CALDERAS

Las calderas o generadores son mquinas que aplicando el calor de un combustible que puede ser gaseoso, lquido o slido mediante un quemador especialmente diseado para cada combustible, calienta el agua hasta 95C (calderas de agua caliente), por encima de los 100C (calderas de agua sobrecalentada), calientan agua y producen su cambio de estado de fase lquida a fase gaseosa (calderas de vapor), o calientan un fluido caloportado diferente al agua (calderas de fluido trmico).

TIPOS DE CALDERAS Calderas de Gran Volumen de Agua. a. Calderas Sencillas. Estas calderas se componen de un cilindro de planchas de acero con fondos combados. En la parte central superior se instala una cpula cilndrica llamada domo, donde se encuentra el vapor ms seco de la caldera, que se conduce por caeras a las mquinas. La planchas de la calderas, as como los fondos y el domo se unen por remachadura. Esta caldera se monta en una mampostera de anillos refractario, y all se instalan el fogn carnicero y conducto de humo. En el hogar, situado en la parte inferior de la caldera, se encuentran las parrillas de fierro fundido y al fondo un muro de ladrillos refractarios, llamado altar, el cual impide que se caiga el carbn y eleva las llamas acercndolas a la caldera. b. Calderas con Hervidores. Este tipo de calderas surgieron bajo la necesidad de producir mayor cantidad de vapor. Los hervidores son unos tubos que se montan bajo el cuerpo cilndrico principal, de unos 12 metros de largo por 1.50 metros de dimetro; estos hervidores estn unidos a este cilindro por medio de varios tubos adecuados. Los gases del hogar calientan a los hervidores al ir hacia adelante por ambos lados del cuerpo cilndrico superior, tal como en la caldera anteriormente mencionada. Las ventajas de estas calderas, a comparacin de las otras, es por la mayor superficie de calefaccin o de caldeo, sin aumento de volumen de agua, lo que aumenta la produccin de vapor. Su instalacin, construccin y reparacin es sencilla. Los hervidores pueden cambiarse o repararse una vez daados. La diferencia de dilatacin entre la caldera y los hervidores pueden provocar escape devapor en los flanches de los tubos de unin y, a veces, la ruptura. Esta es una de las desventajas de esta caldera.

c. Calderas de Hogar Interior. En este tipo de calderas, veremos las caractersticas de funcionamiento de la caldera con tubos hogares "cornualles". Estas calderas estn formadas por un cuerpo cilndrico principal de fondos planos o convexos, conteniendo en su interior uno o dos grandes tubos sumergidos en agua, en cuya parte anterior se instala el hogar. El montaje se hace en mampostera, sobre soportes de fierro fundido, dejando un canal para que los humos calienten a la caldera por el interior en su recorrido hacia atrs, donde se conducen por otro canal a la chimenea. Su instalacin se puede hacer por medio de dos conductos en la parte baja, para que los humos efecten un triple recorrido: hacia adelante por los tubos hogares, atrs por un conducto lateral, adelante por el segundo conducto y finalmente a la chimenea. Los tubos hogares se construyen generalmente de plantas onduladas, para aumentar la superficie de calefaccin y resistencia al aplastamiento. Segn el paso de fluido caloportador a travs de los tubos de intercambio, las calderas pueden ser: CALDERA ACUOTUBULAR: Son aquellas en las que el fluido de trabajo se desplaza por el interior de los tubos durante el calentamiento y los gases de combustin circulan en el exterior de los mismos. Son de aplicacin para trabajos que requieren una presin por encima de los 22 bar.

CALDERA PIROTUBULAR: Son aquellas calderas en las que los gases de combustin circulan por el interior de los tubos y el lquido se encuentra en un recipiente atravesado por dichos tubos. Su aplicacin es principalmente cuando la presin de trabajo es inferior a los 22 bar.

CALDERAS DE AGUA CALIENTE Son aquellas en las que el fluido caloportador es el agua y tienen una temperatura mxima de servicio inferior a 100C. Pueden ser acuotubulares o pirotubulares. CALDERAS DE AGUA SOBRECALENTADAS Son aquellas en las que el fluido caloportador es el agua y tienen una temperatura mxima de servicio superior a 110C. Este tipo de calderas puede ser acuotubulares o pirotubulares. CALDERAS DE FLUIDO TRMICO Las calderas de fluido trmico son aquellas en las que el fluido caloportador es distinto al agua. Estas calderas pueden ser nicamente acuotubulares.

