENSBLES
A LA DGESTN POR UNA NUCLEASA COMO LA DNASA . LA SENSBLDAD A LA
DNASA DE LAS REGONES DE CROMATNA QUE ESTN TRANSCRBNDOSE
ACTVAMENTE, REFLEJA SLO UN POTENCAL PARA LA TRANSCRPCN MS QUE LA
TRANSCRPCN EN S Y EN VAROS SSTEMAS PUEDE CORRELACONARSE CON UNA
FALTA RELATVA DE LA 5-METL-DESOXCTDNA EN EL DNA.
DENTRO DE REGONES GRANDES DE CROMATNA ACTVA EXSTEN ESTRECHAMENTOS
MS CORTOS DE 100 A 300 NUCLETDOS QUE EXHBEN UNA SENSBLDAD AN
MAYOR (OTRAS 10 VECES) A LA DNASA . ES PROBABLE QUE ESTOS STOS
HPERSENSBLES SE DEBAN A UNA CONFORMACN ESTRUCTURAL QUE FAVOREZCA
EL ACCESO AL DNA DE LA NUCLEASA. EN GENERAL, ESTAS REGONES SE
LOCALZAN PRXMAS CORRENTE ARRBA DEL GEN ACTVO Y CORRESPONDEN A UNA
ESTRUCTURA NUCLEOSMCA NTERRUMPDA DEBDO A LA FJACN DE PROTENAS
NO HSTONAS. EN MUCHOS PARECE SER QUE S UN GEN ES CAPAZ DE SER
TRANSCRTO, DEBE TENER UN STO HPERSENSBLE A LA DNASA EN LA CROMATNA
SEGUDAMENTE CORRENTE ARRBA. LAS PROTENAS QUE NTERVENEN EN LA
TRANSCRPCN Y LAS QUE SE OCUPAN DE CONSERVAR EL ACCESO A LA TRA
MOLDE, DEFNEN LA FORMACN DE STOS HPERSENSBLES. CON FRECUENCA LOS
STOS HPERSENSBLES PROPORCONAN LA PRMERA PSTA ACERCA DE LA
PRESENCA Y UBCACN DE UN ELEMENTO DE CONTROL DE LA TRANSCRPCN.
LA CROMATNA NACTVA PARA LA TRANSCRPCN EST EMPAQUETADA MS
DENSAMENTE DURANTE LA NTERFASE SEGN SE OBSERVA POR ESTUDOS CON EL
MCROSCOPO ELECTRNCO Y SE LE CONOCE COMO HETEROCROMATNA; LA
CROMATNA ACTVA PARA LA TRANSCRPCN SE TE CON MENOR DENSDAD Y SE LE
CONOCE COMO EUCROMATNA. GENERALMENTE, LA EUCROMATNA SE REPLCA
ANTES EN EL CCLO CELULAR DE LOS MAMFEROS QUE LA HETEROCROMATNA.
175
HAY DOS TPOS DE HETEROCROMATNA, LA CONSTTUTVA Y LA FACULTATVA. LA
HETEROCROMATNA CONSTTUTVA SEMPRE EST CONDENSADA Y, POR TANTO,
NACTVA. SE ENCUENTRA EN REGONES CERCANAS AL CENTRMERO DEL
CROMOSOMA Y EN LOS EXTREMOS CROMOSMCOS (TELMEROS). LA
HETEROCROMATNA FACULTATVA EN OCASONES EST CONDENSADA, PERO OTRAS
VECES ES TRANSCRTA ACTVAMENTE Y, POR CONSGUENTE, NO CONDENSADA,
APARECENDO COMO EUCROMATNA. DE LOS DOS MEMBROS DEL PAR DE
CROMOSOMA X EN LAS HEMBRAS DE LOS MAMFEROS, UN CROMOSOMA X ES CAS
COMPLETAMENTE NACTVO PARA LA TRANSCRPCN Y ES HETEROCROMTCO. SN
EMBARGO, DURANTE LA GAMETOGNESS, EL CROMOSOMA X HETEROCROMTCO SE
SEPARA Y SE VUELVE ACTVO PARA LA TRANSCRPCN DURANTE LA EMBROGNESS
TEMPRANA; POR TANTO ES HETEROCROMATNA FACULTATVA.
CERTAS CLULAS DE NSECTOS, POR EJEMPLO, ,H-./N/M0S, CONTENEN
CROMOSOMAS GGANTES QUE SE HAN REPLCADO DURANTE 10 CCLOS SN
SEPARACN DE LAS CROMTDAS HJAS. ESTAS COPAS DEL DNA SE ALNEAN LADO
A LADO EN REGSTROS PRECSOS Y PRODUCEN UN CROMOSOMA CON BANDAS QUE
CONTENE REGONES DE CROMATNA CONDENSADA Y BANDAS MS LGERAS DE
CROMATNA MS EXTENDDA. LAS REGONES ACTVAS PARA LA TRANSCRPCN DE
ESTOS CROMOSOMAS POLTCNCOS ESTN ESPECALMENTE EXTENDDAS EN LOS
"PUFS, EN LOS CUALES ES POSBLE DEMOSTRAR LAS ENZMAS NECESARAS PARA LA
TRANSCRPCN Y QUE SON LOS STOS DE SNTESS DEL RNA.
Correlacin entre la actividad de la RNA polimerasa y la sntesis de RNA.
Cierto nmero de genes se activan cuando las larvas de ,!ironomus tentans
se someten a choque trmico (39C durante 30 minutos). A: Distribucin de la
RNA polimerasa B (llamada tambin tipo ) en el cromosoma V aislado de la
glndula salival. La enzima fue identificada por inmunofluorescencia mediante
176
un anticuerpo dirigido contra la polimerasa. Las bandas 5C y BR3 son
especficas del cromosoma V y las flechas indican los abultamientos. B:
Autorradiograma de un cromosoma V incubado en presencia de H-uridina para
marcar al RNA. Notse la correspondencia de la inmunofluorescencia y la
presencia del RNA radiactivo (puntos). Barra=7Mm
6$EL DNA SE 'RGANITA EN &R'M'S'MAS"
En la metafase, los cromosomas de los mamferos poseen una simetra doble,
con cromtidas hermanas idnticas conectadas a un centrmero, la posicin
relativa de las cuales es caracterstica para un cromosoma dado. Cada
cromtida humana contiene una molcula de DNA de doble tira. Durante la
interfase, el empacamiento de la molcula de DNA es menos denso que como
se encuentra en el cromosoma condensado durante la metafase. Los
cromosomas en la metafase son inactivos par la transcripcin.
Dos cromtidas hermanas del cromosoma humano No. 12. Amplificacin 27
850x.
El genoma haploide humano consiste de 3x109 pares de bases o pares de
nucletidos alrededor de 1.7x107 nucleosomas. Por tanto, cada una de las 23
cromtidas en el genoma haploide humano contendr un promedio de 1.3 x
108 nucletidos en una molcula de DNA de doble tira. La longitud de cada
molcula de DNA debe comprimirse aproximadamente 8000 veces para
generar la estructura de un cromosoma metafsico condensado. En los
cromosomas en la metafase, las fibras de cromatina de 25 a 30 nm tambin
estn plegadas en una serie de dominios en forma de asa, cuyas porciones
proximales estn ancladas a un soporte proteinceo no histnico.
177
Resumen los ndices de empaquetamiento de cada uno de los rdenes de la
estructura del DNA.
El empaquetamiento de las nucleoprotenas dentro de las cromtidas no es el
azar, segn evidencias de los patrones caractersticos observados cuando los
cromosomas se tien con colorantes especficos como la quinacrina o el
colorante de Giemsa.
De individuo a individuo dentro de una misma especie, el patrn de teido
(formacin de bandas) de todo el complemento del cromosoma es altamente
reproducible; no obstante, difiere de manera significativa en otras especies, aun
en aquellas ntimamente emparentadas. As pues, el empacamiento de las
nucleoprotenas en los cromosomas de los eucariotes superiores debe
depender, de alguna manera de caractersticas especficas de las especies
moleculares del DNA.
Una combinacin de tcnicas de tincin especializadas y microscopia de alta
resolucin permite a los genetistas mapear con bastante precisin miles de
genes de regiones especficas en cromosomas humanos y del ratn.
178
Cariotipo humano (de varn con una constitucin normal 46,XY), en el cual los
cromosomas se tieron por el mtodo de Giemsa y alineados de acuerdo con
la Convencin de Pars.
Con frecuencia, las regiones codificantes estn separadas por secuencias
intercaladas.
Las regiones codificadoras del DNA, cuyas transcripciones finalmente aparecen
en el citoplasma como molculas nicas del mRNA, estn interrumpidas en el
genoma por grandes secuencias intermedias de DNA que no codifica. De
acuerdo a esto, las transcripciones primarias del DNA, hnRNA, contienen
secuencias intermedias no codificadoras de RNA que deben retirarse en un
proceso en el cual adems se renen los segmentos codificadores apropiados
para formar el mRNA maduro. Casi todas las secuencias codificadoras para un
mRNa sencillo, estn interrumpidas en el genoma (y por tanto en la
transcripcin primaria) por cuando menos una, y en algunos casos hasta 50,
secuencias intermedias no codificadoras (intrones).
No esta muy clara la funcin de las secuencias intermedias o intrones. Pueden
servir para separar dominios funcionales (exones) de informacin codificadora,
en una forma que permita se produzca el reordenamiento gentico por
recombinacin con ms rapidez, que si todas las regiones codificadoras para
una funcin gentica dada estuvieran contiguas. Tal aumento en la velocidad
del reordenamiento gentico de los dominios funcionales permitira una
evolucin ms rpida de la funcin biolgica.
La relacin entre el cromosoma DNA y mRNA. El complemento del haploide
DNA humano de 3x109 pares de bases (pb) est distribuido entre los 23
cromosomas. Los genes estn agrupados en estos cromosomas. Un gen
179
promedio puede tener una longitud de 20 000 pb, incluyendo la regin
reguladora (diagonales) la cual, por lo general, se localiza en el extremo 5'
del gen. La regin reguladora se presenta aqu como adyacente al sitio donde
se inicia la transcripcin (flechas). La mayor parte de los genes euriticos
tienen alternancias de exones e intrones. En este ejemplo, existen nueve
exones (negro) y ocho intrones (reas azules). Los intrones se retiran de la
transcripcin primaria mediante la reaccin de procesamiento y los exones
estn unidos juntos en una secuencia que forma el mRNA maduro (nt,
nucletidos).
F$ES%RU&%URA DEL DNA1 EUEN%E DE INE'RMA&IAN GENM%I&A
NTRODUCCN.
El descubrimiento de que la informacin gentica est codificada a lo largo de
una molcula polimrica compuesta por slo cuatro tipos de unidades
monomricas, es uno de los logros cientficos ms importantes de este siglo.
Esta molcula polimrica, el DNA, es la base qumica de la herencia y est
organizada en genes, unidades fundamentales de la informacin gentica. Los
genes controlan la sntesis de varios tipos de RNA, que en su mayor parte
estn involucrados en la sntesis de protenas. Los genes no funcionan de
manera autnoma; su replicacin y funcionamiento se controlan por varios
productos de gen, a menudo en colaboracin con componentes de varias vas
de transduccin de seales. El conocimiento de la estructura y funcin de los
cidos nucleicos es esencial para comprender la gentica y muchos aspectos
de la fisiopatologa de la enfermedad, as como los fundamentos genticos de
la enfermedad.
MPORTANCA BOMDCA.
La base qumica de la herencia y de las enfermedades genticas se encuentra
en la estructura del DNA. Se ha dilucidado la va de informacin bsica (esto
es, el DNA dirige la sntesis del RNA, que a su vez regula la sntesis de
protenas). Este conocimiento se est usando para definir la fisiologa celular
normal y la fisiopatologa de la enfermedad a nivel molecular.
EL DNA CONTENE LA NFORMACN GENTCA.
La demostracin de que el DNA contiene la informacin gentica se hizo por
primera vez en 1944 en una serie de experimentos realizados por Avery,
MacLeod y McCarty, quienes mostraron que la determinacin gentica del
carcter (tipo) de la cpsula de un neumococo especfico poda ser transmitida
a otro neumococo de un tipo capsular diferente introduciendo DNA purificado
del primer tipo en el segundo. Estos autores se referan al agente (despus
mostrara ser el DNA) que efectuaba el cambio como el "factor de
transformacin). Subsecuentemente, este tipo de manipulacin gentica se ha
hecho comn. Recientemente se han realizado experimentos similares
utilizando levaduras, clulas de mamferos cultivadas, embriones de insectos y
roedores como receptores y DNA clonado como el donador de la informacin
gentica.
EL DNA EST CONSTTUDO POR CUATRO DESOXNUCLETDOS.
180
La naturaleza qumica de las unidades desoxinucletidas mononumricas del
DNA desoxiadenilato, desoxiguanilato, desoxicitidilato y timidilato- . Estas
unidades monomricas del DNA se conservan en la forma polimrica por
puentes 3', 5' fosfodister constituyendo una sola tira.
Segmento de la estructura de la molcula de DNA en la cual las bases
purnicas y pirimidnicas, adenina (A), timina (T), citosina (C) y guanina (G) se
mantienen juntas por un esqueleto fosfodister entre los fragmentos 2'-
desoxirribosilo adheridos a las nucleobases por un enlace N-gulocosdico.
Ntese que el esqueleto tiene polaridad (es decir, direccin). Esto, por lo
general, se representa en la orientacin 5' a 3'.
El contenido informativo del DNA (el cdigo gentico) reside en la secuencia en
que se ordenan estos monmeros desoxirribonucletidos de purina y
pirimidina. El polmero posee una polaridad; un extremo tiene terminal 5'-
hidroxilo o fosfato, en tanto que el otro tiene a una fraccin 3'-fosfato o
hidrxilo. La importancia de esta polaridad se har evidente en las secciones
posteriores. Dado que la informacin gentica reside en el orden de las
unidades monomricas en los polmeros, debe existir un mecanismo para
reproducir o replicar esta informacin especfica con un elevado grado de
fidelidad. Ese requerimiento, junto con los datos de difraccin con rayos X de la
molcula del DNA y con la observacin de Chargaff de que en las molculas de
DNA la concentracin de los nucletidos de desoxiadenosina (A) es igual a la
de los nucletidos de timidina (T) (A=T), en tanto que la concentracin de los
nucletidos de desoxiguanosina (G) es igual a la de los nucletidos de
desoxicitidina (C) (G=C), condujo a Watson, Crick y Wilkins y proponer al
principio del decenio de 1950 el modelo de una molcula de doble tira del DNA.
181
Las dos tiras de esta molcula de doble hlice con giro a la derecha se
mantienen juntos por puentes de hidrgeno entre las bases purnicas y
