Prticas de Biologia Celular

PUBLICAO DIDTICA

FARMACIA

Profa. Responsvel: Llian Carla Carneiro

Trindade, GO 2 !

2 ". O#$etivos gerais da disciplina descrever a estrutura, co%posi&'o (u%ica e fisiologia das c)lulas, co%o u% funda%ento para a co%preens'o dos de%ais nveis de organi*a&'o+ relacionar os conceitos apresentados e% aula te,rica co% as o#serva&-es prticas+ treinar o %anuseio do %icrosc,pio de lu* .instru%ental #sico utili*ado para o estudo da c)lula/+ desenvolver 0#itos de tra#al0o e% la#orat,rio. 2. Regi%ento da disciplina #iologia celular 1'o ) per%itida a entrada de alunos ap,s "2 %inutos do incio das aulas. 3 fre(45ncia dos alunos ) controlada por c0a%ada oral. 3s aulas prticas s'o #aseadas na 3postila 6Biologia Celular 7 3ulas Prticas8, u%a pu#lica&'o didtica do Curso de Ci5ncias Biol,gicas da 9:G ; 9nidade 9niversitria de <orrin0os. =. B>BL>OGR3?>3 B@A>C3: 3LB:RTA, B.+ BR3B, C.+ L:D>A, E.+ R3??, <.+ ROB:RTA, F.+ D3TAO1, E. C. Biologia molecular da clula. Ga ed., Porto 3legre, :ditora 3rtes <)dicas, "HH!. "2H=p. Ce ROB:RT>A, :. C. P.+ ROB:RT>A Er., :. <. ?. Bases moleculares da Biologia celular e molecular. Ga ed., Rio de Eaneiro, :ditora Guana#ara Foogan, 2 . G !p. E91I9:>R3, L. C.+ C3R1:>RO, E. Biologia celular e molecular. !a ed., Rio de Eaneiro, :ditora Guana#ara Foogan, 2 . GGHp. F3RP, G. Biologia celular e molecular - conceitos e experimentos. <anole, A'o Paulo, 2 2, !JKp. LOC>AL, L.+ B:RF, 3.+ <3TA9C3>R3, P.+ F3>A:R, C.3.+ FR>:G:R, <.+ ACOTT, <.P.+ M>P9RAFB, L.+ C3R1:LL, E. 2 =. Molecular Cell Biology. 2N :d. ?ree%an, 1eO BorP. 2. Cisposi&-es gerais Para u% %el0or aproveita%ento das aulas prticas os alunos dever'o: TR3M:R 3 3POAT>L3 3 TOC3A 3A 39L3A+ ". 3ntes do incio da aula, o aluno deve ler atenta%ente as instru&-es para cada eQerccio. Ceve procurar tra#al0ar co% iniciativa pr,pria.

3 2. 1o fi% de cada eQerccio 0 se%pre perguntas Rs (uais o aluno dever responder, ap,s discuti;las co% os colegas do grupo ou de acordo co% consultas aos teQtos das aulas te,ricas+ G. O aluno ) responsvel pelo %aterial (ue l0e ) fornecido: %icrosc,pio, lS%inas, pin&as, vidraria, etc. Ceve *elar pela #oa %anuten&'o dos %es%os, le%#rando;se de (ue os colegas de outras tur%as far'o uso desses %es%os %ateriais.

# SUMRIO

Prticas de Biologia Celular................................................................................................1 PUBLICAO DIDTICA.......................................................................................................1 ru!o 1...................................................................................................................................." ru!o 2...................................................................................................................................." ru!o 3................................................................................................................................" ru!o #................................................................................................................................" Aeross$is % &'o (icro!art)culas s$lidas ou l)*uidas co( di(e+s'o a!ro,i(ada de -.1 e "-. *ue !ode( !er(a+ecer e( sus!e+s'o e( co+di/0es 1i1eis !or 1rias 2oras..........." 3ias a4reas de !e+etra/'o...................................................................................................." 3ia de !e+etra/'o cut5+ea..................................................................................................." Co+ta(i+a/'o 1ia ocular....................................................................................................." Co+ta(i+a/'o 1ia oral.........................................................................................................6 Prote/'o i+di1idual..............................................................................................................6 Prote/'o coleti1a.................................................................................................................6 7egras Bsicas de &egura+/a..............................................................................................6 Co+sidera/0es 8i+ais............................................................................................................9 Prtica +o 1..................................................................................................................................: Utili;a/'o do (icrosc$!io de lu;................................................................................................: T4c+icas de estudo das c4lulas..................................................................................................1# Prtica +o 2................................................................................................................................1< T4c+icas de !re!aro de (ateriais !ara (icrosco!ia de lu;.......................................................1< 1.Co+ceitos a=ordados...............................................................................................................1< Prtica +o 3................................................................................................................................26 >4todos de estudo da c4lula e (or8ologia celular....................................................................26 Prtica +o #................................................................................................................................2< Orga+elas e (acro(ol4culas !ode( ser se!aradas !or ce+tri8uga/'o......................................2< Prtica +o "................................................................................................................................32 Co(!ara+do c4lulas !rocari$ticas e eucari$ticas......................................................................32 Prtica +o 6................................................................................................................................3" Isola+do o D?A@ +a co;i+2a....................................................................................................3" Prtica +o 9................................................................................................................................39 Astuda+do a !assage( de solutos e sol1e+tes !ela (e(=ra+a !las(tica................................39 Prtica +o :................................................................................................................................3< O=ser1a+do os(ose +as c4lulas 1egetais..................................................................................3< Prtica +o <................................................................................................................................#1 Cloro!lastos e (itocB+drias......................................................................................................#1 Prtica +o 1-..............................................................................................................................#2 Prtica +o 11..............................................................................................................................#3 >itose........................................................................................................................................#3

BIOSSEGURANA

" BIOSSEGURANA - e o co+Cu+to de a/0es 1oltadas !ara !re1e+/'o. (i+i(i;a/'o ou eli(i+a/'o de riscos i+ere+tes Ds ati1idades de !es*uisa. !rodu/'o. e+si+o. dese+1ol1i(e+to tec+ol$gico e !resta/'o de ser1i/os. as *uais !ossa( co(!ro(eter a saEde do 2o(e(. dos a+i(ais. do (eio a(=ie+te ou a *ualidade dos tra=al2os dese+1ol1idos. Os age+tes =iol$gicos s'o co+siderados de acordo co( a !atoge+icidade !ara o 2o(e(F a 1irulG+cia. o (odo de tra+s(iss'oF a e+de(icidadeF a e,istG+cia ou +'o de !ro8ila,ia e de tera!Gutica e8ica;. A,iste( # gru!os disti+tos;
GRU O !

Asta classe !ossui =ai,o risco i+di1idual e coleti1oF >icroorga+is(os +u+ca descritos co(o age+te causador de doe+/as !ara o 2o(e(. e *ue +'o co+stitue( risco !ara o (eio a(=ie+teF A,e(!losH Bacillus cereus. Asc2eric2ia coli.
GRU O "

Asta classe !ossui risco i+di1idual (oderado e risco coleti1o li(itadoF >icroorga+is(os *ue !ode( !ro1ocar doe+/as ao 2o(e(. co( !ouca !ro=a=ilidade de alto risco !ara os !ro8issio+ais de la=orat$rioF A,e(!losH &c2istosso(a (a+so+i. Iuc2ereria =a+cro8ti e &!orot2ri, sc2e+cJii.
GR9PO G

Asta classe !ossui risco i+di1idual ele1ado e risco coleti1o =ai,o. !ode+do causar e+8er(idades gra1es aos !ro8issio+ais de la=orat$rioF A,e(!losH >Kco=acteriu( tu=erculosis. LI3 e TrK!a+osso(a cru;i.
GR9PO =

Asta classe agru!a os age+tes *ue causa( doe+/as gra1es !ara o 2o(e( e re!rese+ta( u( s4rio risco !ara os !ro8issio+ais de la=orat$rio e !ara a coleti1idadeF Possui age+tes !atogG+icos alta(e+te i+8ecciosos *ue se !ro!aga( 8acil(e+te. !ode+do causar a (orte ra!ida(e+teF A,e(!losH 3)rus A=olaF LassaF >ac2u!F >ar=ug.
3:ROAAT>A

- S#o micropart$culas s%lidas ou l$&uidas com dimens#o aproximada de '(! e )' ( &ue podem permanecer em suspens#o em condi*+es ,i-,eis por ,-rias .oras.

U>3A 3VR:3A C: P:1:TR3WXO

Pi!etage(. ce+tri8uga/'o e a=ertura da ce+tr)8uga e( 8u+cio+a(e+toF >acera/'o de tecidos. so+ica/'o. agita/'oF 8la(=age( co( al/a de !lati+aF A=ertura de a(!olas lio8ili;adasF >a+i!ula/'o de 8luidos org5+icos. a=ertura de 8rascos co( cultura de c4lulas.