CALDERASDE VAPOR Son aquellas en las que el fluido caloportador es vapor de agua. Pueden ser acuotubulares y pirotubulares. SELECCIN DE TIPO DE CALDERA Para seleccionar el tipo de caldera con el que se va a trabajar se ha de tener en cuenta una srie de criterios. Los parmetros principales para la seleccin son las siguientes: Potencial til, para las calderas de agua caliente, agua sobrecalentada y fluido trmico, segn el requerimiento trmico de la instalacin ala cual va a alimentar. Produccin de vapor, para las calderas de vapor, segn el consumo de vapor necesario en el proceso. Presin de trabajo en continuo de acuerdo con la presin necesaria en el consumidor ms alejado del centro de produccin. Temperatura de trabajo en continuo, segn el requerimiento constante de la instalacin.

COMPONENTES FUNDAMENTALES: Para las calderas pirotubulares. Envolvente exterior o virola exterior. Este elemento es de forma cilndrica y es el encargado de contener los fluidos (agua/vapor) y evitar que estos salgan al exterior, en la misma van montadas las tubuladuras de control y supervisin, tales como los controladores de nivel, los indicadores pticos de nivel y orificios de inspeccin del agua, etc. Cmara de combustin u hogar de combustin La cmara de combustin, de construccin cilndrica y disposicin horizontal, puede fabricarse en ejecucin lisa u ondulada en funcin del tamao de la caldera y de la presin del trabajo de la misma. Es la encargada de obtener la llama del quemador e iniciar el cambio de energa por radiacin. Cmara de inversin de gases (slo en calderas de tres pasos de gases). Este elemento es el encargado de reconducir los gases de la combustin hacia el haz tubular, haciendo cambiar de direccin a los mismos. Por regla general, esta

cmara est totalmente refrigerada por agua y construida de forma cilndrica y horizontal. En las calderas de bajo rendimiento, uno de los dos fondos no est refrigerado por agua, sino que lo est de una mampostera de cemento refractario. Fondo delantero y trasero exterior De forma circular, van soldados a la virola exterior y evitan que los fluidos salgan al exterior. En estas piezas van soldados los tubos del segundo y tercer paso de gases, as como puertas de registro interior e inspeccin y cajones recolectores de gases. Fondo delantero y trasero interior (slo en calderas de tres pasos de gases). De forma circular, van soldados a la virola de la cmara de inversin. Tiene como funcin contener los productos de la combustin. En el fondo delantero van soldados los tubos de segundo paso de gases y en el fondo trasero van soldados entre ste y el fondo trasero exterior unos tubos huecos (tubos stay), para dar al conjunto robustez y flexibilidad. Has tubular (de uno o dos secciones en funcin de las calderas de 2 o 3 pasos de gases). Son conjuntos formados por una cantidad variable de tubos por los cuales circulan los gases de la combustin por su interior. Son los encargados de la transmisin por conveccin.

Para las calderas acuotubulares. Domo o caldern Es de forma cilndrica y en su interior contiene los fluidos. Al ser de dimensiones reducidas se le ha de dotar de separadores de gotas para elevar el ttulo de vapor. Al igual que en la virola exterior de las calderas acuotubulares, en el domo van las tubuladuras de control, supervisin y servicio. Cmara de combustin u hogar de combustin Generalmente en forma de prisma de base rectangular, es la zona donde se realiza la combustin. Est delimitado por seis paredes de membranas que, excepto por una de ellas, el resto son totalmente estancadas al paso de los gases de combustin exterior. La otra pared est diseada para que los gases salgan del hogar he inicien su camino a travs de los diferentes componentes de gases del circuito de la caldera, adems de producir el cambio en le direccin de los gases. Paredes de membrana

Son formadas en su totalidad de tubos refrigeraos por el agua que circula por su interior. Estos tubos estn unidos entre s por medio de soldadura de estanqueidad en el lado de gases y colectores distribuidores de mayor tamao en el lado del agua Tubos de subida y bajada Los tubos de subida son los encargados de llevar el fluido ms caliente (por diferencia de temperaturas) de todas las zonas de la caldera al domo. Los tubos de bajada son los encargados de devolver el fluido que se ha enfriado desde el domo a las zonas de calentamiento. Evaporadores o tubos de bandera Son haces de tubos dispuestos generalmente a contracorriente de los gases especialmente donde se efecta el intercambio por conveccin. Economizadores Son aquellos elementos que se instalan en la salida de gases de las calderas para aumentar su rendimiento. Formados por tubos lisos o con aletas, por el interior de sus tubos circula el agua de alimentacin a la caldera y por fuera de los tubos los gases de la combustin o contracorriente. Dichosos gases ceden su energa al agua aumentando su temperatura y siendo necesario menor consumo de energa para producir 1 kilogramo de vapor o para producir 1 kilovatio. Recalentadores o sobrecalentadores Son equipos compuestos por serpientes de tubos instalados en la zona de mayor temperatura de la caldera. Exceptuando su instalacin en la cmara de combustin, generalmente estn dispuestos justo detrs de la pared de membrana y despus de la cmara de combustin. Estn destinados a elevar el ttulo de vapor a 1, as como la temperatura del vapor saturado que pasa a travs de su interior, produciendo vapor sobrecalentado o vapor recalentado a una temperatura superior a la de saturacin.