pirimidnicas de las respectivas molculas lineales. La paridad entre los
nucletidos de las tiras opuestas es sumamente especfico y depende de los
enlaces del hidrgeno de A con T y de G con C.
El pareamiento de bases entre desoxiadenosina y timidina implica la formacin
de dos puentes de hidrgeno. Entre la desoxicitidina y la desoxiguanosina son
tres los enlaces. Las lneas punteadas representan los puentes de hidrgeno.
En la molcula de doble tira, las restricciones impuestas por la rotacin
alrededor del enlace fosfodister, la configuracin favorecida anti del enlace
glucosdico y los tautmeros predominantes de las cuatro bases (A, G, T y C),
permiten a A parearse slo con T y a G slo con C. Esta restriccin de
pareamiento de bases explica la observacin anterior de que en una molcula
de DNA de doble tira, el contenido de A es igual al de T y el contenido de G es
igual al de C. Las dos tiras de la molcula de doble hlice, cada una de las
cuales posee una polaridad, son antiparalelas, es decir, una tira corre en
direccin 5' a 3' y la otra en direccin 3' y 5'. Esto es anlogo a dos calles
paralelas, cada una con un solo sentido, pero con el movimiento del trnsito de
direcciones opuestas. En las molculas de DNA de doble tira, dado que la
informacin gentica reside en la secuencia de nucletidos de una, la tira
codificadora; la opuesta se considera la tira no codificadora debido a que es
complementaria de la transcripcin de RNA que codifica protenas.
Las dos tiras, en donde las bases estn opuestas, se conservan juntas por
puentes de hidrgeno, giran alrededor de un eje central para formar una hlice
doble. El DNA de tira doble existe en seis formas por lo menos (A a E y Z). Bajo
condiciones fisiolgicas (escasa sal, grado elevado de hidratacin), la forma B
182
alrededor del eje de la molcula contiene 10 pares de bases. La longitud de
expansin de ese giro es de 3.4nm. Su anchura (dimetro helicoidal) es de 2
nm.
Tres puentes de hidrgeno unen al nucletido desoxiguanosina con el
nucletido desoxicitidina en tanto que el otro par, el A-T, se conserva junto por
dos puentes de hidrgeno. Por tanto el enlace G-C es ms fuerte,
aproximadamente en 50 por ciento. Debido a esa fuerza adicional y tambin
por las interacciones de las columnas, las regiones de DNA ricas en enlaces G-
C son mucho ms resistentes a la desnaturalizacin o "fusin que las regiones
ricas en A-T.
-$E'RMAS ES%RU&%URALES A17 Y T DEL DNA
Las cadenas polimricas complementarias se presentan como una doble hlice
o espiral determinada por dos hebras -las columnas vertebrales constituidas
por azcares y fosfatos- que se enrollan en forma paralela alrededor de un eje
imaginario a la manera de una escalera caracol. Esta disposicin se denomina
plectonmica. Escalones de la metafrica escalera seran los pares de bases
unidas por puentes de hidrgeno.
En el caso del ADN ms frecuente, el de tipo B, el ancho de la doble hlice es
de 20 ( = Angstrom = 1/10.000.000 mm). Cada vuelta entera de la hlice
tiene una longitud de 34 y la distancia entre dos pares de nucletidos
sucesivos es de 3,4 , de manera que se necesitan 10 pares de bases para
completar un giro completo de la hlice. Asimismo, el sentido de giro se
corresponde con el de las agujas del reloj (sentido horario).
Los nucletidos se unen mediante los fosfatos que conectan el carbono en la
posicin 5' de una pentosa con el carbono en la posicin 3' de la adyacente.
Estas uniones 5'-3' determinan la direccionalidad de las cadenas. La figura 3
nos permite advertir con claridad que la direccin del extremo 5' al extremo 3'
de las dos cadenas complementarias es opuesta, antipolar o antiparalela.
183
Puede observarse tambin la presencia de un surco mayor y un surco menor
formados por los giros de la espiral plectonmica.
Unin complementaria de un par de bases G y C visto desde el extremo
superior del eje vertical de la doble hlice. La conformacin anti de las
pentosas es caracterstica de las formas A y B del ADN. Las conformaciones
anti de la C y sn de la G son caractersticas de la forma Z. Se sealan los
puntos por donde pasa el eje de la doble hlice en las formas A, B y Z.
El ADN presenta tres organizaciones espaciales diferentes, todas ellas con
forma de hlice, a las que se ha denominado A, B y Z. En el caso de las bases
complementarias G-C, por dnde pasa el eje imaginario de la hlice en cada
uno de estos tres tipos de ADN. Como puede observarse, la ubicacin del eje
modifica la profundidad de los surcos mayor y menor. Esta misma figura nos
ilustra acerca de cmo pueden situarse las pentosas de manera que los
carbonos en posicin 4' 'y 5' se orienten hacia el surco mayor (forma anti) o
hacia el surco menor (forma sn). Estas orientaciones caracterizan a los
distintos tipos de ADN, pues mientras las pentosas de las formas A y B se
ubican segn una modalidad anti, la forma Z presenta a la pentosa de la base
C en posicin anti y a la de la base G en posicin sn, hecho que, como luego
veremos, determina su forma peculiar.
Por lo general, el ADN se presenta bajo la forma B, pero ya Watson y Crick
observaron que en condiciones de moderada deshidratacin poda adoptar la
organizacin espacial A. En este caso se requieren 11 pares de bases para la
ejecucin de un giro completo de la hlice, lo cual determina una forma
ligeramente "subenrollada" con respecto a la que presenta el tipo B. Asimismo,
debido al desplazamiento de los pares de bases en relacin al eje longitudinal
de la hlice, el tipo A manifiesta una marcada diferencia entre sus surcos (el
184
mayor es mucho ms profundo que el menor), distincin que en el tipo B no
resulta particularmente notable. El ADN de tipo Z, del que luego nos
ocuparemos en detalle, se diferencia ms de las formas A y B que stas entre
s.
Watson y Crick describieron el modelo de las formas A y B del ADN mediante
la interpretacin de fotografas de difraccin de rayos X obtenidas de fibras de
ADN nativo, es decir, extrado de clulas. Sin embargo, la magnitud de la
informacin que puede obtenerse de este tipo de estudios es limitada, debido a
que las fibras de ADN son extremadamente largas, no cristalizan y
habitualmente presentan un cierto desorden estructural. El mtodo, a lo sumo,
permite establecer la estructura de un ADN promedio o estadstico, el cual no
necesariamente representa la estructura de las diferentes regiones de ADN A o
B existentes en la naturaleza. Cualquier variacin local de estructura que pueda
resultar de una secuencia particular de bases, pasar inadvertida al analizar la
difraccin de rayos X inducida por una larga fibra de ADN. Resulta claro,
entonces, que los ADN A y B de Watson y Crick son macromolculas
"abstractas" que representan el promedio de un conjunto de variantes
moleculares que se suceden a lo largo de la cadena. El anlisis estructural de
estas variantes slo ha sido posible en los ltimos aos, gracias al
advenimiento de mtodos eficaces para sintetizar cadenas muy cortas de ADN
que se denominan oligmeros. Estas cadenas poseen entre 4 y 24 pares de
bases cuya secuencia ha sido predeterminada por el investigador. Los
oligmeros cristalizan con facilidad y, por lo tanto, cuando se los somete a
difraccin de rayos X, proveen una informacin que permite la reconstruccin
espacial fidedigna de su estructura. Si adems se desea saber cmo sera la
arquitectura de una larga fibra de ADN formada por un gran nmero de
repeticiones del oligmero, pueden suministrarse los datos moleculares del
mismo a una computadora, la cual se encarga de simular un modelo espacial
con tantas repeticiones como se le ordene.
185
Esquema indicativo de la manera en que dos cadenas complementarias de
nucletidos se unen y adoptan la forma de doble hlice tpica de la
macromolcula de ADN.
186
/$R'IEDADES DEL ADN
Entre las propiedades ms importantes del ADN tenemos la desnaturalizacin,
hipercromicidad, relajamiento y superenrrollamiento.
Desnaturalizacin: Al someter las disoluciones de la forma de doble hlice
del ADN a pHs extremos, temperatura, disminucin de la constante
dielctrica del medio acuoso por incorporacin de alcoholes, cetonas etc.. y
al exponerlo a la urea, amidas y otros solutos similares. As disminuye la
viscosidad de la disolucin, la absorcin luminosa aumenta, la rotacin
ptica se torna ms negativa y la densidad de flotacin aumenta. A este
cambio fsico es a lo que se le denomina desnaturalizacin y estos agentes
deznaturalizantes del ADN son idnticos a los que inducen la
desnaturalizacin de las protenas globulares. Se debe tomar en cuenta
que en la desnaturalizacin del ADN no se rompen enlaces covalentes, pero
la estructura duplohelicoidal se desenrolla y se separa. Los puentes de
hidrogeno entre los pares de bases y las interacciones del apilado entre las
bases sucesivas, son los dos conjuntos de fuerzas responsables de
mantener la estructura de doble hlice del ADN. Cuando cualquiera de
estas fuerzas se interrumpe, la estructura duplohelicoidal nativa
experimenta su transicin a una forma con lazos al azar, denominada ADN
desnaturalizado o monofilar.
La desnaturalizacin de la molcula del ADN dplex tiene dos etapas:
En la primera, las dos hebras se desenrollan parcialmente pero permanecen
unidas por lo menos mediante un corto segmento de la estructura
duplohelicoidal con algunas bases complementarias todava en registro. Los
segmentos desenrollados de cada una de las hebras adoptan una
conformacin cambiante y al azar. En la segunda etapa, ambas hebras se
separan por completo una de otra. Si en este estado se enfran
rpidamente, cada una de las hebras liberadas se dobla sobre si misma
para formar unos segmentos duplohelicoidales intracaternarias.
La desnaturalizacin de un ADN homogneo es fcilmente reversible si el
proceso de desenrollamiento no ha pasado de la primera etapa. Mientras
un segmento duplohelicoidal est unido a las dos hebras con los pares de
bases en su sitio, los segmentos desplegados de las dos hebras volvern a
enrrollarse espontneamente reformando un dplex completo cuando se
haga descender la temperatura. De esta manera se produce
instantneamente un retorno a la conformacin nativa, que es la de mnima
energa libre. Sin embargo, si las dobles hebras se han separado por
completo, la renaturalizacin se vuelve mucho ms lenta.
La fusin de un ADN duplohelicoidal homogneo muestra una temperatura
de transicin muy precisa debido a la naturaleza cooperativa de las muchas
interacciones sucesivas que tienen lugar, de suerte que cada una de las
acciones recprocas hace aumentar en gran manera la tendencia a que se
efecte la siguiente. En la desnaturalizacin del ADN los segmentos menos
estables son los ricos en pares A-T y los primeros en abrirse.
187
Hipercromicidad
El efecto hipercrmico es el cambio fsico ms fcil de utilizar como medida
de la desnaturalizacin del ADN e indica el incremento de la absorcin
luminosa observada a 260 nm. Este efecto se da gracias a la capacidad que
tienen las bases pricas y pirimdinicas, as como sus correspondientes
nucletidos de absorber la luz ultravioleta a 260 nm. Sin embargo, la el ADN
duplohelicoidal nativo absorbe mucha menos luz de la que podra
predecirse por la suma de la luz absorbida por sus mononucletidos
constituyentes. Una vez desnaturalizado el ADN de doble hlice nativo por
calefaccin, se observa un gran incremento de la absorcin lumnica a 260
nm que puede llegar a un 40% segn la muestra. El porcentaje en
incremento de absorcin lumnica inducido por calentamiento esta en
relacin con su contenido en pares de bases A-T en cuanto mayor sea la
cantidad de estos pares mayor ser la absorcin.
La absorcin lumnica, menos que aditiva, de las molculas de ADN de
doble hebra, que se denominan !ipocromismo, se debe a las acciones
interelectrnicos entre las bases apiladas de la estructura de doble hlice
nativa, que hacen disminuir la cantidad de luz que puede absorber cada uno
de los retos. Cuando se desordena la estructura duplohelocoidal, las bases
se deshacinan y en esta forma, menos obstaculizada, absorben casi tanta
luz como lo haran si se hallaran en forma de nucletidos libres.
RELAJAMENTO Y SUPERENROLLAMENTO
Este se produce cuando el ADN contiene ms pares de bases que los