U>3 C: P:1:TR3WXO C9TY1:3

Picada co( agul2as co+ta(i+adasF Corte co( 1idraria *ue=rada ou tri+cadaF Corte !or i+stru(e+tos !er8urocorta+tes co+ta(i+adosF
CO1T3<>13WXO U>3 OC9L3R

Ocorre e( decorrG+cia de !roCe/'o +os ol2os de got)culas de (aterial i+8ecta+teF As oculares de (icrosc$!ios e a!arel2os $!ticos co+ta(i+ados s'o gra+de 8o+te de i+8e/'o.

CO1T3<>13WXO U>3 OR3L

Pi!etage( !ela =ocaF L=ito de 8u(arF 7oer as u+2asF Co(er de+tro do la=orat$rio. Boas !rticas +o la=orat$rio La1ar as ('os a+tes e a!$s a Cor+ada de tra=al2oF ?u+ca !i!ete co( a =ocaF ?'o co(er ou !re!arar ali(e+tosF ?'o =e=er +e( 8a;er 2igie+e =ocal. (a*uilage(. de!ila/'o ou =ar=ear%se e roer as u+2asF >a+ter os artigos de uso !essoal 8ora do la=orat$rioF ?'o use sa!atos a=ertosF ?'o tra=al2ar so;i+2o +o la=orat$rio. Protetor 8acial uso de Caleco $culos de segura+/a lu1as cirErgicas !Gra de =orrac2a !i!etador auto(tico (scaras Protege( o !ro8issio+al e o (eio a(=ie+teH C5(eras de 8lu,o la(i+ar la1a ol2os c2u1eiro de e(ergG+cia Co+2eci(e+to dos riscos la=oratoriaisF Trei+a(e+toF A*uisi/'o de (a+ual de segura+/aF Cu(!rir as i+stru/0es de segura+/aF Usar os e*ui!a(e+tos de !rote/'o i+di1idual e coleti1aF Ali(i+ar 8oco de e,!osi/'o ao riscoH >a+ter =a+cadas li(!as e li1res rotular o (aterial de estudo li(!ar i(ediata(e+te o derra(a(e+to de (aterial =iol$gico e1itar a 8or(a/'o de aeross$is Co(u+icar situa/0es de risco e acide+tes.

PROT:WXO >1C>U>C93L

PROT:WXO COL:T>U3

R:GR3A B@A>C3A C: A:G9R31W3

PROCEDIMENTO DE DESINFECO EM CASO DE ACIDENTES

1. Derramamento s m!"es #e mater a" "$%& #o 'ontam na#o( 'om !o&'a )orma*+o #e aerosso" ,-r&!o #e r s'o 1 e ./0

9 co=rir a rea a8etada co( toal2a !a!el colocar o desi+8eta+te a!ro!riado so=re o !a!el aguardar 3- (i+utos re(o1er os !a!4is co( !i+/a e coloc%los e( saco !lstico Musar lu1asN a!licar +o1a(e+te o desi+8eta+te es8rega+do%o .. Derramamento #e mater a" "$%& #o 'ontam na#o 'om )orma*+o #e aeross1 s ,E2.0 -otas 'a n#o #a ! !eta/0 !re+der a res!ira/'o a=a+do+ar a rea !or algu+s (i+utos !roceder co(o o caso de derra(a(e+to si(!les 3. 4&e#a #e '&"t&ras em me o "$%& #o o& s1" #o 'om %&e5ra #e re' ! ente0 !re+der a res!ira/'o a=a+do+ar a rea tra+car a !orta coloca+do u( a1iso aguardar 3- (i+utos certi8icar%se da +ature;a do (icroorga+is(o e+1ol1ido !ara decidir so=re a !rote/'o +ecessria e desi+8eta+te a ser utili;ado
CO1A>C:R3WZ:A ?>13>A

Acide+tes s'o causados !or atos i+seguros ou co+di/0es i+segurasF ?u+ca !er(a+e/a e( u( la=orat$rio se( o !ro8essor ou t4c+ico res!o+s1elF 7eage+tes *u)(icos ou age+te !atogG+icos a!rese+ta( (aior riscoF Te+2a o +O do tele8o+e do cor!o de =o(=eiros se(!re e( local 1is)1elF &e eu +'o sei algoH PA7 U?TA7 P A Q?ICA &OLUOR

>nstru&-es <icrosc,pio

de

La#orat,rio,

Recon0eci%ento

<anuseio

do

Or#em0 1% Arru(e e( orde( o (aterial +ecessrio !ara cada e,!eriG+cia % isso e1ita co+8us'oF 2% Use se(!re o Caleco eSou (scaras eSou lu1as *ua+do +ecessrioF 3% Ati*uete cuidadosa(e+te todo o (aterialF #% De!ois de usar la1ar eSou li(!ar. re!o+2a o (aterial +o de1ido lugar. 6 m!e7a0 1% De!ois de usar. la1e a 1idraria e e+,gTe 1rias 1e;es e( gua li(!aF 2% ?'o Cogue o (aterial usado +a !iaF 3% Dei,e o seu lugar t'o li(!o co(o gostaria de e+co+trar. Pre'a&*8es0 1% &e(!re *ue ocorrer u( acide+te +o tra=al2o. a1ise i(ediata(e+te ao !ro8essorF 2% Uua+do a*uecer u(a su=st5+cia e( u( tu=o de e+saio. +'o a!o+te a e,tre(idade a=erta !ara 1ocG ou !ara outra !essoaF 3% ?u+ca !ro1e u(a droga ou u(a solu/'o. a +'o ser co( !er(iss'o do !ro8essorF #% &e *ual*uer su=st5+cia cair +a sua !ele. la1e%a i(ediata(e+te co( gua corre+teF "% Leia os r$tulos dos 8rascos a+tes de usar as su=st5+cias +ele co+tidasF 6% Uua+do *ual*uer su=st5+cia cair +o c2'o ou +a (esa. la1e o local i(ediata(e+teF 9% Ao lidar co( 1idraria. !roceda co( cuidado !ara e1itar *ue=ras e cortes !erigososF

: :% &u=st5+cias i+8la(1eis de1e( ser a*uecidas e( =a+2o%(aria ou e( c2a!a el4tricaF <% A( caso de dE1ida so=re o uso de u(a su=st5+cia. co+sulte o !ro8essor. At t&#e0 1% Use o te(!o de la=orat$rio !ara reali;ar a!e+as o e,erc)cio i+dicado !ara aula !rticaF 2% Leia a+tes da aula as i+stru/0es !ara o e,erc)cio do diaF 3% &iga todas as i+stru/0es cuidadosa(e+teF #% 7egistre os resultados e( u( cader+o reser1ado !ara esse 8i(F
Relatrio

1% 2% 3% #%

Va/a os relat$rios segui+do as i+stru/0es do seu !ro8essorF A li+guage( de1e ser clara e suci+taF Os dese+2os e gr8icos de1e( ser tra/ados co( li+2as 8ir(es e a l!isF &e 8or usar cores !ara os dese+2os. elas de1e( ser 8i4is ao 1isto e( la=orat$rio M?'o co!iar dese+2os de atlas ou colegasNF "% Para cada e,!eriG+cia !oder ser 8eito u( relat$rio suci+to *ue de1er co+star deH T$t&"o( O59et :o. Intro#&*+o. Mater a" &t " 7a#o( Pro'e# mentos( Res&"ta#os( D s'&ss+o( Con'"&s8es.
3T:1WXO: I93LI9:R 3T>T9C: CO 3L91O I9: U:1L3 COLOC3R :< R>ACO C: 3C>C:1T: O L3BOR3TTR>O O9 9< COL:G3, ><PL>C3R@ 13 C>AP:1A3 CO <:A<O C3A 39L3A PR@T>C3A.

r-tica no ! Utili/a*#o do microsc%pio de lu/

< !. Conceitos a0ordados O %icrosc,pio de lu* ) u% aparel0o utili*ado para o#serva&'o de o#$etos %uito pe(uenos, i%possveis de sere% eQa%inados, e% detal0es, a ol0o nu. O tipo de %icrosc,pio %ais utili*ado nos estudos citol,gicos ) o co%posto, (ue ) constitudo #asica%ente por duas lentes convergentes. 1este %icrosc,pio a lu* atravessa o o#$eto o#servado e o con$unto de lentes, antes de atingir o ol0o, for%ando u%a i%age% #idi%ensional. 3ssi%, o o#$eto deve ser delgado o suficiente para (ue a lu* atravesse;o.