ACCESORIOS DE LA CALDERA Placa de instalacin Hay varios accesorios que deben instalarse en las calderas de vapor, todos con el objetivo de mejorar: Funcionamiento. Eficacia. Seguridad. A continuacin explicaremos algunos de los accesorios importantes de la caldera, junto con la legislacin asociada. En la ltima la mitad del siglo XIX, las explosiones en calderas de vapor eran bastante comunes. A consecuencia de esto, se form una compaa en Manchester con el objetivo de reducir el nmero de explosiones sometiendo las calderas de vapor a un examen independiente. Esta compaa era el principio de la actual Federacin de Seguridad (SAFed), el organismo cuya aprobacin se requiere en el Reino Unido para los accesorios y controles de caldera. Despus de un periodo comparativamente corto, slo ocho de11 000 calderas examinadas explotaron. Esto comparado con las 260 explosiones de calderas que ocurrieron en calderas que no fueron examinadas por esta compaa. Este xito conllev a la ley sobre explosiones de calderas de1882 qu incluy la necesidad de una placa de instalacin de caldera. Un ejemplo de una placa de instalacin de caldera se muestra en la figura.

Serial Number Model Number Output Design pressure Maximum working pressure Hydraulie test pressure Data of test Design atandard class Inspection suthority

32217 Shellbol Mk.ll 3,00KG/H 19 bar 18 bar 28.5 bar 33323 BS EN 12953 1 British Engine

Una tpica placa de instalacin El nmero de serie y modelo identifican a la caldera y se utilizan para pedir recambios al fabricante y para el registro de la caldera.

Vlvulas de Seguridad Uno de los accesorios importantes de la caldera es la vlvula de seguridad. Su funcin es proteger el cuerpo de la caldera de sobrepresin y evitar que explosione. Hay muchos tipos diferentes de vlvulas de seguridad, todas deben cumplir el siguiente criterio: La(s) vlvula(s) de seguridad deber(n) dar salida a un caudal de vapor equivalente a la potencia trmica de la caldera. El rango de capacidad de descarga total de la(s) vlvula(s) de seguridad debe estar dentro del 110% de la presin de diseo de la caldera. El orificio que conecta una vlvula de seguridad a una caldera debe ser, como mnimo, de 20 mm. La tara mxima de la vlvula de seguridad ser la presin mxima permisible de trabajo de la caldera. Debe haber un margen adecuado entre la presin normal de trabajo de la caldera y la tara de la vlvula de seguridad.

119 Vlvulas de interrupcin para calderas Una caldera de vapor debe tener instalada una vlvula de interrupcin (tambin conocida como vlvula de salida de vapor), que asla la caldera de vapor y su presin del proceso o la planta. Generalmente, es una vlvula de globo en ngulo del modelo de husillo. La Fig. 6.3 muestra una vlvula de interrupcin tpica de este tipo.

En el pasado, estas vlvulas estaban fabricadas de hierro fundido, acero y bronce (que se usan para las aplicaciones con presiones ms altas). Actualmente, muchos fabricantes de calderas usan vlvulas de fundicin nodular como estndar en sus propias aplicaciones como vlvula de interrupcin. La vlvula de interrupcin no se disea como una vlvula para proporcionar ms o menos vapor, debe abrirse o cerrarse totalmente. Siempre debe abrirse lentamente para evitar aumentos repentinos de presin aguas abajo y golpes de ariete. En aplicaciones de varias calderas debe instalarse una vlvula de aislamiento adicional en serie con la vlvula de salida de vapor. sta es, generalmente, una vlvula del globo de husillo, del tipo de retencin que previene que una caldera presurice a otra. Alternativamente, algunas empresas prefieren usar una vlvula globo de husillo con una vlvula de retencin de disco intercalada entre las bridas de las dos vlvulas de aislamiento. Vlvulas de retencin Las vlvulas de retencin (como las de las Fig. 6.4 y 6.5) se instalan en la tubera del agua de alimentacin de la caldera, entre la bomba de alimentacin y la caldera. Una vlvula de aislamiento para la alimentacin a la caldera se instala en el cuerpo de la caldera.