normales de una doble hlice por unidad de longitud. Por lo tanto esta
tiende a compensar o aliviar esta tensin torsional, retorcindose en sentido
opuesto o negativo.
En algunos organismos como bacterias, bacterifagos y numerosos virus
animales que contienen ADN, los extremos de las molculas de ADN se
unen para crear un crculo cerrado sin trmino.
Esto por supuesto no destruye la polaridad de las molculas pero elimina
todos los grupos libres hidroxilo y fosforilo 3` y 5`. En las formas relajadas o
en los superenrollamientos existen crculos cerrados. Los superenrollados
ocurren cuando una molcula cerrada es torcida alrededor de su propio eje
o cuando una pieza lineal de ADN dplex, cuyos extremos estn fijos, es
retorcida. Este proceso que requiere energa, coloca a la molcula bajo
tensin y mientras mayor sea el nmero de superenrollamientos, ms
elevada ser la tensin o torsin. Los superenrollamientos negativos se
forman cuando una molcula de ADN es torcida en direccin contraria a las
manecillas del reloj. Se dice que este ADN esta desenrollado. La energa
necesaria para alcanzar este estado est, en cierto sentido, almacenada en
los superenrollamientos. Por lo tanto. La transicin a otra forma que
requiera energa, es facilitada por el desenrollamiento. Una de estas
transiciones es la separacin de las tiras, el cual es un prerrequisito para la
replicacin y transcripcin del ADN. As el ADN superenrollado es una
forma preferida en los sistemas biolgicos. Las enzimas que catalizan los
cambios topolgicos del ADN se llaman topoisomerasas. Las
topoisomerasas pueden relajar o insertar superenrollamientos. La mejor
caracterizada es la girasa bacteriana, que induce superenrollamiento
negativo en el ADN utilizando ATP como fuente de energa.
188
($RELI&A&IAN SEMI&'NSER?AD'RA DEL ADN
El modelo de la estructura del ADN propuesto por Watson y Crick, de dos
cadenas de desoxirribonucletidos unidos por puentes de hidrogeno entre
bases complementarias, sugiri el mecanismo por el cual las cadenas de ADN
podan copiarse.
Es posible visualizar dos mecanismos simples de replicacin; uno conservativo,
en el que la nueva molcula de ADN posee dos cadenas nuevas, o bien un
mecanismo semiconservativo en el cual una cadena de ADN original se
combina con una cadena hija recin sintetizada.
Meselson y Stahl (1958) demostraron experimentalmente que el mecanismo
semiconservativo era el correcto.
En la replicacin hay requerimientos necesarios iguales en todos los
organismos: una seccin de ADN por copiar, Magnesio++, los cuatro trifosfatos
de desoxirribonucletidos y una enzima, la ADN polimerasa.
En la replicacin semiconservadora cada tira de la molcula completa se
separa de su complemento durante la replicacin, cada una sirve como molde
sobre la cual se sintetiza una nueva cadena complementaria. Las dos
molculas hijas de ADN de doble tira recin formadas, contienen cada una, una
de las tiras de la molcula original doble, pueden entonces ser distribuidas
entre las dos clulas hijas. Cada clula hija contendr molculas de ADN con
informacin idntica a la que posea la clula progenitora; aunque en estas
clulas hijas, la molcula de ADN de la clula original slo se ha
semiconservado.
Esquema de la replicacin semiconservadora.
189
G$ME&ANISM'S DE RU%URA Y REARA&IAN DEL ADN
El principal mecanismo de ruptura es: el de la radiaci#n ioni1ante+ Aunque
existe otro tipo de agentes que inducen la ruptura de la cadena, tales como:
fuerzas de cizalla o de doblado, cambio de pH local (el cual produce prdida
de bases purnicas) y determinados agentes qumicos del entorno pueden
modificar una o ms bases.
En la radiacin ionizante puede ser reparada por unin directa o por
recombinacin. En general el dao causado por radiacin ionizante y por
alquilacin de las bases es reparado en parches cortos de escisin y resntesis.
Al igual que los daos ocasionados por luz ultravioleta.
Existen tres tipos principales mecanismos de reparacin:
1. La fotorreactivaci#n en1im2tica3 es todava poco conocido. Este proceso se
produce por iluminacin de la clula con luz azul visible. Esta
fotorreactivacin requiere a una enzima especfica, que se une al sitio
defectuoso del ADN. La iluminacin produce la absorcin de energa
lumnica por la enzima; la energa absorbida, de algn modo, provoca la
ruptura de enlaces covalentes en la zona defectuosa de la monohebra. El
proceso ms corriente de la fotorreactivacin consiste en la escisin del
anillo ciclobutano anormal de un dmero de timina que libera dos restos de
timina. De este modo, la luz visible puede utilizarse para reparar un ADN
lesionado por luz ultravioleta.
2. Reparacin por escisin, es independiente de la luz y por ello se denomina
proceso de reparacin oscuro, se efecta gracias al concurso secuencial
de cuatro actividades enzimticas. Por ejemplo, si el defecto es un dmero
de timina, es detectado por la actividad nuclesica 5 3 de la DNA
polimerosa , que ejerce una funcin de patrulla y provoca una incisin en el
costado 5 del efecto. Entonces, el segmento defectuoso es sustituido por
los pares de bases correctos, por la accin polimersica de la DNA
polimerasa , la cual secciona o escinde al segmento defectuoso. Despus,
la nueva hebra se une por su extremo 3 al extremo 5 de la hebra
remanente intacta, por la accin de la DNA ligasa. A este mecanismo se le
ha denominado proceso de corte, remiendo, corte y soldadura.
3. Segn el tercer tipo de proceso de reparacin, un gran segmento de las
hebras del DNA dplex lesionado es sustituido por el correspondiente
segmento intacto de otra molcula de DNA; en resumen, una parte del gen
es remplazada por parte de otra molcula de DNA. Se le conoce como
proceso de reparacin por recombinacin; constituye un caso especial de
proceso gentico general, en el cual los genes de un cromosoma se
combinan covalentemente con otro cromosoma. La reparacin por
combinacin tiene efecto por ejemplo despus de una lesin de un
cromosoma viral en la clula husped.
La Xeroderma pigmentosum es una enfermedad gentica poco frecuente en la
que la piel se muestra anormalmente sensible al componente ultravioleta de la
luz solar. Los individuos aquejados de ella muestran una tendencia a
desarrollar cncer de piel. J. E. Cleaver ha descubierto que esta enfermedad se
debe a la deficiencia gentica de una enzima que normalmente participa en la
190
reparacin por escisin de los dmeros de timina inducidos por la luz
ultravioleta y que probablemente es la endonucleasa requerida para la primera
incisin o corte. Se ha ideado una prueba para diagnosticar la Xeroderma
pigmentosum, mediante el anlisis in vitro de la capacidad de reparacin de
fibroblastos cutneos cultivados. Entre otros estados patolgicos genticos
humanos, en los que la reparacin del DNA es defectuosa, se encuentra la
enfermedad de Bloom, la anemia de falconi y la progeria, que origina la vejez
prematura y la muerte. Una enfermedad gentica similar de reparacin del DNA
en el ganado, denominada ojo de ganado o de res, conduce a una incidencia
de cerca del 100% de cncer.
D$ME&ANISM'S DE %RANS&RI&IAN
La ARN polimerasa es muy activa con los ADNs duplofilares nativos de varias
procedencias, pero menos activa con los ADNs monofiliares o los
desnaturalizados. Los ADN polmeros sintticos tales como el poli-(dT), o el
copolmero alternante poli-(dTC), que actan tambin como patrones, s bien
con cierta perdida de fidelidad.
En las condiciones intracelulares, la molcula del ARN polimerasa transcribe
tan slo una hebra del ADN dplex. La holoenzima completa es capaz de
reconocer y de unirse al ADN en sitios de iniciacin especficos, que son
estructuras de 10 o ms restos ricos en bases pirimidnicas tales sitios de
iniciacin estn muy separados en el ADN patrn. La presencia de la
subunidad sigma es necesaria para mantener la holoenzima con la formacin
adecuada para poder unirse al sitio de insercin en el patrn de ADN. La unin
de la polimerasa a su patrn va seguida de la separacin de hebras del ADN y
de un cambio en la conformacin de la holoenzima. El primer nuclesido 5-
trifosfato, o nuclesido iniciador, que siempre es el ATP o el GTP, se fija a la
polimerasa para formar el complejo de iniciacin. El primer enlace
internucleotidico se forma despus de la captacin del segundo nuclesido-5-
trfosfato, que generalmente es un nuclesido pirimidnico (UTP o CTP).
Entonces se forma el primer enlace fosfodister por ataque nucleoflico del
grupo 3-hidroxilo de la purina-nuclesido-5-trifosfato iniciador sobre el tomo
de fsforo alfa del segundo nuclesido-trifosfato, y se elimina pirofosfato
inorgnico procedente del segundo NTP.
Se observa que en el primer (purnico)-nuclesido-5trifosfato retiene su grupo
5-trifosfato despus de que se han incorporado el segundo y los subsiguientes
restos nucleotdicos. Este grupo es, precisamente el que permite reconocer al
extremo de iniciacin, o 5-terminal, de la molcula de ARN.
Prolongacin y terminacin de las cadenas de ARN.
Una vez que se han unido los dos primeros nucletidos, la prolongacin
de la cadena procede rpidamente, mientras progresa la transcripcin en
direccin 5 3 antiparalela a la hebra 3 5 del patrn ADN. Durante la
prolongacin, un segmento del recin construido ARN, forma transitoriamente
un hbrido dplex complementario ARN-ADN. Sin embargo, los dplex hbridos
ARN-ADN son mucho menos estables que los dplex ADN-ADN; por lo tanto,
la nueva cadena de ARN tiende a separarse del ADN en la horquilla de
transcripcin. Despus de la incorporacin de unos 10 restos nucleotdicos el
191
factor alfa se disocia de la holoenzima rindiendo la enzima ncleo, el cual
procede a seguir replicando al ADN patrn. Entonces, el factor alfa liberado
queda asequible para iniciar una nueva cadena de ARN, operando con otra
molcula de polimerasa ncleo.
La prolongacin del ARN contina a lo largo del ADN patrn hasta que la
molcula de la polimerasa ncleo llega a una seal de terminacin de la
cadena. Las seales especificas de terminacin son necesarias por que el ADN
que se transcribe contiene muchos genes y, con frecuencia, es circular; sin una
seal de terminacin el ARN se seguira formando indefinidamente.
Por otra parte, las diferentes clases de ARNs, tales como los tARNs y los
rARNs, poseen longitudes de cadena completamente especificadas. La
naturaleza precisa de las seales de terminacin del ARN es desconocida, si
bien se sabe que el ADN del bacterifago, una de dichas seales es un tramo
de restos U. Las protenas p y k, que son auxiliares del ARN-polimerasa, pero
que no forman parte de ella, participan en la terminacin y en la liberacin de la
cadena de ARN.
4ranscripci#n divergente+ La cadena del ADN que se transcribe vara de
un opern a otro a lo largo del cromosoma, es decir, pueden ocurrir
intercambios de cadena. Se dice que cuando dos operones adyacentes uno del
otro se transcribe de diferentes cadenas de ADN se produce una transcripcin
divergente. El arreglo de los promotores para tales operones de transcripcin
divergente es opuesto.
4ranscripci#n en eucariotas+ La maquinaria transcripcional de las
eucariotas es mucho ms compleja que la de las procariotas, tanto en trminos
de la estructura de las ARN polimerasas, como la variedad de las secuencias
de ADN, elementos que influyen en la velocidad de transcripcin. Una
consideracin importante es que en las eucariotas 5superiores5 slo una
pequea proporcin del genoma se expresa siempre como una secuencia de
ARN. Una proporcin considerable de genomas eucarioticos existen de manera
permanente como cromatina altamente condensada (heterocromatina), la cual
es transcripcionalmente inerte.
Las secuencias que se transcriben ms laxamente. Adems, se
requieren protenas accesorias especficas, llamadas factores de transcripcin,
para que ocurra la transcripcin eficaz de toda clase de genes eucariticos. A
diferencia de los factores sigma bacterianos, los factores de transcripcin
eucariticos no interacciona con el ARN polimerasa. Forman complejos
estables con la cromatina antes de iniciarse la transcripcin y actan como
reguladores positivos. Hasta la fecha no se les ha podido identificar.
192
H$DIEEREN&IAS EN%RE ADN Y ARN
Hay tres tipos netamente diferenciados de ARN, tanto en su estructura
#)$%I'S DE ARN
a) Diferencias estructurales