!.!. 1escri*#o dos componentes do microsc%pio O %icrosc,pio ) co%posto, #asica%ente por dois siste%as: o %ptico, for%ado pelas lentes e o mec2nico (ue as sustenta. 3 seguir, encontra%;se descritas cada u%a das partes desses siste%as.
3. outras. B. %icrosc,pio. C. latina ou Mesa: ) u%a pe&a de for%ato retangular, ou arredondada, Corpo ou Bra*o: ) a pe&a (ue liga a #ase R parte superior do ou Base: ) o suporte do %icrosc,pio, pe&a (ue sustenta todas as

disposta paralela%ente R dire&'o da #ase do %icrosc,pio. :sta pe&a se destina R recep&'o da lS%ina contendo o %aterial para estudo. 1o centro da platina eQiste u%a a#ertura para a passage% de lu*. 3ssociada R platina, nor%al%ente, encontra;se u%a pe&a deno%inada 6c0arriot8 cu$a fun&'o ) %ovi%entar a lS%ina no plano 0ori*ontal. Os dois parafusos dispostos lateral%ente R platina, u% so#re o outro, pro%ove% a %ovi%enta&'o do 6c0arriot8. O parafuso %ais eQterno .de %enor diS%etro/ per%ite o desli*a%ento da lS%ina da es(uerda para direita e vice;versa. O parafuso de diS%etro %aior ) responsvel pelo %ovi%ento da lS%ina para frente e para trs. 3coplada ao 6c0arriot8, 0 u%a presil0a (ue per%ite o encaiQe e fiQa&'o da lS%ina.

1C. 3onte de lu/: 0 u%a fonte de lu* apoiada so#re o p) do %icrosc,pio.

3lguns %icrosc,pios possue% apenas u% espel0o para refletir a lu* de u%a fonte eQterna. :. 3iltro: ) u%a placa de vidro colorida .a*ul, verde, etc./ fiQada a u%

receptculo, (ue torna a lu* %ais apropriada R o#serva&'o do %aterial. O filtro a*ul ) usado e% %icrosc,pio de rotina para transfor%ar a lu* a%arelada da lS%pada e% lu* #ranca tipo lu* solar. ?. Condensador: ) u% con$unto de lentes situado a#aiQo da platina, (ue

concentra e torna paralelo o feiQe lu%inoso, fornecendo a lu* necessria R ilu%ina&'o unifor%e do o#$eto e% estudo. O 6parafuso8 do condensador, locali*ado lateral%ente no #ra&o do %icrosc,pio, per%ite a %ovi%enta&'o das lentes condensadoras (ue deve% ser %antidas na posi&'o %ais elevada para o#ten&'o de u%a ilu%ina&'o unifor%e. G. 1ia4ragma ou 5ris: ) u%a pe&a associada ao condensador, regulvel

%ediante u%a alavanca, (ue controla a (uantidade de lu* (ue atinge o orifcio da platina. 3 regulage% ade(uada deste diafrag%a oferece u%a i%age% co% %el0or contraste. L. Can.#o: ) a parte superior do %icrosc,pio, dotada de %ovi%ento de

rota&'o constituda por u%a pe&a se%i;esf)rica, ligado a u% tu#o e% cu$a eQtre%idade encontra;se a lente ocular. >. Re,%l,er: locali*ado a#aiQo do can0'o. O rev,lver ) u%a pe&a circular

dotada de %ovi%ento de rota&'o, no (ual se insere% as lentes o#$etivas. O disco do rev,lver possui ran0uras para (ue o o#servador possa gira;lo para as %udan&as de o#$etivas. E. Ocular: ) a lente superior do %icrosc,pio (ue se encaiQa no tu#o. Toda

ocular tra* indicado o au%ento (ue proporciona R i%age% do o#$eto o#servado. F. O06eti,as: o %icrosc,pio possui, geral%ente, (uatro lentes o#$etivas.

Toda o#$etiva tra* gravado o au%ento (ue proporciona R do o#$eto o#servado. :ste au%ento ) indicado pelo n[%ero gravado co% caracteres %aiores. O n[%ero gravado co% caracteres %enores refere;se a a#ertura nu%)rica da lente, u% detal0e da ,ptica.

11
L. ara4uso macromtrico: na lateral do #ra&o eQiste% dois parafusos,

geral%ente, encaiQados u% no outro. O de %aior diS%etro ) o parafuso %acro%)trico, (ue per%ite grandes avan&os ou recuos da platina e% rela&'o R o#$etiva. <. ara4uso micromtrico: esse parafuso per%ite pe(uenos avan&os ou

recuos da platina. 3presenta u% %enor diS%etro, podendo estar pr,Qi%o ou associado ao %acro%)trico. 1. 7ra,a: $unto ao #ra&o do %icrosc,pio pode eQistir u%a alavanca (ue

trava o %ovi%ento do parafuso %acro%)trico e% u%a deter%inada posi&'o, i%pedindo a %ovi%enta&'o da platina e protegendo as o#$etivas contra possveis c0o(ues.

O06eti,os
lu*. Relacionar a i%age% for%ada e os au%entos o#tidos co% o >dentificar e citar as fun&-es de cada co%ponente do %icrosc,pio de

funciona%ento do siste%a ,ptico. <anusear correta%ente o %icrosc,pio.

". rocedimentos corretos para a 4ocali/a*#o

% 3#aiQe a %esa total%ente usando o parafuso %acro%)trico.

Gire o rev,lver, encaiQando a o#$etiva de %enor au%ento .=\/. Uerifi(ue pelo rudo caracterstico do encaiQe se a o#$etiva est real%ente encaiQada. % Pegue a lS%ina, segurando;a apenas pelas #ordas. Uerifi(ue se

a la%nula est voltada para ci%a. % 3#ra a presil0a e colo(ue a lS%ina so#re a platina, encaiQando;

a ao 6c0arriot8. Aolte a presil0a e verifi(ue se a lS%ina est #e% encaiQada. Centrali*e o %aterial no orifcio da platina, utili*ando os parafusos do 6c0arriot8. % % 3cenda a lu* do %icrosc,pio. Uerifi(ue se o diafrag%a est a#erto, ol0ando lateral%ente se

0 passage% de lu* atrav)s do orifcio da platina. Caso se$a necessrio, a#ra o diafrag%a, %ovi%entando a alavanca correspondente.

12
% elevada. % Levante a platina at) o seu ponto %Qi%o %ovi%entando o Certifi(ue;se se o condensador encontra;se e% posi&'o %ais

parafuso %acro%)trico, at) o seu ponto %Qi%o. % 3gora, ol0ando atrav)s da ocular, co% os dois ol.os a0ertos e

utili*ando o parafuso %acro%)trico, a#aiQe lenta%ente a platina, at) (ue o %aterial a ser o#servado se$a visto. 3ssi% (ue isto ocorrer, corri$a a focali*a&'o utili*ando o parafuso %icro%)trico. % :Qplore o %aterial, %ovi%entando os parafusos do 6c0arriot8

co% u%a das %'os e o parafuso %icro%)trico co% a outra. Colo(ue se%pre o %aterial a ser analisado no centro do ca%po de o#serva&'o, antes de passar para a o#$etiva de au%ento i%ediata%ente superior. % :ncaiQe a o#$etiva de " \ e fa&a o a$uste da focali*a&'o,

utili*ando apenas o parafuso %icro%)trico. O#serve o ca%po atenta%ente. % Aelecione u%a deter%inada rea do %aterial, centrali*e;a e

encaiQe a o#$etiva de = \. ?a&a o a$uste da focali*a&'o, utili*ando so%ente o parafuso %icro%)trico. % Ter%inando a o#serva&'o, desligue a lu*, gire o rev,lver para

encaiQar a o#$etiva de %enor au%ento .passando pela o#$etiva de " \/ e retire a lS%ina. O0s. 1unca %ovi%ente a platina do %icrosc,pio co% a o#$etiva de %aior au%ento encaiQada.

8. 9ti,idades de 3ixa*#o
Uoc5 ir usar, na %aioria das aulas prticas de B>OLOG>3 C:L9L3R, o %icrosc,pio. Ca a necessidade de Uoc5 aprender a eQplorar todas as possi#ilidades deste instru%ento ,tico, #e% co%o dos cuidados (ue Uoc5 deve ter co% ele. L:>3 CO< 3T:1WXO O 3P]1C>C: C:AT3 39L3 : UOLT: 3 :L: A:<PR: I9: T>U:R C^U>C3A. ". 3gora, o Professor ir l0e eQplicar co%o usar o %icrosc,pio e (uais os cuidados (ue Uoc5 deve ter co% ele.

13
Retire da caiQa a lS%ina contendo a letra 9 e colo(ue;a so#re a platina, de %odo a %anter a letra na posi&'o e% (ue ela ) lida, O#serve a posi&'o da letra na i%age% for%ada pelo %icrosc,pio co% a o#$etiva de =\. 3p,s a o#serva&'o responda:

a/ ?a&a os es(ue%as da posi&'o e do ta%an0o da letra o#servada, a vista desar%ada e nos au%entos de " \ e = \.