La vlvula de retencin contiene un resorte que mantiene la vlvula cerrada cuando no hay presin en la caldera aunque el tanque de alimentacin tenga un nivel elevado. Adems, previene que la caldera se inunde por la presin esttica del agua de alimentacin. Bajo condiciones normales de vapor, la vlvula de retencin funciona de una manera convencional para detener el flujo del retorno de la caldera que entra en la lnea de alimentacin cuando la bomba de alimentacin se para. Cuando la bomba de alimentacin se pone en marcha, su presin vence al resorte para alimentar la caldera.

Control de Sales Disueltas Controla la cantidad total de slidos disueltos (TDS) en el agua de caldera y, a veces, tambin se conoce como purga continua. El sistema puede ser manual o automtico. Cualquiera que sea el sistema usado, los TDS son una muestra del agua de caldera comparado con un punto de referencia; si el nivel de TdS es demasiado alto, se libera una cantidad de agua de caldera para ser sustituida por agua de alimentacin de caldera con un nivel de TDS mucho ms bajo. Esto tiene el efecto de diluir el agua en la caldera y reducir los niveles de TDS. En un sistema de control de TDS manual, debera tomarse una muestra del agua de caldera cada cambio de turno. un sistema tpico de control automtico de TDS se muestra en la figura.

122 Vlvulas de purga de fondo Las calderas deben tener, como mnimo, una vlvula de purga de fondo, en un lugar cercano al que pueda que se acumule el sedimento o lodo. Estas vlvulas deben accionarse con una llave y estn diseadas de tal manera que es imposible sacar la llave con la vlvula abierta. Existen vlvulas de purga de fondo automticas que se controlan por temporizadores incorporados en los controles electrnicos que aseguran que una sola caldera puede purgarse a la vez. Las figuras siguientes muestran vlvulas tpicas de purga de fondo.

Con purga de fondo manual en una instalacin de varias calderas, slo se permite una llave en la sala de calderas. De esta manera, es imposible que el contenido de la purga de fondo de una caldera pase a otra y que tenga que pararse para el mantenimiento.

Manmetros Todas las calderas deben tener, como mnimo, un indicador de presin. El dial debe tener, como mnimo, 150 mm de dimetro y ser del tipo de tubo de bourdon. Debe tener marcada la presin de trabajo normal y la presin/diseo de trabajo mximo permisible. Los manmetros, normalmente, se conectan al espacio vapor de la caldera por un tubo sifn en R que est lleno de vapor condensado para proteger el mecanismo del dial de altas temperaturas. Se pueden instalar manmetros en otros recipientes a presin, como tanques de purga de fondo.

124 Indicadores de nivel de agua y sus accesorios Para lograr que un caudal de vapor coincida con los requisitos variables de una planta de vapor, es necesario un buen control de nivel de agua de la caldera. Con los pequeos espacios de vapor en las calderas actuales, es esencial una respuesta rpida y precisa a las variaciones en el nivel de agua. Todas las calderas tienen, como mnimo, un indicador de nivel de agua. Un tubo de cristal muestra el nivel real del agua en la caldera sean cuales sean las condiciones de trabajo de la caldera. Deben instalarse indicadores e nivel para que muestren su lectura ms baja del nivel del agua a 50 mm del punto sobre donde ocurrir el sobrecalentamiento. Alrededor de ellos deben instalarse protectores que no deben impedir la visibilidad del nivel del agua. La Fig. 6.10 muestra un indicador de nivel tpico. Los indicadores de nivel son propensos a daos por la corrosin de los qumicos en el agua de la caldera, y erosin durante la purga de fondo, especialmente en el lado del vapor. Cualquier seal de corrosin o erosin obliga a cambiar el cristal. Para comprobar un indicador de nivel, debe seguirse el siguiente procedimiento: 125 1. Cerrar el grifo de agua y abrir el grifo de purga durante aproximadamente 5 segundos. 2. Cerrar el grifo de purga y abrir la llave del agua. El agua deber volver rpidamente a su nivel del funcionamiento normal; si esto no ocurriera, entonces podra haber un obstculo en el grifo de agua y debe remediarse lo antes posible. 3. Cerrar el grifo de vapor y abrir el grifo de purga durante aproximadamente 5 segundos. 4. Cerrar el grifo de purga y abrir la llave de vapor. Si el agua no vuelve a su nivel rpidamente, podra haber un obstculo en el grifo de vapor y debe remediarse lo antes posible.