La estructura del ADN es de doble cadena,
lo que confiere una mayor proteccin a la
informacin contenida en l.
La estructura de los ARN es
monocatenaria aunque, puede presentarse
en forma lineal como el ARNm o en forma
plegada cruciforme como ARNt y ARNr

b) Diferencias en la composicin

El ADN y ARN se diferencian en su
composicin de pentosa, el ADN est
compuesto por desoxirribosa y el ARN por
ribosa.
Tambin se diferencian en su composicin
de bases., EL ADN est compuesto por
Adenosina, Timina Guanina y Citosina,
mientras que el ARN sustituye la Timina
por Uracilo. Su composicin de bases es
Adenosina, Uracilo, Guanina y Citosina

c) Diferencias en la funcin
Respecto ala funcin de cada tipop de cido nucleico, tambin hay diferencias. El
DNA tiene como funcin almacener, conservar y transmitir la informacin genetica
de clulas madres a hijas.
El RNA tiene como funcin bsica el articular los procesos de expresin de la
informacin gentica del DNA en la sntesis de proteinas.
193
Hay tres tipos netamente diferenciados de ARN, tanto en su estructura
como en su funcin, aunque hay algunos otros tipos de RNA en las clulas:
1.- ARN mensajero

ARN mensajero, consiste en una
secuencia de nucletidos que
corresponde a la transcripcin de un
trozo de DNA (gen). No obstante, esta
transcripcin no es siempre un proceso
simple y directo. En secuencias que
contienen exones e intrones, el
transcrito primario sufre una
maduracin durante la que se cortan
los intrones y se empalman los exones
(splicing).
Su funcin es la de transportar la
informacin gentica del ncleo a los
ribosomas en que son transcritos.
194

1.- ARN de tranferencia

Los ARN de transferencia, son
molculas de ARN con estructura
cruciforme, encargados de leer el
cdigo del ARNm en los ribosomas e
ir sintetizando la cadena de de
protena a partir de los aminocidos
que tiene asociados a su estructura.
Existen tantos ARNt como
aminocidos codificables. Cada ARNt
tiene en una parte de su estructura la
secuencia que codifica un
aminocido (anticodn) que se unir
al codn del ARNm. En la parte
opuesta tiene una parte diseada
para unirse al
aminocido que codifica el anticodn.
195

3.- ARN ribosmico
ARN ribosmico, es un ARN estructural
que compone los ribosomas junto con
protenas. Parece ser que tiene una
funcin de enzimtica al facilitar las
interacciones para que el RNAm se
acomode en el ribosoma y sea ledo por
los RNAts, y al mismo tiempo facilita la
interaccin con protenas enzimticas
que posibilitan la formacin de los
enlaces peptdicos
Los ribosomas procarioticos tienen
RNAr de tres tamaos 16S, 5S y 23S,
los eucariticos tienen 4 tamaos 18S,
5S, 5.8S y 28S
El ARNr es el que contribuye a dar a los
ribosomas su forma acanalada, al
condicionar la posicin de las protenas,
posibilitando la unin a su estructura del
ARNm, de los ARNt y de la protena
que se est sintetizando. Supone el
75% del RNA celular en procariotas y el
50% en eucariotas.