LS%ina #/ e%

" \

= \

Iual a diferen&a (uanto R posi&'o da i%age% da letra vista ao %icrosc,pio rela&'o a sua posi&'o real o#servada a vista desar%ada_

``````````````````````````````````````````````` c/ Por (ue centrali*ar o %aterial o#servado no ca%po de o#serva&'o, a cada

%udan&a de o#$etiva_ ```````````````````````````````````````````````````````````` ```````````````````````````````````````````````````````````` 2. O#serva&'o de organis%os %icrosc,pios % de u% lago. % Cu#ra co% u%a la%nula encostando u%a de suas #ordas Colo(ue so#re u%a lS%ina u%a gota de gua proveniente

na gota e deiQando;a descer suave%ente, %ini%i*ando a for%a&'o de #ol0as de ar. % % ?ocali*e. O#serve os organis%os e% diferentes ca%pos de

o#serva&'o utili*ando;se os parafusos do 6c0arriot8.

1# % Cesen0e o (ue o#servou.

OBA. Para o#servar organis%os %ais transparentes, di%inua a lu%inosidade usando o diafrag%a.

?igura " ; O <icrosc,pio

1 W ocular 2 W o=Ceti1as e re1$l1er 3 W !lati+a # W c2arriot " W (acro(4trico 6 W (icro(4trico 9 W dia8rag(a +o co+de+sador : W co+de+sador < W =ot'o do co+de+sador 1- W dois !ara8usos ce+trali;adores do co+de+sador 11 W 8o+te de lu; 12 W co+trole de ilu(i+a/'o 13 W dia8rag(a de ca(!o Mala1a+ca +o lado es*uerdo do (icrosc$!ioN 1# W dois !ara8usos de aCuste da l5(!ada Mes*uerdo e direitoN 1" W 8ocali;adora da l5(!ada Mala1a+ca +o lado direito do (icrosc$!io % +'o 1is)1el +o 8otogra8iaN

7:C;IC9S 1< <S7U1O 19S C:=U=9S

3 0ist,ria das ci5ncias %orfol,gicas ) e% larga escala a cranica da desco#erta de novos %)todos de prepara&'o para os diferentes %ateriais e do desenvolvi%ento de instru%entos ,pticos cada ve* %ais poderosos .?aOcett, "HJ2/. ?oi a constru&'o do pri%eiro %icrosc,pio e o uso deste aparel0o para o eQa%e de diferentes %ateriais #iol,gicos (ue possi#ilitou a ela#ora&'o da T:OR>3 C:L9L3R, segundo a (ual todos os seres vivos t5% co%o unidade %ni%a de estrutura e defini&'o, a c)lula. Ro#ert LooP, foi o pri%eiro a detectar a eQist5ncia das c)lulas, a partir de estudos e% corti&as. :% "JGJ, o #otSnico <at0ias Ac0eide% e e% "HGH o *o,logo Teodor Ac0Oan fi*era% a teoria segundo a (ual, todos os organis%os vivos s'o constitudos por c)lulas, co% eQce&'o dos vrus. 3 %oderna doutrina celular se resu%e e% = tens:

A c4lula 4 a (e+or u+idade de 1ida

1" A 1ida 4 gerada !elo meta5o" smo *ue re!rese+ta as rea/0es *u)(icas geradas !elos ele(e+tos *u)(icos e,iste+tes de+tro de u(a c4lulaF Todo ser !luricelular !ro14( de u(a outra c4lula % o ;igoto Todas as c4lulas !ro14( de outra !ree,iste+te A !artir da). os co+2eci(e+tos so=re a c4lula tG( !rogredido !aralela(e+te ao a!er8ei/oa(e+to dos (4todos e a!arel2os de i+1estiga/0es. !ri+ci!al(e+te ao da (icrosco!ia. Vora( desco=ertas t4c+icas cito*u)(icas !ara a ide+ti8ica/'o e locali;a/'o de di1ersas (ol4culas co+stitui+tes da c4lulas. Co( o ad1e+to dos (icrosc$!ios eletrB+icos. *ue te( gra+de !oder de resolu/'o. 8ora( o=ser1ados !or(e+ores da estrutura celular *ue +'o !oderia( se*uer se i(agi+ados !elos estudos 8eitos co( os (icrosc$!ios $!ticos. >ais ou (e+os si(ulta+ea(e+te co( o uso da (icrosco!ia eletrB+ica 8ora( a!er8ei/oados (4todos de se!ara/'o de orga+elas celulares e !ara o estudo i+ 1itro de suas (ol4culas e res!ecti1as 8u+/0es. !er(iti+do (a+i!ular o ge+o(a. de+tre outras 8u+/0es. Est&#o #e ';"&"as : :as ,< n : :o=/ O eQa%e de c)lulas vivas n'o per%ite u% te%po prolongado de estudo devido ao te%po vital da c)lula. Ta%#)% o %aterial transparente n'o per%ite a

distin&'o de deter%inadas estrutura, necessitando;se para isso o uso de corantes especficos. Para anlise de u% %aterial vivo ) necessrio portanto: Colocar uma gota de suspens#o do material em &uest#o na l2mina> Co0rir a l2mina com a l2m$nula> =e,ar a l2mina ao microsc%pio para a an-lise.

<xame de clulas em cultura ?@in ,i,oAB 3s c)lulas de tecidos ani%ais ou vegetais pode% ser %antidas vivas e at) crescere%, por perodos #astante longos desde (ue %antidas e% %eios (ue produ*a% as condi&-es naturais (ue l0es era% pr,prias. A'o c0a%ados %eios de cultura, nos (uais dever'o estar presentes todos os nutrientes e sais %inerais necessrios para a so#reviv5ncia das c)lulas, al)% das condi&-es ade(uadas de te%peratura, pL e oQigena&'o.

16 Colora*+es ,itaisC Iuando se dese$ar corar os %icroorganis%os, se% contudo %at;los, lan&a;se %'o dos corantes at,Qicos co%o o a*ul de %etileno, ver%el0o neutro, etc.... e% solu&'o a(uosa a "b. Pode ser usada a %es%a t)cnica do eQa%e a fresco, $ descrita, apenas su#%etendo o %aterial a eQa%inar R a&'o de u% corante vital. Cessa for%a o %aterial aparece corado, se% (ue se$a afetada sua vitalidade.

<studo de clulas em prepara*+es permanentes :studo de c)lulas vivas apresenta% li%ita&-es co%o resolu&'o do %aterial e estocage%. 3ssi%, desenvolveu;se t)cnicas (ue superava% esses fatores li%itantes, onde as c)lulas s'o fiQadas e coradas para %el0or de%onstra&'o de seus co%ponentes. :Qiste% vrios tipos de prepara&'o de lS%inas per%anentes, de acordo co% o %aterial (ue est sendo analisado. Confec&'o de cortes para estudo e% %icroscopia ,ptica e eletranica: 3 fiQa&'o ) a pri%eira etapa na o#ten&'o de u% preparado per%anente evitando a aut,lise da c)lula, i%pede a prolifera&'o de #act)rias, endurece a c)lula para (ue ela resista %ais e au%enta a afinidade das estruturas celulares pelos corantes usados na %icroscopia.

19 V necessrio fa*er cortes delgados para anlise de estruturas celulares

utili*ando;se para isso o %icr,to%o. CorantesC Iuase todas as organelas s'o transparentes e incolores, o (ue dificulta o seu estudo, para isso ) necessrio utili*ar;se de corantes especficos para visuali*ar partes especficas de u%a c)lula. Corantes fora% definidos por Langeron co%o su#stSncias coradas (ue per%ite% trans%itir a propriedade de sua cor a outros corpos. <uitas s'o as su#stSncias corantes, sendo (ue (uase totalidade s'o

derivadas da anilina. Classifica%;se e% ;aturaisC destaca%;se o car%i%, a 0e%atoQilina ou 9rti4iciaisC ta%#)% con0ecidos por corantes da anilina, sendo os co% %aior desta(ue os #sicos .ou nucleares 7 violetas de genciana, cristal de violeta, verde de %ala(uita, a*ul de %etileno, fucsina #sica, a*ul de tolidina, verde de %etila/, cidos .ou citoplas%ticos 7 eosina, fluorescena, fucsina cida, orange G, ver%el0o congo, aurSncia, cido pcrico/ e neutros .eosinato de a*u% de %etileno e de a*ul 3M9R, gie%sa/.

1: 3 %aioria dos corantes co%porta;se co%o #ase ou co%o cido. 1os

corantes #sicos, o grupa%ento responsvel pela cor ) catianico, co%#inando co% os grupa%entos cidos das %ol)culas celulares. E os corantes cidos s'o anionicos e co%#ina%;se co% os co%ponentes #sicos celulares.

1<

r-tica no " 7cnicas de preparo de materiais para microscopia de lu/ !.Conceitos a0ordados
O estudo dos seres vivos e% nvel citol,gico ) li%itado por tr5s fatores principais: as pe(uenas di%ens-es da %aioria das c)lulas, a falta de contraste entre as estruturas celulares, a espessura e o ta%an0o dos ,rg'os (ue se pretende estudar. :% conse(45ncia, a anlise da estrutura e organi*a&'o celular n'o depende so%ente do uso do %icrosc,pio, %as ta%#)% de t)cnicas #sicas de preparo do %aterial #iol,gico. 1a utili*a&'o do %icrosc,pio de lu*, a lS%ina de vidro serve co%o u% suporte para o %aterial. O processa%ento do %aterial #iol,gico, desde sua o#ten&'o at) a %ontage% so#re a lS%ina, consiste de u%a s)rie de passos (ue concorre%, direta ou indireta%ente, para a %anuten&'o das caractersticas originais das c)lulas e para u%a #oa o#serva&'o. 1os estudos citol,gicos pode;se utili*ar %ateriais frescos ou fiQados. :ssa escol0a dever atender aos o#$etivos do tra#al0o.

3. <3T:R>3>A ?R:ACOA 9tili*a%;se prepara&-es a fresco (uando n'o eQiste interesse na sua preserva&'o. O %aterial ) preparado i%ediata%ente ap,s sua o#ten&'o e, depois de o#servado, ) descartado .LS%inas n'o per%anentes/. Co%o eQe%plo destas prepara&-es pode%os citar: esfrega&o de l(uidos corporais, cortes feitos a %'o livre e% tecidos vegetais, entre outros.

B. <3T:R>3>A ?>\3COA 3 fiQa&'o ) u%a opera&'o %uito i%portante e crtica, sendo e%pregada na(ueles %ateriais (ue ser'o preservados por longos perodos de te%po. :la

2envolve a %orte e a preserva&'o das c)lulas de u% ,rg'o ou de u% tecido (ue ser'o posterior%ente estudados. 9% #o% fiQador ) a(uele (ue %odifica o %ni%o possvel a co%posi&'o (u%ica das c)lulas e preserva o %Qi%o possvel a sua estrutura. 9tili*ando;se %ateriais fiQados pode;se preparar tanto lS%inas

per%anentes (uanto lS%inas n'o per%anentes, esta escol0a dever atender aos o#$etivos do tra#al0o. :Qiste% diversos tipos de prepara&-es onde pode;se o#ter lS%inas per%anentes: "/ :s%aga%ento 3lguns %ateriais pode% ser es%agados entre lS%ina e la%nula o#tendo; se c)lulas suficiente%ente isoladas. 3p,s a fiQa&'o, pe(uenos frag%entos do %aterial fiQado s'o co%pri%idos so# a la%nula, (ue pode ser re%ovida, (uando necessrio, co% nitrog5nio l(uido.

2/ Cecal(ue V o#tido ao se co%pri%ir suave e fir%e%ente a superfcie de u% frag%ento do %aterial fresco so#re u%a lS%ina. 3s c)lulas superficiais se destaca% e adere% R lS%ina, sendo posterior%ente fiQadas e coradas. Geral%ente, as c)lulas se ro%pe% e tais preparados s'o [teis na o#ten&'o de n[cleos livres no citoplas%a.

G/ :sfrega&o V feito co% l(uidos corporais, co%o o sangue. Coloca;se u%a gota do l(uido so#re a eQtre%idade de u%a lS%ina (ue, co% o auQlio de u%a segunda lS%ina inclinada so#re a pri%eira, o %aterial ) espel0ado unifor%e%ente. 3 prepara&'o ) deiQada secar ao ar, fiQada e corada. 3lgu%as dessas prepara&-es dispensa% o uso de la%nulas.

21 ". 1escri*#o geral das etapas de prepara*#o de l2minas 2.". Coleta 3 coleta do %aterial deve ser precedida de estudos (ue garanta% a o#ten&'o do o#$eto de estudo e% %el0or condi&'o possvel. Iuando se pretende estudar in vivo a anlise ) feita i%ediata%ente ap,s a coleta+ preservando assi%, as condi&-es do %aterial. Ae o estudo for in vitro ap,s a coleta o %aterial deve ser fiQado.

2.2. ?iQa&'o 3 fiQa&'o consiste no trata%ento de c)lulas ou tecidos co% agentes (ue esta#ili*e% as estruturas co%o se as %es%as estivesse% vivas. Ceve se levar e% considera&'o na escol0a do fiQador: o poder de penetra&'o, capacidade de causar %orte, n'o altera&'o %orfol,gica das c)lulas e tecidos e, propiciar #oa conserva&'o do %aterial.