El operador autorizado debe comprobar sistemticamente los indicadores de nivel por lo menos una vez al da llevando la proteccin necesaria en la cara y las manos para protegerle de quemaduras en caso de la rotura del cristal. Todas las manetas del indicador de nivel deben apuntar hacia abajo cuando est trabajando. La proteccin del indicador de nivel debe mantenerse limpia. Cuando se est limpiando la proteccin debe cerrarse temporalmente el indicador de nivel.

126 Hay que asegurarse de que hay un nivel de agua satisfactorio antes de cerrar el indicador de nivel y tener cuidado de no tocar o golpear el cristal. Despus de limpiar, y cuando se haya colocado la proteccin, el indicador de nivel debe comprobarse y los grifos puestos en la posicin correcta. Los significantes desarrollos en los ltimos aos han producido una mejora en la seguridad y fiabilidad de los controles de nivel de agua en calderas, siendo normales los controles de nivel electrnicos que han remplazado, en muchos casos, los equipos de flotador ms antiguos. Mantenimiento El indicador de nivel debe renovarse completamente en cada revisin anual. La falta de mantenimiento puede producir endureciendo de la estopada que bloquea los grifos. Si se dobla o se distorsiona una maneta de un grifo, hay que asegurarse de que el grifo est totalmente abierto. Los accesorios daados deben renovarse o repararse inmediatamente. Los cristales suelen perder transparencia debido a las condiciones del agua o por la corrosin. Por consiguiente, los cristales deben renovarse regularmente, por lo que se debe disponer de cristales y estopadas de recambio.

Se debe recordar que si los pasos de vapor estn estrangulados, pueden dar un falso nivel alto o bajo de agua en la caja de nivel. Al comprobar las conexiones de vapor del indicador de nivel, deben cerrarse los grifos de conexin a la tubera de agua del indicador de nivel. Cmaras de control de nivel Las cmaras de control de nivel estn en la parte externa de la caldera y sirven par instalar los controles o alarmas de nivel como muestra la figura. El funcionamiento de los controles o alarmas de nivel se verifica diariamente cuando se usa la vlvula de purga secuencial. Con el volante girado totalmente en sentido contrario a las agujas de reloj, la vlvula estar en la posicin de funcionamiento normal y un asiento trasero cierra la conexin del desage.

127 Controles de nivel instalados dentro de la caldera Hay sistemas del control de nivel que proporcionan un grado mayor de seguridad que los mencionados anteriormente. Los sensores se instalan directamente dentro del cuerpo de la caldera y proporcionan una funcin de supervisin de la integridad del sistema. Debido a que estn instalados internamente, no estn sujetos a los procedimientos de purga de fondo de las cmaras externas. El funcionamiento del sistema se comprueba con un

ensayo de evaporacin. Las fundas de proteccin se instalan para amortiguar el nivel de agua alrededor del sensor.

128 Eliminadores de aire y enriquecedores de vaco Cuando una caldera se pone en marcha, el espacio de vapor est lleno de aire. Este aire no tiene valor calorfico, de hecho afectar adversamente al funcionamiento de la planta debido a su presin parcial, como se demuestra en la ley de Daltons, y tambin su efecto de cubrir las superficies de intercambio de calor. El aire tambin puede dar lugar a corrosin en el sistema de condensado si no se elimina adecuadamente. El aire puede purgarse del espacio de vapor simplemente usando una vlvula manual, normalmente quedara abierto hasta que el manmetro marque una presin aproximada de 0,5 bar. una alternativa al grifo es un eliminador de aire de presin equilibrada que no slo libera al operador de la caldera de la tarea de purgar aire manualmente (y asegura que realmente se realiza), sino que tambin es mucho ms preciso y eliminar los gases que se pueden acumular en la caldera. En la Fig. 6.13 se muestran unos eliminadores de aire.

129 Cuando se para una caldera, el vapor en el espacio vapor se condensa produciendo un vaco. Este vaco ejerce una presin desde el exterior sobre la caldera, y puede producir que las mirillas de inspeccin fuguen, que se dae la estructura de la caldera y existe el peligro de que se llene excesivamente la caldera parada. Para evitar esto, se requiere un rompedor de vaco en el cuerpo de la caldera.