4.- ARN nucleolar

Las clulas eucariotas poseen RNA nucleolar (RNA heterogeneo
nucleolar) que son en realidad precursores del los RNAm maduros.
196
##$IN!I7ID'RES DE LA SIN%ESIS DE DNA Y RNA"
Un inhibidor se puede definir como una molcula capaz se suspender
un proceso fisiolgico psicolgico, en este caso nos enfocamos en los
fisiolgicos, especialmente en la sntesis del DNA y el RNA. Cada una tiene
propiedades caractersticas diferentes y su actuacin varia por lo tanto. Una
clase la integran aquellos que interfieren en con la transcripcin porque se
unen al patrn de DNA y modifican su estructura; los del otro tipo se unen a la
RNA-polimerasa e impiden su actividad.
Los inhibidores especificos para el DNA forman complejos no
covalentes con el, y dificultan su funcin como patrn. El ms importante de
tales agentes es la actinomicina D, un antibiotico cuyo anillo de fenoxazona se
inserta entre dos pares de bases G y C, mientras que sus cadenas laterales
pentapeptdicas se unen mediante enlaces de hidrgeno a restos de G., la
actinomicina D no ejerce efecto alguno sobre la unin de la RNA-polimerasa
con el DNA, pero bloquea, preferentemente, la prolongacin de la cadena.
Penetra en las clulas intactas, en las cuales puede inhibir la transcripcin sin
afectar a otros aspectos del metabolismo celular. La replicacin del DNA es
mucho menos sensible a la actinomicina D que la transcripcin.
Otro agente que se une con el DNA es el bromuro de etidio, el cual
tambin parece que se inserta entre dos pares de bases sucesivos. A bajas
concentraciones del colorante, se une preferentemente al DNA circular
superenrollado, como el de las mitocondrias. La aflotoxina, es un carcingeno

5.- snRNPs

Las clulas eucariotas poseen tambin un grupo de molculas de RNA
unidas a protenas, denominadas ribonucleoprotenas pequeas
nucleolares (snRNPs) que desempean un papel importante en el
proceso de sntesis de RNAm
197
muy potente capaz de inducir cncer heptico; inhibe tanto la replicacin como
la transcripcin de DNA.
Entre los agentes que actan inhibiendo a la propia RNA-polimerasa
hay un grupo de antibiticos bacterianos llamados rifamicinas; son inhibidores
poderosos para algunos RNA bacterianos pero as para los RNA de la mayora
de las Clulas eucariotas... el ms utilizado de esta clase es la rifampicina, que
es un derivado de la rifampicina artificial, esta se liga mediante unin no
covalente a la subunidad beta de la RNA-polimerasa de algunas especies, y
bloquea la formacin del complejo de iniciacin sin afectar la prolongacin de
RNA. Otro agente inhibidor es la estreptolidigina que esta bloquea la
elongacin de la cadena del RNA. La alfa amanitina, bloquea una de las RNA-
polimerasa nucleares de las clulas eucariticas pero no afecta a los RNA
polimerasa bacterianas, mitocondriales y cloroplsticas.
Es as como los inhibidores, tienen diferentes formas y diferentes
mecanismos de accin sobre la molcula que van a bloquear. Es de
importancia pues conocer donde acta cada inhibidor y sobre que acta en el
momento que nos encontremos frente a un agente patolgico, para poder
acabar con el de manera correcta y rpida
198
#6$%RANS&RI&IAN IN?ERSA"
En la actualidad se conocen varios virus de RNA que producen
enfermedades caractersticas cada uno. Estos se caracterizan por producir la
transformacin permanente y heredable de ciertas clulas normales en clulas
malignas cancergenas. En los primeros aos de los 60, H. M. Temin postul
que el RNA de estos virus que contienen genes cancergenos tiene que ser
transcrito a la forma de DNA para incorporarse al genoma de la clula husped
como una parte del mismo, permanente y heredable, posiblemente por la
accin de una DNA-polimerasa dirigida por el RNA del virus tumoral. Durante
mucho tiempo estas hiptesis se consideraban propias de alguien loco, o que
se encontraba contra del dogma central de la gentica molecular, que
mantena que la informacin se trasladaba del DNA al RNA y ste a la protena.
Sin embargo, la hiptesis quedo finalmente demostrada llevando a cabo
experimentos con partculas de virus tumorales de RNA que contenan DNS-
polimerasa-RNA-dirigidas, tambin denominadas transcriptasas inversas. Estas
enzimas se parecen a las DNA-polimerasa DNA-dirigidas en el hecho de que
construyen DNA en direccin 5 3, en que utilizan desoxiribonucleosido-5-
trifosfatos como precursores y en que requieren a la vez, hebra patrn y
cebadora, que debe tener un hidroxilo 3 libre terminal. Se han encontrado
transcriptasas inversas a partir de clulas tumorales malignos de RNA, as
como de pacientes con leucemia.
Sin embargo se han encontrado tambin transcriptasas inversas en
personas y animales considerados normales que no se encuentran infectados
por virus tumorales. La funcin de las DNA-polimerasas-RNA-dirigidas en las
clulas normales no se comprende; su presencia sugiere que la transcripcin
de mensajes del RNA al DNA es un proceso normal, por ejemplo en la sntesis
de copias mltiples de ciertos genes. Este reconocimiento ha abierto nuevas
rutas de investigacin en gentica bioqumica.
199
Dogma Central de la
Biologa Molecular

El dogma central de la biologa molecular explica el flujo o procesamiento
de la informacin gentica en la mayora de los organismos conocidos. En
el dogma se distinguen tres etapas:
1.- La replicacin, en la cual se copia el DNA progenitor en molculas hijas
idnticas al DNA progenitor.
2.- La transcripcin que es el proceso mediante el cual se transcribe o pasa
la informacin gentica del DNA al RNAm, para ser llevado al lugar de
sntesis de las protenas: los ribosomas.
3.- La Traduccin es el proceso mediante el que el mensaje cifrado en el
idioma de los tripletes de bases (cdigo gentico) es descifrado por los
RNAt sintetizndose una protena.
En algunas bacterias y virus la informacin gentica se almacena en
forma de RNA, y tienen la capacidad de sintetizar DNA a partir de RNA, por
ello, el dogma se ha modificado para incluir a estos organismos
contemplando el proceso de transcripcin inversa