A'o eQe%plos de fiQadores:for%ol 2b+ lcool ! b+ tetr,Qido de ,s%io+ cido cra%ico+ cido ac)tico =2b al)% de %isturas.

2.G. Cortes Os cortes s'o i%prescindveis e% %ateriais %ulticelulares, co%o tecidos vegetais e ani%ais, para per%itir a passage% de lu* pelo %aterial .pr); re(uisito #sico para a preserva&'o do %aterial ao %icrosc,pio/ e o estudo de estruturas co%pleQas, por possi#ilitar u%a vis'o a%pla das ca%adas %ais internas e a individuali*a&'o de c)lulas.

22 2.G.". >nterpreta&'o de cortes V i%portante notar (ue, u% [nico corte n'o per%ite resolver a for%a de u%a dada estrutura. 1o eQe%plo (ue se segue, u%a sec*#o .ori/ontal de tr5s o#$etos diferentes, apresenta a %es%a configura&'o.

O#$etos

Pode;se, no entanto, o#ter infor%a&-es adicionais, o#servando;se cortes do %es%o o#$eto e% diferentes dire&-es. >sto re(uer, natural%ente, (ue se dispon0a de %ais de u% eQe%plar do o#$eto. :% u% corte longitudinal, os o#$etos 3, B e C apresentaria%, respectiva%ente, as seguintes configura&-es:

23

2# Os cortes pode% ser de = tipos: transversal .(uando feito paralela%ente ao %enor co%pri%ento do %aterial/, Longitudinal .(uando feito paralela%ente ao %aior co%pri%ento do %aterial/+ O#l(uo .(uando a dire&'o do corte n'o est relacionada a nen0u% eiQo/ e parad)r%ico .paralelo R superfcie do ,rg'o 7 o#ten&'o de epider%es/.

:stes diferentes cortes s'o i%portantes para (ue possa%os construir a vis'o tridi%ensional das estruturas celulares. Ceve;se ter e% %ente (ue a figura (ue se v5 representa apenas u%a sec&'o do o#$eto. :ssa figura ) #idi%ensional, e as estruturas t5% tr5s di%ens-es. Por esse %otivo, para constru&'o do %odelo tridi%ensional das estruturas o#servadas, utili*ando a %icroscopia, deve;se ou fa*er vrios tipos de cortes ou, fa*er u%a s)rie de cortes se(4enciais. 3l)% disso, algu%as estruturas, devido R sua locali*a&'o, n'o

2" s'o reveladas e% todos os tipos de corte, devendo;se verificar o tipo de corte ade(uado para cada estudo. 2.=. Colora&'o Iuando o %aterial a ser o#servado ) transl[cido, ou, (uando se (uer o#servar estrutura especfica torna;se necessrio o uso de corantes, (ue s'o su#stSncias capa*es de transferir cor a outras su#stSncias, propiciando contraste entre as estruturas e o %eio.

8. O06eti,os Cescrever as %etodologias co%u%ente utili*adas no preparo de %ateriais citol,gicos+ Con0ecer os passos do preparo de lS%inas per%anentes e $ustificar os prop,sitos de cada u%. >nterpretar i%agens de cortes 0istol,gicos e reconstruir for%as tridi%ensionais a partir delas. D. 9ti,idades de 4ixa*#o 3. <ontage% de lS%inas per%anentes a partir de %ateriais includos e% 0istoresina. O#serve a se(45ncia de tra#al0o %ontada na #ancada lateral do la#orat,rio. 1a se(45ncia est'o representados os passos envolvidos no preparo de lS%inas per%anentes. 3p,s as o#serva&-es responda as (uest-es. a. Os %ateriais, para sere% o#servados ao %icrosc,pio, deve% ser delgados, por (ue_ 0. Cite = %aneiras de se preparar %ateriais para sere% o#servados ao %icrosc,pio. c. Iual a i%portSncia da fiQa&'o dos %ateriais_ d. V possvel preparar u%a lS%ina per%anente utili*ando;se %ateriais frescos .n'o fiQados/. :Qpli(ue. e. Co%ente so#re a utili*a&'o de cortes se(4enciais.

26

r-tica no 8 Mtodos de estudo da clula e mor4ologia celular

!. Conceitos a0ordados 3 #iologia celular e %olecular estuda o#$etos %uito pe(uenos, por isso depende inteira%ente do aperfei&oa%ento dos instru%entos e das t)cnicas de pes(uisa. 3lguns %)todos para estudo da c)lula: %icroscopia, fraciona%ento celular, %)todos cito(u%icos, %)todos i%unocito(u%icos e radioautografia. 3#aiQo s'o apresentados diferentes nveis de estrutura #iol,gica .adaptado de Ce Ro#ertis c Ce Ro#ertis Er., 2 /:
Dimenso 0,1 mm (100m) ou mais 100-10m 10-0,!m (!00nm) !00-1nm rea de Estudo Anatomia Histologia "itologia Estruturas rgos Tecidos "#lulas, $act#rias Mtodos para Visualizao Olho humano; lentes simples Microc pios pticos Microscopia de raios %

Menos de 1nm

Mor&ologia "omponentes celulares Microscopia de polari)a*o; su$microsc pica e e '(rus Microscopia eletr+nica ultra-estrutura molecular ,strutura molecular e -isposi*o dos .tomos -i&ra*o de raios % at+mica

". ".!.

Mtodos de estudo da clula Microscopia

d Microsc%pio %ptico co%p-e;se de uma parte mec2nica, (ue serve de suporte, e uma parte %ptica, constituda por tr5s siste%as de lentes: o condensador, a o06eti,a e a ocular.

O con0eci%ento atual so#re as c)lulas foi o#tido nos [lti%os 22eG

anos

ap,s o desenvolvi%ento da %icroscopia eletranica. 3 principal vantage% conferida por esse e(uipa%ento ) seu %aior poder de resolu&'o (ue per%itiu o estudo da ultra;estrutura ou %orfologia su#;%icrosc,pica da c)lula.

29 Os cortes para o#serva&'o no %icrosc,pio eletranico .<.:./ s'o %uito finos, geral%ente de 2 a 2 n% de espessura, fiQados e contrastados co% contrastantes pr,prios R %icroscopia eletranica, tal co%o o tetr,Qido de ,s%io.

"." Bases %pticas da microscopia E 4orma*#o de imagem 3 lu*, (ue atravessa as lentes condensadoras, ) unifor%e%ente espal0ada so# a lS%ina e atravessa o o#$eto o#servado incidindo na lente o#$etiva. :stando o o#$eto colocado anterior%ente ao ponto focal da lente o#$etiva, for%ar;se;, no plano focal da lente ocular, u%a i%age% real .(ue pode se pro$etada e% u% anteparo/, %aior e invertida. 3 lu*, ao atravessar a ocular, for%ar u%a i%age% virtual, %aior e direita co% rela&'o R i%age% for%ada pela o#$etiva. Ceste %odo, a i%age% final do o#$eto, proporcionada pelo %icrosc,pio, ser virtual, %aior e invertida e% rela&'o ao %es%o. O o#servador ao eQa%inar o %aterial ver u%a i%age% real e invertida, pois a lu* ao atravessar o cristalino do ol0o for%ar u%a i%age% real e invertida co% rela&'o a i%age% for%ada pela ocular. O c)re#ro inverte esta i%age%. O au%ento final da i%age% ) resultado do produto do au%ento proporcionado pelas lentes oculares e o#$etivas. Ue$a a figura a#aiQo:

2:

7eti+a Le+te dos ol2os Le+tes da ocular I(age( 8or(ada !ela o=Ceti1a Mreal. (aior e i+1ertidaN

Le+tes da o=Ceti1a O=Ceto so=re a l5(i+a Le+tes do co+de+sador Vo+te de lu;

3igura ". Princpio de funciona%ento do %icrosc,pio de lu*

oder de resolu*#o 7 O ter%o poder de resolu*#o refere;se R capacidade de u% siste%a ,tico de discri%inar a i%age% de u% o#$eto (ue se encontra e% seu ca%po de vis'o. Por eQe%plo, a#aiQo de u% certo li%ite %ni%o . ,"%%/, o ol0o 0u%ano n'o identifica a ocorr5ncia de dois o#$etos distintos, eventual%ente visuali*ando;os co%o u% [nico o#$eto.

=imite de resolu*#o 7 %enor distSncia (ue deve eQistir entre dois pontos para (ue eles apare&a% individuali*ados

2<

r-tica no D Organelas e %acro%ol)culas pode% ser separadas por centrifuga&'o

!. Conceitos a0ordados O estudo #io(u%ico dos co%ponentes celulares re(uer a separa&'o e o isola%ento cuidadoso das vrias organelas e %acro%ol)culas celulares. A, a partir de organelas ou de seus vrios co%ponentes %oleculares purificados ) possvel estudar co%o esses co%ponentes interage% entre si para pro%over o funciona%ento de u%a organela. Cesta for%a, as %etodologias e%pregadas para o fraciona%ento celular e %olecular s'o funda%entais para o estudo da organi*a&'o %olecular e do funciona%ento da c)lula. 3s c)lulas pode% ser ro%pidas de vrias %aneiras+ por eQe%plo, por inter%)dio de c0o(ue os%,tico, pelo uso de vi#ra&-es ultra;sanicas e por %)todos %ecSnicos (uando s'o for&adas a passar por u% pe(ueno orifcio ou s'o 0o%ogenei*adas. 3 aplica&'o cuidadosa desses procedi%entos per%ite (ue organelas co%o n[cleo, %itocandrias, co%pleQo de Golgi e peroQisso%os fi(ue% intactos e ta%#)% (ue %uitas vesculas derivadas do retculo endoplas%tico, c0a%adas de %icrosso%os, %anten0a% %uito de suas propriedades #io(u%icas originais. Co%o os co%ponentes resultantes do ro%pi%ento celular apresenta% grandes diferen&as de ta%an0o, eles pode% ser separados por centrifuga&'o. Postos e% u% tu#o a girar e% alta rota&'o, as diferentes organelas v'o sofrer a a&'o da for&a centrfuga. :struturas %aiores co%o c)lulas intactas e n[cleos v'o sedi%entar pri%eiro no fundo do tu#o. Por eQe%plo, 2 %inutos de centrifuga&'o a " rp% .Rota&-es or Minuto/ ) suficiente para separar este %aterial.

Centrifuga&-es co% %aior n[%ero de rp% e por %aior te%po .por eQe%plo, " %inutos a 2 . rp%/ far'o sedi%entar co%ponentes u% pouco %enores, co%o

3%itocandrias, lisosso%os e peroQisso%os. 3ltas rota&-es e% te%po ainda %aiores .J . rp% por G 0oras/ sedi%enta% ri#osso%os e grandes %acro%ol)culas. :%#ora n'o se$a possvel, por inter%)dio do uso de u%a centrfuga co% pe(uena capacidade rp%, reali*ar as separa&-es necessrias para o isola%ento eficiente das diversas organelas, as atividades apresentadas a segui possi#ilita% (ue a a&'o da centrifuga&'o, no isola%ento de alguns co%ponentes celulares, se$a vivenciada de %odo concreto e discutida co% #ase nos resultados o#servados.

Material necess-rio ?ol0as de Tradescantia purpureaf Gral e pistilo .pode ser pires e col0er/ Tu#os de centrfuga Pipetas de Pasteur Centrfuga Cetergente de lou&a .l(uido ou gel/ @gua acidulada .2 a G gotas de vinagre 7 cido ac)tico 7 e% %ais ou %enos " %L de gua/

rocedimentos ". 2. Colo(ue G %L de gua acidulada e% u% gral .ou e% u% pires/+ :s%ague nessa solu&'o 2 a G fol0as de Tradescantia co% u% pistilo .ou u%a

col0er/+ G. Transfira co% u%a pipeta de Pasteur a parte l(uida do 0o%ogenei*ado

para u% tu#o de centrfuga e centrifugue rapida%ente ."2 seg./ para retirar fi#ras de celulose e outros resduos %aiores+ =. Transfira o so#renadante para u% tu#o novo. O#serve (ue o l(uido te%

cor %arro%. Centrifugue por 2 %inutos.

31 Pode se ver clara%ente, ap,s a centrifuga&'o, (ue o so#renadante ) u% l(uido roQo, pela presen&a do pig%ento 0idrossol[vel antocianina. 1o fundo do tu#o fica u% precipitado verde, pela presen&a de cloroplastos, (ue s'o organelas grandes e por isso v'o para o fundo do tu#o. 2. K. Transfira o so#renadante para u% novo tu#o. Co% u%a pipeta Pasteur, ressuspenda o precipitado .cloroplastos/ e% gua

acidulada. !. 3crescente u%a gota de detergente no tu#o contendo a 6solu&'o verde8 e

agite o tu#o por %ais ou %enos u% %inuto. J. Centrifugue por 2 %inutos os tu#os co% o so#renadante .6solu&'o roQa8/ e

co% o precipitado .6solu&'o verde8/. H. O#serve e descreva o (ue aconteceu co% o %aterial contido nos tu#os.

Iuest-es para discuss'o ". Iue %)todo ) utili*ado para ro%per as c)lulas, nesta prtica_