GRUPO SILVESTRE

Nombre de Empresa SILVESTRE PERU S.A.C Nombre Comercial SILVESTRE S.A.C. RUC 20191503482 Fecha de Fundacin 28/10/1993 Tipo de Sociedad SOCIEDAD ANONIMA CERRADA Estado de la Empresa ACTIVO Sector econmico de desempeo VENTA MAYORISTA DE OTROS PRODUCTOS CIIU 51906 Marca De Actividad Comercio Exterior IMPORTADOR/EXPORTADOR Direccin Principal CAL. CALLE ARICA #242 Referencia de ubicacin ALTURA CUADRA 6 DE PARDO Poblacin LIMA / LIMA / MIRAFLORES Fax 0 Telfonos - - - 0 6173300

CALDERA DE VAPOR OLV Las calderas verticales OLMAR, son del tipo acuotubular y estn dotadas de unos colectores interiores de gran dimetro por los que se produce la circulacin del agua. Su robustez y fiabilidad, permite una utilizacin en condiciones difciles y una gran durabilidad lo que les hace ser ideales para pequeas y medianas empresas, en las que las condiciones de trabajo no sean las mas idneas. Por otro lado, su disposicin vertical permite ubicaciones en sitios difciles donde la superficie de ubicacin puede llegar a ser un problema. Estn disponibles en pequeas y medinas producciones y con quemadores para combustibles lquidos y gaseosos.

La cromatografa es un mtodo fsico de separacin basado en la distribucin de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra mvil. En la cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que fluye a travs de una columna que contiene a la fase fija. La cromatografa lquida clsica se lleva a cabo en una columna generalmente de vidrio, la cual est rellena con la fase fija. Luego de sembrar la muestra en la parte superior, se hace fluir la fase mvil a travs de la columna por efecto de la gravedad. Con el objeto de aumentar la eficiencia en las separaciones, el tamao de las partculas de fase fija se fue disminuyendo hasta el tamao de los micrones, lo cual gener la necesidad de utilizar altas presiones para lograr que fluya la fase mvil. De esta manera, naci la

tcnica de cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC), que requiere de instrumental especial que permita trabajar con las altas presiones requeridas. Dependiendo del tipo de fase fija y del tipo de fenmeno fsico que provoca la separacin, la cromatografa lquida de alta resolucin puede ser: 1. Cromatografa de adsorcin La fase fija es un slido y se utiliza casi exclusivamente slice (slica) y en mucha menor medida almina. 2. Cromatografa de reparto En casi todos los casos, como fase estacionaria se utilizan compuestos unidos qumicamente a un soporte slido de slica. Se la subdivide encromatografa en fase normal y fase reversa. En la cromatografa en fase normal, la fase fija es polar (como por ejemplo agua o trietilenglicol) y los compuestos menos polares eluyen primero. En la cromatografa en fase reversa, el compuesto unido qumicamente es un hidrocarburo aliftico y se emplean fases mviles polares. En este caso, las sustancias ms polares eluyen primero. 3. Cromatografa inica Se utilizan columnas rellenas con resinas de intercambio inico para separar y determinar iones. 4. Cromatografa de exclusin por tamao La fase fija est formada por partculas polimricas o de slice que contienen una red uniforme de poros y llevan a cabo un fraccionamiento realcionado con el tamao molecular. Las molculas de tamao mayor son excludas y eluyen primero, mientras que las ms pequeas que penetran en los poros son retenidas ms tiempo. El HPLC es una de las tcnicas de laboratorio ms utilizada como herramienta analtica para separar y detectar compuestos qumicos. Una parte fundamental de los cromatgrafos de HPLC es la bomba. Las bombas para HPLC deben cumplir ciertos requisitos fundamentales: - Deben producir presiones estables hasta 6000 psi. - Deben mantener el flujo libre de pulsaciones - Deben generar intervalos de caudales de flujo (0,1 a 10 ml/min) - Deben permitir un control y reproducibilidad del flujo de solvente - Sus componentes deben ser resistentes a la corrosin Las bombas que se usan en HPLC se pueden clasificar segn su funcionamiento y diseo en:

Mecnicas: recprocantes y de desplazamiento contnuo Neumticas

Tipos de HPLC
Cromatografa de fase normal La cromatografa de fase normal o "Normal phase HPLC" (NP-HPLC) fue el primer tipo de sistema HPLC utilizado en el campo de la qumica, y se caracteriza por separar los compuestos en base a su polaridad. Esta tcnica utiliza una fase estacionaria polar y una fase mvil apolar, y se utiliza cuando el compuesto de inters es bastante polar. El compuesto polar se asocia y es retenido por la fase estacionaria. La fuerza de absorcin aumenta a medida que aumenta la polaridad del compuesto y la interaccin entre el compuesto polar y la fase estacionaria polar (en comparacin a la fase mvil) aumenta el tiempo de retencin. joe La fuerza de interaccin no slo depende de los grupos funcionales del compuesto de inters, sino tambin en factores estericos de forma que los ismeros estructurales a menudo se pueden diferenciar el uno del otro. La utilizacin de disolventes ms polares en la fase mvil disminuye el tiempo de retencin de los compuestos mientras que los disolventes ms hidrofbicos tienden a aumentar el tiempo de retencin. La NP-HPLC cay en desuso a los aos setenta con el desarrollo del HPLC de fase reversa o Reversed-phase HPLC debido a la falta de reproductibilidad de los tiempos de retencin puesto que los disolventes prticos cambiaban el estado de hidratacin de la silica o almina de la cromatografa. Cromatografa de fase reversa La HPLC de fase reversa (RP-HPLC) consiste en una fase estacionaria apolar y una fase mvil de polaridad moderada. Una de las fases estacionarias ms comunes de este tipo de cromatografa es la silica tratada con RMe2SiCl, dnde la R es una cadena alquil tal como C18H37 o C8H17. El tiempo de retencin es mayor para las molculas de naturaleza apolar, mientras que las molculas de carcter polar eluyen ms rpidamente. El tiempo de retencin aumenta con la adicin de disolvente polar a la fase mvil y disminuye con la introduccin de disolventes mas hidrofobicos. La cromatografa de fase reversa es tan utilizada que a menudo se lo denomina HPLC sin ninguna especificacin adicional. La cromatografa de fase reversa se basa en el principio de las interacciones hidrofbicas que resultan de las fuerzas de repulsin entre un disolvente relativamente polar, un compuesto relativamente apolar, y una fase estacionaria apolar. La fuerza conductora en la unin del compuesto a la fase estacionaria es la disminucin del rea del segmento apolar del analito expuesto al disolvente.Este efecto hidrofbico est dominado por la disminucin de la energa libre de la entropa asociada con la minimizacin de la interfase compuesto-disolvente polar. El efecto hidrofbico disminuye con la adicin de disolvente apolar a la fase mvil. Esto modifica el coeficiente de particin de forma que el compuesto se mueve por la columna y eluye. Las caractersticas del compuesto de inters juegan un papel muy importante en la retencin. En general, un compuesto con una cadena alquil larga se asocia con un tiempo

de retencin mayor porque aumenta la hidrofobicidad de la molcula. Aun as, las molculas muy grandes pueden ver reducida la interaccin entre la superficie del compuesto y la fase estacionaria. El tiempo de retencin aumenta con el rea de superficie hidrofbica que suele ser inversamente proporcional al tamao del compuesto. Los compuestos ramificados suelen eluir ms rpidamente que sus ismeros lineales puesto que la superficie total se ve reducida. Aparte de la hidrofobicidad de la fase inmvil, otras modificaciones de la fase mvil pueden afectar la retencin del compuesto; por ejemplo, la adicin de sales inorgnicas provoca un aumento lineal en la tensin superficial, y como que la entropa de la interfase compuesto-disolvente est controlada precisamente por la tensin superficial, la adicin de sales tiende a aumentar el tiempo de retencin. Otra variable importante es el pH puesto que puede cambiar la hidrofobicidad del compuesto. Por este motivo, la mayora de mtodos utilizan un tampn como el fosfato de sodio para controlar el valor del pH. Estos tampones controlan el pH, pero tambin neutralizan la carga o cualquiera resto de silica de la fase estacionaria que haya quedado expuesta y actan como contraiones que neutralizan la carga del compuesto. El efecto de los tampones sobre la cromatografa puede variar, pero en general mejoran la separacin cromatogrfica. Las columnas de fase reversa se echan a perder con menor facilidad que las columnas de silica normales. Aun as, muchas columnas de fase reversa estn formadas por silica modificada con cadenas alquil y no se deben utilizar nunca con bases en medio acuoso puesto que stas podran daar el esqueleto de silica subyacente. Las columnas se pueden utilizar en cidos en medio acuoso pero no deberan estar expuestas demasiado tiempo al cido porque puede corroer las partes metlicas del aparato de HPLC. Cromatografa de exclusin molecular La cromatografa de exclusin molecular, tambin conocida como cromatografa por filtracin en gel, separa las partculas de la muestra en funcin de su tamao. Generalmente se trata de una cromatografa de baja resolucin de forma que se suele utilizar en los pasos finales del proceso de purificacin. Tambin es muy til para la determinacin de la estructura terciaria y la estructura cuaternaria de las protenas purificadas. La cromatografa de filtracin molecular es un mtodo de cromatografa en columna por el cual las molculas se separan en solucin segn su peso molecular, o ms precisamente, segn su radio de Stokes. En esta cromatografa, la fase estacionaria consiste en largos polmeros entrecruzados que forman una red tridimensional porosa. A los fines prcticos, la columnas se empaquetan con pequeas partculas esferoidales formadas por esos polmeros entrecruzados. En consecuencia, estas partculas son porosas, y el tamao de los poros es tal que algunas molculas (las demasiado grandes) no podrn ingresar a esos poros, en tanto que otras (las suficientemente pequeas) podrn pasar libremente. Los poros quedan conectados formando una malla o red, lo cual determina una serie de caminos a ser recorridos por las molculas que acceden al interior de esta.