200
BBLOGRAFA
5-PROPEDADESDEL ADN: Desnaturalizacin, hipercromicidad, relajamiento y
superenrollamiento.
Albert L. Lehninger
Bioqumica de Lehninger 2 Edicin
Ediciones Omega
Pgs. 883-887 (Propiedades del ADN en disoluciones)
Robert K. Murray
Bioqumica de Harper 15 Edicin
Editorial manual moderno
Pg. 446 (Formas relajadas y superenrolladas)
6-ADN REPLCACN SEMCONSERVADORA
Robert K. Murray
Bioqumica de Harper 15 Edicin
Editorial manual moderno
Pgs. 446, 447 (Replicacin)
Daz Zagoya- Hikcs
Bioqumica 2 Edicin
Editorial nteramericana. McGraw-Hill
Pgs. 538, 539
www.biolgiamolecular.gl.com
7-MECANSMOS DE RUPTURA Y REPARACN DEL ADN
Robert K. Murray
Bioqumica de Harper 15 Edicin
Editorial manual moderno
Pgs. 472, 473, 474 (ADN reparado por enzimas)
Albert L. Lehninger
Bioqumica de Lehninger 2 Edicin
Ediciones Omega
Pgs. 925, 926 (Reparacin del ADN)
8-MECANSMOS DE TRANSCRPCN
Albert L. Lehninger
201
Bioqumica de Lehninger 2 Edicin
Ediciones Omega
Pgs. 929, 930 (Especificidad de patrn e iniciacin de la transcripcin)
Daz Zagoya- Hikcs
Bioqumica 2 Edicin
Editorial nteramericana. McGraw-Hill Pg. 557 (Transcripcin)
9- DFERENCAS DE ADN Y ARN
www.google.com/biologia molecular
Daz Zagoya- Hikcs
Bioqumica 2 Edicin
Editorial nteramericana. McGraw-Hill
10-TPOS DE ARN Y SU FUNCN
www.google.com/biologia molecular
11-NHBDORES DE LA SNTESS DE ADN Y ARN
Bioqumica de Lehninger 2 Edicin
Ediciones Omega Pgs. 932, 933
12-TRANSCRPCON REVERSA
www.google.com/biologia molecular
Bioqumica de Lehninger 2 Edicin
Ediciones Omega Pgs. 927, 928
Rivera Nuez Laura Karina
Resendez Velzquez Gabriel D.
Aguilar Esquivel Juan Esteban
202
UNIDAD ?III
SON%ESIS DE R'%EONAS Y &LA?E GENM%I&A
NTRODUCCN
Las letras A, G, T y C corresponden a los nucletidos encontrados en el DNA.
Estn organizadas en palabras clave de tres letras llamadas codones y el
conjunto de los codones constituye el cdigo gentico. Un ordenamiento lineal
de codones (un gen) especifica la sntesis de varias molculas de RNA, la
mayor parte responsables de algn aspecto de la sntesis de protenas. Este
proceso se lleva a cabo en tres etapas principales: inicio, alargamiento y
terminacin. Es semejante a la replicacin y transcripcin de DNA en sus
caractersticas generales y en el hecho de que tambin sigue la polaridad 5' a
3'.
MPORTANCA BOMDCA
El cdigo gentico proporciona la base de la explicacin en que los defectos de
las protenas pueden causar enfermedad y sirve para diagnosticar
enfermedades genticas. Adems la fisiopatologa de varias infecciones virales
se relaciona con la capacidad de stos de interrumpir la sntesis protenica de
la clula husped. Muchos antibacterianos son efectivos porque interrumpen la
sntesis protenica en la clula invasora.
#" $ELUY' DE LA INE'RMA&IAN GENM%I&A 8ADN1 ARN Y R'%EONA9
El dogma central de la biologa plantea que una molcula de DNA da como
resultado una de RNA, la cual a su vez da como resultado una protena:
DNA ---- RNA ---- Protena
El ADN alberga la informacin gentica, necesaria para que la clula sepa
como realizar cada proceso celular. Sin embargo carece de actividad cataltica.
Para que esos procesos tengan lugar esa informacin debe "traducirse" a
molculas que s tengan actividad cataltica, las protenas. Este proceso de
transmisin de informacin consta de un paso intermedio, la transcripcin: el
ADN es copiado a ARN mensajero, que transporta esa informacin al
citoplasma, que es donde radica en la clula la maquinaria de traduccin.
Un gen es una parte de una molcula de DNA que codifica una molcula
funcional de RNA. La molcula de RNA puede codificar la sntesis de un
polipptido determinado (mRNA) o ser tRNA, rRNA, snRNA o scRNA. La
molculas de RNA se sintetizan en el ncleo celular por transcripcin de una
hebra de DNA patrn en concordancia con las reglas del pareamiento de
bases, la secuencia de nucletidos del RNA es complementaria de la
secuencia de la tira molde, y poseen la misma orientacin direccional 5'a3'.
203
Secuencia de ADN: 3'... TACGCT...5'
Secuencia de ARNm: 5'...UAGCGA...3'
En los procariotes hay una correspondencia lineal entre el gen, el RNA
mensajero
(mRNA) transcrito del gen y el producto polipeptdico. En estos organismos los
procesos de transcripcin y la traduccin estn muy acoplados. Los ribosomas
comienzan la traduccin cerca del extremo 5 de la hebra naciente de mARN
poco tiempo despus de que es extruido de la ARN polimerasa. Muchos de los
mARNs procariontes son degradados enzimticamente despus de entre 1 y 3
minutos de su sntesis. En la mayora de los mARNs el extremo 5 es
degradado antes de que se haya sintetizado el 3.
En eucariontes la induccin de nuevas protenas frecuentemente toma
horas o das porque la transcripcin se lleva en el ncleo y el mARN tiene que
viajar al citoplasma en donde se lleva a cabo la traduccin, por lo tanto este
proceso es ms complicado en estas clulas. Aqu la transcripcin de genes es
catalizada por enzimas RNA polimerasas. Existe una RNA polimerasa , que
cataliza la transcripcin del r RNA (se localiza en el nucleolo), una RNA
polimerasa , que transcribe al mRNA y algunos pocos RNA pequeos (se
localizan en la cromatina), y una RNA polimerasa , que transcribe tRNA,
rRNA y algunos RNA pequeos. En las clulas eucariontes la transcripcin
primaria, RNA nuclear heterogneo (hnRNA), es de mayor tamao que el RNA
maduro. El hnRNA contiene regiones codificantes (exones) que formarn el
RNA maduro y secuencias intercaladas largas no codificadoras (intrones) que
separan a los exones, y solo los exones pasan a formar parte de la molcula de
mRNA madura que es exportada al citoplasma. El hnRNA se procesa en el
ncleo y los intrones, que a menudo constituyen una porcin mayor del hnRNA
que los exones, se retiran. A continuacin, los exones se empalman para
formar mRNA maduro, que se transporta al citoplasma, donde se traduce a
protena.
La clula debe poseer la maquinaria necesaria para traducir de manera
precisa y
eficiente la informacin de la secuencia de nucletidos de un mRNA, en la
secuencia de aminocidos de la correspondiente protena especfica. A este
proceso se le denomina traduccin. Las molculas de mRNA no tienen, por s
mismas, afinidad para los aminocidos y, por tanto, la traduccin de la
informacin de la secuencia de nucletidos del mRNA en la secuencia de
aminocidos de una protena requiere de una molcula adaptadora
intermediaria. Esta molcula adaptadora debe reconocer una secuencia
especfica de nucletidos y un aminocido especfico. Con la molcula
adaptadora, la clula puede dirigir un aminocido especfico hacia la posicin
secuencial apropiada de una protena como lo dicta la secuencia de
nucletidos del mRNA especfico. Los grupos funcionales de los aminocidos
no se ponen en contacto con el molde de mRNA.
La enzima encargada de la sntesis de ARN a partir de templado de
ADN. La ARN polimerasa fue descubierta independientemente en 1960 por
Samuel Weiss y Jerard Hurwits.
204

La reaccin que cataliza consiste en:

(ARN)
n-residuos
+ NTP D (ARN)
n-residuos + 1
+ PPi.

NTP: nuclesido trifosfato (ATP, CTP, GTP y UTP); posteriormente, el PPi se
hidroliza

Todas las clulas contienen a la ARN polimerasa. En procariontes esta
enzima sintetiza todo el ARN excepto el necesario para el cebador en la
replicacin del ADN (esta reaccin es catalizada por la primasa).
Algunos bacterifagos sintetizan una ARN polimerasa que solo sintetiza
ARN especfico del fago. En eucariontes hay 4 5 ARN polimerasas
diferentes que sintetizan diferentes tipo de ARNs.
6$&'D'NES1 &LA?E DE LA SIN%ESIS R'%EI&A
Cada aminocido de la cadena peptdica est especificado por tres
bases de nucletidos. Estos tripletes se denominan codones o palabras del
cdigo. Cada conjunto de tres bases es ledo en una secuencia lineal, sin que
exista solapamiento entre las palabras del cdigo. Como el ARN contiene
cuatro bases diferentes, el nmero mximo de palabras de tres letras que se
pueden formar es de 4
3
, es decir, 64. de entre ellas, 61 se utilizan para
especificar los 20 aminocidos. As, algunos aminocidos son especificados
por varias palabras diferentes; se dice que el cdigo es degenerado. El cdigo
es universal en el sentido de que la mayora de las palabras significan lo mismo
en diferentes especies. Por lo tanto, el cdigo gentico est formado por
tripletes, no presenta solapamiento y es degenerado y universal.
As pues, codn es un trmino que define las palabras que utiliza el ADN
para especificar el cdigo gentico. El ADN est compuesto por cuatro bases:
guanina, adenosina, timina y citosina, las cuales codifican toda la informacin
gentica. Las palabras que se usan son de tres letras y estn siempre
compuestas por tres de esas cuatro bases y pueden traducirse en aminocidos
especficos que son las unidades que forman las protenas. As que un codn
es la palabra de tres letras que especifica, bien sea el comienzo de una
protena, el final de una protena o uno de los aminocidos o unidades.
205
F"
&ARA&%ERIS%I&AS
DEL &'DIG'
GENE%I&' 8N'
AM7IGU'1 N'
%RASLAAN%E1 SIN
UN%UA&IAN1
DEGENERAD' Y
UNI?ERSAL9
Tres codones no
cifran para
aminocidos
especficos; estos han
sido llamados
CODONES SN
SENTDO. Por lo
menos dos de ellos son utilizados en la clula como seales de terminacin;
estas especifican donde detener la polimerizacin de los aminocidos en la
molcula de protena. Los 61 codones restantes codifican para 20 aminocidos.
As debe haber un "degeneracin en la clave gentica; es decir varios codones
deben cifrar para el mismo aminocido. Algunos aminocidos son codificados
por varios codones. Un ejemplo de esto seria, seis codones diferentes
especifican la serina. En general el tercer nucletido en un codo es menos
importante que los otros dos para determinar el aminocido especfico por ser
incorporado y esto da cuenta de la mayor parte de la degeneracin del cdigo.
El cdigo gentico no es "ambiguo esto es, dado un codon especifico,
solo un aminocido esta determinado. El reconocimiento de codones
especficos en el RNA m por la molcula adaptadora de RNAt depende de su
regin anticodn. Cada molcula de RNAt contiene una secuencia especifica,
complementaria de un codn, que se llama su anticodn. Para un codon dado
en el RNAm, slo una nica especie de molcula de RNAt posee el anticodn
apropiado. Sin embargo, algunas molculas de RNAt puede utilizar el
anticodn para reconocer ms de un codn.
El cdigo gentico no se traslapa, adems una vez que se comienza la
lectura en un codn especfico, no hay puntuacin entre los codones y el
mensaje es ledo en una secuencia continua de tripletes de nucletidos hasta
que se alcanza un codn sin sentido.
El cdigo gentico es universal, la frecuencia de uso de cada codn para
aminocidos vara considerablemente entre las especies y en los diferentes
tejidos de una misma especie. Los cuadros del uso de los codones se estn
haciendo cada vez ms exactos conforme aumenta la secuenciacin de los
genes.
206
-$ARNt ARA &ADA UN' DE L'S 6) AMIN'A&ID'S
6
da
base
U & A G
#
er
base
U
UUU
Fenilalanina UCU Serina UAU Tirosina UGU Cisteina
UUC
Fenilalanina UCC Serina UAC Tirosina UGC Cisteina
UUA Leucina UCA Serina UAA Ochre Stop
2
UGA Opal
Stop
)
UUG Leucina UCG Serina UAG Amber Stop
)
UGG
Triptofano
&
CUU Leucina CCU Prolina CAU Histidina CGU Arginina
CUC Leucina CCC Prolina CAC Histidina CGC Arginina
CUA Leucina CCA Prolina CAA Glutamina CGA Arginina
CUG Leucina CCG Prolina CAG Glutamina CGG Arginina
A
AUU soleucina
ACU
Threonine AAU Asparagine AGU Serina
AUC soleucina
ACC
Threonine AAC Asparagine AGC Serina
AUA soleucina
ACA
Threonine AAA Lisina AGA Arginina
AUG Metionina
1