```````````````````````````````````````````````````````````` 2. Por (ue foi usada gua acidulada_

```````````````````````````````````````````````````````````` ```````````````````````````````````````````````````````````` G. O (ue ser encontrado no so#renadante ap,s a pri%eira centrifuga&'o_ :

no precipitado_ ```````````````````````````````````````````````````````````` ```````````````````````````````````````````````````````````` =. Iual a fun&'o do detergente_ `````````````````````````````````````````````````````````` `````````````````````````````````````````````````````````` 2. Pes(uise a respeito da classifica&'o taQona%ica de T. purpurea.

32

r-tica no ) Comparando clulas procari%ticas e eucari%ticas

!. Conceitos a0ordados Os seres vivos pode% ser classificados e% dois grandes grupos: os procariontes e os eucariontes, confor%e a organi*a&'o da c)lula (ue os co%p-e. O o#$etivo desta prtica ) o de co%parar c)lulas procari,ticas e eucari,ticas, esta#elecendo se%el0an&as e diferen&as. 3o %icrosc,pio ,ptico, o (ue %ais c0a%a a aten&'o ) a grande diferen&a de ta%an0o entre as c)lulas eucari,ticas e procari,ticas tpicas. V claro (ue se pode encontrar c)lulas procari,ticas, co%o algu%as cianofceas, cu$o ta%an0o est pr,Qi%o ou %es%o ) %aior (ue algu%as c)lulas eucari,ticas. :ntretanto, a regra ) (ue os procariontes geral%ente t5% c)lulas %uito %enores (ue os eucariontes. Outra diferen&a #e% %arcante ) a presen&a do n[cleo nos eucariontes e sua aus5ncia nos procariontes. >nterna%ente, n'o s, a presen&a do n[cleo difere nos dois tipos de c)lulas, %as ta%#)% a intensa co%parti%entali*a&'o das diversas fun&-es celulares e% organelas envoltas por %e%#ranas 7 o siste%a de endo%e%#ranas 7 caracterstico das c)lulas eucariontes. >nfeli*%ente, o siste%a de endo%e%#ranas ) de difcil visuali*a&'o ao %icrosc,pio ,ptico, sendo %ais #e% o#servado ao %icrosc,pio eletranico. >sto restringe o elenco de atividades prticas possveis co% o uso de %icrosc,pios co%uns, e a o#serva&'o da caracterstica %ais notvel para diferenciar os dois tipos de organi*a&'o celular fica, geral%ente, li%itada R o#serva&'o de presen&aeaus5ncia de n[cleo .co%o eQce&'o a esta generali*a&'o pode;se citar a visuali*a&'o de vac[olos contrteis e digestivos e% ciliados 7 e e% prepara&-es de lS%inas per%anentes co% colora&-es especiais para visuali*ar retculo endoplas%tico, co%pleQo de Golgi ou %itocandrias/.

33 9%a for%a #e% didtica de evidenciar as diferen&as e% rela&'o Rs di%ens-es das c)lulas ) colocar lado a lado c)lulas #acterianas e c)lulas da %ucosa da #oc0ec0a. ". Material necess-rio LS%inas e la%nulas Palitos Placa de Petri co% colanias de #act)rias 3l&a de platina La%parina @lcool ! b Corante a*ul de %etileno ,2b Papel;filtro ?rasco co% capacidade de 22 %L <icrosc,pio 8. rocedimentos ". Co% u%a al&a de platina .ou u% palito de dente ou de f,sforo/, encoste leve%ente e% u%a colania de #act)rias+ 2. :sfregue a al&a na lS%ina at) espal0ar #e% a a%ostra coletada+ G. ?iQe as #act)rias pelo calor, passando a lS%ina na c0a%a de u%a la%parina, co% as #act)rias voltadas para ci%a .cuide para a lS%ina n'o a(uecer de%ais/+ =. Co% u% palito de f,sforo, raspe a parte interna da #oc0ec0a e, depois, esfregue o palito so#re a regi'o da lS%ina e% (ue previa%ente fora% colocadas as #act)rias+ 2. <ergul0e a lS%ina e% lcool ! b para fiQar as c)lulas+ K. Colo(ue u%a gota de corante .a*ul de %etileno ,2b/ so#re o %aterial e aguarde " %inuto+ !. Re%ova o corante, passando na lS%ina u% pe(ueno fluQo de gua, so# a torneira+ J. Cu#ra co% a la%nula, se(ue a lS%ina e o#serve ao %icrosc,pio.

3# Iuest-es para discuss'o "/ Por (ue fiQa%os as #act)rias pelo calor e as c)lulas

eucari,ticas co% lcool ! b_ ```````````````````````````````````````````````````````````` ```````````````````````````````````````````````````````````` ```````````````````````````````````````````````````````````` 2/ Iual a fun&'o do corante a*ul de %etileno_