Cromatografa de intercambio inico En la cromatografa de intercambio inico, la retencin se basa en la atraccin electrosttica entre los iones en solucin y las cargas inmovilizadas a la fase estacionaria. Los iones de la misma carga son excluidos mientras que los de carga opuesta son retenidos por la columna. Algunos tipos de intercambiadores inicos son: i) Resinas de poliestireno, ii) intercambiadores inicos de celulosa y dextranos (geles) y iii) Silica porosa o vidrio de tamao de poro controlado. En general los intercambiadores inicos favorecen la unin de iones elevada carga y radio pequeo. Un incremento en la concentracin del contrain (respecto a los grupos funcionales de la resina) reduce el tiempo de retencin. Un incremento en el pH reduce el tiempo de retencin en las cromatografas de intercambio catinico mientras que una disminucin del pH reduce el tiempo de retencin en las cromatografas de intercambio aninico. Este tipo de cromatografa es ampliamente utilizado en las siguientes aplicaciones: purificacin de agua, concentracin de componentes traza, Ligand-exchange chromatography, Ion-exchange chromatography of proteins,High-pH anion-exchange chromatography of carbohydrates and oligosaccharides, etc. Cromatografa basada en bioafinidad Este tipo de cromatografa se basa en la capacidad de las sustancias biolgicamente activas de formar complejos estables, especficos y reversibles. La formacin de estos complejos implica la participacin de fuerzas moleculares como las interacciones de Van der Waals, interacciones electrostticas, interacciones dipolo-dipolo, interacciones hidrofbicas y puentes de hidrgeno entre las partculas de la muestra y la fase estacionaria. Se trata de un mtodo que se emplea para el rastreo de mutaciones (ya casi totalmente en desuso debido al auge de la secuenciacin), que permite detectar la presencia de variaciones en el ADN aunque no se determinan especficamente cules. En este caso, se utiliza la tcnica cromatogrfica para la deteccin de heterodplex de ADN, en lugar de utilizar un gel para correr las molculas de cidos nucleicos. El procedimiento consiste en desnaturalizar (aumentando la temperatura normalmente) una muestra que contenga tanto el ADN problema como un ADN control, que no es ms que el mismo ADN problema pero en su versin silvestre o normal (sin mutaciones). Luego se procede a renaturalizar (disminuyendo la temperatura), de manera que aquellas cadenas de ADN que vuelvan a unirse con sus respectivas complementarias (cadena "a" silvestre con cadena "b" silvestre; o bien cadena "a" mutante con cadena "b" mutante) no presentarn diferencia con el estado original; sin embargo, si por ejemplo una cadena "a" silvestre hibrida con una cadena "b" mutante, aquella regin (ms o menos amplia) en la que exista mutacin no complementar, formndose un bucle u horquilla, es decir, una regin en la que las bases nitrogenadas no son complementarias y no establecen las uniones caractersticas por puentes de hidrgeno en la doble hlice de ADN. Dichas estructuras son los denominados heterodplex (dplex de ADN hbridos). Estos heterodplex migran de forma diferente a los homodplex en la columna de cromatografa de fase reversa(al igual que lo hacen en un gel de agarosa o acrilamida). La separacin se realiza en condiciones desnaturalizantes variables, detectndose las

molculas de ADN midiendo la absorbancia a 260 nm. Esto origina un pico de elucin a un tiempo caracterstico. A medida que se incrementan las condiciones desnaturalizantes los heterodplex migran por delante de los homodplex, apareciendo los picos correspondientes a heterodplex antes en el grfico resultante, el cromatograma. De esta manera, como los heterodplex se desnaturalizan a temperaturas distintas a los homodplex, ambas molculas dan lugar a picos de elucin distintos. Previo al proceso inicial de desnaturalizacin se suele llevar a cabo una PCR para la amplificacin del ADN molde en fragmentos de unas 150-450 pb. Con este sistema pueden detectarse fcilmente sustituciones de una base, inserciones o deleciones, con un coste reducido y de manera rpida (aproximadamente 16 minutos).