ACG
Threonine AAG Lisina AGG Arginina
G
GUU Valina GCU Alanina
GAU cido
Asprtico GGU Glicina
GUC Valina GCC Alanina
GAC cido
Asprtico GGC Glicina
GUA Valina GCA Alanina
GAA cido
Glutmico GGA Glicina
207
GUG Valina GCG Alanina
GAG cido
Glutmico GGG Glicina
1
Codn de inicio de cadena
2
Codones de terminacin de cadena
/$MU%A&I'NES
Una mutacin se refiere a cualquiera de los cambios en el fenotipo de un
ser vivo, es decir cuando ocurren cambios en al secuencia de nucletidos. El
cambio inicial puede no ocurrir en la tira codificadora de la molcula de DNA de
doble tira para ese gen, pero despus de la replicacin, las molculas hijas de
DNA con mutaciones en la tira codificadora, se segregarn y aparecern en la
poblacin del organismo.
Algunas mutaciones se deben a sustitucin de bases(cambios de
bases individuales, mutaciones puntuales), y estos cambios pueden ser:
o %ransiciones0 Una pirimidina o una purina es cambiada por la otra
purina o pirimidina segn sea el caso.
o %rans+ersiones0 Cambios de una purina por cualquiera de las dos
pirimidinas, o el cambio de una pirimidina por cualquiera de las dos
purinas.
Las mutaciones por despla>amiento de marco se deben a supresin o
insercin de nucletidos en el gen. Cada una se refiere:
o Supresin0 La deleccin de un solo nucletido de la tira codificadora de
un gen, dara como resultado un marco de lectura alterado en el RNAm.
La maquinaria que traduce el RNAm no reconocera que estaba faltando
una base, puesto que no hay puntuacin en la lectura de los codones y
resultara una grave alteracin en la secuencia de aminocidos
polimerizados. Puede haber una traduccin alterada de RNAm distal a la
deleccin del nucletido individual y tambin la lectura del mensaje
podra dar como resultado la aparicin de un codn sin sentido y la
produccin de un polipptido prematuramente terminado y mutilado
cerca de su extremo carboxilo. Si 3 nucletidos o mltiplos de 3 fueran
suprimidos de un gen, el correspondiente mensajero proporcionara, al
ser traducido, una protena en al cual faltara el nmero correspondiente
de aminocidos. Si la dellecin ocurre antes o dentro del codn de
terminacin normal (codn sin sentido), podra dar por resultado la
lectura a travs de una seal de terminacin hasta que se encontrara
otro codn sin sentido.
o Insercin0 Las inserciones de 1, 2 o de no mltiplos de 3 nucletidos en
un gen, darn por resultado un RNAm en el cual el marco de lectura
208
estar distorsionado despus de la traduccin y los mismos efectos que
ocurren con las delecciones sern reflejados en la traduccin del RNA
m. Estos pueden ser secuencias alteradas de aminocidos distales a la
insercin, y la generacin de un codn sin sentido en la insercin distal a
ella, o quiz la lectura a travz del codn de terminacin normal. Por lo
que despus de una deleccin en un gen, una insercin puede
restablecer el marco de lectura apropiado(o viceversa).
6rincipales sustancias mut2genos
Ciertos anlogos de las bases, tales como el 5-bromouracilo y la 2-
aminopurina se pueden incorporar al DNA. Originan transiciones como
consecuencia de la alteracin en el apareamiento de bases en el curso de su
incorporacin al DNA o en al subsiguiente proceso de replicacin.
El %&bromouracilo, es un anlogo de la timina, se empareja normalmente
con la adenina, y la forma enlica del 5-bromouracilo se empareja con la
guanina, por lo que se originan las siguientes transiciones: AT GC.
La )&aminopurina, se empareja con al timina y el tautmero normal de la
2-aminopurina puede formar un enlace de hidrgeno sencillo con la citosina. De
aqu que la 2-aminopurina puede producir transiciones AT GC.
Otros mutgenos actan modificando qumicamente las bases del DNA,
por ejemplo el 2cido nitroso reacciona con las bases que contienen grupos
aminos:
o la adenina se desamina oxidativamente a hipoxantina.
o la citosina a uracilo.
o la guanina a xantina.
Una clase diferente de mutacin se produce por efecto de molculas
aromticas planas tales como las acridinas. Estos compuestos se intercalan
en al DNA, es decir, se deslizan entre parejas de bases adyacentes de la
doble hlice del DNA. En consecuencia, favorece la insercin o deleccin
de una o ms parejas de bases. El efecto de estos mutgenos es alterar la
estuctura de lectura, a menudo que se inserte o suprima un nmero de
bases que sea mltiplo de 3.
209
(" SIN%ESIS R'%EONI&A 8A&%I?A&IAN DE L'S AMIN'B&ID'S1
INI&IA&IAN1 ALARGAMIEN%' Y %ERMINA&IAN9 R'&ESAMIEN%'
'S%RADU&&I'NAL.
Estas entidades particuladas sirven como maquinaria sobre la cual una
secuencia de nucletidos del RNAm es traducida en la secuencia de
aminocidos de la proteina especificada. La traduccin del RNA m comienza
cerca de su extremo 5' con la formacin del correspondiente amino terminal de
la molcula de proteina. El mensaje es ledo en direccin 5' a 3', concluyendo
con la formacin del extremo carboxilo. La transcripcion de un gen en el
correspondiente RNA m o su precursor forma primero el extremo 5' de la
molcula de RNA. En los procariotas esto permite el comienzo de la traduccin
del RNA m antes de que la transcripcin del gen est completa. En las
eucariota el proceso de transcripcin es nuclear, la traduccin del RNA m
ocurre en el citoplasma.
*NCACON
La iniciacin de la sntesis de protenas requiere la seleccin de una
molcula de RNA m para su traslacin por un ribosoma. En este proceso
interviene RNAt, RNAr, RNA m, y por lo menos diez factores de iniciacin
eucariota (e F ). El inicio pude dividirse en cuatro etapas:1) disociacin del
ribosoma en sus subunidades 40s y 60s. 2) fijacin de un complejo ternario
formando por met-RNA, GTP Y e F 2 al ribosoma para formar un complejo de
preinicio; 3) union del RNA m con el complejo de inicio 40S y 4) combinacin
del complejo de inicio 40S con la subunidad 60S para formar el complejo de
inicios 80S.
DSOCACON RBOSOMCA: Dos factores de iniciacin, e F-3 Y e F-1A , se
unen a la subunidad 40S. Esto favorece la disociacin del ribosoma 80S en sus
subuinades 40S y 60S e impide su reunin. La fijacin de e F -3 a la subunidad
60S tambin previene que se unan de nuevo.
FORMACON DE COMPLEJO DE PRENCO 40S: El primer paso en este
proceso comprende la fijacin de GTP en el e F-2.Luego este complejo binario
se une a met- RNAt1, un RNAt especifico para unirse el codon de iniciacin
AUG. Este complejo binario se une a la subunidad ribosmica 40S, que se
estabiliza al unirse con e F-3 y e F- 1 A.
FORMACON DEL COMPLEJO DE NCACON 40S: Los extremos 5' de la
mayor parte de molculas de RNA m en las clulas eucariota estn coronadas
o rematadas. Este remate de trifosfato de metil-guanosil facilita la fijacin del
RNA m al complejo de preinicio 40S. Una protena fijadora del remate, e F-4F,
se une al remate o corona a travs de una subunidades. Luego e F-4 A y e F-
4B se une y es probable que reduzcan la estructura secundaria compleja del
extremo 5' del RNA m a travs de sus actividades respectivas de ATPasa y
helicasa. El e F-3 es una protena clave debido a que se une con gran afinidad
tanto a RNA m y la subunidad ribosmica 40S. Despus de la fijacin del
complejo de preinicio 40S al remate del RNA m y de la reduccin (fusin) de la
estructura secundaria prxima al extremo 5' del RNA m el complejo recorre al
RNA m en busca de un codon iniciacin adecuado. Este es la mayor parte de
210
los AUG 5' pero el codon de iniciacin preciso es determinado por las llamadas
secuencias "consenso "kozak que circundan al AUG.
FORMACON DEL COMPLEJO DE NCO 80S: La union de la subunidad 80S
y el complejo de inicio 40S comprende la hidrlisis del GTP adherido a e F-2
por e F-5.
Esta reaccin libera a los factores de inicio unidos al complejo de
correspondiente 40S y la union rpida de la subunidades 40S y 60S para
formar el ribosoma 80S. En este punto, Met-RNAt esta en el sitio P del
ribosoma, listo para que comience el ciclo de alargamiento.
*ALARGAMENTO
El alargamiento es un proceso cclico que comprende varios pasos
catalizados por protenas designadas factores de alargamiento.
ADHERENCA DE AMNOACL- RNAt AL STO A: En el ribosoma 80S
completo formado durante el proceso de inicio el sitio A esta libre. La fijacin
del aminoacilo-RNAt apropiado en ese sitio requiere el reconocimiento del
codn correcto. El factor de alargamiento Eef-1 forma un complejo con GTP y
el aminoacilo-RNAt entrante. En esta forma compleja el aminoacilo-RNAt
puede entrar al sitio A con liberacin de Eef-1 a y GDP y fosfato.
FORMACON DEL ENLACE PEPTDCO: El grupo a amino del aminoacilo-
RNA nuevo en el sitio A lleva a cabo un ataque nucleoflico sobre el grupo
carboxlico esterificado del peptidilo-RNAt que ocupa el sitio P. Esta reaccin
es catalizada por un componente protenico, peptidiltransferasa, de la
subunidad ribosmica 60S. Debido a que el aminocido del aminoacilo-RNAt
ya est activado, no se requiere una fuente adicional de energa para esta
reaccin. El resultado es la adherencia de la cadena peptdico en crecimiento al
RNAt en el sitio A.
TRASLOCACON: El factor de alargamiento 2 y GTP son responsables de la
traslocacin del peptidilo-RNAt recin formado en el sitio A al sitio P que haba
quedado vaco. El GTP, utilizados como fuente energtica por e EF-2, se
hidroliza a GDP y fosfato durante el proceso de traslocacin. Al pasar el
peptidilo-RNAt recin formado a su codn correspondiente en el sitio P, el sitio
A queda libre para otro ciclo de reconocimiento de codn por el aminoacilo-