```````````````````````````````````````````````````````````` ```````````````````````````````````````````````````````````` ```````````````````````````````````````````````````````````` G/ Iuais as principais diferen&as o#servveis entre as c)lulas

das #act)rias e as da #oc0ec0a_ ```````````````````````````````````````````````````````````` ```````````````````````````````````````````````````````````` ```````````````````````````````````````````````````````````` ```````````````````````````````````````````````````````````` ```````````````````````````````````````````````````````````` =/ o#servadas ao <O_ Iuais as principais diferen&as internas (ue n'o pudera% ser

3"

.f na verdade cidos nucl)icos g C13 h R13/ Material necess-rio rocedimento ". 2. Rale a ce#ola e colo(ue;a e% u% dos frascos. 3dicione R ce#ola ralada " %L de u%a solu&'o feita co% J %L de gua 9%a ce#ola grande 9% ralador de (uei$o e u% prato Aal de co*in0a Cetergente para lou&a .e% gel ) %el0or do (ue o l(uido/ @gua (uente .de K2 a J
o

r-tica no F Isolando o 1;9G na co/in.a

C/

?iltro de caf) e suporte para filtro Gelo @lcool gelado Cois frascos de vidro .co% capacidade de 2 %L/

9% #ast'o .pode ser de vidro ou %es%o u% ara%e/ Recipiente plstico .caiQa ou #acia co% capacidade de "L/

(uente, 2 %L de detergente e u%a col0er .de sopa/ de sal. <isture esta solu&'o co% a ce#ola ralada. G. :spere " %inutos e ent'o colo(ue o frasco co% a ce#ola e% u% #an0o de

gelo .recipiente plstico co% u% pouco de gua e vria pedras de gelo/. i %edida (ue a solu&'o onde est a ce#ola esfria ) possvel o#servar (ue o l(uido parece estar 6tal0ando8. =. Iuando a solu&'o co% a ce#ola ralada estiver fria, filtre. O l(uido filtrado

) aparado e% u% frasco li%po. 2. >ncline o vidro co% o l(uido filtrado .e% Sngulo de G
o

e = o/ e derra%e

vagarosa%ente, pela parede, o lcool gelado. O#serve (ue o lcool n'o se %istura

36 pronta%ente co% a solu&'o filtrada, for%ando duas fases .na superior fica o lcool/. :ntre as duas fases ) possvel o#servar a for%a&'o de u% precipitado co% aspecto de 6fiapos8 es#ran(ui&ados, (ue s'o os cidos nucl)icos. K. Co% a a$uda do #ast'o, principal%ente se eQistir u% ganc0o na ponta, )

possvel enrolar os cidos nucl)icos (ue est'o precipitando. !. 9%a ve* enrolados no #ast'o, os cidos nucl)icos deve% secar por alguns

%inutos ao ar .deiQar evaporar o lcool/+ depois, o %aterial deve ser transferido da eQtre%idade do #ast'o para u% tu#o co% ,2 %L de gua.

39

r-tica no H <studando a passagem de solutos e sol,entes pela mem0rana plasm-tica

!. Conceitos a0ordados 3s c)lulas de (ual(uer organis%o est'o co#ertas pela %e%#rana celular. 3 constitui&'o dessa %e%#rana pro%ove a passage% controlada de su#stSncias e o conse(4ente e(uil#rio dinS%ico no interior do organis%o. 3 gua e outros ons pe(uenos pode% passar se% gasto de energia .transporte passivo/ pelas %e%#ranas #iol,gicas. 9%a das for%as de transporte passivo ) a os%ose, (ue ve% a ser a passage% do solvente de u%a solu&'o %enos concentrada para a solu&'o %ais concentrada, atrav)s de u%a %e%#rana se%iper%evel. 3 o#serva&'o ao %icrosc,pio do fena%eno os%,tico, atuando direta%ente nas 0e%cias e e% c)lulas vegetais, per%ite ao professor pro%over u%a #oa discuss'o co% os alunos so#re a per%ea#ilidade e a organi*a&'o da %e%#rana celular. ". Material necess-rio LS%inas e la%nulas 3gul0a 0ipod)r%ica descartvel LS%ina de #ar#ear Conta;gotas @gua destilada Aoro fisiol,gico .1aCl ,Hb/ Aolu&'o 0ipertanica .solu&'o saturada de 1aCl eeou a&[car+ o %ais

eficiente ) fa*er u%a solu&'o saturada de sal e a&[car/ Papel;filtro Luvas descartveis