RNAt apropiado y alargamiento. Al removerse la fraccin peptidilo del RNAt en
el sitio P, el RNAt desprendido se disocia con rapidez de ese sitio.
La carga de la molcula de RNAt con un fragmento aminoacilo requiere la
hidrlisis de un ATP a AMP, lo cual equivale a la hidrlisis de 2 ATP a 2ADP y
2 fosfatos. La entrada de aminoacilo-RNAt al sitio A causa la hidrlisis de un
GTP a GDP. La traslocacin del peptidilo-RNAt recin formado del sitio A al
sitio P por e EF-2 tambin requiere la hidrlisis de un GTP a GDP y fosfato.
211
*TERMNACON:
Despus de mltiples ciclos de alargamiento que culminan en la
polimerizacin de los aminocidos especficos en una molcula de protenas, el
codon sin sentido a terminal, del RNA m (UUA, UAG, UGA ) aparece en el sitio
A. Los factores liberadores (e RF) son capaces de reconocer que una seal de
terminacin reside en el sitio A. El factor liberador conjuntamente con el GTP y
la pptido y el RNAt que ocupa el sitio P. As se adiciona una molcula de
agua, en lugar de un aminocido. Esta hidrlisis libera la protena y el RNAt del
sitio P. Despus de la hidrlisis y la liberacin, el ribosma 80S se disocia en sus
subunidades 40S y 60S, las cuales son entonces recicladas. Luego el RNA m
se desprende del ribosoma que a su vez se disocia en sus subunidades
componentes 40S y 60S y puede comenzar otro ciclo.
*EL PROCESAMENTO POSTRADUCCONALES:
Una protena no es biolgicamente activa hasta que se encuentra en una
conformacin especfica o nativa, la cual esta determinada por la secuencia de
aminocidos. De esta manera el mensaje gentico lineal o unidimensional,
proveniente de la molcula de RNA, hasta que es sujeta a un procesamiento o
a modificaciones covalentes.
a)Todo los polipptidos se inician con un residuo de N- formilmetionina en
procariotas y de metionina en eucariotas. El grupo formilo, el residuo de
metionina y residuo puede eliminarse por medio de enzimas especficas.
b)Forman puentes disulfuro entre dos residuos de cisterna, que se forman por
una reaccin enzimtica y se considera que protegen a la protena de la
desnaturalizacin.
c) La fosforilacin de los aminocidos hidroxilados como son serina, treonina y
tirosina. Esta reaccin se lleva a cabo con enzimas especficas, formando
fosfoserina, fosfotreonina y fosfotirosina.
d) Algunos aminocidos pueden hidroxilarse.
e)Es posible que se aada residuos de cido asprtico y glutmico.
f) Las glucoprotenas se forman por la unin covalente de ciertos carbohidratos
a residuos de asparagina, serina y treonina.
g) Algunas protenas son sintetizadas con un nmero mayor de aminocidos y
estos residuos pueden eliminarse con peptidasa.
h) La adicin de un grupo prosttico es necesaria para la actividad biolgicas .
i) Algunos residuos de lisina puede ser metilados enzimticamente, tambin
algunos grupos carboxilo.
G" AN%I7I'%I&'S @UE IN!I7EN LA SIN%ESIS DE R'%EINAS "
El ribosoma bacteriano es ms pequeo y tiene un complemento de RNA
y de molculas protenicas diferentes y algo ms sencillas. Esta diferencia ha
sido explotada para propsito clnico, debido a que muchos antibiticos
interactan de manera especfica con las protenas de los ribosomas
procariticos inhibiendo as la sntesis de protenas. Es una detencin en el
crecimiento o la muerte de la bacteria. Los ms tiles antibiticos de esta clase
por ejemplo tetraciclinas, lincocina, eritromicina y cloranfenico) no interactan y
por tanto no son txicos para organismos eucariotas.
212
Otros antibiticos inhiben las sntesis de protenas en todos los ribosomas
(puromicina) o solo en las clulas eucariotas (cicloheximida). La puromicina, es
un anlogo estructural del tirosinil-RNAt. La puromicina es incorporada a travs
del sitio A del ribosoma en la posicin terminal carboxlica de un pptido, pero
causa la liberacin prematura del polipptido. La puromicina, como anlogo del
tirosinil-RNAt, inhibe eficazmente la sntesis de protenas.
La toxina diftrica, una exotoxina de Corynebacterium diphtheriae infectada con
un fago lisognico especfico, cataliza la ADP ribosilacin del FA-2 en las
clulas de mamferos. Esta modificacin inactiva al FA-2 y por ello inhiben
especficamente la sntesis de protenas.
4. ARNt para cada uno de los 20 aminocidos
.Existe por lo menos una especie de RNA de transferencia (tRNA) para cada
uno de los 20 aminocidos.
Las molculas de tRNA tienen funciones y estructuras tridimensionales
similares.
La funcin adaptadora de las molculas de tRNA requiere de la carga de cada
tRNA especfico con su aminocido especfico. Puesto que no hay afinidad de
los cidos nucleicos para grupos funcionales especficos del aminocido, este
reconocimiento debe llevarse a cabo por una molcula de protena capaz de
reconocer tanto una molcula de tRNA especfico hasta un aminocido
especfico. Por lo menos 20 enzimas especficas se requieren para estas
funciones de reconocimiento y para la adherencia apropiada de los 20
aminocidos a las molculas de tRNA especfico. El proceso de
reconocimiento y unin (carga) se realiza en pasos por una enzima para cada 1
de los 20 aminocidos. Estas enzimas se llaman aminoacil-tRNA-sintetasas.
Ellas forman un intermedio activado del complejo especfico amino-acil-AMP-
enzima; esta reconoce entonces, un tRNA especfico al cual se adhiere la
fraccin aminoacil en la terminal 3'-hidroxiladenosina. El aminocido
permanece adherido a su tRNA especfico en una unin ster hasta que se
polimeriza en una posicin especfica en la fabricacin de un percusor
polipeptdico de una molcula de protena.
El brazo timidina seudouridina-citidina (T C) interviene en la
combinacin del aminoacil-tRNA a la superficie ribosmica en el sitio de la
sntesis de protenas. El brazo D es uno de los sitios significativos para el
reconocimiento apropiado de una especie dada de tRNA por la aminoacil-
tRNAsintetasa correspondiente. El brazo aceptor, localizado en el extremo 3'-
hidroxiladenosilo, es el sitio de adherencia del aminocido especfico.
La regin del anticodn consiste en 7 nucletidos y reconoce al codn
de tres letras en el mRNA. La secuencia leda en la direccin 3'a5' en esa asa
anticodn consiste en una base variable-purina modificada-XYZ-pirimidina-
pirimidina-5'. Esta direccin para leer el anticodn es 3'a5', en tanto que el
cdigo gentico se lee de 5'a3', ya que las asas codn y anticodn de las
molculas del mRNA y t RNA son antiparalelas en su complementariedad.
La degeneracin del cdigo gentico reside en su mayor parte en el
ltimo nucletido de la tripleta codn, sugiriendo que el pareamiento de bases
entre este ltimo nucletido y el nucletido correspondiente del anticodn no es
descrito. Este fenmeno se refiere como bamboleo; el pareamiento del codn
y anticodn puede bambolearse en este sitio de pareamiento especfico de
nucletido a nucletido. Por ejemplo los dos codones para la arginina, AGA y
213
AGG, se pueden unir al mismo codn que tiene uracilo en su extremo5'. De
manera semejante, 3 codones para la glicina, GGU, GGC y GGA pueden
formar un par de bases a partir de un anticodn CC. La es un nucletido de
inosina, otra de las bases peculiares que aparecen en las molculas de tRNA.
El reconocimiento del codn por una molcula de tRNA no depende del
aminocido que esta unido a su terminal 3'-hidroxilo. Esto ha sido
ingeniosamente demostrado cargando un tRNA especfico para cistena con
cistena marcada radioactivamente. Entonces, por medios qumicos, el residuo
ceseinilo fue alterado para generar una molcula tRNA especfico para la
cistena, pero cargado, en cambio, con alanina. La transformacin qumica de
la fraccin cisteinilo en alanilo no alter la porcin anticodn de la molcula de
tRNA espec+ifico para la cistena. Cuando esta alanil-tRNAcis se us en la
traduccin de un mRNA de hemoglobina, se incorpor una alanina radiactiva a
lo que normalmente era un sitio de cistena en la molcula protenica de
hemoglobina. El experimento demostr que el derivado aminoaclico de una
molcula de aminoacilo-tRNA no desempea una funcin en el reconocimiento
del codn. La fraccin de aminoacilo nunca se pone en contacto con el molde
de mRNA que contiene los codones.
O O
HOOC HC R Enz Adenina- Ribosa O P - O C -
CH -R
H2 OH NH2
Enz-AMP-AA
Aminocido AA (aminocido activo)
E$2-/a :E$2;
A/-$)ac-l 1R0A
s-s1e1asa
1R0A <R0A=AA
A'P"E$2
214
Formacin de aminoacil-tRNA. Reaccin en dos pasos que involucra a
la enzima aminoacil-tRNA sintetasa, que conduce a la formacin de aminoacil-
tRNA. La primera reaccin implica la formacin de un complejo amp-
aminocido-enzima. Luego, este aminocido activado se transfiere a la
molcula correspondiente del tRNA. El AMP y la enzima se liberan y esta
ltima puede utilizarse de nuevo.
215
216
&'D'NES DE mRNA Y
&'D'NES
&'RRES'NDIEN%ESFirst
Nucleotide
Second Nucleotide
0 , " 7
0 pheylalnine
UUU
UUC
Leucina
UUA
UUG
Serina
UCU
UCC
UCA
UCG
Tirosina
UAU
UAC
stop
UAA
UAG
Cistena
UGU
UGC
stop
UGA
Triptfano
UGG
, Leucina
CUU
CUC
CUA
CUG
Prolina
CCU
CCC
CCA
CCG
Histidina
CAU
CAC
Glutamina
CAA
CAG
Arginina
CGU
CGC
CGA
CGG
" soleucina
AUU
AUC
AUA
methionine/start
AUG
Trionina
ACU
ACC
ACA
ACG
Asparangina
AAU
AAC
Lisisna
AAA
AAG
Serina
AGU
AGC
Arginina
AGA
AGG
7
Valina
GUU
GUC
GUA
GUG
Alanina
GCU
GCC
GCA
GCG
cido asprtico
GAU
GAC
glutamic acid
GAA
GAG
Glicina
GGU
GGC
GGA
GGG
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www. Prodigy.com
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Michelle Adriana Mejia Rosales
217

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