3: <icrosc,pio ,ptico .<O/ Cesinfetante co% cloro .alve$ante/ 3lgod'o

8. rocedimento " ". Colo(ue u%a gota de soro fisiol,gico e% duas lS%inas li%pas. ?a&a u% pe(ueno furo na ponta do dedo co% u%a agul0a descartvel

est)ril e colo(ue u%a gota de sangue so#re cada lS%ina .todas as agul0as deve% ser i%ediata%ente dispensadas e% u% frasco co% u%a solu&'o de 2 b de desinfetante R #ase de cloro/ 2. 0e%ceas. G. :% u%a das lS%inas, co% u% conta;gotas colo(ue u%a gota de u%a Cu#ra co% la%nula e o#serve ao <O. Cescreva e desen0e as

solu&'o 0ipertanica e% u% dos lados da la%nula e encoste u% papel;filtro do outro lado para su#stituir o soro da lS%ina. Cessa for%a, o papel;filtro do outro lado puQar u% pouco do sangue da lS%ina e, no outro lado, u% pouco da solu&'o 0ipertanica entrar e% contato co% as c)lulas sanguneas. =. O#serve ao <O principal%ente a regi'o da LS%ina onde as 0e%cias

entrara% %ais e% contato co% a solu&'o 0ipertanica. 2. 1a outra lS%ina, repita o %es%o procedi%ento anterior, s, (ue e%

ve* de solu&'o 0ipertanica use gua destilada. O#serve a regi'o da lS%ina onde as 0e%cias entrara% %ais e% contato co% a solu&'o 0ipotanica. K. Ter%inada a o#serva&'o, as lS%inas deve% ser %ergul0adas e% u%a

solu&'o de desinfetante R #ase de cloro .2 b/ ou lcool HKGL, para depois sere% li%pas e reaproveitadas. Passar u% algod'o co% lcool na %esa do %icrosc,pio e de%ais partes %anuseadas do aparel0o.

3<

r-tica no I O0ser,ando osmose nas clulas ,egetais

Material necess-rio LS%inas e la%nulas Aolu&'o de a*ul de %etileno ,2b Ce#ola LS%ina de #ar#ear Conta;gotas @gua destilada Aolu&'o 0ipertanica .Aolu&'o saturada de 1aCl eeou a&[car, o %ais

eficiente ) fa*er u%a solu&'o saturada de sal e a&[car/ Papel;filtro

rocedimento ". Retire a epider%e de u%a esca%a de ce#ola e colo(ue so#re u%a

LS%ina co% u%a gota de a*ul de %etileno, cu#ra co% a la%nula e o#serve ao <O. 2. Cesen0e as c)lulas de epider%e de ce#ola, indicando a parede

celular, o n[cleo e o nucl)olo. G. Colo(ue e% u% dos lados da la%nula u%a gota de u%a solu&'o

saturada de 1aCl eeou sacarose. Co% u% papel;filtro, a#sorva a solu&'o (ue est entre a lS%ina e a la%nula de for%a tal (ue a solu&'o 0ipertanica entre e% contato co% a epider%e de ce#ola. 3lgu%as ve*es ) %ais eficiente retirar a la%nula, e co% o papel de filtro retirar a solu&'o (ue est e% volta da epider%e e su#stitu;la por solu&'o 0ipertanica. =. plas%odes%os. Cescreva e desen0e o (ue aconteceu. >dentifi(ue os

#-

2. O#serva&'o de fol0as de :lodea canadensis

a/ Colo(ue e% u%a lS%ina, u%a fol0a nova de :lodea canadensis. #/ Colo(ue u%a gota de gua so#re a lS%ina. c/ Cu#ra co% a la%nula. d/ :Qa%ine ao %icrosc,pio. e/ Ciscuta o (ue Uoc5 o#servou. Co%o se c0a%a o fena%eno_ Iue conclus-es Uoc5 pode tirar _

Juest+es para 4ixa*#o ". 2. O (ue ) os%ose_ Iuando ocorre_ Por (ue ocorre 0e%,lise .ro%pi%ento das c)lulas/ (uando as 0e%cias s'o

colocadas e% gua destilada_ G. =. 2. K. Por (ue n'o ocorre 0e%,lise co% as c)lulas da ce#ola_ O (ue acontece (uando as c)lulas s'o colocadas e% solu&'o 0ipertanica_ Por (u5_ O (ue ) plas%,lise_ O (ue s'o plas%odes%os_

#1

r-tica no K Cloroplastos e mitocLndrias

1esta aula Uoc5 far o#serva&-es, ao %icrosc,pio ,tico, da %orfologia dos cloroplastos de diferentes tipos de plantas. :% seguida Uoc5 far a interpreta&'o de u%a %icrografia %ostrando o corte longitudinal de u% cloroplasto. ". Presen&a e %orfologia dos cloroplastos e% epider%e de fol0as de sa%a%#aia e lrio. ".". <)todo a/ Retire co% u%a gilete .ou pin&a, ou un0a/ u%a pelcula fina da face inferior da fol0a da sa%a%#aia e do lrio. #/ Colo(ue o %aterial so#re u%a gota de gua na lS%ina. c/ Cu#ra co% la%nula. d/ ?ocali*e o %aterial co% a o#$etiva de %enor au%ento e e% seguida utili*e a o#$etiva de = \. ".2. O#serva&-es: a/ <orfologia ; ?a&a u% es(ue%a do esta%ato e das c)lulas da epider%e de cada %aterial. >ndi(ue a presen&a dos cloroplastos nestas c)lulas.

#/ Uoc5 o#servou diferen&as (uanto R presen&a de cloroplastos nesses dois tipos de plantas (ue pertence% a grupos taQona%icos diferentes _ Iue tipo de diferen&as _ ````````````````````````````````````````````````````````````` ````````````````````````````````````````````````````````````` ````````````````````````````````````````````````````````````` ````````````````````````````````````````````````````````````` 2. O#serve a %icrografia eletranica %ostrando u% corte longitudinal de cloroplastos. ?a&a u% desen0o es(ue%tico dessa figura, indicando os seus co%ponentes, #e% co%o o %aterial utili*ado .esp)cie e ,rg'o/ para a prepara&'o.

#2 >ndi(ue no seu es(ue%a os locais onde ocorre% a fotofosforila&'o e o ciclo de Calvin.

r-tica no !'
Tema - C toes%&e"eto aN A,a(i+e a la(i+a de es!er(ato;$ide 2u(a+o.

4&est8es !ara D s'&ss+o - Re"a' one 'entr$o"os( )"a-e"os e '$" os. - Comentar as estr&t&ras : s&a" 7a#as nos es!ermato71 #es. DISCUSSO0 CONC6US>ES0

#3

r-tica no !! Mitose
!. Conceitos a0ordados O cresci%ento e o desenvolvi%ento dos organis%os vivos depende% do cresci%ento e da divis'o de suas c)lulas. 1os organis%os unicelulares a divis'o celular resulta nu%a verdadeira reprodu&'o, originando novos indivduos. 3o contrrio, nos organis%os pluricelulares, (ue prov5% de u% *igoto, repetidas divis-es desta c)lula inicial leva% ao desenvolvi%ento e cresci%ento do indivduo. 3 g5nese de novas c)lulas constitui u% fena%eno cclico deno%inado ciclo

celular. 3 %aior parte do ciclo celular ) co%preendida pela int)rfase, perodo entre o final de u%a divis'o e o co%e&o de outra. 9%a s)rie de eventos per%ite, para fins de estudo, identificar e caracteri*ar u%a se(45ncia de (uatro fases no processo %it,tico, apesar de n'o eQistire% li%ites precisos entre elas. :stas fases s'o con0ecidas co%o pr,fase, %etfase, anfase e tel,fase. 3 %itose garante ao longo do processo proliferativo celular, a %anuten&'o da identidade das c)lulas, por %eio da transfer5ncia da #agage% g5nica de u%a c)lula Rs suas descendentes.

". rocedimentos: 1esta aula Uoc5 far a identifica&'o de fases da %itose e% lS%inas per%anentes contendo cortes longitudinais e transversais de ra*es. :% seguida Uoc5 vai preparar lS%inas te%porrias de pontas de rai*, pelo %)todo de es%aga%ento e colora&'o pelo car%i%. ". LS%inas per%anentes de ra*es de ce#ola .3lliu% cepa/. Co% a o#$etiva de " \ focali*e a regi'o %eriste%tica .

##

#/ Co% a o#$etiva de = \ identifi(ue as fases da %itose. Cesen0e;as. Cescreva as caractersticas principais de cada fase.

YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY I?TP7VA&A

YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

P7XVA&A

YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

>ATVA&A

#"

YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY A?VA&A

YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY TALXVA&A

LS%inas te%porrias de c)lulas de ponta de rai* de ce#ola.